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Resposta imunoinflamatória na periodontite experimental induzida em ratos submetidos à quimioterapia: estudo histomorfométrico e imunoistoquímico / Immunoinflammatory response in induced experimental periodontitis in rats submitted to chemotherapy: histomorphometric and immunohistochemical study

Gusman, David Jonathan Rodrigues [UNESP] 21 February 2017 (has links)
Submitted by DAVID JONATHAN RODRIGUES GUSMAN null (davidgusman2@gmail.com) on 2017-03-13T20:24:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - repositório.pdf: 2782554 bytes, checksum: f50fde3c779b38d95fd2a6a0f3853086 (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-03-20T17:42:04Z (GMT) / Submitted by DAVID JONATHAN RODRIGUES GUSMAN null (davidgusman2@gmail.com) on 2017-03-21T14:09:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - repositório.pdf: 1782759 bytes, checksum: 3919ad9a78c59ab55a6cf6d2ad793a6b (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-22T16:48:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gusman_djr_me_araca.pdf: 1782759 bytes, checksum: 3919ad9a78c59ab55a6cf6d2ad793a6b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T16:48:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gusman_djr_me_araca.pdf: 1782759 bytes, checksum: 3919ad9a78c59ab55a6cf6d2ad793a6b (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo tem por objetivo avaliar o efeito dos quimioterápicos 5-Fluorouracil (5-FU) e da Cisplatina (CIS) sob os tecidos periodontais saudáveis e durante os estágios inicias da periodontite experimental (PE) induzida em ratos. No presente estudo, foram utilizados 156 ratos machos, distribuídos aleatoriamente em 6 grupos: SPE-SS (n= 26): sem indução da PE e que receberam administração de solução salina (grupo Sham); SPE-CIS (n= 21) – sem indução da PE e que receberam administração de CIS; SPE-5FU (n= 27) – sem indução da PE e que receberam administração de 5-FU; PE-SS (n= 27): indução da PE e que receberam administração de solução salina; PE-CIS (n= 28) - indução da PE e que receberam administração de CIS; PE-5FU (n= 27) - indução da PE e que receberam administração de 5-FU. Os animais receberam 2 injeções para administração dos quimioterápicos com intervalo de 48 horas entre elas (períodos: baseline e 02 dias), aplicando-se as doses de 5 mg/kg e 2,5mg/kg (CIS) e 60 mg/kg e 40 mg/kg (5-FU). Logo após a primeira injeção, foi realizado a indução da PE adaptado-se um fio de algodão número 24 ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Nos períodos de 03, 05 e 07 dias após indução da PE, os animais foram eutanasiados pela administração de dose letal de thiopental (150mg/kg). Para análise hematológica de leucócitos totais (LT), foram obtidas amostras sanguíneas no baseline e no último período de eutanásia e para fosfatase alcalina (FA) no baseline e em todos os períodos experimentais. As mandíbulas obtidas foram fixadas em formaldeído tamponado 4%, descalcificadas em EDTA e incluídas em parafina para confecção de cortes histológicos seriados de 4 μm de espessura no sentido mésio-distal para coloração com Hematoxilina e Eosina e realização de reações imunoistoquímicas. Foi realizado análise histológica (escores), histométrica de porcentagem de osso na furca (POF) e padrões de imunomarcação para TNFα, IL-1β e RANKL (escores). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (p<0,05) em programa computacional especializado. Observou-se uma diminuição nos níveis de LT nos grupos SPE-5FU e PE-5FU aos 7 dias. A FA sérica diminuiu aos 3, 5 e 7 dias nos grupos SPE-CIS, SPE-5FU, PE-SS, PE-CIS e PE-5FU. Histologicamente, SPE-CIS e SPE-5FU obtiveram uma exacerbação do processo inflamatório comparado ao SPE-SS, isso foi condizente com os resultados imunoistoquímicos, com maior padrão de imunomarcação para TNFα e IL-1β. Para PE-CIS e PE-5FU houve maior exacerbação do processo inflamatório comparados com os demais grupos, isso foi condizente com os resultados imunoistoquímicos, com maior padrão de imunomarcação para TNFα e IL-1β aos 3 e 7 dias e RANKL aos 7 dias. Deste modo, houve menor POF nos grupos PE-CIS e PE-5FU comparado ao PE-SS em todos períodos experimentais, além disso, PE-5FU apresentou menor POF até mesmo comparado ao PE-CIS aos 5 e 7 dias. Diante dos limites do presente estudo, pode-se concluir que os quimioterápicos promoveram uma exacerbação do processo inflamatório nos tecidos periodontais saudáveis e agravaram a progressão da PE em seu estágio inicial. / The aim of the present study was to evaluate the effect of the chemotherapics 5-Fluorouracil (5-FU) and Cisplatin (CIS) on healthy periodontal tissues and during the early stages of induced experimental periodontitis (EP) in rats. 156 male rats were randomly set in 6 groups: NP-SS (n = 26): without EP induction and received saline solution (Sham group); NP-CIS (n = 21) - without EP induction and received CIS; NP-5FU (n = 27) - without EP induction and received 5-FU; EP-SS (n = 27): induction of EP and received saline solution; EP-CIS (n = 28) - induction of EP and received CIS; EP-5FU (n = 27) - induction of PE and received 5-FU. The animals received 2 injections of chemotherapics with 48-hour interval between them, with doses of 5 mg/kg and 2.5 mg/kg (CIS) and 60 mg/kg and 40 mg/kg (5-FU). After the first injection, the induction of EP was performed by the placement of a number 24 cotton thread around the lower left first molar. At 03, 05 and 07 days after EP induction the animals were euthanized by administration of thiopental (150mg/kg). For hematological analysis of total leukocytes (TL), blood samples were obtained at baseline and in the last euthanasia period, and for Alkaline Phosphatase (AP), at baseline and in all experimental periods. The collected mandibles were fixed in buffered 4% formaldehyde, demineralized in EDTA and embedded in paraffin for preparation of serial histological sections of 4 μm thickness in mesiodistal direction for Hematoxylin and Eosin staining and immunohistochemical reactions. Histotologic (scores), histometry of the percentage of bone in the furcation (PBF) and immunolabelling standards for TNFα, IL-1β and RANKL (scores) analyzes were performed. The data were submitted to statistical analysis (p <0.05) in a specialized computer program. A decrease of the TL levels in NP-5FU and EP-5FU groups was observed at 7 days. Serum AP decreased at 3, 5 and 7 days in NP-CIS, NP-5FU, EP-SS, EP-CIS and EP-5FU. Histologically, NP-CIS and NP-5FU presented an exacerbation of the inflammatory process compared to the NP-SS, this was consistent with the immunohistochemical results, with higher immunolabelling pattern of TNFα and IL-1β. In EP-CIS and EP-5FU was observed an increased exacerbation of the inflammatory process compared to the other groups, this was consistent with the immunohistochemical results, with a higher immunolabelling pattern for TNFα and IL-1β at 3 and 7 days, and RANKL at 7 days. Thus, there was a smaller POF in EP-CIS and EP-5FU compared to the EP-SS in all experimental periods, moreover, EP-5FU presented smaller POF even compared to EP-CIS at 5 and 7 days. Given the limitations of the present study, it can be concluded that chemotherapy exacerbated the inflammatory process in healthy periodontal tissues and aggravated the progression of EP in its initial stage. / FAPESP: 2014/11427-8
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Influência do 5-fluorouracil nos tecidos periodontais normais e sobre a evolução da doença periodontal experimental induzida

Novaes, Vivian Cristina Noronha [UNESP] 09 August 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-09Bitstream added on 2014-08-27T15:57:08Z : No. of bitstreams: 1 000749780_20180809.pdf: 435833 bytes, checksum: bcbdc341e351502f1ddd028ace313ed3 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-08-10T11:59:47Z: 000749780_20180809.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-08-10T12:00:50Z : No. of bitstreams: 1 000749780.pdf: 3128544 bytes, checksum: 9979af99499fa80f9ed83ce4458bcb53 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo avaliou por meio de análise histomorfometrica, imunoistoquimica e da Fosfatase Alcalina (FA) os efeitos do quimioterápico 5-fluorouracil (5-FU), nos tecidos periodontais normais, na evolução da periodontite experimental (PE) e no tratamento periodontal mecânico de Raspagem e Alisamento Radicular (RAR). Foram tratados 150 ratos, dos quais 92 foram utilizados e divididos aleatoriamente em 6 grupos submetidos aos seguintes tratamentos: Grupo C (n=24) - animais não tratados com 5-FU, sem PE, área contralateral dos Grupos PE e PE + RAR que foram utilizadas como controle negativo. Grupo PE (n=16) – animais portadores da PE. Grupo PE + RAR (n=18) – animais portadores da PE e tratados localmente pela técnica da RAR. Grupo 5-FU (n=24) - animais tratados sistemicamente com 5-FU. Grupo 5-FU + PE (n=16) - animais tratados sistemicamente com 5-FU, com indução PE. Grupo 5-FU + PE + RAR (n=18) - animais tratados sistemicamente com 5-FU, portadores da PE e tratados localmente com RAR. A PE foi induzida pela adaptação de um fio de algodão ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Nos animais dos grupo 5-FU, 5-FU + PE e 5-FU + PE + RAR o 5-FU foi administrado no momento da indução da PE e após 48 horas. Após 7 dias da evolução da PE, nos animais dos grupos PE, PE + RAR, 5-FU + PE e 5-FU + PE + RAR a ligadura foi removida e os grupos PE + RAR e 5-FU + PE + RAR foram tratados localmente com RAR. Os animais foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias após a remoção da ligadura. Foram obtidos cortes seriados de 4 ?m de espessura no sentido mésio-distal e corados com Hematoxilina e Eosina ou Tricrômico de Masson. A porcentagem de osso na furca (POF) foi avaliada por análises histomorfométrica e foram realizadas... / The present study evaluated by histomorphometric, immunohistochemistry and Alkaline Phosphatase (ALP) analysis the effects of the chemotherapeutic 5-fluorouracil (5-FU), in the normal periodontal tissues, in the evolution of experimental periodontitis (EP) and in the mechanical periodontal treatment Scaling and Root Planing (SRP). 150 rats were treated, of which 92 were used and randomly divided into 6 groups of the following treatments: Group C (n = 24) - animals not treated with 5-FU without PE, contralateral area of groups EP and EP + SRP that were used as negative control. EP group (n = 16) - animals with EP. Group EP + SRP (n = 18) - animals with EP and treated locally by SRP. Group 5-FU (n = 24) - animals treated systemically with 5-FU. Group 5-FU + EP (n = 16) - animals treated systemically with 5-FU and with EP induction. Group 5-FU + EP + SRP (n = 18) - animals treated systemically with 5-FU, with EP and treated locally with SRP. The EP was induced by placing a cotton thread around the left mandibular first molar. In the animals of the groups 5-FU, 5-FU + EP and 5-FU + EP + SRP, 5-FU was administered at the time of induction of EP, and after 48 hours. After 7 days of evolution of EP, the animals of groups EP, EP + SRP, 5-FU + EP and 5-FU + EP + SRP, the ligature was removed and the groups PE + SRP and 5-FU + EP + SRP were treated locally with SRP. The animals were sacrificed at 7, 15 and 30 days after removal of the bandage. Were obtained from serial sections of 4 mm thick in the mesio-distal and stained with Hematoxylin and Eosin or Masson's Trichrome. The Percentage of Bone in the Furcation (PBF) was evaluated by histomorphometric analysis... / FAPESP: 11/03021-3
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"Efeitos anti-inflamatório e antirreabsortivo ósseo da Punica granatum l. combinada ou não com laser de baixa intensidade na perda óssea induzida por ligadura em ratos” / Anti-inflammatory and bone antiresorptive effects of Punica granatum L. combined or not to low level laser irradiation on ligature-induced bone loss in rats

Monteiro, Larice Kércia Braz January 2013 (has links)
MONTEIRO, Larice Kércia Braz. "Efeitos anti-inflamatório e antirreabsortivo ósseo da Punica granatum l. combinada ou não com laser de baixa intensidade na perda óssea induzida por ligadura em ratos”. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-11-26T13:18:46Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lkbmonteiro.pdf: 1114026 bytes, checksum: 7b06786507f846031cbbc0b35bc12780 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-11-26T13:19:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lkbmonteiro.pdf: 1114026 bytes, checksum: 7b06786507f846031cbbc0b35bc12780 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-26T13:19:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lkbmonteiro.pdf: 1114026 bytes, checksum: 7b06786507f846031cbbc0b35bc12780 (MD5) Previous issue date: 2013 / Periodontitis is a chronic infectious inflammatory disease. P. granatum (PNG) and low level laser irradiation (LLLI) have demonstrated anti-inflammatory properties and antioxidants. The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory and bone antiresorptive activities of PNG combined or not with LLLI in ligature-induced periodontitis in rats. Periodontitis was induced in 72 rats by inserting a nylon-3.0 around the left upper second molar. The contralateral hemimaxila was used as control. Groups of 6 animals received saline 0.9% (SAL), SAL+LLLI 4 J/cm2, PNG [60, 180, 540 (mg/kg)] or PNG 540 mg/kg+LLLI 4 J/cm2. The low intensity laser GaAlAs was applied immediately after surgery, while PNG was administered by gavage daily until day 11, when the animals were killed. The jaws were removed and processed for macroscopic, histometric, histological and immunohistochemical staining for TRAP. Gingival tissue samples were obtained to evaluate the activity of myeloperoxidase (MPO). Blood samples were collected for measurement of serum bone alkaline phosphatase (BALP), leukograms and analysis of liver and kidney function. Additionally, indexes of liver and kidney were performed. Rats were weighted daily. Periodontitis induction caused intense alveolar bone loss (ABL), reduction of BALP, cementum and periodontal ligament destructions, and intense leukocyte infiltration. Systemically, periodontitis induced leukocytosis and and did not alter hepatic transaminases, urea or creatinine serum levels, or liver and kidney indexes. The ABL was prevented by PNG (60= 34%, 180= 34%, 540= 42%), SAL+LLLI= 31% e PNG 540+LLLI= 48% (p<0.05). PNG 540 combined or not with LLLI decreased the alveolar bone resorption, the leukocyte infiltration and preserved the periodontium in the jaws in which the periodontitis was induced. Animals treated with PNG 540+LLLI showed an important decreasing of TRAP positive immunostaining (Periodontium Unchallenged = 0.0 ± 0.0, SAL= 0.016 ± 0.004; SAL+LLLI= 0.01 ± 0.003; PNG 540= 0.011 ± 0.003; PNG 540+LLLI = 0.002 ± 0.0003). The raise of MPO activity was prevented by PNG (60= 46%, 180= 49%, 540= 76%), SAL+LLLI= 54% e PNG 540+LLLI= 80% (p<0.05). In spite the reduction of BALP, seen in SAL group was not prevented by SAL+LLLI or PNG (p>0.05), the combined treatment with PNG 540+LLLI caused an increase on BALP serum levels (74.2 ± 5.4 U/l), when compared to SAL (44.9 ± 3.0 U/l) (p<0.05). No change was seen for hepatic transaminases, urea or creatinine serum levels, or in liver and kidney indexes, in all groups (p>0.05) and all groups prevented (p<0.05) the leukocytosis observed in SAL group. In short, PNG combined or not with LLLI reduced leukocyte infiltration and the number of neutrophils and reduced alveolar bone loss, at the expense of inhibiting osteoclast activation, without causing systemic changes / A periodontite é uma doença infecto-inflamatória crônica caracterizada por intensa perda óssea. P. granatum (PNG) e Irradiação com Laser de Baixa Intensidade (ILBI) têm demonstrado propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes. O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades anti-inflamatória e antirreabsortiva óssea da PNG combinada ou não com ILBI na periodontite induzida por ligadura em ratos. A periodontite foi induzida em 72 ratos Wistar através da inserção de um fio de nylon-3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo. A hemimaxila contralateral foi utilizada como controle. Grupos de 6 animais receberam solução salina 0,9% (SAL), SAL+ILBI 4 J/cm2, PNG (60, 180, 540) mg/kg ou combinação de PNG 540 mg/kg+ILBI 4 J/cm2. O laser de baixa intensidade GaAlAs foi aplicado imediatamente após a cirurgia, enquanto a PNG foi administrada, por gavagem, diariamente, até o 11º dia, quando, então, os animais foram mortos, suas maxilas removidas e processadas para análises macroscópica, histométrica, histológica e marcação imunohistoquímica para TRAP. Amostras de tecido gengival foram obtidas para avaliação da atividade de mieloperoxidase (MPO). Foram coletadas amostras de sangue para dosagem dos níveis séricos de fosfatase alcalina óssea (FAO), leucograma e análise das funções hepática e renal. Adicionalmente, os índices hepático e renal foram realizados. Os ratos foram pesados diariamente. A indução da periodontite causou intensa perda óssea alveolar (POA), redução sérica da FAO, destruição do ligamento periodontal e do cemento, e intensa infiltração leucocitária. Sistemicamente, a periodontite induziu leucocitose e não causou alterações nos níveis séricos de transaminases hepáticas, ureia ou creatinina, bem como nos índices hepático e renal. A POA foi prevenida significantemente por PNG (60= 34%, 180= 34%, 540= 42%), SAL+ILBI= 31% e PNG 540+ILBI= 48% (p<0.05). PNG 540 combinada ou não com ILBI preveniu a perda óssea alveolar, a infiltração leucocitária e preservou o periodonto de maxilas nas quais a periodontite foi induzida. Animais tratados com PNG 540+ILBI mostraram significante redução na imunomarcação positiva para TRAP (Periodonto Não desafiado=0,0 ± 0,0; SAL= 0,016 ± 0,004; SAL+ILBI= 0,01 ± 0,003; PNG 540= 0,011 ± 0,003; PNG 540+ILBI= 0,002 ± 0,0003). O aumento da atividade de MPO foi prevenido por PNG (60= 46%, 180= 49%, 540= 76%), SAL+ILBI= 54% e PNG 540+ILBI= 80% (p<0.05). Embora a redução da FAO observada no grupo salina não tenha sido prevenida por PNG ou SAL+ILBI (p>0,05), PNG 540+ILBI causou um aumento significante nos níveis séricos de FAO (74,2 ± 5,4 U/l), quando comparado ao SAL (44,9 ± 3,0 U/l) (p<0,05). Nenhum grupo apresentou mudanças significantes nos níveis séricos de transaminases hepáticas, ureia ou creatinina ou nos respectivos índices hepático e renal (p>0,05), e todos os grupos preveniram (p<0,05) a leucocitose quando comparada ao grupo SAL. Em suma, PNG combinada ou não com ILBI reduziu a infiltração leucocitária e o número de neutrófilos além de reduzir a perda óssea alveolar, à custa da inibição da ativação de osteoclastos, sem causar alterações sistêmicas importantes
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Efeitos imunomodulatórios do extrato de Allium cepa L. e da quercetina sobre a produção de mediadores inflamatórios e a osteoclastogênese in vitro

Teixeira, Tatiane de Oliveira 13 May 2015 (has links)
Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-03-31T12:23:56Z No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-31T12:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) / FAPESB, CNPq, e CAPES / Introdução: A periodontite é uma doença inflamatória que afeta a inserção do tecido conjuntivo e do osso de suporte que rodeia os dentes. Os osteoclastos estão implicados na homeostasia do tecido ósseo em situações patológicas, como na doença periodontal. O desequilíbrio na remodelação óssea pela indução de inflamação e perda óssea mediada pelos osteoclastos pode ser desencadeado pelo LPS de P. gingivalis (PgLPS). Alguns fatores e fármacos podem restaurar a homeostase do osso, com a regulação de mediadores inflamatórios como o extrato metanólico de Allium cepa L. (AcE) e a quercetina (Qt), que têm demonstrado possuir propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Nossos objetivos foram analisar os efeitos imunomoduladores in vitro do AcE e da Qt na osteoclastogênese em condições inflamatórias (PgLPS-induzida). Métodos: Células precursoras de osteoclastos (RAW 264.7) foram diferenciadas com 30 ng/mL de RANKL, coestimuladas com PgLPS (1 μg/mL) e tratadas com AcE (50-1000 μg/mL) ou Qt (1,25, 2,5 ou 5 μM). Ensaios de redução da resazurina e ensaio para mensuração de proteína total foram utilizados para avaliar a viabilidade celular. Ensaio de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) foi utilizado para determinar a quantidade de p-nitrofenol libertado; e coloração de TRAP foi utilizada para avaliar o número e o tamanho dos osteoclastos multinucleados. Os níveis de citocinas foram quantificados por ELISA em sobrenadantes de cultura celular. Utilizando-se ensaios de Western blot, foi avaliada a fosforilação e a degradação do IκBα. Resultados: Foram determinadas concentrações não citotóxicas de AcE e de Qt em culturas celulares. A osteoclastogênese foi modulada negativamente nas concentrações testadas de AcE e de Qt em comparação com o controle. Todas as concentrações de AcE e de Qt diminuíram significativamente o número de osteoclastos grandes, presumivelmente mais ativos, e as concentrações de AcE a 1000 μg/mL μM reduziram o número de osteoclastos pequenos. Observou-se um decréscimo da produção de IL-6 e IL-1α e um aumento da produção de IL-3 e IL-4. Além disso, tanto o AcE quanto a Qt regularam negativamente a via do NF-κB. Conclusão: Esses resultados sugerem que o AcE e a Qt podem ser inibidores de osteoclastogênese em condições inflamatórias, por meio da diminuição da ativação da via do NF-κB induzida por PgLPS e RANKL. Mais estudos são necessários para apoiar o uso do AcE e da Qt para tratar doenças que envolvam perda óssea patológica, incluindo-se a periodontite. / Introduction: Periodontitis is an inflammatory disease that affects connective tissue attachment and the supporting bone that surrounds the teeth. Osteoclasts are implicated in normal bone remodeling and bone loss. P. gingivalis LPS (PgLPS) can cause an imbalance in the remodeling by inducing inflammation and osteoclast-mediated bone loss. Allium cepa L. (AcE) and quercetin (Qt) have been shown to possess anti-inflammatory properties. Objectives: Our aims were to examine the in vitro modulatory effects of AcE and Qt on osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced). Methods: RAW 264.7 cells were differentiated with 30ng/mL of RANKL, co-stimulated with PgLPS (1μg/mL) and treated with AcE (50-1000 μg/mL) or Qt (1.25, 2.5 or 5 μM). Resazurin reduction and total protein content assays were used to detect cell viability. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) assays were used to determine the amount of released p-nitrophenol that indicates the degree of differentiation in RANKL-stimulated cells; and TRAP staining was used to evaluate the number and size of TRAP-positive multinucleated osteoclast cells. Cytokine levels were measured using ELISA on osteoclast precursor cell culture supernatants. Using western blot analysis IκBα phosphorylation and IκBα degradation were evaluated. Results: Both AcE and Qt did not affect cell viability. Osteoclastogenesis was significantly affected by AcE and Qt when compared to control. Small (less active) osteoclast counts were decreased by AcE (1000 μg/mL) and Qt (2.5 and 5 μM), while all concentrations of AcE and Qt significantly decreased the number of large and presumably active osteoclasts. We observed lower production of IL-6 and IL-1α and an increased production of IL-3 and IL-4. Also both AcE and Qt downregulated NF-κB pathway. Conclusion: These findings suggest that AcE and Qt may be inhibitors of osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced) via attenuation of RANKL/ PgLPS-induced NF-κB activation. Further studies are needed in other to support the use of AcE and Qt to treat diseases involving pathological bone loss including periodontitis.
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Expressão de genes relacionados à remodelação óssea na fase inicial da reabsorção do rebordo residual em mandíbulas humanas

Zutin, Elis Andrade de Lima [UNESP] 19 December 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:25Z : No. of bitstreams: 1 000827647.pdf: 518493 bytes, checksum: 3c0ed8f6246b2af2e53424e679ca76be (MD5) / O entendimento da reabsorção do rebordo residual (RRR) pode fornecer uma base científica importante para melhorar tratamentos restauradores e terapêuticos de pacientes edêntulos. O presente estudo teve como objetivo principal buscar marcadores moleculares envolvidos com a remodelação óssea no tecido ósseo proveniente de mandíbulas que sofreram a extração dos dentes remanescentes em período inferior a dois meses (no qual a RRR é mais intensa). O grupo de amostras analisadas no estudo foi composto por cinco indivíduos que sofreram extração dentária na área operada há menos de dois meses e por um paciente que sofreu extração dentária na área operada há mais de cinco anos, que foi usado como calibrador. Todos os pacientes tiveram os seus dados clínicos anotados e a radiografia panorâmica dos pacientes foi utilizada para realização de traçados para avaliação de características anatômicas previamente relacionadas com RRR. O RNA das amostras foi extraído e apresentaram pureza entre 1,8 e 2,0. A síntese de cDNA foi realizada pela técnica do qRT-PCR. Para as análises quantitativas, todas as reações foram realizadas em placas customizadas de 96 poços específicas para PCR em tempo real, utilizando iniciadores de 40 genes envolvidos no metabolismo ósseo. Levando-se em consideração o nível de expressão e a menor variação entre os genes de referência, HPRT1 foi o gene escolhido como normalizador. A média da idade dos indivíduos foi de 53,8 ± 5,6 anos e apenas um dos sujeitos da pesquisa era do gênero feminino. Em todas as amostras analisadas, ocorreu maior presença de genes-alvo sub-expressos (em verde), seguidos dos super-expressos (em vermelho) e dos moderadamente expressos (em preto). Foi observada intensa atividade de remodelação óssea nos pacientes com remodelação óssea inicial, os quais apresentavam grande heterogeneidade individual na expressao de genesde formação e reabsorção óssea. No.... / The understanding of residual ridge resorption (RRR) can provide an important scientific basis for improving restorative and therapeutic treatments of edentulous patients. The present study aimed to seek molecular markers involved in bone remodeling in bone tissue from jaws that suffered the extraction of remaining teeth in less than two months period (in which the RRR is more intense).The group of samples analyzed in this study was composed of five individuals who underwent tooth extraction operated in less than two months by area and one patient who underwent tooth extraction operated in the area for more than five years , which was used as calibrator. All patients had their recorded clinical data and panoramic radiographs of patients was used to perform set for evaluation of anatomical features previously related to RRR. The RNA samples were extracted and presented purity between 1.8 and 2.0. The preparation of cDNA was performed by qRT-PCR. For quantitative analysis, all reactions were performed at optical plates 96 wells for specific real-time PCR using primers of 40 genes involved in bone metabolism. Taking into account the level of expression and the lowest variation among the reference genes, HPRT1 was chosen as the normalizing gene. The mean age of subjects was 53.8 ± 5.6 years and only one of the subjects were female. In all samples, the greater presence of target genes underexpressed (green), followed by overexpressed (red) and moderately expressed (black) occurred. Intense activity of bone remodeling was observed in patients with initial bone remodeling, which had great individual heterogeneity in gene expression of bone formation and resorption. However, no significant correlations between clinical and laboratory findings for this group of patients
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Estudo histomorfométrico e imunoistoquímico dos efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana no tratamento da doença periodontal induzida em ratos

Longo, Mariéllen [UNESP] 28 February 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:32:28Z : No. of bitstreams: 1 longo_m_me_araca.pdf: 527742 bytes, checksum: 9509864865c7af3c0ba3de31bbef652b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo avaliou histomorfometricamente e imunoistoquimicamente os efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), usando dois fotossensibilizadores com diferentes concentrações, como coadjuvante no tratamento da periodontite induzida em ratos. A doença periodontal (DP) foi induzida por adaptação de uma ligadura ao redor do primeiro molar inferior esquerdo em 162 ratos. Os animais foram randomicamente divididos em 9 grupos: G1 - raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação com soro fisiológico; G2 - RAR e irrigação com azul de metileno (MB) (100 μg / ml); G3 - RAR e irrigação com MB (10 mg / ml); G4 - RAR e irrigação com azul de toluidina- O (TBO) (100 μg / ml); G5 - RAR e irrigação com TBO (10 mg / ml); G6 – RAR, irrigação com MB (100 μg / ml) e Laser (InGaAlP; 660nm; 4,94J/cm2/ponto; 24 segundos); G7 – RAR, irrigação com MB (10 mg / ml) e Laser; G8 – RAR, irrigação com azul de TBO (100 μg / ml) e Laser; G9 – RAR, irrigação com TBO (10 mg/ml) e Laser. A área de perda óssea (PO) na região de furca (RF) foi analisada histomorfometricamente. A quantidade de osteoclastos e os reguladores locais da atividade osteoclástica foram avaliados qualitativamente na RF via detecção imunoistoquímica de TRAP e RANKL-OPG, respectivamente. Os dados da PO foram analisados estatisticamente (P<0,05). Os animais do G1 apresentaram maior PO (2,17±0,54) comparado ao G6 (0,55±0,14), G7 (0,77±0,17) e G8 (0,73±0,17) aos 7 dias... / The aim of this study was to evaluate histomorphometric and immunohistochemical the effects of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), using two photosensitizers with different concentrations, as an adjunct in the treatment of induced periodontitis in rats. Periodontal disease was induced by placing a ligature around the left first mandibular molar in 162 rats. The animals were randomly divided into nine groups: G1- scaling and root planning (SRP) and irrigation with saline solution, G2- SRP and irrigation with methylene blue (MB) (100 μg/ml); G3- SRP and irrigation with MB (10 mg/ml); G4- SRP and irrigation with toluidine blue O (TBO) (100 μg/ml); G5- SRP and irrigation with TBO (10 mg/ml); G6- SRP, irrigation with MB (100 μg/ml) and Laser (InGaAlP; 660 nm; 4.94 J/cm2/point; 24 seconds); G7-SRP, irrigation with MB (10 mg/ml) and Laser; G8- SRP, irrigation with TBO (100 μg/ml) and Laser; G9- SRP, irrigation with TBO (10 mg/ml) and Laser. The area of bone loss (BL) in the furcation region (FR) was histometrically analyzed. The amount of osteoclasts and the local regulator of osteoclastic activity were evaluated qualitatively in the FR via immunohistochemical detection of TRAP and RANKL-OPG, respectively. Data were analyzed statistically (P<0.05). The animals of G1 presented more BL (2.17±0.54) compared to animals of G6 (0.55±0.14), G7 (0.77±0.17) and G8 (0.73±0.17) at 7 days. There was no statistically significant difference between the groups treated with photosensitizers or aPDT. The qualitative immunohistochemical analysis revealed that there was a tendency to decrease immunostaining of RANKL and TRAP, and a tendency to increase expression of OPG in the groups treated with aPDT/MB. The aPDT using the MB, as an adjunctive therapy to SRP was effetive to act as a downregulator in local molecular mechanisms... (Complete abstract click electronic access below)
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Influência do hidrocloreto de tetraciclina associado à terapia fotodinâmica no tratamento da doença periodontal induzida: estudo histomorfométrico e imunoistoquímico em ratos

Faleiros, Paula Lazilha [UNESP] 03 October 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-03Bitstream added on 2014-06-13T19:57:14Z : No. of bitstreams: 1 faleiros_pl_me_araca_parcial.pdf: 320319 bytes, checksum: f60161ac54afca08ece804618922fde8 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-02T12:36:12Z: faleiros_pl_me_araca_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-02T12:37:33Z : No. of bitstreams: 1 000717309_20201003.pdf: 296777 bytes, checksum: feb467f613ec70e8fd72178698b6bbaf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: O propósito do presente estudo foi realizar uma avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica do efeito do hidrocloreto de tetraciclina (TTC) e da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), usados isoladamente ou em associação, como adjuvantes à raspagem e alisamento radicular (SRP) no tratamento da doença periodontal (DP) experimental induzida. Materiais e métodos: Foram utilizados 168 ratos, nos quais a DP foi induzida através da adaptação de fio de algodão ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Após 7 dias, a ligadura de todos os animais foi removida e o primeiro molar inferior esquerdo foi submetido à SRP. Os animais foram então divididos randomicamente em 7 grupos experimentais de diferentes tratamentos adjuvantes à SRP: SRP-SS - irrigação com solução salina (SS); SRP-MB - irrigação com azul de metileno (MB); SRP-TTC - irrigação com TTC; SRP-MB/TTC - irrigação com solução de MB e TTC; SRP-aPDT - irrigação com MB e, após 60 s, irradiação com Laser em baixa intensidade (LLLT) (660 nm); SRP-TTC/LLLT – irrigação com TTC e, após 60 s, irradiação com LLLT (660 nm); SRP-TTC/aPDT - irrigação com solução de MB e TTC e, após 60 s, irradiação com LLLT (660 nm). Os animais foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias após o tratamento da DP. Foi realizada uma análise histométrica da área de perda óssea (PO) e das características histopatológicas e imunoistoquímicas da região de furca. Resultados: Aos 7 dias pós-tratamento, os grupos SRP-TTC, SRP-MB/TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT e SRP-TTC/aPDT exibiram menor área de PO que os grupos SRP-SS e SRP-MB (p<0,05). Aos 15 dias pós-tratamento, os grupos SRP-TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT e SRP-TTC/aPDT exibiram menor área de PO que o Grupo SRP-SS (p<0,05). Os... / Aim: The purpose of the present study was to perform a histomorphometric and immunohistochemical assessment of the effect of tetracycline hydrochloride (TTC) and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), used alone or in combination, as adjunct to scaling and root planing (SRP) in the treatment of experimentally induced periodontal disease (PD). Materials and methods: One-hundred-and-sixty-eight rats were used, in which PD was induced by tying cotton thread around the left mandibular first molar. After 7 days, ligatures were removed from all animals, and left first molar was subjected to SRP. The animals were then randomly divided into 7 experimental groups receiving different treatments adjuvant to SRP: SRP-SS - irrigation with saline solution (SS); SRP-MB - irrigation with methylene blue (MB), SRP-TTC - irrigation with TTC; SRP-MB/TTC - irrigation with TTC and MB solution; SRP-aPDT - irrigation with MB and afterwards 60 s irradiation with low-level laser therapy (LLLT) (660 nm); SRP -TTC/LLLT - irrigation with TTC, and afterwards 60 s, LLLT irradiation (660 nm); SRP-TTC/aPDT - irrigation with TTC and MB solution and afterwards 60 s, irradiation with LLLT (660 nm). Animals were euthanized at 7, 15 and 30 days after treatment of PD. Histometric evaluation of bone loss (BL), and of histopathological and immunohistochemical characteristics of the furcation region, was performed. Results: At 7 days postoperatively, SRP-TTC, SRP-MB/TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT and SRP-TTC/aPDT groups exhibited less BL than SRP-SS and SRP-MB groups. At 15 days postoperatively, SRP-TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT and... (Complete abstract click electronic access below)
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Efeitos da osteopenia no reparo ósseo alveolar de ratas /

Prado, Renata Falchete do. January 2008 (has links)
Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Rosilene Fernandes da Rocha / Banca: Renata Callestini Felipini / Banca: Juliana Mazzonetto Teófilo / Banca: Vanessa Ávila Sarmento Silveira / Resumo: Este trabalho teve como objetivo analisar os efeitos iniciais da deficiência estrogênica associada ou não a dieta deficiente em cálcio na reparação óssea alveolar. Foram utilizadas 72 ratas, aos três meses de idade, das quais 48 foram ovariectomizadas e 24 falso-operadas (SHAM). Das 48 ratas ovariectomizadas, 24 receberam ração comercial padrão (OVZ) e 24 receberam ração especial com baixo teor de cálcio (ESP). Foi extraído o primeiro molar inferior, bilateralmente, 15 dias após a ovariectomia e a cirurgia Sham. Os animais foram sacrificados aos sete, 21 e 45 dias após as exodontias. As mandíbulas foram radiografadas e processadas para análise radiográfica e microscópica. Como resultados após a comparação pelo teste ANOVA e de Tukey verificou-se que a densidade óptica, o volume trabecular e o número de mastócitos foram crescentes significativamente com o decorrer do tempo, enquanto a taxa de aposição mineral óssea diária e o volume osteóide foram decrescentes com o tempo. A comparação entre os grupos SHAM e OVZ não revelou diferenças estatísticas, entretanto a comparação entre os grupos OVZ e ESP mostrou diferenças no volume trabecular e número de mastócitos, sendo os demais parâmetros semelhantes. Diante do exposto concluiu-se que a deficiência hormonal não retarda o reparo ósseo alveolar de ratas ovariectomizadas e um possível mecanismo de reabsorção óssea é ativado diante da hipocalcemia e deficiência estrogênica recrutando mastócitos. A taxa de aposição mineral diária não é influenciada pela deficiência hormonal, mas pareceu sofrer alguma influência quando se associou a dieta pobre em cálcio, mostrando uma tendência à diminuição. / Abstract: This study had the objective of analyze the initials effects of estrogen deficiency associated or not with a low calcium dietary in the alveolar bone repair. 72 rats at three months were used; 48 ovariectomized and 24 Sham-operated (SHAM). The ovariectomized rats were divided into 2 groups, 24 rats receiving common diet (OVZ) and 24 receiving special diet (ESP). SHAM rats received common diet. Treatment began on the ovariectomy day. The lower first molar was removed on both sides 15 days after ovariectomy. The rats received the diets until sacrifice, which occurred at seven, 21 and 45 days after dental extraction. The mandibles were submitted to radiographic and microscopic analyses. As results, using ANOVA and Tukey tests, optic density, trabecular volume and mast cell number increased with time and osteoid volume and mineral apposition rate decrease with time. Comparison between the OVZ and SHAM groups for each period revealed no difference; however OVZ and ESP groups showed different trabecular volume and mast cell number, being the other parameters, similar. In conclusion, hormonal deficiency do not retards the alveolar bone repair in ovariectomized rats and a possible mechanism of bone resorption is activated instead of hypocalemia and estrogen deficiency recruiting mast cell. The mineral apposition rate is not affect by ovariectomy but seems to present an influence by its association with low calcium dietary shows a tendency to decrease. / Doutor
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Efeito da aplicação local de células mononucleares adultas autógenas em cirurgia de perda óssea alveolar induzida em camundongos

Guimarães, Maria Letícia Rassi January 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T18:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000400250-Texto+Completo-0.pdf: 1856899 bytes, checksum: 614c0f3a931065292e34ce60993c7082 (MD5) Previous issue date: 2008 / The association in humans between aging and alveolar bone loss is difficulty to evaluation and periodontal tissues repair and is a challenge for dentistry. This study analyzed the behavior of mandibular bone tissue after application of adult autogenous mononuclear cells using morphometric examination and measurements of osteocalcin values with RT-PCR. Male BALB/c mice aged 3 (n=5) and 9 months (n=7) were used. Alveolar bone loss was induced by mucoperiosteal flap surgery of the right and left molar regions of the mandible. The right side - experimental side and received applications of adult autogenous mononuclear cells, and the left side - control side and received applications of DPBS. Results of alveolar bone loss were expressed in mm2 and compared by paired Student t test. Morphometric analyses revealed in 3 and 9- months-old, area of bone loss in the buccal side were not statistically different between groups. However, the mean in lingual side of control samples was significantly larger compared with experimental samples (p<0. 03). Osteocalcin expression revealed that the values of the protein were practically negligible in samples of 3-month-old mice. The analysis of the 9-month-old mice, however, showed that the protein values were significantly different: 5 of the 7 experimental samples showed osteocalcin expression in mRNA. Under the experimental conditions the results showed that alveolar bone loss was prevented in the lingual side of younger mice, and that values of osteocalcin expression were significantly different in the samples of 9-month-old mice. / A associação entre envelhecimento e perda óssea alveolar em humanos é de difícil avaliação e a reparação dos tecidos periodontais e constitui um desafio a Odontologia. O objetivo este estudo foi analisar a resposta do tecido ósseo alveolar frente à aplicação local de células mononucleares adultas autógenas, com análises morfométricas e análise da expressão da osteocalcina em RT-PCR. Foram utilizados camundongos machos BALB/c de 3 (n=5) e 9 (n=7) meses de idade. A perda óssea alveolar foi induzida por cirurgias de descolamento mucoperiósteo vestibular em mandíbulas nas regiões de molares nos lados direito e esquerdo. O lado direito - sítio experimental, com a aplicação de células mononucleares, e o lado esquerdo - sítio controle, com a aplicação de DPBS. Os resultados da perda óssea foram expressos em mm2 e comparados com teste t de Student pareado. Nas análises morfométricas aos 3 e 9 meses, a área da perda óssea na face vestibular não foi diferente entre os grupos. Entretanto, a perda óssea das amostras controle aos 3 meses, face lingual foi significativamente maior que as amostras experimentais (p<0. 03). A expressão da proteína osteocalcina no grupo dos camundongos de 3 meses foi praticamente inexistente. Enquanto na análise dos resultados aos 9 meses a proteína apresenta diferenças significativas de expressão, demonstrando que de 7 sítios experimentais, 5 deles expressaram mRNA de osteocalcina. Nas condições deste experimento os resultados evidenciaram a prevenção da perda óssea alveolar na face lingual dos camundongos mais jovens e uma significante expressão da proteína osteocalcina aos 9 meses.
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Avaliação radiográfica do comportamento ósseo em relação à profundidade da linha marginal de cimentação de próteses sobre implantes Cone Morse: estudo experimental em cães / Radiographic evaluation of bone behavior in relation to the depth of the line of marginal cementation of prostheses on Morse taper implants: experimental study in dogs

Stancari, Fernanda Herrera 29 March 2011 (has links)
Pouco se sabe sobre o comportamento do tecido ósseo em relação à profundidade da linha de cimentação em próteses sobre implantes. Por isso, o presente estudo radiográfico utilizou os implantes Cone Morse com o intuito de definir a posição exata na qual se pode estabelecer a profundidade da linha de cimentação protética. Foram utilizados cinco cães, os quais tiveram todos os pré-molares inferiores extraídos numa primeira fase cirúrgica. Após três meses, realizou-se a segunda fase cirúrgica na qual foi utilizada a técnica da carga imediata, com a instalação dos implantes juntamente com os pilares protéticos. Foram instalados trinta implantes numa profundidade de 3mm infra óssea e eles foram igualmente divididos entre os grupos Controle e Experimental. Os pilares protéticos tinham diferentes dimensões transmucosas de 1.5, 3.5, e 5.5mm. Isto fez com que a linha de cimentação se posicionasse a 1.5mm infra óssea, a 0.5mm supra óssea e a 2.5mm supra óssea. No grupo Controle, foi realizada a instalação dos implantes e dos pilares protéticos somente. No grupo Experimental, foi realizada a instalação dos implantes, dos pilares protéticos e, sobre estes, foram cimentados cilindros de alumina. Foram realizadas tomadas radiográficas periapicais, através da técnica do paralelismo, em todas as fases do experimento. As radiografias foram escaneadas e analisadas através do programa AutoCAD. Foram utilizados os testes estatísticos t de Student para amostras pareadas e independentes com o nível de significância de p<0.05. Os resultados mostraram que não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos Controle e Experimental nas diferentes profundidades em relação ao tecido ósseo. Adicionalmente, também não houve diferenças estatisticamente significantes na crista óssea nas variações das dimensões das cintas transmucosas dos pilares testados e nas variações entre os tempos Inicial e Final do experimento no grupo Controle e no grupo Experimental. Conclui-se que não há influência da profundidade da linha de cimentação no comportamento da crista óssea e a utilização de diferentes dimensões dos pilares protéticos não altera o tecido ósseo marginal ao redor dos implantes Cone Morse. / Little is known about the behavior of bone tissue in relation to the depth of the cement line position in dental implants. Therefore, this radiographic study used the Morse taper implants in order to define the exact location in which it can be established the depth of the prosthetic cementation line. Five dogs were used and had all their lower premolars extracted in the first stage surgery. After three months, was performed a second surgical procedure in which was used the technique of immediate loading, installing together implants and abutments. Thirty implants were installed at a depth of 3 mm below the bone and they were equally divided between the Control and Experimental group. The abutments had different transmucosal dimensions of 1.5, 3.5, and 5.5mm. This meant that the depth of cementation line was positioned respectively to 1.5mm below the bone, 0.5 above the bone and 2.5mm above the bone. In the Control group, was performed the installation of implants and abutments only. In the Experimental group, was performed the installation of implants, abutments and, over these, was cemented cylinders of alumina. Periapical radiographs were taken, using the paralleling technique, in all phases of the experiment. The radiographs were scanned and analyzed with the program AutoCAD. Statistical t Student test of samples paired and independent were used with the level of significance of p<0.05. The results showed no differences statistically significants between the Control and Experimental group at different depths in relation to bone tissue. Additionally, there were no differences statistically significant in the crest bone in the variations of dimensions of the transmucosal abutments tested and in the variations between the Start and End time of the experiment in the Control and Experimental groups. It is concluded that there is no influence of the depth of cementation line on the behavior crest bone and the different dimensions of the abutment does not change the marginal bone around Morse taper implants.

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