Plus de 300 alcaloïdes d’Amaryllidaceae doués d’activités biologiques ont été isolés à partir des plantes appartenant à cette famille. De nos jours, seule la galanthamine, utilisée pour le traitement palliatif de la maladie d’Alzheimer, est commercialisée. L’accumulation de ces alcaloïdes dans les plantes est limitée. La culture in vitro est une méthode alternative intéressante pour l’obtention plus aisée de ces alcaloïdes à haute valeur ajoutée. Le premier objectif de ce travail vise à développer une méthode de purification efficace, simple et rapide des extraits de plantes préalablement à leur analyse en LCMS et GCMS. Le second objectif est d’étudier l’effet de plusieurs facteurs exogènes, ajoutés au milieu de culture de bulbilles de Leucojum aestivum et de sa variété Gravety Giant en bioréacteurs RITA®, sur les voies de biosynthèse de la galanthamine et de la lycorine. La variation des paramètres exogènes a permis une accumulation accrue en galanthamine et en lycorine (0,814 mg/g et 1,54 mg/g de matière sèche respectivement) dans les bulbilles. Le troisième objectif porte sur l’isolement et l’identification d’endophytes à partir de bulbes in vivo et in vitro de trois espèces d’Amaryllidaceae (L. aestivum, Narcissus pseudonarcissus et Galanthus elwesii). Des bactéries endophytes du genre Bacillus ont été identifiées. Un nouvel alcaloïde a été isolé à partir des cultures bactériennes / Over 300 Amaryllidaceae alkaloids possessing a wide range of biological activities have been isolated from plants belonging to this family. Galanthamine, used for the palliative treatment of Alzheimer’s disease, is the only one commercialized. The biodisponiblity of these alkaloids is low. In vitro culture offers an alternative yet interesting approach for the biotechnological production of these valuable alkaloids. The aim of this work was, first, to develop a fast, efficient and easy purification method of plant extracts prior to their phytochemical analysis both in LCMS and GCMS. Second, the combined effects of bioreactor RITA® culture and feeding with different exogenous factors on the biosynthetic pathway of both galanthamine and lycorine were studied. The experiments were conducted both with Leucojum aestivum and L. aestivum ‘Gravety Giant’ bulblets. The variation of several exogenous parameters resulted in a better accumulation of galanthamine and lycorine (0.814 mg/g and 1.54 mg/g dry weight respectively) in the bulblets. The third aim was to isolate and identify alkaloid producing endophytes from in vivo and in vitro bulbs of three Amaryllidaceae species (L. aestivum, Narcissus pseudonarcissus and Galanthus elwesii). Bacterial endophtes belonging to the Bacillus genus were identified. A new alkaloid was isolated from bacterial liquid cultures

?rea de concentra??o: Ci?ncias farmac?uticas. / Data de aprova??o ausente. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-08-01T18:51:24Z No. of bitstreams: 2 leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT). 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Consequentemente, ? necess?rio maior investimento em pesquisas com plantas medicinais para tratamento de doen?as, principalmente, as cr?nicas degenerativas e parasit?rias, como Doen?a de Chagas, Leishmanioses, C?ncer e as infec??es causadas por bact?rias e fungos, cujo o tratamento apresenta importantes limita??es. Assim, o objetivo deste estudo foi realizar a triagem fitoqu?mica e de atividades biol?gicas de extratos etan?licos de 12 esp?cies de plantas oriundas do Cerrado, coletadas no mun?cipio de Diamantina, Vale do Jequitinhonha/MG. Para a triagem fitoqu?mica preliminar destes extratos foram realizadas rea??es cromog?nicas, de precipita??es e an?lises em cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC). A citotoxicidade para c?lulas normais de mam?feros foi avaliada em fibroblastos de camundongos (L929). A linhagem celular de c?ncer de mama MDA-MB-231 foi a utilizada para a avalia??o da atividade antitumoral dos extratos. A avalia??o da atividade antitripanossomat?deo foi realizada sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de Trypanossoma cruzi e, sobre as formas promastigotas das cepas BH46 de Leishmania (leishmania) infantum e cepa M2269 de Leishmania (leishmania) amazonensis. Para a avalia??o destas atividades foi empregada a t?cnica colorim?trica de MTT. A avalia??o das atividades antibacteriana e antif?ngica foi realizada por meio da determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima (CIM), empregando a t?cnica colorim?trica da Resazurina. As esp?cies de bact?rias utilizadas foram Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Na atividade antif?ngica foram utilizadas quatro esp?cies de leveduras (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei e Candida tropicalis) e duas esp?cies de fungos filamentosos (Aspergillus niger e Penicillium expansum). Dos 13 extratos avaliados com rela??o a citotoxicidade sobre fibroblastos de camundongos da linhagem L929, todos apresentaram algum grau de citotoxicidade. Alguns destes extratos apresentaram elevada toxicidade sobre esta linhagem celular, sendo que o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus foi o mais t?xico. Na avalia??o da atividade antitumoral, com exce??o do extrato etan?lico das folhas de P. rigida, todos os outros extratos avaliados apresentaram atividade. Destes o mais promissor tamb?m foi o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade tripanocida sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi, nove extratos foram ativos contra este parasito. Destes os mais promissores foram os extratos das folhas de A. aculeata e das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade leishmanicida para a cepa M2269 os extratos etan?licos das folhas de E. erythropappus e das folhas de B. oxyclada apresentaram como os mais promissores e, para a cepa BH46 o extrato etan?lico de toda esp?cie T. catahartica foi o mais promissor, seguido tamb?m do extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade antibacteriana somente os extratos etan?licos das folhas de B. oxyclada, de P. tomentosa e S. rugosa foram ativos e, as ?nicas bact?rias sens?veis foram P. aeruginosa e S. aureus. Destes o extrato etan?lico de P. tomentosa inibiu um maior n?mero de bact?rias com a??o bactericida. Os fungos filamentosos, A. niger e P. expansum, se mostraram resistentes a todos os extratos avaliados e C. krusei foi a levedura mais sens?vel. Os extratos das folhas de B. oxyclada e das folhas de P. tomentosa foram os extratos que inibiram o maior n?mero de esp?cies f?ngicas com os menores valores de CIM. Atrav?s destes resultados, sugere-se que os extratos etan?licos das folhas de Eremanthus erythropappus, de Peixotoa tomentosa e de Banisteriopsis oxyclada apresentaram o maior n?mero de atividades biol?gicas e com os melhores resultados, o que torna estas esp?cies as mais promissoras como fontes potenciais de mol?culas bioativas para o tratamento de C?ncer, Doen?a de Chagas, Leishmanioses e infe??es bacterianas e f?ngicas, necessitando de mais estudos a fim de identificar as subst?ncias respons?veis por tais atividades e pela citotoxicidade e, valid?-las atrav?s de outros modelos in vitro e in vivo. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. / Plants are a potencial source of biologically active substances and they are used for therapeutic purposes since the beginning of human civilization. Brazil, in turn, holds a vast biological diversity and has a lot of plant species with medicinal potential. Among the various biomes of Brazil, the Cerrado is the second largest, registering many medicinal species. Consequently, it is necessary to invest more in research of medicinal plants as possible new treatments, especially for the degenerative and chronic disease such as Chagas, Leishmaniasis, cancer and infections caused by bacteria and fungi, whereof treatment has big limitations. The objective of this study was the phytochemical screening and biological activities studies of ethanolic extracts of 12 plants species from the Cerrado, collected in the municipality of Diamantina, Vale do Jequitinhonha / MG.For the preliminary phytochemical screening were made chromogenic and precipitation reactions and analysis in thin-layer chromatography. Cytotoxicity for normal mammalian cells was evaluated in mouse fibroblasts (L929) and the cell line of breast cancer MDA-MB-231 was used to analyze the antitumor activity of the extracts. The evaluation of antitripanossomatideo activity was performed using epimastigotas of Colombiana Trypanosoma cruzi strain and promastigotes of BH46 Leishmania (Leishmania) infantum strain and M2269 Leishmania (Leishmania) amazonensis strain. The analyze of these activities were based at the colorimetric MTT technique. The evaluation of antibacterial and antifungal activities was performed by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) employing the colorimetric Resazurin technique. Species of bacteria used were Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. In the antifungal activity were used four species of yeast (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei and Candida tropicalis) and two species of filamentous fungi (Aspergillus niger and Penicillium expansum). Of the 13 extracts evaluated for cytotoxicity using the L929 strain mouse fibroblasts, all they had some cytotoxicity level. Some of these extractsthen showed a high toxicity in this assay cell line, wherein the ethanolic extract of E. erythropappus leaves was the most toxic. In the evaluation of antitumor activity all extracts showed activity, exception for the extract of P. rigida leaves. Among these the most promising was either the ethanolic extract of the leaves of E. erythropappus. Evaluation of trypanocidal activity using Colombian strain of T. cruzi epimastigotas, present active for nine extracts against this parasite, been the A. aculeata and leaves E. erythropappus leaf extract the most promising. Leishmanicidal activity for the M2269 strain of E. erythropappus B. oxyclada leaf extract presented as the most promising and, for the BH46 strain the T. catahartica role plant extract shows the best results, followed by the E. erythropappus leaf extract. In the antibacterial activity assay only the B. oxyclada, P. tomentosa and S. rugosa leaf extracts were active, and the only for P. aeruginosa and S. aureus. Among these the P. tomentosa extract inhibited a greater number of bacteria with bactericidal action. Filamentous fungus A. niger and P. expansum were resistant to all extracts evaluated and C. krusei was the most sensitive yeast. P. tomentosa and B. oxyclada leaf extracts inhibited more yeast species but with the lowest MIC values. Due these results, it is suggested that the E. erythropappus of P. tomentosa and B. oxyclada leaf ethanolic extracts showed the greatest of biological activities, making these the most promising species as potential sources of bioactive molecules for the treatment of cancer, Chagas disease, Leishmaniasis and bacterial and fungal infections, yet requiring further studies to identify the substances responsible for such activities and cytotoxicity and validate them through other models in vitro and in vivo.

O Hibiscus rosa-sinensis L. e o Hibiscus syriacus L., da família Malvaceae são utilizados na área ornamental, mas nos últimos anos vem ganhando espaço na área alimentícia como flores comestíveis. Alguns estudos demonstram o potencial antibacteriano destas variedades frente a diversos microrganismos e sobre sua composição nutricional e fitoquímica há poucas pesquisas. Este trabalho teve por objetivo analisar a intensidade de atividade de inibição (IINIB) e a inativação bacteriana (IINAB) in vitro dos dois extratos alcoólicos das flores dos hibiscos e a relação com os polifenóis e antocianinas, e quantificar os compostos nutricionais e bioativos comparados com a atividade antioxidante. Avaliou-se a ação antibacteriana frente às bactérias de interesse alimentar, Staphylococcus aureus e Salmonella Enteretidis resultando em diferenças significativas entre as médias dos valores arbitrários (IINIB/IINAB). Observou-se a resistência da primeira bactéria com a segunda respectivamente em ambos os extratos vegetais. O doseamento dos compostos fitoquímicos presentes constatou que as plantas possuem correlação com a atividade antibacteriana e as propriedades químicas demonstraram valores significativos do ponto de vista nutricional e detectou-se efeito relevante com a atividade antioxidante. / The Hibiscus rosa-sinensis L. and Hibiscus syriacus L., Malvaceae the family are used in the ornamental area, but in recent years has been gaining ground in the food area as edible flowers. Some studies have demonstrated the antibacterial potential of these varieties against various microorganisms and on their nutritional composition and phytochemical little research. This study aimed to analyze the intensity of activity inhibition (IINIB) and bacterial inactivation (IINAB) in vitro of both alcoholic extracts of petals of flowers of hibiscus and relationship with polyphenols and anthocyanins, and quantify the nutritional and bioactive compounds compared with antioxidant activity. We evaluated the antibacterial action on the bacteria of food interest, Staphylococcus aureus and Salmonella Enteretidis resulting in significant differences between the means of arbitrary values (IINIB/IINAB), where there was resistance from the first to the second bacterium in both extracts vegetables. The determination of phytochemical compounds found that plants have a correlation with the antibacterial activity and chemical properties showed significant amounts of nutritional standpoint and significant effect was detected with antioxidant activity.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The selective determination of inorganic cations, like alkaline, earth-alkaline, of transition and the ammonium ion (NH4 +) is considered as a difficult practice, because generally, these ions show very close apparent mobilities, by the similarities in their sizes (hydrated ionic rays) and same charges, in some cases it may make the separation not viable. This work describes the simultaneous determination of 14 analytes: ammonium (NH4 +), potassium (K+), calcium (Ca2+), sodium (Na+), magnesium (Mg2+), manganese (Mn2+), thallium (Tl+), chrome (Cr3+), lead (Pb2+), cadmium (Cd2+), zinc (Zn2+), copper (Cu2+), cobalt (Co2+) and nickel (Ni2+). The mechanism of separation used was the capillary zone electrophoresis (CZE, capillary zone electrophoresis) with capacitively coupled contactless conductivity detection (C4D, capacitively coupled contactless conductivity detection) CZE-C4D. The experimental conditions optimized to the determination of cations were: working electrolyte 30 mmol L-1 MES/His, containing 1.5 mmol L-1 18-crown-6 ether, in pH 6; followed by a second stage containing 1 mmol L-1 citric acid in its composition to the selective determination of ions K+ and Tl+. Even other operational parameters with the separation potential of -10 kV, the work temperature of 25 ±1°C, hydrodynamic injection by the samples gravity (20 cm versus 60 s), and the detector C4D operating with the frequency of 600 kHz and varying the amplitude in 2 Vpp (peak to peak). The developed methodology was evaluated for the 14 analytes, where the method was shown adequate to the determination of inorganic cations studied, showing wide linear work rates of 5.18 to 2,217.06 Umol L-1 and of 19.00 to 1,538.46 Umol L-1 for ions NH4 + and Cr3+, respectively; also showing limits of detection (LD) and of quantification (LQ) in the order of Umol L-1 for all analytes. The study also involved the analysis of the alkaloids in real samples and in distinct molds, like phytotherapyc formulations and formulations of mineral fertilizers. / A determinação seletiva de cátions inorgânicos, como metais alcalinos, alcalinos terrosos, de transição e o íon amônio (NH4 +) é considerada uma prática difícil, pois geralmente estes íons apresentam mobilidades aparentes muito próximas, pela semelhança de seus tamanhos (raios iônicos hidratados) e mesmas cargas, em alguns casos, podendo inviabilizar a separação. Este trabalho descreve a determinação simultânea de 14 analitos: amônio (NH4 +), potássio (K+), cálcio (Ca2+), sódio (Na+), magnésio (Mg2+), manganês (Mn2+), tálio (Tl+), cromo (Cr3+), chumbo (Pb2+), cádmio (Cd2+), zinco (Zn2+), cobre (Cu2+), cobalto (Co2+) e níquel (Ni2+). O mecanismo de separação utilizado foi a eletroforese capilar de zona (CZE, capillary zone eletrophoresis) com detecção condutométrica sem contato capacitivamente acoplada (C4D, capacitively coupled contactless conductivity detection) CZE-C4D. As condições experimentais otimizadas para a determinação dos cátions foram: eletrólito de trabalho MES/His 30 mmol L-1, contendo éter 18-coroa-6 1,5 mmol L-1, em pH 6; seguida de uma segunda etapa contendo ácido cítrico 1 mmol L-1 na sua composição, para a determinação seletiva dos íons K+ e Tl+. Ainda outros parâmetros operacionais como o potencial de separação de -10 kV, a temperatura de trabalho de 25 ±1°C, injeção hidrodinâmica por gravidade das amostras (20 cm versus 60 s), e o detector C4D operando com frequência de 600 kHz e variando a amplitude em 2 Vpp (pico a pico). A metodologia desenvolvida foi avaliada para os 14 analitos, onde o método mostrou-se adequado para a determinação dos cátions inorgânicos estudados apresentando amplas faixas lineares de trabalho de 5,18 a 2.217,06 Umol L-1 e de 19,00 a 1.538,46 Umol L-1 para os íons NH4 + e Cr3+, respectivamente; apresentando também limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ) na ordem de Umol L-1 para todos os analitos. O estudo também envolveu a análise desses metais em amostras reais e de matrizes distintas, como formulações fitoterápicas e formulações de fertilizantes minerais.

The family Amaranthaceae consist of approximately 65 genus and 1000 species of herbaceous plants. The genus Alternanthera is in this family and can be found spread worldwide. The Alternanthera brasiliana (L.) Kuntze and Alternanthera dentata (Moench) Stuchlik species are known as penicillin and can be found in Brazil, commonly in Santa Catarina and Rio Grande do Sul. The popular usage of the A. brasiliana specie is for the treatment of tonsillitis, cold and the influenza and the A. dentata is used to treat infections, fever along with headache and is also used as antiseptical for the treatment of itches and wounds. This work aims at to stipulate pharmacognostics parameters of distinguishment between the two cited species because there is a disagreement among the botanics about the existence of the dentata species. The macroscopical characteristics that can help authenticate them are: the perimeter, color, the abundance of trichomas in the limb and the shape of the stalk. The anatomical analysis had allowed the distinction through the type of found stomata (anfiestomatic and hipostomatic), the existence of the collenchyma disposal of the phloem and the absence of trichomes in the adaxial surface of A. dentata. The presence of the Kranz sheath characterized the type C4 of the Amaranthaceae family. Additionally, this work describes the identification of β-sitosterol, stigmasterol and espinasterol isolated from dichloromethane fraction of A. brasiliana leaves. The A. brasiliana leaves used in the pharmacobotanic and phytochemistry analyses and in the biological activities were collected in December 2004 and March 2005 in Santa Cruz do Sul (RS) and Santa Maria (RS), the leaves were identified by the biologist Dr. Thaís do Canto Dorow (Dpt. of Biology, UFSM). The vouchers are deposited in the Department of Biology herbarium of UFSM respectively under the register numbers SMDB 10038 and 10039. The A. dentata specie used in the morphoanatomic study was collected in Florianópolis (SC) and was identified by the researcher Antônio Amaury Silva Jr. of EPAGRI-SC and confirmed by Elen N. Garcia and Sílvia Rubin, both biologists of the Federal University of Pelotas. This specie used in the study is registered in the institution 03 herbarium (PEL-UFPEL) 04/07/06 and in the UFSM herbarium SMDB 10100. In relation to the antimicrobial activity the best result was obtained in the dichloromethane fraction with the Prototheca zopffi algae but it was also found satisfactory MIC for the Gram-positive S. aureus and B. subtillis bacteria and for the S. cerevisiae fungus. The biggest antioxidant activity was found in the acetate of ethyla fraction wich evidenced a IC50=163, 01ug/mL. The correlation between the polyphenol tenors and the antioxidant activity was not possible. / A família Amaranthaceae compreende, aproximadamente 65 gêneros e 1000 espécies de herbáceas. O gênero Alternanthera está inserido nesta família e encontra-se amplamente distribuído pelo mundo. As espécies Alternanthera brasiliana (L.) Kuntze e Alternanthera dentata (Moench) Stuchlik são igualmente conhecidas por penicilina , sendo encontradas no Brasil, mais comumente nos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul. O uso popular da espécie A. brasiliana destina-se ao tratamento de amigdalites, gripes e resfriados já para a espécie A. dentata foi referenciada em infecções, febre acompanhadas de dor de cabeça e também como antiséptico para sarnas e feridas. Este trabalho visa determinar parâmetros farmacognósticos de diferenciação entre as referidas espécies, uma vez que há discordância entre botânicos da existência da espécie dentata. As características macroscópicas que podem auxiliar na autenticação das espécies são contorno, cor, abundância de tricomas no limbo e a forma do pecíolo. As análises anatômicas permitiram a diferenciação através do tipo de estômatos encontrados (anfiestomático e hipostomático) além da ocorrência do colênquima, disposição do floema e a ausência de tricomas tectores na face adaxial de A. dentata. A presença da bainha vascular com anatomia de Kranz caracterizou o tipo C4 da família Amaranthacea. Adicionalmente, o trabalho descreve a identificação de β-sitosterol, estigmasterol e espinasterol oriundos da fração diclorometânica das folhas de A. brasiliana. As folhas de A. brasiliana para as análises farmacobotânica, fitoquímicas e atividades biológicas foram coletadas em dezembro de 2004 e março de 2005 nos municípios de Santa Cruz do Sul e Santa Maria, sendo identificadas pela bióloga Drª. Thaís do Canto Dorow (Dpto. Biologia, UFSM). As excicatas estão depositadas no Herbário do Departamento de Biologia da UFSM sob registro SMDB10038 e 10039, respectivamente. A espécie A. dentata utilizada no estudo morfo-anatômico foi coletada no município de Florianópolis, sendo identificada pelo pesquisador da EPAGRI-SC Antônio Amaury Silva Jr., e confirmada pelas biólogas da Universidade Federal de Pelotas Elen N. Garcia e Sílvia Rubin, tendo seu registro no herbário da instituição 03 (PEL-UFPEL) 04/07/06 e no Herbário da UFSM SMDB 10100. Quanto a atividade antimicrobiana, a melhor resposta obtida foi com a fração diclorometânica frente a alga Prototheca zopffi mas também foram encontrados CIM satisfatórios para as bactérias Gram-positivas S. aureus e B. subtillis e para o fungo S. cerevisiae. A maior atividade antioxidante foi encontrada na fração acetato de etila, a qual evidenciou um IC50=163, 01μg/mL. Não foi evidenciada correlação entre teores de polifenóis e atividade antioxidante.

O presente trabalho descreve o isolamento e a caracterização estrutural dos constituintes químicos majoritários presentes nos frutos maduros das espécies Virola pavonis (A. CD.) A. C. Sm., Iryanthera juruensis Warburg e Osteophloeum platyspermum (Spruce ex A. DC.) Warburg. Foram isoladas vinte e oito substâncias, sendo catorze lignóides, dois tocotrienóis, dois sesquiterpenos, quatro diterpenos, um derivado do ácido cinâmico e cinco flavonóides. Avaliou-se ainda a composição química e o teor do óleo volátil extraído das folhas e dos pericarpos das espécies supracitadas, o que revelou a predominância de hidrocarbonetos monoterpênicos e monoterpenos oxigenados nas folhas e nos pericarpos, respectivamente, de O. platyspermum, bem como de hidrocarbonetos sesquiterpênicos em ambos os órgãos vegetais de I. juruensis e de sesquiterpenos oxigenados nas folhas de V. pavonis. Como esperado, o óleo essencial dos pericarpos de O. platyspermum apresentou significativa atividade contra Escherichia coli e Candida albicans devido à alta concentração de monoterpenos oxigenados. As substâncias di-hidrocarinatina e di-hidrocarinatidina, ambas isoladas do pericarpo de V. pavonis, inibiram o crescimento in vitro da cepa multiresistente K1 de Plasmodium falciparum (acima de 50 % a 2,5 µg/mL). Enquanto que os lignóides verrucosina e guaiacina, ambos obtidos do arilo de I. juruensis, mostraram boa ação leishmanicida contra as formas promastigotas de Leishmania amazonensis (IC50 = 27 e 45 µg/mL, respectivamente). / This work describes the isolation and structural characterization of the major chemical constituents from ripe fruits of Virola pavonis (A. CD.) A. C. Sm., Iryanthera juruensis Warburg and Osteophloeum platyspermum (Spruce ex A. DC.) Warburg. Twenty-eight substances have been isolated and classified as fourteen lignoids, two tocotrienols, two sesquiterpenes, four diterpenes, one cinnamic acid derivative and five flavonoids. Additionally, it was also analyzed the yields and chemical composition of the volatile oils from leaves and pericarps of all target species. This analysis indicated the predominance of oxygenated monoterpenes and monoterpene hydrocarbons respectively in leaves and pericarps of O. platyspermum, sesquiterpene hydrocarbons in both I. juruensis plant tissues and oxygenated sesquiterpenes in V. pavonis leaves. As one might expect, the oil from O. platyspermum pericarps presented significant activity against Escherichia coli and Candida albicans due to the high concentration of oxygenated monoterpene. Dihydrocarinatin and dihydrocarinatidin, both isolated from V. pavonis pericarps, were able to inhibit the growth of the multi-drug resistant K1 strain of Plasmodium falciparum (up 50% at 2,5 µg/mL). While the lignoids verrucosin and guaiacin, both obtained from I. juruensis arils, presented good antileishmanial activity against the promastigotes forms of Leishmania amazonensis (IC50 = 27 and 45 µg/mL, respectively).

Foi realizada uma investigação fitoquímica envolvendo diversos órgãos de plantas adultas (raízes, caules, folhas, inflorescências e sementes), plântulas (cultivadas in vivo e in vitro) e suspensões celulares de P. solmsianum. Dos órgãos estudados de plantas adultas, as raízes apresentaram a maior complexidade e diversidade química da planta, abrangendo ácidos benzóicos e benzaldeídos substituídos, esteróides, fenilpropanóides, lignanas tetraidrofurânicas e aristolactamas, enquanto que os outros órgãos acumulam principalmente fenilpropanóides e lignanas tetraidrofurânicas. As raízes de plântulas apresentaram semelhança qualitativa de metabólitos secundários quando comparadas às raízes de plantas adultas. No entanto, as partes aéreas apresentaram diferentes compostos como farnesol, fitol e α-tocoferol. Os extratos de plântulas separadas por tamanho foram comparados em relação à diversidade dos metabólitos encontrados, não sendo observada uma variação qualitativa muito significativa. Os extratos obtidos das células de suspensões celulares de P. solmsianum indicaram prevalência de ácidos graxos e esteróides, enquanto que o extrato obtido do meio de cultura apresentou como componente majoritário o ácido salicílico. / The phytochemical investigation was carried out to describe the composition in organs of adult plants (roots, steams, leaves, inflorescences and seeds), plantlets (in vivo and in vitro) and cell suspensions of Piper solmsianum. The roots of adult plants presented highest chemical diversity including benzoic acids, benzaldehydes, sterols, phenylpropanoids, tetrahydrofuran lignans and aristolactams, whereas aerial organs accumulate mainly phenylpropanoids and tetrahydrofuran lignans. The roots from plantlets presented qualitative similarity of secondary metabolites when compared to the roots of adult plants. However, the aerial parts from plantlets presented different composition including farnesol, phytol and α-tocopherol in addition to phenylpropanoids, but the plantlets at different developmental stages showed no significant qualitative variation. The extracts of cell suspensions of P. solmsianum indicated a suppressed phenylpropanoid metabolism with fatty acids and sterols in the cells and salicylic acid as major excreted compound in the culture medium.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6774.pdf: 4696015 bytes, checksum: 084c02944eff3cb2f25b1db2ce63280b (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Financiadora de Estudos e Projetos / Plants species from Brazilian savanna often have defense mechanisms in response to the low nutrient content of the soil, the light intensity, the competition for resources and drought, pronounced by deep water deficit, to which they are subjected. This area is a potential source of bioactive compounds that still little explored and potential phytochemical studies of these species are important to this preservation. Biological invasions are one of the main factors threatening the Brazilian savanna biodiversity. Many plants are initially introduced as ornamental species and subsequently become invasive. Invasive plants are generally more competitive than the other species and tolerate unfavorable conditions. This advantage can be explained according to the "Novel weapons hypothesis". It proposes that invasive plants have secondary metabolites that act as allelochemicals and present new challenges to native species. Thus, secondary metabolites of invasive species in the Brazilian savanna are also an important area of phytochemistry being investigated. Therefore, we hypothesized that native species from Brazilian savanna, Myrsine umbellata and Myrsine coriacea, and the alien specie, Tithonia diversifolia, produces secondary metabolites that have different biological activities, including insecticidal, antifungal and phytotoxic acitivities, favoring their establishment in this environment and have economic importance for agriculture and pharmaceutic industry. In the Chapter 1, the biological activity of leaf extracts of M. umbellata and M. coriacea, was evaluated. The in vitro antifungal effect of leaf extracts of these two species was evaluated against Pythium aphanidermatum, Fusarium oxysporum and Colletotrichum acutatum, three important crop pathogens. We also evaluated the insecticide potential of these extracts against Spodoptera frugiperda, known as fall armyworn, an important pest that causes damages to many crops. Finally, the total polyphenols and antioxidant activity of the leaf extracts of these two species was quantified by the DPPH method. In the Charpter 2 we evaluated the phytotoxic potential of leaf, stem and root extracts from T. diversifolia. Bioassays of wheat elongation coleoptile seed germination and seedling growth are performed. The Ethyl Acetate leaf extract was the most active extract and was selected to continue the isolation studies and the identification of compounds. The chromatographic separation of this extract allowed us the isolation of 12 sesquiterpene lactones (STSs), 1 secosesquiterpeno, and 1 diterpene. Two STSs are reported for the first time in this study, 8β-O-(2-methylbutyroyl) and tirotundin 8β-O-(isovaleroyl)tirotundin. The high phytotoxic activity of the extracts and compounds, especially the majority, 1β-methoxydiversifolin, tagitinin A and tagitinin C, indicates that allelopathy may be responsible for their establishment in this habitat. In the Chapter 3, the T. diversifolia Ethyl Acetate fractions were tested for insecticidal activity against S. frugiperda and it was observed a significant reduction in the pupal weight of the caterpillar. This may be an indicative of the presence of toxic substances to this insect in these fractions, however, this reduction in the pupal weight is not associated with the majority compounds tested. Thus, we conclude that the studied plant species have secondary metabolites with promising biological activities and economic importance for agriculture and pharmaceutical industry. / Espécies vegetais provenientes do Cerrado costumam apresentar mecanismos de defesa em resposta ao baixo teor de nutrientes do solo à que estão submetidas, a intensa luminosidade, a maior competição por recursos e ao longo período de estiagem, marcada por profundo déficit hídrico. Este domínio é uma fonte potencial de compostos bioativos ainda pouco explorada e estudos do potencial fitoquímico destas espécies são importantes para a preservação da sua biodiversidade. Entre os principais fatores que ameaçam a biodiversidade do Cerrado, está a invasão biológica. As plantas invasoras são geralmente mais competitivas que as demais espécies e suportam condições adversas. Essa vantagem pode ser explicada segundo a hipótese das novas armas , que afirma que as plantas invasoras possuem metabólitos secundários que agem como aleloquímicos e apresentam novos desafios para as espécies nativas. Dessa forma, metabólitos secundários de espécies invasoras do Cerrado também são uma importante área da fitoquímica a ser investigada. Sendo assim, foi proposta a hipótese de que espécies nativas, Myrsine umbellata e Myrsine coriacea e uma invasora do cerrado, Tithonia diversifolia, produzem metabólitos secundários em resposta ao estresse à que estão submetidas e que estes apresentam diferentes funções biológicas, incluindo, atividade antifúngica, antioxidante, inseticida e fitotóxica, que favoreçam seu estabelecimento nesse ambiente e apresentam importância econômica para uso na agricultura e na indústria farmacêutica. Para isso, no primeiro capítulo, foi avaliada a atividade biológica de extratos foliares de M. umbellata e M. coriacea. Foi avaliado o efeito antifúngico in vitro de extratos foliares destas espécies sobre Pythium aphanidermatum, Fusarium oxysporum e Colletotrichum acutatum, importantes patógenos de culturas agrícolas. Também foi avaliado o potencial inseticida destes extratos sobre Spodoptera frugiperda, conhecida como lagarta-do-cartucho do milho, importante praga causadora de danos a esta cultura. E por último, foi determinado a concentração de fenóis totais e atividade antioxidante dos extratos foliares destas duas espécies pelo método de redução do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil). No segundo capítulo foi avaliado o potencial fitotóxico de extratos de folha, caule e raiz de T. diversifolia. Foram realizados bioensaios com coleóptilos de trigo, germinação de sementes e crescimento de plântulas. O extrato foliar preparado com Acetato de Etila foi selecionado para continuar os estudos de isolamento e identificação de compostos por apresentar melhor atividade. A separação cromatográfica deste extrato nos permitiu isolar 12 lactonas sesquiterpênicas (STS), 1 secosesquiterpeno, e um diterpeno. Duas STSs estão sendo relatadas pela primeira vez neste trabalho, 8β-O-(2-metilbutiroil)tirotundina e 8β-O- (isovaleroil)tirotundina. A alta atividade fitotóxica desta espécie, bem como dos compostos avaliados e, principalmente, os compostos majoritários 1β-metoxidiversifolina, tagitinina A e tagitinina C, indica que a alelopatia pode ser uma das formas de seu estabelecimento nesse ambiente. No capítulo 3 foram testados a atividade inseticida de frações do extrato Acetato de Etila de T. diversifolia e seus compostos majoritários contra S. frugiperda e foi observado uma redução significativa no peso pupal da lagarta. A redução da massa pupal pode ser o indicativo da presença de substâncias tóxicas ao inseto nessas frações, no entanto, essa redução não está associada à presença dos compostos majoritários testados. Dessa forma, concluímos que as espécies vegetais estudadas, possuem metabólitos secundários com atividades biológicas promissoras e importância econômica para serem utilizados na agricultura e na indústria farmacêutica.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The purpose of this study was to conduct a phytochemical study of the crude extract of the root bark of the species Discaria americana Gilles and Hooker. The origin of this knowledge has been proposed the use of this plant in popular medicine for the treatment of various diseases such as fever, skin diseases, stomach disorders, diabetes and as a tonic in the form of teas and infusions. Through this study was isolated six compounds among which four are cyclopeptide alkaloids, one cyclopeptide alkaloid neutral and one triterpenoid. Cyclopeptide alkaloids isolated are known as Discarine B (23) C Discarine (44) Frangufoline (26) and Frangulanine (27). The cyclopeptide alkaloid neutral is known as Discarene C (63) and triterpenoid is known as Betulinic Acid (69). In this study it was possible to determine the absolute configuration of the compound Discarine C (44) by X-ray diffraction and derivatisation of the amino acids present in the molecule, which were subjected to enantiosselective gas chromatography. Still in phytochemical analysis, we determined the significant activity of some of the isolated compounds. The alkaloid ciclopeptídico Discarine B (23), Discarine C (44), Frangulanine (27) and cyclopeptide alkaloid neutral Discarene C (63) proved strong bacteriostatic against the strain Salmonella typhimurium being the Discarine C (44) showed strong potential bactericidal front of this strain. Discarine B (23) showed significant potential bacteriostatic and bactericidal against the Enterococcus spp and appreciable potential bacteriostatic front Escherechia coli. It was possible to establish a relationship between their structure and configuration and its antimicrobial activity. / A proposta deste trabalho foi a de realizar um estudo fitoquímico do extrato bruto das cascas das raízes da espécie Discaria americana Gilles and Hooker. A origem dessa proposta vem do conhecimento do uso dessa planta na medicina popular para o tratamento de várias enfermidades tais como febre, doenças de pele, afecções no estômago, diabetes e como tônico, na forma de chás e infusões. Por meio deste estudo foi possível isolar seis compostos, dentre os quais quatro são alcalóides ciclopeptídicos, um alcalóide ciclopeptídico neutro e um triterpenóide. Os alcalóides ciclopeptídicos isolados são conhecidos como Discarina B (23), Discarina C (44), Frangufolina (26) e Frangulanina (27). O alcalóide ciclopeptídico neutro é conhecido como Discareno C (63) e o triterpenóide é conhecido como Ácido Betulínico (69). Neste estudo foi possível determinar a configuração absoluta do composto Discarina C (44) através de Difração de Raio-X e derivatização dos aminoácidos presentes na molécula, os quais foram submetidos à cromatografia gasosa enantiosseletiva. Ainda na análise fitoquímica foi possível constatar a atividade significativa de alguns dos compostos isolados. Os alcalóides ciclopeptídicos Discarina B (23), Discarina C (44), Frangulanina (27) e o alcalóide ciclopeptídico neutro Discareno C (63) se mostraram fortes bacteriostáticos frente à cepa Salmonella typhimurium, sendo que a Discarina C (44) apresentou forte potencial bactericida frente a essa cepa. Discarina B (23) apresentou significativo potencial bacteriostático e bactericida frente à Enterococcus spp e apreciável potencial bacteriostático frente à Escherechia coli. Foi possível estabelecer uma relação entre suas estruturas e configurações e seu potencial antimicrobiano.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2016-03-30T13:03:49Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 8147215 bytes, checksum: 55ceb3d471bad1f7580ba3350ee86625 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-30T13:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 8147215 bytes, checksum: 55ceb3d471bad1f7580ba3350ee86625 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Genus Pilosocereus belonging to the Cactaceae family stands out for having the highest number of species, being 35 species distributed from Mexico to Paraguay, being Brazil the country with the greatest number of species distributed among different environments, including caatingas, salt marshes and rocky fields. The species Pilosocereus pachycladus F.RITTER, popularly known as "Facheiro" is used in folk medicine against prostate inflammation. The pioneer phytochemical study of this specie led to the isolation and identification of twelve substances which are: an alcohol (decanol), two fatty acids (palmitic acid and Pp-8b), two porphyrinic substances (Phaeophytin a and Phaeophytin a hydroxylated), five steroids (β -sitosterol, stigmasterol, ergosterol, glycosylated β-sitosterol and glycosylated stigmasterol), a phenolic aldehyde (syringaldehyde) and a phenolic acid (p-hydroxyphenylacetic acid); two substances are unprecedented in Cactaceae family and nine new in Pilosocereus genre. An microbiological assessment of specie Pilosocereus pachycladus against strains of bacteria and fungi showed no antimicrobial activity directly but a complementary study for inhibition of efflux pump found that this specie may act as a source of natural products that modulate multidrug resistance in bacteria and substance identified as syringaldehyde (Pp-6) can served as a promising molecule to enhance the antibiotic activity against the efflux pump. / O gênero Pilosocereus pertencente à família Cactaceae se destaca por possuir o maior número de espécies, com 35 exemplares distribuídos desde o México até o Paraguai, sendo o Brasil o país com o maior número de espécies distribuídas em diferentes ambientes, incluindo caatingas, restingas e campos rupestres. A espécie Pilosocereus pachycladus F. RITTER, conhecido como "Facheiro", é utilizada pela medicina popular contra inflamação prostática. O estudo fitoquímico pioneiro desta espécie levou ao isolamento e identificação de doze substâncias sendo elas: um álcool (decanol), dois ácidos graxos (ácido palmítico e Pp-8b), duas substâncias porfirínicas (feofitina a e feofitina a hidroxilada), cinco esteroides (β-sitosterol, stigmasterol, ergosterol, β-sitosterol glicosilado, stigmasterol glicosilado), um aldeído fenólico (Siringaldeído) e um ácido fenólico (ácido p-hidroxifenilacético); duas sustâncias são inéditas na família Cactaceae e nove inéditas no gênero Pilosocereus. Uma avaliação microbiológica da espécie P. pachycladus frente a cepas de bactérias e fungos não revelou atividade antimicrobiana direta porém um estudo complementar frente a inibição da bomba de efluxo revelou que esta espécie poderá atuar como uma fonte de produtos naturais que modulam a resistência bacteriana a múltiplas drogas e a substância identificada como Siringaldeído (Pp-6) atuou como molécula promissora para potencializar a atividade antibiótica frente à bomba de efluxo.