Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Coorientador: João Ferreira de Lima Neto / Banca: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Resumo: O estudo avaliou a viabilidade in vitro do biomaterial "Selante de Fibrina derivado de veneno de serpente" (SF), como arcabouço para células tronco mesenquimais (CTMs) de ratos. O SF é um material caracterizado como adesivo biológico, e foi produzido e fornecido pelo Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, CEVAP, Brasil. As CTMs foram coletadas a partir da medula óssea de fêmures e tíbias de ratos e foram caracterizadas por meio de citometria de fluxo com auxilio de marcadores positivos: CD 44 e CD 90 (CTMs) e marcador negativo: CD 34 (células tronco hematopoiéticas). Cultivos foram induzidos para diferenciarem-se em linhagens específicas (osteogênico, condrogênico e adipogênico). Para avaliação do crescimento in vitro e a viabilidade celular em conjunto ao biomaterial foram utilizadas microscopia óptica de luz invertida, microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O SF em contato com as CTMs não induziu a diferenciação espontânea para as linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. As diferentes técnicas de avaliação microscópica utilizadas mostraram que o SF foi capaz de realizar a captura e manutenção das CTMs e houve interação das células com o interior e superfície do biomaterial. Portanto, a coleta, o cultivo e a caracterização das CTMs de ratos foram possíveis. O SF mostrou-se eficiente como arcabouço biológico e interagiu com as células tronco mesenquimais mantendo-as viáveis, oferecendo-se como uma ferramenta de uso clínico-cirúrgico alternativa para processos regenerativos visando terapias mais eficientes / Abstract: This study evaluated the in vitro viability of biomaterial Fibrin Sealant (FS) derived from snake venom as a scaffold for rat mesenchymal stem cells (MSCs). The FS is characterized as a biological adhesive material, and is produced and was supplied by the Center for the Study of Venoms and Venomous Animals, CEVAP, Brazil. MSCs were collected from the bone marrow of femurs and tibias of rat and were characterized using flow cytometry with CD 44 and CD 90 positive markers (MSC) and CD34 negative marker (mononuclear stem cells). Cultivations were induced to differentiate into specific cell lineage (osteogenic, chondrogenic and adipogenic). To evaluate the in vitro growth and cell viability with the biomaterial were used inverted light optical microscopy, fluorescence microscopy and scanning electron microscopy and transmission. The SF did not cause the spontaneous differentiation in contact with MSCs to osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineage. Different microscopy techniques showed that the SF was able to accomplish the capture and maintenance of MSCs and there was interaction with the cell interior and surface of the biomaterial. Finally, the collection, cultivation and characterization of rat MSCs were possible. The SF was effective as a biological scaffold and interacted with the MSCs keeping them viable offering itself as a tool for clinical and surgical alternative providing clinical and surgical therapies more efficient for regenerative processes / Mestre

Neste trabalho avaliamos se as Natterinas (NTR), proteínas majoritárias presentes no veneno do peixe peçonhento T. nattereri, são as responsáveis pela a ação inibitória do recrutamento de leucócitos durante a inflamação e os mecanismos moleculares envolvidos neste processo. Utilizando análises de microscopia intravital tratamos os animais com as NTR e 6 h depois induzimos o rolamento de leucócitos com KC, LPS ou agonista de PAR-4 sobre a microcirculação. Os dados mostraram que o tratamento com as NTR inibem o rolamento e a migração de leucócitos induzido pela KC e pelo LPS. Além disso, o efeito inibitório das NTR depende parcialmente da sua atividade proteásica e não está relacionado com a clivagem proteolítica da quimiocina KC ou com a indução de reguladores endógenos como IL-10, corticóides, a enzima HO-1 ou IL-1Ra. O efeito inibitório parece ser dependente da ativação da sinalização TLR/MyD88 e PI3K e das proteínas serina/treonina fosfatases, contribuindo de forma significativa na sobrevida de animais induzidos a endotoxemia por LPS. / In this work we evaluated whether Natterins (NTR) the majority proteins present in the venom of Thalassophryne nattereri venomous fish are responsible for the inhibitory action of leukocyte recruitment during inflammation and the molecular mechanisms involved in this process. Using intravital microscopy analysis we treated the animals with NTR and 6 h after we induced the leukocyte rolling by topical of KC, LPS or agonist of PAR-4 on the microcirculation. The data showed that treatment with NTR inhibited the leukocyte rolling and migration induced by LPS and KC. Moreover, the inhibitory effect of NTR depends partly on its proteinase activity and is not related to the proteolytic cleavage of the chemokine or KC nor with the induction of endogenous regulators such as IL-10, corticoids, the HO-1 or IL-1Ra. The inhibitory effect is dependent on the activation of PI3K and TLR/MyD88 signaling and protein serine/threonine phosphatases, contributing significantly to the survival of animals endotoxemia induced by LPS.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_fabiane_grecco.pdf: 3401915 bytes, checksum: 93b93d478f426a7fe7b06afda9b90b14 (MD5) Previous issue date: 2009-06-08 / This study him to characterize liver morphological patterns of the intoxication by Senecio spp. observed in cattle in Southern Rio Grande do Sul State, Brazil between 2000-2008 and to text the acquireal resistance in sheep to Senecio brasiliensis poisoning. The patterns observed were correlated with climate changes occurred in the period. Two outbreaks Senecio spp. In sheep were described. It was tested if repeated doses of S. brasiliensis induce resistance to the intoxication in sheep. The macroscopic and histological lesions of cattle dead by Senecio spp. toxicosis submitled to Regional Diagnostic Laboratory of Pelotas University were analyzed. The lesions were classified in seven different patterns. The outbreaks prevalence and climate changes concerning accumulated rain and temperature mean in different seasons of year were analyzed. To determine if repeated doses of S. brasiliensis induce resistance to the intoxication in sheep, doses that cause acute intoxication was determined. The green plant was administered by gavage to 3 sheep in doses of 60, 80, 90 and 100 g/kg of body weight (bw). The doses (100g\kg of bw) that caused acute poisoning were divided in 2, 5 and 10 doses and administered daily in 2, 5 and 10 days to observe if chronic lesion would develop. Sheep that received 10g/kg of bw was challenged with 100g/kg of bw after 45 days the last doses of 10g. Doses of 15 g/kg of bw were administered by gavage for 30 days and 10 g/kg of bw for 10 days to three sheep. Two of them were challenged 24 hours after the last doses of 30g/kg of bw. One sheep was challenged 15 days after the last doses of 30g/kg of bw. The results of macroscopic and histological analyze of liver showed that the diffuse liver fibrosis and nodular regeneration were the most common lesions induced by Senecio spp. intoxication in cattle. Although between 2007 and 2008 the pattern with little fibrosis and histological subacute lesion had been observed. In outbreaks of spontaneous Senecio spp. poisoning in sheep jaundice, photodermatitis, progressive emaciation and death in 4 to 30 days were observed. Macroscopic lesion were characterized by jaundice, yellowish liver, mesentery edema, ascitis, alternativaly dark and firm liver with numerous small well-circumscribed nodules measuring 1-5mm in diameter in the cut and capsular surface. Microscopically the hepatic lesions were similar in all affected sheep and characterized by hepatomegalocytosis, periportal fibrosis, hepatocytes necrosis and biliary ductal proliferation. The results of experimental intoxication showed that doses up 90g/kg of bw cause acute intoxication and the doses of 100g/kg of bw divided in10 doses do not induces resistance to Senecio brasiliensis poisoning in sheep. It was demonstrated that 15g/kg of bw for 30 days and 30g/kg of bw for 10 days induce resistance to Senecio basiliensis poisoning if the animals were challenged with 100g/kg of bw immediately after last dose of 30g/kg of bw and lost resistance after 15 days. / Os objetivos do presente trabalho foram caracterizar os diferentes padrões morfológicos hepáticos da intoxicação por Senecio spp. em bovinos observados na área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da UFPel (LRD) entre 2000-2008, fazendo uma relação com as variações climáticas ocorridas no período; descrever dois surtos da intoxicação por Senecio spp em ovinos; e determinar se doses repetidas e não tóxicas da planta induzem a resistência de ovinos à intoxicação por Senecio brasiliensis. Para tanto, este trabalho foi dividido em duas partes sendo que na primeira foram analisadas as lesões macroscópicas e histológicas dos fígados de bovinos mortos pela intoxicação que foram necropsiados e/ou tiveram órgãos remetidos ao LRD, as quais foram agrupadas em sete diferentes padrões morfológicos. Foram determinados os dados da prevalência dos surtos durante este período e as variações climáticas referentes à precipitação pluviométrica e temperatura média nas diferentes estações do ano. Na segunda parte do trabalho foram descritos dois surtos da intoxicação por Senecio spp. em ovinos. Para determinar se doses não tóxicas da planta verde induzem a resistência em ovinos inicialmente foi determinada a dose tóxica capaz de induzir intoxicação aguda nesta espécie animal. Foram administradas 60, 80, 90 e 100g/kg de peso corporal (pc) a três ovinos. As doses que causaram a morte dos animais foram divididas em duas, cinco e 10 doses administradas diariamente para determinar se os animais apresentavam lesões hepáticas crônicas, sendo que o ovino que recebeu 10g/kg de pc por 10 dias foi desafiado 45 dias após a última administração com a dose de 100g/kg de pc. Para induzir a resistência doses de 15g/kg de peso corporal foram administradas por 30 dias e doses de 30g/kg de pc foram administradas por 10 dias a três ovinos. Dois foram desafiados no dia seguinte ao final da administração da planta e um foi desafiado 15 dias após. Os resultados da análise macroscópica e histológica dos fígados dos bovinos demonstraram que os padrões mais frequentemente encontrados são aqueles caracterizados pela presença e fibrose difusa e presença de nódulos regenerativos, embora nos casos ocorridos entre 2007 e 2008 padrões de lesão com menor quantidade de fibrose e 2 casos de lesão subaguda tenham sido observados. Nos surtos espontâneos de intoxicação por Senecio spp. em ovinos foi observada icterícia, fotossensibilização, perda de peso e morte entre quatro dias e um mês e as lesões macroscópicas caracterizaram-se por icterícia discreta e generalizada e fígado amarelado e firme ou palidez da carcaça, ascite, edema de mesentério e fígado escuro e firme com nódulos esbranquiçados de 1-5 mm de diâmetro tanto na superfície capsular como ao corte. Microscopicamente, as lesões hepáticas eram semelhantes em todos os ovinos afetados e caracterizadas por megalocitose, fibrose periportal, necrose individual e aleatória de hepatócitos e hiperplasia acentuada das células dos ductos biliares. Os resultados da intoxicação experimental demonstraram que doses acima de 90g/kg de pc são capazes de produzir intoxicação aguda e que a dose de 100g/kg de pc fracionada em 10 doses de 10g/kg de pc não induzem resistência à intoxicação nesta espécie animal. Foi demonstrado que doses de 15 g/kg de pc por 30 dias e 30g/kg de pc por 10 dias induzem resistência nos ovinos quando os mesmos são desafiados imediatamente após o término do experimento e que se o desafio é realizado 15 dias após o final do experimento os animais perdem a resistência.

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1 The consequences of breaching the rules on evidence for the effectiveness of the evidence Abstract This diploma thesis deals with the issue of ineffectiveness of evidence in connection with the violation of rules on evidence. One of the two main goals of this work was to acquaint the reader with the issue, especially with the help of analysis of current legislation, the views of leading experts in criminal science and also a rich case law of the courts. The second main goal was to propose a de lege ferenda solution that could contribute to solving the most pressing problems of the current legislation. The diploma thesis is divided into six parts, including the introduction and conclusion. The first chapter provides the reader with a theoretical basis for easier understanding of this issue. It explains the basic terminology occurring in the field of evidence and the basic sources of law that will accompany the reader throughout the thesis are introduced. There is also a detailed explanation of the basic principles of criminal proceedings concerning the evidence as whole. In addition, at the end of this chapter, the stages of criminal proceedings are mentioned with a brief description of their specifics with a regard to the evidence in these specific sections. The second chapter is devoted to the concepts...

1 The Consequences of Breaching the Rules of Evidence for the Effectiveness of the Evidence Abstract This diploma thesis deals with the phenomenon of ineffective evidence in criminal procedures as a result of a breach the rules of evidence. The aim of the thesis is to submit current regulations about evidence in the Czech legal system, evaluate it and shine a light on certain problems. Can a criminal procedure be just if the essential principles are trampled on and the government breaks the law? Are there any barriers preventing geovernment arbitrariness? This thesis tries to answer these questions by introducing legal institutes based on area of evidence in criminal procedure. Thesis consists of six parts - four chapters, introduction and conclusion. The first chapter deals generally with evidence and its specifics in criminal law. It defines crucial terminology to understand this topic thoroughly and shines a light on principles of evidence. The second chapter revolves around admissibility and especially efficiency of evidence as a result of a breach in the rules of evidence by law enforcement. That breach of evidence has to fulfill a certain level of severity which has an important part in evidence ineffectivity. In the very last part of this chapter the author suggests legislative changes according to a...

and keywords Urgent and unrepeatable acts Urgent and unrepeatable acts are procedural acts of criminal proceedings in which there is a conflict between the rights of the defense with the purpose of criminal proceedings consisting in the lawful determination of the circumstances of the commission of a crime and in the fair punishment of its perpetrator. This conflict is tolerated because urgent and unrepeatable acts are used to secure and take evidence that risks being thwarted, destroyed or lost, or evidence that cannot be taken in court proceedings. The aim of this work is to describe and analyze the conditions under which these, by their nature exceptional, acts of criminal proceedings can be performed and to analyze the consequences of non-compliance with these conditions. To this end, the first chapter described the structure of criminal proceedings with a focus on the structure of preparatory proceedings and analyzed the definition of urgent and unrepeatable acts, provided some typical examples and an analysis of the problematic definition of urgency. In the second chapter, in addition to the general conditions of evidence, the formal and material conditions for performing urgent and unrepeatable acts were analyzed, including the question of whether some additional conditions imposed on...

A Nattectina é uma toxina isolada do veneno de Thalassophryne nattereri que possui homologia com lectinas tipo C. Este estudo consistiu em avaliar a ação da Nattectina sobre as funções de macrófagos e a influência de citocinas Th1/Th2 nessa ativação. Nossos resultados mostram que a Nattectina induziu o aumento da expressão de moléculas coestimuladoras dependente da sinalização MAPK p38 e PI3K em macrófagos derivados da medula óssea, e também um aumento na capacidade endocítica e expressão de MHC de classe II dependentes da sinalização ERK1/2 e da ligação da Nattectina ao carboidrato. Verificamos ainda que alterações induzida pela Nattectina nos macrófagos são consistentes com a ativação clássica M1 dependente de IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">g, e regulada negativamente por IL-4, IL-10 e IL-13. Por fim, verificamos uma ação coadjuvante da IL-4 com IFN-<font face=\"Symbol\">g na mobilização de SPMs (Small Peritoneal Macrophages) para cavidade peritoneal e na ativação de macrófagos. Dessa forma, a Nattectina pode ser considerada um importante agente imunomodulador capaz de modular as funções de macrófagos. / Nattectin is a toxin isolated from Thalassophryne nattereri fish venom that has homology with C-type lectin. This study was carried out to evaluate the action of Nattectin on macrophage functions and the influence of Th1/Th2 cytokines in this activation. Our results show that Nattectin induced the increased expression of costimulatory molecules dependent on MAPK p38 and PI3K signaling in bone marrow-derived macrophages, and also an increase in endocytic capacity and MHC class II expression dependent on ERK1/2 signaling and binding of Nattectin to carbohydrate. We also found that modifications induced by Nattectin in macrophages are consistent with classical (M1) activation of macrophages dependent on IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">g cytokines, and negatively regulated by IL-4, IL-10 and IL-13. Finally, it was demonstrated an adjuvant role of IL-4 with IFN-<font face=\"Symbol\">g in mobilization of SPMs (Small Peritoneal Macrophages) to peritoneal cavity and also in macrophage activation. Thus, Nattectin can be considered an important immunomodulatory agent able to modulate macrophage functions.

A infestação de pastagens por populações de Pteridium arachnoideum é um problema que afeta a pecuária, em diversas partes do mundo. Os efeitos deletérios da infestação pela planta sobre a bovinocultura são manifestados na forma de mortalidades e de redução das áreas de pastagens, assim como de perdas produtivas. Devido à importância dessas perdas na produção de bovinos, foi proposto o acompanhamento de uma propriedade do Rio Grande do Sul com problemas decorrentes da infestação pela planta em sua casuística e métodos de controle empregados. Adicionalmente, realizou-se teste da viabilidade de ovinos como ferramenta de controle biológico. Dos casos de intoxicação naturais acompanhados na propriedade, observou-se a ocorrência de quadro agudo de diátese hemorrágica e de quadro crônico de carcinomas do trato digestório superior. Observou-se que quando expostos a fatores predisponentes, como a introdução em áreas recentemente roçadas, os bovinos podem consumir altas doses da planta e assim desenvolver a enfermidade aguda em forma de surtos. Em diversos bovinos jovens com quadro de diátese hemorrágica, além das hemorragias disseminadas e infartos múltiplos, observou-se acentuado edema laríngeo, que cursava clinicamente com dispneia e estertores respiratórios característicos. Os carcinomas do trato digestório superior, apesar de menos frequentes, causaram expressivas perdas devido a mortalidades anuais de matrizes. A tentativa de controle pelo pastejo por ovinos não foi eficiente, devido ao consumo pouco expressivo na lotação praticada. Mortalidade de ovinos, no entanto, decorrente do consumo da planta não foi registrada. O método de combate à planta aplicado na propriedade combinava ou associava a roçagem em áreas densamente povoadas com o uso de herbicidas, nomeadamente metilsulfuron-metil e picloram, em todos os piquetes. A redução da cobertura da P. arachnoideum foi variada em diferentes piquetes; entretanto, possibilitou a recuperação de algumas áreas de pastejo. / The infestation of pastured areas by Pteridium arachnoideum populations has been a considerable and global problem to the livestock production. The deleterious effects of the plant infestation on cattle are manifested as animal mortality and pasture coverage reduction. Given the importance of P. arachnoideum in cattle production, it has been proposed to monitor a beef cattle farm in Rio Grande do Sul, to assess some of the losses associated with the plant consumption apart of the methods employed for controlling the plant. In addition, the viability of sheep’s grazing as a biological control tool was tested. Cases of natural poisoning observed in the farm included the acute form, known as hemorrhagic diathesis as well as the chronic form, consisting in digestive carcinomas. When cattle were exposed to any predisposing factor, such as being moved to newly mowed areas, it was noted that the amount of plant consumed can readily lead to an outbreak of acute poisoning. Several cases of hemorrhagic diathesis in young cattle went along with marked laryngeal edema, which was clinically manifested as dyspnea and roaring, in addition to the classic pathological changes of widespread hemorrhages and infarcts. Even though less frequent, carcinomas of the upper digestive tract caused significant losses, due to annual mortality of mature cows. The attempt through grazing by sheep wasn’t efficient to control P. aquilinum, due to the low consumption of the plant seen in the actual stocking. However, sheep mortality, by P. arachnoideum consumption was not recorded. The plant control method applied at the farm combined mowing of densely populated areas with herbicide applications, namely metilsulfuron-methyl and picloram, in all paddocks. The reduction of P. arachnoideum coverage was varied in different paddocks; however, allowed the recovery of some grazing areas.

A infestação de pastagens por populações de Pteridium arachnoideum é um problema que afeta a pecuária, em diversas partes do mundo. Os efeitos deletérios da infestação pela planta sobre a bovinocultura são manifestados na forma de mortalidades e de redução das áreas de pastagens, assim como de perdas produtivas. Devido à importância dessas perdas na produção de bovinos, foi proposto o acompanhamento de uma propriedade do Rio Grande do Sul com problemas decorrentes da infestação pela planta em sua casuística e métodos de controle empregados. Adicionalmente, realizou-se teste da viabilidade de ovinos como ferramenta de controle biológico. Dos casos de intoxicação naturais acompanhados na propriedade, observou-se a ocorrência de quadro agudo de diátese hemorrágica e de quadro crônico de carcinomas do trato digestório superior. Observou-se que quando expostos a fatores predisponentes, como a introdução em áreas recentemente roçadas, os bovinos podem consumir altas doses da planta e assim desenvolver a enfermidade aguda em forma de surtos. Em diversos bovinos jovens com quadro de diátese hemorrágica, além das hemorragias disseminadas e infartos múltiplos, observou-se acentuado edema laríngeo, que cursava clinicamente com dispneia e estertores respiratórios característicos. Os carcinomas do trato digestório superior, apesar de menos frequentes, causaram expressivas perdas devido a mortalidades anuais de matrizes. A tentativa de controle pelo pastejo por ovinos não foi eficiente, devido ao consumo pouco expressivo na lotação praticada. Mortalidade de ovinos, no entanto, decorrente do consumo da planta não foi registrada. O método de combate à planta aplicado na propriedade combinava ou associava a roçagem em áreas densamente povoadas com o uso de herbicidas, nomeadamente metilsulfuron-metil e picloram, em todos os piquetes. A redução da cobertura da P. arachnoideum foi variada em diferentes piquetes; entretanto, possibilitou a recuperação de algumas áreas de pastejo. / The infestation of pastured areas by Pteridium arachnoideum populations has been a considerable and global problem to the livestock production. The deleterious effects of the plant infestation on cattle are manifested as animal mortality and pasture coverage reduction. Given the importance of P. arachnoideum in cattle production, it has been proposed to monitor a beef cattle farm in Rio Grande do Sul, to assess some of the losses associated with the plant consumption apart of the methods employed for controlling the plant. In addition, the viability of sheep’s grazing as a biological control tool was tested. Cases of natural poisoning observed in the farm included the acute form, known as hemorrhagic diathesis as well as the chronic form, consisting in digestive carcinomas. When cattle were exposed to any predisposing factor, such as being moved to newly mowed areas, it was noted that the amount of plant consumed can readily lead to an outbreak of acute poisoning. Several cases of hemorrhagic diathesis in young cattle went along with marked laryngeal edema, which was clinically manifested as dyspnea and roaring, in addition to the classic pathological changes of widespread hemorrhages and infarcts. Even though less frequent, carcinomas of the upper digestive tract caused significant losses, due to annual mortality of mature cows. The attempt through grazing by sheep wasn’t efficient to control P. aquilinum, due to the low consumption of the plant seen in the actual stocking. However, sheep mortality, by P. arachnoideum consumption was not recorded. The plant control method applied at the farm combined mowing of densely populated areas with herbicide applications, namely metilsulfuron-methyl and picloram, in all paddocks. The reduction of P. arachnoideum coverage was varied in different paddocks; however, allowed the recovery of some grazing areas.