Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Gerhard Wunderlich / Banca: Joseli de Oliveira Ferreira / Banca: Carlos Eugênio Cavasini / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: A malária é uma das principais causas de morbidade e mortalidade nas áreas tropicais e subtropicais do mundo. O desenvolvimento de uma resposta imune eficaz é capaz de reduzir a mortalidade e os sintomas clínicos da doença. No entanto, este é um processo complexo, e um dos objetivos dos imunologistas é entender as razões pelas quais os indivíduos diferem em suas respostas imunes contra o parasito. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência de polimorfismos em genes coestimulatórios do sistema imune na resposta imune humoral contra proteínas de estágio sanguíneo do Plasmodium vivax, principal espécie causadora de malária no Brasil. Para tanto, nós genotipamos, pelo método de PCR-RFLP, nove SNPs em sete genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS). A amostra foi constituída por 227 indivíduos infectados com P. vivax no município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. As respostas de anticorpos IgG específicos contra as proteínas N- (ICB2-5) e C-terminal (MSP-119) da MSP-1, da DBP e da AMA-1 do P. vivax foram determinadas por ELISA. IgM e as subclasses de IgG contra a ICB2-5 também foram avaliadas. Para estudar os polimorfismos dos genes coestimulatórios, nós primeiramente investigamos o impacto da estratificação da população na distribuição dos polimorfismos com o auxilio de marcadores informativos de ancestralidade e demonstramos que a frequência dos SNPs ICOS +1564T>C, CD40L -726T>C e CD86 +1057G>A varia de acordo com a ancestralidade. Polimorfismos em genes coestimulatórios foram associados com a resposta de anticorpos contra proteínas do estágio sanguíneo do P. vivax, mais especificamente contra a DBP, e as porções N- e C-terminal da MSP-1. Além disso, haplótipos formados pelos genes CD28, CTLA4 e ICOS foram associados com a resposta de anticorpos IgG4 contra a região N-terminal da MSP-1. Este é o primeiro estudo de associação genética envolvendo polimorfismos em genes ... / Abstract: Malaria is one of the main causes of morbidity and mortality in the tropics and subtropics areas of the world. Although the immunity is only partial, it is important in reducing the amount of illness and death caused by malaria. However, the immunity against malaria is complex, and one of the main goals of vaccine developers is to understand why people differ in their immune response to the parasite. The present research aims to investigate the genetic mechanisms related to humoral immune response against P. vivax blood stages antigens, predominant malaria species in Brazil. Nine single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 7 genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS) were determined by PCR-RFLP. A total of unrelated 227 individuals infected with P. vivax from the Goianésia do Pará, Pará state, participated in this study. Level and prevalence of IgG antibodies against N-terminal (ICB2-5) and C-terminal (MSP-119) regions of MSP-1, DBP and AMA-1 of P. vivax were measured by ELISA. First, we evaluate the influence of genomic ancestry on distributions of co-stimulatory genes polymorphisms in an admixed Brazilian population using ancestry informative markers. ICOS, CD40L and CD86 polymorphisms were associated with genomic ancestry. There were significant association between CD28 -372G>A, ICOS +1564T>C, and CD40L -726T>C SNPs with antibodies anti-DBP prevalence. Moreover, CD40 -1C>T and CD86 +1057G>A SNPs were associated with antibody levels anti-PvMSP-119. The CD28 -372G>A and CD40 -1C>T SNPs were associated with IgM prevalence against ICB2-5. Haplotypes formed by polymorphisms in CD28, CTLA4, and ICOS genes were associated with IgG4 antibodies against ICB2-5. This is the first study to associate polymorphisms in costimulatory genes with humoral immune response against P. vivax. These data may add important information for understanding the immunological aspects involved in vivax malaria / Doutor

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Banca: Flávio Augusto Naoum / Banca: Ana Elizabete Silva / Resumo: A doença falciforme (DF) é uma anemia hemolítica hereditária causada pela presença da hemoglobina S (Hb S). No Brasil, as formas mais comuns são a homozigose (Hb SS) e a associação da Hb S com as hemoglobinas C (Hb SC), D-Punjab (Hb SD) e beta-talassemia (Hb Sβ-tal). A inflamação na DF é uma condição crônica, com constante liberação de citocinas pró-inflamatórias, e relacionada aos eventos de hipóxia e angiogênese, também característicos da doença. O comportamento desses eventos nos genótipos da DF podem explicar as variações frequentemente encontradas nas manifestações clínicas da doença nos indivíduos. Assim, o objetivo desse estudo foi analisar os processos de inflamação, hipóxia e angiogênese nos genótipos Hb SS, Hb SD, Hb Sβ-tal e Hb SC da DF, comparando os resultados obtidos com um grupo controle sem hemoglobinopatias. Inicialmente, o perfil hemolítico dos indivíduos com DF foi avaliado, considerando-se a porcentagem de reticulócitos e os níveis de lactato desidrogenase (LDH), aspartato aminotransferase (AST) e bilirrubina indireta (BI). O perfil inflamatório foi avaliado pela quantificação dos níveis plasmáticos de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8 e TNF-α), proteínas antiinflamatórias (TGF-β1 e ANXA1), fatores responsivos à hipóxia (HIF-1α e VEGF) e polimorfismos genéticos capazes de influenciar nas vias estudas. A porcentagem de reticulócitos e os níveis de LDH, AST e BI foram mais elevados no genótipo Hb SS, seguido pelo genótipo Hb SD, enquanto os grupos com Hb Sβ-tal e Hb SC apresentaram perfil hemolítico mais brando. Os níveis plasmáticos dos marcadores inflamatórios IL-1β, IL-8, TNF-α e TGF-β1 foram aumentados na DF em relação ao controle, especialmente no genótipo Hb SS, evidenciando a inflamação presente e mais grave no grupo com maior intensidade hemolítica. A ANXA1 esteve reduzida... / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is a hereditary hemolytic anemia caused by the presence of hemoglobin S (Hb S). In Brazil, the most common forms of SCD are the homozygous (Hb SS) and the association of Hb S with hemoglobins C (Hb SC), D-Punjab (Hb SD) and beta thalassemia (Hb Sβ-thal). Inflammation in SCD is a chronic condition, with the recurrent release of pro-inflammatory cytokines, and is related to hypoxic and angiogenenic events, which are characteristics of the disease. The behavior of these events in SCD genotypes could explain variations frequently found in the clinical manifestations of patients. Thus, the aim of the study was to verify the inflammation, hypoxia and angiogenesis processes in the Hb SS, Hb SD, Hb Sβ-thal and Hb SC genotypes of SCD, comparing the results to a control group without hemoglobinopathies. At first, the hemolytic profile of SCD individuals was evaluated considering the reticulocytes percentage and the lactate dehydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (AST), and indirect bilirubin (IB) levels. The inflammatory profile was analyzed by quantifying the plasma levels of proinflammatory cytokines (IL-1β, IL-8, and TNF-α), anti-inflammatory proteins (TGF-β1 and ANXA1), responsive factors to hypoxia (HIF-1α and VEGF), and genetic polymorphisms able to influence the studied pathways. The percentage of reticulocytes and the LDH, AST, and IB levels were higher in the Hb SS genotype, followed by Hb SD, while the Hb Sβ-thal and Hb SC genotypes presented milder hemolytic profile. The plasma levels of inflammatory markers IL-1β, IL-8, TNF-α, and TGF-β1 were higher in SCD than in the control group, especially in the Hb SS genotype, demonstrating the presence of more severe inflammation in the group with greater hemolytic intensity. The ANXA1 was reduced in SCD, reflecting the imbalance between inflammatory response propagation and inflammation ... / Doutor

Orientador: Maria Rita Marques de Oliveira / Coorientador: Rozangela Verlengia / Banca: Thaís Borges Cesar / Banca: Aureluce Demonte / Banca: Glenda Nicioli da Silva / Banca: Carla Cristina Enes / Resumo: A interação entre gene e meio ambiente tem sido apontada como responsável pelo aumento das doenças crônicas metabólicas, cujos fatores de risco vêm se manifestando nas populações humanas, em idades cada vez mais precoces. Objetivo: Analisar os efeitos dos polimorfismos -514C/T no gene da LIPC e CT84 no gene da ApoA1, bem como da mutação missense no gene da ApoE sobre os fatores de risco para doenças crônicas, numa amostra de adolescentes, de um município do interior do Estado de São Paulo, Brasil. Metodologia: Foi realizado um estudo transversal com 214 adolescentes de ambos os sexos com idade mínima de 10 anos. Na coleta de dados foram incluídos: questionário de freqüência alimentar e de atividades físicas especifico para adolescentes, antropometria, aferição da pressão arterial, dosagens bioquímicas (insulina, glicose, colesterol total e frações, triglicerídeos e Apoa1) e genotipagem por PCR-real time dos genes selecionados. Resultados: Os adolescentes portadores do alelo raro para o polimorfismo -514CT do gene LIPC apresentaram maior prevalência de síndrome metabólica. Em relação ao polimorfismo TC84 da ApoA1, os adolescentes com o genótipo TT apresentaram maior prevalência de hipertrigliceridemia e se encontraram mal adaptados à prática de atividade física e consumo de carboidrato. Analisando a mutação missense do gene da ApoE foi verificado que os adolescentes portadores do alelo ApoE4 apresentaram maior prevalência de fatores de risco para doenças crônicas e eram beneficiados pelo consumo de gordura em substituições aos carboidratos. Conclusão: Recomendações dietéticas e prática de atividades físicas direcionadas ao perfil genético do adolescente poderão prevenir o desenvolvimento de fatores de risco metabólico e o aparecimento de doenças crônicas na vida adulta / Abstract: The interactions between genes and environment has been identified as responsible for the increase of chronic metabolic diseases, in which risk factors are positioning themselves in human populations at earlier years of age. Objective: To analyze the effects of the polymorphisms -514CT LIPC gene and CT84 ApoA1 gene, as well as, missense mutation ApoE gene on the outcome of risk factors for chronic diseases in a sample of adolescents from a city in the state of Sao Paulo, Brazil. Methods: It was conducted a cross-sectional study in 214 adolescents of both sexes with a minimum of 10 years of age. The data collection included: food frequency and physical activity questionnaire, anthropometry, blood pressure, biochemical measurements (insulin, glucose, Total cholesterol and fractions, triglycerides e Apoa1) and genotyping of the selected genes by PCR-real time. Results: The adolescents with the rare allele for the -514CT LIPC polymorphism had higher prevalence of metabolic syndrome. Regarding TC84 ApoA1 polymorphism, the adolescent's carriers of the TT genotype had higher prevalence of hypertriglyceridemia and found themselves ill-suited to the practice of physical activity and carbohydrate consumption. Analyzing the missense mutation of the ApoE gene it was found that adolescents with the ApoE4 allele had a higher prevalence of risk factors for chronic diseases and were benefited by the consumption of fat to carbohydrate substitutions. Conclusion: A dietary and physical activity treatment targeted to the genetic profile of the adolescent may prevent the development of metabolic risk factors and the onset of chronic diseases in adulthood / Doutor

Orientador: Marilza Vieira Cunha Rudge / Coorientador: Angélica Mércia Pascon Barbosa / Banca: Rodrigo Castro / Banca: Cláudia Rainho / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Marcos Ferreira Minicucci / Coorientador: Sandro José Conte / Banca: Marina Politi Okoshi / Banca: Daniela de Rezende Duarte Maksymczuk / Resumo: Introdução: Alguns estudos mostraram que o processo inflamatório está relacionado à gravidade da queimadura. Nesse contexto, a utilização de estratégias para modular essa hiper-resposta inflamatória é bastante atrativa. Nos últimos anos, a vitamina D tem se destacado por sua ação anti-inflamatória e pela modulação da resposta imunológica. Parte das ações da vitamina D é mediada pelo receptor nuclear da vitamina D (VDR). Estudos recentes mostram que polimorfismos do gene do receptor VDR pode influenciar a resposta à vitamina D. Objetivos: O objetivo deste estudo é avaliar a associação dos polimorfismos Taql e Bsml do gene VDR com o tempo de internação, o surgimento de infecção e a mortalidade em pacientes queimados. Casuística e métodos: Foram incluídos prospectivamente os pacientes queimados, com idade ≥ 18 anos, que internaram na enfermaria e na Unidade de Terapia Intensiva do Setor de Tratamento de Queimados do Hospital Estadual Bauru. Os pacientes foram incluídos no período de janeiro de 2013 a janeiro de 2014. Na admissão dos pacientes foram registrados dados demográficos e clínicos foram registrados. Amostras sanguíneas foram coletadas na admissão dos pacientes para dosagem bioquímica, de 25 (OH) vitamina D e determinação dos polimorfismos Taql e Bsml do gene VDR. Os pacientes foram acompanhados durante toda a internação e o surgimento de infecção, o tempo de internação e a mortalidade foram registrados. Para avaliar a associação dos polimorfismos com o tempo de internação utilizamos a análise de regressão linear simples e múltipla. Para avaliar a associação dos polimorfismos com o surgimento de infecção e mortalidade utilizamos a análise de regressão logística. O nível de significância adotado foi de 5%. Resultados: Foram avaliados 87 pacientes, mas em 7 deles, devido problemas técnicos, não foram avaliados os polimorfismos do receptor da vitamina D, Taql e Bsml, por isso... / Abstract: Introduction: Some studies showed that the inflammatory process was related with severe burn injury. Thus, strategies for modulation of inflammatory response are of great interest. In the last years, vitamin D received attention due to its anti-inflammatory and immunomodulatory actions. Most of the actions of vitamin D are through its nuclear receptor (VDR). Recent studies showed that VDR gene polymorphisms could influence vitamin D response. Objective: The objective of this study is to evaluate the association of Taql and Bsml polymorphisms of VDR gene with length of hospital stay, infection development and mortality in burn patients. Methods: We prospectively evaluated burn patients, over the age of 18 years, admitted to the Burn Unit of Hospital Estadual Bauru. The patients were included from January 2013 to January 2014, after signing the written informed consent. Upon admission demographical and clinical data were recorded. Blood sample was collected for biochemical analysis, measure of serum 25(OH) vitamin D3 concentration, and Taql and Bsml polymorphisms determination. The patients were followed during hospital admission, and length of hospital stay, infection development and mortality were recorded. For association between length of hospital stay and VDR polymorphisms we used uni and multivariate linear regressions. For association between polymorphisms and infection development and mortality, uni and multiple logistic regressions were performed. Significance level was 5%. Results: We evaluated 87 patients, however 7 were excluded due to technical problems with VDR polymorphism evaluation. Thus, 80 patients were studied. Considering these patients 60% were male, and average age was 42.5 ± 16.1 years. Regarding the cause of burn 47.5% were caused by fire, 33,7% due to hot liquids, 15% caused by electricity and 3.8% due to other causes. The median of burn surface area was 8.0 (3.0-18.8)% and 47.5% were treated in intensive care ... / Mestre

Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Coorientador: Cláudia R. Bonini-Domingos / Banca: Carlos Eugênio Cavasini / Banca: Maria Tercilia Vilela / Banca: Érika Cristina Pavarino / Banca: Lilian Madi Ravazzi / Resumo: No Brasil o Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente, responsável por aproximadamente 85% dos casos de malária. Ademais as variantes da proteína circumesporozoíta (CSP - VK210, VK247 e P. vivax-like) já foram identificadas em várias áreas endêmicas no país. Diversos estudos analisando a influência da variabilidade genética de receptores celulares e moléculas envolvidas na resposta imune, com diferentes peptídeos do Plasmodium, têm obtido resultados variáveis de acordo com o antígeno utilizado e a população analisada. Este trabalho apresenta resultados sobre o estudo de polimorfismos genéticos no TCR (T cell Receptor) e nas Interleucinas 1 e 2 em pacientes infectados por P. vivax provenientes do município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. Avaliou-se estes polimorfismos com a parasitemia do indivíduo, com os genótipos da CSP e com a resposta sorológica contra os peptídeos da CSP. Foram relacionados também estes polimorfismos com os níveis de citocinas. Os polimorfismos foram analisados por técnicas de PCR-RFLP e PCR alelo específico. As análises sorológicas da CSP foram realizadas por ELISA. Foram comparadas as frequências genotípicas observadas segundo o teorema de Hardy-Weinberg (HW). Os níveis de IL1 e IL2 foram avaliados por citometria de fluxo, seguindo protocolo descrito pelo fabricante. Associação dos polimorfismos com os níveis de interleucinas foi avaliada por Análise de variância. As frequências genotípicas e alélicas foram obtidas no programa R v 2.11.1.... / Abstract: In Brazil, Plasmodium vivax is the most prevalent species responsible for approximately 85% of malaria cases. In addition, variants of the circosporozoite protein (CSP - VK210, VK247 and P. vivax - like) have already been identified in several endemic areas in the country. Several studies analyzing the influence of the genetic variability of cellular receptors and molecules involved in the immune response with different Plasmodium peptides have obtained variable results according to the antigen used and the analyzed population. This work presents results on the study of genetic polymorphisms in TCR (T cell Receptor) and in Interleukins 1 and 2 in patients infected by P. vivax from the city of Goianésia do Pará, in the State of Pará. These polymorphisms were evaluated with Parasitemia, CSP genotypes and serological response to CSP peptides. These polymorphisms were also related to cytokine levels. Polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and allele-specific PCR techniques. Serological tests of CSP were performed by ELISA. The genotypic frequencies observed according to the Hardy-Weinberg (HW) theorem were compared. Levels of IL1 and IL2 were evaluated by flow cytometry following the protocol described by the manufacturer. Association of polymorphisms with interleukin levels was evaluated by analysis of variance. The genotypic and allelic frequencies were obtained in program R v 2.11.1. The parasitemia ranged from 15 to 70,000, with a median of 1,500 parasites / mm3. The SNPS investigated showed varied frequencies in the sample studied. All polymorphism evaluated is in Hard Wenberg Equilibrium. There was no significant difference in parasitemia in relation to the investigated SNPs. Infections containing only the VK247 variant were the most common and also no significant difference in antibody response was observed according to the CSP variant present at the time of infection ... / Doutor

Orientador: Raquel Mantuanelli Scarel Caminaga / Resumo: Estudos realizados por nosso grupo investigaram polimorfismos no gene Interleucina 8 (IL8) em 500 indivíduos com e sem periodontite e identificaram que o haplótipo ATC/TTC conferiu 2 vezes maior suscetibilidade à doença periodontal crônica (DP) em comparação com o haplótipo ATT/TTC. Estudos clínicos revelaram que indivíduos portadores do haplótipo no gene IL8 associado à DP, mesmo com baixo desafio microbiano, desenvolviam periodontite de maneira mais exacerbada quando comparados aos indivíduos portadores do haplótipo não associado à DP. No entanto, a funcionalidade biológica desses haplótipos no gene IL8 ainda não foi investigada por meio de controlados ensaios in vitro. A proposta deste estudo é avaliar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL8 em células imunes, incluindo a investigação por meio da regulação da expressão do gene repórter presente em plasmídeos recombinantes construídos artificialmente (constructos). Foi coletado sangue periférico de pacientes que carregam cada haplótipo e estimulados com mediadores inflamatórios e bactérias periodontopatogênicas para se avaliar a expressão gênica (mRNA, RT-qPCR), proteínas secretadas (Multiplex), perfil fenotípico celular (Citometria de fluxo), fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) por macrófagos (Citometria de fluxo) e potencial de migração de linfócitos e neutrófilos. Constructos contendo cada haplótipo foram transfectados em linfócitos T humanos (células JM) e a expressão do gene repórter GFP fo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies by this group investigated polymorphisms in the Interleukin 8 (IL8) gene in 500 individuals with and without periodontitis and identified that the ATC/TTC haplotype conferred 2-fold increased susceptibility to periodontal disease (PD) compared to the ATT/TTC haplotype. Clinical studies showed that individuals with IL8 haplotype associated with PD, even with low microbial challenge, responded in a more exacerbated manner when compared to individuals with not susceptible haplotype. However, the biological functionality of these haplotypes in the IL8 gene was not investigated by in vitro controlled assays. . The purpose of this study is to evaluate the functionality of haplotypes in the IL8 gene in immune cells including the investigantion of gene reporter expression present in the recombinant plasmids constructed artificially (constructs). Peripheral blood was collected from patients from each haplotype and stimulated with inflammatory mediators and periodontopathogenic bacteria to evaluate the gene expression (mRNA, RT-qPCR), secreted proteins (Multiplex), cellular phenotype profile (flow cytometry), phagocytosis and reactive oxygen species (ROS) by macrophages (flow cytometry) and migration potential of lymphocytes and neutrophils. Constructs containing each haplotype were transfected into Human lymphocytes (JM cells) and expression of the GFP reporter gene was evaluated using flow cytometry. The individuals with the susceptible haplotype (ATC / TTC) had higher levels... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Rita Marques Oliveira / Banca: Daisy Maria Favero Salvadori / Banca: Thabata Koester Weber / Banca: Celso Vieira de Souza Leite / Banca: Irineu Rasera Junior / Resumo: A obesidade é caracterizada pelo excesso de gordura corporal e é considerada um importante fator de risco para doenças cardiometabólicas. Dentre as estratégias para o tratamento, principalmente da obesidade mórbida, a cirurgia bariátrica apresenta resultados significativos na redução da massa corporal e controle das comorbidades associadas. Por outro lado, observa-se que nem todos os pacientes submetidos à cirurgia atingem redução significativa da massa corporal e/ou manutenção desta ao longo do tempo. Investigar os fatores envolvidos no comportamento da massa corporal após cirurgia bariátrica se faz importante para melhorar a efetividade do tratamento da obesidade mórbida. O presente trabalho tem como foco as atividades físicas e composição corporal e consiste na apresentação de três estudos. O primeiro estudo teve como objetivo avaliar as alterações das atividades físicas e composição corporal seis e doze meses após cirurgia bariátrica. Trinta e quatro mulheres submetidas à cirurgia de derivação gástrica em Y de Roux (DGYR) completaram o estudo. As atividades físicas foram mensuradas diretamente por meio de um acelerômetro tri-axial, antes e após seis e doze meses da cirurgia. A composição corporal foi estimada por bioimpedância multifrequencial nos mesmos períodos. O percentual de tempo gasto em atividades físicas moderada-vigorosa (AFMV) aumentou significativamente do período pré para 6 meses após cirurgia, entretanto, não foi observada diferença em 12 meses. Alterações n... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Obesity is characterized by excess body fat and is considered an important risk factor for cardiometabolic diseases. Among treatment strategies, mainly for morbid obesity, bariatric surgery exhibits significant outcomes by reducing body mass and controlling associated comorbidities. On the other hand, it has been observed that not all patients undergoing this surgery achieve significant body mass reduction and/or maintenance over time. The assessment of factors involved in body mass evolution after bariatric surgery is important for improving the effectiveness of the treatment of morbid obesity. The present research focused on physical activities and body composition, and consists of the presentation of three studies. The goal of the first study was to assess changes in physical activities and body composition six and twelve months after bariatric surgery. Thirty-four women undergoing Roux-en-Y gastric bypass surgery completed the study. Physical activities were directly measured using a tri-axial accelerometer before and six and twelve months after the surgery. Body composition was estimated by multifrequency bioimpedance during the same periods. The percent time spent in moderate-to-vigorous physical activity (MVPA) changed significantly from pre- to 6 months post-surgery; however, no difference was observed at 12 months. No significant changes was detected for others physical activities variables. The percentage of subjects achieving ≥ 150 min per week of MVPA in bout ≥ 10... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Leonor Gusmão / Banca: Joyce Aparecida Martins Lopes Ferraz / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Banca: Celso Teixeira Mendes Júnior / Resumo: Na rotina da genética forense, o uso exclusivo dos marcadores STRs (Short Tandem Repeats) em situações que a amostra biológica apresenta-se degradada pode gerar um resultado final estatístico inconclusivo, tornando fundamental a análise de marcadores adicionais para a resolução do caso. Utilizado como método complementar, os polimorfismos InDels (inserção/deleção) têm mostrado grande potencial para superar as limitações dos marcadores tradicionais. A análise de regiões do cromossomo X também vem ganhando significativa importância nesses estudos, especialmente nos casos em que a análise dos autossômicos não é suficiente. Nessa perspectiva, este trabalho teve por objetivo geral caracterizar a população do estado de São Paulo para 32 polimorfismos de inserção/deleção no cromossomo X (32 X-InDels) e avaliar a utilidade desse multiplex na resolução de casos forenses. Para tanto, buscou-se identificar a diversidade genética desses polimorfismos nessa população, a segregação dos alelos entre os genitores (pai e mãe) para as suas respectivas filhas e a eficiência desse painel na amplificação de DNA extraído de amostras ósseas. Para identificar a diversidade genética, foram analisados os perfis genotípicos de 500 indivíduos não aparentados nascidos no estado de São Paulo. Todos os marcadores mostraram-se polimórficos para a população, sendo MID3701 o que apresentou maior diversidade e somente MID2637 se mostrou pouco informativo. O marcador MID1361 apresentou-se em desequilíbrio de Ha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In forensic genetics routine, the exclusive use of STRs (Short Tandem Repeats) markers when the biological sample is degraded can generate an inconclusive final statistical result, making essential the analysis of additional markers for case resolution. Used as a complementary method, InDels (insertion/deletion) polymorphisms have shown great potential to overcome the limitations of traditional markers. Polymorphisms in the X chromosome is also gaining significant importance in these studies, especially in those cases in which the analysis of the autosomal markers is not enough. In this perspective, this study aimed to characterize the São Paulo state population for 32 X chromosome insertion/deletion polymorphisms (32 X-InDels) and to evaluate the utility of this multiplex in the resolution of forensic cases. Therefore, it was analyzed the genetic diversity of this population, the alleles segregation between the parents and their respective daughters, and the amplification efficiency of this panel in DNA extracted from human bones. To identify genetic diversity, the genotypic profiles of 500 unrelated individuals born in São Paulo state was analysed. All markers were polymorphic for the population, with MID3701 being the most diverse, and MID2637 the less informative. The MID1361 marker was in Hardy-Weinberg disequilibrium and an allelic variant was identified in its short allele. The panel showed high forensic efficiency, confirmed by the accumulated power of discrimination (0.9999999999993 in females and 0.99999993 in males) and by the accumulated mean exclusion chance (0.999996 in trios and 0.99995 in duos). Comparing with other populations, significant values of genetic distance were obtained and São Paulo is closer to three... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A alta incidência da dengue no Brasil, causada pela elevada freqüência de seu vetor, o Aedes aegypti, torna importante conhecer a organização de suas populações em termos de diferenciação genética. Esse conhecimento poderá levar a métodos de monitoramento e controle mais eficientes. No presente trabalho, a técnica RAPD-PCR foi utilizada na análise de quatro populações brasileiras de A. aegypti, sendo três classificadas pela SUCEN (Superintendência do Controle de Endemias) como resistentes aos inseticidas utilizados para seu controle (São Luís- SL; São José do Rio Preto- RP; Araçatuba- AR) e uma classificada como portadora de resistência em desenvolvimento (Bauru- BA). Uma quinta população, procedente dos Estados Unidos, suscetível aos mesmos inseticidas (Rockefeller- RO) foi utilizada para comparação. A aplicação dos métodos estatísticos de Nei, (1973, 1978) produziu índices que permitem considerar o conjunto de populações analisadas, no total de primers, como portador de diferenciação genética muito alta conforme a classificação de Wright (1978). Assim indicaram os valores de Gst (0,277), que mede a diferenciação gênica; de Hs (0,129), que mede a heterozigose média e de Ht (0,181), que mede a heterozigose total. Porém, considerando-se as comparações das populações duas a duas, verifica-se que essa diferenciação foi variável, sendo que a comparação entre as populações RP e AR mostrou que estas são as populações menos diferenciadas geneticamente, enquanto as mais diferenciadas foram SL x RO e SL x BA. Os cálculos de similaridade de Nei e Li (1979) confirmaram os dados obtidos com os índices mencionados, reforçando a idéia de maior similaridade entre RP e AR, seguida de RO e BA. De modo geral, pode-se dizer que não é fácil interpretar a estrutura das populações de A. aegypti quanto às causas de sua diferenciação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The high incidence of dengue in Brazil, caused by the high frequency of its vector, Aedes aegypti, makes the organization of their populations in terms of genetic differentiation something important to know. This knowledge could lead to more efficient methods of monitoring and control of the vector. In this study, the RAPD-PCR was used in the analysis of four Brazilian populations of A. aegypti, three of which were classified by SUCEN (Superintencia do Controle de Endemias) as resistant to the insecticides used for its control (San Luis-SL; São Jose do Rio Preto, RP; Araçatuba-AR) and one considered in resistance development (Bauru-BA). A fifth population, from the United States, susceptible to these insecticides (Rockefeller-RO) was used for comparison. The application of the statistical methods of Nei (1973, 1978) produced indices that allowed us to consider the set of populations studied, in the total of primers, as having a very high genetic differentiation, according to the classification of Wright (1978). This is indicated by the values of Gst (0.277), which measure the genetic differentiation, the values of Hs (0.129), which measures the average heterozygosity and of Ht (0.181), that measure the total heterozygosity. However, considering the pair-wise comparisons of populations, this differentiation was variable, being the populations RP and AR the less differentiated genetically, while the more differentiated were SL x RO and BA x SL. The estimation of the similarity of Nei and Li (1979) confirmed the data obtained with the indices mentioned, reinforcing the idea of greater similarity between RP and AR, followed by RO and BA. In general, it is not easy to interpret the structure of A. aegypti populations as to on the causes of their genetic differentiation, since they are under strong interference of the human activity, which includes not only the passive transport... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Hermione Elly Melara de Campos Bicudo / Coorientador: Lilian Madi-Ravazzi / Banca: Lílian Castiglioni / Banca: Francisco Chiaravalloti Neto / Mestre