Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Inclui bibliografias / A doença renal crônica (DRC) e a doença periodontal (DP) são sérios problemas de saúde-pública, sendo esta última especialmente negligenciada na população de renais crônicos. A vitamina D é um hormônio esteróide solúvel, metabolizado no fígado e nos rins, / Chronic kidney disease (CKD) and periodontitis (PD) are serious public-health concerns, but the latter has been especially neglected in the CKD population. Vitamin D is a fat-soluble steroid hormone, metabolized in the liver and then in the kidney, result

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2010 / Bibliografia: f.43-55 / A reabsorcao radicular apical externa (RRAE) e uma sequela comum do tratamento ortodontico; e considerada multifatorial, envolvendo o hospedeiro e fatores ambientais. Estudos sugerem que a RRAE apresenta um componente genetico. A vitamina D e responsavel / External apical root resorption (EARR) is a common complication of orthodontic treatment and is considered to be multifactorial, involving host and environmental factors. Studies have suggested that EARR has a genetic component. Vitamin D is responsible f

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2008. / Inclui bibliografias / A doença renal crônica (DRC) é uma doença progressiva, que cursa com a destruição dos nefros. A doença renal em estágio final, ou estágio 5, refere se à fase em que os pacientes necessitam de terapia de substituição de suas funções renais, por diálise ou / Chronic kidney disease (CKD) is an inflammatory progressive illness characterized by the gradual and usually permanent loss of kidney function over time. The main causes are hypertension and diabetes mellitus. Patients with CKD present several complicatio

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2005 / Inclui bibliografia / A cárie dentária é uma doença infecciosa e de etiologia multifatorial, relacionada à microbiota, à dieta e ao hospedeiro. O número de indivíduos acometidos pela cárie dentária tem reduzido sobremaneira, mas ainda é substancial, mesmo em áreas favorecidas

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Genes que codificam proteínas envolvidas na biossíntese, ação e metabolização dos esteróides sexuais são polimórficos. Essa condição poderia explicar as variações individuais na densidade mamográfica. O presente estudo teve como objetivos avaliar a eventual associação das características clínicas e dos polimorfismos HaeIII, MspI e XbaI do gene do receptor alfa de estrogênio com a densidade mamográfica após a menopausa. Métodos: Foram avaliadas prospectivamente 120 mulheres não usuárias de terapia hormonal e sem lesões mamárias clínica ou mamográficas. Todas elas submeteram-se à mamografia bilateral e a densidade radiológica foi determinada por três observadores independentes, sendo duas avaliações subjetivas, baseadas na classificação dos padrões mamográficos do ACR-BIRADS® (2003) e uma computadorizada - ferramenta de histograma de escala de cinza do software Adobe Photoshop® 7.0. Amostras de sangue periférico foram obtidas para extração de DNA, que foi realizada segundo o protocolo do Kit GFX® da Amersham-Pharmacia. Após a extração do DNA, foi realizada PCR-RFLP (Reação de Cadeia Polimerase - Restriction Fragment Length Polymorphism) para análise dos polimorfismos presentes no íntron 1 (HaeIII e XbaI) e no éxon 1 (MspI) do gene do receptor de estrogênio. Resultados: Houve alto grau de concordância entre os observadores na determinação da densidade mamográfica (kappa, Pearson e Spearman - p<0,001). As associações entre as características clínicas com a densidade mamária foram: Idade (p=0,04), índice de massa corpórea (p<0,0001), idade da menarca (p=0,02), idade da menopausa (p=0,120), idade no primeiro parto (p=0,120) e paridade (p=0,09). Já a relação entre a distribuição alélica dos polimorfismos com a densidade foi: XbaI (p=0,02), HaeIII (p=0,65) e MspI (p=0,65). Conclusão: Apenas o polimorfismo XbaI e os fatores clínicos idade, idade da menarca e índice de massa corpórea mostraram-se associados com a densidade mamográfica após a menopausa. / Introduction: Genes that encode proteins involved at biosynthesis, action and metabolism of sexual steroids are polymorphics. This condition could explain individual variations in mammographic density. The objectives of this study were to evaluate a possible association of clinical characteristics and polymorphisms HaeIII, MspI and XbaI of the estrogen receptor gene alpha with postmenopausal mammographic density. Methods: Prospective evaluation was made of 120 women who were not hormone therapy users and had no identified breast lesions. Bilateral mammography was obtained from the group, and the radiological density was determined by three independent observers, with two subjective evaluations based on the ACR-BIRADS® (2003) classification of mammographic patterns and one computerized evaluation – the grey-scale histogram tool of the Adobe Photoshop® 7.0 software. Peripheral blood samples were obtained for DNA extraction, performed according to the GFX® Kit protocol from Amersham-Pharmacia. PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism) was carried out for an analysis of the polymorphisms present in intron 1 (HaeIII and XbaI) and in exon 1 (MspI) of the estrogen receptor gene. Results: There was a high degree of concordance among the observers in the determination of mammographic density (Kappa, Pearson and Spearman index - p<0.001). The associations of clinical characteristics with mammographic density were: age (p=0,04), body mass index (p<0.0001), age at menarche (p=0.02), age at menopause (p=0.120), age at first delivery (p=0.120) and parity (p=0.09). The relation between the allele distribution of the polymorphisms and the density was: XbaI (p=0.02), HaeIII (p=0.65) and MspI (p=0.65). Conclusion: Polymorphism XbaI and the clinical factors age, menarche and body mass index showed to be associated with postmenopausal mammographic density. / FAPESP: 03 / 04533-1 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2016-04-11T20:38:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Capa - Doutorado Leticia Soncini de Souza.pdf: 5208177 bytes, checksum: 19d82e927ab0bb3e8f7dde3d954c6d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-16T14:40:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Capa - Doutorado Leticia Soncini de Souza.pdf: 5208177 bytes, checksum: 19d82e927ab0bb3e8f7dde3d954c6d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-16T14:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Capa - Doutorado Leticia Soncini de Souza.pdf: 5208177 bytes, checksum: 19d82e927ab0bb3e8f7dde3d954c6d35 (MD5) / FACITEC, FAPES, CNPq / Uma vez admitindo-se que o conhecimento da regulação dos mecanismos de formação e reabsorção óssea é crucial na busca de alternativas terapêuticas em doenças como a osteoporose, a biologia molecular surge como ferramenta interessante e, indispensável para alcançar tal objetivo. Dentre esses marcadores genéticos, os polimorfismos associados ao gene do receptor de estrogênio alfa (REα) e ao gene da Apolipoproteína “E” (ApoE) têm recebido maior atenção nos últimos anos. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão dos polimorfismos PvuII (CT nt -397) e XbaI (GA nt -351) presentes no gene do REα e dos polimorfismos presentes no gene da ApoE (HhaI - ε2, ε3 e ε4) em populações de mulheres pós-menopausadas, associando estas alterações gênicas, seus perfis clínicos e bioquímicos com a osteoporose. Após análise dos resultados obtidos, o SNP PvuII, do gene do RE, está relacionado com a baixa Densidade Mineral Óssea (DMO), sendo este efeito mais observado em mulheres com idade mais avançada. O alelo P, contudo, correlaciona-se fortemente com alta DMO (p<0,05) em toda a população estudada, e se reproduz quando analisada a população com idade acima de 65 anos, sugerindo um papel protetor à perda de massa mineral óssea. No SNP XbaII do mesmo gene, observou-se uma associação significativa do alelo x em concentrações de triglicerídeos e de lipídios totais, além da dependência da idade dos pacientes e do Índice de Massa Corporal (IMC). Já o SNP HhaI, no gene da APOE, o alelo E2 pode estar relacionado como um fator de risco para a baixa DMO, e o alelo E3 pode estar relacionado como um fator protetor em relação à DMO. Esses resultados contribuem para uma melhor compreensão sobre a expressão de genes relacionados à osteoporose e podem fornecer subsídios para uma melhor determinação prognóstica da enfermidade, além de racionalização da conduta terapêutica a ser escolhida, proporcionando uma melhor qualidade de vida de pacientes já na pós-menopausa. / Since that assuming the knowledge of the regulatory mechanisms of bone formation and resorption is crucial in the search for alternative therapies in diseases such as osteoporosis, molecular biology emerges as interesting tool and essential to achieving this goal. Among these genetic markers, gene polymorphisms associated with estrogen receptor alpha (ERα) and the gene Apolipoprotein " E" (ApoE) have received increased attention in recent years. The aim of this study was to analyze the expression of polymorphisms PvuII (CT nt -397) and XbaI (GA nt -351) gene present in REα and polymorphisms in the gene ApoE (HhaI - ε2 , ε3 and ε4) in populations of postmenopausal women, associating these gene alterations, and their clinical and biochemical profiles with osteoporosis. After analyzing the results obtained, the PvuII SNP in the gene of ERα is related to low BMD, and this effect is most noticeable in women with advanced age. The P allele, however, correlates strongly with high BMD (p < 0.05) in the whole population studied and reproduced when analyzing the population aged over 65 years, suggesting a protective role in the loss of bone mineral. In XbaII SNP, of same gene, a significant association of allele x at concentrations of triglycerides and total lipids and dependence on patient age and Body Mass Index (BMI) was observed. On the other hand, for SNP HhaI, ApoE gene, the E2 allele may be associated as a risk factor for low BMD, and E3 allele may be associated as a protective factor in relation to BMD. These results contribute to a better understanding of the expression of genes related to osteoporosis and can provide information for better prognostic determination of the disease as well as rationalization of therapeutic conduct to be chosen, providing a better quality of life for postmenopausal patients.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-07Bitstream added on 2014-06-13T19:12:52Z : No. of bitstreams: 1 tayar_g_me_sjrp.pdf: 647193 bytes, checksum: c93976b0eb63a8369134ef80302ad964 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A osteoporose é uma doença metabólica, que se caracteriza por baixa massa e deterioração do tecido ósseo, conduzindo à fragilidade do osso com conseqüente aumento do risco de fraturas. O início da doença é influenciado por uma complexa interação entre fatores genéticos e ambientais, que pode afetar diferentemente os indivíduos. Por essa razão, faz-se necessário o estudo dos polimorfismos dos genes associados ao metabolismo ósseo, como os do Receptor para Vitamina D (VDR) e da Apolipoproteína E (APOE), além dos envolvidos no biometabolismo de agentes ambientais, como as Glutatião-S-Transferases (GSTs). Foram estudados 53 pacientes, homens e mulheres, com osteoporose e ou osteopenia, pareados por sexo e faixa etária com um grupo controle. O DNA foi extraído de leucócitos de sangue periférico e amplificado por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os polimorfismos GSTM1 e GSTT1 foram analisados em gel de agarose 2%, enquanto os da APOE e VDR foram submetidos à restrição enzimática com as enzimas Hha I e Fok I, respectivamente, seguido da análise em gel de poliacrilamida 6%, corados com brometo de etídeo e visualizados em luz UV. A análise estatística dos dados foi realizada, utilizando-se o teste t, teste de Fisher, a regressão multivariada e o teste de equilíbrio de Hardy-Weinberg. O genótipo nulo (0/0) de GSTM1 mostrou-se significantemente mais freqüente nos pacientes (64,1%) comparado ao dos controles (37,7%; P= 0,00112). Por outro lado, pacientes e controles não diferiram quanto à presença (+/+) e ausência (0/0) do gene GSTT1 (P=0,5328). A distribuição genotípica do polimorfismo VDR – Fok I revelou freqüência significantemente aumentada do genótipo ff nos pacientes (22,6%; P=0,0078). Para o gene da APOE, o alelo e3 foi significantemente mais freqüente nos controles (0,85; P=0,0431), enquanto... / Osteoporosis is a metabolic disease characterized by low body mass and bone deterioration, leading to bone fragility with the consequent increase of fractures risk. The disease onset is influenced by a complex interaction between genetic, and environment factors that can affect differently the individuals’ response. Therefore, the study of polymorphisms regarding the genes involved in bone metabolism is of upgrade necessity, such as the Vitamin D Receptor gene (VDR), Apolipoprotein E (APOE), besides the genes involved in xenobiotic metabolism, it means, the Glutathion-S-Transferases (GSTs). We have studied 53 patients, men and women, with osteoporosis and/or osteopenia, matched by gender and age with a control group. The DNA was extracted from peripheral blood lymphocytes and amplified through Polimerase Chain Reaction (PCR). GSTM1, and GSTT1 polymorphisms were analyzed in 2% agarose gel, while APOE, and VDR had been submitted to enzymatic restriction with Hha I and Fok I enzymes, respectively, followed by the analysis in 6% polyacrilamide gel, stained with ethidium bromide and visualized under UV light. The statistic analysis was carried on using test t, test of Fisher, the multi-varied regression and the test of Hardy-Weinberg balance. The GSTM1 null genotype (0/0) was significantly more frequent in patients (64.1%) compared to the controls (37.7%; P= 0.00112). On the other hand, patients, and controls did not differ concerning the presence (++) and absence (0/0) of GSTT1 gene (P=0.5328). The genotypic distribution of VDR –Fok I polymorphism showed a significantly increased frequency of the genotype ff in patients (22.6%; P=0.0078). For the APOE, the allele e3 was significantly more frequent in controls (0.85; P=0.0431), while the allele e4 was in patients (0.20; P=0.0075). The genotype...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-08-23Bitstream added on 2014-06-13T20:54:02Z : No. of bitstreams: 1 cortezzi_ss_me_sjrp.pdf: 512438 bytes, checksum: c98927f964472197d57903b9dbd21cb1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço é uma neoplasia cujo principal fator de risco é o consumo de tabaco e/ou álcool. As infecções pelo HPV têm sido observadas nesse grupo de tumores. Os HPVs de alto risco podem induzir alterações calulares pela interação de suas proteínas E6 e E7 com as proteínas p53 e a pRb, respectivamente. As oncoproteínas são insuficientes para o desenvolvimento do fenótipo maligno, sugerindo a presença de outros cofatores, como a susceptibilidade genética. O gene TP53 possui um polimorfismo que resulta na presença de uma prolina ou de uma arginina na posição correspondente ao códon 72, no exon 4. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel da infecção pelo HPV e do polimorfismo de TP53 na carcinogênese de cabeça e pescoço. Foram analisadas 142 amostras de indivíduos controle e 50 amostras de pacientes. Os resultados mostraram a presença do HPV em 10,6% dos controles e em 16% dos tumores. A análise da freqüência de distribuição dos genótipos relativos revelou 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro e 7% Pro/Pro no grupo controle e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro no grupo dos tumores. A análise estatística desses dados não mostrou diferença significativa na distribuição dos genótipos e dos alelos entre os dois grupos, independentemente da presença do HPV, à exceção dos indivíduos Pro/Pro, que estão associados à ausência do HPV. O alelo arginina e o genótipo Arg/Pro têm efeito protetor ao desenvolvimento dos tumores. O HPV não representa risco aos carcinomas espinocelulares de cabeça e pescoço. / Head and neck squamous cell carcinoma is a disease associated with tobacco and/or alcohol abuse. There are evidences that oncogenic HPV may also be a risk for upper aerodigestive tract cancers. High-risk HPVs encode two early proteins, E6 and E7, that can bind to p53 and pRb, respectively, and induce its degradation or inactivation. The TP53 gene has a single polymorphism at codon 72 of exon 4 that encodes either arginine (Arg) or proline (Pro). The purpose of this study was to evaluate the role of HPV infection and p53 polymorphism in head and neck cancer. We analyzed 50 tumors as well swabs of oral mucosa from 142 control individuals by PCR technique. The prevalence of HPV in controls was 10.6% and in cancer specimens was 16%. The frequency of distribution of genotypes in controls was 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro and 7% Pro/Pro and in tumors was e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro. Contrarely to the results of some studies on cervical cancer, no association between any TP53 genotype or allele and the development of head and neck cancer was observed, regardless of HPV status, except for Pro/Pro genotype which is associated with the absence of HPV. Arginine allele and Arg/Pro genotype appear to protect against head and neck cancers. Also, the data showed that HPV infection results in no increasing risk of developing head and neck tumors..

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-10Bitstream added on 2014-06-13T19:42:40Z : No. of bitstreams: 1 guirado_mm_dr_sjrp.pdf: 243606 bytes, checksum: d763ca85a0e74640c2c01e853c525fde (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Hoje se sabe que as enzimas esterásicas estão relacionadas com o desenvolvimento de resistência a inseticidas, em muitos organismos. Em Aedes aegypti, a dedução desse envolvimento tem resultado mais de testes que permitem a avaliação da atividade das esterases no extrato total dos mosquitos (mostrando valores maiores nas populações resistentes) do que de estudos mais profundos de padrões e bandas individualizadas e sua relação com a resistência. Com o objetivo básico de contribuir para o conhecimento desse aspecto, no presente trabalho 11 populações geográficas daquele vetor, sendo seis classificadas como resistentes, três como suscetíveis e duas como tendo suscetibilidade diminuída, foram analisadas quanto ao polimorfismo de esterases, por eletroforese em géis de poliacrilamida. O resultado do estudo de cerca de 30 amostras de larvas e adultos de cada população mostrou 24 bandas que foram tentativamente associadas com oito loci genéticos. Considerando também os dados de Lima-Catelani et al. (2004) e de Sousa-Polezzi & Bicudo (2005), temos o total de 25 bandas esterásicas, incluídas em 12 supostos loci, em 15 populações daquele vetor, até a presente data. A população de São José do Rio Preto, analisada em intervalos de cinco anos entre aqueles dois estudos, e sete anos entre Sousa-Polezzi & Bicudo (2005) e o presente trabalho, mostrou modificações no padrão de esterases, que ocorreram ao longo do tempo paralelamente ao surgimento e aumento da resistência aos inseticidas utilizados no controle, nessa população. Essas modificações abrangeram, basicamente, aumento ou diminuição da freqüência de algumas bandas e ausência de bandas previamente detectadas. De modo geral, a busca por padrões esterásicos específicos, relacionados ao desenvolvimento da resistência, indicou algumas bandas ou combinações de bandas para um estudo mais aprofundado. Essas bandas são: EST-1, sozinha, devido à sua alta freqüência em cinco das seis populações classificadas como resistentes, a combinação de EST-1 com EST-4, ambas ocorrendo simultaneamente, de forma predominante nas populações resistentes, e as colinesterases , detectadas nas 11 populações, mas apresentando freqüências mais altas em quatro das seis populações consideradas resistentes. Diante do conhecimento atual sobre as esterases e sua relação com a resistência a inseticidas, em A. aegypti, no presente trabalho é discutida a possibilidade de que a quantidade total de esterases (principalmente das carboxilesterases) produzidas por um grupo de genes possa ser mais importante em gerar resistência do que o grau de expressão de genes individuais que codificam para bandas específicas. Contudo, entendemos que as bandas destacadas neste trabalho devem ser alvo de um estudo mais detalhado, antes que essa hipótese ganhe maior força. / It is presently known that the esterases are involved in the process of resistance to insecticides, in several organisms. In Aedes aegypti, the conclusion about such involvement resulted rather from tests in which the total amount of esterases is computed in extracts of the mosquitoes (showing greater quantities in the resistant ones) than from deeper studies of esterase patterns or particular esterase bands and their relationship with resistance. With the basic aim to contribute to the knowledge of this relationship, in the present study the esterase polymorphism of 11 geographic populations of that vector, being six classified as resistant, three as susceptible and two as presenting decreased susceptibility, was studied by electrophoresis in polyacrylamide gels. The results of the analysis of about 30 individual samples of larvae and adults of each population showed 24 esterase bands which were tentatively associated to eight loci. Considering also the data from Lima-Catelani et al. (2004) and Sousa-Polezzi & Bicudo (2005), a total of 25 bands and 12 loci, in 15 populations, was obtained. The population from São José do Rio Preto, analyzed at intervals of five years between those two studies and seven years between Sousa-Polezzi & Bicudo (2005) and the present study, showed changes in the esterase pattern, which occurred along time concomitant to the increase of insecticide resistance in that population, including frequency increase or decrease of some bands and absence of bands previously detected. The search for specific esterase patterns related to the resistance development indicated some bands and combinations of bands as deserving a deeper study. They are EST-1 alone, due to high frequency in five of the six resistant populations, or the combination of EST-1 with EST-4, both occurring simultaneously, with high frequency, mainly in the resistant populations, and the cholinesterases, which although present in the 11 populations, showed higher frequencies in four of the six resistant ones. In front of the present knowledge on esterases related with resistance, in A. aegypti, we discuss the possibility that the total amount of esterases (mainly carboxilesterases) produced by a group of genes might be more important in the generation of resistance than the degree of expression of genes codifying particular bands. However, we understand that the bands stood out in the present study must be the target of a more detailed analysis, before this hypothesis gains a greater consideration. / FAPESP: 05/59219-5

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-28Bitstream added on 2014-06-13T18:43:16Z : No. of bitstreams: 1 marchesin_src_dr_sjrp.pdf: 719824 bytes, checksum: 27f6c7b9b1235bdfcec78f2741f543a0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A proposta do presente trabalho foi analisar as relações de proximidade genética e evolutiva entre espécies de Chiroptera, a partir da utilização da técnica PCR-RFLP para a obtenção de dados moleculares para os genes mitocondrial 12/16S e nuclear RAG2. A variabilidade detectada no presente estudo para as diferentes espécies é extremamente importante e poderá orientar ou subsidiar estudos com diferentes finalidades. A complexidade dos táxons de Chiroptera observada em outras análises, como citogenética e morfológica também foi revelada pela análise de RFLP, reforçando a importância dessa metodologia nos estudos evolutivos do grupo. / The aim of this study was to assess the relationships of genetic and evolutive proximity among Chiroptera species, through the obtention of molecular data through mitochondrial (12/16S) and nuclear (RAG2) genes by PCR-RFLP technique. The variability detected by this study to the different species is extremely important and can direct or subsidize studies with different purposes. The complexity of Chiroptera taxa observed in cytogenetic and morphologic analyses was also revealed by the RFLP technique, reinforcing the importance of this methodology in evolutive studies of the group.