Orientador: Antonio de Queiroz Neto / Coorientador: Guilherme de Camargo Ferraz / Coorientador: Rogério Abdallah Curi / Banca: Josineudson Augusto II de Vasconcelos Silva / Banca: Luciana Correia de Almeida Regitano / Banca: Humberto Tonhati / Banca: Ana Fabrícia Braga Magalhães / Resumo: O transportador de monocarboxilato isoforma 1 (MCT1), presente na membrana das hemácias, e sua proteína auxiliar CD147 têm como função transportar H+ e lactato do plasma para dentro das hemácias, mantendo assim, a homeostase ácido-base e retardando a acidose sistêmica e fadiga muscular. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi comparar as quantidades das proteínas MCT1 e CD147 em hemácias de cavalos Árabes e Quartos de Milha com diferentes níveis de desempenho atlético. Além disso, objetivou-se buscar por polimorfismos para os genes MCT1, CD147, DMRT3 e PDK4, a fim de checar associações entre os polimorfismos e o desempenho nas raças. Cavalos Árabes e Quartos de Milha foram divididos em dois grupos de acordo com o desempenho em provas de enduro e provas de corridas, respectivamente. A quantidade de MCT1 e CD147 na membrana plasmática das hemácias foi determinada por western blotting com unidades arbitrárias de densidade óptica (OD) e anticorpos reagentes à espécie humana anti-MCT1 e anti-CD147. Os dados para as quantidades de proteínas foram analisados pelo PROC MIXED do SAS. O modelo incluiu a idade como covariável e os efeitos fixos de sexo, raça e grupo de desempenho dentro de raça. As correlações foram analisadas pelo teste de Pearson pelo procedimento PROC CORR. P-valores <0,01 foram considerados estatisticamente significantes. Os polimorfismos dos genes foram analisados por sequenciamento (MCT1 e CD147), PCR-RFLP (DMRT3) e ARMS-PCR (PDK4). Os pacotes ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Monocarboxylate transporter isoform 1 (MCT1), present in the red blood cell membranes and its ancillary protein CD147 have as function transport H+ and lactate ions from the plasma into the red blood cells, thereby maintaining acid/base homeostasis and retarding systemic acidosis and muscular fatigue. Thereby, the aim of this study was to compare the amount of MCT1 and CD147 proteins in the red blood cells of Arabian and Quarter Horses with different levels of athletic ability. Furthermore, we investigated polymorphisms for MCT1, CD147, DMRT3, and PDK4 genes in Arabian and Quarter Horses in order to check associations between the polymorphisms and the performance in these breeds. Arabian horses were divided into two groups according to their performance in endurance competition and Quarter Horses were separated by its performance in races, determined by Speed Index. The amount of MCT1 and CD147 proteins in the plasma membrane of red blood cells was determined by western blotting analysis with arbitrary optical density units (OD), using a human specific anti-MCT1 and anti- CD147 antibody. Data for the amounts of proteins were analyzed using the PROC MIXED procedure of SAS software. The model for the analysis included the effects of sex, breed and performance group within breed as fixed effect and age as covariate. The correlations were analyzed by Pearson correlation test using the PROC CORR procedure of SAS software. P values <0.01 were considered statistically significant. Polymorphisms of the genes were analyzed by sequencing (MCT1 and CD147), PCR-RFLP (DMRT3) and ARMS-PCR (PDK4) techniques. The statistical packages Genetics, Lattice and GenABEL were used to compare the frequencies of the groups using the software R, with the Fisher's exact test being performed with significance level of 5%. MCT1 and CD147 proteins ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Humberto Tonhati / Banca: Jeffrey Frederico Lui / Banca: Eucléia Primo Betioli Contel / Banca: Luciana Correia de Almeida Regitano / Banca: Antonoi Roberto Otaviano / Resumo: A atividade biológica do ácido linoléico conjugado (CLA) em seres humanos está diretamente relacionada à prevenção e tratamento de várias doenças, principalmente o câncer. A maiores fontes naturais de CLA, disponíveis para o consumo, são o leite e derivados lácteos. Em ruminantes, altos níveis de secreção do CLA ocorrem em função da síntese endógena que ocorre na glândula mamária, pela ação da enzima Estearoil- Coenzima A dessaturase (SCD) sobre o ácido vacênico circulante. Neste estudo, a região promotora do gene da SCD de búfalas da raça "Murrah", foi isolada a partir de bibliotecas gênicas obtidas com a utilização da técnica "Genome Walking". Os produtos das bibliotecas foram clonados e sequenciados, caracterizando uma região de 588 pb acima do sitio de início de transcrição. A aplicação de softwares específicos para análise das sequências, permitiu a identificação de regiões consenso que atuam como sítios de ligação para fatores de transcrição que agem diretamente na regulação da expressão gênica. Os principais sítios de ligação identificados foram: SREBP-1, NF-Y, NF-1, AP-1, FSE e HNF-4. A sequência da região promotora bubalina obtida neste estudo apresentou homologia com sequências da mesma região descritas para bovinos, ovinos e suínos, indicando similaridade entre os nucleotídeos que as compõem. Este estudo permitiu a caracterização molecular completa da região promotora do gene da SCD em bubalinos leiteiros / Abstract: The role of conjugated linoleic acid (CLA) in humans is related to prevention and treatment in a number of diseases, mainly, cancer. Milk and dairy products are the major natural sources of CLA available for human diets. In ruminants, the CLA levels produced occurs in function of the endogenous synthesis on mammary gland by the action of Stearoyl CoA desaturase (SCD) on vaccenic acid. In this study, the promoter region of SCD's gene of Murrah breed buffaloes was isolated from Genome Walker libraries. The amplicons were cloned and sequenced, characterizing 588 bp upstream the transcriptions start site. Analysis with specific software to promoter regions allows the identification of transcription factor binding sites related to gene expression regulation. The putative sequences identified were SREBP-1, NF-Y, NF-1, AP-1, FSE and HNF-4. The core promoter sequence of SCD obtained in this study showed homology with the promoters previously described to bovine, ovine and swine, indicating a high conservation level to the nucleotide sequence. This study allows the complete molecular characterization to the core promoter of SCD gene in dairy buffaloes / Doutor

Resumo: O Sistema de Produção de Novilhos Superprecoces é considerado hoje o único sistema padronizado de produção de bovinos de corte, em prática no Brasil, que prediz a qualidade total dos produtos cárneos e seus sub-produtos. Tal sistema permite obter animais jovens, em torno de um ano, prontos para o abate, com terminação adequada de cobertura de gordura na carcaça. Atualmente as técnicas de genética molecular permitem identificar e clonar genes responsáveis pela síntese de proteínas que atuam nas vias metabólicas relacionadas ao crescimento animal e partição de nutrientes para os diferentes tecidos auxiliando o melhoramento genético. Considerando a importância do efeito dos genes do Hormônio do Crescimento e seu receptor, Leptina, STAT5A, Calpaína e Calpastatina no metabolismo animal, buscou-se neste trabalho estudar 9 polimorfismos genéticos e verificar a existência de associação com os índices mais importantes de crescimento, características de carcaça e qualidade de carne de bovinos submetidos ao Sistema Superprecoce, durante três sucessivos anos de confinamento experimental. Para tanto, foram avaliados 500 animais para os polimorfismos do GH/AluI e GHRm, e 300 animais para o restante dos polimorfismos gênicos. Os animais foram desmamados aos sete meses de idade em sistema creep-feeding e posteriormente submetidos a confinamento por 120 dias. Os polimorfismos foram analisados pela técnica PCR-RFLP e STR. O efeito dos genótipos sobre as características estudadas foi analisado utilizando-se o procedimento GLM (SAS) e as médias dos quadrados mínimos dos genótipos comparadas pelo teste de Tukey. As características mais importantes do crescimento foram influenciadas significativamente pelos polimorfismos do GH/DdeI, GHR/StuI, LEPT/Kpn2I, STAT5A/DdeI e CAPN2/HhaI (P<0,01). As características de carcaça foram associadas significativamente com os polimorfismos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Novilho Superprecoce System is considered the only beef cattle production system in Brazil that determines the total quality of meat products and by-products. The animals were slaughtered at one year old with appropriate carcass backfat. The molecular genetics studies have resulted in the identification of genes with a key role in the determination of production traits, improving the animal breeding. Considering the importance of Growth Hormone, GH receptor, Leptin, STAT5A, Calpain and Calpastatin genes at the animal metabolism, the objectives of this work were the study of 9 genes polymorphisms on the DNA sequence and their associations with the most important growth, carcass and meat quality traits of beef cattle raised at the Superprecoce System, during three years consecutives of feedlot. A total of 500 animals to the GH/AluI and GHRm polymorphisms, and 300 animals to the remaining genes polymorphisms were analyzed. The animals were weaned at 7 months old at the creepfeeding and raised at the feedlot system for 120 days. The polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and STR methodology. The genotype effects at the traits were analyzed by GLM procedure of SAS and the least square means of the genotypes were compared by Tukey test. The most important growth traits were influenced by GH/DdeI, GHR/StuI, LEPT/Kpn2I, STAT5A/DdeI and CAPN2/HhaI genes polymorphisms (P<0,01). The carcass traits were associated with GHR/StuI,LEPT/Kpn2I and CAPN2/HhaI genes polymorphisms (P<0,01). Nevertheless, just tenderness, of the meat quality traits, showed a significant relationship with the GHRm microssatelite, LEPT/Kpn2I and CAPN2/HhaI polymorphisms (P<0,01)...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Antônio Carlos Silveira / Coorientador: Henrique Nunes de Oliveira / Coorientador: Catalina Romero Lopes / Doutor

Orientador: Eliana Morielle-Versute / Banca: Fernando de Camargo Passos / Banca: Luciana Bolsoni Lourenço / Banca: Guaracy Tadeu Rocha / Banca: Wagner André Pedro / Resumo: A proposta do presente trabalho foi analisar as relações de proximidade genética e evolutiva entre espécies de Chiroptera, a partir da utilização da técnica PCR-RFLP para a obtenção de dados moleculares para os genes mitocondrial 12/16S e nuclear RAG2. A variabilidade detectada no presente estudo para as diferentes espécies é extremamente importante e poderá orientar ou subsidiar estudos com diferentes finalidades. A complexidade dos táxons de Chiroptera observada em outras análises, como citogenética e morfológica também foi revelada pela análise de RFLP, reforçando a importância dessa metodologia nos estudos evolutivos do grupo. / Abstract: The aim of this study was to assess the relationships of genetic and evolutive proximity among Chiroptera species, through the obtention of molecular data through mitochondrial (12/16S) and nuclear (RAG2) genes by PCR-RFLP technique. The variability detected by this study to the different species is extremely important and can direct or subsidize studies with different purposes. The complexity of Chiroptera taxa observed in cytogenetic and morphologic analyses was also revealed by the RFLP technique, reinforcing the importance of this methodology in evolutive studies of the group. / Doutor

Orientador: Ana Carla Pereira Latini / Coorientador: Vânia Nieto Brito de Souza / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Milton Ozório Moraes / Resumo: hanseníase é uma doença de caráter complexa causada pelo Mycobacterium leprae, que é um patógeno intracelular obrigatório com predileção por macrófagos na pele e células de Schwann nos nervos periféricos. O genoma altamente conservado do bacilo sugere que o patógeno não seja o responsável pela variedade de fenótipos clínicos e biológicos observada na doença, atribuindo grande importância aos fatores genéticos do hospedeiro. Estudos de ligação do tipo genome-wide apontaram um locus de susceptibilidade para a doença na região cromossômica 10p13 e o gene GATA3, localizado na região 10p15, é um forte candidato a fazer parte dessa associação devido à sua localização no genoma e ao seu papel na resposta imune. O GATA-3 é um fator de transcrição clássico na diferenciação de células Th2, no entanto, sabe-se hoje que essa proteína possui outras funções importantes para o sistema imune. Nós empregamos a estratégia de estudo de associação do tipo caso-controle em série, utilizando duas amostras populacionais do Brasil com 1.633 indivíduos, para testar sete variantes genéticas do GATA3. Um estudo funcional também foi conduzido para avaliar o efeito dos polimorfismos associados sobre a expressão de GATA-3 e produção de citocinas. O alelo A do polimorfismo rs10905284 foi associado com resistência para a hanseníase em ambas as amostras. Na análise combinando as duas amostras este efeito do alelo A foi confirmado (OR 0,67; IC95%: 0,54-0,84; p=0,0004). A análise funcional mostrou que os indivíduos portadores do genótipo AA expressam altos níveis da proteína GATA-3 nos linfócitos. Portanto, nós confirmamos que o marcador rs10905284 está associado à hanseníase na população brasileira e influencia os níveis de expressão do fator de transcrição GATA-3 / Abstract: Leprosy outcome is a complex trait and the host-pathogen-environment interaction defines the emergence of the disease. The causative agent of the disease, Mycobacterium leprae, exhibits a conserved genome and could not be accountable for the variety of outcomes observed from exposition, infection and disease. Thus, host genetic risk factors have been successfully associated to leprosy. The 10p13 chromosomal region was linked to leprosy in familial studies and the GATA3 gene is a strong candidate to be part of this association due to its locus and the role that exerts in the immune response. The GATA-3 is a transcription factor involved in the Th2 cell differentiation, however, today it is recognized the ample role of this protein in the immune response. Here, we applied a stepwise strategy to test genetic variants at GATA3 in two case-control samples from Brazil comprising a total of 1,633 individuals. A functional investigation was also conducted to evaluate the effect of the polymorphisms on the GATA-3 protein and the cytokines production. The A allele of rs10905284 marker was associated to leprosy resistance in both samples. In the analysis combining the two samples this effect was reinforced (OR 0,67; CI95%: 0,54-0,84; p=0,0004). The functional analysis showed that individuals carrying AA genotype express higher levels of GATA-3 protein in lymphocytes. So, we confirmed that the rs10905284 is a locus associated to leprosy in the Brazilian population and influences the levels of this transcription factor. / Mestre

Orientador: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Adriana Camargo Ferrassi / Banca: José Roberto Fígaro Caldeira / Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres, correspondendo a 22% de todos os casos. Foram estimados mais de 1.050.000 casos novos de câncer de mama em todo o mundo no ano 2000. Mecanismos epigenéticos como a ativação e desativação de genes por meio da hipometilação e hipermetilação, respectivamente, da região promotora dos genes estão associados ao surgimento de diversos tipos de cânceres. Embora os fatores que resultam na metilação aberrante ainda não sejam bem conhecidos, a deficiência de folato têm sido associada a esse mecanismo no desenvolvimento de cânceres como de colo uterino, pulmão, mama, cólon e cérebro. Neste trabalho, foi avaliado se os polimorfismos em genes de enzimas chaves no metabolismo do folato como a timidilato sintase (TS) e metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) influenciam o padrão de metilação da região promotora dos genes CDH1, BRCA1 e hMLH1 em amostras de câncer de mama. A metilação foi avaliada através da MS-PCR e os polimorfismos por PCR e PCR-RFLP. Não houve diferença estatisticamente significante (p<0.05, teste exato de Fisher) do padrão de metilação dos genes quando comparado com estádio, grau histológico, idade e freqüência dos polimorfismos. Os polimorfismos 5'UTR TS, C677T e A1298C MTHFR não influenciam no padrão de metilação da região promotora dos genes CDH1, BRCA1 e hMLH1 em amostras de câncer de mama / Abstract: The breast cancer is the most frequent cancer in women equivalent to 22% of all cases. It were estimated more than 1.050.000 new cases of breast cancer in all the world in the year 2000. Epigenetic mechanisms like ativation and desativation of genes by hypomethylation and hipermethylation, respectivelly, of genes promoter regions are associated to the appearance of several types of cancer. Although the factors that result in aberrant methylation are not well known, the lack of folate has been associated to this mechanism in the development of cancers like cervical uterine, lungs, breast, colon and brain. In this research it was evaluated if the polymorphisms in genes of folate metabolism enzymes like the thymidilate syntase (TS) and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) influence the methylation pattern of the promoter of genes CDH1, BRCA1 and hMLH1 in samples the tissue of breast cancer. The methylation was evaluated through the MS-PCR and the polymorphisms through PCR and PCR-RFLP. We observed no statistically significant associations (p<0.05, exact test of Fisher) of the patterns of methylation of genes when compared to stage, histologic grade, age and frequency of polymorphisms. The polymorphisms 5'UTR TS, C677T AND A1298C MTHFR did not influence in the pattern of methylation of the promoter region of genes CDH1, BRCA1 e hMLH1 in samples the tissue of breast cancer / Mestre

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T05:11:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_ElisangelaJacintode_D.pdf: 2724594 bytes, checksum: 0bdfcc4937fef94a58da6f31edd931de (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Fibrose Cística é uma alteração genética que cursa principalmente com manifestações pulmonares e pancreáticas. A correlação genótipo-fenótipo da fibrose cística é motivo de árduos estudos. Somente a correlação com a insuficiência pancreática foi encontrada. Percebeu-se, também, que o curso e a gravidade da manifestação pulmonar não estão correlacionados com o genótipo CFTR. A doença pulmonar pode ser influenciada por fatores ambientais e por fatores genéticos. Genes modificadores podem influenciar na gravidade do fenótipo dos fibrocísticos através de vários mecanismos. O objetivo desse projeto foi analisar alguns genes modificadores, MBL2, TGFB1 e CD14, e correlacionar com a gravidade do quadro pulmonar dos fibrocísticos. Verificar a presença dos alelos 'delta'F508 e a gravidade do quadro pulmonar nos paciente fibrocísticos. A análise de polimorfismos no gene MBL2 e no gene TGF- 'beta'1 no códon 10 na posição + 869, foi realizada através da técnica da reação em cadeia da polimerase alelo específica. A genotipagem do polimorfismo C-159T, no gene CD14 foi realizada através da reação em cadeia da polimerase e digestão enzimática. Em nossa casuística, os polimorfismos do gene MBL2 não foram associados com a gravidade do quadro pulmonar em pacientes fibrocísticos. Com relação ao polimorfismo T869C no gene TGFB1, encontramos apenas associação do heterozigoto TC com quadro pulmonar leve (P=0,04). Para o polimorfismo C-159T no gene CD14, obtivemos um predomínio de pacientes com o genótipo TT (P=0,0009), mas não houve discriminação com relação à gravidade do quadro pulmonar. Com isso concluímos que houve uma associação entre o genótipo TC do polimorfismo T869C (TGF-'beta'1) e o quadro pulmonar leve nos fibrocísticos. Com relação ao gene CD14, o genótipo TT parece ser um fator de risco para o quadro pulmonar, mas não um fator modulador da gravidade. Em nossa casuística, não existiu associação entre pacientes homozigotos para a mutação 'delta'F508 e a gravidade do quadro pulmonar / Abstract: Cystic fibrosis is a genetic alteration characterized mainly by pancreatic and pulmonary manifestations. The genotype-phenotype correlation in cystic fibrosis has been the subject of arduous studies. A correlation between cystic fibrosis and pancreatic insufficiency, as well as to the fact that the occurrence and severity of pulmonary manifestations are not correlated with CFTR genotype, has been observed. Pulmonary illness can be influenced by environmental and genetic factors. Modifier genes can influence the phenotype severity of patients with cystic fibrosis through some mechanisms. The objective of this study was to analyze some modifier genes, such as MBL2, TGFB1 and CD14, and to correlate them with the gravity of the pulmonary picture of patients with cystic fibrosis and to also verify the presence of the alleles 'delta'F508 and the gravity of the pulmonary picture in these patients. The analysis of MBL2 and TGF-'beta'1 gene polymorphisms at codon 10, in the position + 869, was carried out using the technique of allele-specific polymerase chain reaction. The genotyping of the CD14/-159 polymorphism was performed by polymerase chain reaction and enzymatic digestion. In our casuistic, the polymorphism of the MBL2 gene was not associated with the gravity of the pulmonary picture in patients with cystic fibrosis. Regarding the T869C polymorphism in the TGFB1 gene, we found only an association of heterozygote TC with a mild pulmonary picture (P=0,04). In the C-159T polymorphism of the CD14 gene, we observed an accumulation of patients with genotype TT (P=0,0009), but did not have a discrimination regarding the gravity of the pulmonary picture. Therefore we concluded that there was an association between the genotype TC of the T869C polymorphism (TGF-'beta'1) and the mild pulmonary picture in the patients with cystic fibrosis. Regarding the CD14 gene, the TT genotype seems to be a risk factor for the pulmonary picture, but not a gravity modulating factor. In our casuistic, we found no association between 'delta'F508 homozygote patients for the mutation and the gravity of the pulmonary picture / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria de Fatima Sonati / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T10:57:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wobeto_VaniaPerettideAlbuquerque_M.pdf: 1559837 bytes, checksum: 9718fec2e739bfa4edba42baf4596e8f (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A haptoglobina (Hp) é uma proteína de fase aguda que possui propriedades antioxidantes e imunomodulatórias. Três principais genótipos/fenótipos (Hp1-1, Hp2-1, Hp2-2) demonstram eficiências distintas em suas atividades e estão associados com a suscetibilidade e evolução de várias doenças, inclusive o diabetes mellitus (DM). Alguns estudos sugerem que o polimorfismo da Hp pode influenciar o desenvolvimento da retinopatia diabética (RD), uma importante complicação microvascular desta doença. Com o objetivo de investigar essa associação em uma população brasileira, nós determinamos os genótipos da Hp em 317 pacientes diabéticos com no mínimo 10 anos de duração da doença. Os pacientes foram classificados em diabéticos do tipo 1 (DM-1) e do tipo 2 (DM-2), com e sem RD. As freqüências genotípicas dos diferentes grupos de pacientes e de um grupo controle consistindo de 142 indivíduos saudáveis, previamente estudado, foram comparadas. Nenhuma diferença significativa foi observada entre os três genótipos da Hp. Níveis de hemoglobina glicosilada (HbA1c), pressão arterial sistêmica sistólica (PAS), pressão arterial sistêmica diastólica (PAD) e duração do diabetes, considerados potenciais fatores de risco para o DM, foram também comparados. Novamente, nenhuma diferença significativa foi observada entre os genótipos. Assim nós concluímos que o polimorfismo da Hp não está associado com a presença da RD na população brasileira aqui estudada / Abstract: Haptoglobin (Hp) is an acute phase protein with antioxidant and immunomodulatory properties. Three main genotypes/phenotypes (Hp1-1, Hp2-1, Hp2-2) show distinct efficiencies in these activities and have been associated with susceptibility and outcome in several diseases, including diabetes mellitus (DM). It has been suggested that Hp polymorphism may influence the development of retinopathy, an important microvascular complication in DM. In order to investigate this association in a Brazilian population, we determined the Hp genotypes of 317 diabetic patients with at least 10 years of disease. The patients were classified as DM-type 1 and DM-type 2, with and without diabetic retinopathy (DR). The Hp genotype frequencies of the different patient groups and of a control group consisting of 142 healthy individuals who had previously been studied were compared. No significant differences were observed for the three Hp genotypes. Hemoglobin A1c levels, systolic blood pressure (SBP), diastolic blood pressure (DBP) and duration of diabetes, which are potential risk factors for DR, were also compared. Again no significant differences were observed for the three Hp genotypes. Thus, we conclude that this polymorphism is not associated with the presence of DR in the Brazilian population studied here / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

A agenesia dentária é a falha do desenvolvimento do germe dentário causando a ausência definitiva do dente. Constitui–se na anomalia dentária mais comum, afetando até um quarto da população em geral. A principal causa está relacionada com a função anormal de genes específicos que desempenham um papel chave durante a odontogênese, especialmente o MSX1 e o PAX9. Apesar da alta frequência dessa anomalia, apenas algumas mutações no MSX1 e no PAX9 foram associadas com a agenesia não–sindrômica até o momento. Uma vez que um número maior de indivíduos afetados é esperado nos próximos anos, uma análise mais profunda dos defeitos genéticos que levam à agenesia torna–se fundamental. O objetivo desta pesquisa foi estudar seis famílias segregando oligodontia/hipodontia não–sindrômica, além de investigar a presença de mutações nos genes MSX1 e PAX9 com a finalidade de associar fenótipo e genótipo. As famílias, que apresentam mais de um integrante com agenesia, foram selecionadas a partir de uma clínica particular. Amostras de células epiteliais bucais foram coletadas de todos os indivíduos por meio de escovas citológicas. O DNA foi isolado, amplificado e sequenciado. Todas as sequências foram comparadas com as existentes no GenBank. A homologia das sequências mutantes também foi comparada utilizando–se o software online BLAST. Os genes MSX1 e PAX9 de dez indivíduos controle não afetados e sem grau de parentesco também foram sequenciados. Foi identificada uma nova mutação missense no exon 2 próximo ao final do domínio pareado do PAX9 em três famílias. A mutação heterozigótica C503G resulta em uma troca de aminoácido de alanina para glicina no resíduo 168 (Ala168Gly), o qual é invariavelmente conservado entre várias espécies. A mudança alanina–glicina pode determinar uma alteração da estrutura proteica devido às propriedades únicas de flexibilidade da glicina, levando à agenesia dentária. Tal mutação não encontra–se registrada em nenhum banco de dados conhecido ou na literatura sendo, portanto, inédita. As mutações intrônicas IVS2–109G>C, IVS2–54A>G e IVS2–41A>G também foram identificadas no PAX9. Essas variantes polimórficas podem estar envolvidas no fenótipo uma vez que um probando, o qual apresentou todas as três mutações intrônicas em homozigose, foi afetado com a mais severa forma de oligodontia dentro da amostra. A transição * 6C>T foi identificada no exon 2 do MSX1, em apenas uma família. Devido ao fato de estar localizada seis bases após o stop codon, essa mutação homozigótica pode dificultar/alterar o término da tradução contribuindo, assim, para o fenótipo. Novos estudos acerca da expressão gênica em um número maior de famílias afetadas irá aumentar o conhecimento sobre agenesia dentária. Tal entendimento permitirá alcançar melhores opções de tratamento e, talvez, uma ferramenta de diagnóstico precoce que, possivelmente, envolverá o exame de DNA baseado em variantes polimórficas. Todos esses dados podem auxiliar a clínica odontológica em um futuro próximo. / Universidade de Caxias do Sul / Tooth agenesis, the failure of development of tooth bud causing definitive absence of the tooth, is the most common dental anomaly affecting up to one quarter of the general population. The main cause is related to abnormal function of specific genes which play key roles during odontogenesis, particularly MSX1 and PAX9. Despite the high frequency of this anomaly, there are only a restricted number of mutations in MSX1 and PAX9 that have been associated with non–syndromic tooth agenesis so far. Since a greater number of affected subjects is expected over the coming years, a deeper analysis of the gene networks underlying tooth agenesis is critical. The aim of this research was to investigate six families segregating non–syndromic oligodontia/hypodontia as well as to screen for mutations in their MSX1 and PAX9 genes, attempting to associate phenotype and genotype. Families were selected from a private office. They should present more than one relative affected with agenesis. All subjects had a sample of buccal epithelial cells collected with cytology brushes. DNA was isolated, amplificated and sequenced. All sequences were compared to those in GenBank. Homology of the mutant sequences was also compared using BLAST online software. MSX1 and PAX9 genes from ten unrelated unaffected control subjects were also sequenced. A novel missense mutation lying in the exon 2 close to the end of the paired domain of PAX9 was identified in three families. Heterozygous mutation C503G is expected to result in an alanine–to–glycine amino acid change in residue 168 (Ala168Gly), which is invariably conserved among several species. The alanine–glycine change might lead to protein structural alteration due to the unique flexibility properties of glycine, leading to tooth agenesis. This is a novel mutation since it is not registered neither in any known database nor in literature. Intronic mutations IVS2–109G>C, IVS2–54A>G and IVS2–41A>G were also identified in PAX9. These polymorphic variants may be involved in the phenotype as one proband, showing all three intronic mutations in homozygosis, was affected with the most severe oligodontia within the sample. Transition *6C>T lying in the exon 2 six base pairs after the stop codon was detected in MSX1 gene in one family. Due to its proximity to the stop codon, this homozygous mutation can hinder a regular translation termination thus contributing to the phenotype. Further studies with gene expression in larger affected families will increase knowledge of tooth agenesis. Such understanding will allow to achieve better treatment options and, perhaps, an early diagnosis tool which would possibly lie on the DNA examination based on polymorphic variants. All this data may assist dental practice in a near future.

A espennatogênese é andrógeno-dependente, porém muitos homens com problemas na espermatogênese têm níveis hormonais androgênicos normais. O mau funcionamento do receptor de andrógenos (Androgen Receptor- AR) é a possível causa deste problema. O AR é membro da família dos receptores nucleares e é codificado pelo Gene do Receptor de Andrógenos, que é de cópia única, localizado no cromossomo X e possui oito éxons. O éxon 1 contém um segmento com repetições CAG, que codifica poliglutamina. O trato glutamínico é polimórfico e varia de 1 O a 35 repetições na população normal. Alterações no segmento CAG estão envolvidas na etiologia de doenças neurodegenerativas (repetições CAG > 40) e câncer de próstata (< a 16 repetições). Mutações no Gene do AR estão correlacionadas com a síndrome de insensibilidade aos andrógenos, que varia desde a completa feminilização até homens inférteis com fenótipo normal. O objetivo do presente estudo constituiu em investigar a correlação entre o polimorfismo CAG e a prevalência de mutações nos éxons 5 e 7 e a alteração dos parâmetros seminais na população da Serra Gaúcha. O segmento CAG e a região codificadora dos éxons 5 e 7 foram amplificadas pela técnica de reação da polimerase em cadeia (PCR) e analisadas pela técnica de seqüenciamento automatizado. A média das repetições CAG do grupo de pacientes (n = 45) foi de 20,04±3,94 e a média do grupo controle (n = 45) foi 20,64±3,71. Não há significânc:ia estatística entre elas (p = O, 459). Verificamos correlação entre as repetições CAG e a morfologia seminal (Organização Mundial da Saúde) (p = O, 032; r = O, 349). Porém não se verificou associação com os demais parâmetros seminais: concentração (p =O, 134; r= O, 227), motilidade (p = 0,184; r= 0,202), morfologia (Kruger) (p = 0,213; r= 0,210). Não foram detectadas mutações nos éxons 5 e 7 nos dois grupos de estudo. Nosso estudo sugere que polimorfismo CAG e a presença de mutações nos éxons 5 e 7 não estão correlacionados com alterações seminais no grupo de estudo. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Spermatogenesis is androgen-dependent, but most men with impaired spermatogenisis have normal serum androgens leveis. Malfunction of androgen receptor (AR) may be a possible cause of this problem. AR is a member of the nuclear receptor family. It encodes a single copy gene in the X chromosome. The AR Gene is composed by eigth exons. The exon 1 contains a segment of CAG repeats, translated to polyglutamine. This glutamine repeat tract is polymorphic and its size varies from 10 to 35 in normal population. These changes have clinicai implications for human diseases: neurodegenerative disorders (CAG repeat > 40) and prostate cancer (CAG repeat < 16). Mutations in AR Gene cause a variety of defects related to androgen insensitivity, ranging from complete feminization to phenotypic males with infertilty. The aim of this study was to investigate the relationship between CAG repeat length and the prevalence of mutations in the exon:s 5 and 7 and impaired spermatogenesis in a Serra Gaucha population. The CAG repeat leng1th and the coding region of exons 5 and 7 was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by direct DNA sequencing. The mean CAG repeat length in the experimental group (n = 45) was 20.04±3.94 and in the control group (n = 45) was 20.64±3.71. No difference was found between patientes and controls in the mean values (p = 0.459). 1We found relationship between CAG repeat and morphology (World Health Organization) (p = 0.032; r = 0.349). However, the correlation was not found between CAG repeat and others seminais parameters: concentration (p = 0.134; r= 0.227), morphology (Kruger) (p = 0.213;. r= 0.210) and motility (p = 0.184; r= 0.202). No mutations were detected in the coding regions of exons 5 and 7 in both groups. Our study suggests that CAG polymorphism and mutations in the exons 5 and 7 are not likely to cause of spermatogenesis abnnormalities in our population.