Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / En el origen de la nefropatía diabética (ND) intervienen factores genéticos. La proteína nefrina es esencial para la constitución de la barrera de filtración glomerular, y cuando está alterada en su excreción es indicador de compromiso renal. Esta proteína está codificada en el gen NPHS1 ubicado en el cromosoma 19 humano. En este gen están descritos 82 SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) en su gen, 8 de los cuales se encuentran en zonas codificantes y sólo 3 de éstos son no sinónimos (E117K, K447E y N1077S). El objetivo principal de esta tesis es identificar SNPs del gen de nefrina en diabéticos chilenos tipo 1 (DM1) y tipo 2 (DM2) y relacionarlos con ND. Otro objetivo es pesquisar la presencia de nefrinuria y relacionarla con la presencia de SNPs en el gen de nefrina. Para realizar estos análisis seleccionamos al azar 67 pacientes DM1, 94 pacientes DM2 (distribuidos: 32 y 36 normoalbuminúricos, 22 y 36 microalbuminúricos, 13 y 28 macroalbuminúricos, respectivamente), 22 nefrópatas no diabéticos y 36 individuos sanos. A estos pacientes se les extrajo ADN de sangre periférica, se amplificaron 2 segmentos específicos del gen de nefrina mediante PCR (Polymerase Chain Reaction), los cuales contenían 2 de los 3 polimorfismos no sinónimos descritos para este gen (E117K y N1077S). Los amplificados se analizaron mediante SSCPPCR (Single-Strand Conformational Polymorphism) y se secuenciaron. También se tomaron muestras de orina de todos los individuos incorporados al estudio, las cuales fueron analizadas con anticuerpos anti-nefrina, para pesquisar la presencia de nefrinuria. Mediante SSCP-PCR se encontraron diferencias en la migración electroforética que sugirieron la presencia de polimorfismos para uno de los segmentos analizados, que contenía el polimorfismo SNP rs#4806213 (N1077S). Se detectó la presencia de una variante electroforética en el 26,8% de los pacientes DM1, 19,1% de los DM2, 18,2 % de los nefrópatas no diabéticos y 5,6% controles sanos (p<0,05 DM vs controles sanos y diferencias no significativas en DM1 y DM2, normo-, micro- o macroalbuminúricos). Mediante la secuenciación del ADN se detectó que en el 95% de los casos, la variación detectada corresponde al SNP rs#466452 ubicado en el intrón 24, que también se encuentra en la región amplificada por PCR, y sólo el 5% correspondía al SNP rs#4806213 (exón 24). En el análisis de nefrinuria no se logró detectar nefrina por medio de tres anticuerpos anti-nefrina distintos en los diversos grupos de pacientes. En conclusión, la técnica SSCP-PCR es sensible, confiable y de bajo costo, es un buen método de barrido o screening para detectar SNPs, aunque es importante ajustar en forma especifica electroforéticas en cada caso y verificar los polimorfismos mediante secuenciación. Los SNPs rs#3814995 y rs#4806213 del gen de nefrina se encuentran presentes en la población chilena, pero no tendrían asociación con diabetes ni ND. El SNP rs#466452 es más frecuente en diabéticos y la presencia de este polimorfismo intrónico determina la aparición de una secuencia tipo ESE (Exon Splicing Enhancer), cuya funcionalidad debe ser corroborada por medio de RT-PCR / Genetic factors are involved in the development of diabetic nephropathy (DN). Nephrin protein is essential of the glomerular filtration slit, and is an indicator of renal damage. Human nephrin is encoded by the NPHS1 gene located on chromosome 19. 82 SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) have been described in its gene, 8 of which are found in coding zones and only 3 of these are non-synonymous (E117K, K447E and N1077S). The main subject of this thesis is to identify nephrin non-synonymous SNPs in Chilean diabetic type 1 (DM1) and type 2 (DM2) patients and its relationship with DN. Another aim is to detect nephrinuria and relate it to the presence/frequency of these SNPs in the nephrin gene. In order to carry out these analysis, 67 DM1 patients, 94 DM2 patients (32 and 36 normoalbuminurics, 22 and 36 microalbuminurics, 13 and 28 macroalbuminurics, respectively), 22 non-diabetic nephropaths and 36 healthy individuals were selected. DNA was extracted from peripheral blood to amplify 2 specific segments of the nephrin gene by PCR (Polymerase Chain Reaction) which contained 2 of the 3 described nonsynonymous polymorphisms for this gene (E117K and N1077S). The PCR-fragments were analyzed by SSCP-PCR (Single-Strand Conformational Polymorphism-PCR) and sequenced. Also urine samples were taken from all individuals incorporated into the study and analyzed using polyclonal anti-nephrin antibodies to study the presence of nephrinuria. In the segment that contained SNP rs#4806213 (N1077S) polymorphism analyzed by SSCP-PCR, differences in electrophoretical migration were found, suggesting the presence of a polymorphism. This difference was found in 26.8% of DM1 patients, 19.1% of DM2, 18.2% in non-diabetic nephropaths and 5.6% in healthy controls (p<0.05 DM1 vs healthy individuals, differences were not significant between DM1 and DM2, normo-, micro- or macroalbuminurics). When the SSCP-PCR samples positive for a variation in electrophoretic migration were sequenced to verify results, two SNPs were detected: in 95% of the cases the detected variation corresponded to SNP rs#466452 located in intron 24, also found in the PCR amplified region, and only 5% corresponded to SNP rs#4806213 in exon 24. The use of three different antibodies in nephrinuria analyses was not able to detect nephrin, in the different group of patients. SSCP-PCR is a sensitive and reliable technique, and it is a good method for screening and detecting SNPs; however it is important to verify results by direct sequencing. SNP´s rs#3814995 and rs#4806213 are present in the Chilean population, but may have no association with diabetes or DN. SNP rs#466452 is more frequent in DM1 patients and the presence of this intronic polymorphism determines the appearance of an ESE site (Exon Splicing Enhancers), but the existence of a functional ESE site must be corroborated by RT-PCR

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-12-15T17:31:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4060682 bytes, checksum: 7c64e4cbfad1a08ae453dcc6c04507ad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T17:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4060682 bytes, checksum: 7c64e4cbfad1a08ae453dcc6c04507ad (MD5) Previous issue date: 2016-11-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer de mama (CM) é o segundo câncer mais comum entre as mulheres brasileiras, destacando-se entre os tipos de câncer com altas taxas de mortalidade. O CM é considerado uma doença multifatorial envolvendo fatores biológico- endócrinos, vida reprodutiva, comportamentais, estilo de vida, como a dieta, e os genéticos. O presente trabalho tem como objetivo investigar os hábitos alimentares, o perfil de ácidos graxos do tecido mamário e a ocorrência de polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) entre mulheres com o CM ou doença benigna da mama (DBM). Foi conduzido um estudo caso-controle, mascarado, de base hospitalar, com mulheres diagnosticadas com CM, DBM e controles, atendidas em um hospital público da cidade de Belo Horizonte, MG. Os dados foram coletados com a aplicação de questionário, e as amostras biológicas obtidas das pacientes que foram submetidas a cirurgia da mama por meio da coleta de sangue e biopsia do tecido mamário. Os resultados mostraram que não houve diferença estatística no consumo de ácidos graxos entre os grupos avaliados. A concentração do ácido láurico (P 0,001), acido mirístico (P = 0,036), ácido estearico (P = 0,031) e ácidos graxos saturados totais (AGST) (P=0,048) foram menores no tecido adiposo das mulheres com CM do que nas com DBM, enquanto o ácido palmitoleico (P = 0,022), ácido erúcico (P = 0,002), MUFAs totais) (P = 0.039) e a razão acido oleíco/ácido estearico (P = 0,015) foram maiores naquelas com CM do que nas com DBM. Por sua vez, não houve associação significativa entre o polimorfismo de Prol2Ala do Receptor Ativado por Proliferadores de Peroxissomos gama (PPARy ) (P=0,977), da Metilenotetrahidrofolato Redutase (M T HFR ) C677T (lC=0,956-1,003), da Metionina Sintetase (MT H ) A2756G (lC=0,335-1,028) e os grupos estudados. Quando testados se as combinações de alelos de risco poderiam gerar um efeito cumulativo no câncer de mama, o presente trabalho não encontrou associações significativas (p>0,05). As variáveis apontadas como fatores de risco para a ocorrência de DBM e CM nesta população estavam relacionadas a vida reprodutiva e hormonal da mulher, bem como a composição corporal e de estilo de vida. A participação das variáveis principais deste estudo e o CM e a DBM, continuam dependente de mais estudos na população brasileira, particularmente em relação aos polimorfismos. / Breast cancer (BC) is the second most common cancer among Brazilian women, highlighting among cancers with high mortality rates. BC is considered a multifactorial disease involving biological-endocrine factors, reproductive life, behavioral, lifestyle, diet, and genetic. The present study aims to investigate the eating habits, the fatty acid profile of the breast tissue and an occurrence of single nucleotide polymorphism (SNP) among women with BC or benign breast disease (BBD). A masked, hospital-based case-control study was conducted with women diagnosed with BC, BBD and controls, attended at a public hospital in the city of Belo Horizonte, MG. The data were collected with the application of a questionnaire, and the biological samples obtained from patients who underwent breast surgery through blood collection and breast tissue biopsy. The results showed that there was no statistical difference in the consumption of fatty acids between the evaluated groups. The concentration of lauric acid (P = 0.001), myristic acid (P = 0.036), stearic acid (P = 0.031) and total saturated fatty acids (SFAs) (P = 0.048) were lower in women with BC than in those with BBD, whereas palmitoleic acid (P = 0.022), erucic acid (P = 0.002), total MUFAs (P = 0.039) and oleic acid / stearic acid ratio (P = 0.015) were higher in those with BC than in BBD. On the other hand, there was no significant association between Pro12Ala polymorphism of the Receptor Activated by Peroxisome Proliferators gamma (PPARγ) (P = 0.977), Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR) C677T (CI = 0.956-1.003), Methionine Synthase (MTH) A2756G (CI = 0.335-1.028) and the groups studied. When tested whether combinations of risk alleles could generate a cumulative effect on breast cancer, our work found no significant associations. The variables identified as risk factors for the occurrence of DBM and CM in this population were related to women's reproductive and hormonal life, as well as body composition and lifestyle. The participation of the main variables of this study and CM and DBM, remain dependent on more studies in the Brazilian population, particularly in relation to the polymorphisms.

Orientador: Carlos Eduardo Steiner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T13:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_NilmaAlmeidade_M.pdf: 1405023 bytes, checksum: 12e3861c31dae0e759ab571d2d029476 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A retinopatia diabética é uma complicação freqüente no diabetes melito tipo 1, acometendo quase a totalidade de pacientes, em graus variados, após 20 anos de doença. A interferência de fatores ambientais como a manutenção de um estado hiperglicêmico na sua fisiopatologia já foi comprovada, mas ainda não foi esclarecido porque alguns pacientes desenvolvem essa complicação de maneira grave e precoce. Nos últimos anos, diversos estudos têm sugerido a participação de fatores genéticos nesse processo. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), potente indutor da angiogênese, foi associado à retinopatia diabética por alguns autores, pelo aumento da sua expressão, em virtude de mutações em sua região promotora. Neste trabalho foi realizada uma avaliação clínico-laboratorial, a análise do SNP rs833061 (- 460) e a pequisa da deleção de 18 pares de bases em -2549, ambas na região promotora do gene VEGF em 114 pacientes com diabetes melito tipo 1, de três centros de referência em diabetes no Brasil ¿ Hospital das Clínicas da Unicamp, Instituto Estadual de Diabetes e Endocrinologia Luiz Capriglione (RJ) e Santa Casa da Misericórdia de São Paulo (SP). Houve associação entre retinopatia diabética proliferativa e nefropatia, porém nenhum paciente apresentou a deleção em -2549, nem o alelo -460 C em homozigose. Tais resultados sugerem que esses polimorfismos na região promotora do gene VEGF não interferem na predisposição à retinopatia diabética na população estudada e que outros agentes ambientais e/ou genéticos devem ser significativos / Abstract: Diabetic retinopathy is a frequent complication of diabetes mellitus type 1 and almost all patients develop it after twenty years of disease. The causes of these complications are not clear, but several environmental factors such as chronic hyperglicaemia may act in this predisposition, however, it is not clearly understood why some individuals develop it in a severe and precocious way. The participation of genetic factors as the vascular endothelial growth factor (VEGF), a potent angiogenic mediator, was already confirmed for some authors. In this study we investigate whether polymorphisms in VEGF gene are associated with proliferative diabetic retinopathy. One hundred-fourteen patients with diabetes mellitus type 1 underwent a clinical and laboratorial study, as well as the analysis of two polymorphisms: rs833061 and the deletion of 18 bp at -2549 both on the promoter region of the VEGF gene. There was an association between nephropathy and retinopathy in our patients but none of the individuals presented the deletion at -2549 or the allele C in rs833061 in homozygous state. These results suggest that such polymorphisms in the promoter region of the VEGF gene do not interfere in the predisposition to diabetic retinopathy in our population and that other environmental and/or genetic factor may be more relevant / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T17:09:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CamilaOrescodos_D.pdf: 28263366 bytes, checksum: 0bb038ac0bb395e9aed9a7089336b2d0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: AHSP é uma proteína eritróide específica que apresenta afinidade de ligação com a-globinas, estabilizando essas moléculas e dessa forma, evitando a precipitação nos precursores eritróides e bloqueando danos celulares causados pela oxidação de cadeias globínicas. Camundongos portadores de P-talassemia com deleção do gene AHSP apresentaram maior precipitação de cadeias a-globinas nas hemácias e níveis acentuados de anemia. Estudos in vitro utilizando proteína recombinante demonstraram menor geração de espécies reativas de oxigênio quando a-globinas encontram-se estabilizadas pela AHSP. Com o objetivo de analisar a importância da proteína AHSP como modulador de gravidade clínica nas síndromes P-talassêmicas o gene AHSP foi analisado em amostras de DNA de pacientes com P-talassemia, atendidos pelo Hemocentro da Unicamp, e em amostras controles durante minha tese de mestrado. Durante estes estudos, três características do gene AHSP foram detectadas. Estas características do gene AHSP foram investigadas durante o desenvolvimento deste presente trabalho. Primeiro, um polimorfismo localizado no posição 12888 no gene AHSP, que leva a substituição de uma Asparagina na posição 75 por uma Isoleucina (N75I), foi identificado em uma paciente heterozigota para P-talassemia (Pj9/pA) com anemia grave e em processos transfusionais freqüentes. Outras duas famílias apresentaram o polimorfismo N75I. Entretanto, nestes casos a presença do polimorfismo no gene AHSP não se correlaciona claramente com a gravidade clínica. O sequênciamento de amostras de indivíduos controles de várias partes do mundo sugerirão uma baixa freqüência deste polimorfismo na população analisada. Estudos de indivíduos saudáveis positivos para o polimorfismo N75I demonstraram precipitação e oxidação de cadeias globínicas nas hemácias. Análises funcionais com proteína recombinante sugerem que a proteína AHSP N75I apresenta características de ligação com a-globínas normais, mas é menos eficiente em evitar geração de espécies reativas de oxigênio por estas cadeias globínicas. Estes efeitos, quando em conjunto com ?-talassemia poderiam resultar em anemia mais grave, demonstrando a proteína AHSP N75I como um modificador genético nas síndromes talassêmicas. Segundo, através de análises computacionais, nós identificamos uma estrutura secundária na região 3'-UTR do RNA mensageiro do gene AHSP. semelhante a um elemento responsivo a ferro (IRE), presente em todas as espécies que apresentam o gene AHSP. Várias evidências demonstraram que, mesmo não apresentando as características principais para a caracterização de um IRE, esta estrutura secundária do gene AHSP é reconhecido pelas proteínas reconhecedoras de IREs (IRPs) regulando a estabilidade da molécula de RNA mensageiro em resposta aos níveis de ferro: 1) Recuperação do RNA mensageiro do gene AHSP através da imunoprecipitacão das proteínas IRP1 e IRP2: 2) Níveis elevados de ferro desestabilizam o RNA mensageiro do gene AHSP: mutações neste IRE levam à desestabilização constitutiva do RNA mensageiro; 3) Níveis elevados de ferro desestabilizam o RNA mensageiro do gene AHSP em camundongos que apresentam excesso de ferro. Estes dados contribuem para o melhor entendimento de como IRE atípicos podem ainda ser funcionais e sugerem um mecanismo que poderia regular a estabilidade de cadeias globínicas de acordo com os níveis de ferro. Além disso, sugerem que o excesso de ferro, que ocorre em pacientes com (3-talassemia. podem ser determinante na gravidade da doença por, provavelmente, aumentar os níveis de a-globinas livres e precipitando nos precursores eritróides. E, em terceiro, através de busca de sítios de ligação de fatores de transcrição no gene AHSP, nós encontramos um elemento MARE localizado no final do segundo éxon. Estudos de imunoprecipitaçâo de cromatina demonstraram ligação dos fatores de transcrição Nrf2, Bachl e Maf ao elemento MARE do gene AHSP e regiões controle. Concluindo, estes resultados demonstraram pela primeira vez um polimorfismo no gene AHSP que produz uma proteína não completamente funcional que pode estar relacionada com gravidade à p-talassemia e, além disso, descrevem dois mecanismos inéditos da regulação da expressão do gene AHSP que podem ser importantes na regulação deste gene em outras doenças hematológicas e durante a eritropoiese / Abstract: Alpha-hemoglobin stabilizing protein (AHSP) is an erythroid-specific molecular chaperone that binds the cx-chains of hemoglobin, preventing their precipitation and deleterious effects. Loss of AHSP exacerbates a-globin precipitation and anemia in a murine model for p-thalassemia. In vitro, recombinant AHSP inhibits the production of reactive oxygen species (ROS) by a-globin. To further define the role of AHSP as a modifier of P- thalassemia, we analyzed AHSP sequence for mutations in a large population of (3- thalassemic and control subjects. From this genomic screening three interesting features of the AHSP gene were found. First, a single nucleotide change that converts asparagine 75 to leucine (N75I) was identified in a patient who was heterozygous for P-thalassemia (p39/(3A). She presented with an unusually severe anemia that required regular blood transfusion. Another two families were positive detected for the SNP N75I. but the presence of other known genetic modifiers for thalassemia in these families made hard to correlate clinical severity with AHSP. Of the unrelated control subjects tested just one (0.35%) contained the SNP N75I. Analysis of red blood cells from this subject revealed normal hemoglobin indices but a small number of Heinz bodies, suggesting a non-fully functional AHSP. Analysis of the biochemical properties of the recombinant mutant protein showed that the binding affinity of AHSP N75I for a- hemoglobin is normal. Importantly, compared to wild type AHSP, the N75I mutant protein exhibited significantly reduced capacity to inhibit ROS production by a-hemoglobin. Hence, AHSP N75I may be less effective at conferring protection from oxidative-mediated damage by free a-hemoglobin in erythrocytes. These effects, when coupled with P-thalassemia, could result in more severe anemia, implicating AHSP N75I as a potential genetic modifier. Second, by computational algorithms, we identified IRE-like stem-loop structures in AHSP mRNA of multiple species, yet the primary sequences deviate significantly from canonical IRE consensus sequences determined by studies of classical IREs, such as Transferring receptor and Ferritin. Several lines of evidence now show that the AHSP IRE binds IRPs to regulate mRNA stability in an iron-dependent fashion: 1) AHSP mRNA co-immunoprecipitates with IRPs. 2) AHSP mRNA is destabilized by iron in both erythroid and heterologous cells; disruption of the IRE renders the mRNA constitutively unstable. To study how iron regulates AHSP expression in vivo, we treated mice with iron dextran for 10 days and then examined AHSP mRNA in Terll9+ erythroid progenitors by RT-PCR. We found that short-term iron overload reduced AHSP mRNA levels. Our findings indicate that AHSP mRNA stability is regulated by iron via an atypical 3'-UTR IRE. These findings extend the potential repertoire for functional IREs that do not conform as the previously defined canonical consensus sequences. In addition, they provide a potential mechanism by which erythroid cells can regulate globin stability according to iron status. As such, iron overload, which occurs in patients with p thalassemia, might aggravate the disease by further elevating the levels of toxic free a globin. And third, by computation analysis of transcriptional sites, we found a potential MARE element located at the end of the second exon. Experiments of chromatin imunoprecipitation assay determined the binding of the transcript factor Nrf2, Bachl and Maf to the MARE element of AHSP gene, as well to the positive controls. Overall, these results demonstrated for the first time a polymorphism on AHSP gene that produce a non fully functional protein that might be correlated with severity in p-thalassemia and two new mechanisms that control the AHSP gene expression with potential implications in another hematological diseases besides thalassemias and closely connecting AHSP with erythropoiesis / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Wilson Nadruz Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sales_MariaLilian_M.pdf: 699325 bytes, checksum: c06952a4445a0175323db1f2dd969bed (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A subunidade p22phox é um componente essencial do complexo enzimático NADPH oxidase, o qual é considerado a principal fonte de produtos do stress oxidativo no sistema cardiovascular. O alelo -930G da p22phox tem sido associado com maior stress oxidativo mediado pela NADPH oxidase e hipertensão arterial. Nós recentemente demonstramos que a hipertrofia do ventrículo esquerdo é acompanhada de aumento na expressão miocárdica de p22phox em ratos submetidos à coarctação da aorta, sugerindo que esta proteína pode estar envolvida em lesões de órgão-alvo induzidas por hipertensão, mais especificamente na hipertrofia cardíaca. Foi pesquisada a prevalência deste polimorfismo em 160 indivíduos acompanhados no Ambulatório de Hipertensão Arterial Sistêmica da UNICAMP, e realizada a correlação desta variante com a massa e geometria ventricular esquerda, lesão renal e perfil metabólico destes pacientes. Não foram encontradas correlações significativas entre este polimorfismo e lesão renal ou estrutural em ventrículo esquerdo. Porém, nos indivíduos com genótipo GG foram encontrados níveis séricos de Triglicérides e de LDL colesterol significativamente mais baixos / Abstract: The p22phox subunit is an essential component of the NAD(P)H oxidase enzymatic complex, which is considered the major source of oxidative stress products in the cardiovascular system. The -930G allele of p22-phox has been associated with higher promoter activity, increased NAD(P)H oxidase-mediated oxidative stress and hypertension. NADPH oxidases have been proved important in the pathogenesis of renal damage in models of hypertension. We recently reported that left ventricular hypertrophy is accompanied by increased myocardial p22-phox expression in aortic-banded rats, suggesting that this protein might be involved in hypertensive cardiac hypertrophy. Thus, the aim of the present report was to investigate the role of p22phox -930A/G polymorphism on cardiac hypertrophy, renal damage and metabolic profile in hypertensive patients. We research the -930A/G polimorfism prevalence in 160 hypertensive subjects from Ambulatory Hypertension Unit - UNICAMP. The follow-up was between 2005 and 2006. The variant -930A/G has not relationship with alterations in ventricular structure and with renal damage markers. However, in GG subjects was associated with lower seric levels of Triglycerides and LDL-cholesterol This finding suggest a association between this variant GG genotype with a best metabolic profile in hypertensives / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Ricardo Della Coletta, Ana Lucia Carrinho Ayroza Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T13:40:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_HelenaraSalvatiBertolossi_D.pdf: 1239702 bytes, checksum: 4e6973ffe9eab3d15e1180f4b76d52d2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As fissuras lábio-palatinas não-sindrômicas (FL/PNS) representam as malformações faciais mais comuns em seres humanos e são causadas por uma combinação de fatores genéticos e ambientais sob um modelo de herança multifatorial. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil epidemiológico (características clínicas, demográficas e ambientais) dos indivíduos afetados por FL/PNS residentes na região oeste do estado do Paraná na busca por fatores de risco para o desenvolvimento das FL/PNS e também verificar a associação de polimorfismos em genes que codificam enzimas do sistema do reparo do DNA na susceptibilidade das FL/PNS. Para a primeira parte do estudo, foram coletadas 194 amostras de saliva de pacientes com FL/PNS e seus pais, sendo que os mesmos foram entrevistados com um questionário, contendo perguntas relacionadas aos pacientes com fissura e aos seus genitores, visando levantar dados referentes aos aspectos ambientais relacionados às fissuras. A segunda parte do estudo envolveu a análise dos polimorfismos rs1136410 no gene ADPRT, rs1052133 no gene OGG1, rs1800734 no gene MLH1, rs1130409 no gene APEX1, rs861539 no gene XRCC3, rs1801321 no gene RAD51, rs25487, rs25489, rs3213245 e rs1799782 no gene XRCC1 e rs13181 e rs1799793 no gene ERCC2 em 223 trios (pai, mãe e paciente com fissura) pelo teste de desequilíbrio de transmissão (TDT). As amostras utilizadas para a investigação de polimorfismo foram provenientes de 4 Centros diferentes de tratamento da FL/P, composta por 93 trios de Minas Gerais, 74 do Paraná, 34 da Bahia e 22 da Paraíba. Entre os pacientes avaliados, um predomínio de homens, leucodermas e afetados por fissuras lábio-palatinas (FLP) foi observado. Entre as alterações sistêmicas, as otorrinolaringológicas foram significantemente mais prevalentes em fissuras palatinas (FP) em comparação com as fissuras labiais (FL; p=0,013). Mais de 80% das mães dos pacientes com FL/PNS reportaram que não fizeram uso de suplementos vitamínicos durante o primeiro trimestre de gestação. Entre os 12 polimorfismos avaliados, rs3213245 no gene XRCC1 demonstrou uma significante associação com FL (p=0,03) e rs13181 do gene ERCC2 demonstrou tendência de associação com FLP (p=0,06). O haplótipo formado pelos polimorfismos rs25487, rs25489, rs321345 e rs1799782 no gene XRCC1 também foi significantemente associado as FLs (p=0,02). Os resultados deste estudo revelaram o perfil epidemiológico dos pacientes com FL/PNS atendidos no oeste do estado do Paraná e demonstram que os polimorfismos nos genes XRCC1 e ERCC2, que codificam enzimas associadas ao sistema e reparo do DNA, podem estar associados à suscetibilidade ao desenvolvimento das FL/PNS / Abstract: Nonsyndromic cleft lip and palate (NSCL/P) represents the most common facial malformation in humans, and they are caused by a combination of genetic and environmental factors under a multifactorial model of inheritance. The objective of this study was to characterize the epidemiologic profile (clinical, demographical and environmental features) of individuals affected by the NSCL/P in the west of the Paraná state searchingfor risk factors for the development of NSCL/P, and to verify the association of polymorphisms in genes that encode enzymes of the DNA repair system in the susceptibility of the NSCL/P. For the first part of the study, 194 patients with NSCL/P and their parents were interviewed with a questionnaire containing questions associated with the patients with cleft and their parents, addressing points of environmental aspects related to the clefts only in the western of the city of Parana. The genetic study involved the analysis of the polymorphisms rs1136410 in the gene ADPRT, rs1052133 in the gene OGG1, rs1800734 in the gene MLH1, rs1130409 in the gene APEX1, rs861539 in the gene XRCC3, rs1801321 in the gene RAD51, rs25487, rs25489, rs3213245 and rs1799782 in the gene XRCC1 and rs13181 and rs1799793 in the gene ERCC2 in 223 trios (father, mother and the patient with cleft) by the disequilibrium of transmission test (TDT). The sample to the investigation of the polymorphism were from four centers of FL/PNS treatment, composed by 93 trio from Minas Gerais, 74 from Parana, 34 from Bahia and 22 from Paraiba. A predominance of men, leucoderma and affected by cleft lip and palate (CLP) was observed. In relation to systemic alterations, the otorhinolaryngologics were significantly more prevalent in in patients with cleft palate clefts (CP) in comparison with patients affected by cleft lip (CL, p=0.013). More than 80% of the mothers of the NSCL/P patients reported that they did not use vitamin supplements during their first trimester of the pregnancy. Among the 12 polymorphisms, rs3213245 in XRCC1 demonstrated a significant association with the CL (p=0.03) and rs13181 inERCC2 demonstrated atendency of association with CLP (p=0.06). The haplotype formed by XRCC1 polymorphisms rs25487, rs25489, rs321345 and rs1799782 1 was significantly associated with CL (p=0.02). The results of this study show the epidemiologic profile of the patients with NSCL/P assisted in the west of Parana state and demonstrated that polymorphisms in the genes XRCC1 and ERCC2, which encode enzymes of the DNA repair system, may be associated with the susceptibility of the NSCL/P development / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: Laura Maria Mariscal Ottoboni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:15:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Novo_MariaTeresaMarques_D.pdf: 4388960 bytes, checksum: 4e9cc7ee25e2a967d6cd5387992b880d (MD5) Previous issue date: 1998 / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T16:24:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RinckJunior_JoseAugusto_D.pdf: 4925898 bytes, checksum: cf6e78a6e4ad84c7bbe48d34d75fdae6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: As glutationa S-transferases (GSTs) são enzimas detoxificantes. Os genes GSTM1 e GSTT1 são polimórficos e quando deletados perdem a expressão enzimática. As proteínas codificadas pelos genes XPD são responsáveis pelo reparo de lesões do DNA causadas pela luz solar. Polimorfismos nestes genes também podem codificar proteínas com funções comprometidas, em especial o Lys751Gln e o Asp312Asn do gene XPD. Ainda não é claro o papel dos polimorfismos destes genes no risco de melanoma cutâneo (MC) ou se estão associados com os aspectos clínicopatológicos. Foram incluídos 489 indivíduos (231 pacientes, 258 controles). A genotipagem foi realizada por reação em cadeia da polimerase e digestão enzimática. O risco de MC esteve aumentado em 2,00 (IC 95%: 1,05-3,81, P= 0,03) vezes em portadores do genótipo GSTT1 nulo + Asp/Asn + Asn/Asn do XPD Asp312Asn. O GSTT1 nulo elevou o risco de MC metastático em 3,75 (IC 95%: 1,48-9,44, P= 0,006) vezes e se combinado ao GSTM1 nulo em 7,33 (IC 95%: 2,09-25,68, P= 0,003) vezes. O alelo 312Asn elevou o risco de MC no tronco ou membros em 1,80 (IC 95%: 1,19-2,73, P= 0,005) vezes e do subtipo extensivo superficial ou nodular em 1,80 (IC 95%: 1,14-2,84, P= 0,01) vezes. Os genótipos Asn/Asn + Gln/Gln elevou o risco de MC de níveis I, II ou III de Clark em 2,46 (IC 95%: 1,12-5,37, P= 0,02) vezes. Os genótipos GSTM1 nulo + GSTT1 nulo (HR: 3,18; IC95%: 1,21-8,36, P= 0,01) e o genótipo GSTT1nulo + Gln/Gln (HR: 5,93; IC95%: 1,53-22,91, P= 0,01) estiveram associados a maior risco de morte. Concluímos que os referidos polimorfismos em combinações específicas podem aumentar a susceptibilidade ao MC e influenciar suas características clínicopatológicas e sobrevida / Abstract: The glutathione S-transferases (GST) are detoxifying enzymes; the GSTM1 and GSTT1 genes are polymorphic and when deleted lose enzyme expression. The XPD proteins are responsible for DNA damage repair caused by sunlight. Polymorphisms (SNPs) in XPD genes may also result proteins with impaired function, in particular Lys751Gln and Asp312Asn. However It¿s not entirely clear whether the SNPs of these genes influence the risk of cutaneous melanoma (CM) or are associated with clinic pathological aspects of this disease. In the present study 489 individuals were included (231 patients and 258 controls). Genotyping was performed by polymerase chain reaction and enzyme digestion. The risk of MC was increased 2.00-fold (95% CI: 1.05-3.81, P= 0.03) in carriers of the GSTT1 null combined with Asp/Asn + Asn/Asn genotype of XPD Asp312Asn. The GSTT1 null genotype and GSTT1 null + GSTM1 null genotype increased the risk of metastatic MC by 3.75-fold (95% CI: 1.48-9.44, P= 0.006) and 7.33-fold (95% CI: 2.09-25.68, P= 0.003), respectively. The allele 312Asn increased the risk of MC in the trunk or limbs in 1.80-fold (95% CI: 1.19-2.73, P= 0.005) and superficial spreading or nodular subtype in 1.80-fold (95%: 1.14-2.84, P= 0.01). The combined Asn/Asn + Gln/Gln genotype raised the risk of MC in Clark¿s level I, II or III in 2.46-fold (95% CI: 1.12-5.37, P= 0.02). The genotype GSTM1null + GSTT1 null (HR: 3.18; 95% CI: 1.21-8.36, P= 0.01) and GSTT1 null + Gln/Gln (HR: 5.93; 95% CI: 1.53-22.91, P= 0.01) were predictive of lower overall survival. In conclusion, polymorphisms in specific genes combinations may increase susceptibility to MC and influence their clinic pathological features and survival / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Paulo Dalgalarrondo, Gil Guerra Júnior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T16:35:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_Amiltondos_D.pdf: 1499196 bytes, checksum: ab7cdc89cfde467e953aef2343067e60 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Estrutura da tese: No presente estudo optou-se pelo "Formato Alternativo de Tese". Esta é composta por introdução geral, justificativas do estudo, objetivos/hipóteses, casuística/métodos, capítulos (um e dois) em formato de artigos científicos e considerações finais. A introdução geral versou sobre risperidona, efeitos adversos de seu uso em crianças e adolescentes e farmacogenética dos efeitos adversos. Nos capítulos um e dois encontram-se os artigos. A seguir, são apresentadas as principais informações que se referem à estruturação dos dois capítulos da tese. Objetivos: Avaliar a frequência de obesidade, hipertensão arterial (HAS), síndrome metabólica, resistência insulínica, dislipidemias e hiperprolactinemia em crianças e adolescentes em uso de risperidona para o tratamento de transtornos mentais e comportamentais e sua associação com determinados polimorfismos (SNP) dos genes HTR2C, DRD2, LEP, LEPR, CYP2D6, MC4R e SCARB2. Casuística/Métodos: Foram incluídos 120 pacientes em uso de risperidona (oito a 20 anos de idade) e 197 indivíduos saudáveis sem uso da medicação. Foram avaliados: idades cronológica e óssea, dose prescrita e dose por quilograma, tempo de uso da risperidona, sexo, cor da pele, uso de outros psicofármacos, valores de circunferência abdominal, IMC, pressão arterial, glicemia, insulina, índice HOMA-IR, colesterol, triglicérides, AST, ALT, leptina, prolactina e distribuições de SNP dos genes: HTR2C, DRD2, LEP, LEPR, CYP2D6, MC4R e SCARB2. Foram comparadas as distribuições alélicas dos SNP entre indivíduos em uso ou não de risperidona e, naqueles que usaram, entre os que apresentaram ou não efeitos metabólicos de risco cardiovascular e hiperprolactinemia. Resultados: Sobrepeso foi encontrado em 32 (26,7%) avaliações, obesidade em cinco (4,2%), HAS em oito (6,7%), síndrome metabólica em seis (5%), CA aumentada em 20 (16,7%) e hiperprolactinemia em 79 (65,8%), sem diferenças quanto a estar ou não em monoterapia. O HOMA-IR esteve elevado em 22 (18,3%) avaliações, colesterol total em 20 (16,7%) e triglicérides em 41 (34,2%). Houve correlações positivas entre: idade cronólogica e idade óssea com CA e PA; idade óssea com HOMA-IR; dose prescrita de risperidona com CA e PA sistólica. Foram encontradas correlações negativas entre: dose de risperidona ajustada por quilograma com concentrações de leptina; idade óssea com HDL colesterol; idade cronológica e idade óssea com AST; e de tempo de uso de risperidona com prolactinemia. Houve diferenças significativas na frequência dos SNP dos genes DRD2, HTR2C e LEP entre indivíduos em uso ou não de risperidona e, naqueles em uso, houve associações entre os SNP do gene HTR2C com frequência de hiperprolactinemia; dos genes LEP, HTR2C e CYP2D6 com z-escores de IMC; do gene CYP2D6 com PA, ALT e HOMA-IR; dos genes HTR2C e LEPR com níveis de leptina; dos genes MC4R e DRD2 com HOMA-IR; do gene HTR2C com CA; e do gene LEP com ALT. Conclusões: Polimorfismos dos genes HTR2C, DRD2, LEP, LEPR, CYP2D6 e MC4R, mas não do gene SCARB2, associaram-se à ocorrência de certos parâmetros metabólicos anormais. As diferenças na distribuição de alguns SNP estudados entre casos e controles sugere o possível envolvimento desses genes com grupos de sintomas psicopatológicos. Houve diversas correlações entre os parâmetros clínico-laboratoriais estudados / Abstract: Structure of the thesis: In the present study it was chosen the "Alternative Model of Thesis", which consisted of general introduction, justifications for the study, objectives/hypotheses, subjects/methods, chapters (one and two) in the format of scientific manuscripts and final considerations. The general introduction addressed aspects of risperidone, adverse effects of its use in children and adolescents and pharmacogenetics of its adverse effects. The chapters, one and two, are the articles. The main information regarding the structure of the two chapters is presented below. Objectives: To evaluate the frequency of obesity, hypertension, metabolic syndrome, insulin resistance, dyslipidemias and hyperprolactinemia in children and adolescents using risperidone for the treatment of mental and behavioral disorders and their association with certain polymorphisms (SNP) of the HTR2C, DRD2, LEP, LEPR, CYP2D6, MC4R and SCARB2 genes. Subjects/methods: There were included 120 patients in use of risperidone (eight-20 years old) and 197 healthy subjects without it. There were evaluated: chronologic and bone ages, total prescribed and weight-adjusted doses, period of risperidone use, sex, skin color, use of other psychotropic drugs, waist circumference (WC), BMI, blood pressure (BP), blood glucose, insulin, HOMA-IR index, cholesterol, triglycerides, AST, ALT, leptin, prolactin and some SNP of the HTR2C, DRD2, LEP, LEPR, CYP2D6, MC4R and SCARB2 genes. There were compared the allelic distributions of the SNP between individuals in use or not of risperidone and, among those who were in use of it, between patients who had and who did not have metabolic effects of cardiovascular risk and hyperprolactinemia. Results: Overweight was found in 32 (26.7%) evaluations, obesity in five (4.2%), hypertension in 8 (6.7%), metabolic syndrome in six (5%), increased WC in 20 (16.7%) and hyperprolactinemia in 79 (65.8%), with no differences regarding whether risperidone use was isolated or not. HOMA-IR was elevated in 22 (18.3%) samples, total cholesterol in 20 (16.7%) and triglycerides in 41 (34.2%). There were found positive correlations of: chronologic and bone ages with WC and BP; bone age with HOMA-IR; and prescribed dose of risperidone with WC and systolic BP. There were found negative correlations of: weight-adjusted dose of risperidone with concentrations of leptin; bone age with HDL-cholesterol; chronologic and bone ages with AST; and duration of treatment with concentration of prolactin. Regarding the studied polymorphisms, there were differences in the frequency of the SNP of DRD2, HTR2C and LEP genes between risperidone-exposed and not-exposed groups and, among those exposed, differences regarding SNP of: HTR2C gene and hyperprolactinemia; LEP, HTR2C e CYP2D6 genes with z-scores of BMI; CYP2D6 gene with BP, ALT and HOMA-IR; HTR2C and LEPR genes with leptin levels; MC4R and DRD2 genes with HOMA-IR; HTR2C gene with WC; and LEP gene with ALT. Conclusions: The prevalence of overweight/obesity, metabolic disorders and hyperprolactinemia was high, with several correlations of clinical and laboratory parameters. Differences in the distribution of some of the studied SNP between individuals in use or not of risperidone suggest the possible involvement of these genes with clusters of psychopathologic symptoms. There were several correlations among the clinical laboratory parameters / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Ciências

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T18:37:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pincinato_EderdeCarvalho_D.pdf: 3229024 bytes, checksum: a92cc669d0c70abe36aab0ff261da986 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A cisplatina (CDDP) associada à radioterapia (RT) é utilizada no tratamento de portadores de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP). A resposta ao tratamento bem como seus efeitos colaterais variam de indivíduo para indivíduo e tal fato pode ser explicado pela variabilidade genética no metabolismo da CDDP. O objetivo deste estudo foi o de verificar se habilidades herdadas na detoxificação da CDDP, mediadas pelas enzimas GSTM1, GSTT1 e GSTP1, alteram os efeitos terapêuticos, colaterais e a concentração de CDDP urinária em pacientes com CCECP. Foram avaliados, de forma prospectiva, 90 pacientes com CCECP tratados com CDDP associada à RT. Os genótipos dos polimorfismos GSTM1, GSTT1 e GSTP1 Ile105Val foram analisados por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex e PCR seguida de digestão enzimática, respectivamente, em DNA de sangue periférico. A resposta ao tratamento foi avaliada por exame clínico e tomografia computadorizada do pescoço. Os efeitos colaterais ao tratamento foram graduados por questionários e exames laboratoriais. As toxicidades renal e auditiva foram avaliadas por clearance de creatinina estimado (ClCrea), taxa de filtração glomerular com EDTA-51Cr (TFG) e audiometria tonal limiar. As concentrações urinárias da CDDP foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Pacientes com a deleção homozigótica do gene GSTT1 estiveram sob risco 0,09 (IC 95%: 0,02-0,41) vezes menor de ocorrência de vômitos, 0,22 (IC 95%: 0,05-0,89) vezes menor de ototoxicidade e menor redução de ClCrea (81,69 ± 21,40 para 84,13 ± 25,69 versus 93,16 ± 28,94 para 77,52 ± 23,96 mL/min/1,73m²) e de TFG (79,56 ± 20,68 para 69,94 ± 21,40 versus 84,38 ± 19,96 para 62,87 ± 20,72 mL/min/1,73m²) do que os portadores do gene. Já os pacientes com o alelo Val do polimorfismo GSTP1 Ile105Val estiveram sob risco 6,32 vezes maior de ocorrência de vômitos acentuados (IC 95%: 2,05-19,51), 3,35 vezes maior de ototoxicidade acentuada (IC 95%: 1,03-10,96) e maior redução de TFG (80,87 ± 21,73 para 66,97 ± 24,96 versus 85,35 ± 18,76 para 62,19 ± 17,40 mL/min/1,73m²) do que os portadores do genótipo Ile/Ile. Maior concentração urinária de CDDP foi observada em pacientes com a deleção homozigótica do gene GSTT1, quando comparados aos pacientes com a presença do gene (429,58 ± 116,24 versus 253,42 ± 95,20 ug CDDP/mg creatinina). Concluímos que estes polimorfismos desempenham papéis importantes na ocorrência de eventos adversos da terapêutica e excreção urinária do CDDP. Acreditamos que estes resultados possam constituir a base preliminar para o tratamento personalizado futuro de pacientes com CCECP / Abstract: Cisplatin (CDDP) associated with radiotherapy (RT) is used in treatment of patients with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). The response to treatment as well as its side effects vary among individuals, and this fact may be explaned by the genetic variability in metabolism of CDDP. The aim of this study was to access if inherited ability to cellular CDDP detoxification, mediated by GSTM1, GSTT1 and GSTP1 enzymes alters the therapeutic and side effects of CDDP and RT and urinary concentration of CDDP in HNSCC patients. We evaluated, prospectively, 90 consecutive HNSCC patients, who received CDDP associated RT as treatment. Genotypes of GSTM1, GSTT1 and GSTP1 Ile105Val polymorphisms were analyzed by multiplex polymerase chain reaction (PCR) and PCR followed by restriction enzyme digestion, respectively, in peripheral blood DNA. Treatment response was assessed by clinical examination and computed tomography of neck. Treatment side effects were ranked through questionnaire and laboratory tests. Renal and hearing toxicities were assessed using, respectively, estimated creatinine clearance and glomerular filtration 51Cr-EDTA and pure tone threshold audiometry. Urinary doses of CDDP were performed by high performance liquid chromatography (HPLC). Patients with the GSTT1-null genotype had a 0.09 times (95% CI:0.02-0.41) decreased risk for vomiting, 0.22 times (95% CI:0.05-0.89) decreased risk for ototoxicity, less creatinine clearance decreases (81.69 ± 21.40 to 84.13 ± 25.69 versus 93.16 ± 28.94 to 77.52 ± 23.96 mL/min/1.73m²) and glomerular filtration 51Cr-EDTA (79.56 ± 20.68 to 69.94 ± 21.40 versus 84.38 ± 19.96 to 62.87 ± 20.72 mL/min/1.73m²) than GSTT1-present genotype. Patients with Val allele of GSTP1 Ile105Val polymorphism had 6.32 higher risk presenting high grade vomiting (95% CI: 2.05-19.51), 3.35 higher risk to high grade ototoxicity (95% CI: 1.03-10.96) and higher glomerular filtration 51Cr-EDTA reduction (80.87 ± 21.73 to 66.97 ± 24.96 versus 85.35 ± 18.76 to 62.19 ± 17.40 mL/min/1.73m²) when compared to wild genotype. Higher CDDP urinary level was observed in patients with the GSTT1-null genotype, compared to patients with the gene (429.58 ± 116.24 versus 253.42 ± 95.20 ug CDDP/mg creatinine). We concluded that these genetic polymorphisms have important roles in complete response rate, in occurrence of side effects, and in urinary CDDP excretion. We believe that this data may constitute preliminary basis of future personalized treatment of HNSCC patients / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica