Se aplica la técnica del ADN polimorfico Amplificado al Azar (RAPD) se aplica al estudio molecular de Lama pacos (alpaca), esta metodología se propone debido a que las técnicas de microsatélites y ADN mitocondrial, que actualmente se utilizan, no tienen un uso práctico cuando se trata de analizar gran cantidad de muestras. Para la estandarización del RAPD se utilizo ADN genómico a partir de sangre total y cebadores de 10 nucleotidos siguiendo los protocolos estandarizados modificando básicamente la concentración de MgCl2 a 2.5 mM permitiendo aumentar la intensidad de las bandas y una mejor visualización. Se prosiguió con la identificación de cebadores informativos, de 23 cebadores fueron seleccionados 7 (OPF-05, OPI-04, OPB-03, OPI-18, OPB-11, OPA-18 y OPI-14) por generar numerosas bandas por muestras analizadas. Estos cebadores permitieron obtener perfiles diferentes entre alpacas híbridas y puras; en la muestra poblacional estudiadas no se encontraron alpacas que tuvieran un perfil de bandas similares a los presentados por los animales puros, esto explicaría el grado de hibridación que existe debido a un inadecuado cuidado en el cruce, esto trae como consecuencia, por ejemplo, una baja calidad en la producción de fibra por las alpacas y llamas híbridas disminuyendo el ingreso económico para las familias campesinas. En 8 alpacas los cebadores OPB-03 y OPA-18 mostraron bandas polimorficas de 650 pb y 1000 pb respectivamente, este polimorfismo nos podría indicar alguna mutación o variabilidad intraespecífica, ya que estos animales no presentan diferencias fenotípicas evidentes. / -- The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) is applied on the molecular study of Lama pacos (Alpaca), this methodology is proposed because the microsatellites and DNA mitochondrial techniques, which are used commonly, don't have a practical utility when is necessary to analyze great quantity of samples. Genomic DNA obtained from total blood and primers of 10 nucleotides were used to standardize the RAPD technique following the standardized protocols, and concentration of MgCl2 was modified at 2.5 mM which allowed an increase at the intensity and a better visualization of the bands. After the standardization, the identification of informative primers was realized, beginning with 23 primers, selecting only 7 (OPF 05, OPI 04, OPB 03, OPI 18, OPB 11, OPA 18 and OPI 14), because the presence of several bands for the analyzed samples. These primers let obtain different profiles between hybrid and pure alapacas; in the sample were not found alpacas with a similar bands profiles to those presented by the pure animals, this would explain the hybridization grade that exists due to an inadequate care in the crossing, this results in, for example a low quality in the fiber production from the hybrid alpacas and llamas, diminishing the economic entrance for the rural families. In 8 alpacas the primers OPB-03 and OPA-18 showed polymorphic bands of 650 pb and 1000 pb respectively, this polymorphism could indicate some mutation or intraespecific variability, since these animals don't present evident phenotypic differences. / Tesis

La pirazinamida (PZA) es una droga antituberculosa de primera línea, presenta gran actividad in vivo, sin embargo in vitro no es evidente a menos que el pH del medio sea ácido, lo que hace que la susceptibilidad sea difícil de determinar por métodos convencionales. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue evaluar la prueba molecular Polimorfismo Conformacional de la Hebra simple de ADN (SSCP) en cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis, así como comparar su desempeño con otras pruebas como son el BACTECÔ-460TB, el test de Wayne y el secuenciamiento. Se utilizó la prueba molecular del SSCP para la determinación de la susceptibilidad a PZA trabajando con 157 aislamientos clínicos de M. tuberculosis provenientes del Área de Tuberculosis del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Se aplica la técnica del ADN polimorfico Amplificado al Azar (RAPD) se aplica al estudio molecular de Lama pacos (alpaca), esta metodología se propone debido a que las técnicas de microsatélites y ADN mitocondrial, que actualmente se utilizan, no tienen un uso práctico cuando se trata de analizar gran cantidad de muestras. Para la estandarización del RAPD se utilizo ADN genómico a partir de sangre total y cebadores de 10 nucleotidos siguiendo los protocolos estandarizados modificando básicamente la concentración de MgCl2 a 2.5 mM permitiendo aumentar la intensidad de las bandas y una mejor visualización. Se prosiguió con la identificación de cebadores informativos, de 23 cebadores fueron seleccionados 7 (OPF-05, OPI-04, OPB-03, OPI-18, OPB-11, OPA-18 y OPI-14) por generar numerosas bandas por muestras analizadas. Estos cebadores permitieron obtener perfiles diferentes entre alpacas híbridas y puras; en la muestra poblacional estudiadas no se encontraron alpacas que tuvieran un perfil de bandas similares a los presentados por los animales puros, esto explicaría el grado de hibridación que existe debido a un inadecuado cuidado en el cruce, esto trae como consecuencia, por ejemplo, una baja calidad en la producción de fibra por las alpacas y llamas híbridas disminuyendo el ingreso económico para las familias campesinas. En 8 alpacas los cebadores OPB-03 y OPA-18 mostraron bandas polimorficas de 650 pb y 1000 pb respectivamente, este polimorfismo nos podría indicar alguna mutación o variabilidad intraespecífica, ya que estos animales no presentan diferencias fenotípicas evidentes. / The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) is applied on the molecular study of Lama pacos (Alpaca), this methodology is proposed because the microsatellites and DNA mitochondrial techniques, which are used commonly, don't have a practical utility when is necessary to analyze great quantity of samples. Genomic DNA obtained from total blood and primers of 10 nucleotides were used to standardize the RAPD technique following the standardized protocols, and concentration of MgCl2 was modified at 2.5 mM which allowed an increase at the intensity and a better visualization of the bands. After the standardization, the identification of informative primers was realized, beginning with 23 primers, selecting only 7 (OPF 05, OPI 04, OPB 03, OPI 18, OPB 11, OPA 18 and OPI 14), because the presence of several bands for the analyzed samples. These primers let obtain different profiles between hybrid and pure alapacas; in the sample were not found alpacas with a similar bands profiles to those presented by the pure animals, this would explain the hybridization grade that exists due to an inadequate care in the crossing, this results in, for example a low quality in the fiber production from the hybrid alpacas and llamas, diminishing the economic entrance for the rural families. In 8 alpacas the primers OPB-03 and OPA-18 showed polymorphic bands of 650 pb and 1000 pb respectively, this polymorphism could indicate some mutation or intraespecific variability, since these animals don't present evident phenotypic differences.

La enzima 5,10-metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) cataliza la conversión de la 5,10-metilentetrahidrofolato a 5-metiltetrahidrofolato, esta enzima es un intermediario entre el ciclo del folato y el ciclo de la remetilación del aminoácido homocisteina a metionina. Una mutación puntual C677T en el gen de esta enzima trae como consecuencia el cambio del aminoácido Ala por Val, lo cual conlleva a la formación de una enzima termolábil que finalmente se evidencia con un incremento en los niveles de homocisteina en sangre. Se ha documentado la relación de niveles altos de homocisteina y el incremento de la presión arterial y su posible relación a enfermedades coronarias e hipertensión. La determinación del polimorfismo C677T de la MTHFR, tiene índices muy variados en las distintas poblaciones y regiones del mundo. Estimar las frecuencias de este polimorfismo en nuestro país, permitiría al especialista determinar posibles poblaciones en riesgo a estas enfermedades asociadas, como preeclapmsia. Se extrajo muestras de sangre venosa de 92 gestantes del Instituto Materno Perinatal San Bartolomé Herrera (Lima-Perú). Se encontraron 32 gestantes CC (34.8%), 44 gestantes CT (47.8%), y por último 16 gestantes TT (17.2 %). Se encontró una frecuencia de 58.7 % y 41.3% para el alelo C y T respectivamente. Se estimó que la muestra estudiada se encuentra en Equilibrio de Hardy-Weinberg (X2 =0.0022) y que los valores de las frecuencias genotípicas y alélicas se encuentran de acorde a los publicados por otras investigaciones en nuestro país y la región sudamericana. Aun cuando la relación del alelo mutado T y el desarrollo de hipertensión no ha sido demostrada en nuestro país, el monitoreo y la incidencia del polimorfismo C677T y estudios tipo caso-control nos permitiría tener más evidencias sobre esta posible relación en nuestra población. / Tesis

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T18:12:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:09:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:09:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / CAPES / Asma e atopia são condições determinadas por fatores ambientais e genéticos Vários estudos de associação do genoma têm sido realizados para tentar entender os componentes genéticos de tais condições. Os genes IL33 e IL1RL1 são os mais replicados em estudos do tipo GWAS em todo o mundo. A citocina IL-33 e o seu receptor ligado à membrana (ST2L) ou sua forma solúvel (sST2), em conjunto são potentes moduladores de inflamação do tipo Th2. Quando ligada ao ST2L, IL-33 produzida por múltiplas células da resposta inata e adaptativa, induz citocinas pró-inflamatórias, tais como IL-4, IL-5 e IL-13, aumentando a resposta e inflamação Th2, principal característica da asma e alergias. Por outro lado, quando a IL-33 se liga ao sST2, neutraliza o seu efeito, impedindo sua ligação ao ST2L. Vários polimorfismos nestes genes têm sido associados com a asma e atopia. Assim, os fatores genéticos que afetam IL33 e IL1RL1 podem influenciar a susceptibilidade para asma e atopia. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar a influência de polimorfismos em IL33 e IL1RL1 na asma e atopia em uma população Latina. Estratégias diferentes foram usadas para, um estudo de coorte de asma leve e um estudo caso-controle de asma grave. O alelo A para rs1041973 em IL1RL1 na coorte SCAALA foi positivamente associado com IL-5 produção (OR 1,36, IC 95% 1,09-1,84, P=0,044) IgE específica (OR 1,40, IC 95% 1,07-1,84, P=0,013) e SPT (OR 1,48, IC 95% 1,08-2,03, P=0,014), ambos contra o ácaro B. tropicalis. Além disso, indivíduos atópicos com o genótipo AA de rs1041973 mostraram uma diminuição da produção de sST2 comparado com indivíduos com os genótipos AC e CC (P <0,05). O alelo G do SNP IL33 rs12551256 foi negativamente associado com asma (OR 0,71, IC 95% 0,53-0,94, P=0,017). Em relação ao estudo caso controle do ProAR, o alelo A do rs1420101 em IL1RL1, foi positivamente associado com asma atópica (OR 1,29, IC 95% 1,05-1,66, P=0,046) e negativamente com FEV1 (BETA -2,37, IC 95% -4,67; -0,07, P=0,043). Além disso, este mesmo alelo mostrou uma diferença estatisticamente significate com uma menor produção de sST2 plasmático em indivíduos controle (P <0,001). O alelo C do rs2381416 foi positivamente associado com SPT para A. flavus. (OR 7,2, IC 95% 1,05-3,37, P=0,033), epitélio de cão (OR 1,52, IC 95% 1,19-3,47, P=0,009) e gato (OR 1,52, IC 95% 1,04-2,63, P=0,048). Estes dados sugerem que os SNPs nos genes IL33 e IL1RL1 podem ter um impacto sobre o desenvolvimento de asma e alergia na população brasileira. No entanto, mais estudos devem ser realizados para elucidar o impacto funcional de tais polimorfismos aqui descritos no desenvolvimento de asma e atopia. / QUEIROZ, Gerson de Almeida. STUDY OF INFLUENCE OF IL33 AND IL1RL1 POLYMORPHISMS IN SEVERE ASTHMA. 93f. 2016. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia. Asthma and atopy are conditions determined by environmental and genetic factors. Several genome-wide association studies have been conducted to try to understand the genetic components of such conditions. The IL33 and IL1RL1 are the most replicated genes in GWAS studies worldwide. The cytokine IL-33 and its receptor, membrane bound (ST2L) or its soluble form (sST2) together are potent Th2-type inflammation modulators. When bound to ST2L, IL-33 produced by multiple cells of the innate and adaptive response, induce proinflammatory cytokines such as IL-4, IL-5 and IL-13, increasing the response and Th2 inflammation main feature of asthma and allergies. On the other hand, when IL-33 binds to sST2, neutralizes their effect by preventing its binding to ST2L. Several polymorphisms in these genes have been associated with asthma and atopy. Thus, genetic factors that affect IL33 and IL1RL1 may influence susceptibility to asthma and atopy. In this context, this study aimed to evaluate the influence of polymorphisms in IL33 and IL1RL1 in asthma and atopy in a Latino population. To verify that he have used to different strategies, a cohort study for mild asthma and a case-control study for severe asthma. The A allele for rs1041973 in IL1RL1 in SCAALA cohort was positively associated with IL-5 production (1.36 OR, 95% CI 1.09-1.84, p=0.044) specific IgE (OR 1.40, 95% CI 1.07-1.84, p=0.013) and SPT (OR 1.48, 1.08-2.03 95% CI, p=0.014), both against B. tropicalis mite. Furthermore, atopic individuals with the AA genotype of rs1041973 showed a decreased production of sST2 as compared to individuals with the AC and CC genotypes (P<0.05). The G allele of IL33 SNP was negatively associated with asthma (OR 0.71, 95% CI 0.53-0.94, p=0.017). Regarding the ProAR case control study the A allele of rs1420101 in IL1RL1 was positively associated with atopic asthma (OR 1.29, 95% CI 1.05-1.66, P=0.046) and negatively associated with FEV1 (BETA -2.37, 95% CI -4.67 ; -0.07, P=0.043). In addition, this same allele showed a statistically significant difference with a lower production of plasma sST2 in control subjects (P<0.001). The C allele of rs2381416 was positively associated with SPT to A. flavus. (OR 7.2, 95% CI 1.05 to 3.37, P = 0.033), dog (OR 1:52, 1:19 to 3:47 95%, P = 0.009) and cat epithelium (OR 1:52, 95% CI 1.04-2.63, P = 0.048). These data suggest that SNPs in IL33 and IL1RL1 genes may have an impact on the development of asthma and allergy in Brazilian population. However, further studies should be conducted to further elucidate the functional impact of such polymorphisms described herein in the development of asthma and atopy.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-07-31T18:57:58Z No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-08-01T20:30:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / CNPQ / A asma alérgica é uma morbidade de relevante impacto mundial que afeta milhões de indivíduos. É uma doença complexa que envolve a combinação de fatores ambientais e genéticos que são determinantes de seu desenvolvimento. Muitos genes têm sido reportados por estarem envolvidos com asma e atopia, dentre eles os genes DAD1 e OXA1L, presentes no cromossomo 14, que podem também estar envolvidos a essas condições. O gene DAD1 é considerado um regulador negativo da apoptose e OXA1L é reportado por seu envolvimento na biogênese e fosforilação oxidativa mitocondrial. Não existem dados na literatura que demonstrem variantes nesses genes associados com essas morbidades. Desta forma, sabendo-se da importância da apoptose e biogênese mitocondrial na reposta inflamatória da asma e alergia, polimorfismos nesses genes podem estar associados como fatores de risco ou proteção para seu desenvolvimento. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar se polimorfismos em DAD1 e OXA1L estão associados com asma e marcadores de atopia na população do SCAALA do inglês (Social Change Asthma and Allergy in Latin America) e qual o impacto funcional destas variantes, uma vez que estejam associadas com estes desfechos. O DNA de 1.307 indivíduos foram genotipados usando Illumina 2.5 Human Omni Bead chip. Foram realizadas análises de regressão logística a fim de avaliar a associação de variantes em DAD1 e OXA1L com asma e marcadores de alergia utilizando software PLINK 1.9 ajustados por sexo, idade, infecções helmínticas e marcadores de ancestralidade no modelo aditivo. O alelo G do SNP rs1681577 do DAD1 foi negativamente associado com asma (OR: 0.80; IC: 0.64 – 0.99; p: 0.039). Além disso, o alelo A do rs17119961 foi positivamente associado com teste cutâneo para P. americana (OR: 2.13; IC: 1.36 – 3.32; p: <0.001). O rs3811189 teve seu alelo C associado positivamente com produção espontânea de IL-13 (OR: 1.31; IC: 1.07 – 1.61; p: 0.008). Ademais, o SNP rs4981436 no OXA1L teve seu alelo C positivamente associado com asma (OR: 1.41; IC: 1.08 – 1.84; p: 0.012). Por outro lado o alelo G do SNP rs8572 foi positivamente associado com teste cutâneo para D. pteronyssinus (OR: 1.33; IC: 1.05 – 1.68; p: 0.017). O rs200470407 teve seu alelo C associado positivamente com produção espontânea de IL-13 (OR: 1.32; IC: 1.07 – 1.64; p: 0.012). Verificamos também um aumento da expressão do gene DAD1 em indivíduos asmáticos comparados aos controles. Assim sendo, polimorfismos em DAD1 e OXA1L podem influenciar a ocorrência de asma e atopia em uma população latina / Allergic asthma is a morbidity with significant worldwide impact that affects Millions of individuals. It is a complex disease that involves the combination of environmental and genetic factors both related to its occurrence. Many genes have been reported to be involved with asthma and atopy, and among them, DAD1 and OXA1L genes , located at chromosome 14 may also be involved in such conditions. The DAD1 gene is considered to be a negative regulator of apoptosis and OXA1L is reported for its involvement in mitochondrial biogenesis as well as its oxidative phosphorylation. There are no data in the literature that previously have already reported variants in such these genes with these morbidities. Thus, along with the importance of apoptosis and mitochondrial biogenesis in the inflammatory response of asthma and allergy, polymorphisms in these genes may be associated as risk or protective factors for their development. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether polymorphisms in DAD1 and OXA1L are associated with asthma and markers of atopy in population SCAALA (Social Change Asthma and Allergy in Latin America) and what is the functional role of these variants once associated with such outcomes. The DNA of 1,307 individuals was genotyped using the Illumina 2.5 Human Omni Bead chip. Logistic regression analyzes were performed to evaluate the association of variants in DAD1 and OXA1L with asthma and allergy markers using PLINK 1.9 software adjusted for sex, age, helminth infections and ancestral markers in the additive model. The G allele of the SNP rs1681577 of DAD1 was negatively associated with asthma (OR: 0.80; CI: 0.64 - 0.99; p: 0.039). In addition, the A allele of rs17119961 was positively associated with skin prick test for P. americana (OR: 2.13; CI: 1.36 - 3.32; p: <0.001). The C allele for rs3811189 was positively associated with spontaneous IL-13 production (OR: 1.31; CI: 1.07 - 1.61, p: 0.008). In addition, the C allele of SNP rs4981436 in OXA1L was positively associated with asthma (OR: 1.41; CI: 1.08 - 1.84; p: 0.012). On the other hand, the G allele of the SNP rs8572 was positively associated with the skin prick test for D. pteronyssinus (OR: 1.33; CI: 1.05 - 1.68; p: 0.017). The C allele of rs200470407 was positively associated with spontaneous production of IL-13 (OR: 1.32; CI: 1.07 - 1.64; p: 0.012). In addition, DAD1 gene expression was up-regulated in asthmatic individuals compared to controls. Thus, polymorphisms in DAD1 and OXA1L may be related to allergy and asthma in Latin America

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T17:37:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Elisabete Conceição.pdf: 567171 bytes, checksum: 1955730634dbe5b3fb43878595214d3b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T17:37:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Elisabete Conceição.pdf: 567171 bytes, checksum: 1955730634dbe5b3fb43878595214d3b (MD5) / FAPESB; CAPES / Introdução: O fato de apenas 10% das pessoas infectadas com M. tuberculosis desenvolverem a doença clínica sugere que fatores genéticos podem desempenhar um papel importante na patogênese da TB. Polimorfismos em genes de citocinas têm sido associados com susceptibilidade, gravidade e variação na resposta clínica em várias doenças, incluindo doenças infecciosas. Para combater a doença, a única vacina licenciada para uso contra a tuberculose é o Bacilo de Calmette-Guérin (BCG). A proteção induzida pela vacinação contra o M. tuberculosis é mediada pela geração de células T específicas e produção aumentada de IFN-γ. Objetivo: Avaliar a associação entre o polimorfismo de genes de citocinas e receptores em voluntários sadios revacinados com BCG ao perfil de resposta in vitro a antígenos micobacterianos. Metodologia: 25 voluntários com resultados negativos ao teste tuberculínico em dupla testagem (que fizeram parte de um estudo de revacinação com Bacilo de Calmette-Guérin, cepa Moreau), foram recrutados para o estudo. As citocinas IFN-γ, TNF, IL-10, IL-6 e IL-1β foram avaliadas no sobrenadante das culturas de sangue total estimuladas com antígenos do M. tuberculosis. Os polimorfismos de interesse IFNG +874T>A, IL10- 592C>A, IL1B-35C>T, TLR2 G753A (Arg753Gln) e TLR4 C399T (Thr399Ile) foram amplificadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) e a análise dos polimorfismos foram identificados por tamanho dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP) ou Amplificação pelo Sistema de Mutação Refratária (ARMS-PCR). Resultados: Não houve diferença significativa na produção das citocinas IFN-γ, IL-10, TNF, IL-6 e IL-1β antes ou após a revacinação com BCG entre os diferentes genótipos dos polimorfismos estudados. Discussão e Conclusão: No presente estudo, foi observado que o aumento da produção de IFN-γ (estudo de revacinação com Bacilo de Calmette-Guérin, cepa Moreau) após a revacinação de indivíduos saudáveis com BCG não foi influenciada por polimorfismos previamente associados com resistência e/ou susceptibilidade ao desenvolvimento da tuberculose em outras populações. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:49Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10892a.pdf: 1446856 bytes, checksum: b8584942c83d1ed625c0076b4f6f900e (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:49Z : No. of bitstreams: 2 Publico-10892a.pdf: 1446856 bytes, checksum: b8584942c83d1ed625c0076b4f6f900e (MD5) Publico-10892b.pdf: 1591232 bytes, checksum: 19cbbe483605beb743a5e89a4ee18045 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:49Z : No. of bitstreams: 3 Publico-10892a.pdf: 1446856 bytes, checksum: b8584942c83d1ed625c0076b4f6f900e (MD5) Publico-10892b.pdf: 1591232 bytes, checksum: 19cbbe483605beb743a5e89a4ee18045 (MD5) Publico-10892c.pdf: 1743672 bytes, checksum: 388b1349efb7e835d3d05a3575699591 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:50Z : No. of bitstreams: 4 Publico-10892a.pdf: 1446856 bytes, checksum: b8584942c83d1ed625c0076b4f6f900e (MD5) Publico-10892b.pdf: 1591232 bytes, checksum: 19cbbe483605beb743a5e89a4ee18045 (MD5) Publico-10892c.pdf: 1743672 bytes, checksum: 388b1349efb7e835d3d05a3575699591 (MD5) Publico-10892d.pdf: 1690185 bytes, checksum: 34b03df3cf5cbb70f29cd94d1a659d77 (MD5) / Objetivos: Determinar as freqüências dos principais polimorfismos KEL, KEL*1,2, KEL*3,4,21 e KEL*6,7, e de dois novos alelos KEL, KEL*29 e KEL*30, em pacientes com hemoglobinopatias e doadores de sangue. Elucidar, empregando técnicas moleculares, casos raros envolvendo o sistema Kell. Casuística e métodos: As freqüências dos polimorfismos KEL*1,2, KEL*3,4,21 e KEL*6,7 foram avaliadas por PCR-RFLP em 108 pacientes portadores de hemoglobinopatias e 205 doadores de sangue. As freqüências dos polimorfismos KEL*29,KEL*29- (1988G>A) e KEL*30,KEL*30- (1033G>A) foram estudadas por PCR-RFLP em 68 pacientes com hemoglobinopatias e 300 doadores. Afim de elucidar um caso raro de aloimunização anti-KEL7 em uma gestante com antecedente de perdas fetais, estudamos por PCRRFLP os principais polimorfismos KEL nos 6 indivíduos da família. Empregando a técnica de seqüenciamento, pesquisamos as bases moleculares responsáveis pelo fenótipo KELnull em 2 pacientes e a mutação responsável pelo padrão anômalo na genotipagem do polimorfismo KEL*3,4 por PCR-NlaIII-RFLP em 3 indivíduos. Resultados: O genótipo KEL*1/KEL*2 foi observado em 6,5% (7/108) dos pacientes com hemoglobinopatias e em 6,3% (13/205) dos doadores de sangue (p>0,999). O genótipo KEL*3/KEL*4 foi observado em apenas 1% (2/205) dos doadores de sangue (p=0,547). O genótipo KEL*6/KEL*7 foi detectado em 6,5% (7/108) dos pacientes com hemoglobinopatias e em 4,4% (9/205) dos doadores (p=0,430). Todos os 68 pacientes portadores de hemoglobinopatias e os 300 doadores de sangue foram genotipados como KEL*29/KEL*29 e KEL*30/KEL*30. A identificação do aloanticorpo anti-KEL7 na gestante foi auxiliada pelo estudo molecular KEL. A gestante apresentava o genótipo KEL*6/KEL*6, sua mãe e sua filha eram KEL*6/KEL*7, enquanto seu segundo parceiro e sua neta foram genotipados como KEL*7/KEL*7. O recém nascido apresentou o mesmo genótipo da mãe. A mutação C1042T (Q348X) foi detectada pela reação de seqüenciamento e confirmada pela técnica de PCR-Tsp45I-RFLP nas pacientes portadoras do fenótipo KELnull. A mutação IVS6-13C>T foi identificada pela reação de seqüenciamento nos indivíduos com o padrão anômalo na genotipagem KEL*3,4. Conclusões: Não foi observada diferença significativa nas freqüências dos polimorfismos KEL entre os pacientes brasileiros afro-descendentes com hemoglobinopatias e os doadores de sangue. A concordância na genotipagem KEL observada entre as populações de doadores e receptores de sangue sugere que os pacientes brasileiros politransfundidos apresentam menor risco de aloimunização Kell quando comparados aos dados reportados em estudos onde a população de doadores de sangue é predominantemente constituída por indivíduos de origem caucasiana. Em adição, nossos dados sugerem que a necessidade de transfusão de hemácias com fenotipagem expandida pode não ter o mesmo custo-benefício nos pacientes politransfundidos no Brasil. Nenhum alelo variante KEL*29- (1988G>A) ou KEL*30- (1033G>A) foi identificado entre os 736 alelos analisados. Nossos dados sugerem que os antígenos KEL29 e KEL30 têm pouco impacto clínico, uma vez que a aloimunização a estes antígenos é, provavelmente, um evento raro restrito a poucos casos envolvendo indivíduos com fenótipo KEL:-29 ou KEL:-30. Finalmente, o estudo molecular KEL possibilitou a elucidação do caso de aloimunização anti-KEL7 associado às mortes fetais intra-uterinas, a identificação das bases moleculares do fenótipo KELnull em dois indivíduos brasileiros e a detecção da mutação responsável pelo padrão anômalo na genotipagem KEL*3,4. / To evaluate the KEL polymorphisms in Brazilian patients with hemoglobinopathies and blood donors and to elucidate some rare cases implicating Kell blood group system. Subjects and methods: Employing the PCR-RFLP technique, we evaluated the KEL*1,2, KEL*3,4,21 and KEL*6,7 polymorphisms frequencies in 108 patients with hemoglobinopathies and 205 blood donors. We also studied the KEL*29,KEL*29- (1988G>A) and KEL*30,KEL*30- (1033G>A) polymorphisms frequencies in 68 patients with hemoglobinopathies and 300 blood donors. In adition, the KEL polymorphisms were evaluated in an Afro-descent Brazilian pregnant woman and her relatives to elucidate a rare case of anti-KEL7 alloimmunization associated to intrauterine deaths. To elucidate the molecular basis of KELnull phenotype in Brazilian patients and to identify the mutation responsible for the abnormal pattern observed in three different samples in KEL*3,4 genotyping by PCR-NlaIII-RFLP, KEL sequencing was performed. Results: The KEL*1/KEL*2 genotype was found in 6.5% (7/108) of patients with hemoglobinopathies and in 6.3% (13/205) of blood donors (p>0,999). The KEL*3/KEL*4 genotype was observed in only 1.0% (2/205) of blood donors (p=0,547). The KEL*6/KEL*7 genotype was found in 6.5% (7/108) of patients with hemoglobinopathies and in 4.4% (9/205) of blood donors (p=0,430). We also found 1 (0.5%) donor with KEL*6/KEL*6 genotype. There was no statistically significant difference between the frequencies of KEL*1/KEL*2, KEL*3/KEL*4 and KEL*6/KEL*7 genotypes seen in patients with hemoglobinopathies compared to those observed in blood donors. All tested subjects, 300 donors (100%) and 68 patients (100%), were homozygous for the wild type consensus nucleotides at the KEL*29 and KEL*30 positions. No variant allele 1988G>A KEL*29 or 1033G>A KEL*30 was identified among the 736 analyzed alleles. The pregnant woman (propositus) was KEL*6/KEL*6, her mother and her daughter were KEL*6/KEL*7 heterozygous, and her former partner was KEL*7/KEL*7. The newborn was also tested and presented the same KEL*6/KEL*6 genotype of his mother. The propositus and her available relatives were KEL*2,4/KEL*2,4 homozygous. In addition, the C1042T (Q348X) mutation was detected by KEL sequencing, and corroborated by the PCR-Tsp45I-RFLP technique, in Brazilian patients with KELnull phenotype. The IVS6-13C>T mutation was also detected by KEL sequencing in subjects with abnormal pattern in KEL*3,4 genotyping by PCR-NlaIIIRFLP. Conclusions: The observed concordant KEL genotyping donor-recipient population suggests that Brazilian patients are at lower risk for Kell alloimmunization than that reported by studies where the donor population is predominantly formed by white Caucasians. In addition, our data indicate that the requirement for extended antigen-matched RBC transfusion in multitransfused patients may not be cost-effective in Brazil. Moreover, our data suggest that the KEL29 and KEL30 antigens have little clinical impact, since the alloimmunization by these antigens is probably a very rare event, restricted to a few cases involving subjects with KEL:-29 or KEL:-30 phenotype. Finally, we also report a rare case of anti-KEL7 alloimmunization associated to intrauterine deaths in an Afro-descent Brazilian woman, as well as the molecular basis of KELnull phenotype in Brazilians and the mutation implicated in the abnormal pattern seen in KEL*3,4 genotyping were identified by molecular studies. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T19:42:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jean Sauve.pdf: 1000878 bytes, checksum: 23d1efdd1dd02ca5753a16ef0cc08d82 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T19:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jean Sauve.pdf: 1000878 bytes, checksum: 23d1efdd1dd02ca5753a16ef0cc08d82 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / O papilomavírus humano (HPV) é o principal agente etiológico de lesões malignas, a exemplo do câncer cervical e de suas lesões precursoras, as Neoplasias Intraepiteliais Cervicais (NICs). Investigamos se os polimorfismos de base única (SNPs) no gene da Beta-Defensina Humana 1 (DEFB1) poderiam estar associados à susceptibilidade à infecção e à progressão da lesão cervical provocadas por HPV de alto risco. Polimorfismos neste gene têm sido alvo de diversos estudos e revelaram ser de suma importância na susceptibilidade a diversas infecções. Neste estudo, os SNPs -52G/A, -44C/G e -20 G/A na região 5' UTR do gene DEFB1 foram analisados através de sequenciamento, em um grupo de 160 pacientes do sexo feminino HPV positivas e 71 indivíduos sadios. As análises estatísticas foram feitas utilizando o Teste exato de Fisher e o Teste do Qui-quadrado. Os resultados indicam que o alelo -44G e o haplótipo ACA podem estar relacionados com a susceptibilidade à infecção pelo HPV de alto risco. Os resultados não apontam diferenças significativas nas frequências alélicas e genotípicas dos outros polimorfismos entre pacientes infectados com HPV de alto risco e indivíduos sadios. Também não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas nas frequências alélicas e genotípicas nos pacientes HPV positivos quanto ao grau de lesão cervical.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T14:28:18Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego Arruda Falcão.pdf: 2643790 bytes, checksum: 44b65e220e924f485f965798c64679dc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T14:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego Arruda Falcão.pdf: 2643790 bytes, checksum: 44b65e220e924f485f965798c64679dc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq / A anemia falciforme (AF) é a anemia hemolítica mais comum no Brasil. É uma doença que se origina de uma mutação pontual e sua fisiopatologia é caracterizada pela polimerização da HbS, levando a formação de uma hemácia em forma de foice. Essa hemácia falcizada leva à hemólise e vaso-oclusão, que são responsáveis pelas principais manifestações clínicas da doença, como as úlceras de membros inferiores. As úlceras afetam consideravelmente a qualidade de vida dos pacientes com AF, e apesar de não apresentarem uma causa muito bem definida, variantes polimórficas de alguns genes, podem influenciar no seu desenvolvimento. Objetivo: Esclarecer se fatores genéticos como os haplótipos βs, a talassemia α, e polimorfismos nos genes eNOS, Klotho,TEK, TGF-β e BMP6 estão relacionados com o desenvolvimento das úlceras de membros inferiores na anemia falciforme em nossa população de pacientes acompanhadas na Fundação HEMOPE. Metodologia: A amostra foi constituída de 100 pacientes casos e 175 pacientes controles. Utilizamos como critérios de inclusão para os casos: pacientes portadores de anemia falciforme (HbSS) não relacionados, acompanhados no Hospital de Hematologia da Fundação Hemope (HEMOPE), Recife – PE com histórico atual ou prévio de úlcera de membros inferiores. O grupo de controles foi constituído de portadores de anemia falciforme acima de 18 anos que nunca apresentaram úlceras. Análise molecular foi feita por PCR-RFLP, gap PCR e PCR em tempo real. Resultados: O polimorfismo do gene TGFβ3 mostrou diferença estatística(p=0,027) quando comparamos os dois grupos estudados, mostrando que a homozigoze para esse polimorfismo, pode aumentar o risco de desenvolvimento de úlceras de membros inferiores. Não houve diferença estatística entre os outros marcadores moleculares. Conclusões: De todos os marcadores genéticos em nosso estudo, apenas o polimorfismo do gene TGF β3 apresentou influência reprodutível como modulador genéticos para a prevalência de úlceras de membros inferiores em nossa população de pacientes com AF.