A síndrome metabólica (SM) é um conjunto de alterações metabólicas caracterizadas por três de cinco fatores sendo estes; obesidade abdominal, resistência à insulina, hiperglicemia, dislipidemia e hipertensão. As alterações fisiopatológicas da SM são importantes fatores de risco para a doença cardiovascular que tem alta prevalência na maioria das populações. Estudos genéticos têm mostrado que polimorfismos em genes envolvidos em vias do metabolismo glicídico e lipídico estão relacionados com maior predisposição à SM, porém há poucos dados na nossa população. O objetivo deste projeto é estudar a relação entre polimorfismos nos genes LEP, FTO, APOA5, ADRB3, TCF7L2, ENPP1, CYP11B2 e PPARG e a SM. Foram avaliados parâmetros antropométricos, composição corporal, perfil metabólico e de adipocinas, em 167 indivíduos com SM e 262 sem SM, 321 mulheres e 108 homens, e idade entre 30 e 70 anos. Amostras de sangue periférico foram utilizadas para extração de DNA e determinações de perfil lipídico, glicêmico e de adipocinas. Os polimorfismos FTO (rs1421085 T>C, rs1558902 T>A, rs17817449 T>G, rs8050136 C>A, rs9939609 T>A e rs9930506 A>G), LEP rs7799039 G>A, APOA5 rs662799 T>C, ADRB3 rs4994 T>C, TCF7L2 rs7903146 C>T, ENPP1 rs1044498 A>C, CYP11B2 rs1799998 A>G e PPARG rs2972162 C>T foram analisados por PCR em tempo real. As frequências gênicas e alélicas dos polimorfismos estudados foram similares entre os grupos com e sem SM (p>0,05). O haplótipo FTO TTTCAG foi mais frequente no grupo SM (4,2%) do que sem SM (<1,0%, p=0,003), sugerindo que os portadores deste haplótipo tem maior risco de desenvolver síndrome metabólica. Maiores valores de índice de massa corporal (IMC), circunferência abdominal (CA) ou razão cintura-quadril (RCQ) foram observadas nos portadores dos polimorfismos FTO rs1481085 (alelo C), FTO rs1558902 (alelo A), FTO rs17817449 (alelo G), FTO rs8050136 (alelo A), FTO rs9939609 (alelo A), LEP rs7799019 (alelo A), TCF7L2 rs7903146 (alelo C) em comparação com os portadores de genótipos ancestrais (p<0,05), principalmente no grupo SM. Além disso, o polimorfismo FTO rs9930506 (alelo G) foi relacionado com maior teor de gordura corporal (p=0,040), no grupo SM. O SNP CYP11B2 rs1799998 (alelo G) foi relacionado com maior concentração sérica de LDL colesterol e menor concentração de apoAI (p<0,05), grupo SM. Enquanto que a variante ENPP1 rs1044498 (alelo C) foi associada com menor trigliceridemia (p=0,024), no grupo sem SM. Portadores do alelo A do SNP LEP rs7799019 tiveram maior insulinemia e maiores valores de HOMA-&#946; e HOMA-IR que os portadores do genótipo GG (p<0,05), em ambos os grupos, sugerindo a relação desta variante com resistência a insulina. Menores concentrações de leptina foram observadas nos portadores dos SNPs LEP rs7799019 (alelo A) (p=0,031) e ENPP1 rs1044498 (alelo C) (p=0,021) grupo SM; e FTO rs9939609 (alelo A) (p=0,047) no grupo sem SM. A variante FTO rs9930506 (alelo G) foi relacionada com maior adiponectinemia (p<0,05), no grupo SM. Enquanto o SNP ENPP1 rs1044498 (alelo C) foi relacionado com menor concentração sérica de adiponectina nos grupos com (p=0,010) e sem (p=0,006) SM. Em síntese, polimorfismos FTO, LEP e TCF7L2 tem importante papel na adiposidade associada com a síndrome metabólica, em nossa população, e junto com as variantes CYP11B2 ENPP1 contribuem para a variabilidade do perfil metabólico e de adipocinas principalmente em indivíduos com SM. / Metabolic syndrome (MS) is a group of metabolic disorders characterized by three of five factors, which are: abdominal obesity, insulin resistance, hyperglycemia, dyslipidemia and hypertension. The pathophysiological changes of MS are important risk factors for cardiovascular disease that has a high prevalence in most populations. Genetic studies have shown that polymorphisms in genes involved in pathways of glucose and lipid metabolism are associated with increased predisposition to MS, but there are few data on our population. The objective of this project is to study the relationship between polymorphisms in LEP, FTO, APOA5, ADRB3, TCF7L2, ENPP1, PPARG and CYP11B2 and the SM. We evaluated anthropometric parameters, body composition, metabolic profile and adipokines in 167 individuals with MS and 262 without MS, 321 women and 108 men, aged between 30 and 70 years. Peripheral blood samples were used for DNA extraction and determination of lipid profile, glycemic and adipokines. The polymorphisms FTO (rs1421085 T>C rs1558902 T>A rs17817449 T>G rs8050136 C>A rs9939609 T>A and rs9930506 A>G), LEP rs7799039 G>A APOA5 rs662799 T>C ADRB3 rs4994 T>C TCF7L2 rs7903146 C>T, ENPP1 rs1044498 A>C CYP11B2 rs1799998 A>G and PPARG rs2972162C G>T were analyzed by real-time PCR. Genic and allelic frequencies of polymorphisms were similar between the groups with and without MS (p> 0.05). The FTO TTTCAG haplotype was more frequent in the SM group (4.2%) than without MS (<1.0%, p = 0.003), suggesting that carriers of this haplotype have higher risk of developing metabolic syndrome. Higher values of body mass index (BMI), waist circumference (WC) or waist-hip ratio (WHR) were observed in carriers of the FTO rs1481085 polymorphism (C allele), FTO rs1558902 (allele A), FTO rs17817449 (G allele), FTO rs8050136 (allele A), FTO rs9939609 (allele A), LEP rs7799019 (allele A), TCF7L2 rs7903146 (C allele) compared with those with ancestral genotypes (p <0.05), especially in the SM group. In addition, FTO rs9930506 polymorphism (G allele) was associated with higher fat body mass (p = 0.040) in MS group. CYP11B2 SNP rs1799998 (G allele) was associated with increased serum concentration of LDL cholesterol and apoAI lower concentration (p <0.05) SM group. While the ENPP1 variant rs1044498 (C allele) was associated with lower plasma triglycerides (p = 0.024) in the group without MS. Carriers of the A allele of SNP rs7799019 LEP had higher insulin and higher HOMA-&#946; and HOMA-IR than carriers of the GG genotype (p <0.05) in both groups, suggesting the relationship of this variant with insulin resistance. Lower concentrations of leptin were observed in carriers of the LEP SNPs rs7799019 (allele A) (p = 0.031) and ENPP1 rs1044498 (allele C) (p = 0.021) SM group, and FTO rs9939609 (allele A) (p = 0.047) in the group without MS. The variant FTO rs9930506 (G allele) was associated with higher adiponectinemia (p <0.05) in group SM. While the ENPP1 SNPs rs1044498 (C allele) was associated with lower serum concentration of adiponectin in groups with (p = 0.010) and without (p = 0.006) MS. In summary, polymorphisms FTO, TCF7L2 and LEP play an important role in adiposity associated with metabolic syndrome in our population, and along with the CYP11B2 ENPP1 variants contribute to the variability of the metabolic profile of adipokines, especially in individuals with MS.

Os tumores extra-axias do sistema nervoso são de localização extra-cerebral e na maioria das vezes benignos; meningiomas, schwanomas e metástases fazem parte deste grupo. O aparecimento de um tumor ocorre a partir do acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas nas células. Para entender o mecanismo molecular da progressão tumoral e a formação de metástases é indispensável identificar os genes que acumulam essas alterações. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo analisar o perfil de metilação dos genes TP16, TP53, DAL-1, GSTP-1, MEN-1, NDRG2 e das DNA metiltransferases 3A, 3B e 3L e sua associação com os tumores extra-axiais e ainda, avaliar, através de um estudo caso-controle, a influência dos SNPs TP53 Pro47Ser e Arg72Pro, EGF + 61, GSTP-1 Ile105Val e WRN Cys1367Arg no desenvolvimento e prognóstico desses tumores. A técnica utilizada para a análise de hipermetilação foi a MSP, e através dela observamos que a atividade das DNMTs não está associada à metilação dos tumores extra-axiais e ainda, os perfis de metilação das DNMTs de novo não estão associados com alterações no padrão de metilação dos genes TP16, TP53, DAL-1, GSTP-1, MEN- 1 e NDRG2. Observamos que a metilação do gene TP53 está associada principalmente aos tumores de maior grau de malignidade, a uma deficiência na resposta a tratamentos e, conseqüentemente, a um maior número de óbitos. A metilação do gene TP16 está envolvida mais freqüentemente na formação de schwanomas e a de NDRG2 na progressão dos meningiomas. A análise de polimorfismos foi realizada através da técnica de PCR-RFLP e observamos diferenças nas distribuições genotípicas entre pacientes e controles nos SNPs TP53 Pro47Ser e Arg72Pro, EGF + 61 e GSTP-1 Ile105Val, onde as variantes Ser47, Pro72, EGF G61 e Val105 foram observadas com maior freqüência entre os portadores de tumores extra-axiais. Dessa forma, estas variantes podem ser fatores de susceptibilidade para o desenvolvimento dos tumores. / The extra-axial brain tumors have extra-brain localization and in most of the time they are benign, meningiomas, schwannomas and metastasis are included in this group. The appearance of a tumor occurs because of the accumulation of genetic and epigenetic alterations in the cells. In order to understand the molecular mechanism of the tumor progression and the metastasis formation it is important to identify the genes that accumulate the alterations. Thereby, the objective of this study was to analyze the methylation profile of the genes TP16, TP53, DAL-1, GSTP-1, MEN-1, NDRG2 and the DNA methyltransferases 3A, 3B and 3L and their association with the extra-axial brain tumors. Another purpose was to determine, in a case-control study, the roles of the TP53 Pro47Ser and Arg72Pro, EGF + 61, GSTP-1 Ile105Val and WRN Cys1367Arg SNPs in the development and prognosis of these tumors. We used the MSP to screen the hypermethylation profile and we observed no association between the DNMTs activity and the hypermethylation of the tumors. We also did not find association between the methylation of the DNMTs de novo and alterations in the methylation profile of the genes TP16, TP53, DAL-1, GSTP-1, MEN-1 and NDRG2. We observed that TP53 hypermethylation was associated with the high grade tumors, a poor response to the treatments and, consequently, the high number of obits. The TP16 methylation was involved with the shwannomas formation and the NDRG2 gene was involved in the meningiomas progression. For the polymorphism analysis, we used the PCR-RFLP technique and we observed differences in the genotype distributions between cases and controls of TP53 Pro47Ser and Arg72Pro, EGF + 61 and GSTP-1 Ile105Val SNPs, where the variants Ser47, Pro72, EGF G61 and Val105 were more frequent in patients than in controls. Thus, these variants can be important factors of susceptibility to the tumor development.

Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-05T17:26:15Z No. of bitstreams: 1 gracieledtenani_dissert.pdf: 2576225 bytes, checksum: 0b7b634cafdb9080cbe9b93e41c2e195 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-05T17:26:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gracieledtenani_dissert.pdf: 2576225 bytes, checksum: 0b7b634cafdb9080cbe9b93e41c2e195 (MD5) Previous issue date: 2016-12-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Background - Hepatocellular carcinoma (HCC) is highlighted as the most aggressive malignant liver tumor. The identification of candidate genes to become biomarkers may help to clarify the pathophysiology of HCC, as well as the diagnosis of the disease at early stage, leading to new therapeutic interventions. Objectives -To evaluate the association of genetic variants and the gene expression involved in the cell signaling process, apoptosis, and angiogenesis with HCC, to characterize risk subgroups and identify biological markers for early diagnosis, prognosis and treatment of the disease. Casuistics and Methods – We studied 343 subjects, 102 with HCC (SG = study group) and 215 controls (CG = control group) for the analysis of PTEN polymorphisms (rs10490920, rs532678 and rs701848) and VEGF-A (rs3025039 and rs1570360). For gene expression analysis of PTEN and PIK3CA, 24 patients with HCC were selected (SGge = Study Group of gene expression), 16 with cirrhosis (CiGge = Cirrhosis Group of gene expression) and 10 controls who underwent bileo and digestive surgery (CGge = Group control of gene expression). The polymorphisms of related genes were analyzed by PCR/RFLP (polymerase chain reaction/restriction fragments length polymorphism), while the gene expression (fresh liver tissue) by qPCR (quantitative/polymerase chain reaction). Data from the clinical profile, lifestyle and comorbidities were obtained from medical records and questionnaire. Alpha error level was set at 5%. Results - Male gender, advanced age, smoking, alcohol consumption and diabetes mellitus (DM) prevailed in the group with HCC compared to the control (P<0.05). Genetic polymorphisms: PTEN- rs10490920 - The T/T genotype was noted in both groups followed by T/C, and the T allele (P>0.05). PTEN- rs532678- The genotype T/C was the most common in both groups, followed by C/C, and the C allele was predominant in GE compared to control group (P>0.05). PTEN- rs701848- The genotype C/C was highlighted in SG compared to CG, followed by T/T, and the T allele (P>0.05). VEGF-A- rs3025039- The C/C genotype is distinguished in both groups (P>0.05), the same occured for the C allele (P = 0.4226). VEGF-A- rs1570360 – G/G genotype prevailed in both groups (P>0.05), as well as the G allele (P=0.6387). Although similarity between the groups for genotypic and allelic distribution was observed, mutant PTEN and VEGF-A alleles prevailed in patients with HCC and tobacco and alcohol consumption, compared to the control group (P <0.05). PTEN and VEGF haplotype analysis was similar among the groups (P>0.05). Gene expression - PTEN expression levels was decreased in patients with HCC (median= 0,908) compared to cirrhotic patients (median = 5.93, P=0.0347). PIK3CA expression levels (median- HCC= 0,108; cirrhosis= 0,493) were similar between groups (P> 0.05). Conclusion – PTEN and VEGF-A genetic variants, as well as their haplotypes were not associated to HCC. Reduced gene expression of PTEN in tumor tissue can be associated with HCC, while PIK3CA does not differentiate between patients with HCC from those with cirrhosis. It stands out as independent risk factors for HCC, smoking, alcohol consumption, male sex, advanced age and DM. PTEN and VEGF-A mutant alleles, particularly in the presence of smoking and alcohol consumption may enhance the risk for HCC. / Introdução - O carcinoma hepatocelular (CHC) destaca-se como o mais agressivo tumor maligno do fígado. A identificação de genes candidatos a biomarcadores pode contribuir para esclarecer a fisiopatologia do CHC e auxiliar no diagnóstico precoce da doença com novas intervenções terapêuticas. Objetivos - Avaliar a associação de variantes genéticas e expressão gênica envolvidas no processo de sinalização celular, apoptose e angiogênese com CHC, visando caracterizar subgrupos de risco e identificar marcadores biológicos para diagnóstico precoce, prognóstico e tratamento da doença. Casuística e Métodos – Foram estudados 343 indivíduos, sendo 102 com CHC (GE= Grupo de estudo) e 215 controles (GC= Grupo controle) para a análise dos polimorfismos de PTEN (rs10490920, rs532678, rs701848) e VEGF-A (rs3025039 e rs1570360). Para a análise de expressão gênica de PTEN e PIK3CA, foram selecionados 24 pacientes com CHC (GEeg= Grupo de estudo da expressão gênica), 16 com cirrose (GCieg= Grupo cirrose da expressão gênica) e 10 controles submetidos a cirurgias bileo-digestivas (GCeg= Grupo controle da expressão gênica). Os polimorfismos dos referidos genes foram analisados por PCR/RFLP (polymerase chain reaction/restriction fragments lengh polymorphism), enquanto a expressão gênica (tecido hepático fresco) por qPCR (quantitative/polymerase chain reaction). Dados do perfil clínico, hábitos de vida e comorbidades foram obtidos em prontuário médico e questionário. Admitiu-se erro α de 5%. Resultados - O gênero masculino, idade avançada, tabagismo, etilismo e diabetes mellitus (DM) prevaleceram no grupo com CHC, comparado ao controle (P<0,05). Polimorfismos genéticos: PTEN- rs10490920- O genótipo T/T destacou-se em ambos os grupos, seguido de T/C, assim como o alelo T (P>0,05). PTEN- rs532678- O genótipo T/C foi o mais frequente em ambos os grupos, seguido de C/C, assim como o alelo C predominou em GE comparado a GC (P>0,05). PTEN- rs701848- O genótipo T/C destacou-se em GE compado a GC, seguido de T/T, assim como o alelo T (P>0,05). VEGF-A- rs3025039- O genótipo C/C destacou-se em ambos os grupos (P>0,05), o mesmo ocorreu para o alelo C (P=0,4226). VEGF-A- rs1570360 – O genótipo G/G prevaleceu em ambos os grupos (P>0,05), assim como o alelo G (P=0, 6387). Embora detectada semelhança entre os grupos para distribuição genotípica e alélica, alelos mutantes de PTEN e VEGF-A prevaleceram em pacientes com CHC e hábitos tabagista e etilista, comparado ao controle (P<0,05). A análise de haplótipos de PTEN e VEGF-A mostrou semelhança entre os grupos (P>0,05). Expressão gênica- Houve diminuição dos níveis de expressão de PTEN em pacientes com CHC (mediana= 0,908) comparado aos cirróticos (mediana= 5,93; P= 0, 0347). Níveis de expressão de PIK3CA (mediana- CHC=0,108; cirrose= 0,493) foram semelhantes entre os grupos (P>0,05). Conclusão – Variantes genéticas de PTEN e VEGF-A, assim como seus haplótipos, não se associam ao CHC. Expressão gênica reduzida de PTEN no tecido tumoral hepático pode estar associado a CHC, enquanto PIK3CA não diferencia pacientes com CHC daqueles com cirrose. Destacam-se como fatores de risco independentes para CHC tabagismo, etilismo, sexo masculino, idade avançada e DM. Alelos mutantes de PTEN e VEGF-A, particularmente na presença de tabagismo e etilismo podem potencializar o risco para CHC.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-06-10T14:20:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-11T18:30:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-11T19:08:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-11T19:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) Previous issue date: 2010-08-20 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The Herpes Simplex Virus type 2 (HSV-2) is a widespread, incurable agent that establishes latency in nervous cells and is responsible for the majority of genital herpes cases. The UL23 is a polymorphic gene, which encodes the viral thymidine kinase (TK) of the Herpes virus. TK has six conserved regions, including two active sites, which plays an important role in acyclovir (ACV) metabolism. Therefore, some mutations in UL23 are implicated with ACV resistance phenoty pe. In this work, we analyzed 67 samples collected between Ap ril 2008 and September 2009 at the STI/STD clinic of “Alfredo da Matta” Foundation, in Manaus, Amazonas, Brazil obtained from HSV-2 genital ulcer patients. In order to characterize polymorphisms, all sp ecimens were processed for total nucleic acid isolation, submitted to PCR amplification targeting the complete ORF of UL23 gene followed by automated nucleotide sequencing with dideoxy chain terminators. Sequences analysis shown that 45 sequences were 100% similar to the reference strain “HG52”. The remaining 22 sequences (32.8%) showed at least one nucleotide substitution; none insertions or deletions were found. Amino acids substitutions were detected in 19 out of 22. The mutation Gly39Glu was the most frequently detected (16/19), followed by Asn78Asp (5/19); Gly39Glu and Asn78Asp were simultaneously found in four samples. Deduced amino acids sequences were aligned with 66 available on GenBank from African and American continents. A total of 23 variable sites were identified and, once more, Gly39Glu mutation was the most frequent found (74/133). Substitutions previously associated with ACV resistance were not detected, however, Gly39Glu was recently described as a probable resistant mutation. Another four mutations observed: His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser and Ala366Val had not been previously described. The theoretical models of TK’s structure built for seven samples showed that amino acids substitutions were found away from the conserved and/or catalytic sites of TK, with the exception of Arg338Gln which was nearly from ATP-binding site. Mutations associated with ACV resistance were not detected. However one of the mutations found, Gly39Glu, was p reviously associated with this resistance phenoty pe. Another four mutations found in his work: His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser and Ala366Val had not been previously described elsewere. To our knowledge, this is the first study on UL23 polymorphisms on Brazilian HSV-2 samples, a research field considered as a priority by WHO HIV/STI program. / latência em células nervosas sendo responsável pela maioria dos casos de herpes genital. O UL23 é um gene polimórfico que codifica a timidinaquinase viral (TK) do Herpesvírus. A TK possui seis regiões conservadas, incluindo dois sítios ativos; esta enzima desempenha um papel importante no metabolismo do aciclovir (ACV). Consequentemente, algumas mutações no gene UL23 estão relacionadas a fenótipos de resistência ao ACV. Nesta dissertação, analisamos 67 amostras coletadas entre Abril de 2008 e Setembro de 2009 na clínica de DST/IST da Fundação “Alfredo da Matta”, em Manaus, Amazonas, Brasil, obtidas de pacientes com úlceras genitais por HSV-2. Com o objetivo de se caracterizar polimorfismos, todos os espécimes foram processados para extração total de ácido nucleico e submetidos à amplificação da CDS do gene UL23 pela técnica de PCR, seguida de sequenciamento nucleotídico automatizado utilizando-se terminadores dideóxi. As análises de sequências mostraram que 45 delas foram 100% similares à cepa-referência “HG52”. As 22 sequências restantes (32,8%) mostraram pelo menos uma substituição de nucleotídeo; nenhuma inserção ou deleção foi encontrada. Substituições de aminoácidos foram detectadas em 19 dessas 22 sequências. A mutação Gly39Glu foi a mais frequente (16/19), seguida pela Asn78Asp (5/19); Gly39Glu e Asn78Asp foram encontradas simultaneamente em quatro amostras. Sequências deduzidas de aminoácidos foram alinhadas com 66 sequências Africanas e Americanas disponíveis no GenBank. Um total de 23 sítios variáveis foram identificados e, mais uma vez, a mutação Gly39Glu foi a mais frequente (74/133). Substituições previamente associadas à resistência ao ACV não foram detectadas, entretanto, a Gly39Glu foi recentemente descrita como uma provável mutação de resistência. Outras quatro mutações observadas, His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser e Ala366Val, foram descritas pela primeira vez por este trabalho. Nos modelos teóricos da estrutura da TK, construídos para sete amostras, foi possível visualizar que as substituições de aminoácidos estavam situadas longe dos sítios ativos/conservados desta enzima, com exceção da mutação Arg338Gln que apresentou maior proximidade com o sítio de ligação de ATP. Não foram detectadas mutações sugestivas de resistência ao ACV. Ao nosso conhecimento, este é o primeiro estudo de polimorfismos do gene UL23 do HSV-2 em amostras brasileiras, um campo considerado prioridade pelo Programa de HIV/IST da OM S.

Scrapie ou paraplexia enzoótica dos ovinos é uma doença neurodegenerativa fatal que acomete ovinos e raramente caprinos. A doença é influenciada por polimorfismos nos códons 136, 154 e 171 do gene prnp que codifica a proteína priônica. Os animais podem ser susceptíveis ou resistentes, de acordo com as sequências alélicas observadas nos referidos códons. No Brasil ocorreram apenas casos de animais que foram importados, sendo o país considerado livre da doença. Neste trabalho foi realizada a genotipagem dos diferentes polimorfismos associados ao desenvolvimento do scrapie e a categorização em animais susceptíveis e resistentes. Foram sequenciadas 118 amostras provenientes de ovinos da raça Santa Inês criados em propriedades localizadas no Estado de São Paulo. Destas amostras foram identificados 6 alelos e 11 genótipos (ARQ/ARQ, ARR/ARQ, ARQ/AHQ, ARQ/VRQ, AHQ/AHQ, ARR/ARR, ARR/AHQ, VRQ/VRQ, ARQ/TRQ, TRR/TRR, TRQ/TRQ), dentre os quais o genótipo ARQ/ARQ teve ocorrência de 56,7%. Em nosso estudo foi detectada a presença da tirosina no códon 136, observação rara na medida em quenão existem relatos nacionais e relatos envolvendo a raça Santa Inês descrevendo este polimorfismo. Com os resultados obtidos, foi possível determinar a existência de grande variabilidade genética relacionada à raça Santa Inês no Estado de São Paulo, apesar da variabilidade, apenas 1,69% dos genótipos observados são extremamente resistentes ao scrapie. Estes dados demonstram que a raça nativa Santa Inês pode ser considerada potencialmente susceptível ao scrapie. / Enzootic paraplexia or scrapie is a fatal neurodegenerative disease affecting mainly sheep and rarely goats. The disease is influenced by polymorphisms at codons 136, 154 and 171 of prnp gene that encodes the prion protein. The animals may be susceptible or resistant to the development of the disease according to the allelic sequences observed in these codons. In Brazil there were only cases of scrapie in imported animals, therefore the country is considered free of the disease. This study performed the genotyping of different polymorphisms associated to the development of scrapie. Then, based on these findings the animals were categorized in resistant and susceptible. A total of 118 samples were sequenced from the Santa Ines sheep raised on properties located in the State of Sao Paulo. From these samples, 6 alleles and 11 genotypes were identified (ARQ / ARQ, ARR / ARQ, ARQ / AHQ, ARQ / VRQ, AHQ / AHQ, ARR / ARR, ARR / AHQ, VRQ / VRQ, ARQ / TRQ, TRR / TRR, TRQ / TRQ), the genotype ARQ / ARQ presented a frequency of 56.7%. It was also detected the presence of tyrosine at codon 136, which may be considered a rare observation, since there is no report regarding Santa Ines breeding presenting this polymorphism. These results showed the great genetic variability in Santa Ines in Sao Paulo and only 1,69% of the genotypes observed are extremely resistant to scrapie. These data demonstrate that the Santa Ines sheep can be considered potentially susceptible to scrapie.

O envelhecimento é um processo inexorável, porém a redução gradativa da capacidade do organismo está bastante ligada com os hábitos do estilo de vida e a fatores genéticos. Polimorfismos nos genes que codificam a enzima conversora de angiotensina (ECA) e a proteína alfa-actinina 3 (ACTN3) podem resultar em mudanças na aptidão física. Já o treinamento físico tem sido utilizado como uma ferramenta não farmacológica na prevenção primária em saúde. Por fim, a periodização deste treinamento busca ser um meio sistemático de planejar e organizar o treinamento de modo a torná-lo mais eficiente. Não há na literatura estudos com a periodização ou com os genótipos da ECA e ACT3 associados ao treinamento combinado. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar diferentes modelos de periodização do treinamento no exercício físico combinado em variáveis de saúde e comparar a magnitude da resposta em indivíduos com diferentes características genéticas em relação aos genes ECA e ACTN3. Após três semanas de adaptação, 54 mulheres com idade entre 50-75 anos foram randomicamente divididas nos modelos de treinamento a) não periodizado (NP), b) periodização não linear (NL) ou c) periodização não linear flexível (NLF). Para os valores pré e pós 12 semanas de treinamento, aptidão aeróbia (consumo máximo de oxigênio [VO2 pico] e teste de caminhada de seis minutos) e força muscular (1 RM no supino e leg press) foram medidas. A genotipagem da ECA foi feita por PCR convencional e a ACTN3 por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que a força máxima foi aumentada estatisticamente no supino (effect size [ES] de 1,18 em PNL e 1,22 em PNLF] e leg press (ES de 0,92 em PNL e 0,98 em PNLF) nos grupos PNL e PNLF. No teste de caminhada de seis minutos, a magnitude da aptidão aeróbica melhorou em todos os grupos (ES de 1,02 em NP, 1,33 em PNL e 0,54 em PNLF). Para o gene da ECA, houve uma diferença estatística entre os grupos do pré para o pós no supino (ID/DD: 18,6%; II: 8,3%). Para o gene da ACTN3, houve diferença estatística do pré para o pós dentro do grupo no supino (CC/CT: 17,4%; TT: 6,9%) e leg press (CC/CT: 12,3%; TT: 7,5%) apenas no grupo CC/CT. Em conclusão, o presente estudo mostrou que os modelos periodizados foram capazes de induzir melhorias significativas na força muscular em mulheres pós menopausa fisicamente ativas. Além disso, os genótipos ID/DD do gene da ECA e CC/CT do gene da ACTN3 melhor efeito na força muscular no treinamento combinado. / The aging is an inexorable process, but the gradual reduction of the capacity in the organism is related with lifestyle habits and genetic factors. Polymorphisms in genes encoding both angiotensin converting enzyme (ACE) and alpha-actinin 3 protein (ACTN3) may result in changes in physical fitness. Physical training has been used as a non-pharmacological tool in primary health prevention. Finally, the periodization training is a systematic means of planning and organizing training to do it more efficient. There are no studies in the literature with periodization or with ACT and ACT3 genotypes associated to combined training. In this context, the objective of this study was to evaluate different models of periodization training in combined exercise training in health variables and to compare the magnitude of the response in individuals with different genetic characteristics in relation to the ACE and ACTN3 genes. After three weeks of adaptation, 54 women aged 50-75 years were randomly assigned to a) nonperiodization (NP), b) non-linear periodization (NLP) or c) flexible non-linear periodization (FNLP). At baseline and after 12 weeks, aerobic fitness (peak oxygen uptake [VO2peak] and six-minute walk test) and maximal muscle strength (1 RM bench press and leg press) were measured. The ACE genotyping was performed trough conventional PCR and ACTN3 by real-time PCR. The results showed that the magnitude of the maximal strength statistically increased in the bench press [effect size (ES) of 1.18 in NLP and 1.22 in FNLP] and leg press (ES of 0.92 in NLP and 0.98 in FNLP) only in the periodized groups. In six-minute walk test, the magnitude of the aerobic fitness improved in all groups (ES of 1.02 in NP, 1.33 in UP and 0.54 in FNLP). In conclusion, the present study showed that periodized models could induce significant improvements on muscle strength in active postmenopausal women. In the ACE gene, there was a statistical difference between the groups from pre to post supine (ID / DD: 18.6%, II: 8.3%). For the ACTN3 gene, there was a statistical difference between the pre and post within the group in the bench press (CC/CT: 17,4%; TT: 6,9%) and leg press (CC/CT: 12,3%; TT: 7,5%) only in the CC/CT group. In conclusion, the present study showed that periodized models could induce significant improvements on muscle strength in active postmenopausal women. In addition, the genotypes ID / DD of the ECA and CC / CT gene of ACTN3 gene had a better effect to muscle strength.

Determina si existe asociación entre los polimorfismos C3435T del gen ABCB1 y -24C>T del gen ABCC2 con la epilepsia refractaria o farmacorresistente en pacientes del Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Martins (HNERM) durante el periodo de mayo 2016 a junio 2017, en este estudio participaron 22 pacientes con epilepsia refractaria y ocho pacientes con epilepsia farmacorrespondedora. Para ello, se tomaron muestras de sangre venosa para extraer el ADN genómico y se amplificaron las regiones que contenían los polimorfismos C3435T del gen ABCB1 y -24C>T del gen ABCC2 mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Los polimorfismos de los genes ABCB1 y ABCC2 fueron detectados en el amplificado mediante restricción enzimática con Mbo I y secuenciación, respectivamente. La información clínica se obtuvo de las historias clínicas y se contrastó con una encuesta que se le realizada a cada paciente. El polimorfismo C3435T del gen ABCB1 en pacientes epilépticos refractarios se observó en 11 individuos, dos homocigotos (CC) y nueve heterocigotos (CT), con frecuencias alélicas de C=0.705 y T=0.295. El polimorfismo -24C>T del gen ABCC2 en pacientes refractarios se determinó en un paciente heterocigoto (CT), con frecuencias alélicas de C=977 y T=0.023. En cuanto a la información clínica, se observaron epilepsias de tipo focal y generalizada con etiología estructural, genética, infecciosa y desconocida, de inicio de crisis ya sea focal o generalizada en el grupo de pacientes refractarios estudiados. La epilepsia focalizada de etiología estructural fue la que presentó mayor prevalencia entre los pacientes epilépticos refractarios estudiados. Por otro lado, no se observó asociación significativa entre el alelo T de los polimorfismos C3435T del gen ABCB1 y - 24C>T del gen ABCC2 con la epilepsia refractaria (p>0.05). / Tesis

El cáncer de cuello uterino es el séptimo cáncer más frecuente en la población general y el segundo más común entre las mujeres de todo el mundo. Numerosos estudios epidemiológicos y moleculares han establecido al Virus del Papiloma Humano (VPH) como el principal factor etiológico del cáncer cervical. Sin embargo, dada la alta prevalencia de la infección por VPH en la población general respecto de la incidencia del carcinoma cervical, se presume que la sola infección por este virus sería insuficiente para provocar la transformación neoplásica. Las diferencias genéticas del hospedador que influyan en la respuesta contra la infección viral podrían determinar un mayor riesgo de desarrollo de lesiones cervicales y progresión hacia un carcinoma invasor. De esta manera, los polimorfismos genéticos presentes en genes relacionados a la infección viral, a la respuesta inmune, a los sistemas de reparación del ADN y aquellos genes supresores de tumores, podrían influenciar y determinar un riesgo aumentado de desarrollo de la neoplasia cervical. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto del componente genético en relación a la susceptibilidad de desarrollo de cáncer cervical y la infección por el Virus del Papiloma Humano. Se analizaron un total de 512 muestras cervicales de mujeres de la ciudad de La Plata, las cuales fueron clasificadas histológicamente en: 200 muestras de mucosa cervical normal (PapI/II), 100 Lesiones Intraepiteliales de Bajo Grado (LGSIL), 72 Lesiones Intraepiteliales de Alto Grado (HGSIL) y 140 muestras correspondientes a Carcinomas Cervicales Escamosos (SCC). La presencia de ADN del VPH fue examinada mediante PCR anidada y la genotipificación del virus por PCR-SSCP y PCR-EIA. La genotipificación de los Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNPs) presentes en los genes FASL (-844 T/C), IL10 (-1082 G/A), p53 (Arg72Pro), INFG (+ 874 T/A) y RNASEL (Arg462Gln) se llevó a cabo mediante la tecnología de Pirosecuenciación, mientras que el análisis de los SNPs Arg399Gln y Arg194Trp de XRCC1, -308 (G/A) y -238 (G/A) de TNF-α y -670 del gen FAS se realizó utilizando la técnica de PCR-RFLP. La prevalencia de la infección por VPH en el grupo control fue del 36,5%. El tipo viral más prevalente fue el VPH-16 (51,2%). Del total de los controles, el 29,3% correspondió a mujeres mayores a 30 años infectadas con VPH-16 y/o VPH-18. Los polimorfismos presentes en las regiones promotoras de los genes TNF-α (-308 (G/A) y -238 (G/A)), IL-10 (-1082 (G/A)) y FASL (-844 (T/C)), así como el SNP + 874 (T/A) del gen Interferon gamma, no presentaron diferencias entre casos y controles. De manera similar, no hubo asociación entre dichos polimorfismos y la presencia del ADN del VPH. Sin embargo, se registró un incremento significativo en el riesgo de desarrollo de cáncer cervical otorgado por los genotipos homocigota AA del gen FAS (OR=2,25; p=0,035), heterocigota CG del gen p53 (OR=2,43; p=0,004) y el genotipo TT+TC del gen XRCC1 codon 194 (OR=2,26; p=0,02). Por otra parte, los genotipos homocigota AA de RNASEL (OR=0,31; p=0,034) y heterocigota AG de XRCC1 codon 399 (OR=0, 48; p=0,023) otorgaron una menor susceptibilidad frente al desarrollo de la neoplasia cervical. En el caso del gen FAS, el genotipo homocigota AA (OR=2,53; p=0,035) se encontró asociado con un incremento en la susceptibilidad a la infección por VPH. En cuanto a las lesiones cervicales, se observó que tanto el alelo Gln (A) (OR=3,03; p=0,001) como el genotipo homocigota Gln/Gln (AA) (OR=5,34; p=0,000) de XRCCI Arg399Gln otorgaron un incremento significativo en el riesgo de desarrollo de lesiones de bajo grado (LSIL). Por el contrario, el genotipo heterocigota Gln/Arg (AG) de este mismo polimorfismo estuvo asociado con una disminución en el riesgo de desarrollo de este tipo de lesiones (OR=0, 25; p=0,009). Por último, el análisis de los polimorfismos a través del algoritmo MDR reveló que existe una interacción sinérgica entre ellos, presentando el modelo de cuatro-factores (cuatro-loci), conformado por FASL-P53-RNASEL-XRCC1399, una asociación significativa con la neoplasia cervical (TA=0,61; p<0,05). De acuerdo a los resultados obtenidos se observa que la asociación encontrada entre los Polimorfismos de Nucleótido Simple y el carcinoma cervical apoya el rol de la susceptibilidad genética del hospedador en la etiología de esta enfermedad. En base a esto se sugiere que la utilización de estos polimorfismos podría resultar muy conveniente en la identificación de aquellos individuos que se encuentran con mayor riesgo de desarrollo de lesiones cervicales y progresión hacia un carcinoma invasor.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la distribución de los polimorfismos PON1 Q192 R en una en una población de Junín a 4105 m de altitud. Así también señala la distribución de los fenotipos y la actividad de la enzima. La distribución de los genotipos para PON 1192 es de QQ 13,9%; QR 45,6% y RR 40,5 y el alelo más frecuente es de 192R 63%. La distribución de los fenotipos para PON 1 Q192R es, AA 20,5%; AB 49,1% y BB 30,4 %. Las actividades paraoxonasa basal y estimulada son significativamente diferentes entre los fenotipos y genotipos, pero no hay diferencia en la actividad esterasa entre estos grupos. La alta prevalencia del alelo PON1 192R encontrado, indica un papel importante en el desarrollo de enfermedades cardiometabólicos en estas poblaciones, por lo que se requiere más estudios en diferentes poblaciones, de las interacciones gen-medio ambiente que pueda modular la expresión de la enzima. / Tesis

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Um dos genes localizados nesse cromossomo, o FOXP3, codifica uma fator de transcrição que está diretamente relacionado à ativação e diferenciação de células T regulatórias. Tais células constituem um importante mecanismo relacionado ao controle de doenças alérgicas. Diversos polimorfismos já foram descritos nas regiões codificante e regulatória do FOXP3, o que sugere que os mesmos possam ter um impacto funcional sobre a proteína correspondente. Desta forma, fatores genéticos que afetam o gene FOXP3 podem determinar diferenças na susceptibilidade a doenças alérgicas, tais como a asma. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o impacto de polimorfismos em genes localizados no cromossomo X, a exemplo FOXP3, no desenvolvimento da asma e atopia. Para analisar a associação de polimorfismos presentes no cromossomo X e asma, foi realizado um X-WAS (Estudo da Associação Ampla do Cromossomo X). Já para verificar a associação de polimorfismos no gene FOXP3 com asma e atopia foi realizado um estudo de gene-candidato. Como resultados mais importantes destaca-se a associação do polimorfismo rs12007907 no gene IL1RAPL com sintomas de asma (P = 3.33x10-6; OR=0.49, 95% IC= 0.37 - 0.67) e níveis de produção de IL-13 (p = 0.045) no X-WAS; a associação dos polimorfismos no gene FOXP3 rs2232368 (OR = 1,95; 95% IC= 1.04 – 3,66) com sintomas de asma, rs2232368 (OR = 2,31; 95% IC= 1,16 – 4,59), rs3761549 (OR = 1,44; 95% IC= 1,028 – 2,018) e rs2280883 (OR = 0,836; 95% IC= 0,704 – 0,992) com atopia, além da interação entre o rs2280883 no FOXP3 e infecção com EBV no desenvolvimento de atopia definida por SPT (OR = 0,64; 95% IC: 0,47 – 0,87) e IgE específico para aeroalérgenos (OR = 0,62; 95% IC: 0,46 – 0,83). Estes achados sugerem que polimorfismos em genes do cromossomo X, dentre eles FOXP3 e IL1RAPL, possuem impacto no desenvolvimento de asma e alergia em nossa população. No entanto, novos estudos devem ser conduzidos na tentativa de elucidar melhor o impacto funcional destes polimorfismos aqui descritos no desenvolvimento de asma e alergia, além da replicação em outras populações. / Asthma and atopy are conditions determined by genetic and environmental factors, which can act independently and in interaction. Several Genome Wide Association Studies has been conducted to try to understand which genetic components influence asthma. However, genes located on the X chromosome are often underrepresented. One of the genes located in this chromosome, the FOXP3, encodes a transcription factor that is directly related to the activation and differentiation of regulatory T cells. Such cells are an important mechanism related to the control of allergic diseases. Several polymorphisms have been described in coding and regulatory regions of the FOXP3, which suggests that they may have a functional impact on the corresponding protein. Thus, genetic factors affecting the FOXP3 gene can determine differences in susceptibility to allergic diseases such as asthma. In this context, this study aimed to assess the impact of polymorphisms in genes located on the X chromosome, such the FOXP3, in the asthma and atopy risk. To analyze the association between polymorphisms on chromosome X and asthma, it was carried out an X-WAS (Study of Wide Association of Chromosome X). To verify the association of polymorphisms in the FOXP3 gene with asthma and atopy, a gene-candidate study was conducted. The meaningful results were the association of rs12007907 polymorphism in IL1RAPL gene with asthma symptoms (p = 3.33x10-6; OR = 0.49, 95% CI = 0.37 - 0.67) and IL-13 production levels (p = 0.045) in X-WAS; furthermore we observed association of rs2232368 in the FOXP3 gene with asthma symptoms (OR = 1.95; 95% CI = 4.1 - 3.66) and a association with atopy for the rs2232368 (OR = 2.313; 95% CI = 1.16 to 4.59), the rs3761549 (OR = 1.44; 95% CI = 1.03 to 2.02) and rs2280883 (OR = 0.836, 95% CI = 0.70 to 0.99). In addition, we reported an interaction between the rs2280883 located on FOXP3 and infection with EBV in the atopy development defined by SPT (OR = 0.64; 95% CI: 0.47 - 0.87) and specifc IgE to allergens (OR = 0.62; 95% CI: 0.46 - 0.83). These findings suggest that polymorphisms in genes of the X chromosome, including FOXP3 and IL1RAPL, have potential impact on the development of asthma and allergy in our population. However, further studies should be conducted to elucidate the functional impact of these polymorphisms described in this study in the asthma and atopy, as well as replication in other populations.