The Use of Thromboelastography in Evaluation of Coagulation in Females with Physiological or Pathological Pregnancy MUDr. Ferdinand Polák Abstract Introduction: The target of this study was to compare thromboelastography coagulation parameters in the following three groups: a) healthy pregnant women, b) healthy non-pregnant women and c) pregnant women with pathological pregnancy and also to compare it to reference limits for the common population. If appropriate, we would propose recommendations for new reference ranges for pregnant women in their third trimester. Materials and methods: Prospective observational study, comparing, by using thromboelastography, the blood samples of 60 healthy women in their third trimester of pregnancy (group GRAV) to the samples of the control group of 43 healthy non-pregnant fertile women (group NON-GRAV) and to the samples of 50 women with pathological pregnancy (preeclampsia, fetal death) in their third trimester (group PATOL). Selective percentiles were used to determine new reference limits. Results and conclusions: We found statistically significant differences between groups GRAV and NON-GRAV. Therefore, we established, based on our results, new thromboelastography reference limits for pregnant women. Coagulation changes during pathological pregnancy are less...

Introdução: As doenças hipertensivas da gestação (DHG) são a principal causa de morte materna em todo o mundo. A pré-eclâmpsia ocorre em 3-5% das gestações, acrescentando maior morbimortalidade. Apesar da importância em saúde pública dessa patologia, sua patogênese não está totalmente esclarecida. Acredita-se que uma disfunção na placentação ocasione um estado de estresse oxidativo, contribuindo para manifestação clínica da doença. O selênio é um antioxidante presente no organismo cujas concentrações séricas tendem a diminuir na gestação normal, e a sua deficiência vem sendo relacionada às DHG. Entretanto, estudos prévios mostram resultados conflitantes. O objetivo deste estudo é correlacionar os níveis séricos de selênio com DHG na nossa população, considerando um possível fator de proteção deste mineral. Métodos: Foi realizado um estudo caso-controle, incluindo 32 gestantes normotensas, 20 hipertensas (hipertensão crônica e gestacional) e 38 pacientes com pré-eclâmpsia. Todas pacientes foram oriundas do pré-natal ou admissão obstétrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. O selênio sérico foi dosado no momento da inclusão do estudo. As pacientes foram acompanhadas até o momento da alta após o parto. O nível de significância adotado foi de 5% (p≤0,05) e as análises foram realizadas no programa SPSS versão 18. Resultados: As pacientes não diferiram quanto à idade materna, etnicidade, anos de estudo, paridade e prevalência de tabagismo. Pacientes normotensas apresentaram menor índice de massa corporal e foram incluídas no estudo mais precocemente. Além disso, estas pacientes apresentaram maior prevalência de outras comorbidades, excluindo hipertensão. Pacientes com pré-eclâmpsia tiveram níveis de pressão arterial sistólica mais altos no momento da admissão. Uso contínuo de medicações e história de DHG em gestações anteriores foi mais comum no grupo de pacientes com pré-eclâmpsia. Os níveis séricos de selênio não apresentaram diferença significativa entre os grupos, sendo uma média de 56,4±15,3μg/L no grupo controle, 53,2±15,2μg/L no grupo hipertensão e 53,3±16,8μg/L no grupo com pré-eclâmpsia (P=0,67). Das pacientes com préeclâmpsia, 52,6% apresentaram pré-eclâmpsia grave. Os níveis séricos de selênio destas pacientes também não diferiram significativamente do grupo controle (P=0,77). Pré-eclâmpsia foi associada a interrupção mais precoce da gestação e menor peso de nascimento (P<0,05), entretanto não houve diferença significativa entre os outros desfechos estudados. Conclusão: Não houve diferença significativa na concentração de selênio sérico entre gestantes normotensas e gestantes com doenças hipertensivas da gestação, não sendo possível estabelecer um fator de proteção. / Introduction: The hypertensive disorders of pregnancy (HDP) are the leading cause of maternal death in the world. Preeclampsia occurs in 3-5% of pregnancies, adding greater morbidity and mortality. Despite the importance of this disease in public health, its pathogenesis is not fully understood. It is believed that a dysfunction in the placentation process leads to oxidative stress, contributing to the clinical manifestation of the disease. Selenium is an antioxidant present in the body, which serum concentrations tend to decrease in normal pregnancy. Its deficiency has been related to HDP. However, previous studies have shown conflicting results. The aim of this study is to correlate serum selenium levels with HDP in our population, considering a possible protective factor of this mineral. Methods: We conducted a case-control study, including 32 normotensive pregnant women, 20 with hypertension (chronic and gestational hypertension) and 38 patients with preeclampsia. All patients were derived from antenatal or obstetric admission of Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Serum selenium was measured at the time of inclusion in the study. Patients were followed until hospital discharge after delivery. The significance level was 5% (p≤0.05) and analyzes were performed using SPSS version 18. Results: The patients did not differ with regard to maternal age, ethnicity, years of education, parity, and smoking prevalence. Normotensive patients had lower body mass index and were included in the study earlier. In addition, these patients had a higher prevalence of other comorbidities excluding hypertension. Patients with preeclampsia had higher levels of systolic blood pressure on admission. Continuous use of medication and HDP history in previous pregnancies were more common in patients with preeclampsia. Serum selenium levels were not significantly different between groups, with an average of 56.4 ± 15,3 μg/L in the control group, 53.2 ± 15,2 μg/L in the hypertension group and 53.3 ± 16,8 μg/L in the group with preeclampsia (P=0.67). Of patients with preeclampsia, 52.6% had severe preeclampsia. Serum selenium levels of these patients did not differ significantly from the control group (P=0.77). Preeclampsia was associated with earlier interruption of pregnancy and lower birth weight (P<0.05). There was no significant difference between other outcomes studied. Conclusion: There was no significant difference in the concentration of serum selenium between normotensive pregnant women and pregnant women with hypertensive disorders of pregnancy, thus not being possible to establish selenium as a protective factor.

Objetivo - Comparar índices 3D Power Doppler (PD3D) da circulação úteroplacentária (UPC) no primeiro e segundo trimestre em pacientes que desenvolveram pré-eclâmpsia (PE) e aquelas que não fizeram e testar a hipótese de que os parâmetros da vascularização e intensidade de fluxo da placenta, tal como determinado por PD3D, são diferentes em gestações normais em comparação com pré-eclâmpsia. Método - Foi realizado um estudo observacional prospectivo usando PD3D para avaliar a perfusão da placenta em 96 gestantes que fizeram o exame ecográfico de rotina entre 11 e 14 semanas. O índice vascular (VI), o índice de fluxo (FI) e o índice de fluxo vascular (VFI) por histograma Doppler tridimensional foram calculados. Todas pacientes repetiram o exame entre 16 e 20 semanas. Após o nascimento as pacientes foram classificadas como normais ou com pré-eclâmpsia. Resultados - Os índices vasculares placentários incluindo VI, FI e VFI foram significativamente menores em placentas com PE em comparação com os controles no exame realizado no segundo trimestre (p <0,001). Não houve diferença estatística nas pacientes examinadas no primeiro trimestre. Conclusão - Nossos resultados sugerem que a avaliação de índices vasculares placentários com Power Doppler 3D no segundo trimestre tem o potencial para detectar as mulheres em risco para o desenvolvimento posterior de PE. / Objective - To compare 3D power Doppler indices (3DPD) of utero-placental circulation (UPC) in the first and second quarter in patients who developed preeclampsia and those who did not and to test the hypothesis that the parameters of vascularization and placenta flow intensity, as determined by three-dimensional ultrasound (3D) are different in normal pregnancies compared with preeclampsia. Methods - A prospective observational study using 3D power Doppler was performed to evaluate the placental perfusion in 96 pregnant women who came to do the ultrasound routine between 11 and 14 weeks. The placental vascular index (VI), flow index (FI), blood vessels and blood flow index (VFI) by three-dimensional Doppler histogram were calculated. All patients repeated the exam between 16 and 20 weeks. The outcome was scored as normal or preeclamptic. Results - The placental vascular indices including VI, FI and VFI were significantly lower in preeclamptic placentas compared with controls in the study performed in the second trimester (p <0.001). There was no statistical difference in the patients examined in the first trimester. Conclusion - Our findings suggest that 3D-Power Doppler assessment of placental vascular indices in the second trimester has the potential to detect women at risk for subsequent development of PE.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / As SÃndromes Hipertensivas Gestacionais (SHG) respondem por elevados Ãndices de morbimortalidade materna e neonatal, tendo estudos mostrado que seus efeitos nÃo resumem-se ao perÃodo da gestaÃÃo, acarretando em um perfil clÃnico e metabÃlico diferenciado conferindo maior risco para a ocorrÃncia de eventos cardiovasculares em mulheres com histÃria destas patologias. Objetivou-se neste estudo analisar o perfil de risco cardiovascular em mulheres com histÃria obstÃtrica de SHG. Tratou-se de uma coorte retrospectiva na qual foram avaliadas 60 mulheres (30 com histÃria de SHG e 30 com histÃria de gestaÃÃes sem complicaÃÃes) cujos partos ocorreram no perÃodo entre 1992 e 2002 em uma Maternidade TerciÃria de Fortaleza-Ce. As pacientes que aceitaram participar do estudo realizaram avaliaÃÃo antropomÃtrica, laboratorial e da funÃÃo endotelial atravÃs da dilataÃÃo fluxo-mediada da artÃria braquial. As variÃveis contÃnuas foram analisadas utilizando os testes de Kolmogorov-Smirnov para verificaÃÃo da normalidade destas, sendo utilizados os testes t-Student e Mann-Whitney para comparaÃÃo das mÃdias. As medidas clÃnicas e metabÃlicas foram categorizadas segundo os pontos de corte determinados por consensos nacionais segundo o risco cardiovascular, sendo utilizado o teste do qui-quadrado e Exato de Fisher para comparaÃÃo entre os grupos. Calculou-se a OR para as variÃveis que se mostraram estatisticamente significantes considerando p<0,05. O perÃodo de seguimento mÃdio dos grupos foi de 15,2Â3,5 anos. O estudo mostrou que mulheres com histÃria de SHG apresentam maiores valores de IMC, PAS, LDL-C e glicemia em jejum (p=0,03; 0,03; 0,02 e 0,02, respectivamente). Mostrou-se estatisticamente significante o uso de anti-hipertensivos (p=0,03) e tendÃncia ao uso de hipoglicemiantes (p=0,05). Encontrou-se uma frequÃncia de disfunÃÃo endotelial de 60% entre as expostas, demonstrando diferenÃa estatisticamente significante entre os grupos (p=0,01). Foi identificada SÃndrome MetabÃlica em 80% das expostas, com diferenÃa entre os grupos quanto ao diagnÃstico e o nÃmero de componentes da sÃndrome (p=0,01). As pacientes do grupo exposto apresentaram maiores pontuaÃÃes no Escore de Risco de Framingham e no Escore Global de RCV (p=0,03; 0,01). O estudo apresenta um perfil de risco cardiovascular desfavorÃvel em pacientes com histÃria de SHG corroborando com dados da literatura e contribuindo para embasar a necessidade de um melhor acompanhamento no pÃs-parto em longo prazo de mulheres com histÃria desta complicaÃÃo obstÃtrica.

A neutropenia é um achado freqüente em recém-nascidos de mães com pré-eclampsia. Estudos avaliando a ativação leucocitária nestes recém-nascidos são escassos. No entanto, as principais citocinas pró-inflamatórias envolvidas são a IL-8 e o GRO-α. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis plasmáticos de IL-8 e GRO-α em recémnascidos prematuros de mães com pré-eclampsia. Metodologia: Foram incluídos recém-nascidos com idade gestacional menor de 36 semanas e peso de nascimento inferior a 2000 gramas, sendo divididos em dois grupos de acordo com a presença ou ausência de pré-eclampsia materna. Os critérios de exclusão foram: malformações congênitas, erro inato de metabolismo ou anormalidades cromossômicas, infecções do grupo STORCH, óbito na sala de parto e recém-nascidos nos quais as mães possuíam hipertensão crônica sem a presença de pré-eclampsia. Nas primeiras 48 horas de vida, no momento de coleta assistencial, uma pequena amostra adicional de sangue foi obtida para dosagem de IL-8 e GRO-α pelo método de enzimoimunoensaio. Foram usados os testes qui-quadrado, T student, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e regressão logística múltipla. Resultados: 119 recém-prematuros (64 sem pré-eclampsia e 55 com pré-eclampsia). Os grupos foram similares quanto ao peso de nascimento, idade gestacional, escore de Apgar no 5’minuto, sepse, doença de membrana hialina , ventilação mecânica, nutrição parenteral total, enterocolite necrosante, hemorragia periventricular. O grupo com préeclampsia apresentou mais neutropenia, foi mais PIG, parto cesariano e menos bolsa rota superior a 18 horas. Os níveis de IL-8 foram maiores no grupo sem pré-eclampsia materna [157.1 pg/ml (86.4-261.3) e 26.54 pg/ml (3.6-87.2) p<0.001 para não préeclampticos e pré-eclampticos, respectivamente]. Após análise por regressão múltipla apenas a ausência de pré-eclampsia foi associada com níveis elevados de IL-8. Conclusão: O prematuro de mãe com pré-eclampsia apresenta níveis reduzidos de IL-8, sugerindo que a ativação leucocitária possa estar prejudicada nestes recém-nascidos. / Neutropenia is frequent in newborn infants of preeclamptic mothers.Information on leukocyte activation in those newborns is scarce, but IL-8 and GRO- are the main proinflammatory cytokines involved. The aim was to study IL-8 and GRO- plasma levels in preterm newborn infants of preeclamptic mothers. Methods: Newborn infants with gestational age < 36 weeks and birth weight < 2000 grams were included and divided: non-preeclamptic and preeclamptic groups. Exclusion criteria: major congenital malformations, inborn errors of metabolism or chromosomal anomalies,STORCH infections, inborn preterm that died in the delivery room, and those whose mothers had chronic hypertension without preeclampsia. During the regular blood sample collection in the first 48 hours, a small amount was used for IL-8 and GRO- measurement by enzyme immunoassay. Chi-square, Student s t test, Mann Whitney test, Kruskal-Wallis and multiple logistic regression model were employed. Results: 119 preterm infants (64 non-preeclamptic and 55 preeclamptic). They were similar in birth weight, gestational age, Apgar scores at 5 minutes, sepsis, SDR, mechanical ventilation, TPN, NEC, intraventricular hemorrhage and death. The preeclamptic group had more neutropenia, SGA, C Section, and less rupture of membranes for > 18 hours. IL-8 was higher in the non-preeclamptic [157.1 pg/ml (86.4-261.3) e 26.54 pg/ml (3.6-87.2) p<0.001 non-preeclamptic and preeclamptic groups, respectively]. GRO-α was similar [229.5 pg/ml (116.6-321.3) and 185.5 pg/ml (63.9-306.7) p=0.236 in non-preeclamptic and preeclamptic groups, respectively]. After multiple regression analysis only absence of preeclampsia was associated with high IL-8 levels. Conclusions: Preterm newborn infants of preeclamptic mothers have a decreased plasma level of IL-8, suggesting that the leukocyte activation may be impaired in infants of preeclamptic mothers.

Objetivo - Comparar índices 3D Power Doppler (PD3D) da circulação úteroplacentária (UPC) no primeiro e segundo trimestre em pacientes que desenvolveram pré-eclâmpsia (PE) e aquelas que não fizeram e testar a hipótese de que os parâmetros da vascularização e intensidade de fluxo da placenta, tal como determinado por PD3D, são diferentes em gestações normais em comparação com pré-eclâmpsia. Método - Foi realizado um estudo observacional prospectivo usando PD3D para avaliar a perfusão da placenta em 96 gestantes que fizeram o exame ecográfico de rotina entre 11 e 14 semanas. O índice vascular (VI), o índice de fluxo (FI) e o índice de fluxo vascular (VFI) por histograma Doppler tridimensional foram calculados. Todas pacientes repetiram o exame entre 16 e 20 semanas. Após o nascimento as pacientes foram classificadas como normais ou com pré-eclâmpsia. Resultados - Os índices vasculares placentários incluindo VI, FI e VFI foram significativamente menores em placentas com PE em comparação com os controles no exame realizado no segundo trimestre (p <0,001). Não houve diferença estatística nas pacientes examinadas no primeiro trimestre. Conclusão - Nossos resultados sugerem que a avaliação de índices vasculares placentários com Power Doppler 3D no segundo trimestre tem o potencial para detectar as mulheres em risco para o desenvolvimento posterior de PE. / Objective - To compare 3D power Doppler indices (3DPD) of utero-placental circulation (UPC) in the first and second quarter in patients who developed preeclampsia and those who did not and to test the hypothesis that the parameters of vascularization and placenta flow intensity, as determined by three-dimensional ultrasound (3D) are different in normal pregnancies compared with preeclampsia. Methods - A prospective observational study using 3D power Doppler was performed to evaluate the placental perfusion in 96 pregnant women who came to do the ultrasound routine between 11 and 14 weeks. The placental vascular index (VI), flow index (FI), blood vessels and blood flow index (VFI) by three-dimensional Doppler histogram were calculated. All patients repeated the exam between 16 and 20 weeks. The outcome was scored as normal or preeclamptic. Results - The placental vascular indices including VI, FI and VFI were significantly lower in preeclamptic placentas compared with controls in the study performed in the second trimester (p <0.001). There was no statistical difference in the patients examined in the first trimester. Conclusion - Our findings suggest that 3D-Power Doppler assessment of placental vascular indices in the second trimester has the potential to detect women at risk for subsequent development of PE.

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T08:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palei_AnaCarolinaTaveiros_D.pdf: 6616764 bytes, checksum: 3e220ef5f104375086227af04101b5d6 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A pré-eclâmpsia é uma síndrome caracterizada por hipertensão associada à proteinúria. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) são enzimas zinco-dependentes que degradam vários componentes da matriz extracelular, cuja atividade é modulada pelos inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs). Uma vez que as MMP-2 e MMP-9 são fundamentais para os processos de formação e remodelamento dos tecidos feto-placentários e participam da regulação do tônus vascular, os níveis dessas enzimas podem estar alterados em desordens hipertensivas da gestação. É possível ainda que polimorfismos localizados no gene da MMP-9 possam influenciar na susceptibilidade a essas doenças. Logo, os objetivos desse trabalho foram: 1) comparar as concentrações plasmáticas de MMP-2, MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 entre grávidas saudáveis (GS), grávidas com hipertensão arterial gestacional (HAG) e com pré-eclâmpsia (PE); 2) comparar as frequências genotípicas e haplotípicas dos polimorfismos C-1562 T e (CA)n da MMP-9 entre GS, HAG e PE. E ta mbém correlacionar as concentrações de MMP-9 aos genótipos e haplótipos da MMP-9; 3) comparar as frequências genotípicas e haplotípicas desses polimorfismos entre HAG ou PE que respondem ou não à farmacoterapia com anti-hipertensivos. Inicialmente, determinaram-se os níveis de pro-MMP-9 e pro-MMP-2 no plas ma, por zimografia, e as concentrações plasmáticas de TIMP-1 e TIMP-2 nos grupos GS, HAG e PE, por ELISA. Nossos resultados revelaram um aumento da atividade líquida de MMP-9 (relação pro-MMP-9/TIMP-1) em HAG, mas em PE, comparados com GS. Em seguida, extraiu-se o DNA das voluntárias GS, HAG e PE, e determinaram-se as frequências genotípicas dos polimorfismos C-1562 T e (CA)n, por PCR seguida de eletroforese, e as frequências haplotípicas, pelo programa PHASE. Observou-se que o genótipo CT para o polimorfismo C-1562 T e o haplótipo H4 (T H) estão mais frequentes em HAG, mas não em PE, comparados com GS. Quando avaliamos as concentrações plasmáticas de MMP-9 segundo as distribuições genotípicas e haplotípicas, não se observam diferenças estatisticamente significantes nos grupos GS e PE, apesar de que o genótipo LH do polimorfismo (CA)n foi associado positivamente com a concentração de MMP-9 em HAG. Por último, determinaram-se as frequências genotípicas e haplotípicas nas pacientes HAG e PE classificadas conforme a responsividade à metildopa ou à terapia anti-hipertensiva total. Verificamos que os genótipos CT+TT estão mais freqüentes nas pacientes HAG que não respondem aos anti-hipertensivos, comparadas com as HAG responsivas, em ambas as abordagens. O haplótipo H2 (C H) está mais frequente nas HAG responsivas à terapia total, enquanto o haplótipo H4 nas HAG não-responsivas à terapia total. Além disso, verificou-se que haplótipo H2 está mais frequente nas pacientes PE que não respondem aos anti-hipertensivos em ambas as abordagens, comparadas com as PE responsivas. Portanto, nossos resultados sugerem que a MMP-9 apresenta um papel relevante na fisiopatologia da HAG e que o polimorfismo C-1562 T e o haplótipo H4 estão associados com a susceptibilidade e com a não-responsividade à terapia anti-hipertensiva dessa doença. E ainda que o haplótipo H2 está associado com a não-responsividade aos anti-hipertensivos em PE / Abstract: Preeclampsia is a syndrome characteriz ed by hypertension plus proteinuria. Matrix metalloproteinases (MMPs) are zinc-dependent enzymes that break down several extracellular matrix components, whose activity is modulated mainly by tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). Since MMP-2 and MMP-9 ar e essential for the processes of placental and uterine artery remodeling, and they can participate in vascular tone control, levels of these enzymes may be altered in hypertensiv e disorders of pregnancy. It is also possible that polymorphisms in the MMP-9 gene may influence susceptibility to t hese diseases. Thus, the objectives of this study were: 1) to compare plasma MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 concentrations among healthy pregnant (HP), pregnant women with gestational hypertension (GH) and preeclampsia (PE); 2) to compare the genotype and haplotype frequencies of MMP-9 polymorphisms (C T and (CA)n) among HP, GH and PE. And to correlate the MMP-9 concentrations with MMP-9 genotypes and haplotypes too; 3) to compare genotype and haplotype frequencies of these polymorphisms between GH or PE who respond or non-respond to pharmacotherapy with antihypertensives. To achieve our first goal, we determined the plasma pro-MMP-9 and pro-MMP-2 leve ls by zymography, and plasma TIMP-1 and TIMP-2 concentrations by ELISA in GS, HAG and PE. Ou r results showed a net increase in the MMP-9 activity (ratio pro-MMP-9/TIMP-1) in GH, but not in PE, compared with HP. Moreover, to achieve ou r second goal, we firstly extracted DNA from HP, GH and PE volunteers, and then we determined the genotype frequencies of C T and (CA)n polymorphisms by PCR followed by electrophoresis, and the haplotype fr equencies by the program PHASE. It was observed that CT genotype for the C T polymorphism and H4 haplotype (T H) are more frequent in GH, but not in PE, compared with the HP. When we evaluated plasma MMP-9 concentrations according to genotype and haplotype distributions, no statistically significant differences were observed in HP and GH groups; although the LH genotype for (CA) n polymorphism was associated significantly and positively with GH. To approach our third goal, we determined the genotype and haplotype frequenc ies in GH and PE patients classified as responsiveness to methyldopa or to glo bal antihypertensive treatment. We found -1562 -1562 -1562 that CT+TT genotypes are more frequent in GH patients who do not respond to antihypertensives in both approaches, compared with GH who respond. We also found that H2 haplotype (C H) is more common in GH women Who respond to global therapy, and that H4 hap lotype is more common in GH women who do not respond to global therapy. In addi tion, it was found he haplotype H2 are more frequent in PE patients who do not respond to antihypertensives in both approaches, compared with PE who respond. Therefore, our results suggest that MMP-9 has a role in the pat hophysiology of GH and the C T polymorphism and H4 haplotype are associ ated with susceptibility and non-responsiveness to antihypertensive treatment of this disease. While the H2 haplotype is associated with non-responsiveness to antihypertensives in PE / Doutorado / Doutor em Farmacologia

O objetivo deste trabalho foi avaliar o status de magnésio (Mg) e a sua relação com o estresse oxidativo e as citocinas inflamatórias na pré-eclâmpsia (PE). Participaram do estudo, 18 gestantes saudáveis (controle - CT) e 18 gestantes com PE, diagnosticadas com pressão arterial >= 140/90 mmHg, proteinúria >= 0,3 g/24 h e sem doenças associadas. Sangue e urina de 24 horas foram coletados para análise de status de Mg, estresse oxidativo [malondialdeído (MDA), 8-isoprostano urinário e a atividade antioxidante das enzimas catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GSH-Px)], a concentração de óxido nítrico (NO), e das citocinas inflamatórias [proteína C reativa, interleucina 6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF-&#945;)]; Foi aplicado um questionário quantitativo de frequência alimentar para gestantes. As comparações entre os grupos foram feitas pelos testes Qui-quadrado, t-Student ou Mann Whitney. O coeficiente de correlação de Spearman foi usado para verificar associação entre as variáveis. A análise do Receiver Operating Characteristic (ROC) foi realizada para identificar as variáveis que melhor discriminassem os grupos (&#945;=5%). As concentrações de Mg plasmático e eritrocitário, bem como a concentração de NO, a atividade da CAT e as concentrações de TNF-&#945; e IL-6 foram maiores na PE do que no CT. Associações positivas entre o Mg plasmático e a proteinúria (p=0,04), o TNF&#945; (p=0,03) e a IL-6 (p=0,02) foram verificadas; associações negativas foram encontradas entre a atividade da CAT e a concentração de 8-isoprostano urinário (p=0,02) e entre a atividade da GSH-Px e os níveis de pressão arterial diastólica (p=0,01). A análise ROC mostrou que o Mg plasmático e o TNF-&#945; foram as variáveis que mellhor discriminaram as gestantes com PE das CT. Os resultados mostraram que o estresse oxidativo não foi evidente na fisiopatologia da PE, possivelmente devido aos mecanismos antioxidantes compensatórios do organismo. A inflamação e os eventos inerentes à PE, como vasoconstrição, podem ter promovido as alterações no status de Mg. / The aim of this study was to assess the magnesium (Mg) status and its relationship with oxidative stress and inflammatory cytokines in preeclampsia (PE). Were included 18 healthy pregnant women (CT- control) and 18 PE, diagnosed with blood pressure >= 140/90 mmHg, proteinuria >= 0,3 g/24 h, and without other diseases. Blood and 24h urine were collected for analyses of the Mg status, oxidative stress [malondialdehyde (MDA), 8-isoprostane urinary and activities of the antioxidant enzymes: catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px)], nitric oxide (NO) and inflammatory cytokines concentrations [protein C reactive, interleukin 6 (IL-6), tumor necrosis factor-&#945; (TNF-&#945;); Furthermore, a quantitative food frequency questionnaire was applied to pregnant women. The comparisons between groups were done by Chi-square, t-Student or Mann Whitney tests. Spearman correlation coefficient was used to verify association among variables and the Receiver Operating Characteristic (ROC) analysis was performed to identify variables that better discriminated the groups (&#945; = 5 %). The Mg concentration, in plasma and in erythrocyte, as well as NO concentration, CAT activity and TNF-&#945; and IL-6 concentrations were higher in PE than CT group. Positive associations between plasma Mg and proteinuria (p=0,04), TNF-&#945; (p=0,03) and IL-6 (p=0,02) were verified; Negative associations were found between CAT activity and 8-isoprostane urinary concentration (p=0,02) and between GSH-Px activity and diastolic blood pressure levels (p=0,01). ROC analyses showed that plasma Mg and TNF-&#945; were the variables which better discriminate pregnant women with PE from CT. The results showed that oxidative stress was not evident in physiopathology of PE, possibly due to compensatory antioxidant mechanisms present in the body. The inflammatory and the events inherent to PE, such as vasoconstriction, possibly have promoted changes in Mg status.

Introdução: a adiponectina está envolvida na homeostase energética, através da regulação do metabolismo glicídico e lipídico. Adicionalmente, apresenta propriedades anti-inflamatórias e antiateroscleróticas. Polimorfismos no gene da adiponectina (ADIPOQ) podem modular as concentrações de adiponectina. A influência desses polimorfismos no desenvolvimento da hipertensão gestacional (HAG) e da pré-eclâmpsia (PE) é desconhecida. Objetivo: o objetivo deste trabalho foi analisar a influência dos polimorfismos no gene ADIPOQ sobre o desenvolvimento da hipertensão gestacional e da pré-eclâmpsia. Pacientes e métodos: Foram estudadas 401 gestantes sendo 161 grávidas saudáveis (GS), 113 com HAG e 127 com PE. Os polimorfismos do gene ADIPOQ -11391G>A (rs17300539), -11377C>G (rs266729), 45T>G (rs2241766) e 276G>T (rs1501299) foram genotipados através de discriminação alélica por reação de PCR em tempo real. Os haplótipos foram inferidos através do programa PHASE 2.1. Resultados: não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas freqüências genotípicas e alélicas dos polimorfismos estudados. Na analise dos haplótipos, observamos pequenas diferenças nas freqüências haplotípicas entre os grupos estudados, no entanto, nenhuma destas diferenças foi estatisticamente significativa (P>0,05). Conclusão: Não encontramos nenhuma associação entre as variantes genotípicas e alélicas dos polimorfismos no gene ADIPOQ com o desenvolvimento de hipertensão arterial gestacional e pré-eclâmpsia. / Introduction: adiponectin is involved in energy homeostasis by regulating glucose and lipid metabolism. Additionally, it presents anti-inflammatory and anti-atherosclerotic functions. Polymorphisms in adiponectin gene (ADIPOQ) can modulate the concentrations of adiponectin. The influence of these polymorphisms on the development of gestational hypertension (GH) and preeclampsia (PE) is unknown. Aim: The aim of this work was to examine the influence of polymorphisms in the gene ADIPOQ on the development of gestational hypertension and preeclampsia. Patients and Methods: we studied 401 pregnant women: 161 healthy pregnant (HP), 113 pregnants with gestational hypertension (GH) and 127 pregnants with preeclampsia (PE). Polymorphisms ADIPOQ -11391G>A (rs17300539), - 11377C>G (rs266729), 45T>G (rs2241766) and 276G>T (rs1501299) were genotyped by allelic discrimination by PCR in real time. Haplotypes were inferred using the PHASE 2.1 program. Results: there were no statistically significant differences in allele and genotype frequencies of the polymorphisms studied. In the analysis of haplotypes, we observed small differences in haplotype frequencies between groups, however, none of these differences was statistically significant (P> 0.05). Conclusion: we found no association between the genotypic and allelic variants of the ADIPOQ gene polymorphisms with the development of gestational hypertension and preeclampsia.

Orientador: José Eduadro Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:18:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sertorio_JonasTadeuCau_D.pdf: 15317741 bytes, checksum: 8f9e412dcb5f88fa28c13ad829f48faa (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O óxido nítrico (NO) exerce um importante papel durante as alterações hemodinâmicas que normalmente acompanham uma gravidez sadia (GS). Entretanto, em mulheres com pré-eclâmpsia (PE), uma síndrome caracterizada por hipertensão e proteinúria, a vasodilatação da circulação sistêmica materna está comprometida. Isso possivelmente ocorre devido a uma menor biodisponibilidade de NO, a qual resulta de uma menor produção e uma maior degradação do NO. Como a hemoglobina livre no plasma sequestra o NO pela rápida reação de dioxigenação, o que pode comprometer a eficiência do processo de vasodilatação mediado pela via do NO/guanilato ciclase, formulamos a hipótese de que pacientes com PE, quando comparadas com grávidas sadias, apresentariam concentrações aumentadas de hemoglobina livre no plasma, o que resultaria em maior degradação (consumo) do NO e menor biodisponibilidade de NO. Além disso, também formulamos a hipótese de que os diferentes fenótipos da haptoglobina (Hp) podem modular a biodisponibilidade de NO ao influenciar o consumo de NO na PE. A haptoglobina é uma proteína polimórfica (Hp1-1, Hp2-1 e Hp2-2) que se liga à hemoglobina para formar um complexo (Hb-Hp) que é removido da circulação, prevenindo o consumo de NO e o estresse oxidativo induzido pela hemoglobina. Os produtos do gene da haptoglobina apresentam diferentes propriedades bioquímicas e biofísicas, o que pode influenciar a taxa de eliminação (clearance) do complexo Hb-Hp. Para avaliar a biodisponibilidade de NO, foram analisadas as concentrações de nitrito no plasma e no sangue total em um analisador de NO. O consumo de NO foi determinado no plasma através do método de quimiluminescência. As concentrações de hemoglobina plasmática e haptoglobina foram analisadas com kits de imunoensaio enzimático (ELISA). Os genótipos da haptoglobina foram determinados pela Reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). Encontramos concentrações reduzidas de nitrito no plasma e no sangue total de grávidas com PE comparado com grávidas sadias. As amostras de plasma de grávidas com PE consumiram mais NO e apresentaram maiores concentrações de hemoglobina livre do que as amostras de grávidas sadias. Além disso, verificamos que há correlação positiva entre as concentrações de hemoglobina plasmática e o consumo de NO, correlação negativa entre o consumo de NO e as concentrações de nitrito plasmático e no sangue total e, por fim, correlação negativa entre as concentrações de hemoglobina livre plasmática e as concentrações de nitrito no plasma e no sangue total. Esses dados sugerem que níveis aumentados de Hb livre resultam em consumo de NO aumentado e baixo biodisponibilidade de NO em pacientes com PE, quando comparados com grávidas sadias. Não encontramos diferenças nas frequências dos genótipos da haptoglobina entre grávidas com PE e GS. Em grávidas sadias, os genótipos da haptoglobina não apresentaram efeitos nos níveis de hemoglobina livre, no consumo de NO e nas concentrações de nitrito plasmático. Entretanto, pacientes com PE e genótipos Hp2-1 e Hp2-2 apresentaram níveis aumentados de hemoglobina livre (heme), consumo de NO elevado e concentrações reduzidas de nitrito quando comparados com pacientes com PE e genótipo Hp1-1. Esses achados indicam que apesar de o genótipo da haptoglobina não afetar o risco de se desenvolver PE, o genótipo Hp1-1 possivelmente exerce um papel de proteção na PE ao reduzir o sequestro de NO, enquanto que os genótipos Hp2-1 e Hp2-2 podem agravar a PE ao reduzir a biodisponibilidade de NO / Abstract: Nitric oxide (NO) plays an important role in the hemodynamic changes found during normal pregnancy (NP). However, preeclampsia (PE), a syndrome characterized by hypertension and proteinuria, is associated with impaired vasodilatation of the maternal systemic circulation, possibly due to decreased NO bioavailability resulting of lower NO production and increased NO degradation. Since cell-free hemoglobin scavenges NO through a high speed dioxygenation reaction, thus compromising the efficiency of the NO/soluble guanylyl cyclase pathway to elicit vasodilatory activity, we hypothesized that higher plasma hemoglobin concentrations exist in patients with preeclampsia compared with normal pregnant women, and the higher plasma hemoglobin concentrations could lead to increased NO consumption and lower NO bioavailability in preeclamptic patients. Moreover, we hypothesized that haptoglobin (Hp) phenotypes might modulate NO bioavailability by influencing NO consumption in preeclampsia. Haptoglobin is a polymorphic protein (Hp1-1, Hp2-1 and Hp2- 2) that binds hemoglobin to form a complex that is removed from circulation, thus preventing Hb-driven oxidative stress and NO scavenging. Hp protein products differ in biochemical and biophysical properties, which reflects on the Hb-Hp complex clearance rate. To assess NO bioavailability, we measured plasma and whole blood nitrite concentrations using an ozone-based chemiluminescence assay. A NO consumption assay was used to measure NO consumption. Plasma hemoglobin and haptoglobin concentrations were assessed with a commercial immunoassay (ELISA). Haptoglobin genotypes were determined using Real Time Polymerase Chain Reaction. We found lower whole blood and plasma nitrite concentrations in preeclamptic patients compared with normal pregnant women. Plasma samples from preeclamptic women consumed more NO and had higher plasma Hb levels than those found in normal pregnant women. We found significant positive correlations between plasma Hb and plasma NO consumption, negative correlations between plasma NO consumption and whole blood and plasma nitrite concentrations, and negative correlations between plasma Hb and whole blood and plasma nitrite concentrations. These findings suggest that increased plasma Hb levels lead to xiv increased NO consumption and lower NO bioavailability in preeclamptic patients compared with healthy pregnant women. Furthermore, we found no differences in Hp genotype frequencies between preeclamptic and NP groups. Haptoglobin genotypes had no effects on plasma heme levels, NO consumption and plasma nitrite in normal pregnant women. However, in preeclampsia, Hp2-1 and Hp2-2 were associated with higher plasma heme levels, increased NO consumption, and lower plasma nitrite compared with Hp1-1. These findings indicate that although haptoglobin genotype does not affect the risk of preeclampsia, Hp1-1 genotype may exert a protective role in preeclampsia by reducing NO scavenging, whereas Hp2-1 and Hp2-2 may further aggravate preeclampsia by reducing NO bioavailability / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia