Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Miriam Sannomiya / Banca: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Resumo: O uso de fitoterápicos padronizados com assegurada comprovação de eficácia e segurança tem apresentado resultados terapêuticos surpreendentes em diversos países. Contudo, no Brasil, onde há grande potencial de produção de fitoterápicos devido a sua enorme biodiversidade, há deficiências na correta caracterização química das matérias-primas e escassez de ensaios farmacológicos e toxicológicos desses materiais, etapas essenciais para assegurar eficácia e segurança dos fitoterápicos. Machaerium hirtum (Fabaceae) é utilizada popularmente para o tratamento de diarréia, tosse e câncer. Um estudo químico que identifique as substâncias presentes nesta espécie e as quantifique pode fornecer subsídios para o entendimento destas atividades. A primeira etapa consistiu no isolamento das substâncias do extrato EtOH 70% das partes aéreas de M. hirtum por meio de cromatografia de permeação em gel seguida de purificação das substâncias por HPLC-RI. A identificação das substâncias foi feita por Ressonância Magnética Nuclear e por Espectrometria de Massas. O perfil químico do extrato foi estabelecido por HPLC-PDA e a quantificação das substâncias foi feita com base em suas agliconas, pelo método da calibração externa. Foi possível identificar as flavonas saponarina (8,69 ± 0,46 mg/g de extrato), isovitexina (6,44 ± 0,45 mg/g de extrato), isoorientina, que se apresentou abaixo do limite de quantificação (LOQ) e swertisina, presente no perfil cromatográfico em co-eluição com outra substância. Tais resultados são fundamentais para a padronização do extrato EtOH 70% das folhas de Machaerium hirtum / Abstract: The use of standardized phytomedicines with proven efficacy and safety has shown surprising therapeutic results in various countries. Brazil has great potential for production of herbal medicine due to its enormous biodiversity. However, there are deficiencies in the correct characterization of chemical raw materials and few reliable pharmacological and toxicological tests of these materials, essential steps to ensure efficacy and safety of herbal medicines. Machaerium hirtum (Fabaceae) is popularly used to treat diarrhea, cough and cancer. A chemical study to identify the substances present in this species may provide and quantify contributions to the understanding of these activities. The first step was the isolation of substances of 70% EtOH extract of aerial parts of M. hirtum by gel permeation chromatography followed by purification of substances by HPLC-RI. The identification of substances was performed by Nuclear Magnetic Resonance and Mass Spectrometry. The chemical profile of the extract was established by HPLC-PDA and quantification of the substances was based on their aglycones by the method of external calibration. It was possible to identify the flavones saponarin (8,69 ± 0,46 mg/g of extract), isovitexin (6,44 ± 0,45 mg/g of extract), isoorientin, which was below the limit of quantification (LOQ) and swertisin, present in the chromatographic profile in co-elution with another substance. These results are fundamental to the standardization of the crude 70% EtOH extract from the leaves of Machaerium hirtum / Mestre

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: André Luiz Meleiro Porto / Banca: Ernani Pinto Júnior / Banca: Jacqueline Aparecida Takahashi / Resumo: As macroalgas Dichotomaria marginata e Padina gymnospora foram coletadas no litoral paulista e seus microrganismos associados, Penicillium citrinum (Dm1) e Penicillium chrysogenum (Pg1), respectivamente, foram isolados e identificados. Os microrganismos foram cultivados em arroz parboilizado estéril e as culturas obtidas foram extraídas com acetato de etila e submetidas a partição. A fração FMeCN de cada extrato foi submetida às técnicas cromatográficas a fim de isolar os metabólitos secundários. Os extratos das macroalgas foram submetidos a partição e as frações resultantes submetidas a estudo químico por CLAE-DAD, CLAE-DAD/EMIES e RMN 1H. A comparação dos perfis cromatográficos das frações obbtidas das macroalgas permitiu uma abordagem qualitativa dos constituintes por gerar informações sobre a composição química das macroalgas em estudo. Os ácidos graxos foram analisados nas frações apolares das macroalgas e microrganismos associados por CG-EM e resultou na identificação de 27 substâncias nas frações hexânicas das macroalgas, sendo 19 da D. marginata e 8 da P. gimnospora, enquanto para os microrganismos, 32 substâncias foram identificadas, sendo 16 de P. citrinum e 16 de P. chrysogenum. A fração em MeCN de P. citrinum forneceu 17 substâncias, sendo 4 alcaloides quinolizidínicos: citrinadina A (1), citrinadina B (2), 18- desidroxi-citrinadina B (3), chrisogenamida (4); 4 alcaloides quinolactínicos: quinolactinas A (11), B1/B2 (12), B (13) e D (14) e 9 policetídeos: dicitrinina A (5), 1,5-dihidroxi-2-metil-3-(1-metil-2-hidroxi)-propilbenzeno (6), esclerotinina A (7), descarboxidihidrocitrinona (8), 1-carboxi-8-hidroxi-6-metilxantona éster metílico (9), ácido linoléico (10), ácido italícico (15), citrinina (16), e 1,3,8-tri-hidroxi-6- (hidroximetil)antraceno-9,10-diona (17). Adicionalmente, 9 substâncias foram obtidas a partir de P. chrysogenum, sendo 3... / Abstract: Macroalgae Dichotomaria marginata and Padina gymnospora were collected at Sao Paulo State shore and their associated microrganisms, Penicillium citrinum (Dm1) and Penicillium chrysogenum (Pg1), respectively, were isolated and identified. The microorganisms were cultivated in sterile parboilized rice and the resulting cultures were extracted with ethyl acetate and submitted to partitioning. Fraction FMeCN of each extract was submitted to chromatography aiming at the isolation of secondary metabolites. The macroalgae extracts were submitted to partitioning and the resulting fractions were analyzed by HPLC-DAD, HPLC-DAD-MS/ESI and 1H NMR. The chromatographic profile comparison for the resulting fractions from macroalgae allowed the qualitative assessment of the chemical constituents, and afforded information on the chemical composition of the macroalgae. Fatty acids were analysed in the low polarity fractions of the macroalgae and microrganisms extracts by GC-MS and resulted in the identification of 27 compounds from the hexane fractions of macroalgae, including 19, from D. marginata, and 8, from P. gimnospora, whereas 32 fatty acids were identified from the microorganisms, including 16 from P. citrinum and 16, from P. chrysogenum. Fraction in MeCN from P. citrinum afforded 17 compounds: 4 quinolizidine alkaloids: citrinadin A (1), citrinadin B (2), 18-dehydroxy-citrinadin B (3), chrysogenamide (4); 4 quinolactin alkaloids: quinolactins A (11), B1/B2 (12), B (13) and D (14), and 9 poliketides: dicitrinin A (5), 1,5-dihydroxy-2-methyl-3-(1-methyl-2-hydroxy)-propylbenzene (6), esclerotinin A (7), decarboxydihydrocitrinone (8), de 1-carboxy-8-hydroxy-6- methylxanthone methyl ester (9), linoleic acid (10), italicic acid (15), citrinin (16), e 1,3,8-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)antracene-9,10-dione (17). Aditionally, 9 compounds were obtained from P. chrysogenum, 3 nucleotides: adenosine (18)... / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Adriano Defini Andricopulo / Banca: Ian Castro-Gamboa / Banca: Flávio da Silva Emery / Banca: Norberto Peporine Lopes / Banca: Sylvie Michel / Resumo: Os produtos naturais são uma importante fonte de inspiração para o desenvolvimento de novos fármacos. O presente trabalho visou identificar produtos naturais bioativos que pudessem ser usados como modelo para o planejamento de novos compostos com propriedades antitumorais. A falta de dados organizados é ainda uma das dificuldades das áreas de produtos naturais e química medicinal. Portanto, a compilação de dados disponíveis sobre os metabólitos secundários sejam de espécies vegetais ou de outras fontes é de grande valor. Esse fato nos motivou a propor como primeiro objetivo deste projeto, a criação de uma base de dados contendo informações botânicas, químicas e biológicas dos metabólitos secundários obtidos e publicados pelo NuBBE durante 15 anos. A base de dados poderá ser útil não apenas para a pesquisa em química de produtos naturais atual do grupo, mas para todos interessados em estudos de planejamento de moléculas bioativas, metabolômica e dereplication, já que está disponível para acesso livre na internet. Um artigo científico descrevendo a criação da base de dados foi publicado na revista Journal of Natural Products em 2013. Os compostos da base de dados foram utilizados como fonte de moléculas para uma triagem virtual baseada na estrutura do receptor com a proteína tubulina para a identificação de moduladores dessa proteína. Baseado nos resultados de triagem virtual foi realizada a avaliação biológica in vitro das substâncias utilizando a proteína tubulina e ensaios de migração celular (wound healing e câmara de Boyden). Os ensaios biológicos indicaram uma série de guanidinas e a piplartina como principais compostos bioativos dentre os avaliados. A piplartina foi selecionada como modelo para o planejamento de novos compostos, pois apresentou relevante inibição de migração celular, além de estar descrito na literatura como citotóxico e... / Abstract: Natural products are an important source for the design of new drugs. This thesis aimed at the identification of bioactive natural products to be used as models for the design of compounds with antitumor properties. The lack of organized data is still one of the drawbacks in the natural products and medicinal chemistry area. Therefore, the compilation of accessible data of secondary metabolites from plant species or other sources is of great value, especially for the identification of molecular leads. This fact inspired us to propose as first objective of this thesis, the creation of the NuBBE database (NuBBEDB) containing botanical, chemical, and biological information of the secondary metabolites obtained and published by NuBBE in 15 years. This database can be useful not only for the current research in natural products of the group, but for the scientific society interested in bioactive compounds, metabolomics, and dereplication. A scientific paper describing the creation of the database was published in the Journal of Natural Products in 2013. NuBBEDB compounds were used as molecular source for the virtual screening with the protein tubulin. Based on the results of the virtual screening the biological evaluation of selected compounds was performed with the protein tubulin, and cell migration assays (Wound Healing and Boyden Chamber). The results of the biological assays indicated a series of guanidines and piplartine as active compounds. Piplartine was selected to be a model for the design of new compounds because it inhibited cell migration and is described in the literature as cytotoxic and selective, an interesting profile for this project. A series of 5 analogue compounds were designed and synthesized aiming at a better understanding of structure activity relationship and improvement of the biological activity. The compound designed by molecular simplification showed activity in the cell... / Doutor

Orientador: Guiseppina Pace Pereira Lima / Banca: Celina Maria Henrique / Banca: Selma Dzimidas Rodrigues / Resumo: Este trabalho objetivou determinar e comparar os teores de fibras e lipídios, de putrescina, espermidina e espermina, além de fenóis totais e flavonóides totais solúveis em partes de vegetais produzidos de forma orgânica e convencional, geralmente descartadas no preparo de alimentos, porém algumas vezes utilizados no consumo. Os alimentos foram adquiridos de produtores orgânicos certificados ou convencionais da região de Botucatu/SP. As análises foram realizadas em cascas (abóbora, banana, batata, berinjela, laranja, limão, manga, maracujá, rabanete), folhas (abóbora, brócolis, cenoura, couve, mandioca, rabanete e uva), talos (brócolis, couve e espinafre) e semente de abóbora. Os resultados mostraram que sementes de abóbora e talos de brócolis cultivados de forma convencional apresentaram maior teor de fibras. Cascas de banana e laranja orgânicos apresentaram maior teor de lipídios. Já as cascas de limão e rabanete, folhas de brócolis e mandioca e talos de couve, brócolis e espinafre não apresentaram dados que mostrem diferenças significativas entre si quanto ao teor de lipídios. A maior parte dos vegetais analisados mostrou uma tendência em apresentar teor mais elevado de poliaminas e fenóis totais em alimentos oriundos do cultivo orgânico ao contrário do observado para os flavonóides totais, possivelmente em função das práticas culturais adotadas durante o cultivo. A ingestão de alimentos vegetais contendo alto teor de poliaminas e compostos fenólicos devem ser cuidadosamente analisados como possível modulação de seqüelas patológicas. Grande parte dos alimentos geralmente descartados pelos consumidores é desperdiçada quanto ao seu valor nutricional. / Abstract: The objective of this work was to determinie and comparie fibers and lipids, the contents of putrescine, spermidine and spermine, besides soluble total fenols and flavonoids in vegetables parts that grown in organic and conventional cultures, commonly discharged in food preparation, however, sometimes used in the consumption. The plants were obtained from certified organic or conventional producers of Botucatu/SP region. The analyses were made in skin (squash, banana, potato, eggplant, orange, lemon, mango, passion fruit, radish), leaves (squash, broccoli, carrot, kale, cassava, radish and grape), stems (broccoli, kale and spinach) and squash seeds. The results showed that squash seeds and broccoli stems from conventional culture presented higher fiber content. Organic banana and orange skins had higher lipids content. Lemon and radish skins, broccoli and cassava leaves and kale, broccoli and spinach stems presented no data showing significant differences for lipid content. Most of the analyzed vegetables tended to present higher content of polyamines and total fenols in organic culture, opposite to what was observed for total flavonoids, possibly due to the practices used during the culture. The ingestion of vegetables with high contents of polyamines and fenols compounds must be carefully analyzed as possible modulation of pathologic sequels. A great deal of food usually discharged by consumers is lost as for their nutritional value. / Mestre

Orientador: Mirtes Costa / Banca: Maria Cristina Pereira Lima / Banca: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Resumo: Adepressão e as desordens de ansiedade são distúrbios psiquiátricos de alta prevalência, cuja falta ou o tratamento inadequado acarretam um impacto negativo expressivo na vida social, física e mental do individuo. Historicamente, depressão e ansiedade são clinicamente consideradas desordens separadas e distintas, predominantemente devido aos diferentes tratamentos utilizados, usualmente os antidepressivos tricíclicos e os benzodiazepínicos, respectivamente. Entretanto, muitos estudos clínicos têm demonstrado uma grande sobreposição entre esses dois estados e vários antidepressivos são também utilizados no tratamento da ansiedade. Porém, mesmo com o arsenal terapêutico disponível, muitos portadores destes transtornos não respondem ao tratamento, a terapêutica efetiva leva algumas semanas para manifestar seus efeitos e estes são muitas vezes acompanhados por efeitos adversos. Neste contexto, as plantas medicinais desempenham um importante papel na busca de novos compostos, mais eficazes e seguros para o tratamento dessas desordens. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade do óleo essencial obtido da espécie Rosmarinus offi.cinalis L. em modelos experimentais clássicos de depressão (Teste do Nado Forçado), transtorno de ansiedade generalizada (Labirinto em Cruz Elevado) e Transtorno Obsessivo Compulsivo (Teste de Esconder Esferas). Os resultados são promissores, pois o óleo essencial demonstrou ser ativo na dose de 500 mglkg no Teste do ado Forçado e no Teste de Esconder Esferas, sem apresentar indícios de alterações sobre o sistema motor no Teste da Barra Giratória. Não foi observada atividade no modelo de ansiedade generalizada. O conjunto de resultados sugere a presença de efeito compatível com atividade sobre a depressão e sobre o transtorno obsessivo compulsivo. A continuidade deste estudo objetivará o esclarecimento do mecanismo de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Depression and anxiety are psychiatric disorders of high prevalence. Lack or inappropriate treatment has a significant negative impact on person' s social and physical life as well as on mental well-being. Historically, depression and anxiety were considered separated and distinct disorders in the medical concept, due to different approaches usually used for their treatment, such as tricyclic antidepressants and benzodiazepines, respectively. However, many clinical studies have shown a great overlapping between these two states and many antidepressants are also used for the treatment of anxiety. Although a wide range of therapeutic drugs is available, many patients do not respond to the antidepressant treatment. Some weeks are required for an effective therapeutic response and treatment effects are usually accompanied by unwanted side-effects. Thus, attempts in order to find new, more effective and safe treatment options are necessary. ln this perspective, medicinal plants play an important role on the research of new drugs for treatment of these disorders. The objective ofthis paper was to evaluate the effect of essential oil obtained from Rosmarinus officinalis L. in c1assical experimental models of depression (Forced Swimming Test), generalized anxiety disorder (Elevated Plus Maze) and obsessive-compulsive disorder (Marble Burying Test). Our results are promising, such essential oil was active at 500 mglkg in the Forced Swimming Test and in the Marble Burying Test, without impairment upon the motor system, evaluated in the Rota-rod Test. There was no observed activity in the experimental procedure to generalized anxiety. Data analysis suggests the presence of depression and obsessivecompulsive disorder-like effects. The continuity of this study will intend the elucidation of action mechanisms, pharmacokinetic parameters and toxicity of essential oil form Rosmarinus officinalis L. / Mestre

Orientador: Marcia Nasser Lopes / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: Ana Helna Januário / Resumo: O projeto proposto tem como objetivo principal a obtenção de substâncias bioativas a partir do estudo químico/biológico dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos Pg-1, Lasiodiplodia sp. (Pg-2) e Pg-3, os quais foram isolados da alga parda Padina gymnospora. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida em meio de arroz (cultura sólida) fornecendo os respectivos extratos brutos. Nestes extratos avaliou-se a produção metabólica a partir das análises em CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e foram submetidos à bioensaios para avaliar a potencialidade antifúngica e anticolinesterásica, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O endófito selecionado para estudos posteriores (Lasiodiplodia sp.) cultivado em arroz, forneceu o extrato bruto em acetonitrila. O extrato bruto em acetonitrila foi fracionado em coluna de sílica gel de fase normal, resultando em treze frações, as quais foram avaliadas quanto ao seu perfil cromatográfico e químico em CCDC e RMN de 1H, respectivamente. O fracionamento realizado em cromatografia de coluna aberta, resultou no isolamento de uma substância pura a partir da fração L. sp-Fr80:20, sendo identificada como meleina (1). Isolou-se duas substâncias, lasiodiplodina (2) e des-Ometil- lasiodiplodina (3) por CCDC preparativa a partir da fração L. sp-Fr70:30. As substâncias foram elucidadas pela análise dos espectros de RMN de 1H 1D e 2D, espectros de RMN de 13C e pela espectrometria de massas (EM-ESI), sendo este o primeiro relato da identificação de isocumarinas e lactonas a partir de fungos endofíticos associados à alga marinha Padina gymnospora / Abstract: The project proposed has as main objective to obtain bioactive substances from the chemical/biological study of crude extracts produced by endophytic fungi Pg-1, Lasiodiplodia sp. (Pg-2) and Pg-3, isolated from brown seaweed Padina gymnospora. These endophytes were cultivated in a small scale in the middle of rice (solid culture) providing the respectives crude extracts. In these extracts were evaluated the metabolic production by CCDC, HPLCDAD and 1H NMR analyzes and were submitted to bioassays to evaluation the antifungal and acetylcholinesterase potential, where these extracts showed promising. The endophyte selected for further studies (Lasiodiplodia sp.) was grown on rice, provided the acetonitile crude. The EtOAc crude was fractionated on a column of normal silica gel phase, resulting in thirteen fractions, which were evaluated for their chemical and chromatographic profile of CCDC and 1H NMR, respectively. The fractionation carried out in an open column chromatography, resulted in the isolation of a pure substance from the fraction L.sp, Fr80:20, identified as mellein (1). Two compounds, lasiodiplodin (2) and des-O-methyllasiodiplodin (3) was isolated by preparative TLC assay from the fraction L.sp-Fr70:30. The products were elucidated by analyzing the NMR spectra 1H 1D and 2D NMR spectra and 13C by mass spectrometry (ESI-MS), and this is the first report of isocumarinas and lactones were isolated from endophytic fungi associated with seaweed Padina gymnospora / Mestre

Orientador: Edivaldo Domingues Velini / Banca: Caio Antonio Carbonari / Banca: Maria de Lourdes Bueno Trindade Galo / Banca: Ricardo Luis Araujo Dias / Banca: Antonio Luiz Cerdeira / Resumo: A qualidade da água de muitos corpos hídricos superficiais tem sido comprometida devido à ocorrência de florações de cianobactérias tóxicas. Muitas espécies, incluindo a Microcystis aeruginosa produzem toxinas naturais, como as microcistinas, que geram grandes riscos ambientais e à saúde pública. Assim, a adoção de medidas que visem o controle das florações é necessária. O presente trabalho tem como objetivo avaliar o efeito de diferentes tipos de substâncias e biomassas foliares sobre o desenvolvimento de M. aeruginosa e na produção de microcistina LR, tendo em vista a necessidade de produzir informações que possam subsidiar programas de manejo de florações. Dentre os compostos testados, o diquat, o diuron e o sulfato de cobre foram mais efetivos em reduzir o teor de clorofila α e o acúmulo de microcistina LR. Nos estudos com teor inicial de clorofila α de 0,5mg L-1 o diquat demonstrou elevado potencial de controle de M. aeruginosa nas concentrações de 0,1 e 0,2mg L-1. O diuron foi mais efetivo em reduzir os teores de microcistina LR total do que em reduzir os teores de clorofila α, apresentando reduções nos teores de microcistinas LR superiores a 75% em todas as concentrações avaliadas. O sulfato de cobre utilizado na concentração de 0,2mg L-1 foi efetivo na redução dos teores de clorofila α e microcistina LR total. Para esses compostos, a eficiência foi menor quando a aplicação ocorreu em unidades experimentais com clorofila α (3,34mg L-1). Porém, ficou evidente que mesmo se os compostos controlassem efetivamente a M. aeruginosa, reduzindo o teor de clorofila α, a microcistina LR seria preservada e liberada na água, portanto, o controle deve ser feito precocemente para evitar que grandes quantidades da ... / Abstract: The water quality of many surface water bodies have been compromised due to occurrence of toxic cyanobacterial blooms. Many species, including Microcystis aeruginosa produce natural toxins, such as microcystins, which offer high risks to the environment and public health. Therefore, the adoption of measures to control blooms is required. This research aims to evaluate the effect of different types of substances and foliar biomass on the development of M. aeruginosa and producing microcystin-LR, in view of the need to produce information that can support blooms management programs. Effects of organic compounds, with or without known herbicide action, inorganic compounds biomass of Brazilian tree native species and green manure were evaluated on chlorophyll-α content and accumulation of microcystin-LR in M. aeruginosa. Among the tested compounds diquat, diuron and copper sulfate were most effective in reducing chlorophyll-α content and microcystin-LR accumulation. In studies with initial chlorophyll content of 0.5 mg L-1 diquat showed high potential to control M. aeruginosa at concentrations of 0.1 and 0.2 mg L-1. Diuron was more effective in reducing the total microcystin-LR content than ... / Doutor

Resumo: O presente trabalho avaliou a citotoxicidade in vitro de produtos naturais (terpenos, iridóides e derivados fenólicos) em linhagens celulares de adenocarcinoma murino de mama (LM3) e de pulmão (LP07), buscando uma possível correlação entre estrutura molecular e atividade antitumoral. A ordem de citotoxicidade na linhagem LM3 foi tingenona> pristimerina> plumericina> cromeno> paclitaxel> escandenina> acetato de bauerenila> ácido p-cumárico> ácido clorogênico. Na linhagem LP07, a exceção é a inversão de posição entre os ácidos clorogênico e p-cumárico e escandenina e paclitaxel. Pristimerina, tingenona, plumericina e o cromeno foram mais ativos que o controle positivo, taxol. Os nor-triterpenos pentacíclicos quinonametídeos tingenona (IC50=0,002 μmol/mL em LP07 e 0,003 μmol/mL em LM3) e pristimerina (IC50=0,005 μmol/mL em LP07 e LM3) apresentaram a maior citotoxicidade nas linhagens tumorais. A avaliação da relação estrutura e atividade indicaram os anéis A e B essenciais para o efeito citotóxico, devido à cetona ,ß-insaturada. A interação de pristimerina e tingenona com N-acetilcisteína foi confirmada por métodos espectrofotométricos e biológicos, constituindo um provável mecanismo de ação das substâncias. A atividade mutagênica das moléculas mais promissoras, pristimerina, tingenona e plumericina foi avaliada in vitro na presença e ausência de ativação metabólica (S9) e não demonstraram mutagenicidade (RM<2). / Abstract: This study evaluates the in vitro cytotoxicity of natural products such as terpenes, iridoids, and phenolic derivatives in the cell lines of adenocarcinoma murine of the breast (LM3) and lung (LP07). The study attempted to identify possible correlations between the molecular structure of these natural products and anticancer activity. The sequence for cytotoxic activity in the LM3 line was tingenone> pristimerin> plumericine> cromene> paclitaxel> scandenin> bauerenyl acetate> p-coumaric acid> chlorogenic acid. This sequence was similar to the LP07 cell line, however the exception was the inverse order between clorogenic and p-coumaric acid and between scandenine and taxol. Pristimerine, tingenone, plumericine and cromene were more potent than taxol, the positive control substance in this study in all cell lines. The quinone-methide triterpene tingenone (IC50=0,002 μmol/mL in LP07 and 0,003 μmol/mL in LM3) and pristimerin (IC50=0,005 μmol/mL in LP07 and LM3) showed the largest level of cytotoxicity in the cell lines. The structure-activity relationship suggests that rings A and B containing an , ßunsaturated carbonyl group are essential for the observed cytotoxic activity. The interaction between pristimerin and tingenone with N-acetilcysteine was proved by byological and spectrophotometric methods, estabilishing a likely action mechanism to these compounds. The in vitro mutagenic activity was evaluated for the most promising compounds: pristimerine, tingenone and plumericine, and they did not show mutagenic potential (RM<2). / Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Chung Man Chin / Banca: Dionéia Camilo Rodrigues de Oliveira. / Mestre

Resumo: Este trabalho trata da caracterização química de espécies de plantas brasileiras usadas no tratamento de disfunções gástricas. Nossa proposta envolve a investigação de extratos orgânicos polares e infusões por técnicas analíticas. Extração em fase sólida (SPE) e/ou extração líquido-líquido (LLE) foram utilizadas na etapa de clean-up para que açúcares livres e oligômeros de proantocianidinas fossem separados da matriz vegetal bruta. As amostras pré-tratadas foram então analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HLPC) acoplada com detector de arranjo de fotodiodos (PAD) ou por espectrometria de massas em tandem acoplado a um ion trap com interface de ionização por electrospray, usando o modo de inserção direta da amostra (FIA-ESI-IT-MS). Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários de plantas pertencentes às famílias Dilleniaceae (Davilla elliptica e D. nitida: flavonóides, catequinas, isoprenóides e ácidos fenólicos), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catequinas, ácidos fenólicos, procianidinas e oligômeros de procianidinas C-glucosiladas) e Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia e B. intermedia: flavonóides, biflavonóides, ácidos fenólicos, oligômeros de proantocianidinas e ácidos galoilquínicos). A determinação quantitativa dos principais metabólitos secundários também foi realizada, permitindo então a completa caracterização da composição química dos extratos de plantas. Assim, nossa proposta levou a uma caracterização química rápida e eficiente de espécies de plantas brasileiras usadas na medicina popular como antiúlcera. Estes resultados são úteis para um melhor entendimento das atividades farmacológicas das espécies de plantas acima mencionadas. / Abstract: This work deals with the chemical characterization of Brazilian plant species used to treat gastric disfunctions. Our approach involved the investigation of organic polar extracts and infusions by using analytical techniques. Solid-phase extraction (SPE) and/or liquid-liquid extraction (LLE) were used in the clean-up step, so that free sugars and proanthocyanidin oligomers were separated from the bulk of the vegetable matrix. The pre-treated samples were then analyzed by using high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to photodiode array (PAD) detector or by direct flow analysis - electrospray ionization - ion trap - tandem mass spectrometry (FIA-ESI-IT-MS). This strategy allowed to recognize the secondary metabolites from plants belonging to the families Dilleniaceae (Davilla elliptica and D. nitida: flavonoids, catechins, isoprenoids and phenolic acids), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catechins, phenolic acids, procyanidins and C-glycosilated procyanidins oligomers) and Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia and B. intermedia: flavonoids, biflavonoids, phenolics acids, proanthocyanidins oligomers and galloylquinic acids). Quantitative determination of the main secondary metabolites was also performed, thus allowing to fully characterization of the chemical composition of plant extracts. Thus, our approach led to a fast and efficient chemical characterization of Brazilian plant species used in folk medicine as antiulcer. These results are useful to the better understanding of the pharmacological activities of the above mentioned plant species. / Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Ian Castro-Gamboa / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Adriana Zerlotti Mercadante / Banca: Claudia Andréa Lima Cardoso / Doutor

Orientador: Maysa Furlan / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Marcos Pivatto / Resumo: O perfil químico de folhas e frutos de Piper fuligineum foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência. A composição química de média polaridade dos dois órgãos vegetais apresentou semelhança. As análises demonstraram também que os frutos apresentavam composição química complexa, principalmente devido a presença de substâncias de maior polaridade. Essas análises permitiram selecionar as folhas de P. fuligineum para dar continuidade aos estudos químicos. Estes estudos resultaram no isolamento de cinco substâncias, sendo duas kavalactonas: (E)-6-(8-feniletil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona e 6-(2-fenil-7,8-diidroxetil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona; uma cromanona: (2,2-dimetil-4-oxocromano-6-carboxilato de metila) e dois derivados prenilados do acido benzoico: 4-hidroxi-3-(3-metilbutil-2-en-1-il)benzoato de metila e 4-metoxi-3-(3-metil-1-oxobut-2-en-1-il) benzoato de metila. As estruturas químicas das substâncias foram determinadas utilizando técnicas espectrométricas, incluindo RMN 1D e 2D. Todas as substâncias estão sendo descritas pela primeira vez em Piper fuligineum. A substância 4 é inédita como produto natural. O extrato etanolico das folhas e as frações obtidas de P. fuligineum foram avaliadas quanto ao potencial tripanocida frente à forma epimastigota da cepa Y de Trypanosoma cruzi, mostrando promissora atividade do extrato etanólico com IC50 de 26,67 g.mL-1 quando comparado com o controle positivo, benznidazol, com IC50 de 11,11 g.mL-1. O extrato acetato de etila, a fração clorofórmica e a substância 1 foram submetidos a testes antifúngicos frente aos fungos Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans. O extrato apresentou forte atividade frente ao fungo Candida tropicalis e moderada atividade frente aos fungos C. krusei, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans, enquanto a fração clorofórmica apresentou forte atividade frente ao... / Abstract: The chemical profile of leaves and fruits of Piper fuligineum was analyzed by high performance liquid chromatography. The chemical composition of medium polarity related to leaves and fruits showed great similarity. The analysis also showed that the chemical composition of the fruits was more complex, mainly due to the presence of more polar substances. These analyzes allowed the selection of the leaves of P. fuligineum to continue the chemical studies. The chemical studies of the leaves of Piper fuligienum resulted in the isolation of six compunds, including two kavalactones (4- methoxy-6- [(E)-2-phenyl -vinyl] -2H-pyran-2-one and 6-(1,2-dihydroxy-2-phenyl- ethyl)-4-methoxy-2H- pyran-2-one), one chromanone (methyl-2,2-dimethyl-4-oxo-6- cromanacarboxylate) and two prenylated derivatives of benzoic acid (methyl-4-hydroxy-3-(3-methyl-2- buten-1-yl) benzoate and methyl-4-methoxy-3-(3-methyl -2-butenoyl) benzoate. The chemical structures of the isolated compounds were determined using spectrometric techniques, including 1D and 2D NMR. All compounds were described for the first time in Piper fuligineum, and the compound 4 is a new natural product. The ethanolic leaf extract and fractions obtained from P. fuligineum were evaluated for trypanocidal potential against epimastigote form of Trypanosoma cruzi Y strain, showing promising activity of the ethanol extract with IC50 of 26.67 g.mL-1 compared with the positive control benznidazole, with IC50 of 11.11 g.mL-1. The ethyl acetate extract, the chloroform fraction and substance 1 underwent antifungal drugs against fungi Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast. The extract showed strong activity against the fungus Candida tropicalis and moderate activity against fungi C. krusei, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast while the chloroform fraction showed strong activity against the fungus C. krusei, and moderate activity against... / Mestre