Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:38:29Z : No. of bitstreams: 1 moura_acs_me_araiq.pdf: 1236232 bytes, checksum: a709145cb5de5a7efb7d91cdfaf1362f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As plantas medicinais utilizadas no tratamento de diversas doenças são fontes de uma infinidade de novas moléculas de interesse para a humanidade. Este trabalho investigou a composição química das partes aéreas do chá e do extrato metanólico de Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularmente conhecida como “anileira” e encontrada no Cerrado brasileiro. O chá foi fracionado por cromatografia de permeação em gel e cromatografia líquida de média pressão, tendo-se isolado: kaempferol, ácido protocatecuico, kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo, triptofano e uracila. O extrato metanólico foi fracionado por cromatografia líquida de alta pressão, que possibilitou o isolamento de: ácido gálico, galato de metila, rutina e kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo. As substâncias foram identificadas por técnicas espectroscópicas (UV, IV e RMN) e as estruturas confirmadas pelo uso da técnica acoplada de HPLC-DAD-ESI-MS. O chá, extrato metanólico e as substâncias isoladas foram avaliados quanto à atividade antioxidante, utilizando-se DPPH. O extrato metanólico apresentou significativa atividade antioxidante, enquanto que o chá não apresentou atividade antioxidante considerável, quando comparados com o padrão ácido gálico. Das substâncias isoladas, o galato de metila apresentou a maior atividade antioxidante. O chá de I. hirsuta foi também avaliado quanto à atividade gastroprotetora em lesões induzida por etanol absoluto em 3 diferentes doses: 125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 e 500 mg.Kg-1, sendo a menor dose a que apresentou melhor efeito. Contudo, o chá de Indigofera hirsuta não apresentou atividade gastroprotetora / Medicinal plants used in the treatment of various diseases and are source of many new molecules. This work investigates the chemical composition of the aerial parts of the infusion and methanol extract of Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularly known as “anileira” and found in the Brazilian Cerrado. The infusion was fractionated by gel permeation chromatography and medium pressure liquid chromatography, it was possible to isolate kaempferol, protocatecuic acid, kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside, tryptophan and uracil. The methanol extract was fractionated by high pressure liquid chromatography, which allowed the isolation of gallic acid, methyl gallate, rutin and kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside. The substances were identified by spectroscopic techniques (UV, IR and NMR) and confirmed by the use of HPLC-DAD-ESI-MS coupling. The infusion, methanol extract and isolated compounds were evaluated for their antioxidant activity using DPPH. The methanol extract showed significant antioxidant activity, while the tea did not show significant antioxidant activity, when compared to gallic acid. Among the isolated substances methyl gallate presented the highest antioxidant activity. The I. hirsuta was also evaluated for its gastroprotective activity in lesions induced by absolute ethanol in 3 different doses (125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 and 500 mg.Kg-1).The lowest dose showed the best effect. However, the infusion not active gastroprotective

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-19Bitstream added on 2014-06-13T19:17:29Z : No. of bitstreams: 1 rufino_mp_me_araiq.pdf: 1110353 bytes, checksum: 9bb9216deecca225472f5b669375aabc (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho objetivou a identificação dos metabólitos secundários, em especial a classe das dicetopiperazinas, produzidos pelo fungo endofítico Colletotrichum sp. isolado dos caules de Senna spectabilis. O fungo foi cultivado em diversos meios líquidos (MDB, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) fornecendo os respectivos extratos brutos. Estes extratos foram submetidos à CCDC, CLAE-DAD e RMN 1H para avaliação da produção metabólica e a bioensaios para avaliar a potencialidade antifúngica e anticolinesterásica. Os resultados obtidos indicaram o meio de MDB como o melhor meio para cultivo do endófito em escala ampliada, cujo extrato obtido foi fracionado por cromatografia em coluna. As 12 frações obtidas foram submetidas a CLAE-DAD e RMN 1H, sendo escolhida a Fração 01 para refracionamento. A partir das subfrações foram identificadas 3 dicetopiperazinas (ciclo(Pro-Val), ciclo(Pro-Phe) e ciclo(Pro-Tyr)). A Fração 01 também foi submetida à desreplicação utilizando a técnica de simulação de espectro de RMN de 1H com o auxílio do software MestreNova®, e posteriormente á espectrometria de massas, o que possibilitou a identificação de 5 dicetopiperazinas (ciclo(Pro-Ala), ciclo(Pro-Ile) ou ciclo(Pro-Leu), ciclo(Val- Phe), ciclo(Pro-Pro) e ciclo(Hyp-Ile)) e da uracila / This study aimed to identify the secondary metabolites, in particular the class of diketopiperazines produced by the endophytic fungus Colletotrichum sp. isolated from stems of Senna spectabilis. The fungus was cultivated in differents liquidi culture media (PDB, YM, Malt Extract, Nutrient and Czapek) providing the respective crude extracts. These extracts were submitted to CCDC, HPLC-DAD and 1H NMR for metabolic production and evaluation of bioassays to assess the potential antifungal activity and acetylcholinesterase inhibition. The results indicate the PDB as the best medium for the endophyte growth on a large scale, whose extract was fractionated by column chromatography. The 12 fractions were obtained and subjected to HPLC-DAD and 1H NMR. The Fraction 1 was again subjected to fractionation by column chromatography and was identified 3 diketopiperazine (cyclo(Pro-Val), cyclo(Pro-Phe) and cyclo(Pro-Tyr)). The Fraction 01 also underwent dereplication using the simulation technique of 1H NMR spectrum with the aid of software MestreNova®, and later to mass spectrometry, which enabled the identification of 5 diketopiperazines (cyclo(Pro-Ala), cyclo(Ile-Pro) or cyclo(Leu- Pro), cyclo(Val-Phe), cycle(Pro-Pro) and cyclo(Hyp-Ile)) and uracil

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-20Bitstream added on 2014-06-13T18:58:41Z : No. of bitstreams: 1 gubiani_jr_me_araiq.pdf: 4375602 bytes, checksum: ebf0911b0c298d741ce239b8375476b9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A busca por novos produtos para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas é um processo que requer otimização contínua. Apesar dos avanços nos processos envolvidos no planejamento racional de fármacos, incluindo química combinatória e ensaios em larga escala, os produtos naturais constituem a estratégia de maior sucesso para a descoberta de novas drogas. Sendo assim, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico do extrato metanólico produzido pelo fungo endofítico Camarops sp. isolado das folhas de Alibertia macrophylla (Rubiaceae). O endófito Camarops sp. foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio de cultivo sólido milho, por 21 dias a temperatura ambiente no modo estático. Os extratos metanólico e acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante, anticolinesterásica e anticancerígena. Os resultados evidenciaram extrato e frações com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos principalmente contra a inibição da enzima acetilcolinesterase. O extrato acetonitrila foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação e determinação estrutural de oito substâncias, sendo estas, (S)-mevalonolactona (1), para-hidroxibenzaldeído (2), Ácido (E)-5-(1-hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-carboxílico (3), azepan-2-ona (4), xylarenona D (5), xylarenona F (6), xylarenona G (7), sendo as duas últimas substâncias inéditas, e xylarenona C (8). Este é o primeiro relato de mevalonolactona obtida de fungo endofítico, substância esta muito utilizada para... / The search for new products to the pharmaceutical and agrochemical industry is a process that requires continuous optimization. Despite advances in the processes involved in rational planning of drugs, including combinatorial chemistry and tests in large scale, the natural products constitute the most successful strategy for the discovery of new drugs. Thus, this work was idealized aiming the obtaining of potentially bioactive substances from the chemical and biological study of methanolic extract produced by the endophytic fungus Camarops sp. isolated from the leaves of Alibertia macrophylla (Rubiaceae). The endophyte Camarops sp. was cultivated in large scale using maize solid culture medium for 21 days at room temperature in the static mode. The methanolic and acetonitrile extracts obtained were evaluated by High Efficiency Liquid Chromatography with diode array detector and by Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen, and submitted to tests for evaluation of antifungal, antioxidant, anticholinesterase and anticancer potenciality. The results showed extract and fractions with an intense metabolic variation and potentially bioactive principally against the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The acetonitrile extract was submitted to chromatographic fractionation and led to the identification and structural determination of eight substances, being, (S)-mevalonolactone (1), para-hidroxybenzaldehyde (2), acid (E)-5-(1-hidroxyallylic)-4-(pent-1-enyl)-2,5-dihydrofuran-3-carboxylic (3), Azepan-2-one (4), xylarenone D (5), xylarenone F (6), xylarenone G (7), being the last two ones novel substances, and xylarenone C (8). This is the first report of mevalonolactone obtained from endophytic fungus, substance much used for cosmetics, and also the first report of Azepan-2-one as a natural product, which is much used in the making... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:58:53Z : No. of bitstreams: 1 holzbach_jc_me_araiq.pdf: 5449837 bytes, checksum: 65991506015b0b72166c7da9e520f8a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho descreve o isolamento e a elucidação estrutural dos constuintes químicos de Aristolochia gigantea Mart. A. gigantea desenvolve um forte sistema subterrâneo de caules e raízes (tubérculos e rizomas). Os extratos etanólicos destas partes da planta foram submetidos a cromatografia (CC, CCDP e CLAE), resultando em doze e oito substâncias, respectivamente. Entre as quais, uma nova aristolactama, aristolactama 9-[O-b-glicopiranosil-O-(1 ׳׳® ׳ 2 )-b-glicopiranosídeo], e duas alcamidas, cis- e trans-N-p-coumaroil-3-O-metildopamina juntamente com as substâncias conhecidas alantoína, b-sitosterol, E-nerolidol, (+)-kobusina, (+)- eudesmina, cis- e trans-N-feruloiltiramina, trans-N-coumaroiltiramina, cis- e trans-Nferuloil- 3-O-metildopamina, aristolactama Ia 8-β-O-glicosídeo, aristolactama Ia N-β- glicosídeo, aristolactama IIIa e magnoflorina. Suas estruturas foram determinadas por análises espectroscópicas. Os efeitos dos extratos, da alantoína, (+)-kobusina e (+)-eudesmina na ação das fosfolipases e proteases dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu e Crotalus durissus terrificus foram avaliados. A alantoína foi o inibidor mais eficiente das fosfolipases enquanto a (+)-eudesmina e os extratos apresentaram atividade inibitória moderada. Além disso, os extratos, a alantoína e a (+)-eudesmina mostraram atividade moderada para as proteases de Bothrops jararacussu enquanto a (+)-kobusina apresentou maior potencial inibitório. / The present work describes the isolation and structural elucidation of the chemical constituents of Aristolochia gigantea Mart. A. gigantea develops a strong system of subterranean stems and roots (tuberous or rhizomatous roots). Ethanol extracts of these plant parts were subjected to chromatography (CC, TLC, and HPLC) to give twelve and eight compounds, respectively. Among which, a new aristolactam, aristolactam 9-O-b-D-glucopyranosyl-(1 ׳ 2→׳׳ )-b-D-glucoside, and two alkamides, cisand trans-N-p-coumaroyl-3-O-methyldopamine together with the known compounds allantoin, E-nerolidol, b-sitosterol, (+)-kobusin, (+)-eudesmin, cis- and trans-Nferuloyltyramine, trans-N-coumaroyltyramine, cis- and trans-N-feruloyl-3-Omethyldopamine, aristolactam Ia 8-b-O-glucoside, aristolactam Ia N-b-D-glucoside, aristolactam IIIa, and magnoflorine. Their structures were determined by spectroscopic analyses. Effects of extracts, allantoin, (+)-kobusin and (+)-eudesmin on action of phospholipases and proteases from venoms of the snakes Bothrops jararacussu and Crotalus durissus terrificus were evaluated. Allantoin was the most efficient inhibitor of phospholipases whereas (+)-eudesmin and the extracts showed moderate inhibitory activity. In addition, the extracts, allantoin, and (+)-eudesmin showed moderate activity on proteases from Bothrops jararacussu whereas (+)- kobusin showed the highest inhibitory potential.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-17Bitstream added on 2014-06-13T18:38:55Z : No. of bitstreams: 1 silva_vp_me_araiq_parcial.pdf: 603484 bytes, checksum: bcd177448067f611dbfe59e42c1fb977 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-11-14T12:16:55Z: silva_vp_me_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-11-14T12:17:43Z : No. of bitstreams: 1 000713164.pdf: 2079828 bytes, checksum: a02dbcca172514ced17b25130709ac2f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O projeto proposto tem como objetivo principal a obtenção de substâncias bioativas a partir do estudo químico/biológico dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos Pg-1, Lasiodiplodia sp. (Pg-2) e Pg-3, os quais foram isolados da alga parda Padina gymnospora. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida em meio de arroz (cultura sólida) fornecendo os respectivos extratos brutos. Nestes extratos avaliou-se a produção metabólica a partir das análises em CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e foram submetidos à bioensaios para avaliar a potencialidade antifúngica e anticolinesterásica, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O endófito selecionado para estudos posteriores (Lasiodiplodia sp.) cultivado em arroz, forneceu o extrato bruto em acetonitrila. O extrato bruto em acetonitrila foi fracionado em coluna de sílica gel de fase normal, resultando em treze frações, as quais foram avaliadas quanto ao seu perfil cromatográfico e químico em CCDC e RMN de 1H, respectivamente. O fracionamento realizado em cromatografia de coluna aberta, resultou no isolamento de uma substância pura a partir da fração L. sp-Fr80:20, sendo identificada como meleina (1). Isolou-se duas substâncias, lasiodiplodina (2) e des-Ometil- lasiodiplodina (3) por CCDC preparativa a partir da fração L. sp-Fr70:30. As substâncias foram elucidadas pela análise dos espectros de RMN de 1H 1D e 2D, espectros de RMN de 13C e pela espectrometria de massas (EM-ESI), sendo este o primeiro relato da identificação de isocumarinas e lactonas a partir de fungos endofíticos associados à alga marinha Padina gymnospora / The project proposed has as main objective to obtain bioactive substances from the chemical/biological study of crude extracts produced by endophytic fungi Pg-1, Lasiodiplodia sp. (Pg-2) and Pg-3, isolated from brown seaweed Padina gymnospora. These endophytes were cultivated in a small scale in the middle of rice (solid culture) providing the respectives crude extracts. In these extracts were evaluated the metabolic production by CCDC, HPLCDAD and 1H NMR analyzes and were submitted to bioassays to evaluation the antifungal and acetylcholinesterase potential, where these extracts showed promising. The endophyte selected for further studies (Lasiodiplodia sp.) was grown on rice, provided the acetonitile crude. The EtOAc crude was fractionated on a column of normal silica gel phase, resulting in thirteen fractions, which were evaluated for their chemical and chromatographic profile of CCDC and 1H NMR, respectively. The fractionation carried out in an open column chromatography, resulted in the isolation of a pure substance from the fraction L.sp, Fr80:20, identified as mellein (1). Two compounds, lasiodiplodin (2) and des-O-methyllasiodiplodin (3) was isolated by preparative TLC assay from the fraction L.sp-Fr70:30. The products were elucidated by analyzing the NMR spectra 1H 1D and 2D NMR spectra and 13C by mass spectrometry (ESI-MS), and this is the first report of isocumarinas and lactones were isolated from endophytic fungi associated with seaweed Padina gymnospora

Orientador: Angela Regina Araújo / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Mary Ann Foglio / Resumo: A busca por novos produtos para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas é um processo que requer otimização contínua. Apesar dos avanços nos processos envolvidos no planejamento racional de fármacos, incluindo química combinatória e ensaios em larga escala, os produtos naturais constituem a estratégia de maior sucesso para a descoberta de novas drogas. Sendo assim, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico do extrato metanólico produzido pelo fungo endofítico Camarops sp. isolado das folhas de Alibertia macrophylla (Rubiaceae). O endófito Camarops sp. foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio de cultivo sólido milho, por 21 dias a temperatura ambiente no modo estático. Os extratos metanólico e acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante, anticolinesterásica e anticancerígena. Os resultados evidenciaram extrato e frações com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos principalmente contra a inibição da enzima acetilcolinesterase. O extrato acetonitrila foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação e determinação estrutural de oito substâncias, sendo estas, (S)-mevalonolactona (1), para-hidroxibenzaldeído (2), Ácido (E)-5-(1-hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-carboxílico (3), azepan-2-ona (4), xylarenona D (5), xylarenona F (6), xylarenona G (7), sendo as duas últimas substâncias inéditas, e xylarenona C (8). Este é o primeiro relato de mevalonolactona obtida de fungo endofítico, substância esta muito utilizada para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The search for new products to the pharmaceutical and agrochemical industry is a process that requires continuous optimization. Despite advances in the processes involved in rational planning of drugs, including combinatorial chemistry and tests in large scale, the natural products constitute the most successful strategy for the discovery of new drugs. Thus, this work was idealized aiming the obtaining of potentially bioactive substances from the chemical and biological study of methanolic extract produced by the endophytic fungus Camarops sp. isolated from the leaves of Alibertia macrophylla (Rubiaceae). The endophyte Camarops sp. was cultivated in large scale using maize solid culture medium for 21 days at room temperature in the static mode. The methanolic and acetonitrile extracts obtained were evaluated by High Efficiency Liquid Chromatography with diode array detector and by Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen, and submitted to tests for evaluation of antifungal, antioxidant, anticholinesterase and anticancer potenciality. The results showed extract and fractions with an intense metabolic variation and potentially bioactive principally against the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The acetonitrile extract was submitted to chromatographic fractionation and led to the identification and structural determination of eight substances, being, (S)-mevalonolactone (1), para-hidroxybenzaldehyde (2), acid (E)-5-(1-hidroxyallylic)-4-(pent-1-enyl)-2,5-dihydrofuran-3-carboxylic (3), Azepan-2-one (4), xylarenone D (5), xylarenone F (6), xylarenone G (7), being the last two ones novel substances, and xylarenone C (8). This is the first report of mevalonolactone obtained from endophytic fungus, substance much used for cosmetics, and also the first report of Azepan-2-one as a natural product, which is much used in the making... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Wagner Vilegas / Banca: Vanderlan da Silva Bolzani / Banca: Hosana Maria Debonsi / Banca: Luis Octavio Regasini / Banca: Letícia Veras Costa Lotufo / Resumo: A fauna acompanhante da pesca do camarão inclui uma série de invertebrados marinhos que são descartados por não ter valor comercial. A fim de tentar acrescentar algum valor a este material, foi analisada a composição química da estrela-do-mar Luidia senegalensis coletada na costa brasileira como consequência da aplicação da pesca de arrasto. A fim de avaliar sua composição química, foi utilizada uma combinação de extração em fase sólida (SPE) seguida de cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrômetro de massas equipado com fonte de ionização por eletrosptray e analisador ion-trap linear (UPLCESI- IT-MSn). Luidia senegalensis contém asterosaponinas, que são esteroides glicosilados sulfatados contendo cinco e seis unidades de açúcar, além de poliidroxiesteroides. Este estudo mostrou a presença de compostos importantes e potencialmente bioativos em invertebrados associados à fauna acompanhante da pesca do camarão, usando um método rápido e eficiente. Normalmente descartada, a fauna acompanhante contém muitos invertebrados que podem hospedar uma grande variedade de gêneros de bactérias, algumas das quais com potencial de produzir produtos naturais bioativos com aplicações biotecnológicas. Assim, para utilizar um material normalmente descartado, foi explorado o potencial biotecnológico de bactérias cultiváveis de duas espécies de invertebrados abundantes na fauna acompanhante, o gastrópode Olivancillaria urceus e a estrela-do-mar Luidia senegalen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The by-catch fauna of the shrimp fishery includes a number of marine invertebrates that are discarded because they do not have commercial value. In order to try to add some value to these materials, we analyzed the chemical composition of the starfish Luidia senegalensis collected in the Brazilian coast as a consequence of the trawling fishery method. In order to access their chemical composition, we used a combination of solid phase extraction (SPE) followed by ultra performance liquid chromatography coupled to electrospray ionization ion trap tandem mass spectrometry (UPLC-ESI-IT-MSn). Luidia senegalensis contains asterosaponins, which are sulphated glycosilated steroids, containing five and six sugar moieties, in addition to polyhydroxysteroids. This study helped us to support the presence of important and potentially bioactive compounds in invertebrates associated to the by-catch fauna of the shrimp fishery, using a fast and efficient method. Typically discarded, by-catch contains many invertebrates that may host a great variety of bacterial genera, some of which may produce bioactive natural products with biotechnological applications. Therefore, to utilize by-catch that is usually discarded we explored the biotechnological potential of culturable bacteria of two abundant by-catch invertebrate species, the snail Olivancillaria urceus and the sea star Luidia senegalensis. Sediment from the collection area was also investigated. Utilizing multiple isolation... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alberto José Cavalheiro / Co-orientador: Cristiano Soleo de Funari / Banca: Paulo Clairmont Feitosa de Lima Gomes / Banca: Fabíola Manhas Verbi Pereira / Banca: Álvaro José dos Santos Neto / Banca: Carmen Lúcia Cardoso / Resumo: Apesar dos recentes avanços em cromatografia líquida monodimensional, a complexidade de algumas amostras exige o emprego de técnicas de separação capazes de oferecer maior poder de resolução e capacidade de picos. Como consequência, o desenvolvimento de técnicas cromatográficas bidimensionais abrangentes (LC×LC, GC×GC, LC×GC) tem recebido atenção crescente nos últimos anos. A principal vantagem dessas técnicas comparadas às técnicas tradicionais é a maior capacidade de picos e possiblidade de se empregar diferentes mecanismos de separação em cada dimensão. O maior desafio relacionado à otimização de métodos desta natureza está relacionado à seleção de complexos parâmetros experimentais, frequentemente baseada na experiência do analista ao invés de rigorosamente estruturada em estratégias teoricamente embasadas. A primeira e mais importante etapa no processo de otimização de métodos LC×LC é a seleção do par cromatográfico (fase estacionária e fase móvel, 1D e 2D). Quando a amostra é precisamente conhecida, algumas características podem servir como um guia qualitativo na seleção destes parâmetros; em outros casos, padrões "representativos" podem ser empregados para avaliar a correlação entre os sistemas 1D e 2D, porém, quando pouca ou nenhuma informação é disponível, esta continua sendo uma tarefa difícil. Este trabalho apresenta uma nova estratégia de seleção do par cromatográfico empregando amostras reais de extrema complexidade e cálculos de recobrimento da superfície de separação, além da otimização de métodos em cromatografia líquida bidimensional abrangente baseada em planejamentos estatísticos. A amostra selecionada para o desenvolvimento do método foi uma mistura de extratos vegetais previamente estudados pelo grupo de pesquisa, contendo uma vasta diversidade de metabólitos com diferentes características estruturais e... / Abstract: Despite recent advances in monodimensional liquid chromatography, the complexity of some samples requires the use of separation techniques that can provide greater resolving power and peak capacity. As a consequence, the development of comprehensive two-dimensional chromatographic techniques (LC×LC, GC×GC, LC×LC) has received increasing attention in recent years. The main advantage of these techniques compared to traditional techniques is the largest peak capacity and possibility to employ different separation mechanisms in each dimension. The biggest challenge related to method optimization of this kind of techniques is related to the selection of complex experimental parameters, often based on the analyst's experience rather than theoretically based strategies. The first and most important step in the method optimization process in LC×LC is the selection of the chromatography pair (stationary phase and mobile phase, 1D and 2D). When the sample is precisely known, some features may serve as qualitative guidance in the selection of these parameters; in other cases, "representative" standards can be used to evaluate the correlation between 1D and 2D systems, however, when little or no information is available, this remains a difficult task. This work presents a new strategy for the selection of the chromatographic pair using real and extremely complex samples and fractional coverage surface calculations, besides the method optimization in comprehensive two-dimensional liquid chromatography based on statistical designs. The sample selected for the method development was a mixture of plant extracts previously studied by the research group and containing a wide diversity of metabolites with distinct structural characteristics and therefore different challenges to be overcome in the chromatographic separation. Employing such strategy and comprehensive elution conditions, it was possible to select the... / Doutor

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: Eliana Aparecida Varanda / Coorientador: Valéria Valente / Banca: Denise Crispim Tavares / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: André Gonzaga dos Santos / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Resumo: Trabalhos demonstraram que derivados da planta Casearia sylvestris protegem o DNA de danos. Dessa forma, este trabalho visa avaliar por quais mecanismos essa proteção ocorre. Os produtos naturais avaliados foram o extrato etanólico das folhas de C. sylvestris e os diterpenos clerodânicos obtidos deste extrato: casearinas B, D e X e caseargrewiina F. Para a avaliação dos efeitos propostos foram utilizadas como modelo as linhagens celulares HepG2, MRC5, XP4PA e Hepa 1c1c7. Primeiramente, os produtos naturais foram avaliados com relação à sua atividade citotóxica pelo teste do MTT e ensaio de sobrevivência clonogênica nos tempos de 24 e 48 h, obtendo-se o IC50 e o IC20. Em seguida, foi realizado o ensaio de genotoxicidade do cometa no tempo de 24 h utilizando-se incubação com a enzima FPG nas linhagens HepG2, MRC5 e XP4PA. Os produtos naturais se mostraram genotóxicos mesmo em pequenas concentrações. Após este ensaio, foi avaliada a antigenotoxicidade dos produtos naturais já nas concentrações pouco genotóxicas e não citotóxicas por 24 h. Para tanto, as células HepG2 foram expostas ao mutágeno peróxido de hidrogênio (H2O2 - 1mM) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. E, as linhagens MRC5 e XP4PA foram expostas à radiação ultravioleta C (UVC) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. Para a linhagem HepG2, o extrato etanólico, as casearinas B e D apresentaram inibição de danos fortes nas maiores concentrações testadas. Já para a linhagem MRC5 somente a casearina B foi capaz de produzir inibição moderada na concentração de 0,04 µM. Adicionalmente, foi verificada a resposta antiapoptótica dos produtos naturais pelo método da anexina-V-FITC/PI nas linhagens submetidas aos mesmos mutágenos do ensaio do cometa, aplicando-se o protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have shown that Casearia sylvestris derivatives protect DNA from damage. Thus, the aim of this study was to evaluate the mechanisms through which this protection occurs. The samples used in this study were the ethanolic extract of C. sylvestris leaves and the clerodane diterpenes obtained from this extract, including casearins B, D and X, and caseargrewiin F. The following cell lines were used: HepG2, MRC5, XP4PA and Hepa 1c1c7. First, all samples were assessed for their cytotoxic activity by using both the MTT assay and the clonogenic survival assay after 24 and 48 h of exposure, yielding the IC50 and IC20. Afterwards, the genotoxicity of the samples was assessed within 24 h following incubation with the samples using the FPG enzyme in the cell lines HepG2, MRC5 and XP4PA. The compounds proved to be genotoxic at all concentrations tested. Subsequently, the antigenotoxicity of the samples was assessed at concentrations that were at very low levels of cytotoxic or genotoxic after 24 h. HepG2 cells were exposed to the mutagen hydrogen peroxide (H2O2, 1 mM) and either pre or post-treated with the samples. Additionally, the cell lines MRC5 and XP4PA were exposed to ultraviolet C (UVC) and either pre or post-treated with the compounds. For the ethanolic extract in the HepG2 cell line, the casearins B and D showed strong inhibition of damage at the highest concentrations tested. In the MRC5 cell line, only casearin B was able to produce moderate inhibition (at 0.04 mM). Additionally, the anti-apoptotic response of the samples was assessed by an anexinV-FITC/PI assay in cell lines that were exposed to the same mutagens used in the comet assay, followed by post-treatment with the samples. The clerodane diterpenes, at high concentrations, increased the percentage of live cells and decreased... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ben-Hur Mattiuz / Coorientador: Eduardo Micotti da Gloria / Banca: Antônio de Goes / Banca: Cristiane Maria Ascari Morgado / Banca: Eliane Aparecida Benato Rodrigues da Silva / Banca: Marcel Bellato Spósito / Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar produtos alternativos, considerados naturais, como a quitosana e óleos essenciais, no controle pós-colheita da antracnose em abacates 'Breda' e 'Hass'. Foram extraídos dez óleos essenciais de plantas e avaliados, inicialmente, quanto ao potencial antifúngico contra o Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Dentre os óleos testados, os de Thymus vulgaris, Lippia sidoides e Cymbopogon citratus foram selecionados pelos seus destacados efeitos inibitórios. Na etapa in vitro foram realizados quatro experimentos, em que foram testados concentrações de quitosana e os óleos, utilizando seis repetições por tratamento. Na etapa in vivo, foram realizados cinco experimentos em que abacates 'Breda' e 'Hass' foram imersos, por 1 minuto, em concentrações de quitosana, e abacates 'Hass' imersos em três concentrações de cada óleo essencial associado a cera comercial. Após a secagem e formação dos revestimentos, os frutos foram armazenados a 22± 2 ºC e 65± 5% UR por 7 dias, para os abacates 'Breda', e a 12± 2 ºC e 80± 5% UR por 14 dias, e por mais 3 dias em temperatura de 22± 2 ºC e 65± 5% UR, para o 'Hass'. Para a análise de variância dos dados, foi conduzido o teste F, e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P≤0,05). O uso de quitosana a partir da concentração de 1,0% inibe o crescimento micelial e a germinação de conídios de C. gloeosporioides in vitro, e quando aplicada em abacates 'Breda' a 1,0%, e em abacates 'Hass' a 2,0%, é eficiente na redução dos sintomas e da incidência da antracnose nos frutos, e na manutenção da qualidade dos mesmos. Os óleos de tomilho (T. vulgaris) e de alecrim-pimenta (L. sidoides), nas concentrações a partir de 200 μL L-1, inibiem o crescimento micelial e a germinação conidial de C. gloeosporioides, enquanto que as concentrações de 500 e 1000 μL L-1 dos óleos associados à cera de... / Abstract: This study aimed at evaluating alternative natural products, such as chitosan and essential oils, to control anthracnose in postharvest of 'Breda' and 'Hass' avocados. Ten plant-extracted essential oils were assessed regarding their initial antifungal potential against Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Thymus vulgaris, Lippia sidoides and Cymbopogon citratus were selected among the oils for their outstanding inhibitory effects. Four experiments were performed in an in vitro stage, in which concentrations of chitosan and oils were tested in six replicates for each treatment. Then, five experiments were set in an in vivo stage, where in 'Breda' and 'Hass' avocados were immersed in different chitosan concentrations for 1 minute, as well as 'Hass' avocados were dipped in three concentrations of each essential oil associated with commercial wax. After drying and covering, 'Breda' avocados were stored at 22± 2 °C under 65± 5% RH for 7 days; and 'Hass' fruit were kept at 12± 2 ° C and 80 ± 5% RH for 14 days, then for more 3 days at 22 ± 2 °C and 65± 5%. Data underwent F test for variance analysis and means were compared by Tukey test (P≤0.05). Chitosan from 1.0% inhibits C. gloeosporioides mycelial growth and spore germination. The use of 1.0% chitosan in 'Breda' variety and at 2.0% in 'Hass' fruit, is effective in reducing of symptoms and incidence of anthracnose in the fruit, and also maintenance of quality. The thymol (T. vulgaris) and rosemary pepper (L. sidoides) oils from 200 μL L-1, inhibit mycelial growth, while concentrations of 500 and 1000 μL L-1 of oils with carnauba wax are more effective in reducing of symptoms of anthracnose, and by maintaining fruit quality of 'Hass' avocados / Doutor