For a long time, 5' cap has been thought to be privilege only for eukaryotic organisms in form of 7-methylguanosine cap at the end of mRNA. This was changed only a few years ago. By using methods liquid chromatography and mass spectrometry a new molecule associated with RNA of Escherichia coli has been found. This molecule turned out to be nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+ ) attached to 5' end of some small regulatory RNAs (sRNA). Later it has been shown, that RNA polymerase can attach NAD+ at 5' of RNA ab initio, meaning that RNA polymerase can utilize NAD+ as a substrate for transcription initiation. To some extent substrate for transcription initiation is chosen based on promoter sequence. Crucial requirement is presence of adenine at +1 position of DNA coding strand. This thesis focuses on promoter sequence requirements for transcription initiation with NAD+ . As a template for transcription four promoters with different modifications and their chimeras are used: RNA1, Pveg, lac UV5 and rrnB P1. Also, I tried to compare RNA polymerase from E. coli and B. subtilis in terms of transcription initiation substrate usage. Lastly, I describe here isolation of NudC, enzyme that cleaves NAD+ to nicotinamide mononucleotide (NMN) and adenosine monophosphate (AMP). NudC will be used for upcoming...

A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus / Huanglongbing (HLB) associated to Candidatus Liberibacter spp., which colonizes the phloem, is considered one of the most serious diseases of citrus. One important strategy to control this disease consists of producing transgenic plants expressing, in the bacteria colonization tissue, genes encoding antibacterial peptides. The objective of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing genes encoding the antibacterial peptide attacin A (attA) driven by phoem-specific promoters. The work started with the development of the gene constructs, containing the attacin A gene (with or without signal peptide) controlled by either sucrose transporter gene (AtSuc2) or phloem protein 2 gene promoters (AtPP2) from Arabidopsis thaliana, or phloem protein 2 gene promotor (CsPP2) from Citrus sinensis. The genetic transformation of C. sinensis \'Hamlin\', \'Valencia\', \'Pera\' and \'Natal\' cultivars was done via Agrobacterium tumefaciens. Epicotyls segments collected from in vitro germinated seedlings were used as explants. Transgenic plants were identified by PCR analyses. PCR positive plants were acclimatized and transferred to specific greenhouse. Integration and transcription of the attA gene was confirmed in acclimatized transgenic plants by Southern and Northern blot analysis, respectively. The attA gene expression was validated by RT-qPCR analysis. \'Hamlin\' transgenic cultivars containing the AtSuc2 or AtPP2 promoters controlling the expression of attA (with or without signal peptide) were propagated by grafting, for future evaluation of Candidatus Liberibacter asiaticus resistance

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The traditional use of antibiotics in aquaculture as growth promoters has been limited due to the negative effects caused by these drugs. As an alternative to the use of these drugs has been sought manipulation of the microbiota of the gastrointestinal tract of aquatic animals through the use of oligosaccharides and dietary fibers with prebiotic potential. Thus, this study aimed to apply different methodologies to obtain Dietary Fiber Concentrates (DFC) = mucilage (MG); pectin (PN) and β-glucan + manan (βG + M) and evaluate the prebiotic potential of these supplements in the diet of juvenile jundiá (Rhamdia quelen). The determination of the nutritional composition of the ingredients revealed that the predominant component in all DFCs were dietary fiber and insoluble fiber. The DFC that had higher extraction yield was βG + M (19.81 ± 8.54%), followed by pectin (14.54% ± 2.72), and mucilage (7.18 ± 1.54%). The composition of mucilage and pectin had a greater diversity of monosaccharides, since the βG+M consisted primarily of mannose (74.5%) and glucose (24.3%). The supplementation of DFC in jundiás diet was assessed for eight weeks through study of growth, body nutrient deposition, digestive enzymes, biochemical and metabolic parameters, responses to stress and immune and intestinal morphology. The jundiás supplemented with DFCs achieved higher growth than the control group and similar to animals supplemented with 5 g kg-1 commercial prebiotic (CP 5). Most somatic parameters and whole fish proximate composition were influenced by supplementation of DFCs. The supplementation of pectin promoted lower activity of digestive enzymes in relation the control group. The animals supplemented with DFC obtained positive changes in biochemical parameters. Furthermore, jundiás showed no response to application of the stressor, maintaining basal cortisol levels. The fish supplemented with DFCs had higher hepatic glycogen stores in relation the control group. Moreover, supplementation with DFCs increased the height of intestinal villi of jundiá. However, these values were lower for the animals of the group PC 5. For thickness of the epithelium this variable was higher in the control group compared to animals supplemented with β-glucan+Manana. / O uso tradicional de antibióticos na aquicultura como promotores de crescimento tem sido limitado em função dos efeitos negativos promovidos por estes medicamentos. Como alternativa ao uso destas drogas, tem se buscado a manipulação da microbiota do trato gastrointestinal dos animais aquáticos através da utilização de oligossacarídeos e de fibras alimentares com potencial prebiótico. Neste sentido, este estudo teve como objetivo aplicar metodologias para obtenção de diferentes Concentrados de Fibras Alimentares (CFAs) = Mucilagem (MG); Pectina (PN) e β-Glicana+Mananas (βG+M) e avaliar o potencial prebiótico destes suplementos na dieta de juvenis de jundiá (Rhamdia quelen). A determinação da composição nutricional dos ingredientes revelou que os componentes predominantes em todos os CFAs obtidos foram fibra alimentar total e fibra insolúvel. O CFA que apresentou maior rentabilidade de extração foi a βG+M (19,81%±8,54), seguida da Pectina (14,54%±2,72) e Mucilagem (7,18%±1,54). A composição da Mucilagem e Pectina obtiveram maior diversidade de monossacarídeos, já a βG+M consistiu basicamente de manose (74,5%) e glicose (24,3%). A suplementação dos CFAs na dieta de jundiás foi avaliada durante oito semanas, através de estudo de crescimento, deposição corporal de nutrientes, enzimas digestivas, parâmetros bioquímicos e metabólicos, resposta ao estresse e imunológica e morfometria intestinal. Os jundiás suplementados com os CFAs obtiveram crescimento superior em relação ao grupo controle e similar aos animais suplementados com 5 g kg-1 de prebiótico comercial (PC 5). A maioria dos parâmetros somáticos e de composição centesimal de peixe inteiro foram influenciados pela suplementação dos CFAs. A suplementação de Pectina promoveu menor atividade das enzimas digestivas em relação ao grupo controle. Os animais suplementados com os CFAs obtiveram alterações positivas nos parâmetros bioquímicos avaliados. Além disso, os jundiás não mostraram resposta à aplicação do agente estressor, mantendo os níveis de cortisol basal. Os peixes suplementados com os CFAs obtiveram maiores estoques de glicogênio hepático em relação ao grupo controle. Além do mais, a suplementação com os CFAs promoveu aumento na altura de vilos intestinais dos jundiás. Porém, estes valores foram menores em relação aos animais do grupo PC 5. Para espessura do epitélio (EE) esta variável foi maior no grupo Controle comparado aos animais suplementados com β- glicana + Manana.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-12-13T14:00:15Z No. of bitstreams: 2 Tese - Regis Kamimura - 2013.pdf: 3024185 bytes, checksum: d75f4278deb066540dc7434aef6cf446 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-14T10:15:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Regis Kamimura - 2013.pdf: 3024185 bytes, checksum: d75f4278deb066540dc7434aef6cf446 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-14T10:15:36Z (GMT). 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The experiment was conducted in a certified swine breeding farm (CSBF), applying the CRD (completely randomized design). Four hundred and eighty castrated male piglets were used, in five treatments, with ten piglets by cage, eight repetitions, and in the basal treatment 16 repetitions were used, being T1=basal diet, denominated negative control, T2=T1+antimicrobial agent, T3=T1+probiotic, Saccharomyces cerevisiae, T4=T1+prebiotic MOS, T5=T1+probiotic Saccharomyces cerevisiae + the prebiotic MOS. The diet was based on corn and soybean meal plus a supplement of minerals and vitamins. There were changes with higher increase in quantity of goblet cells, calculated by millimeter of gut mucosa with neutral mucus compared to those with acid mucus and to the negative control. There were no expressive changes for cells with acid mucus. The percentage of proliferating cells in small intestine by the immunehistochemistry technique for PCNA did not show significant changes and the presence of Paneth’s cells was confirmed by special staining and by immunehistochemistry. The quantity of Paneth’s cells of duodenum changed according to additives used, in comparison with the negative control which had a greater quantity. With the addition of antimicrobial agent there was a lesser quantity. With the prebiotics and synbiotics occurred milder reduction and this suggests that immunomodulation occurred. Besides promoting a better gut health due to a healthier and more appropriate microbiota to the rearing of piglets in the nursery phase, the addition of growth promoters in feeds favors significant gains and can be recommended, since the results are compensatory in productivity. / A microbiota intestinal é alterada por diversos fatores, sendo a dieta o que mais influência, assim como os aditivos moduladores do microbioma. Objetivou-se, neste estudo, avaliar os efeitos dos aditivos promotores de crescimento na dieta, sobre a porcentagem de células caliciformes com mucina ácida e neutra no intestino delgado de suínos, por modularem a microbiota e atuar na imunidade intestinal, avaliou a porcentagem de células intestinais em proliferação pela técnica de imunoistoquímica por PCNA, certificar e quantificar a presença de células de Paneth por coloração específica e por imunoistoquímica, relatos da literatura cita a ligação de probióticos com o epitélio intestinal via células de Paneth e caliciformes. O experimento foi conduzido em uma GRSC, aplicando o DIC. Utilizaram-se 480 leitões machos castrados, em cinco tratamentos, com dez leitões por gaiola, com oito repetições e no tratamento basal realizou-se 16 repetições. Sendo, T1=dieta basal, denominado de controle negativo, T2=T1+ antimicrobiano Avilamicina, T3=T1+probiótico Scchacaromyces cerevisae T4=T1+prebiótico MOS, T5=T1+probiótico Scchacaromyces cerevisae + o prebiótico MOS, foram abatidos com 65 dias de idade. A dieta foi à base de milho e farelo de soja mais um suplemento mineral e vitamínico. Ocorreram alterações com maior aumento na quantidade de células caliciformes com muco neutro comparativamente com aquelas de muco ácido e com o controle negativo. Não houve alterações expressivas para as células com muco ácido. A porcentagem de células no intestino delgado em proliferação pela técnica de imunoistoquímica para PCNA não apresentou alterações significativas, confirmou-se a presença de células de Paneth por colorações especiais e por imunoistoquímica. A quantidade de células de Paneth do duodeno alteraram-se em função dos aditivos utilizados, em comparação ao controle negativo que teve a maior quantidade, com a adição de antimicrobiano houve a menor quantidade, com prebiótico e simbiótico ocorreu redução mais branda, o que sugere ter ocorrido uma imunomodulação Os aditivos promotores de crescimento nas rações são tecnologias que favorecem ganhos significativos e podem ser recomendados, pois os resultados são compensatórios em produtividade. Além de promover uma melhor saúde intestinal em função de uma microbiota mais saudável e mais apta à criação de leitões na fase de creche

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliane_Borsatti.pdf: 2727712 bytes, checksum: 873b91306487ae36eebef66843276a08 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Two experiments were carried out to evaluate the effects of using distinct growth promoter over the energetic metabolism and performance of poultry farming. Two experimental diets (ND normal diet according to nutritional requirements and RD reduced diet, with 5% less of nutrients), supplemented or not with antibiotics and prebiotics from 1 to 10, 11 to 21, and 22 to 42 days of age. For performance, we used 1152 chickens, divided into 48 boxes following a completely casualized 2x3 factor design (two diets x three growth promoter) composed of six treatments and eight repetitions. At the end of each period, the animals and the food leftovers were weighed to calculate the performance variables. At 21 days of age, one chicken per experimental units (EU) was slaughtered and portions of the small intestine were collected for morphological analyses. After 33 days, two chickens per EU were selected and the cecum content was removed for microbiological analysis. After 35 days, blood samples were taken from brachial puncture to evaluate blood parameters. By the end of the experimental period, two chickens per EU were slaughtered for evaluating the dressing percentage. For metabolism analysis, we used 180 poultry chicks, divided into 36 cages, distributed according to the experimental design abovementioned in performance analysis by using the traditional method of excreta collection. The animals fed with RD presented the worst results (P<0.05) for mean weight, weight gain, food intake and feed conversion rate. There was no effect (P>0.05) over villi height in duodenum and ileum. However, interaction (P<0.05) was detected between the evaluated promoter and the villi height in jejunum, the crypt depth and the relationship villi:crypt in all segments, inasmuch as ND containing prebiotics yielded the best results. The growth promoter had no effects over cecum microflora although RD resulted in higher amounts of Lactobacilos and Bifidubacterium (P<0.05) when diets were compared. Food free of growth promoters yielded higher levels of triglycerides and calcium (P<0.05). The RD reduced the concentration of triglycerides (P<0.05) but increased the deposition of abdominal fat (P<0.05). Interaction between diet and growth promoters was observed (P<0.05) in relation to the coefficients of ileum digestibility (CID) of dry matter (DM), raw protein (RP) and ethereal extract (EE). The RD containing antibiotics presented lower CID in DM. The ND containing antibiotic presented higher CID in RP (P<0.05), while RD containing prebiotics resulted in higher CID of RP and EE (P<0.05). The coefficient values of total digestibility (CTD) in DM, RP and EE showed interaction (P<0.05) between diets and growth promoters, where the RD containing antibiotic yielded the lowest DTD of DM and EE. The ND resulted in higher values of apparent metabolizable energy (AME) and nitrogen-corrected apparent metabolizable energy (AMEn) (P<0.05). We conclude that prebiotics can be used as growth promoters in poultry, without hindering their performance while the reduction of nutritional demands in food decreases the digestibility of nutrients / Dois experimentos foram realizados para avaliar o efeito da utilização de diferentes promotores de crescimento sobre o metabolismo energético e o desempenho de frangos de corte em crescimento. Foram avaliadas duas dietas experimentais (DN - dieta normal, atendendo às exigências nutricionais; e DR - dieta reduzida, com 5% menos da exigência nutricional), suplementadas ou não com antibióticos e prebióticos, nos períodos de 1 a 10, 11 a 21, 22 a 42 dias de idade. No desempenho, foram utilizadas 1152 aves, divididas em 48 boxes, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado contendo seis tratamentos, oito repetições, em esquema fatorial 2x3 (duas dietas x três promotores de crescimento). Ao final de cada período, as aves e sobras de ração foram pesadas para cálculo das variáveis de desempenho. Aos 21 dias, foi abatida uma ave por unidade experimental (UE) e coletado fragmentos do intestino delgado para análise da morfologia intestinal. Aos 33 dias, foram selecionadas duas aves por UE e retirado o conteúdo cecal para análise microbiológica. Aos 35 dias< foi realizada coleta de sangue via pulsão braquial para análise dos parâmetros sanguíneos. Ao final do experimento< foram abatidas duas aves por UE para cálculos de rendimento de carcaça. No metabolismo, foram utilizados 180 pintos de corte, divididos em 36 gaiolas, distribuídos no mesmo delineamento experimental do ensaio de desempenho, utilizando-se o método tradicional de coleta de excretas. As aves que receberam DR apresentaram piores resultados (P<0,05) para peso médio, ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar. No duodeno e íleo, não houve efeito (P>0,05) sobre altura de vilos, entretanto, para altura de vilos no jejuno, e, profundidade de cripta e relação vilo:cripta em todos os segmentos, houve interação (P<0,05) entre os promotores avaliados, onde a DN contendo prebióticos apresentou melhores resultados. Não houve efeito dos promotores de crescimento sobre a microflora cecal, entretanto, entre as dietas, a DR apresentou maiores contagens de Lactobacilos e Bifidubacterium (P<0,05). A ração sem promotor de crescimento apresentou maiores teores (P<0,05) de triglicerídeos e cálcio. A DR reduziu (P<0,05) o nível de triglicerídeos, porém causou aumento (P<0,05) na deposição de gordura abdominal. Houve interação (P<0,05) entre dieta e promotores de crescimento para os coeficientes de digestibilidade ileal (CDI) da matéria seca (MS), proteína bruta (PB) e extrato etéreo (EE). A DR contendo antibiótico apresentou menor CDI da MS. A DN contendo antibiótico apresentou maior CDI da PB (P<0,05), enquanto que a DR contendo prebiótico apresentou melhor CDI da PB e do EE (P<0,05). Os valores dos coeficientes de digestibilidade total (CDT) da MS, PB e EE apresentaram interação (P<0,05) entre dietas e promotores de crescimento, onde a DR contendo antibiótico apresentou menor CDT da MS e do EE. A DN apresentou maiores valores de energia metabolizável aparente (EMA) e energia metabolizável aparente corrigida para balanço de nitrogênio (EMAn) (P<0,05). Conclui-se que os prebióticos podem ser utilizados como promotores de crescimento para frangos de corte, sem prejudicar o desempenho das aves e que, ao reduzir a exigência nutricional da ração, reduz-se a digestibilidade dos nutrientes

A influência dos tensoativos lauril sulfato de sódio, cloreto de cetil trimetil amônio e álcool láurico etoxilado com 12 moles de óxido de etileno sobre o stratum corneum da pele de muda das cobras Bothrops jararaca e Spilotis pullatus foi avaliada através das técnicas biofísicas de PAS-FTIR, FT-Raman e DSC. Foram utilizadas soluções dos tensoativos em concentrações acima e abaixo da cmc e tratamentos por 4 e 8 horas (stratum corneum íntegro) e por 12 horas (stratum corneum após a remoção mecânica das camadas superficiais de células com fita adesiva). A presença do lauril sulfato de sódio e do cloreto de cetil trimetilamônio no stratum corneum foi detectada e a principal alteração observada para ambos foi o aumento do conteúdo hídrico do tecido; o álcool láurico etoxilado com 12 moles de óxido de etileno não promoveu aumento do conteúdo hídrico, apresentando ação de extração de lipídeos. A remoção mecânica das camadas superficiais de células com fita adesiva mostrou ser um procedimento útil para tratamento do stratum corneum da pele de muda de cobra, tornando a membrana mais adequada para estudos da ação de promotores de permeação. / The influence of the surfactants sodium lauryl sulfate, cetyl trimethyl ammonium chloride and lauryl alcohol ethoxylate (12 moles ethylene oxide) was evaluated on the stratum corneum of shed snake skin (Bothrops jararaca and Spilotis pullatus) through the biophysical techniques PAS-FTIR, FT-Raman and DSC. The surfactants were used in solutions above and below the cmc and the stratum corneum samples were pre-treated for periods of 4 and 8 hours (whole stratum corneum) and for 12 hours (stratum corneum after tape stripping procedure). The presence of the surfactants sodium lauryl sulfate and cetyl trimetyl ammonium chloride could be detected in the stratum corneum and the main change promoted by both was the increase of the water content of the membrane; the lauryl alcohol ethoxylate (12 moles ethylene oxide) did not promote increase in the hydration but showed some action as far as lipid extraction. The tape stripping procedure showed to be useful for the treatment of the stratum corneum of shed snake skin, making the membrane more adequate than the whole stratum corneum for the studies of the action of permeation enhancers.

Um conjunto de quadros clínicos conhecidos genericamente por Leishmaniose, que representa um sério problema de Saúde Pública, tem como agentes etiológicos protozoários do gênero Leishmania. Em seu ciclo de vida, o parasita apresenta dois hospedeiros, um vertebrado e um invertebrado. O gênero Leishmania é dividido em dois subgêneros: Leishmania (Leishmania) e LeishmaniaViannia), de acordo com a posição ocupada pela forma promastigota no tubo digestivo do hospedeiro invertebrado. Genes que codificam RNA ribossômico são exclusivamente transcritos pela RNA polimerase I. A região promotora dessa polimerase é conhecida como espécie-específica. Estudos anteriores, baseados em ensaios de expressão transiente com construções nas quais a expressão do gene repórter CAT era dirigido por diferentes regiões do promotor mostraram que em Leishmania há um reconhecimento espécie-específico, mas que espécies filogeneticamente relacionadas reconhecem melhor o promotor do que a espécie homóloga. A caracterização estrutural da região promotora de RNA pol I de L. (V.) braziliensis possibilitou mapear o sítio de início de transcrição e definir a provável região promotora de RNA pol I desse organismo. Quando comparamos o 5´ ETS da região estudada, com a região correspondente das demais espécies do subgênero L. (Leishmania), notamos uma alta similaridade tanto no tamanho, quanto na seqüência de nucleotídeos. Já na região IGS os blocos de repetição apresentam tamanho similar, porém seqüências distintas, assim como a seqüência à montante do ETS. Não foi determinado o número de blocos de repetição presente em cada cístron de L.(V.) braziliensis. Os estudos de ligação de fatores nucleares à região central do promotor mostraram que houve um reconhecimento diferencial dessa região entre a espécie homóloga L. (V.) braziliensis e as espécies heterólogas L. (V.) guyanensis, pertencente ao mesmo subgênero e L. (L.) amazonenis. Os complexos protéicos associados a essa região central apresentaram maior afinidade com a espécie heteróloga L. (V.) guyanensis. O fato de ser o ensaio de CAT trabalhoso e demorado levou à busca de outro repórter que evidenciasse a funcionalidade da região promotora ao mesmo tempo em que permitisse a quantificação dessa expressão, de modo a medir a força do promotor. Neste trabalho iniciamos a padronização para utilizar GFP como gene repórter no estudo da funcionalidade de promotores. Foi possível mostrar que a GFP é detectável em microscopia confocal e que as células que expressam GFP podem ser quantificadas em FACS, no entanto, essas detecções só foram possíveis em parasitas selecionados por uma marca de seleção, ou seja, numa transfecção estável. Assim, substituir o gene repórter CAT pelo gene GFP foi inadequado para os ensaios de transfecção transiente, impedindo que fosse medida a atividade da região promotora de L. (V.) braziliensis em diferentes espécies. / Leishmaniasis is the generic name of a serious public health problem that is caused by protozoa of the genus Leishmania. In its lifecycle, the parasite has two hosts, a vertebrate and an invertebrate. The genus Leishmania is divided into two subgenera: Leishmania (Leishmania) and Leishmania (Vianna), according to the position occupied by the promastigotes form at the gut of the invertebrate host. Genes that encode ribosomal RNA are exclusively transcribed by RNA polymerase I. The promoter region of the RNA polymerase I is known to present a species-specific recognition. Previous studies, based on transient expression assays with constructions in which the expression of the reporter gene CAT was directed by different regions of the promoter showed that RNA pol I promoter in Leishmania is species-specific, but in phylogenetically related species the expression of the reporter gene is higher than in the homologous species. The structural characterization of the promoter region of RNA pol I of L. (V.) braziliensis enabled to map the site of initiation of transcription and to define the promoter region of RNA pol I. The comparison of the determined 5\' region of the ETS region, with the corresponding region of other species of the subgenus L. (Leishmania), showed a high similarity both in size, as in the sequence of nucleotides. However, the IGS region and the repetitive blocks of nucleotides have similar size but different sequences. The studies of binding of nuclear factors to the central region of the promoter showed that there was a recognition between the species counterpart L. (V.) braziliensis and the heterologous species L. (V.) guyanensis, belonging to the same subgenus and L. (L.) amazonensis, that belongs to another subgenus. The complex protein associated with this central region showed greater affinity with the heterologous species L. (V.) guyanensis. The fact that to quantify the CAT expression represents a laborious and time consuming test lead us to search for another reporter that could identified the functionality of the promoter region and at the same time allowed the quantification of expression in order to measure the strength of the promoter. In the present work, we began the standardization for the use of GFP gene as reporter in the study of the functionality of promoters. It was possible to show that GFP is detectable in confocal microscope and the cells that express GFP can be quantified in FACS, however, these findings were made possible only in parasites selected by the mark, ie in a stable transfection. So, the replacement of CAT by GFP reporter showed to be inadequate for testing promoters in transient transfection. This prevented the measure of the activity of the promoter region of L. (V.) braziliensis in different species.

Durante os últimos anos a avicultura nacional tem sofrido constantes desafios, tendo como objetivo ampliar o mercado consumidor do frango de corte ao redor do mundo. Entretanto, cada mercado apresenta exigências diferentes, como no caso do mercado europeu que estabelece a exclusão dos antibióticos como promotores de crescimento na alimentação dos frangos de corte. Visando esta problemática, realizou-se este estudo, com o objetivo de analisar os resultados da utilização dos ácidos lático e butírico, isolados e associados, como aditivos em dietas de frangos de corte, em relação ao promotor de crescimento usualmente utilizado nas dietas dos mesmos. Foram avaliados: o desempenho, a imunidade humoral e a morfometria intestinal das aves. Utilizaram-se 1400 pintainhos machos da linhagem comercial Ross, divididos em cinco tratamentos (controle - sem aditivo -; ácido butírico; ácido lático; ácido butírico + ácido lático e avilamicina - antibiótico, promotor de crescimento tradicionalmente utilizado na produção de frangos de corte). Os resultados de desempenho indicaram que a interação dos ácidos foi significativa na fase inicial, entretanto não ocorreu um efeito aditivo dos ácidos, sendo o uso do ácido butírico isoladamente mais recomendável durante essa fase. Já na fase de crescimento, a interação foi significativa com um efeito aditivo, recomendando seu uso nas rações de crescimento. De acordo com os títulos médios de anticorpos obtidos no estudo, a interação foi significativa aos 35 dias de idade e mostrou um efeito sinérgico, sendo a combinação dos ácidos em questão um potente modulador da imunidade humoral. Os resultados obtidos nas análises de morfometria intestinal não foram conclusivos. Em termos gerais, requerem-se mais estudos quanto ao uso dos ácidos orgânicos como promotores de crescimento. / During the last years, the national poultry keeping has suffered constant challenges, having as objective to diversify the consuming market of the broiler to around of the world. However, each market presents different requirements, as in the case of the European market that establishes the exclusion of antibiotics as promotional of growth in the feeding of the broilers. Aiming at this problematic one, this study was become fullfilled, with the objective to analyze the results of the association of the butyric and lactic acids as additives in the ration of broilers, in comparison to the results gotten for the usually used promoters of growth in the diets of broilers. They had been evaluated: the animal performance, humoral immunology and intestinal morfometric of the birds. 1400 male chickens of the commercial ancestry Ross had been used, dividing them in five groups with different treatments to that if it relates to the additive use. Being a group it has controlled absent of additive, a group with butyric acid, a group with lactic acid, the fourth group with the association of butyric and lactic acids, and the fifth group with avilamicina (antibiotic) as promotional of traditionally used growth in the production of broilers. The performance results had indicated that the interaction of acid ones was significant in the initial phase, mean while did not occur an additive effect of acid ones, being the use of the butyric acid separately more recommendable during this phase. Already in the growth phase, the interaction was significant with an additive effect, recommending its use in the rations of growth. In accordance with the average headings of antibodies gotten in the study, the interaction was significant in the third sampling and showed a synergic effect of acid ones, being the combination of acids in question a powerful modulator of the humoral immunity. Meanwhile, the results gotten in the analyses of intestinal morfometric had not been conclusive. In general terms, one requires more organic acid studies that confirm the use of as the promotional ones of growth.

The experiment was conducted at the Laboratory of Poultry (LAVIC) of the Department of Animal Science at Federal University of Santa Maria - RS, from November of 2003 to January of 2004 aiming to evaluate the use of prebiotics, organic acids (acidifiers), enzymes and garlic (phytotherapeutic) as alternative growth promoters, instead of the conventionals (antibiotics) commonly used in broilers feed. The amount of 480 males, day old, Cobb chicks were used, which were submitted to six experimental treatments: T1= Basic Diet (BD) without any growth promoters; T2= BD with 0.1% of garlic in powder; T3= BD with 0.2 % of garlic in powder; T4= BD with antibiotics (Zinc Bacitracina (10 g/ton) and Olaquindox (70 g/ton);T5= BD with prebiotic (mananoligossacarídeos(MOS)) and acidifier (fórmic acids (50%) + propionic acids (50%) and T6= BD whit prebiotic (mananoligossacarídeos(MOS)) and enzymes. The amount of prebiotic, acidifier and enzymes used were rated by the technical advise of the commercial products used. Twenty four experimental boxes of the 1.5 X1.5m, with 20 fowls each were used, with four replicates by treatment in a completely randomized design. The fowls were sheltered on reutilized bed wood shavings, in a mansory shed raised with animal feed based on corn and soy bean meal, ad libitum , isonutritives and divided in three phases: initial (1-21 days) bearing 22% Crude Protein (CP) and 3050 Kcal ME/Kg, growth (22-35 days) with 20% CP and 3100 Kcal ME/Kg, final (36- 43 days) with 18.5 % of CP and 3150 Kcal ME/Kg. The treatments did not show any statistic difference for the parameters: weigh gain (WG) and production factor (PF). There wasn t a significant effect on the feed intake (FI), in the phases of 1-21 and 22-35 days of live, but in the phase of 36-43 days there was a significant effect (P<005), with difference only between the treatments without growth promoters (T1) and the treatments with garlic (T2 and T3), but they did not diverge significantly from the others. Introductory the period of 1-43 days, to come different significant (P<0.05), at the feed intake (FI), of the fowls the treatments without growth promoters (T1) and with antibiotics (T4), but they did not diverge significantly from the others. The feed conversion (FC), did not differ statiscally (P>0.05) in the phases of 1-21 and 36-43 days of live the fowls. The phase of 22-35 days to come different significant (P<0.05), where the fowls submitted to treatment with antibiotics (T4) and with prebiotics + acidifier (T5), showed better feed conversion (FC) and it was statistically relevant (P<0.05), when compared with fowls of the treatment prebiotics + enzymes (T6), but the treatment with prebiotics + acidifier (T5), was not differences between them (P>0.05). In the period of 1-43 days, the fowls submitted to treatment with antibiotics (T4) showed better feed conversion (FC) and it was statistically relevant (P<0.05), when compared with fowls of the control treatments (T1) and prebiotics + enzymes (T6), but there were no differences between them (P>0.05). The feed conversion (FC) of the fowls submitted to the other treatments (T2, T3 and T5) did not differ statiscally (P>0.05). The results according to the intestinal morphology and carcass yield did not show significant effects (P>0.05) between the different growth promoters tested. Based on the results obtained, taking in to account the conditions of what the experiment was conducted, it was concluded that the alternative growth promoters tested did not affect negatively the characteristics of the intestinal morphology of the broilers validating them as substitutes to the conventional promoters. / O experimento foi conduzido no Laboratório de Avicultura (LAVIC) do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Santa Maria - RS, no período de novembro de 2003 a janeiro de 2004, com o objetivo de avaliar o uso de prebióticos, ácidos orgânicos (acidificantes), enzimas e alho (fitoterápico) como promotores de crescimento alternativos, em substituição aos convencionais (antibióticos), usualmente utilizados nas dietas para frangos de corte. Foram usados 480 pintos de corte, machos, com um dia de vida, da linhagem Cobb 500, os quais foram submetidos a seis tratamentos experimentais: T1= Dieta Base (DB) sem adição de promotor de crescimento; T2= DB com 0,1% de alho em pó; T3= DB com 0,2% de alho em pó; T4= DB com Bacitracina de Zinco (10g/ton) e Olaquindox (70g/ton); T5= DB com prebiótico (mananoligossacarídeos (MOS)) e acidificante orgânico (ácido fórmico (50%) + ácido propiônico (50%)) e T6= DB com prebiótico (mananoligossacarídeos (MOS)) e complexo enzimático (proteases, amilases e celulases). Os níveis utilizados de prebióticos, acidificantes e enzimas foram obtidos através das recomendações técnicas dos produtos comerciais usados. Foram usados 24 boxes experimentais de 1,5 X 1,5 m, contendo 20 aves cada, com quatro repetições por tratamento, distribuídos num delineamento experimental inteiramente casualizado. As aves foram alojadas em cama de maravalha reutilizada, num galpão de alvenaria, alimentadas com ração isonutritiva , à base de milho e farelo de soja, fornecida à vontade e dividida em três fases: inicial (1-21 dias), contendo 22% PB e 3050 Kcal de EM/Kg, crescimento (22-35 dias) com 20% PB e 3100 Kcal EM/Kg e final (36-43 dias) com 18,5% de PB e 3150 Kcal EM/Kg. Os tratamentos não apresentaram diferença estatística nos parâmetros de: ganho de peso (GP) e fator de produção (FP). Para o consumo de ração (CR), não se observaram diferenças significativas nas fases de 1-21 e 22-35 dias, mas na fase de 36-43 dias verificou-se efeito significativo (P<0,05), com diferença apenas entre os tratamentos sem adição de promotores de crescimento (T1) e os tratamentos com adição de alho (T2 e T3), estes com a adição de alho não diferiram significativamente dos demais tratamentos (T4,T5 e T6). Considerando o período total (1-43 dias), ocorreu diferença significativa (P<0,05), no consumo de ração entre as aves dos tratamentos sem adição de promotores de crescimento (T1) e com a adição de antibióticos (T4), nos demais tratamentos não houve efeito significativo em relação ao consumo de ração. A conversão alimentar (CA) não foi afetada nas fases de 1-21 e 36-43 dias de idade das aves. Na fase de 22-35 dias verificou-se efeito significativo, onde as aves com antibióticos convencionais (T4) e com MOS + Acidificantes (T5) obtiveram a melhor conversão alimentar, porém sem diferir significativamente entre ambas. Entretanto, as aves do tratamento T5 foram mais eficientes, diferindo significativamente (P<0,05) em relação as aves do T6 (MOS + enzimas), mas não diferiram significativamente das aves dos tratamentos ( T1, T2 e T3 ). Sendo que no período de 1-43 dias, as aves submetidas ao tratamento com antibióticos (T4) apresentaram melhor conversão alimentar (CA) estatisticamente significativa (P<0,05), quando comparadas as aves dos tratamentos sem adição de promotores de crescimento (T1) e prebiótico + complexo enzimático (T6), sendo que estes não diferiram entre si (P>0,05). A conversão alimentar das aves submetidas aos demais tratamentos (T2, T3 e T5) não diferiram entre si (P>0,05). Os resultados referentes à altura de vilos intestinais e rendimento de carcaça não apresentaram efeitos significativos (P>0,05) entre os diferentes promotores de crescimento avaliados. Com base nos resultados obtidos, levando em consideração as condições em que o experimento foi conduzido, conclui-se que os promotores de crescimento alternativos testados são uma opção aos antibióticos. Os promotores de crescimento alternativos testados não afetaram negativamente as características de carcaça e morfometria intestinal dos frangos de corte.

Devido as suas características funcionais, as proteínas vêm sendo cada vez mais utilizadas em diferentes áreas e atividades da sociedade humana como: alimentícia, indústria, têxtil, papel e celulose, química e médica. A produção industrial de proteínas de valor comercial para diversas aplicações, vem sendo cada vez mais conduzida através do desenvolvimento de sistemas de expressão em diferentes hospedeiros, como Saccharomyces cerevisiae. O presente trabalho teve por objetivo desenhar um sistema de expressão metabolicamente independente induzido pelo hormônio estradiol que, em S. cerevisiae, seja capaz de produzir e secretar com eficiência proteínas homólogas e/ou heterólogas de interesse industrial. Para tanto, foi desenhado e construído um plasmídeo regulador (que expressa o fator de transcrição quimérico c-mycGal4(DBD)hER&#945;(LBD)VP16(AD) e um plasmídeo de expressão (que contém o promotor quimérico p5xUASGAL-UARcb1, o qual será induzido pelo fator de transcrição quimérico, regulando a expressão da proteína repórter celobiohidrolase I - cbh1 de Trichoderma reesei). Ambos plasmídeos foram utilizados para transformar a cepa ScW303-1A/pdr5&#916;(construída neste trabalho) e induzido com diferentes concentrações de estradiol. Para analisar a habilidade do promotor em dirigir a expressão da proteína repórter cbh1, foi feito o teste de DNS, com os transformantes selecionados, utilizando carboximetilcelulose 1% como substrato. A maior atividade enzimática ocorre na indução do sistema com 5 &#956;M de 17-&#946;-estradiol e DES (dietilestilbestrol). Os resultados mostram que o sistema de expressão induzido por 17-&#946;-estradiol e DES, funciona de forma eficiente em S. cerevisiae e que o mesmo pode ser utilizado na produção biotecnológica de outras proteínas de interesse. / Due to its functional characteristics, the proteins are being increasingly used in different areas and activities of human society: food, industry, textile, pulp and paper, chemical and medical. The industrial production of commercially valuable proteins for various applications is increasingly being conducted through the development of systems of expression in different hosts such as Saccharomyces cerevisiae. This study aimed to design a metabolically independent expression system induced by estradiol hormone in S. cerevisiae is able to produce and secrete effectively homologous proteins and / or heterologous of industrial interest. Thus, it was designed and built a regulatory plasmid (expressing the chimeric transcription factor c-myc-Gal4 (DBD) -hER&#945; (LBD) - VP16 (AD) and an expression plasmid (which contains the chimeric promoter 5xUASGAL- UARcb1, which is induced by the chimeric transcription factor, regulating the expression of the reporter protein cellobiohydrolase I - cbh1 of Trichoderma reesei). Both plasmids were used to transform ScW303-1A / pdr5&#916; strain (constructed in this work) and induced with different concentrations of estradiol. To analyze the ability of the promoter to direct the expression of the reporter protein cbh1, the DNS testing, with the selected transformants was done using 1% carboxymethylcellulose as a substrate. The highest enzymatic activity occurs in the induction system with 5 &#956;M of 17-&#946;-estradiol and DES (diethylstilbestrol). The results show that the expression system induced by 17-&#946;-estradiol and DES operates efficiently in S. cerevisiae and that it can be used for the biotechnological production of other proteins of interest.