ALBUQUERQUE, Assis Filipe Medeiros. Avaliação do efeito da analgesia preemptiva sobre os eventos inflamatórios e níveis de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α E IL-1β) em cirurgias de terceiros molares inferiores. 2016. 96 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-02-26T13:55:16Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_afmalbuquerque.pdf: 12790761 bytes, checksum: 47c88fafa0d7a457a1634159873f6347 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-02-26T14:05:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_afmalbuquerque.pdf: 12790761 bytes, checksum: 47c88fafa0d7a457a1634159873f6347 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T14:05:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_afmalbuquerque.pdf: 12790761 bytes, checksum: 47c88fafa0d7a457a1634159873f6347 (MD5) Previous issue date: 2016 / The surgery for removal of third molars constitutes a com monly performed procedure in dentistry, and is associated with varying degrees of postoperative pain, which can significantly affect the quality of life of patients. Considering the maximum benefit to the patient undergoing an operation, the preemptive ana lgesia has been the pharmacological strategy widely researched in recent decades. This study aimed to evaluate the pre - emptive analgesia effect on the levels of proinflammatory cytokines ( TNF - α e IL - 1 β ) following mandibular third molar surgery. A unicentric, triple - blind, randomized, placebo - controlled study was conducted with 36 patients undergoing surgical removal of mandibular third molars. All volunteers were allocated randomly to recei ve either etoricoxib 120 mg, ibuprofen 400 mg or placebo 1 hour preoperatively, and inflammatory events were evaluated. There was significant difference between groups with respect to pain scores (p <0.001). Both etoricoxib and ibuprofen reduced pain score s compared to placebo (p <0.05). The TNF - α dose consumed by the placebo group showed no statistically significant difference (p = 0.127) from time 0 ' to time 30' minutes , whereas both ibuprofen and etoricoxib showed significant reduction between times. The IL - 1 β dosage consumed by the placebo gr oups and etoricoxib showed no significant variation; however, the ibuprofen group showed a significant reduction (p = 0.038) of IL - 1 β levels from time 0 ’ to time 30 ’ . As a conclusion, both TNF - α and IL - 1 β levels and the inflammatory events in surgeries for removal of third molars showed to be inversely proportional to the NSAID's COX - 2 selectivity used preemptively. Moreover, TNF - α and IL - 1 β showed a significant reduction in clinical parameters related to inflammatory events compared to the placebo group. / A cirurgia para remoção de terceiros molares constitui-se um procedimento frequentemente realizado em odontologia, estando associado a variados graus de dor pós-operatória, podendo afetar a qualidade de vida dos pacientes. Considerando o benefício máximo ao paciente submetido a uma cirurgia, insere-se a analgesia preemptiva como estratégia farmacológica amplamente pesquisada nas últimas décadas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da analgesia preemptiva sob os efeitos inflamatórios e sob os níveis de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1β) em cirurgias de terceiros molares inferiores. Foi realizado um estudo unicêntrico, triplo-cego, randomizado, placebo-controlado, com 36 pacientes submetidos à remoção cirúrgica de terceiros molares mandibulares (n=72) que foram randomicamente alocados para receber etoricoxibe 120 mg, ibuprofeno 400mg ou placebo 1 hora pré-operatoriamente, e os eventos inflamatórios (dor, edema e abertura bucal) foram avaliados. Houve diferença significativa entre os grupos com relação aos escores de dor (p<0,001). Etoricoxibe e ibuprofeno reduziram os escores de dor em relação ao placebo (p<0,05). A dosagem de TNF-α do grupo placebo não mostrou diferença estatisticamente significante (p=0,127) do tempo 0’ para o tempo 30’ minutos, enquanto que o ibuprofeno e o etoricoxibe mostraram redução significativa entre os tempos. A dosagem de IL-1β dos grupos placebo e etoricoxibe não mostraram variação significativa, porém, no grupo ibuprofeno houve redução significante (p=0,038) dos níveis do tempo 0` para o tempo 30`. Como conclusão do estudo, os níveis de TNF-α e IL-1β, bem como os eventos inflamatórios em cirurgias para remoção de terceiros molares inferiores, mostraram-se inversamente proporcionais à seletividade COX-2 do AINE utilizado preemptivamente, e estes apresentaram redução significativa dos parâmetros clínicos referentes aos eventos inflamatórios em comparação ao grupo placebo.

O 17&#946;-E2 estimula a expressão de receptores endometriais, ER e OXTR. A ativação de OXTR induz a ativação da cadeia de síntese de PGF2&#945;. A hipótese do presente estudo é que as enzimas de síntese de PGF2&#945; são reguladas pelo 17&#946;-E2. Objetivou-se determinar os efeitos do 17&#946;-E2 na expressão gênica e proteica, assim como na localização de proteínas envolvidas na síntese de PGF2&#945;. Vacas Nelore multíparas, solteiras e cíclicas foram sincronizadas por aplicação de BE e inserção de dispositivo de P4. Após 8 dias realizou-se a remoção do dispositivo de P4 e aplicação de PGF2&#945;, seguido por 4 dias de observação de estro (D0=dia do estro). Entre D14 e D27 foram realizadas avaliações diárias da área do CL (cm2), fluxo sanguíneo (%) e concentração plasmática de progesterona (P4). No D15 as vacas foram divididas em três grupos: Controle (C; não tratado;N= 10), Placebo (P; 6mL de etanol 50%; IV; N= 21) e Estradiol (E; 3mg 17&#946;-E2; 6mL de etanol 50%; IV;N=21). Subsequente aos tratamentos, biópsias uterinas foram coletadas nos tempos 0h (C; N=10); 4h (E4h, N=11 e P4h; N=10) ou 7h (E7h, N=10 e P7h, N=11). Amostras de sangue foram obtidas nos tempos 0h a 7h, para mensuração das concentrações PGFM no D15. O grupo E apresentou acentuada diminuição da área do CL, fluxo sanguíneo e concentração de P4 (P&lt;0,05), comparado ao grupo P. Comparado ao grupo P, as vacas do grupo E anteciparam o dia da luteólise funcional e estrutural em 2 e 3 dias, respectivamente. O grupo E apresentou maior concentração de PGFM nos tempos 4h, 6h e 7h (P&lt;0,05), comparado ao grupo P. A quantificação dos transcritos realizada por qPCR (N=6/grupo). Na hora 4, a abundância dos genes ESR1, ESR2, PRKC&#945;, PRKC&#946;, PLA2G4, AKR1B1 e AKR1C4 foi menor nas amostras E4h, enquanto OXTR foi maior nas mesmas amostras comparando-se com as amostras P4h (P&lt;0,05). A expressão gênica de PTGS2 não diferiu entre os grupos E4h e P4h (P&gt;0,05). Na hora 7, as amostras E7h também apresentaram menor abundância de ESR1, PRKC&#945;, PRKC&#946;, AKR1B1 e AKR1C4 (P&lt;0,05) e houve tendência para menor expressão de ESR2, comparado às amostras P7h. Contudo, não houve diferença na abundância de OXTR, PLA2G4 e PTGS2 entre as amostras E7h e P7h (P&gt;0,05). A abundância da enzima PKC&#945; analisada por Western Blotting (N=3/grupo) foi diminuída tanto nas amostras E4h como nas E7h, em relação às amostras P4h e P7h, respectivamente. Na avaliação por imunohistoquímica (N=5/grupo), o grupo E4h apresentou maior imunomarcação de PGR no epitélio glandular (P&lt; 0,05) e houve tendência para maior imunomarcação de PKC&#978; no epitélio luminal, comparado ao grupo P4h (P=0,08). Houve tendência para menor imunomarcação de ER&#945; no epitélio glandular do grupo E4h comparado ao grupo E7h (P=0,1). Concluí-se que a aplicação do 17&#946;-E2 levou a redução da maioria dos transcritos das moléculas de síntese de PGF2&#945;, assim como da abundância de PKC&#945;. O possível mecanismo para a estimulação de PGFM por 17&#946;-E2 pode incluir o aumento da ativação de enzimas que participam na cascata de síntese de PGF2&#945;. / 17&#946;-E2 stimulates the expression of endometrial receptors, ER and OXTR. Activation of OXTR induces the activation of the synthesis of PGF2&#945; pathway. The central hypothesis is that the enzymes involved in PGF2 synthesis are reguleted by 17&#946;-E2. The objective of this study was to determine the effects of 17&#946;-E2 on gene and protein expression and localization of the enzymes involved in PGF2&#945; synthesis. Multiparous, non-lactating and cyclic Nelore cows were synchronized by BE application and P4 device insertion. After 8 days the P4 device was removed and a single dose of PGF2&#945; applied, followed by 4 days of estrus detection (D0 = day of estrus). Daily measurements of CL area (cm2), blood flow (%), and plasma progesterone concentration (P4) were performed between D14 and D27. On D15 cows were divided into three groups: Control (C, untreated, N = 10), Placebo (P; 6mL of ethanol 50%, IV; N = 21) and Estradiol (E; 3mg 17&#946;-E2; Ethanol 50%, IR: N = 21). After the treatments administration, uterine biopsies were collected at times 0h (C; N = 10); 4h (E4h, N = 11 and P4h, N = 10) or 7h (E7h, N = 10 and P7h, N = 11). Blood samples were obtained from time 0h to 7h for the measurement of the PGFM concentrations on D15. Group E showed a marked decrease in CL area, blood flow, and P4 concentration (P &lt;0.05) compared to group P. Also, when compared to group P, cows from group E anticipated the day of functional and structural luteolysis in 2 and 3 days, respectively. Group E presented higher concentration of PGFM at 4h, 6h and 7h (P &lt;0.05), compared to group P. The transcripts abundance was performed by qPCR (N = 6 / group). The transcripts abundance of ESR1, ESR2, PRKC&#945;, PRKC&#946;, PLA2G4, AKR1B1, and AKR1C4 genes was lower in the E4h samples, while OXTR was higher in the same samples compared to the P4h (P &lt;0.05) samples in the time 4h. The gene expression of PTGS2 did not differ between groups E4h and P4h (P&gt; 0.05). At time 7h, samples E7h also had lower abundance of ESR1, PRKC&#945;, PRKC&#946;, AKR1B1 and AKR1C4 (P &lt;0.05) and there was a tendency for lower ESR2 expression, compared to samples P7h. Nevertheless, there was no difference in the abundance of OXTR, PLA2G4, and PTGS2 between samples E7h and P7h (P&gt; 0.05). The abundance of the PKC&#945; enzyme analyzed by Western Blotting (N = 3 / group) was decreased in both the E4h and E7h samples, relative to the samples P4h and P7h, respectively. In the evaluation by immunohistochemistry (N = 5 / group), the E4h group presented greater PGR immunostaining in the glandular epithelium (P &lt;0.05) and there was a tendency for a greater immunostaining of PKC&#978; in the luminal epithelium, compared to the P4h group (P = 0,08). There was a tendency for lower ER&#945; immunostaining in the glandular epithelium of the E4h group compared to the E7h group (P = 0.1). It was concluded that the application of 17&#946;-E2 led to the reduction of most of the transcripts of the PGF2&#945; synthesis molecules, as well as the abundance of PKC&#945;. The possible mechanism for stimulation of PGFM by 17&#946;-E2 may include increased activation of enzymes that participate in the cascade of PGF2&#945; synthesis.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.

A fagocitose de células apoptóticas, também denominada eferocitose, é um processo dinâmico e de fundamental importância para homeostase dos tecidos após uma injúria. Estudos demonstraram previamente que a fagocitose de células apoptóticas promove a síntese de mediadores anti-inflamatórios como PGE2, TGF-? e IL-10, podendo resultar num microambiente supressor e aumento da susceptibilidade do hospedeiro contra agentes infecciosos. Entretanto, a fagocitose de células apoptóticas infectadas por células dendríticas promove a geração não apenas de citocinas anti-inflamatórias como TGF-?, mas também de IL-6 e IL-23, levando a um efeito imunoestimulador, a diferenciação de células Th17. A atuação da PGE2 na imunidade adaptativa vem sendo investigada quanto à diferenciação e ativação de linfócitos Th1, Treg e Th17. Nossos resultados demonstram que a fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli promove a ativação e migração de células dendríticas, assim como a produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias e altos níveis de PGE2. No entanto, diferente da hipótese inicial, a presença de altas concentrações de PGE2 inibe drasticamente a diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli por células dendríticas, in vitro. O tratamento de linfócitos T CD4+naive com antagonistas e agonistas de EP2/EP4 demonstram que o efeito supressor de PGE2 é mediado primordialmente pelo receptor EP4. Por fim, nossos resultados in vivo comprovam os resultados obtidos in vitro, demonstrando o papel supressor de PGE2 na diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas em modelo de infecção pulmonar. / The phagocytosis of apoptotic cells, also called efferocytosis, is a dynamic process critical for tissue homeostasis after injury. We and other groups previously have shown that phagocytosis of apoptotic cells promotes the synthesis of anti-inflammatory mediators such as PGE2, TGF-? and IL-10, that may result in the suppression of host defense against microorganisms. However, an elegant study using infected apoptotic cells showed that phagocytosis of these cells promote not only the generation of anti-inflammatory cytokines such as TGF-? but also IL-6 and IL-23, resulting in an immunostimulatory effect, the differentiation of Th17 cells. The role of PGE2 in adaptive immunity has been investigated regarding differentiation and activation of Th1, Th17 and Treg. Our results demonstrate that engulfment of E.coli infected apoptotic cells promotes the activation and migration of dendritic cells as well as production of pro and anti-inflammatory cytokines together with high levels of PGE2. However, differing from our hypothesis, high levels of PGE2 inhibits drastically the differentiation of Th17 cells on the context of engulfment of E.coli infected apoptotic cells by dendritic cells in vitro. The treatment of T CD4+naive cells with antagonist or agonists of EP2/EP4 receptors demonstrates the suppressor effect is mainly mediated by EP4 receptor. Finally, the instillation of E.coli infected apoptotic cells in E.coli infected animals resulted on modest Th17 increase but treatment with cox inhibitor increased Th17 cell differentiation. Therefore, our in vivo results prove the in vitro results.

Nas éguas cíclicas, a luteólise ocorre entre os dias 14 e 16 após ovulação, pela ação da PGF2&#940 endometrial. Entretanto, durante a gestação, a luteólise deve ser bloqueada, ao mesmo passo que a ação da PGE2 deve ser estimulada. Ambos hormônios possuem baixa difusão pela membrana plasmática, sendo necessária a presença da proteína transportadora de prostaglandina (PGT) para o influxo e efluxo destes hormônios nas células. Os objetivos deste experimento foram identificar e relacionar o RNAm da PGT no endométrio de éguas cíclica e gestante aos 14 dias (experimento 1) e avaliar o perfil do RNAm para PGT no endométrio eqüino em final de diestro sob efeito de secreção embrionária (experimento 2). Para o experimento 1, um ciclo estral de 11 éguas foi acompanhado. Seis éguas não foram inseminadas e somente detectado o tempo de ovulação e cinco foram inseminadas. Biópsias endometriais foram realizadas quando detectado folículo pré-ovulatório (&#8805;35mm de diâmetro) e edema endometrial (E0; n=6), sete (E7; n=6) e quatorze (E14; n=6) dias após ovulação nas fêmeas cíclicas e aos quatorze dias de gestação (EG; n=4) nas fêmeas gestantes. No experimento 2, 5 embriões eqüinos de 13,5 dias de idade foram coletados, cultivados por 24 horas em ambiente com temperatura e CO2 controlados e o meio condicionado embrionário (MCEE) gerado foi armazenado a -80&ordm;C. Em seguida, amostras endometriais de sete éguas cíclicas aos 14 dias pós ovulação foram coletadas por biópsia uterina e cultivadas por 24 horas, em ambiente com temperatura e CO2 controlados, na presença do MCEE. O RNA total foi extraído de todas as amostras endometriais e amplificado pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), de um passo. A abundância relativa média dos transcritos foi submetida a análise de variância e as médias foram separadas pelo teste LSD (P<0,05). No experimento 1, o RNAm da PGT em tecido equino foi identificado, de maneira que as quantidades relativas deste gene foram similares entre E0, E7, E14 e EG. No experimento 2, o MCEE não modificou a quantidade de RNAm para PGT no endométrio em fase final do diestro. / In cyclic mares, luteolysis occurs between the 14th and 16th days after ovulation, due to endometrial PGF2&#940 However, in pregnant mares luteolysis must be blocked, whereas the PGE2 action must be stimulated. Both hormones have low diffusion through the plasma membrane, wherein the Prostaglandin Transporter Protein (PGT) is needed to influx and efflux of these hormones in the cells. The objectives of this experiment are to identify and to relate with the mRNA to PGT in the endometrium of cyclic and pregnant mares (experiment 1) and to evaluate the mRNA profile to PGT in equine endometrium at end of diestrous, under embryonic secretion effect (experiment 2). In the experiment 1, one estrous cycle of 11 mares (5 to 12 years old) was examined. Six mares were not inseminated and only the time of ovulation was recorded, and five mares were inseminated. Endometrial biopsies were performed when pre-ovulatory follicles (diameter &#8805; 35mm) and endometrial edema were detected (E0; n=6), seven (E7; n=6) and fourteen days (E14; n=6) after ovulation in cyclic mares, and fourteen days after ovulation in pregnant mares (EG; n=4). In the experiment 2, five embryos of 13,5 days of age were collected, cultured during 24 hours in controlled temperature and CO2 and the embrionic conditioned medium (ECM) was stored at -80&ordm;C. After that, endometrium samples of 7 mares at fourteen days after ovulation were collected by uterine biopsy and they were cultured during 24 hours, in controlled temperature and CO2, with ECM. Total RNA was extracted and submitted to amplification by one step real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). The abundance relative average of trancripts was submitted to variance analysis and averages were separated by LSD test (P<0,05). In the experiment 1 the mRNA to equine PGT was identified so that the relative quantities of this gene were equal among E0, E7, E14 e EG. In the experiment 2, the ECM did not modify the mRNA quantity to PGT in the endometrium at end of diestrous.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.

O 17&#946;-E2 estimula a expressão de receptores endometriais, ER e OXTR. A ativação de OXTR induz a ativação da cadeia de síntese de PGF2&#945;. A hipótese do presente estudo é que as enzimas de síntese de PGF2&#945; são reguladas pelo 17&#946;-E2. Objetivou-se determinar os efeitos do 17&#946;-E2 na expressão gênica e proteica, assim como na localização de proteínas envolvidas na síntese de PGF2&#945;. Vacas Nelore multíparas, solteiras e cíclicas foram sincronizadas por aplicação de BE e inserção de dispositivo de P4. Após 8 dias realizou-se a remoção do dispositivo de P4 e aplicação de PGF2&#945;, seguido por 4 dias de observação de estro (D0=dia do estro). Entre D14 e D27 foram realizadas avaliações diárias da área do CL (cm2), fluxo sanguíneo (%) e concentração plasmática de progesterona (P4). No D15 as vacas foram divididas em três grupos: Controle (C; não tratado;N= 10), Placebo (P; 6mL de etanol 50%; IV; N= 21) e Estradiol (E; 3mg 17&#946;-E2; 6mL de etanol 50%; IV;N=21). Subsequente aos tratamentos, biópsias uterinas foram coletadas nos tempos 0h (C; N=10); 4h (E4h, N=11 e P4h; N=10) ou 7h (E7h, N=10 e P7h, N=11). Amostras de sangue foram obtidas nos tempos 0h a 7h, para mensuração das concentrações PGFM no D15. O grupo E apresentou acentuada diminuição da área do CL, fluxo sanguíneo e concentração de P4 (P&lt;0,05), comparado ao grupo P. Comparado ao grupo P, as vacas do grupo E anteciparam o dia da luteólise funcional e estrutural em 2 e 3 dias, respectivamente. O grupo E apresentou maior concentração de PGFM nos tempos 4h, 6h e 7h (P&lt;0,05), comparado ao grupo P. A quantificação dos transcritos realizada por qPCR (N=6/grupo). Na hora 4, a abundância dos genes ESR1, ESR2, PRKC&#945;, PRKC&#946;, PLA2G4, AKR1B1 e AKR1C4 foi menor nas amostras E4h, enquanto OXTR foi maior nas mesmas amostras comparando-se com as amostras P4h (P&lt;0,05). A expressão gênica de PTGS2 não diferiu entre os grupos E4h e P4h (P&gt;0,05). Na hora 7, as amostras E7h também apresentaram menor abundância de ESR1, PRKC&#945;, PRKC&#946;, AKR1B1 e AKR1C4 (P&lt;0,05) e houve tendência para menor expressão de ESR2, comparado às amostras P7h. Contudo, não houve diferença na abundância de OXTR, PLA2G4 e PTGS2 entre as amostras E7h e P7h (P&gt;0,05). A abundância da enzima PKC&#945; analisada por Western Blotting (N=3/grupo) foi diminuída tanto nas amostras E4h como nas E7h, em relação às amostras P4h e P7h, respectivamente. Na avaliação por imunohistoquímica (N=5/grupo), o grupo E4h apresentou maior imunomarcação de PGR no epitélio glandular (P&lt; 0,05) e houve tendência para maior imunomarcação de PKC&#978; no epitélio luminal, comparado ao grupo P4h (P=0,08). Houve tendência para menor imunomarcação de ER&#945; no epitélio glandular do grupo E4h comparado ao grupo E7h (P=0,1). Concluí-se que a aplicação do 17&#946;-E2 levou a redução da maioria dos transcritos das moléculas de síntese de PGF2&#945;, assim como da abundância de PKC&#945;. O possível mecanismo para a estimulação de PGFM por 17&#946;-E2 pode incluir o aumento da ativação de enzimas que participam na cascata de síntese de PGF2&#945;. / 17&#946;-E2 stimulates the expression of endometrial receptors, ER and OXTR. Activation of OXTR induces the activation of the synthesis of PGF2&#945; pathway. The central hypothesis is that the enzymes involved in PGF2 synthesis are reguleted by 17&#946;-E2. The objective of this study was to determine the effects of 17&#946;-E2 on gene and protein expression and localization of the enzymes involved in PGF2&#945; synthesis. Multiparous, non-lactating and cyclic Nelore cows were synchronized by BE application and P4 device insertion. After 8 days the P4 device was removed and a single dose of PGF2&#945; applied, followed by 4 days of estrus detection (D0 = day of estrus). Daily measurements of CL area (cm2), blood flow (%), and plasma progesterone concentration (P4) were performed between D14 and D27. On D15 cows were divided into three groups: Control (C, untreated, N = 10), Placebo (P; 6mL of ethanol 50%, IV; N = 21) and Estradiol (E; 3mg 17&#946;-E2; Ethanol 50%, IR: N = 21). After the treatments administration, uterine biopsies were collected at times 0h (C; N = 10); 4h (E4h, N = 11 and P4h, N = 10) or 7h (E7h, N = 10 and P7h, N = 11). Blood samples were obtained from time 0h to 7h for the measurement of the PGFM concentrations on D15. Group E showed a marked decrease in CL area, blood flow, and P4 concentration (P &lt;0.05) compared to group P. Also, when compared to group P, cows from group E anticipated the day of functional and structural luteolysis in 2 and 3 days, respectively. Group E presented higher concentration of PGFM at 4h, 6h and 7h (P &lt;0.05), compared to group P. The transcripts abundance was performed by qPCR (N = 6 / group). The transcripts abundance of ESR1, ESR2, PRKC&#945;, PRKC&#946;, PLA2G4, AKR1B1, and AKR1C4 genes was lower in the E4h samples, while OXTR was higher in the same samples compared to the P4h (P &lt;0.05) samples in the time 4h. The gene expression of PTGS2 did not differ between groups E4h and P4h (P&gt; 0.05). At time 7h, samples E7h also had lower abundance of ESR1, PRKC&#945;, PRKC&#946;, AKR1B1 and AKR1C4 (P &lt;0.05) and there was a tendency for lower ESR2 expression, compared to samples P7h. Nevertheless, there was no difference in the abundance of OXTR, PLA2G4, and PTGS2 between samples E7h and P7h (P&gt; 0.05). The abundance of the PKC&#945; enzyme analyzed by Western Blotting (N = 3 / group) was decreased in both the E4h and E7h samples, relative to the samples P4h and P7h, respectively. In the evaluation by immunohistochemistry (N = 5 / group), the E4h group presented greater PGR immunostaining in the glandular epithelium (P &lt;0.05) and there was a tendency for a greater immunostaining of PKC&#978; in the luminal epithelium, compared to the P4h group (P = 0,08). There was a tendency for lower ER&#945; immunostaining in the glandular epithelium of the E4h group compared to the E7h group (P = 0.1). It was concluded that the application of 17&#946;-E2 led to the reduction of most of the transcripts of the PGF2&#945; synthesis molecules, as well as the abundance of PKC&#945;. The possible mechanism for stimulation of PGFM by 17&#946;-E2 may include increased activation of enzymes that participate in the cascade of PGF2&#945; synthesis.

A fagocitose de células apoptóticas, também denominada eferocitose, é um processo dinâmico e de fundamental importância para homeostase dos tecidos após uma injúria. Estudos demonstraram previamente que a fagocitose de células apoptóticas promove a síntese de mediadores anti-inflamatórios como PGE2, TGF-? e IL-10, podendo resultar num microambiente supressor e aumento da susceptibilidade do hospedeiro contra agentes infecciosos. Entretanto, a fagocitose de células apoptóticas infectadas por células dendríticas promove a geração não apenas de citocinas anti-inflamatórias como TGF-?, mas também de IL-6 e IL-23, levando a um efeito imunoestimulador, a diferenciação de células Th17. A atuação da PGE2 na imunidade adaptativa vem sendo investigada quanto à diferenciação e ativação de linfócitos Th1, Treg e Th17. Nossos resultados demonstram que a fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli promove a ativação e migração de células dendríticas, assim como a produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias e altos níveis de PGE2. No entanto, diferente da hipótese inicial, a presença de altas concentrações de PGE2 inibe drasticamente a diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli por células dendríticas, in vitro. O tratamento de linfócitos T CD4+naive com antagonistas e agonistas de EP2/EP4 demonstram que o efeito supressor de PGE2 é mediado primordialmente pelo receptor EP4. Por fim, nossos resultados in vivo comprovam os resultados obtidos in vitro, demonstrando o papel supressor de PGE2 na diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas em modelo de infecção pulmonar. / The phagocytosis of apoptotic cells, also called efferocytosis, is a dynamic process critical for tissue homeostasis after injury. We and other groups previously have shown that phagocytosis of apoptotic cells promotes the synthesis of anti-inflammatory mediators such as PGE2, TGF-? and IL-10, that may result in the suppression of host defense against microorganisms. However, an elegant study using infected apoptotic cells showed that phagocytosis of these cells promote not only the generation of anti-inflammatory cytokines such as TGF-? but also IL-6 and IL-23, resulting in an immunostimulatory effect, the differentiation of Th17 cells. The role of PGE2 in adaptive immunity has been investigated regarding differentiation and activation of Th1, Th17 and Treg. Our results demonstrate that engulfment of E.coli infected apoptotic cells promotes the activation and migration of dendritic cells as well as production of pro and anti-inflammatory cytokines together with high levels of PGE2. However, differing from our hypothesis, high levels of PGE2 inhibits drastically the differentiation of Th17 cells on the context of engulfment of E.coli infected apoptotic cells by dendritic cells in vitro. The treatment of T CD4+naive cells with antagonist or agonists of EP2/EP4 receptors demonstrates the suppressor effect is mainly mediated by EP4 receptor. Finally, the instillation of E.coli infected apoptotic cells in E.coli infected animals resulted on modest Th17 increase but treatment with cox inhibitor increased Th17 cell differentiation. Therefore, our in vivo results prove the in vitro results.

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Introduction: Severe ischemia-reperfusion injury (IRI) after liver transplantation are correlated with lower early and late graft and patient survival, higher infection rates, appearance of acute and chronic rejections and other complications. In this field, it has been demonstrated that the prostaglandin E1 (PGE1) presents cytoprotective, anti-inflammatory and vasodilator effects. Therefore, the PGE1 assembles most of the requirements necessary to prevent the development of the ischemia-reperfusion injury, especially if it is administered through via portal vein at full doses in the moment of graft reperfusion.Materials and methods: Female Largewhite-Landrace pigs (body weight between 30-35 kg) were used. The orthotopic liver transplantation were performed in 18 pairs of pigs. The study was divided into three groups as follows: Control group, 4 experiments of orthotopic liver transplantation with a cold preservation time of 3 hours in Wisconsin solution; Groups A and B, 7 experiments with 24 hours of cold preservation time in each group. Concerning intraportal infusion of medication, the Group B was infused with prostaglandin E1 at a dose of 0.15 ug/kg/min (Alprostadil 500ug) for 90 minutes in the portal reperfusion of the graft; and Group A was infused with saline solution for 90 minutes in the same time period. In the recipient surgery, biochemical (GOT, GPT, LDH, B-Galactosidase, Hialuronic Acid), hemodynamic and histological studies were carried out to evaluate the ischemia-reperfusion injury (IRI).Results: Survival rate in control group was 100 % and it presented a lower level of sinusoidal-hepatocellular injury and leukocyte activation than the groups A and B. From the beginning of the surgery until the moment of the PGE1 administration, both the group A and the group B were similar in relation to the histology, hepatocellular, endothelial and inflammatory damage markers. After the infusion of the medication (PGE1), the group B developed an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocyte-sinusoidal injury and hepatic function, with an statistical significance in the great majority of them. The portal PGE1 infusion at full doses did not generate hemodynamic instability. Conclusions: The liver transplantation in pigs with 24 hours of cold ischemia of the graft produced a severe IRI that caused the death of all the animals in the groups A and B due to primary graft nonfunction. Nevertheless, with the intraportal PGE1infusion, the group B presented an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocellular injury, sinusoidal damage and hepatic function. The portal PGE1 perfusion at full doses was well tolerated at hemodynamic level.