O objetivo do experimento I foi avaliar a luteólise causada por três doses de PGF2&#945; (12,5; 25 e 50 mg de Dinoprost tometamina) nos dias 5 e 7 do ciclo estral. Foram utilizadas 339 vacas não lactantes da raça Nelore. Os animais foram divididos em dois grupos de acordo com a apresentação do estro, recebendo a dose de PGF2&#945; nos dias 5 e 7 do ciclo estral. Cada grupo foi subdividido em três, que receberam os seguintes tratamentos de PGF2&#945; (12,5 mg; 25 mg; 50 mg). Através da concentração de P4 foram estimadas as taxas de regressão luteal 1 e 0,5 (1 - animais com concentração de P4 abaixo de 1 ng/mL; 0,5 animais com concentração de P4 abaixo de 0,5 ng/mL). Não houve interação entre a dose de PGF2&#945; e o dia do ciclo estral. A aplicação de PGF2&#945; no dia 7 do ciclo estral apresentou maior taxa de regressão luteal 1 e 0,5 quando comparada com o dia 5 do ciclo estral (1 - 76,9 vs 37,0 % - P = 0,0001; 0,5 - 57,5 vs 21,7 %, P = 0,0001, respectivamente). A taxa de regressão luteal 1 aumentou de acordo com a dose de PGF2&#945; administrada (12,5 mg 39,0 %; 25 mg 56,9 %; 50 mg 76,5 % P <0,0001). Quando a PGF2&#945; foi administrada no dia 5 do ciclo estral a concentração média de P4 segui o padrão de luteólise parcial e foi dependente da dose de PGF2&#945;. Quando a PGF2&#945; foi aplicada no dia 7 do ciclo estral a concentração média de P4 caiu drasticamente de 0 para 24 h e não voltou a se elevar em 48 h. A concentração de P4 em 48 h após a aplicação de PGF2&#945; foi menor na dose de 50 mg (0,51 ± 0,07 ng/mL). A taxa de luteólise foi menor no dia 5 do ciclo estral comparado com o dia 7 do ciclo estral. À medida que a dose de PGF2&#945; foi aumentada, a porcentagem de regressão luteal se elevou. O objetivo do experimento II foi avaliar se a substituição das aplicações do GnRH por BE, ECP e eCG no protocolos de 5 dias de P4 causa dupla ovulação e se a utilização de 1 ou 2 mg de BE no início do protocolo influencia na taxa de ovulação dupla. Foram utilizadas 85 multíparas da raça Nelore. No dia 0 do protocolo, as vacas receberam um implante de P4 e a dose de BE segundo o tratamento pertencente (tratamento A 1 mg de BE, tratamento B 2 mg de BE). Cinco dias após, o dispositivo foi retirado e aplicou-se PGF2&#945;, ECP eCG. Houve 5,9 % de dupla ovulação. O tratamento A causou menor porcentagem folículos maiores que 8 mm no dia 7 protocolo que o tratamento B (28,7 vs 50,6 P = 0,0460). Não houve diferença significativa na taxa de ovulação dupla, no diâmetro do folículo dominante no dia 5 e no dia 7 do protocolo e na taxa de crescimento folicular entre os tratamentos A e B. O protocolo de 5 dias de P4 com BE, ECP e eCG causou uma baixa taxa de dupla ovulação. O objetivo do experimento III foi comparar o aparecimento e a frequência de estro e a taxas de ovulação e gestação entre os protocolos de 5 dias de P4 + GnRH / GnRH e de 7 dias de P4 + BE / ECP + eCG em nulíparas, primíparas e multíparas. Foram utilizadas 411 fêmeas da raça Nelore (nulíparas - n = 198; primíparas - n = 80; multíparas - n = 133). No protocolo de 7 dias de P4, os animais receberam no dia 0 um implante de P4 e BE. No dia 7, o dispositivo foi retirado e aplicou-se PGF2&#945;, ECP e eCG. No protocolo de 5 dias de P4, os animais receberam no dia 0 o implante de P4 e GnRH. No dia 5, o dispositivo foi retirado e aplicaram-se 2 doses de PGF2&#945; com intervalo de 6 h entre as doses de PGF2. Os animais que não apresentaram estro até a hora da IA receberam 100 &#956;g de GnRH no momento da IA. A taxa de prenhez utilizando o protocolo de 5 ou 7 dias de P4 variou de acordo com a categoria da fêmea (nulíparas - 41,0 vs 51,0 % - P = 0.1608; primíparas 25,6 vs 31,7 % - P = 0,5513; multíparas - 58,4 vs 32,8 % - P = 0,0041, respectivamente). A taxa de apresentação de estro no protocolo de 7 dias de P4 foi maior para todas as categorias de fêmeas quando comparado com o protocolo de 5 dias deP4. (nulíparas 95,8 vs 66,0 % - P <0,0001; primíparas 48,7 vs 0 %; multíparas - 76,9 vs 13,4 % - P <0,0001, respectivamente). A resposta ao protocolo de 5 dias com GnRH foi pior nas multíparas. / The objective of the experiment I was to evaluate the luteolysis caused by three doses of PGF2&#945; (12.5, 25 and 50 mg of Dinoprost tometamina) when applied on the 5th and 7th days of the estrous cycle. Three hundred thirty-nine (339) nonlactating Nelore cows were used. The animals were divided into two groups according to the onset of estrus, and received the PGF2&#945; dose on the 5th or 7th day of the estrous cycle. Each group was divided into three subgroups, which were submitted to the treatments of PGF2&#945; with dose of 12.5 mg, 25 mg or 50 mg. Through the P4 concentration, the rates of 1 and 0.5 luteal regression were estimated (1 - animals with P4 concentration below 1 ng/mL and 0.5 - animals with P4 concentration below 0.5 ng/mL). There was no interaction between the PGF2&#945; dose and the day of the estrous cycle. The PGF2&#945; application on the 7th day of the estrous cycle had higher rates of the 1 and 0.5 luteal regression, when compared to the PGF2&#945; application on the 5th day of the estrous cycle (1 - 76.9 vs 37.0 % - P = 0.0001; 0,5 - 57.5 vs 21.7 %, P = 0.0001, respectively). The rate of 1 luteal regression increased with the PGF2&#945; dose (12.5 mg - 39.0 %; 25 mg - 56.9 %; 50 mg - 76.5 %, P < 0.0001). The average concentrations of P4, when the PGF2&#945; was administered on the 5th day of the estrous cycle, follow the partial luteolysis standard that dependent on the PGF2&#945; dose. When the PGF2&#945; is applied on 7th day of the estrous cycle, the average concentration of P4 drops dramatically from 0 to 24 h and it do not rise again in 48 h. The P4 concentration is lower in the 50 mg (0.51 ± 0.07 ng/mL), 48 h after the PGF2&#945; application. The luteolysis rate was low on the 5th day of the estrous cycle. The luteal regression percentage increased with increase of the PGF2&#945; dose. The objective of the experiment II was to evaluate whether the replacement of the GnRH applications by BE, ECP and eCG in the 5-day protocols of P4 cause double ovulation and if the use of 1 or 2 mg of BE at the beginning of the protocol influences the double ovulation rate. Eighty-five (85) multiparous Nelore cows were used. On day 0 of the protocol, the cows received a P4 implant and a dose of BE that depending on the treatment to which the cows belong (Treatment A - 1 mg of BE, treatment B - 2 mg of BE). Five days later, the device was removed and the PGF2&#945;, ECP and eCG were applied. In the experiment II, there was 6.5 % of double ovulation. There was no significant difference in the double ovulation rate, dominant follicle diameter on the 5th and 7th day of the protocols, and follicular growth rate between the treatments A and B. The 5-day protocol of P4 with BE, eCG and ECP caused a low rate of the double ovulation, and there was no difference between 1 or 2 mg of BE to synchronize the follicular development wave. The objective of the experiment III was to compare the onset and frequency of estrus and the ovulation and pregnancy rates among the protocols of 5 days of P4 with GnRH and 7 days of P4 with BE, ECP and eCG in nulliparous, primiparous and multiparous. Four hundred eleven (411) Nellore females were used (nulliparous - n = 198; primiparous - n = 80; multiparous - n = 133). In 7-day protocol of P4, the animals received an implant of P4 and BE on day 0. On day 7, the device was removed and the PGF2&#945;, ECP and eCG were applied in the cows. In 5-day protocol of P4, the animals received implants of GnRH and P4 on the day 0. On day 5, the device was removed and two doses of PGF2&#945; were applied with interval of 6 h. The animals that did not show estrus until the AI time received 100 mg of GnRH at this moment. The pregnancy rate varied according to the female category in both protocols (nulliparous - 41.0 vs 51.0 % - P = 0.1608; primiparous - 25.6 vs 31.7 % - P = 0.5513; multiparous - 58.4 vs 32.8 % - P = 0.0041, respectively). The rate estrus onset in the 5-day protocol of P4 with GnRH was lower for all female categories, when compared to the 7-day protocol (nulliparous - 95.8 vs 66.0 % - P <0.0001; primiparous 0 vs 48.7 %; multiparous - 76.9 vs 13.4 % - P <0.0001, respectively). The response in the 5-day protocol with GnRH was worse in multiparous cows.

Interação entre angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] e bradicinina (BK) foi determinada no mesentério de ratos Wistar anestesiados utilizando-se microscopia intravital. Aplicação tópica de BK e Ang-(1-7) induziram vasodilatação que foi abolida por HOE-140 e A-779, respectivamente. Ang-(1-7) (100 pmol) potencializou a vasodilatação de BK (1 pmol) mas não a vasodilatação promovida por acetilcolina, nitroprussiato de sódio, histamina e ácido araquidônico. O efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK foi abolido por A-779, HOE-140, indometacina, L-NAME e TEA, entretanto, losartan não bloqueou este efeito. Enalaprilato aumentou a resposta vasodilatadora de BK e Ang-(1-7) e não alterou o efeito potencializador do segundo sobre o primeiro. Conclui-se que: 1)efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK depende da interação de ambos com seus respectivos receptores; 2)é dependente de óxido nítrico, produtos da cicloxigenase e hiperpolarização de membrana via canais de potássio; 3) o mecanismo de potencialização parece não depender da atividade catalítica da ECA. / The interaction between angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and bradykinin (BK) was determined in the mesentery of anesthetized Wistar rats using intravital microscopy. The response-induced by topical application of BK (1, 10 and 30 pmol), Ang-(1-7) (1, 10, 100 and 1000 pmol) and Ang-(1-7) (100 pmol) + BK (1 pmol) was determined in mesenteric arterioles (15-20 mm diameter). The BK (1 pmol)- and Ang-(1-7) (100 pmol)- induced vasodilation was abolished by BK B2 receptor antagonist HOE-140 (100 pmol applied during 60 seconds) and the Ang-(1-7) antagonist [d-Ala7]-Ang-(1-7)] (A-779) (100 pmol applied during 15 seconds), respectively. Indomethacin (5 mg/kg; IM, 30 min before), a cyclooxygenase inhibitor; L-NAME (10 nmol; topical application, 3 min before), a NO synthase inhibitor, decreased the Ang-(1-7)-induced vasodilation. However, TEA (90 pmol; topical application), a non specific K+ channels blocker, did not alter the response to BK or Ang-(1-7). BK (1 pmol)-induced vasodilation, however, was potentiated by Ang-(1-7) 100 pmol. Sodium nitroprusside (38 pmol), acetylcholine (1,6 nmol), histamine (5,4 nmol) and arachdonic acid (10 nmol) responses were not modified by Ang-(1-7) 100 pmol. The Ang-(1-7)-potentiating effect on BK-induced vasodilation was abolished by A-779, HOE-140, indomethacin, L-NAME and TEA. Losartan (15 mg/kg.IV, 40 min before), an AT1 angiotensin receptor antagonist was without effect. On the other hand, enalaprilat treatment (10 mg/kg; IV, 30 min before), to inhibit angiotensin-converting enzyme (ACE), enhanced the BK and Ang-(1-7)-induced vasodilation but did not modify the effect of Ang-(1-7) on BK vasodilation. In conclusion, the potentiation of BK-induced vasodilation by Ang-(1-7) is a receptor-mediated phenomenon dependent on cyclooxygenase-related products, NO release and K+ channel-mediated membrane hyperpolarization. The potentiating mechanism, apparently, is not related to ACE catalytic activity.

Três experimentos foram desenvolvidos para avaliar protocolos hormonais de sincronização de estro e ovulação em fêmeas Nelore, extratificadas nas três principais categorias de fêmeas (vacas secas, novilhas e vacas paridas) comumente encontradas nas propriedades. Os experimentos possuíam objetivos de comparar a performance reprodutiva das categorias supra citadas, sobre a taxa de detecção do estro, taxa de prenhez na IA (exp. I e II) e/ou IATF (exp III) e no repasse, de fêmeas submetidas a protocolos de sincronização do estro e ovulação. EXP I: Foram utilizadas vacas Nelore não lactantes (n=286), blocadas em um esquema fatorial 2x3, e receberam no D0 o CIDR e 2mg de benzoato de estradiol (BE). O CIDR permaneceu por 5 dias (D5) ou 7 dias (D7), no dia da remoção do CIDR, as vacas receberam PGF2&alpha; (12,5mg, 25mg ou 50mg), formando os tratamentos: 5d12,5mg, 5d25mg, 5d50mg, 7d12,5mg, 7d25mg e 7d50mg. O estro foi detectado em 83.2% (238/286) das vacas, onde D7 (88,0%) foi superior (P<0,05) ao D5 (78,7%). Não houve diferença no tempo médio para detecção do estro que foi de 70,1 ±17,2 h. A taxa de concepção não diferiu entre os tratamentos. A taxa de prenhez à IA foi maior (P<0,05) para o D7 (54,2%) quando comparado ao D5 (39,6%). A taxa de prenhez no repasse e na prenhez total não diferiram entre os tratamentos. EXP II: Utilizou-se 407 novilhas Nelore pré-puberes, blocadas em um esquema fatorial 4x2, as novilhas receberam no D0 o CIDR e 2 mg de BE, o CIDR permaneceu por 5, 7, 9 ou 11 dias. No dia da remoção do CIDR, as novilhas receberam 25mg de PGF2&alpha; e 300 UI eCG. Além disso metade das novilhas receberam 1 mg de BE 48 horas após a retirada do CIDR. A detecção do estro foi maior (P<0,05) para as novilhas que receberam BE (87,3%) quando comparado aos s/BE (54,6%). O tempo médio para detecção do estro foi de 68,1 ±17,3 h. A taxa de concepção não foi influênciada pelos tratamentos, porém a taxa de prenhez da inseminação da sincronização foi maior para o grupo BE (18,8%) quando comparado ao s/BE (12,4%). A taxa de prenhez final não diferiu entre os tratamentos e foi de 62,3%. EXP III: Foram utilizadas vacas Nelore lactantes (n=191), divididas em dois tratamentos: 1xPGF-5d (as vacas permaneceram com o CIDR por 7 dias, sendo que 25mg de PGF2&alpha; foi aplicada no D5); 2xPGF-0/7d (as vacas permaneceram com o CIDR por 7 dias, sendo realizadas duas aplicações de 12,5mg de PGF2&alpha;, no D0 e D7). O CIDR foi retirado no D7, e aplicou-se 0,3 ml de ECP e 300 UI de eCG. Após 50 horas todas as vacas foram submetidas à IATF. No momento da inserção do CIDR 24% das vacas estavam ciclícas. O estro foi detectado em 54,45% (104/191) das vacas, sendo similar entre os tratamentos. O tempo médio para detecção do estro foi de 36,4 ± 8,7 h. Não houve diferença na concepção à IATF, que foi de 59,5 e 59,6% para os tratamentos 1xPGF-5d e 2xPGF- 0/7d, respectivamente. A taxa de prenhez ao final da estação de monta não diferiu e foi de 82,9% para 1xPGF-5d e 86,6% para 2xPGF-0/7d. Em todos os experimentos foi realizada a detecção do estro, com o auxilio de rufiões por até 5 dias após a remoção do CIDR, sendo novamente detectado 10 dias após por um periodo de até 10 dias. Os animais dos exp. I e II foram inseminadas de acordo com o protocolo AM/PM. O diagnóstico de gestação foi realizado de acordo com a caracteristica de cada experimento, mas sempre com o objetivo de identificar e quantificar a origem da prenhez (IA ou repasse). Em vacas Nelore não lactantes, a utilização de protocolos de 7 dias, possui uma performance reprodutiva melhor do que 5 dias de permanência do CIDR. Em novilhas pré-puberes a utilização de BE 48 horas após a remoção do CIDR, aumentou a taxa de detecção de estro, impactanto diretamente no incremento da taxa de prenhez à IA. A utilização do protocolo 7d BE+CIDR, apresenta bons resultados reprodutivos, sendo que podemos reduzir o número de manejos sem o comprometimento da performance reprodutiva, realizando a aplicação de 12,5mg na inserção e na retirada do CIDR. / Three experiments were designed to evaluate estrus synchronization protocols in Nellore females of three different class (dry cows, heifers and lactating cows) commonly found in properties. The experiments had aim to compare a reproductive performance of the categories mentioned above, at the estrus detection, pregnancy rate at AI (exp. I and II) or TAI (exp. III), pregnancy rate at rebreeding, of females submited to estrus synchronization program and ovulation. EXP I: Nonlactating Nellore cows (n=286), were randomized in a 2x3 fatorial arrangement. All animals received the CIDR and 2 mg of EB at D0, the CIDR remained for 5 days (D5) or 7 days (D7). At day of CIDR removal, cows received PGF2&alpha; treatments (12.5mg, 25mg and 50mg), the treatments followed: 5d12.5mg, 5d25mg, 5d50mg, 7d12.5mg, 7d25mg and 7d50mg. Estrus was detected in 83.2% (238/286) of cows, where D7 (88.0%) was higher (P<0.05) than D5 (78.7%). The onset of estrus did not differ among groups and was 70.1 ± 17.2 hours. Conception rate did not differ among treatments. The pregnancy rate at AI was greater (P<0.05) for D7 (54.2%) compared to D5 (39.6%). The pregnancy rate at rebreeding and overall pregnancy did not differ among treatments. EXP II: Prepubertal Nellore heifers (n=407), randomized in a 4x2 factorial arrangement. Heifers received CIDR and 2 mg EB at D0, CIDR remained for 5, 7, 9 or 11 days. On day of CIDR removal, heifers received 25mg of PGF2&alpha; and 300 IU of eCG. Half of the heifers received 1 mg of EB 48 hours after CIDR removal. Estrus detection was greater in EB (87.3%) when compared to NoEB (54.6%). The onset of estrus did not differ among treatments and was 68.1 ± 17.3 hours after CIDR removal. Conception rate was similar among treatments. The pregnancy rate at AI of synchronization was higher for EB (18.8%) compared with NoEB (12.4%). The final pregnancy rate did not differ among treatments. EXP III: Lactating Nellore cows (n=191) were randomized in two groups, 1xPGF-5d (cows received CIDR for 7 days, and 25 mg of PGF was applied on D5); 2xPGF-0/7d (cows received CIDR for 7 days, and two injections of 12.5mg of PGF, on D0 an D7). CIDR was removed on D7, and was associate with injections of 0.3 ml ECP and 300 IU of eCG. TAI was performed 50 h after CIDR removal. Estrus was detected in 54.45% (104/191), and did not differ between groups. The onset of estrus did not differ, and was 36.4 ± 8.7 hours after CIDR removal. The conception rate at TAI did not differ and was 59.5 and 59.6% for 1xPGF-5d and 2xPGF-0/7d, respectively. The final pregnancy rate at the end of breeding season did not differ and was 82.9% for 1xPGF-5d and 86.6% for 2xPGF- 0/7d. All experiments were performed estrus detection with teasers for 5 days after CIDR removal, and was detected again after 10 days, and performed for 10 days. All animals of exp. I and II were inseminated according AM/PM protocol. The pregnancy diagnosis was performed according to caracteristic of each experiment, but always with the goal of identifying and quantifying the origin of pregnancy (AI or rebreeding). Data were analyzed using the statistical program SAS 9.9, for binominal variables we used GLIMMIX procedure and MIXED procedure for continuous variables. In nonlactating Nellore cows, the use of protocols for 7 days, has a better reproductive performance than 5 days of CIDR. In prepubertal heifers using BE 48 hours after CIDR removal, allows for greater estrus detections and increased number of inseminations, and increasing the pregnancy rate at AI. The use of 7d EB+CIDR program yields good reproductive results, and we can reduce a number of handlings without reduce a reproductive performance.

Neste trabalho nós mostramos que células dendríticas (DCs) de camundongos BALB/c expressam receptor para o PAF (Fator ativador de Plaquetas) e que sua ativação promove um fenótipo tolerogênico, associado à produção de IL10 e PGE2. O bloqueio do PAF-receptor por antagonistas aumentou a capacidade das DCs induzirem proliferação de linfócitos T. O antagonista WEB2170 potencializou a resposta imune in vivo a concentração de anticorpo IgG2a OVA-específico aumentou 30 vezes no grupo tratado; a concentração de IgG1 foi semelhante nos dois grupos. O bloqueio do PAFR em camundongos imunizados com OVA em adjuvante completo de Freund, aumentou a produção de IgG1 e IgG2a OVA-específicos. Em camundongos imunizados com OVA/alum o antagonista não alterou a produção de IgG1. Estes resultados indicam que a ativação do PAFR em DCs modula a sua função apresentadora de antígenos pela produção de IL10 e PGE2. O bloqueio do PAFR pode ser útil na ativação das DCs em protocolos de vacinação com DCs e/ou como co-adjuvante em protocolos de imunização. / In the present work we show that BALB/c mice dendritic cells (DCs) express the PAF (platelet-activating factor) receptor and that its activation promotes a tolerogenic phenotype via IL10 and PGE2 production. Blocking PAFR by selective antagonists markedly enhanced DCs ability to induce T cell proliferation. The antagonist WEB2170 potentiated the in vivo immune response the IgG2a OVA-specific levels were 30 fold increased in the treated group; IgG1 concentration was similar for both groups. The PAFR blockade in mice immunized with OVA in complete Freunds adjuvant enhanced both IgG1 and IgG2a OVA-specific antibody production. In OVA/alum immunized mice, the antagonist did not change IgG1 production. These results suggest that PAFR activation in DCs modulates their antigen-presenting function through IL10 and PGE2 production. Blocking PAFR may be useful to induce DCs activation in DCs-based vaccination protocols and/or as a co-adjuvant in immunization protocols.

As metaloproteinases, abundantes em venenos de serpentes da família Viperidae, apresentam homologia estrutural e funcional com as metaloproteinases de mamíferos (MMPs), cujos níveis estão elevados em doenças de natureza inflamatória, como a aterosclerose. A metaloproteinase BaP1, do veneno da serpente Bothrops asper, apresenta potente atividade inflamatória e constitui ferramenta científica importante para o estudo das ações das MMPs. Durante a aterosclerose, as células de músculo liso vascular (CMLVs) mudam do fenótipo contrátil para sintético, migram para a camada subendotelial do vaso, liberam mediadores inflamatórios e expressam MMPs. No entanto, o papel destas enzimas na resposta inflamatória das CMLVs e a potencial relação deste efeito com a migração das mesmas, não foi esclarecida. Neste estudo, investigou-se os efeitos da BaP1 em CMLVs, quanto à 1) indução da migração; 2) liberação de diferentes classes de mediadores inflamatórios e expressão de moléculas de adesão; 3) indução da mudança fenotípica das CMLVs; 4) expressão e participação de enzimas de síntese de prostaglandinas e de receptores de PGE2 na liberação deste eicosanoide; 5) participação de eicosanoides e da IL-1&#946 na migração e mudança de fenótipo das CMLVs. Os resultados obtidos, a partir dos ensaios de transwell e wound healing, mostraram que a BaP1(50nM) induziu a migração das CMLVs, após 48 h, mas não a proliferação celular, observada pelo ensaio de ciclo celular. Além disso, a metaloproteinase induziu aumento da liberação de PGE2 (1-48h), LTB4 (1-3h), IL-1&#946 (12-24h), MCP-1 (24-48h) e fractalcina (24-48h), mas não de PGI2 e nem TXA2, analisados por ensaios de EIA e multiplex. Ainda, a BaP1 aumentou a expressão proteica de COX-2 (1° h) e de PGESm-1 (4° h), analisada por Western blotting, e expressão gênica das sFLA2-IIA (30 min) e cFLA2-IVA (30 min), verificada por PCR em tempo real, sem alterar os níveis de COX-1, dos receptores EP1, EP2, EP3 e EP4, de ICAM-1 e VCAM-1 e da iFLA2. A intervenção farmacológica com os inibidores de COX-2 ou de FLA2 intracelulares reduziu a liberação de PGE2 induzida pela BaP1. Além disso, o pré-tratamento das células com o inibidor da FLAP e com os antagonistas do receptor de IL-1&#946 ou do receptor EP3 reduziu a migração celular induzida pela BaP1. Esta metaloproteinase também induziu a mudança de fenótipo contrátil para o sintético, das CMLVs, verificada pela diminuição da expressão de &#945-actina pelo ensaio de citometria de fluxo. A inibição da COX-2 e da FLAP não alterou este efeito. Este conjunto de dados demonstra a capacidade da BaP1 estimular diretamente as CMLVs para migração, liberação de mediadores inflamatórios e a expressão de COX-2, PGESm-1, sFLA2-IIA e cFLA2-IVA. A produção de PGE2 induzida pela BaP1 depende das FLA2s intracelulares, com ativação das vias da COX-1 e -2. A migração das CMLVs, induzida pela BaP1, depende da PGE2 via ativação do receptor EP3, do LTB4 e da IL-1&#946. Ainda, esta metaloproteinase estimula a mudança fenotípica das CMLVs para o estágio sintético, em que as CMLVs migram e proliferam. Os dados deste estudo, ao demonstrarem que as metaloproteinases contribuem para o desenvolvimento de eventos inflamatórios, em CMLVs, apontam um papel adicional desta classe de enzimas em doenças de natureza inflamatória, como a aterosclerose. / Metalloproteinases are abundant enzymes in Viperidae family snake venoms and exhibit structural and functional homology with mammalian matrix metalloproteinases (MMPs). The levels of these enzymes are incresead in inflammatory diseases, such as atherosclerosis. The BaP1 metalloproteinase from Bothrops asper snake venom presents potent inflammatory activity and constitutes important scientific tool for the study of the actions of MMPs. During atherosclerosis, vascular smooth muscle cells (VSMCs) switch their phenotype from a contractile to a synthetic state, migrate into the subendothelial vessel layer, release inflammatory mediators and express high levels of MMPs. However, the role of these enzymes in the inflammatory response of VSMCs and the potential relationship of this effect with cell migration have not been clarified. In this study, we investigated the effects of BaP1 on CMLVs with focus on: 1) induction of cell migration; 2) release of different classes of inflammatory mediators and protein expression of adhesion molecules; 3) induction of VSMCs phenotype switching; 4) expression and participation of prostaglandin synthesis enzymes and PGE2 receptors in the release of this eicosanoid; 5) participation of eicosanoids and IL-1&#946 in migration and phenotype switching of VSMCs. Results obtained from the transwell and wound healing assays showed that BaP1 (50nM) induced VSMCs migration after 48 h, but not cell proliferation, observed by the cell cycle assay. In addition, this metalloproteinase caused release of PGE2 (1-48h), LTB4 (1-3h), IL-1 (12-24h), MCP-1 (24-48h) and fractalkine (24-48h), but not PGI2 and TXA2, analyzed by EIA and multiplex assays. Furthermore, BaP1 increased protein expression of COX-2 (1 h) and PGESm-1 (4 h), analyzed by western blotting and gene expression of sFLA2-IIA (30 min) and cFLA2-IVA (30 min), evaluated by real-time PCR, without altering COX-1, EP1, EP2, EP3 and EP4, ICAM-1 and VCAM-1 and iFLA2 levels. Pharmacological intervention with COX-2 or intracellular FLA2 inhibitors reduced PGE2 release induced by BaP1. In addition, pretreatment of cells with either a FLAP inhibitor, or IL-1&#946 receptor, or EP3 receptor antagonist reduced cell migration induced by BaP1. This metalloproteinase also induced conversion of contractile VSMCs to an synthetic phenotype, as evidenced by decrease of -actin expression, analyzed by flow cytometry assay. Inhibition of COX-2 and FLAP did not alter this effect. Altogether, these data demonstrate the ability of BaP1 to directly stimulate VSMCs for migration, release of inflammatory mediators and expression of COX-2, PGESm-1, sFLA2-IIA and cFLA2-IVA. PGE2 production induced by BaP1 depends on the intracellular FLA2s, with activation of COX-1 and -2 pathways. VSMCs migration induced by BaP1 depends on PGE2 via EP3 receptor engagement, LTB4 and IL-1&#946. Furthermore, this metalloproteinase stimulates VSMCs phenotypic switching to a synthetic phenotype, in which these cells migrate and proliferate. These data demonstrate that metalloproteinases can contribute to the development of inflammatory events in VSMCs, evidencing an additional role of this class of enzymes in inflammatory diseases, such as atherosclerosis.

As mulheres na fase reprodutiva apresentam menor incidência de doenças cardiovasculares (DCV), em relação aos homens de mesma idade. Porém, essa vantagem desaparece na pós-menopausa, sugerindo que os hormônios sexuais femininos exercem algum efeito cardioprotetor. Um dos mecanismos propostos para explicar essa proteção é o fato dos estrógenos promoverem a produção de importantes fatores vasoativos pelo endotélio vascular, entre eles o óxido nítrico e a prostaglandina I2. Com a diminuição da quantidade de estrógenos circulante, as mulheres na pós-menopausa, estão mais suscetíveis à disfunção endotelial e a doenças cardiovasculares. Estudos têm demonstrado que a terapia de reposição hormonal (TRH) utilizada por mulheres na pós-menopausa combate os sintomas deste período, melhora o quadro de disfunção endotelial e o perfil lipídico e aumenta a síntese de fatores vasoativos, que auxiliam na prevenção da DCV. Entretanto a TRH vem sendo questionada por grandes estudos como o WHI (Writing Group for the Women\'s Health Initiative Investigators) e o HERS (Heart and Estrogen/Progestin Replacement Study), que mostraram um risco aumentado de desenvolvimento de câncer de mama e endometrial em mulheres fazendo uso da TRH. Entre as terapias alternativas para combater os sintomas indesejáveis da menopausa e as implicações mórbidas que acompanham esse período, sem expor as pacientes aos efeitos colaterais da TRH, a literatura aponta os fitoestrógenos, principalmente os extraídos da soja (Glycine max). O objetivo geral deste estudo é avaliar a ação das isoflavonas da soja, que vem sendo utilizadas por mulheres na pós-menopausa, na produção de óxido nítrico, prostaglandina E2 e endotelina-1, por células endoteliais, utilizando um modelo \"in vitro\", células endoteliais da linhagem ECV304. / During their reproductive years, women have a lower incidence of coronary heart disease (CHD) compared to men of similar age. However, this advantage disappears in post-menopause, suggesting that female sex hormones exert some cardio protective effect. One of the mechanisms proposed to explain this protection is the fact that estrogens promote the production of important vasoative factors by vascular endothelium, including nitric oxide and prostaglandin I2. By decreasing circulating estrogen, women in post-menopause are more susceptible of endothelial dysfunction and cardiovascular diseases. Studies have shown that the hormone replacement therapy (HRT) used by post-menopausal women in combating the symptoms of this period, improve endothelial dysfunction and lipid profile and increases the synthesis of vasoative factors, which help in the prevention of CHD. Meanwhile the HRT has been questioned by two large trials, the WHI (Writing Group for the Women\'s Health Initiative Investigators) and HERS (Heart and Estrogen/Progestin Replacement Study), which showed an increased risk of developing breast cancer and endometrial cancer in women using HRT. Among the alternative therapies to combat the symptoms of menopause and undesirable morbid implications that accompany this period, without exposing the patients to the side effects of HRT, the literature suggests the phytoestrogens, especially those from the soybean (Glycine max). The aim of this study is to evaluate the effect of isoflavones from soy, which are used by women in post-menopause, in the production of nitric oxide, prostaglandin E2 and endothelin-1 by endothelial cells, using an \"in vitro\" model: human endothelial cell line ECV304.

Este estudo compara quatro diferentes intensidades com o volume total similar no exercício supino. Avaliou-se a dor muscular de início tardio (DMIT), atividade de creatina quinase (CK), as concentrações sangüíneas de interleucina (IL)-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, fator de necrose tumoral-<font face=\"symbol\">a (TNF-<font face=\"symbol\">a), prostaglandina E2 (PGE2) e o perfil hormonal. A amostra foi composta de soldados do exército brasileiro, divididos em cinco grupos: 50%-1RM, 75%-1RM, 90%-1RM, 110%-1RM e o controle. A DMIT e a atividade plasmática de CK aumentaram significativamente (P<0,05) após a sessão de exercício. A concentração de PGE2 também teve aumento significativo (P<0,05) após a sessão (P<0,05). A concentração plasmática de cortisol após 1h do término do exercício aumentou apenas no grupo 75%-1RM (p < 0,05). Esses resultados sugerem que a intensidade no exercício supino não afeta a magnitude da DMIT, marcadores de lesão muscular, inflamação e na resposta hormonal geral, desde que haja a equalização do volume total, com exceção da concentração plasmática do cortisol, grupo 75%-1RM. / This study compared four different intensities with similar total volume of a bench press exercise for muscle soreness, creatine kinase (CK) activity, interleukin (IL)-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, tumor necrosis factor-<font face=\"symbol\">a (TNF-<font face=\"symbol\">a), prostaglandin E2 (PGE2) and hormonal concentrations in the blood. Brazilian Army male soldiers were placed into five groups: 50%-1RM, 75%-1RM, 90%-1RM, and 110%-1RM, and control that did not perform the exercise. Muscle soreness and plasma CK activity increased significantly (p<0.05) after exercise. Serum PGE2 concentration also increased significantly (p<0.05) after exercise. After one hour post exercise cortisol increased in 75%-1RM group, with this response also exceeding the other intensities (p<0.05). These results suggest that the intensity of bench press exercise does not affect the magnitude of muscle soreness and blood markers of muscle damage, inflammation and largely similar hormonal responses, which may be attributed to the equalization of total volume, exception made for the 75%-1RM group for serum cortisol concentration.

A inibição da secreção pulsátil de prostaglandina F2alfa (PGF2&alpha;) uterina (atividade antiluteolítica) pela ação do interferon-tau (IFN-&tau;) trofoblástico, mantêm a secreção de progesterona pelo corpo lúteo, fundamental ao estabelecimento da gestação nas fêmeas bovinas. Supõe-se que essa atividade antiluteolítica esteja presente no microambiente uterino bovino, portanto objetivou-se estudá-la. Dada à inexistência de ensaios que meçam especificamente a atividade antiluteolítica propôs-se elaborar um ensaio biológico para tal. Observou-se que células BEND tratadas com forbol 12,13 dibutirato (PdBu) por 6 horas em cultivo sintetizam PGF2&alpha; e tal síntese é inibida na presença de interferon-tau recombinante bovino (rbIFN-&tau;). Em outro estudo definiu-se que 25 ng/mL de PdBu promove estímulo consistente à síntese de PGF2&alpha;. A partir da análise de regressão do percentual de inibição à síntese de PGF2&alpha; estimulada por PdBu, em função da concentração de interferon-tau recombinante (rbIFN-&tau;), calculou-se a concentração de rbIFN-&tau; que inibiu em 50% a síntese máxima de PGF2&alpha; (observada na presença apenas de PdBu). Definiu-se a atividade antiluteolítica como o recíproco da concentração proteica requerida para atingir esse percentual de inibição (50%), e que a solução com uma unidade antiluteolítica é aquela que com um micrograma exerça tal efeito. Caracterizou-se a utilização dessa isoforma como padrão do ensaio antiluteolítico e calculou-se a atividade antiluteolítica do mesmo, 9,61 x 10&sup2; UA/&micro;g de proteína. Em estudo seguinte observou-se a modulação da síntese de PGF2&alpha; estimulada por PdBu, em função da concentração proteica de um pool de lavados uterinos ou meios condicionados por conceptos obtidos no décimo sétimo dia de gestação. Notou-se que para cada fluido testado há um intervalo de concentrações onde observa-se aumento linear na atividade antiluteolítica em função do acréscimo proteico. A partir da análise por regressão linear desse evento calculou-se a atividade antiluteolítica de cada amostra. Para o pool de lavados uterinos calculou-se 1,63 x 10-&sup1; UA/ &micro;g de proteína, e para o pool de meios condicionados por conceptos 1,66 x 10&sup2; UA/&micro;g de proteína. Estes estudos permitiram desenvolver uma metodologia para observar a atividade antiluteolítica em humores biológicos. Aplicando o ensaio antiluteolítico estudou-se a atividade antiluteolítica presente em lavados uterinos obtidos durante o período crítico de fêmeas bovinas prenhes ou cíclicas ( respectivamente, 56,2 e 33,9 UA/&micro;g de proteina), notou-se que a atividade antiluteolítica foi maior no microambiente uterino de fêmeas gestantes. Tal resultado associado à potente atividade antiluteolítica observada para os meios condicionados por conceptos indicam a participação do IFN-&tau; secretado pelo concepto na modulação da síntese de PGF2&alpha;. Entretanto, observou-se atividade antiluteolítica nos lavados uterinos obtidos de fêmeas cíclicas, o que indica que a síntese de PGF2&alpha; estimulada por PdBu pode ser modulada por outras proteínas, além do IFN-&tau;. Sugere-se que a atividade antiluteolítica, observada através do ensaio biológico proposto, é resultante da atuação de fatores estimulatórios e inibitórios presentes nos humores biológicos. Conclui-se que a atividade antiluteolítica pode ser mensurada pelo ensaio biológico proposto, no entanto outros estudos devem ser conduzidos para correlacionar essa atividade com a atuação do IFN-&tau;. / The inhibition of pulsatile secretion of PGF2&alpha; mediated by interferon-tau (IFN) is fundamental on the maternal recognition of pregnancy, maintaining the progesterone secretion by corpus luteum. Therefore the measurement of interferon activity in the uterine microenvironment was studied. Due to a lack of assays those measure specific antiluteolytic capacities we suggest develop a biological assay for it. In this research we observed that BEND cells treated with PdBu synthesize PGF2&alpha;, wich is inhibited by the presence of recombinant bovine interferon-tau (rbIFN-&tau;). Following we defined 25ng/mL as PdBu (phorbol 12,13 dibutirate) stimulus at the PGF2&alpha; synthesis to be applied in this biological assay. Studies about the modulation of PdBu-stimulated PGF2&alpha; synthesis by the rbIFN-&tau; validate the use of this isoform as a reference, defining a standard-curve and allowing estimating the antiluteolytic activity of 9.61 x 10&sup2; antiluteolytic units per microgram (UA/&micro;g) of protein. Further, we observed the modulation of PdBu-stimulated PGF2&alpha; synthesis exerted by a pool of uterine flushings or conceptus conditioned medium, and for each tested fluid, there is a range of concentrations where is observed an increasing rate on the inhibition of PGF2&alpha; synthesis. A restrict analysis on this concentrations range shows a linear behavior and allow calculate the antiluteolytic activity of each sample1.63 x 10-&sup1; UA/ &micro;g of protein from a pool of uterine flushings, and 1.66 x 10&sup2; UA/&micro;g from conceptus conditioned medium. These studies validated a method to observe the antiluteolytic activity from biological fluids. Using the antiluteolytic assay, we studied the antiluteolytic activity present in uterine flushings obtained during the critic period by pregnant or cyclic bovine females cíclicas (respectively 56,2 e 33,9 UA/&micro;g of protein). We observed higher antiluteolytic activity from pregnant uterine microenvironment than in cyclic uterine microenvironment. This result linked with the high antiluteolytic activity observed to conceptus conditioned medium, suggest the participation of IFN-&tau; secreted by the conceptus in the PGF2&alpha; synthesis modulation. However, we observed the antiluteolytic activity in uterine flushing obtained by cyclic cows, suggesting that the PGF2&alpha; synthesis could be modulated by another proteins. We believe that the antiluteolytic activity, observed by the antiluteolytic assay, ensue the action of inhibitors or stimulators factors in the biological fluids. We conclude that the antiluteolytic assay could be measured by the proposed biological assay, nevertheless another studies must be done in order to correlate this activity with the interferon action.

Neste trabalho nós mostramos que células dendríticas (DCs) de camundongos BALB/c expressam receptor para o PAF (Fator ativador de Plaquetas) e que sua ativação promove um fenótipo tolerogênico, associado à produção de IL10 e PGE2. O bloqueio do PAF-receptor por antagonistas aumentou a capacidade das DCs induzirem proliferação de linfócitos T. O antagonista WEB2170 potencializou a resposta imune in vivo a concentração de anticorpo IgG2a OVA-específico aumentou 30 vezes no grupo tratado; a concentração de IgG1 foi semelhante nos dois grupos. O bloqueio do PAFR em camundongos imunizados com OVA em adjuvante completo de Freund, aumentou a produção de IgG1 e IgG2a OVA-específicos. Em camundongos imunizados com OVA/alum o antagonista não alterou a produção de IgG1. Estes resultados indicam que a ativação do PAFR em DCs modula a sua função apresentadora de antígenos pela produção de IL10 e PGE2. O bloqueio do PAFR pode ser útil na ativação das DCs em protocolos de vacinação com DCs e/ou como co-adjuvante em protocolos de imunização. / In the present work we show that BALB/c mice dendritic cells (DCs) express the PAF (platelet-activating factor) receptor and that its activation promotes a tolerogenic phenotype via IL10 and PGE2 production. Blocking PAFR by selective antagonists markedly enhanced DCs ability to induce T cell proliferation. The antagonist WEB2170 potentiated the in vivo immune response the IgG2a OVA-specific levels were 30 fold increased in the treated group; IgG1 concentration was similar for both groups. The PAFR blockade in mice immunized with OVA in complete Freunds adjuvant enhanced both IgG1 and IgG2a OVA-specific antibody production. In OVA/alum immunized mice, the antagonist did not change IgG1 production. These results suggest that PAFR activation in DCs modulates their antigen-presenting function through IL10 and PGE2 production. Blocking PAFR may be useful to induce DCs activation in DCs-based vaccination protocols and/or as a co-adjuvant in immunization protocols.

O objetivo do experimento I foi avaliar a luteólise causada por três doses de PGF2&#945; (12,5; 25 e 50 mg de Dinoprost tometamina) nos dias 5 e 7 do ciclo estral. Foram utilizadas 339 vacas não lactantes da raça Nelore. Os animais foram divididos em dois grupos de acordo com a apresentação do estro, recebendo a dose de PGF2&#945; nos dias 5 e 7 do ciclo estral. Cada grupo foi subdividido em três, que receberam os seguintes tratamentos de PGF2&#945; (12,5 mg; 25 mg; 50 mg). Através da concentração de P4 foram estimadas as taxas de regressão luteal 1 e 0,5 (1 - animais com concentração de P4 abaixo de 1 ng/mL; 0,5 animais com concentração de P4 abaixo de 0,5 ng/mL). Não houve interação entre a dose de PGF2&#945; e o dia do ciclo estral. A aplicação de PGF2&#945; no dia 7 do ciclo estral apresentou maior taxa de regressão luteal 1 e 0,5 quando comparada com o dia 5 do ciclo estral (1 - 76,9 vs 37,0 % - P = 0,0001; 0,5 - 57,5 vs 21,7 %, P = 0,0001, respectivamente). A taxa de regressão luteal 1 aumentou de acordo com a dose de PGF2&#945; administrada (12,5 mg 39,0 %; 25 mg 56,9 %; 50 mg 76,5 % P <0,0001). Quando a PGF2&#945; foi administrada no dia 5 do ciclo estral a concentração média de P4 segui o padrão de luteólise parcial e foi dependente da dose de PGF2&#945;. Quando a PGF2&#945; foi aplicada no dia 7 do ciclo estral a concentração média de P4 caiu drasticamente de 0 para 24 h e não voltou a se elevar em 48 h. A concentração de P4 em 48 h após a aplicação de PGF2&#945; foi menor na dose de 50 mg (0,51 ± 0,07 ng/mL). A taxa de luteólise foi menor no dia 5 do ciclo estral comparado com o dia 7 do ciclo estral. À medida que a dose de PGF2&#945; foi aumentada, a porcentagem de regressão luteal se elevou. O objetivo do experimento II foi avaliar se a substituição das aplicações do GnRH por BE, ECP e eCG no protocolos de 5 dias de P4 causa dupla ovulação e se a utilização de 1 ou 2 mg de BE no início do protocolo influencia na taxa de ovulação dupla. Foram utilizadas 85 multíparas da raça Nelore. No dia 0 do protocolo, as vacas receberam um implante de P4 e a dose de BE segundo o tratamento pertencente (tratamento A 1 mg de BE, tratamento B 2 mg de BE). Cinco dias após, o dispositivo foi retirado e aplicou-se PGF2&#945;, ECP eCG. Houve 5,9 % de dupla ovulação. O tratamento A causou menor porcentagem folículos maiores que 8 mm no dia 7 protocolo que o tratamento B (28,7 vs 50,6 P = 0,0460). Não houve diferença significativa na taxa de ovulação dupla, no diâmetro do folículo dominante no dia 5 e no dia 7 do protocolo e na taxa de crescimento folicular entre os tratamentos A e B. O protocolo de 5 dias de P4 com BE, ECP e eCG causou uma baixa taxa de dupla ovulação. O objetivo do experimento III foi comparar o aparecimento e a frequência de estro e a taxas de ovulação e gestação entre os protocolos de 5 dias de P4 + GnRH / GnRH e de 7 dias de P4 + BE / ECP + eCG em nulíparas, primíparas e multíparas. Foram utilizadas 411 fêmeas da raça Nelore (nulíparas - n = 198; primíparas - n = 80; multíparas - n = 133). No protocolo de 7 dias de P4, os animais receberam no dia 0 um implante de P4 e BE. No dia 7, o dispositivo foi retirado e aplicou-se PGF2&#945;, ECP e eCG. No protocolo de 5 dias de P4, os animais receberam no dia 0 o implante de P4 e GnRH. No dia 5, o dispositivo foi retirado e aplicaram-se 2 doses de PGF2&#945; com intervalo de 6 h entre as doses de PGF2. Os animais que não apresentaram estro até a hora da IA receberam 100 &#956;g de GnRH no momento da IA. A taxa de prenhez utilizando o protocolo de 5 ou 7 dias de P4 variou de acordo com a categoria da fêmea (nulíparas - 41,0 vs 51,0 % - P = 0.1608; primíparas 25,6 vs 31,7 % - P = 0,5513; multíparas - 58,4 vs 32,8 % - P = 0,0041, respectivamente). A taxa de apresentação de estro no protocolo de 7 dias de P4 foi maior para todas as categorias de fêmeas quando comparado com o protocolo de 5 dias deP4. (nulíparas 95,8 vs 66,0 % - P <0,0001; primíparas 48,7 vs 0 %; multíparas - 76,9 vs 13,4 % - P <0,0001, respectivamente). A resposta ao protocolo de 5 dias com GnRH foi pior nas multíparas. / The objective of the experiment I was to evaluate the luteolysis caused by three doses of PGF2&#945; (12.5, 25 and 50 mg of Dinoprost tometamina) when applied on the 5th and 7th days of the estrous cycle. Three hundred thirty-nine (339) nonlactating Nelore cows were used. The animals were divided into two groups according to the onset of estrus, and received the PGF2&#945; dose on the 5th or 7th day of the estrous cycle. Each group was divided into three subgroups, which were submitted to the treatments of PGF2&#945; with dose of 12.5 mg, 25 mg or 50 mg. Through the P4 concentration, the rates of 1 and 0.5 luteal regression were estimated (1 - animals with P4 concentration below 1 ng/mL and 0.5 - animals with P4 concentration below 0.5 ng/mL). There was no interaction between the PGF2&#945; dose and the day of the estrous cycle. The PGF2&#945; application on the 7th day of the estrous cycle had higher rates of the 1 and 0.5 luteal regression, when compared to the PGF2&#945; application on the 5th day of the estrous cycle (1 - 76.9 vs 37.0 % - P = 0.0001; 0,5 - 57.5 vs 21.7 %, P = 0.0001, respectively). The rate of 1 luteal regression increased with the PGF2&#945; dose (12.5 mg - 39.0 %; 25 mg - 56.9 %; 50 mg - 76.5 %, P < 0.0001). The average concentrations of P4, when the PGF2&#945; was administered on the 5th day of the estrous cycle, follow the partial luteolysis standard that dependent on the PGF2&#945; dose. When the PGF2&#945; is applied on 7th day of the estrous cycle, the average concentration of P4 drops dramatically from 0 to 24 h and it do not rise again in 48 h. The P4 concentration is lower in the 50 mg (0.51 ± 0.07 ng/mL), 48 h after the PGF2&#945; application. The luteolysis rate was low on the 5th day of the estrous cycle. The luteal regression percentage increased with increase of the PGF2&#945; dose. The objective of the experiment II was to evaluate whether the replacement of the GnRH applications by BE, ECP and eCG in the 5-day protocols of P4 cause double ovulation and if the use of 1 or 2 mg of BE at the beginning of the protocol influences the double ovulation rate. Eighty-five (85) multiparous Nelore cows were used. On day 0 of the protocol, the cows received a P4 implant and a dose of BE that depending on the treatment to which the cows belong (Treatment A - 1 mg of BE, treatment B - 2 mg of BE). Five days later, the device was removed and the PGF2&#945;, ECP and eCG were applied. In the experiment II, there was 6.5 % of double ovulation. There was no significant difference in the double ovulation rate, dominant follicle diameter on the 5th and 7th day of the protocols, and follicular growth rate between the treatments A and B. The 5-day protocol of P4 with BE, eCG and ECP caused a low rate of the double ovulation, and there was no difference between 1 or 2 mg of BE to synchronize the follicular development wave. The objective of the experiment III was to compare the onset and frequency of estrus and the ovulation and pregnancy rates among the protocols of 5 days of P4 with GnRH and 7 days of P4 with BE, ECP and eCG in nulliparous, primiparous and multiparous. Four hundred eleven (411) Nellore females were used (nulliparous - n = 198; primiparous - n = 80; multiparous - n = 133). In 7-day protocol of P4, the animals received an implant of P4 and BE on day 0. On day 7, the device was removed and the PGF2&#945;, ECP and eCG were applied in the cows. In 5-day protocol of P4, the animals received implants of GnRH and P4 on the day 0. On day 5, the device was removed and two doses of PGF2&#945; were applied with interval of 6 h. The animals that did not show estrus until the AI time received 100 mg of GnRH at this moment. The pregnancy rate varied according to the female category in both protocols (nulliparous - 41.0 vs 51.0 % - P = 0.1608; primiparous - 25.6 vs 31.7 % - P = 0.5513; multiparous - 58.4 vs 32.8 % - P = 0.0041, respectively). The rate estrus onset in the 5-day protocol of P4 with GnRH was lower for all female categories, when compared to the 7-day protocol (nulliparous - 95.8 vs 66.0 % - P <0.0001; primiparous 0 vs 48.7 %; multiparous - 76.9 vs 13.4 % - P <0.0001, respectively). The response in the 5-day protocol with GnRH was worse in multiparous cows.