A cicatrização das lesões ligamentares é lenta e muitas vezes ineficiente. Uma vez lesado, o ligamento suspensor do boleto (LSB) dificilmente recupera suas propriedades biomecânicas originais. A desmite do LSB proximal dos membros torácicos ocorre em cavalos de todas as raças e todas as disciplinas esportivas. O objetivo deste trabalho foi avaliar clinicamente e por ultrassonografia, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), e do PRP associado ao LASER terapêutico, na cicatrização da região proximal do LSB, em cavalos com desmite induzida por colagenase. Para isto foram utilizados 18 animais sem raça definida, distribuídos em três grupos. O G1 foi formado por seis animais, submetidos a indução da desmite na região proximal do LSB, que não receberam qualquer tratamento. O G2 foi formado por seis animais, que foram submetidos a desmite induzida e após três semanas receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. O G3 foi formado por seis animais, que após indução da desmite receberam tratamento com LASER terapêutico a partir da segunda semana, e na terceira semana pós-lesão receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. A indução da desmite foi realizada por meio de infiltração guiada pelo ultrassom na região proximal do LSB, sendo este considerado o tempo 0. A cada semana e até a semana oito, os cavalos foram avaliados clinicamente, por ultrassonografia e por análise cinemática, ao trote em linha reta. Houve diferença significativa na comparação entre grupos para as variáveis aumento de volume na avaliação clínica, e área no corte transversal do ligamento e, área no corte transversal da lesão na avaliação ultrassonográfica. Na comparação entre os diferentes momentos de observação as variáveis aumento de volume e dor à palpação do G2 e G3 mostraram escores maiores quando comparados ao G1, sendo que o G2 apresentou escore maior que o G3. Ultrassonograficamente, a ecogenicidade da lesão mostrou diminuição dos escores, a partir da quinta semana de avaliação nos grupos tratados. As demais variáveis clínicas ou ultrassonográficas, bem como a análise cinemática da claudicação não mostraram diferenças significativas entre os grupos. O PRP, apesar de ocasionar inflamação leve e transitório após infiltração, influenciou positivamente o processo de cicatrização da parte proximal do LSB, com um efeito analgésico adicional quando associado ao LASER terapêutico. / The healing process of injured ligaments is slow and often inefficient. Once damaged the suspensory ligament (SL) hardly recover their original biomechanical properties. The forelimb proximal suspensory ligament desmitis occurs in horses of all breeds and all sports. The aim of this study was to evaluate clinically and ultrasonographically, the influence of platelet-rich plasma (PRP), and PRP associated with LASER therapy, on the healing process of the proximal region of the SL in horses with collagenase-induced demitis. For this purpose it were used 18 cross breed horses divided into 3 groups. G1 was composed of six horses subjected to induction of proximal suspensory desmitis, with no treatment. G2 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after three weeks they received ultrasound-guided intralesional injection of PRP. G3 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after two weeks they received laser therapy and one week later they received intralesional guided-ultrasound injection of PRP. Induction of desmitis was made using ultrasound-guided infiltration in PSL, which was considered day zero. Horses were evaluated clinically, in straight line trot for cinematic analysis and ultrasonographically, every week until eighth week. There were significant difference between groups for swelling, the cross-sectional area of the ligament, and the cross-sectional area of the injury on ultrasound evaluation. Comparing the different times of observation, descriptively were a difference for G2 and G3 in the clinical variables that evaluated swelling and pain on palpation, showed higher scores compared to the G1, and G2 had higher scores than the G3. Sonographically, the echogenicity of the lesion showed decreased scores from the fifth week of evaluation in the treated groups. The other clinical variables or ultrasound, as well as the kinematic analysis of lameness showed no significant differences between groups. PRP, although causing transient and mild inflammation after infiltration, positively influenced the healing process of the proximal part of the SL, with additional analgesic effect when combined with laser therapy.

In der vorliegenden Studie wurde an 109 Patienten mit einer Erkrankung des Fesselträgers retrospektiv untersucht, ob die intraläsionale Applikation von autologem thrombozyten-reichem Plasma (PRP) Vorteile gegenüber der intraläsionalen Applikation von xenogener azellulärer Matrix aus porziner Harnblasenmukosa (ACell Vet™ UBM Powder) besitzt. Die gesamten Daten zum Patientenmaterial entstammen einer großen, schwerpunktmäßig orthopädisch orientierten Pferdeklinik. In die Gruppe mit Thrombozyten angereichertem Plasma (PRP) wurden 75 Patienten aufgenommen. Es wurden 3 verschieden Methoden zur Herstellung von thrombozytenreichem Plasma verwendet. Als Vergleichsgruppe dienten 34 Patienten, welche mit einer xenogenen Therapieform (ACell™) am Fesselträger behandelt wurden. Initial wurden alle Patienten klinisch und ultrasonographisch untersucht, wobei bei allen Patienten ein frischer oder alter aufgefrischter/chronischer Schaden am Fesselträger dargestellt werden konnte. Die Wahl der Therapieform richtete sich nach der Einschätzung, der Präferenz und den Erfahrungen des jeweiligen behandelnden Tierarztes unter Berücksichtigung des finanziellen Aufwandes für die Patientenbesitzer. Alle Patienten wurden entweder mit PRP oder mit ACell™ behandelt und Boxenruhe in Verbindung mit einem steigernd aufgebauten Schritt- und Aufbautrainingsprogramm verordnet. Die Nachuntersuchungen zur Kontrolle des Heilungserfolges und -fortschrittes beinhalteten eine klinische Lahmheitsuntersuchung sowie eine ultrasonographische Untersuchung. Je nach klinischer und ultrasonographischer Entwicklung wurde das Bewegungsprogramm angepasst. Zum Abschluss der Studie konnte als Resultat festgestellt werden, dass 45 (60 %) Patienten der PRP Gruppe ihr ursprüngliches Leistungsniveau wieder erreicht hatten, 8 (10,7 %) Patienten konnten ihr ursprüngliches Leistungsniveau nicht wieder erreichen, 17 (22,7 %) Patienten erlitten ein Rezidiv und ein (1,3 %) Patient musste euthanasiert werden. Im Vergleich dazu erreichten 20 (58,8 %) Patienten der ACell™ Gruppe wieder ihr ur-sprüngliches Leistungsniveau, 5 (14,7 %) Patienten konnten ihr ursprüngliches Leistungs-niveau nicht wieder erreichen, 7 (20,6 %) erlitten ein Rezidiv und ein (2,9 %) Patient musste euthanasiert werden. Die Unterschiede im Resultat sind statistisch nicht signifikant. Ein statistisch signifikanter Unterschied (p= 0,05) ist allerdings bei der Dauer der Rehabilitationsphase zu beobachten. Im Durchschnitt benötigten erfolgreich therapierte PRP Patienten signifikant weniger Zeit bis zum Erreichen der vollen Belastbarkeit als erfolgreich therapierte ACell™ Patienten. PRP Patienten wurden durchschnittlich 15,6 Wochen im Schritt bewegt und erhielten 13,2 Wochen Aufbautraining, so dass sie im Durchschnitt nach 29,6 Wochen wieder ihre volle Belastbarkeit erreicht hatten. Erfolgreich therapierte ACell™ Patienten wurden durchschnittlich 20,2 Wochen im Schritt bewegt und erhielten im Anschluss im Durchschnitt 19,8 Wochen Aufbautraining, so dass sie im Durchschnitt nach 40,6 Wochen wieder ihre volle Belastbarkeit erreicht hatten. Es konnte gezeigt werden, dass die Rehabilitationsdauer bei mit thrombozytenreichem Plasma behandelten Fesselträgerschäden signifikant kürzer ist als bei mit ACell™ behandelten Fesselträgerschäden, obwohl sich das Resultat der Behandlung statistisch nicht wesentlich unterscheidet (p= 0,88). Die vielversprechenden Ergebnisse einiger ähnlich konzipierten Arbeiten konnten in der vorliegenden Studie mit keiner der angewandten Behandlungsform erreicht werden. Erwähnte Studien umfassten deutlich größere oder deutlich kleinere Patientengruppen und unterschieden sich hinsichtlich Rasse und Nutzung des Patientenmaterials sowie dem meist kürzeren Untersuchungszeitraum. Insofern erscheint einerseits eine derartige Studie aus praktischer Sicht sinnvoll und lohnenswert, andererseits zeigt sich auch der Bedarf an vergleichbaren, klinischen, praxisorientierten Arbeiten zur Evaluierung dieser Behandlungsmethoden.

A cicatrização das lesões ligamentares é lenta e muitas vezes ineficiente. Uma vez lesado, o ligamento suspensor do boleto (LSB) dificilmente recupera suas propriedades biomecânicas originais. A desmite do LSB proximal dos membros torácicos ocorre em cavalos de todas as raças e todas as disciplinas esportivas. O objetivo deste trabalho foi avaliar clinicamente e por ultrassonografia, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), e do PRP associado ao LASER terapêutico, na cicatrização da região proximal do LSB, em cavalos com desmite induzida por colagenase. Para isto foram utilizados 18 animais sem raça definida, distribuídos em três grupos. O G1 foi formado por seis animais, submetidos a indução da desmite na região proximal do LSB, que não receberam qualquer tratamento. O G2 foi formado por seis animais, que foram submetidos a desmite induzida e após três semanas receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. O G3 foi formado por seis animais, que após indução da desmite receberam tratamento com LASER terapêutico a partir da segunda semana, e na terceira semana pós-lesão receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. A indução da desmite foi realizada por meio de infiltração guiada pelo ultrassom na região proximal do LSB, sendo este considerado o tempo 0. A cada semana e até a semana oito, os cavalos foram avaliados clinicamente, por ultrassonografia e por análise cinemática, ao trote em linha reta. Houve diferença significativa na comparação entre grupos para as variáveis aumento de volume na avaliação clínica, e área no corte transversal do ligamento e, área no corte transversal da lesão na avaliação ultrassonográfica. Na comparação entre os diferentes momentos de observação as variáveis aumento de volume e dor à palpação do G2 e G3 mostraram escores maiores quando comparados ao G1, sendo que o G2 apresentou escore maior que o G3. Ultrassonograficamente, a ecogenicidade da lesão mostrou diminuição dos escores, a partir da quinta semana de avaliação nos grupos tratados. As demais variáveis clínicas ou ultrassonográficas, bem como a análise cinemática da claudicação não mostraram diferenças significativas entre os grupos. O PRP, apesar de ocasionar inflamação leve e transitório após infiltração, influenciou positivamente o processo de cicatrização da parte proximal do LSB, com um efeito analgésico adicional quando associado ao LASER terapêutico. / The healing process of injured ligaments is slow and often inefficient. Once damaged the suspensory ligament (SL) hardly recover their original biomechanical properties. The forelimb proximal suspensory ligament desmitis occurs in horses of all breeds and all sports. The aim of this study was to evaluate clinically and ultrasonographically, the influence of platelet-rich plasma (PRP), and PRP associated with LASER therapy, on the healing process of the proximal region of the SL in horses with collagenase-induced demitis. For this purpose it were used 18 cross breed horses divided into 3 groups. G1 was composed of six horses subjected to induction of proximal suspensory desmitis, with no treatment. G2 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after three weeks they received ultrasound-guided intralesional injection of PRP. G3 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after two weeks they received laser therapy and one week later they received intralesional guided-ultrasound injection of PRP. Induction of desmitis was made using ultrasound-guided infiltration in PSL, which was considered day zero. Horses were evaluated clinically, in straight line trot for cinematic analysis and ultrasonographically, every week until eighth week. There were significant difference between groups for swelling, the cross-sectional area of the ligament, and the cross-sectional area of the injury on ultrasound evaluation. Comparing the different times of observation, descriptively were a difference for G2 and G3 in the clinical variables that evaluated swelling and pain on palpation, showed higher scores compared to the G1, and G2 had higher scores than the G3. Sonographically, the echogenicity of the lesion showed decreased scores from the fifth week of evaluation in the treated groups. The other clinical variables or ultrasound, as well as the kinematic analysis of lameness showed no significant differences between groups. PRP, although causing transient and mild inflammation after infiltration, positively influenced the healing process of the proximal part of the SL, with additional analgesic effect when combined with laser therapy.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-11-22T13:38:33Z No. of bitstreams: 1 Bianca Ayumi Lima Taniguchi .pdf: 5557065 bytes, checksum: e2b995ff334324fa8c28140520d66d2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T13:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianca Ayumi Lima Taniguchi .pdf: 5557065 bytes, checksum: e2b995ff334324fa8c28140520d66d2b (MD5) Previous issue date: 2018-09-27 / The cicatricial process comprises a sequence of events and cellular interacting to restore damaged tissue. Biomaterials such as platelet rich plasma (PRP) were widely used for a healing promotion, due to the better distribution of collagen. In addition, studies show that biomaterial-associated statistics can improve endothelial function and increase re-epithelialization. Analysis of collagen architecture is critical when it comes to healing. A form of evaluation used to individualize the changes in the history and quantify as the existing changes, more precisely, because it is a technique that is independent of the evaluator. This is a research program to evaluate the use of rosuvastatin (RSV) associated with autologous PRP in serial form, to analyze how the ability of expression through the fractal dimension. 100 skin biopsies induced experimentally by male adults, treated or not with PRP, RSV and association, were followed at 7,14 and 17 days. In all procedures there was a decrease in the DF, verified up to 170 days. The WF of the Wounds That Know the Departure of the Different Doses Seven Days (P <0.05), It was verified that, unlike PRP in a serious way, the reorganization of the fibers in the initial healing process can be favored. The use of DF for collagen evaluation proved to be reliable. / O processo cicatricial compreende uma sequência de eventos moleculares e celulares que interagem para restaurar o tecido lesado. Os biomateriais como o plasma rico em plaquetas (PRP) têm sido muito utilizados para a promoção de cicatrização, pela melhor distribuição do colágeno. Além disso, estudos mostram que as estatinas associadas a biomateriais podem melhorar a função endotelial e aumentar a reepitelização. A análise da arquitetura do colágeno é fundamental quando se trata de cicatrização. Uma forma de avaliação utilizada para identificar alterações estruturais na pele é a dimensão fractal, que permite caracterizar estruturas irregulares em lâminas histológicas e quantificar as alterações existentes, de maneira mais precisa, pois se trata de uma técnica que independe do avaliador. Este estudo teve por objetivo verificar a viabilidade do uso da rosuvastatina (RSV) associada ou não ao PRP autólogo de forma seriada, para analisar as fibras colágenas por meio da dimensão fractal. Foram utilizadas 100 biopsias de feridas de pele induzidas experimentalmente de coelhos adultos, machos, tratadas ou não com PRP, RSV e associação, que foram acompanhadas aos 7,14 e 17 dias. Em todos os tratamentos houve uma diminuição da DF, verificada até o 170 dia. A DF das feridas que receberam diferentes tratamentos foi menor nos primeiros sete dias (P<0,05), mostrando que a adição da RSV ao PRP de forma seriada pode favorecer a reorganização das fibras no processo de cicatrização inicial. A utilização da DF para avaliação de colágeno mostrou-se confiável.

No description available.

Haemophilus influenzae b (Hib) é uma bactéria patogênica causadora de pneumonia e meningite. Sua cápsula polissacarídica (PRP) é considerada como principal fator de virulência e utilizada como antígeno vacinal. Hib é fastidioso e requer micronutrientes para seu desenvolvimento. A finalidade deste trabalho é estabelecer o meio quimicamente definido para desenvolvimento de Hib e produção de PRP. Inicialmente, definiu-se um meio a partir de dados da literatura. Este meio foi estudado através do delineamento de Plackett-Burman de 44 ensaios, obtendo-se valores máximos de DO540nm de 5,0 UA, e 227,7 mg/L de PRP. A análise estatística revelou que EDTA, NH4Cl, Cys e PVA podem ser removidos do meio sem impactar os parâmetros estudados e que Glm, Hipoxantina, Inosina, Tiamina, Hemina e Tween 80 apresentam efeito significativo positivo para produção de PRP. Analisando os meios estudados, foi possível verificar que a composição do E44 possibilitou produzir o PRP a US$ 16,50/g, sendo considerado o meio quimicamente definido estabelecido neste trabalho. / Haemophilus influenzae b (Hib) is a pathogenic bacterium that causes pneumonia and meningitis. Its capsular polysaccharide (PRP) is considered as a major virulence factor and used as vaccine antigen. Hib is fastidious and requires micronutrients for its development. The purpose of this study is to establish the chemically defined medium for Hib development and PRP production. Initially, a medium was defined based in the literature. This medium was studied by the Plackett-Burman design of 44 trials, achieving maximum values of DO540nm of 5.0 AU and 227.7 mg / L of PRP. Statistical analysis revealed that EDTA, NH4Cl, Cys and PVA can be removed from the medium without impacting the parameters studied and Glm, Hypoxanthine, Inosine, Thiamine, Tween 80 and Hemin exhibit significant positive effect on the PRP production. Analyzing the studied media, it was possible to verify that the composition of E44 enabled to produce PRP to $ 16.50/g, being considered the chemically defined medium established in this work.

No description available.

Submitted by Natalia Cristine Dias Dos Santos null (santos.nataliacris@gmail.com) on 2018-01-04T14:17:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 3720898 bytes, checksum: 25acdc7e7879412ae2dcd73e6d9407ea (MD5) / Approved for entry into archive by Laura Akie Saito Inafuko (linafuko@assis.unesp.br) on 2018-01-08T15:30:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ncd_me_assis.pdf: 3720898 bytes, checksum: 25acdc7e7879412ae2dcd73e6d9407ea (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-08T15:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ncd_me_assis.pdf: 3720898 bytes, checksum: 25acdc7e7879412ae2dcd73e6d9407ea (MD5) Previous issue date: 2017-11-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Vários estudos têm apontado que a interação de plasma rico em plaquetas (PRP) com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo humano (CT-TAs) é capaz de otimizar o processo regenerativo, estimulando a angiogênese e o recrutamento de células para o local da lesão. O avanço no conhecimento sobre os aspectos físico-químicos do gel de PRP, bem como na interação e no comportamento das CT-TAs quando associadas ao gel poderão resultar em aplicações práticas em processos de regeneração tecidual. Em função disso, objetivou-se analisar diferentes parâmetros relativos a aspectos morfológicos, físico-químicos e estrutural do gel de PRP isolado ou em associação com CT-TAs (PRP/CT-TAs). As análises dos géis foram realizadas por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV) e da técnica de espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). Também foi avaliada a viabilidade e migração das CT-TAS após associação ao gel de PRP. Os resultados mostraram que as CT-TAs continuam viáveis, mantendo suas propriedades, assim como o gel de PRP, após a associação. Não foram observadas alterações estruturais nos géis de PRP isolado e PRP/CT-TAs, preservando os perfis físico-químicos das amostras. Concomitantemente com estes resultados, observou-se que o gel de PRP pode proporcionar um ambiente favorável às células, permitindo proliferação e migração celular. Os resultados obtidos permitem concluir que o gel de PRP pode ser usado como um potencial scaffold, mantendo as células viáveis quando encapsuladas, preservando os aspectos físico-químicos das CT-TAs e do PRP quando em associação. Além disso, pode-se propor que gel de PRP exerce efeitos positivos sob as CT-TAs, estimulando a proliferação e a viabilidade celular. / Several studies have shown that the platelet-rich plasma (PRP) in association with human adipose-derived mesenchymal stem cells (h-AdMSCs) is able to optimize the regenerative process, stimulating angiogenesis and the recruitment of cells to the lesion site. Advancing in the knowledge of the physico-chemical aspects of PRP-gels, as well as in the interaction and behavior of h-AdMSCs when associated to the gel will result in practical applications in tissue regeneration processes. Therefore, the aim of this study was to evaluate different morphological, physic-chemical and structural parameters of the isolated PRP-gel or in association with h-AdMSCs (PRP/h-AdMSCs). The PRP-gels were submitted to scanning electron microscopy (SEM) and Fourier transform infrared spectroscopy technique (FTIR). The h-AdMSCs viability and migration after association with the PRP-gel were also evaluated. The results showed that as h-AdMSCs remain viable, retaining their properties, as the PRP gel, after association. There were no structural changes in the PRP gels isolated and PRP/h-AdMSCs, so maintaining the physical-chemical profiles of the samples. Additionally to these results, it was observed that the PRP-gel can provide a favorable environment for cells, allowing its proliferation and migration. In summary, it is possible to conclude that PRP-gel can be used as a potential scaffold, maintaining cell viability when encapsulated and preserving the physical-chemical aspects of h-AdMSCs and PRP when in association. In addition, it may be proposed that PRP gel exert chemotatic effects for h-AdMSCs, stimulating cell proliferation and viability.

The aim of this study was to observe the repair in irradiated bone using autogenous bone graft associated with platelet-rich plasma in rabbit model. Twelve New Zealand White rabbits were divided into two equal groups: irradiated (I) and non-irradiated (II), which were divided into subgroups: control (left tibiae) and PRP (right tibiae). The irradiated group received a single dose of 15 Gy in the tibiae bone. After forty-five days, in groups I and II, were created lesions in the tibiae, with trephine of 5 mm of diameter. The lesions were filled with autogenous bone grafts with PRP (test group) or without PRP (control group). After four weeks, the animals were sacrificed and the grafted regions were removed, fixed in formalin in PBS, demineralized in EDTA and embedded in paraffin. The histological images were captured at 4X magnification and submitted to the process of Targeting Interactive, as recommended by Oliveira et al. (2006). The region of bone matrix was called Region of Interest (ROI) and the percentage of matrix by area was obtained and analyzed through algorithms developed in the programming environment Scilab. The data were processed using the tests Kolmogrorov-Smirnov and paired ttest student and not paired. The statistical analysis of irradiated and nonirradiated groups showed no significant difference between test and control groups. Also, there s no significant difference between groups irradiated and non-irradiated. According to data obtained, the use of autogenous bone grafts associated with the PRP did not contribute significantly in the repair of irradiated bone. / O objetivo deste estudo foi analisar histologicamente, o reparo ósseo em lesões de tíbia previamente irradiada, após tratamento com enxerto ósseo autógeno associado ao PRP. Neste estudo, foram utilizados 12 coelhos separados em dois grupos iguais: irradiado (I) e não irradiado (II), que foram divididos em subgrupos: controle (tíbia esquerda) e PRP (tíbia direita). O grupo irradiado recebeu dose única de 15 Gy nas tíbias. Após 45 dias, nos grupos I e II, foram criadas lesões nas tíbias, com trefina de 5 mm de diâmetro. As lesões foram preenchidas com enxerto autógeno associado a PRP (grupo teste) ou não associado a PRP (grupo controle). Após quatro semanas, os animais foram sacrificados e as regiões enxertadas foram removidas, fixadas em formol tamponado, desmineralizadas em EDTA e processadas para inclusão em parafina. As imagens histológicas foram digitalizadas, utilizando objetiva de 4X, e submetidas ao processo de segmentação interativa, como preconizado por Oliveira et al. (2006). A região de matriz óssea foi denominada de Região de Interesse (ROI) e a porcentagem de matriz por área foi obtida e analisada por meio de algoritmos desenvolvidos em ambiente de programação SCILAB. Os dados foram tratados utilizando os testes Kolmogrorov Smirnov e Teste t de Student pareado e não pareado. Nos grupo irradiado e não irradiado a análise estatística não mostrou diferença significativa entre os subgrupos teste e controle. Também não foi observada diferença significativa entre os grupos irradiado e não irradiado. De acordo com os dados obtidos, a utilização de enxerto autógeno associado ao PRP não contribuiu, significativamente no reparo de lesões em osso irradiado. / Mestre em Odontologia

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-10-28T14:51:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T14:53:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T14:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Blast (Magnaporthe oryzae) is considered the most important disease of rice fields. Due to the high variability of the pathogen's population, rice cultivars quickly have its race-specific resistance to blast broken. The identification for incorporating different resistance genes in improved and adapted cultivars, utilizing molecular tools, is one breeding strategy to find stable resistance in short period. The goal of this research was to identify the number of resistance genes and SRR molecular markers to the pathotypes IB-1 and IB-9 of M. oryzae, and characterize some enzymes related to the expression of resistance. The experiments were conducted under controlled conditions of green house and laboratories. After crossing cultivar Cica-8 and cultivar Metica-1, the populations F1, F2, BC1:1 and BC2:2 were sown in plastic trays containing five kg of soil fertilized. Each tray contained eight lines with ten plants per row. Each pathotype of M. oryzae inoculated thirty plants of resistant parents, thirty plants of susceptible parents, two hundred plants of F2 population, one hundred plants of BC1:1 population and one hundred plants of BC1:2 population. The isolates 1049 (IB-1) and 435 (IB-9) were cultivated on oat medium to produce the inoculum solution (3.105 conidia.mL-1). The inoculated plants were kept under high humidity condition at 28°C, during seven days. Evaluations were made identifying the number of resistant and susceptible plants. Eleven microsatellite markers were tested by PCR strategies, utilizing DNA of each parent (resistance and susceptible), F1 and F2 populations. PCR reactions were assembled according to the characteristic of each SSR prime. The fragments were separated by denature polyacrylamide (6%) gel to identify polymorphism. Linkage analysis of the RM7102 microssatelite marker was estimated using the MAP MAKER III software. The enzymatic characterization was studied through the extraction of proteins, before and after inoculation, during five consecutive days for the determination of the activity of β-1,3-glucanase (PR1) and peroxidase. Segregation in populations F2 resistant and susceptible presented ratio of 3 plants resistant to 1 plant susceptible. An SSR marker has been identified, RM7102, and linked to the resistance gene of cultivar Cica-8 to the pathotype IB-1. Peroxidase had little activity in all populations. The F2 populations, susceptible to both isolates, presented high β-1,3- glucanase activity. / A brusone (Magnaporthe oryzae) é considerada a doença mais importante dos arrozais. Devido à alta variabilidade da população do patógeno, cultivares de arroz rapidamente tem sua resistência à brusone sucumbida. A identificação e incorporação de diferentes genes de resistência em cultivares melhoradas e adaptadas, com o auxílio de técnicas moleculares, constitui-se em uma das estratégias na busca de resistência estável a serem adotadas. Tendo em vista o desafio acima colocado, este trabalho teve como objetivo determinar o número de alelos envolvidos na expressão de resistência do arroz a brusone, identificar marcadores microssatélites ligados a estes alelos e caracterizar a ação de duas enzimas relacionadas à patogênese. Os experimentos foram conduzidos sob condições controladas de casa de vegetação e laboratório. As gerações F1, F2, RC1:1 e RC1:2 foram semeadas em bandejas plásticas. Cada bandeja continha oito linhas, sendo dez plantas por linha. Cada patótipo de M. oryzae foi inoculado em trinta plantas do genitor resistente, trinta plantas do genitor suscetível, duzentas plantas da população F2, cem plantas da população RC1:1 e cem plantas da população RC1:2. Os isolados 1049, patótipo IB-1 e 435, patótipo IB-9, foram cultivados em meio de cultura aveia-dextrose-ágar para produção de solução de inóculo, à concentração de 3.105 conídios.mL-1. As plantas inoculadas foram mantidas sob alta condição de umidade e temperatura média de 28ºC, durante sete dias. As avaliações foram feitas identificando a proporção de plantas resistentes e suscetíveis. Para testar onze marcadores microssatélites selecionados, foram feitas extrações de DNA de cada genitor e das populações F1 e F2. As reações de PCR assim como os ciclos de amplificação foram montadas de acordo com a característica de cada microssatélite. As reações foram submetidas a gel poliacrilamida desnaturante (6%) para identificação de polimorfismo entre os genitores e as populações F1 e F2. A caracterização enzimática foi estudada através da extração de proteínas, antes e depois da inoculação, durante cinco dias consecutivos para a determinação da atividade enzimática de β-1,3-glucanase (PR1) e peroxidase. A segregação em ambas as populações F2 apresentou proporção de três plantas resistentes para uma planta suscetível. Foi identificado um marcador microssatélite, RM7102, ligado ao alelo de resistência da cultivar Cica-8 ao patótipo IB-1. Não foi possível detectar diferenças entre as populações F2 resistentes e F2 suscetível quanto atividade de peroxidase. A população F2 suscetível, para ambos os patótipos, apresentou alta atividade de β-1,3-glucanase, enquanto a atividade da mesma enzima nos genitores e população F2 resistente não mostrou aumento significativo.