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Detecção e caracterização molecular de riquétsias em humanos, potenciais vetores e animais domésticos da região sudeste do Brasil. / Detection and molecular characterization of rickettsiae in humans, potential vectors and domestic animals of southeastern Brazil.

Gehrke, Flávia de Sousa 18 June 2010 (has links)
Neste projeto, objetivou-se o diagnóstico de riquétsias, utilizando metodologia molecular, em material de humanos, carrapatos, pulgas, cães e equinos de áreas endêmicas dos estados de São Paulo (SP) e Rio de Janeiro (RJ). Diagnosticou-se Rickettsia rickettsii infectando Amblyomma cajennense e humanos no estado de SP, indicando ser esta a única espécie responsável pela doença. Rickettsia conorii foi diagnosticada em um paciente procedente de Portugal. No estado do RJ, Rickettsia felis foi detectada Ctenocephalides felis e em Am. cajennense enquanto que R. rickettsii em Amblyomma aureolatum, Am. cajennense, Anocentor nitens, Boophilus microplus, Ct. felis e Rhipicephalus sanguineus. As frequências mínimas de vetores infectados do estado do RJ apresentaram valores superiores àqueles registrados em outras regiões do país. Demonstrou-se, de forma inédita, o envolvimento de algumas destas espécies no ciclo da bactéria. R. rickettsii foi diagnosticada em cães e equinos indicando a importância dos animais domésticos na manutenção do ciclo da riquetsiose. / This project aimed to diagnose rickettsial diseases using molecular analysis methods on human, tick, flea, dog and horse samples from endemic areas in the States of São Paulo (SP) and Rio de Janeiro (RJ). A diagnosis of Rickettsia rickettsii infecting Amblyomma cajennense and humans in the State of SP was made, indicating that this is the only species responsible for the disease. Rickettsia conorii was diagnosed in a patient from Portugal. In RJ, Rickettsia felis was detected in Ctenocephalides felis and Am. cajennense, while R. rickettsii was detected in Amblyomma aureolatum, Am. cajennense, Anocentor nitens, Boophilus microplus, Ct. felis and Rhipicephalus sanguineus. In the State of RJ the minimum frequency of infected vectors presented higher values than those recorded in other regions of the country. The involvement of some of these species in the bacterium cycle has been demonstrated for the first time. R. rickettsii was diagnosed in dogs and horses indicating the importance of livestock in the maintenance cycle of rickettsial infection.
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Efeitos da infecção por Rickettsia rickettsii sobre o perfil de expressão gênica do carrapato vetor Amblyomma cajennense. / Effects of infection with Rickettsia rickettsii on the gene expression profile of the tick vector Amblyomma cajennense.

Martins, Larissa Almeida 06 May 2014 (has links)
O agente etiológico da Febre Maculosa das Montanhas Rochosas (RMSF), conhecida no Brasil como Febre Maculosa Brasileira, é a bactéria Rickettsia rickettsii. Essa bactéria é transmitida ao homem pela picada de diferentes espécies de carrapatos ixodídeos. No Brasil, os vetores são Amblyomma cajennense e A. aureolatum. As taxas de prevalência de R. rickettsii nas populações de carrapatos de áreas endêmicas para RMSF são baixas, em geral abaixo de 1%. Essa baixa prevalência parece estar associada a menores taxas reprodutivas e de sobrevivência de linhagens infectadas, sugerindo que R. rickettsii seja patogênica também para os seus vetores. Infecções experimentais demonstraram que 80-100% dos indivíduos de uma colônia de A. aureolatum mantida em laboratório são infectados por R. rickettsii, enquanto apenas 10-60% de A. cajennense adquirem a bactéria. Esses dados indicam que as respostas dessas duas espécies de carrapatos à infecção sejam diferentes, resultando em diferentes taxas de prevalência da bactéria. Dessa maneira, a caracterização molecular das interações entre carrapatos do gênero Amblyomma e a bactéria R. rickettsii é importante, podendo gerar informações não somente para o esclarecimento acerca dos mecanismos de patogenicidade de R. rickettsii para os carrapatos, mas também para um melhor entendimento dos mecanismos responsáveis pela aparente restringência de A. cajennense à infecção. Assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) analisar os efeitos da infecção por R. rickettsii sobre o perfil de expressão gênica de carrapatos A. cajennense por hibridação subtrativa por supressão (SSH), (ii) validar os dados de SSH por reação em cadeia de polimerase quantitativa precedida por transcrição reversa (RT-qPCR) e (iii) caracterizar funcionalmente dois genes com expressão induzida pela infecção por RNA de interferência (RNAi). Após a análise bioinformática dos dados de SSH, 44 sequências únicas foram obtidas, das quais 36 representam genes com expressão induzida e 8 genes com expressão reprimida pela infecção. A indução dos genes codificadores da subunidade I da citocromo c oxidase (COX1), da subunidade IV da NADH desidrogenase, de uma proteína com domínio de inibidor de serina-proteases Kunitz-type (papilina-like), identificados por SSH, e de um peptídeo antimicrobiano (hebraeína), foi confirmada por RT-qPCR. O silenciamento gênico da hebraeína e da papilina-like não teve nenhum efeito na aquisição de R. rickettsii pelo vetor, indicando que, isoladamente, não são responsáveis pela proteção de A. cajennense contra a infecção. Os dados gerados pelo presente estudo abrem perspectivas para que outros genes sejam avaliados quanto ao seu papel na aquisição de R. rickettsii, os quais, no futuro, podem ser considerados como alvos para o desenvolvimento de vacinas. / The etiologic agent of the Rocky Mountain Spotted Fever (RMSF), also known as Brazilian Spotted Fever in Brazil, is the bacterium Rickettsia rickettsii. This rickettsia is transmitted to humans by the bite of various tick species. In Brazil, Amblyomma cajennense and A. aureolatum are known as vectors. The prevalence rates of R. rickettsii infected ticks in RMSF endemic areas are low, oscillating around 1%. These low prevalence rates seems to be associated with lower reproductive and survival rates of infected ticks, suggesting that R. rickettsii is also pathogenic to its vectors. Experimental infections with R. rickettsii have demonstrated that 80 to 100% of A. aureolatum ticks from a laboratory colony acquire this bacterium, whereas only 10 to 60% of A. cajennense ticks become infected. These results indicate that the responses of these two tick species against infection are different, resulting in different prevalence rates of the bacterium. Therefore, the elucidation of the interactions between ticks of the genera Amblyomma and the bacterium R. rickettsii at a molecular level is important to provide information to better understand the mechanisms of pathogenicity of R. rickettsii against ticks as well as for the elucidation of the mechanisms responsible for the apparent refractoriness of A. cajennense against infection. Therefore, the objectives of the current study were: (i) analyze the effets of the infection with R. rickettsii on the gene expression of ticks A. cajennense by suppression subtractive hybridization (SSH), (ii) validate SSH data by reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), and (iii) functionally characterize two genes induced by infection using RNA interference (RNAi). After bioinformatics analysis of SSH data, 44 unique sequences were obtained, among which 36 represent genes with expression induced and 8 repressed genes by infection. The induction of genes encoding subunit I of cytochrome c oxidase (COX1), the NADH dehydrogenase subunit IV, a protein containing Kunitz-type inhibitor domain (papilin-like), identified by SSH, and an antimicrobial peptide (hebraein), was confirmed by RT-qPCR. The effects of knockdown of hebraein and papilin-like encoding genes had no effect on the acquisition of R. rickettsii by the vector. Data of the current study may be used to evaluate the role of other genes in acquisition of R. rickettsii, which, in the future, may be considered as target for vaccine development.
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The molecular cloning, sequence, and characterization of the putative protease IV (cjsT) in Rickettsia rickettsii

Temenak, Joseph John, January 1998 (has links)
Thesis (Ph. D.)--University of Missouri--Columbia, 1998. / Typescript. Vita. Includes bibliographical references (leaves: 126-138). Also available on the Internet.
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Avalia??o da biologia e da infec??o por Rickettsia rickettsii (Rickettsiales: Rickettsiaceae) em Haemaphysalis leporispalustris (Acari: Ixodidae) utilizando coelho dom?stico como hospedeiro. / Evaluation of Haemaphysalis leporispalustris (Acari: Ixodidae) biology and infection for Rickettsia rickettsii (Rickettsiales: Rickettsiaceae) using domestic rabbit as host

Freitas, Luciana Helena Teixeira de 21 May 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Luciana Helena Teixeira de Freitas.pdf: 967474 bytes, checksum: 42db4aba518b754de5ef670fd3af5b94 (MD5) Previous issue date: 2007-05-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / With the aim to increase data about the biology of Haemaphysalis leporispalustris in Brazil, two studies were conduced. The first experiment evaluated biological parameters of nymphs of H. leporispalustris during and after the parasitism with the aim to relating those with appearance of males or females. The male parasitism is also evaluated. We tried stipulated the period of minimum and maximum survival of males on the host and the influence of number or longevity of males in the reproductive capacity of females. The second experiment approached the biological acting of the tick front to the infection for Rickettsia rickettsii, causal agent of the Brazilian Spotted Fever. In the first experiment, the engorged nymphs that changed for males were lighter and presented shorter parasitic period (p <0,05) that the ones that changed for females. The sexual ratio (SR) was established in agreement with the parasitic period. Engorged nymphs of shorter parasitic period (5 and 6 days) created a larger proportion of males (1:0 and 1,70: 1, respectively) that the nymphs of longer parasitic period (9 to 10 days, and SR of 1:3,07 and 1: 4,60, respectively). Already the nymphs that engorged in 7 to 8 days, created males and females in proportion of 1: 1,73 and 1:1,67, respectively.Only the larval hatching was influenced by the number of live males. The weight of the engorged females was more influenced by the host resistance than for the number of live males. In the second experiment, alterations in the biological parameters of H. leporispalustris exposed to the R. rickettsii infection were appraised during the parasitic and no parasitic phase of larvae, nymphs and females ticks. Experimental groups were generated by fed on R. rickettsii infected rabbits, during larvae, nymphs and adult phase. Other group was created through co-feeding of R. rickettsii positive males with larvae in healthy rabbits. The tick s group directly fed in inoculated animals suffered larger effect of the infection on the biological parameters, with increase of the parasitic period and mortality, and decrease of the weight and oviposition period. The group infected in the nymph phase generated lighter females, that produced less eggs than didn't developed appropriately (low hatching). The larvae infected by co-feeding with infected males group represents the closest model to the than it happens in the natural condition. This group presented heavier larvae and smaller mortality of larvae and engorged nymphs, in relation to the control group. The efficiency in the ecdisis of nymphs was greater, and even the engorged females presenting smaller weight, they obtained IER upper to the control group. / Com o objetivo de acrescentar dados sobre a bioecologia de Haemaphysalis leporispalustris e a Febre Maculosa no Brasil, dois estudos foram conduzidos. O primeiro experimento avaliou par?metros biol?gicos de ninfas de H. leporispalustris durante e ap?s o parasitismo com o objetivo de relacion?-los com o surgimento de machos ou f?meas e o parasitismo do sexo masculino. Procurou-se estipular qual o per?odo de sobreviv?ncia m?nima e m?xima de machos sobre o hospedeiro e a influ?ncia do n?mero e da longevidade dos machos sobre a capacidade reprodutiva das f?meas. O segundo experimento abordou o desempenho biol?gico do ixod?deo frente ? infec??o por Rickettsia rickettsii, agente causal da Febre Maculosa Brasileira. No primeiro experimento, as ninfas ingurgitadas mais leves mudaram para machos e apresentaram per?odo parasit?rio mais curto (p<0,05) do que as que mudaram para f?meas. A raz?o sexual (RS) foi estabelecida de acordo com o per?odo parasit?rio. Ninfas ingurgitadas de per?odo parasit?rio mais curto (5 e 6 dias) deram origem a uma maior propor??o de machos (1:0 e 1,70: 1, respectivamente) que as ninfas de per?odo parasit?rio mais longo (9 a 10 dias, e RS de 1:3,07 e 1: 4,60, respectivamente). J? as ninfas que se ingurgitaram em 7 a 8 dias, deram origem a machos e f?meas em propor??o de 1: 1,73 e 1:1,67, respectivamente. Somente a eclos?o larval foi influenciada pelo n?mero de machos vivos, sendo que o peso da f?mea ingurgitada foi influenciado mais pela resist?ncia do hospedeiro do que pelo n?mero de machos vivos. No segundo experimento, altera??es no desempenho biol?gico de H. leporispalustris expostos ? infec??o por R. rickettsii, foram avaliadas durante a fase parasit?ria e n?o parasit?ria de larvas, ninfas e f?meas do carrapato. Foram gerados grupos de carrapatos infectados durantes as fases de larva, ninfa e adulto, alimentados em coelhos inoculados com R. rickettsii e um grupo de larvas infectadas atrav?s de co-parasitismo com machos positivos para R. rickettsii. Os grupos de carrapatos diretamente alimentados em animais inoculados sofreram maior efeito da infec??o sobre o desempenho biol?gico, com aumento do per?odo parasit?rio e da mortalidade, e diminui??o do peso e do per?odo de postura. O grupo infectado na fase de ninfa gerou f?meas mais leves, que produziram menos ovos que por sua vez n?o se desenvolveram adequadamente (baixa eclos?o). O grupo experimental gerado pelo co-parasitismo entre larvas e machos representou o modelo mais pr?ximo ao que ocorre na condi??o natural. Este grupo apresentou larvas mais pesadas e menor mortalidade de larvas e ninfas ingurgitadas em rela??o ao controle. A efici?ncia na ecdise de ninfas foi maior e mesmo as f?meas ingurgitadas apresentando menor peso, obtiveram IER superior ao do grupo controle.

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