AZEVEDO, Maria Isabel Carneiro de. Efeito dos flavonóides rutina e quercetina na neuropatia sensitiva periférica induzida por oxaliplatina. 2012. 102 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T13:38:26Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_micazevedo.pdf: 2373704 bytes, checksum: d49b2962dbf8cf9689c38bdf578ddc26 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T13:38:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_micazevedo.pdf: 2373704 bytes, checksum: d49b2962dbf8cf9689c38bdf578ddc26 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T13:38:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_micazevedo.pdf: 2373704 bytes, checksum: d49b2962dbf8cf9689c38bdf578ddc26 (MD5) Previous issue date: 2012 / Oxaliplatin is a third-generation platinum compound and the first-line treatment for colorectal cancer. The main limiting factor in oxaliplatin treatment is painful neuropathy that is difficult to treat. This side effect has been studied for several years, but its full mechanism is still inconclusive, and effective treatment does not exist. Data suggest that oxaliplatin’s initial neurotoxic effect is peripheral and oxidative stress-dependent. A spinal target is also suggested in its mechanism of action. The flavonoids rutin and quercetin have been described as cell-protecting agents because of their antioxidant, antinociceptive, and anti-inflammatory actions. We proposed a preventive effect of these agents on oxaliplatin-induced painful peripheral neuropathy based on their antioxidant properties. Methods: Oxaliplatin (1 mg/kg, i.v.) was injected in male Swiss mice, twice per week for 4 weeks. The development of sensory alterations, such as thermal allodynia and mechanical hypernociception, was evaluated using the tail immersion test in cold water (10°C) and the von Frey test. Rutin and quercetin (25-100 mg/kg, i.p.) were injected 30 min before each oxaliplatin injection. The animals’ spinal cords were removed for histopathological and immunohistochemical evaluation and malondialdehyde and non-protein sulfhydryl group assays. Results: Oxaliplatin significantly reduced thermal and mechanical nociceptive thresholds, effects prevented by quercetin and rutin at all doses. Fos immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord confirmed these results. The oxidative stress assays mainly showed that oxaliplatin induced peroxidation in the spinal cord and that rutin and quercetin decreased this effect. The flavonoids also decreased inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord. These results suggest that nitric oxide and peroxynitrite are also involved in the neurotoxic effect of oxaliplatin and that rutin and quercetin can inhibit their effect in the spinal cord. We also observed the preservation of dorsal horn structure using histopathological analyses. Conclusions: Oxaliplatin induced painful peripheral neuropathy in mice, an effect that was prevented by rutin and quercetin. The mechanism of action of oxaliplatin appears to be at least partially oxidative stress-induced damage in dorsal horn neurons, with the involvement of lipid peroxidation and protein nitrosylation. / Oxaliplatina (OXL) é um agente antineoplásico de terceira geração, com potente atividade citotóxica em vários tipos de câncer, mas apresenta um efeito neurotóxico importante que causa uma severa e dolorosa neuropatia periférica. Dados da literatura também sugerem que o efeito neurotóxico inicial da OXL seria dependente do estresse oxidativo, nos tecidos periféricos. Os flavonóides Rutina (RT) e Quercetina (QC) foram descritos como agentes protetores celulares por sua ação antioxidante, assim como por seus efeitos antiinflamatórios e antinociceptivos. O objetivo deste estudo é investigar o efeito do tratamento com RT e QC na neuropatia sensitiva periférica (NSP) induzida pela OXL em camundongos. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da Universidade Federal do Ceará (n° 36/2011). A neuropatia sensitiva foi induzida em camundongos Swiss machos (25-30 g), através de duas injeções por semana de OXL (1 mg/kg, e.v.) durante 4,5 semanas, no total de nove injeções, juntamente com a avaliação de testes nociceptivos semanais. Alodínia térmica foi avaliada pelo teste de imersão da cauda em água fria (10 °C), e hipernocicepção mecânica plantar pelo teste eletrônico de Von Frey. Os animais tratados com OXL foram divididos nos grupos: grupo controle (pré-tratado com salina), e três grupos pré-tratados com RT ou QC (25, 50 e 100 mg/kg, i.p), 30 min antes de cada injeção de OXL. No final dos experimentos, as medulas espinhais foram removidas e processadas para avaliação histopatológica e imunohistoquímica. Em outros experimentos a medula espinha também foi retirada para testes bioquímicos (MDA e NP-SH). Nossos resultados mostraram que a OXL reduziu significativamente (p < 0,05) tanto o limiar nociceptivo térmico como mecânico. O tratamento com QC, preveniu esses efeitos (p< 0,05) em todas as doses (efeito máximo na dose de 50 mg/kg), aumentando o limiar em 68,6 % para alodínia térmica e em 47,6 % para hipernocicepção mecânica. O tratamento com RT também preveniu esses efeitos (p < 0,05) em todas as doses (efeito máximo na dose de 50 mg/kg) aumentando o limiar em 448 % para alodínia térmica e em 25,5 % para hipernocicepção mecânica. A imunohistoquímica mostrou que a RT e QC diminuíram a imunoexpressão para c-fos, NOSi (oxido nítrico sintase induzida) e nitrotirosina, no corno posterior da medula espinhal, quando comparada ao grupo controle. OXL aumentou significativamente os níveis de MDA, mas não de NP-SH com inibição pelo tratamento com RT e QC. Nossos resultados mostraram que RT e QC tem efeito antinociceptivo em ambos os testes, térmico e mecânico, juntamente com a inibição da imunoexpressão para c-fos pela QC na neuropatia sensitiva periférica da OXL. Além disso, a QC foi capaz de inibir a imunoexpressão para nitrotirosina e para NOSi no corno posterior da medula espinhal, indicando um possível mecanismo envolvendo NO e estresse oxidativo. Os dados sugerem que RT e QC podem ter um efeito neuroprotetor, vindo a ser uma alternativa promissora na prevenção a neuropatia sensitiva periférica causada pela OXL na quimioterapia do Câncer.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Marise Leite (marise_mg@yahoo.com.br) on 2016-03-30T13:34:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-04-05T13:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T13:58:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) Previous issue date: 2015 / Baccharis trimera, popularmente conhecida como "carqueja", é uma planta nativa sul-americana que possui uma alta concentração de compostos fenólicos e, portanto, alto potencial antioxidante. Apesar do potencial antioxidante de B. trimera descrito na literatura, não existem relatos sobre as vias de sinalização envolvidas neste processo. A enzima NADPH oxidase é uma fonte importante na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) em condições patológicas, como no câncer, no diabetes e em processos inflamatórios. Esta enzima é ativada por meio de diferentes moduladores, entre os quais destaca-se a proteína cinase C (PKC), que fosforila a subunidade p47phox da NADPH oxidase, como um contribuinte para a ativação do complexo enzimático e a consequente geração de ERO. Com base nestas informações, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composição fitoquímica dos extratos aquoso e hidroetanólico de Baccharis trimera bem como a influência destes extratos na modulação de ERO e na via de sinalização da PKC e NADPH oxidase em células de hepatocarcinoma humano (SK Hep-1). No presente estudo, a quercetina e a rutina foram utilizadas como controles positivos, pois o efeito antioxidante destes flavonoides tem sido bem estabelecido, sendo estes compostos já identificados em extratos de B. trimera. No extrato hidroetanólico foram identificados cinco flavonoides enquanto no extrato aquoso foram identificados três flavonoides por CLAE-EM. A atividade antioxidante in vitro por DPPH também foi avaliada e os resultados demonstraram que o extrato hidroetanólico possui um maior potencial em sequestrar o radical DPPH bem como uma maior quantidade de compostos fenólicos em comparação ao extrato aquoso. Em relação à viabilidade celular, observamos que o extrato hidroetanólico de B. trimera manteve acima de 70% a porcentagem de células viáveis, entretanto em 24 e 48 horas de incubação houve uma redução da viabilidade (<70%) em concentrações iguais ou superiores a 25μgmL-1. Em relação ao extrato aquoso observamos que a porcentagem de células viáveis foi mantida acima de 70% em 12, 24 e 48 de incubação. Em relação a produção de espécies reativas foi observado que os extratos de B. trimera (aquoso e hidroetanólico) diminuíram os níveis de ERO em células SK Hep-1 não estimuladas. Níveis reduzidos de ERO também foram observados nas células tratadas com quercetina e rutina. Os resultados mostraram que as células estimuladas com PMA / ionomicina (ativadores de PKC) tiveram um aumento significativo na produção de ERO, e esta produção voltou aos níveis basais após tratamento com o DPI (inibidor da NADPH oxidase). O extrato hidroetanólico de B. trimera e quercetina, mas não o extrato aquoso e a rutina, modularam a produção de ERO através da inibição da expressão e atividade da proteína PKC e também através da redução da fosforilação da subunidade p47phox da enzima NADPH oxidase. Em conjunto, estes resultados sugerem um mecanismo potencial de ação de B. trimera na inibição da produção de ERO através da via de sinalização da PKC/NADPH oxidase. __________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Baccharis trimera, popularly known as "carqueja" is a native South American plant having high concentration of phenolic compounds and therefore high potential antioxidant. Although the antioxidant potential of B. trimera described in the literature there are no reports on the signaling pathways involved in this process. The NADPH oxidase is a major source in production of reactive oxygen species (ROS) in pathological conditions such as cancer, diabetes and inflammation. This enzyme is activated by different modulators, among which we highlight protein kinase C (PKC), which phosphorylates p47phox subunit of NADPH oxidase, as a contributor to the activation of the enzyme complex and the subsequent generation of ROS . Based on this information, the aim of this study was to evaluate the phytochemical composition of aqueous and hydroethanolic extracts of Baccharis trimera and the influence of these extracts on ROS modulation induced by PKC signaling pathway in human hepatocellular carcinoma cells (SK-Hep 1). In the present study, quercetin and rutin were used as positive controls, since the antioxidant effect of these flavonoids have been well established, and these compounds have been identified in B. trimera extracts. In hydrethanolic extract five flavonoids were identified, and in the aqueous extract identified three flavonoids by CLAE-MS. The antioxidant activity in vitro was also evaluated by DPPH and the results demonstrated that the hydroethanolic extract has a higher potential scavenger the DPPH radical as well as a greater quantity of phenolic compounds as compared to aqueous extract. About cell viability, we observed that the hydroethanolic extract of B. trimera maintained above 70% of viable cells, however at 24 and 48 hours of incubation there was a reduction of viability (<70%) in concentrations equal to or greater than 25μgmL-1. About aqueous extract we found that the percentage of viable cells was maintained above 70% at 12, 24 and 48 of incubation. It was observed that extracts of B. trimera (aqueous and hydroethanolic) decreased ROS levels in the SK-Hep 1 cells unstimulated. Reduced levels of ROS were also observed in cells treated with quercetin and rutin. The results showed that cells stimulated with PMA / ionomycin (PKC activators) had a significant increase in ROS production and this production returned to basal levels after treatment with DPI (NADPH oxidase inhibitor). The B. trimera hydroethanolic extract and quercetin, but not the aqueous extract and rutin, modulate the production of ROS by inhibiting the expression and activity of PKC protein and downregulation p47phox phosphorilation. Together, these results suggest a potential mechanism of inhibition by B. trimera in ROS production by PKC/NADPH oxidase signaling pathway.

Para que los laboratorios de análisis puedan acreditarse según la norma ISO 17025, es necesario que los resultados analíticos vayan acompañados de dos parámetros de calidadbásicos: su trazabilidad y su incertidumbre. Esto ha hecho que, hoy en día, la verificaciónde la trazabilidad y el cálculo de la incertidumbre de los resultados analíticos sea cada vezmás importante. En esta tesis doctoral hemos propuesto diversas metodologías para calcularla incertidumbre en métodos analíticos que se utilizan de forma rutinaria en el laboratorio.Estas metodologías están basadas en calcular la incertidumbre globalmente (es decir,agrupando términos de incertidumbre siempre que sea posible) y en utilizar la informaciónobtenida durante el proceso de validación del método y, especialmente, durante laverificación de la trazabilidad.La ventaja de estas metodologías es que pueden aplicarse a todos los métodos de rutina yque requieren poco trabajo adicional ya que los métodos analíticos siempre deben validarseantes de aplicarlos al análisis de muestras de rutina. En concreto, hemos propuestoexpresiones para calcular la incertidumbre a un nivel de concentración cuando latrazabilidad de los resultados se verifica utilizando diversas referencias como los materialesde referencia o los ejercicios interlaboratorio. Para ello, se utiliza fundamentalmente lainformación obtenida al verificar la trazabilidad. Además, también puede utilizarse lainformación obtenida a partir de los gráficos de control, los estudios de precisión y losestudios de robustez. El cálculo de la incertidumbre a un nivel de concentración esaplicable en métodos de rutina con un intervalo restringido de concentraciones ya que seasume que el sesgo y la precisión del método es el mismo en todo el intervalo deconcentraciones. No obstante, hay muchos métodos analíticos que se aplican en intervalosde concentración amplios de varios órdenes de magnitud y en diferentes tipos de matrices.Para estos casos, hemos desarrollado expresiones para calcular la incertidumbre a variosniveles de concentración que consideran la variabilidad de las matrices en la incertidumbrefinal. Para ello, debe verificarse la trazabilidad utilizando varias muestras de referenciacuyas concentraciones estén comprendidas en el intervalo de trabajo del método. Además,es necesario verificar la ausencia de dos tipos de sesgos: el sesgo proporcional (que varíacon la concentración y suele expresarse en términos de recuperación) y el sesgo constante.En concreto, hemos desarrollado expresiones para calcular la incertidumbre cuando latrazabilidad de los resultados se verifica utilizando muestras adicionadas. No obstante, estasexpresiones también pueden aplicarse cuando la trazabilidad se verifica utilizando otro tipode referencias como los materiales de referencia.Por último, en esta tesis doctoral hemos estudiado si la incertidumbre de los resultados estásubestimada cuando en la verificación de la trazabilidad se concluye erróneamente que elmétodo no tiene un sesgo significativo. En estos casos, se ha observado que laincertidumbre de los resultados puede estar muy subestimada cuando la incertidumbre delsesgo contribuye a la incertidumbre total en más de un 30 %. Por tanto, es necesarioverificar la trazabilidad en los métodos de rutina de forma que la incertidumbre del sesgono supere el 30% de la incertidumbre total de los resultados. Para ello, es necesario analizarlas muestras de referencia al menos 10 veces y utilizar referencias con la menorincertidumbre posible. / According to the ISO Norm 17025, the accredited analytical laboratories should obtaintheir results accompanied by two basic quality parameters: traceability and uncertainty.Therefore, nowadays the analysts are increasingly urged to assess the traceability of theirresults and to estimate the uncertainty of these results. In this thesis, we have proposeddifferent methodologies to calculate uncertainty in analytical methods that are usedroutinely in the laboratory. These methodologies calculate uncertainty as a whole (i.e. bygrouping terms of uncertainty whenever possible) and use the information generated duringthe validation process and, specially, the information obtained in the assessment oftraceability. Moreover, the uncertainty can also be calculated using the informationgenerated during precision studies, during robustness studies and during the internal qualitycontrol.The advantage of the proposed methodologies is that they require few additional work tocalculate uncertainty because the analytical methods should always be validated beforeapplying them to the analysis of routine samples. We have developed the calculation ofuncertainty at one concentration level when traceability is assessed with several types ofreferences such as certified reference materials (CRM), reference methods andinterlaboratory studies. This uncertainty is calculated using the information obtained in theassessment of traceability. Moreover, this uncertainty can be calculated by using theinformation generated from control charts, precision studies and robustness studies. Thecalculation of uncertainty at one concentration level should only be applied in a restrictedconcentration range because it is assumed that both the method bias and precision are thesame in the whole concentration range. However, many analytical methods are applied inwide concentration ranges and to several kind of matrices. In these cases, we havedeveloped methodologies to calculate uncertainty at several concentration levels and takinginto account the matrix variability in the uncertainty budget. To calculate this uncertainty, itis necessary to verify traceability with several reference samples whose concentrations arecomprised within the concentration range of the routine samples. Moreover, the absence oftwo types of biases should be verified: proportional bias (i.e. that varies with concentrationand is expressed in terms of recovery) and constant bias. We have developedmethodologies for calculating uncertainty when traceability is assessed using spikedsamples. However, these methodologies can also be applied when traceability is assessedusing other type of references such as certified reference materials.Finally, we have studied if the uncertainty of results is underestimated when it is wronglyconcluded in the assessment of traceability that the method bias is not significant. We haveobserved that uncertainty can be very underestimated when the uncertainty of biasrepresents more than 30 % of the final uncertainty. Therefore, it is necessary to havecontributions of the uncertainty of bias lower than 30 % so that the uncertainty of results isnot underestimated. This can be achieved by analysing the reference samples at least tentimes and by using references with lower uncertainty.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:18:14Z No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T12:58:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:58:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Capes / A doença de Parkinson (DP) é caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos no mesencéfalo. No entanto, mecanismos molecular responsável pelo processo degenerativo no sistema dopaminérgico nigroestriatal durante a doença de Parkinson permanecem desconhecidos. Atualmente, concorda-se que disfunção mitocondrial, agregação de α- sinucleína, estresse oxidativo, neuroinflamação e degradação protéica são causas envolvidas. Estudos farmacológicos têm focado no uso de metabolitos secundários de plantas e, entre estes, os flavonoides têm mostrado atividade biológica com efeitos neuroprotetores, antiinflamatórios e antioxidantes. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos neuroprotetores e imunomodulatórios de flavonoides bioativos usando modelos in vitro de DP. Foram usados diferentes modelos de culturas neuronais, avaliadas pelo testes de MTT e análises morfológicas para avaliar os efeitos citotóxicos ou neuroprotetores da rutina e quercetina. Em seguida, foram usados diferentes modelos de cultura primária de células gliais e neuronais e testes de MTT, exclusão ao azul de tripan, Fluoro-Jade B, Western Blot ou imunocitoquímica para β-III-Tubulina, Western Blot para tirosina hidroxilase ou para GFAP para investigar o efeito citotóxico induzido por aminocromo e/ou o efeito neuroprotetor induzido por rutina. Também investigamos a resposta imunoinflamatória ou imunomodulatória dosando citocinas (IL6, IL10, TNF-alpha) usando o método de ELISA. Nossos resultados demonstraram que rutina e quercetina (10-50μM) não induziram decréscimo no metabolismo mitocondrial em linhagens celulares SHSY-5Y ou co-cultura primária de neurônios/células gliais, contudo estes aumentaram o metabolismo mitocondrial nas concentrações de 50 e 100 μM em células da linhagem PC12. Além disso, rutina (10μM) induziu alterações morfológicas em células PC12. Também foi visto que aminocromo (250- 500μM) induziu uma redução na viabilidade celular em co-cultura de mesencéfalo e em cultura de microglia, cultura de células gliais e cultura de neurônios corticais. Ainda, a exposição ao aminocromo reduziu a expressão de β-III-tubulina, tirosina hidroxilase e GFAP em co-culturas de mesencéfalo e cultura de células gliais. Nossos resultados demonstram que a rutina protege células neurais frente a dano induzido por aminocromo, aumenta a expressão de β-III-tubulina e protege a rede de neuritos. Além do mais, aminocromo induziu redução de níveis de citocinas IL-6, IL-10 e TNF-alfa que foram reguladas a níveis basais quando a cocultura de mesencéfalo foi tratada com rutina. Concluímos então que a rutina protege células PC12 contra danos celulares induzidos por MPTP, co-culturas de mesencéfalo e células gliais contra danos induzidos por aminocromo. Podemos sugerir que a redução no nível de citocinas é conseqüência da perda de células gliais induzidas por aminocromo e que o retorno a níveis basais podem ser resultado de glioproteção e neuroproteção induzida pela rutina. / Parkinson's disease (PD) is characterized by the loss of dopaminergic neurons in the midbrain. The molecular mechanism responsible for degenerative process in the nigrostriatal dopaminergic system in PD remains unknown. Currently, there is a general agreement that mitochondrial dysfunction, α-synuclein aggregation, oxidative stress, neuroinflammation and impaired protein degradation are involved. Pharmacological studies have been focusing in using plant secondary metabolites and, among these, flavonoids have shown biological activity such neuroprotective, anti-inflammatory and antioxidant. In this sense, the objective of this work was to study the neuroprotective and immunomodulatory effects of a bioactive flavonoid using in vitro models of PD. We used different models of neuronal culture and MTT test and morphological analysis to make a screening of cytotoxic and/or neuroprotection by rutin and quercetin. After we used different models of primary culture of neuronal and glial cells and MTT test, Tripan Blue, Fluoro-Jade B, western blot or immunocytochemistry of β-III-Tubulin, tyrosine hydroxylase or GFAP in order to investigate the cytotoxic effect induced by aminochrome and/or neuroprotection induced by rutin. We also investigated immunoinflamatory response or immunomodulation by measuring cytokines (IL6, IL10, TNF-alpha) using ELISA. Our results demonstrated that rutin and quercetin (10-50μM) did not induce decrease in mitochondrial metabolism on SHSY-5Y cells line, or primary coculture of neuron/glial cells, however it increased the mitochondrial metabolism at concentrations 50 and 100μM on PC12 cells line. Moreover rutin (10μM) induce alterations on PC12 cells morphology. We also saw that aminocrhome (250-500μM) induced a decrease on cell viability at midbrain co-culture and microglia culture, glial cells culture, cortical neurons culture. In addition, the exposure to aminocrhome decreased expression of β-IIItubulin, tyrosine hydroxylase and GFAP on midbrain co-cultures and glial cells culture. Our results demonstrate that rutin protects neural cells from damage induced by aminocrhome, increases β-III-tubulin expression and protects neurite network. Furthermore, aminocrhome induced reduction of cytokines IL-6, IL-10 and TNF-alpha levels that were regulated to basal levels when the midbrain co-culture was treated with rutin. We concluded that rutin protects against PC12 cells cell against death induced by MPTP and neuronal and glial cells against death induced by aminocrhome. We can suggest that the reduction in cytokine levels are consequence of the loss of glial cells induced by aminocrhome and that the return to baseline levels may result from glioprotection and neuroprotection induced by rutin.

Submitted by PMBqBM null (pmbqbm@ufba.br) on 2017-05-10T15:05:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Rafael Short Ferreira_PMBqBM-UFBA.pdf: 1518060 bytes, checksum: cccc6bd7647121b1ae8a81b5c9c1943a (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-03T15:02:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Rafael Short Ferreira_PMBqBM-UFBA.pdf: 1518060 bytes, checksum: cccc6bd7647121b1ae8a81b5c9c1943a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-03T15:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Rafael Short Ferreira_PMBqBM-UFBA.pdf: 1518060 bytes, checksum: cccc6bd7647121b1ae8a81b5c9c1943a (MD5) / FAPESB / Rutina é um flavonoide glicosilado que apresenta diversas atividades biológicas incluindo anti-inflamatória, antitumoral e efeitos farmacológicos promissores no sistema nervoso central (SNC). A morte neuronal induzida por excitotoxicidade glutamatérgica está presente em diversas doenças e envolve diversas alterações celulares, incluindo danos mitocondriais. Para prevenir a excitotoxicidade, o glutamato é removido pelos astrócitos e convertido em L-glutamina, através da ação da glutamina sintetase (GS). O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos neuroprotetores da rutina com vistas na proteção mitocondrial e modulação de proteínas envolvidas na detoxificação do excedente de glutamato pelos astrócitos.. Estudos de efeitos neuroprotetores foram realizados em dois modelos de estudo do SNC: culturas organotípicas de cérebro de ratos Wistar neonatos (P8) expostas ao glutamato (60 mM) por 24 h, concomitantemente a tratamento com rutina (0.5 – 1μM) e culturas primárias mistas de células isoladas do cerebelo de ratos Wistar (P8) expostas ao glutamato (10 mM) por 24 h e iniciado 4 h antes do tratamento com rutina (0,5 μM). A viabilidade celular e os níveis de expressão de GS, de GLAST e de GLT1 em cultura organotípica cortical foram avaliados por captação de Iodeto de Propídio (IP) e Western blotting, respectivamente. A viabilidade neuronal em culturas primárias de cerebelo foi avaliada por coloração com Fluoro-Jade B. Além disso, a proteção mitocondrial pela rutina foi avaliada através do potencial de membrana e análise de produção ERO, usando safranina O e Amplex Red como sondas, respectivamente, em mitocôndrias isoladas a partir do encéfalo de ratos Wistar adultos expostas à rotenona. Na cultura organotípica, os nossos resultados mostraram que o glutamato (60 mM) induziu o aumento da intensidade de fluorescência relativa ao IP incorporado, que foram reduzidos em tratamentos com 0,5 μM e 1 μM de rutina. Ainda, foi demonstrado que rutina induziu aumento na expressão de GS e GLAST em tratamentos concomitantes com glutamato. Em culturas primárias de cerebelo, os nossos resultados mostraram que o glutamato (10 mM) induziu o aumento no número de células Fluoro-Jade B positivas, que não foi reduzido por pós-tratamento com rutina (0,5 μM). Em mitocôndrias isoladas observamos que a rutina (10 μM) reduziu a dissipação do potencial de membrana e reduziu a produção de ERO. Conclui-se que a rutina é um agente neuroprotetor com potencial para prevenir a excitotoxicidade induzida por glutamato e sugere-se que esse efeito envolve proteção mitocondrial e regulação do metabolismo do glutamato por astrócitos. No entanto, mais estudos são cruciais, a fim de elucidar o mecanismo molecular de neuroproteção induzida por rutina contra danos causados por glutamato e compreender o papel das células gliais, especialmente astrócitos na bioatividade de rutina.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-26T15:08:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Rafael Short Ferreira.pdf: 1518060 bytes, checksum: cccc6bd7647121b1ae8a81b5c9c1943a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-26T15:08:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Rafael Short Ferreira.pdf: 1518060 bytes, checksum: cccc6bd7647121b1ae8a81b5c9c1943a (MD5) / Rutina é um flavonoide glicosilado que apresenta diversas atividades biológicas incluindo anti-inflamatória, antitumoral e efeitos farmacológicos promissores no sistema nervoso central (SNC). A morte neuronal induzida por excitotoxicidade glutamatérgica está presente em diversas doenças e envolve diversas alterações celulares, incluindo danos mitocondriais. Para prevenir a excitotoxicidade, o glutamato é removido pelos astrócitos e convertido em L-glutamina, através da ação da glutamina sintetase (GS). O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos neuroprotetores da rutina com vistas na proteção mitocondrial e modulação de proteínas envolvidas na detoxificação do excedente de glutamato pelos astrócitos.. Estudos de efeitos neuroprotetores foram realizados em dois modelos de estudo do SNC: culturas organotípicas de cérebro de ratos Wistar neonatos (P8) expostas ao glutamato (60 mM) por 24 h, concomitantemente a tratamento com rutina (0.5 – 1 μM) e culturas primárias mistas de células isoladas do cerebelo de ratos Wistar (P8) expostas ao glutamato (10 mM) por 24 h e iniciado 4 h antes do tratamento com rutina (0,5 μM). A viabilidade celular e os níveis de expressão de GS, de GLAST e de GLT1 em cultura organotípica cortical foram avaliados por captação de Iodeto de Propídio (IP) e Western blotting, respectivamente. A viabilidade neuronal em culturas primárias de cerebelo foi avaliada por coloração com Fluoro-Jade B. Além disso, a proteção mitocondrial pela rutina foi avaliada através do potencial de membrana e análise de produção ERO, usando safranina O e Amplex Red como sondas, respectivamente, em mitocôndrias isoladas a partir do encéfalo de ratos Wistar adultos expostas à rotenona. Na cultura organotípica, os nossos resultados mostraram que o glutamato (60 mM) induziu o aumento da intensidade de fluorescência relativa ao IP incorporado, que foram reduzidos em tratamentos com 0,5 μM e 1 μM de rutina. Ainda, foi demonstrado que rutina induziu aumento na expressão de GS e GLAST em tratamentos concomitantes com glutamato. Em culturas primárias de cerebelo, os nossos resultados mostraram que o glutamato (10 mM) induziu o aumento no número de células Fluoro-Jade B positivas, que não foi reduzido por pós-tratamento com rutina (0,5 μM). Em mitocôndrias isoladas observamos que a rutina (10 μM) reduziu a dissipação do potencial de membrana e reduziu a produção de ERO. Conclui-se que a rutina é um agente neuroprotetor com potencial para prevenir a excitotoxicidade induzida por glutamato e sugere-se que esse efeito envolve proteção mitocondrial e regulação do metabolismo do glutamato por astrócitos. No entanto, mais estudos são cruciais, a fim de elucidar o mecanismo molecular de neuroproteção induzida por rutina contra danos causados por glutamato e compreender o papel das células gliais, especialmente astrócitos na bioatividade de rutina.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-26T17:02:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4349278 bytes, checksum: efa749a90ae42bc24ca07745b91abafa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T17:02:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4349278 bytes, checksum: efa749a90ae42bc24ca07745b91abafa (MD5) Previous issue date: 2001-02-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Vários estudos têm mostrado que os flavonóides e corantes naturais apresentam propriedades biológicas como antioxidante, antiinflamatória, hipolipidêmica, anticancerígena, antibacteriana e hipotensora. Além disso, o uso de corantes naturais em alimentos constitui atualmente uma tendência mundial, em função da maior demanda por produtos naturais. Objetivando avaliar o efeito hipolipidêmico dos flavonóides naringina e rutina, e dos corantes naturais cúrcuma e norbixina, isoladamente, e avaliar o efeito de colesterol, ácido cólico e diferentes concentrações de gordura suína na indução de hiperlipidemia em aves da linhagem Avian farms, foram realizados três ensaios. O primeiro e segundo ensaios foram realizados com pintos de corte, machos, de um dia de idade, normolipidêmicos, sendo que no primeiro ensaio os flavonóides e corantes naturais foram administradas via oral, misturados à ração, na dose de 20 mg por ave por dia. O segundo ensaio foi realizado para induzir a hiperlipidemia, com a administração, via oral, misturados à ração, das seguintes substâncias: 1% de colesterol e 0,1% de ácido cólico, 5% de gordura suína e 10% de gordura suína. No terceiro ensaio, os flavonóides e corantes naturais foram administrados via oral, misturados à ração, na dose de 20mg por ave por dia, sendo que este ensaio foi realizado com pintos machos, com hiperlipidemia induzida com 0,7% de colesterol, 0,1% de ácido cólico e 10% de gordura suína. Foram determinados os níveis plasmáticos de colesterol total, colesterol-HDL, colesterol-LDL, colesterol-VLDL e triacilgliceróis em todos os ensaios. No primeiro ensaio, os flavonóides e corantes naturais administrados em pintos de corte normais, não apresentaram efeito hipolipidêmico. No ensaio de indução de hiperlipidemia observou-se que os animais que receberam ração suplementada com 10% de gordura suína e os que receberam 0,7% de colesterol e 0,1% de ácido cólico apresentaram aumentos significativos nos níveis de todos os constituintes avaliados, constatando-se que estas substâncias, nas concentrações testadas, são efetivas na indução de hiperlipidemia. No terceiro ensaio, observou-se que todas as substâncias testadas (naringina, rutina, cúrcuma e norbixina) apresentaram reduções significativas nos níveis de colesterol total, colesterol- LDL, colesterol-VLDL e triacilgliceróis, não alterando os níveis de colesterol- HDL. Estes resultados demonstram que estas substâncias apresentam efeito hipolipidêmico quando administradas em aves com hiperlipidemia induzida pela dieta. / Several studies have been showed that flavonoids and natural colorants present biological properties as antioxidant, antiinflammatory, hypolipidemic, anticarcinogenic, antibactericidal, antihypertensive. Natural colorants are important in foods and constitutes a world tendency due the largest demand for natural products. In order to evaluate the hypolipidaemic effect of flavonoids naringin, rutin and the natural colorants curcumin and norbixin, isolately, besides the cholesterol, colic acid and different concentrations of pig fat effects in the hyperlipidaemia induction in chicks of the lineage Avian farms, three experiments were accomplished. The first and second experiments were accomplished in male chicks, day one old, normolipidaemic, beeing the first by using flavonoids and natural colorants were administered orally, mixed to the ration, in the dosis of 20 mg/chick/day. The second experiment was accomplished by inducing the hyperlipidaemia, with the orally administration, mixed in the ration, of the following substances: 1% of cholesterol and 0,1% of colic acid and pig fat 5% and 10% concentration. In the third experiment, the flavonoids and natural colorants were orally administered, mixed to the ration, in the dosis of 20 mg/chick/day, and this experiment was accomplished in male chicks, with hyperlipidaemia induced by using 0,7% of cholesterol, 0,1% of colic acid and 10% of pig fat. The serum levels of total cholesterol, cholesterol-HDL, cholesterol-LDL, cholesterol-VLDL and triacilglycerols were dosed. The results showed that in the first experiment, was not observed hypolipidaemic effect. In the second experiment could be observed that the animals which received ration with 10% of pig fat and the others which received 0,7% of cholesterol and 0,1% of colic acid presented significant increases in all parameters evaluated, showing that these substances, were effective in hyperlipidaemia induction. In the third experiment, the results showed that naringin, rutin, curcumin and norbixin presented significant reductions in the total cholesterol, cholesterol-LDL, cholesterol-VLDL and triacilglycerols levels without increasing of cholesterol-HDL level. These results demonstrate that these substances present effect hypolipidaemic when administered in chicks with hyperlipidaemia induced by diet.

Orientadora : Maria Suely Soares Leonart / Co-orientadores : Aguinaldo José do Nascimento e Tomoe Nakashima / Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde / Resumo: O eritrócito humano maduro, quando submetido à sobrecarga oxidativa por condições patológicas do eritrócito ou por agentes oxidantes pode apresentar depleção de glutationa reduzida (GSH), um dos responsáveis pelo sistema de defesa antioxidante do eritrócito; oxidação da molécula de hemoglobina; e agregação de complexos de ferro junto à membrana. Tais conseqüências podem ocasionar anormalidades na membrana eritrocitária e hemólise. Este trabalho tem por objetivo, estudar a ação antioxidante dos flavonóides quercetina e rutina, e de extrato hidroalcoólico de Vitis virtifera (EHV), em eritrócitos humanos normais, submetidos à sobrecarga oxidativa, in vitro, induzida por agentes oxidantes como terc-butilhidroperóxido (TBH) ou cloridrato de fenil-hidrazina (CF). Coletou-se sangue venoso de 12 indivíduos com idades entre 18 e 40 anos e considerados saudáveis, em EDTAK3. Lavou-se os eritrócitos em tampão fosfato 28 mM, NaCl 123 mM, pH 7,4 três vezes por centrifugação a 1220 x g, ressuspendendo-os até volume globular de cerca de 40 %. Submeteu-se os eritrócitos, pré incubados ou não com quercetina 100 (xM, à ação oxidante de CF 0,5 mM durante 15 minutos e; pré-incubados ou não com quercetina, rutina ou extrato hidroalcoólico de Vitis virtifera, à ação oxidante de TBH (0,5 - 5 mM), durante 0 a 30 minutos. Realizou-se a determinação da concentração de GSH [BEUTLER, Red cell metabolism, 1984], da formação de metahemoglobina (MetHb) [EVELYN; MALLOY, JJBioLChem., 126: 655, 1938], modificado por BEUTLER (1995) e realizou-se a contagem de corpos de Heinz (CH) segundo técnica preconizada por BEUTLER et ai [J.Lab.&Clin.Méd., 45: 40, 1955], modificado por CLARO (2002). Observou-se uma diminuição da concentração de GSH (4,0-0,1 nmoles/ g Hb) proporcional ao aumento da concentração de TBH (0,5 - 1,0 mM). A formação de MetHb aumentou (8 - 35 %) assim como a de CH (2 -16 %), em função da concentração de TBH (0,5 - 5 mM). A incubação com quercetina 100 pM (10 - 30 minutos) preveniu parcialmente a formação de GSH (0,25 -1,3 junoles/g Hb) induzida por TBH 1 mM. Quercetina (2 - 20 JIM) preveniu parcialmente a formação de CH (7,5 - 6,7 %) induzida por TBH 3 mM. Em amostras oxidadas por CF 0,5 mM, a quercetina 10 - 120 pM preveniu parcialmente a formação de MetHb (4 - 3,6 %). A rutina 100 (xM preveniu parcialmente a depleção de GSH (0,4 pmoles/g Hb) por TBH (0 pmoles/g Hb). A rutina (40 - 140 jiM) preveniu parcialmente a formação de CH (7,6 - 4,9 %) induzida por TBH 3 mM (9,0 %). O EHV (0,1 mg/ml) preveniu parcialmente a depleção de GSH (4,4 ±0,1 jimoles/g Hb) induzida por TBH 0,5 mM enquanto que EHV (0,5 - 1,0 mg/ml) preveniu quase que na totalidade a depleção de GSH (7,4 ± 0,4 e 7,3 ±0,1 (imoles/ g Hb, respectivamente) induzida por TBH 0,5 mM. O EHV (1,0 - 5,0 mg/ml) preveniu parcialmente a formação de CH (6,4 - 4,0 %) induzida por TBH 3 mM. A associação entre quercetina 100 pM e mesilato de desferrioxamina 4 mM, inibiu parcialmente a formação de MetHb (30 ± 1,2 %) induzida por TBH 5 mM. Os resultados sugerem que, nas concentrações testadas, a quercetina é parcialmente eficaz contra a sobrecarga oxidativa promovida por CF. O estresse oxidativo promovido por TBH foi parcialmente prevenido na presença de quercetina, rutina ou EHV. / Abstract: The mature human erythocytes, submitted to oxidative stress under pathological conditions or by oxidizer agents can present: depletion of reduced glutatione (GSH), responsible for the antioxidant defense system of the erythocytes, oxidation of the hemoglobin molecule, or aggregation of complexes of iron close to the membrane. These can cause abnormalities in the membrane and hemolysis. The aim of this work was to study the antioxidative action of the flavonoids quercetin and rutin, and of hydroalchoolic extract of Vitis vinifera (HEV), in human erythocytes submitted to the oxidative stress, induced by oxidizer agents fert-butylhydroperoxide (TBH) or phenylhydrazine hydrochloride (PH), in vitro. Venous blood was collected in EDTAK3 from 12 healthy individuals with ages between 18 and 40 years. The erythocytes was washed three times under centrifugation at 1220 x g, in 28 mM phosphate buffer, pH 7.4, and 123 mM NaCL, and ressuspended at a final globular volume of 40%. The erythocytes was then preincubated with 100 jiM quercetine and then submitted to the oxidizer action of 0.5 mM PH for 15 min and, preincubated with quercetin, rutin and hydroalchoolic extract of Vitis vinifera, to the oxidizer action of TBH (0.5 - 5 mM), for up to 30 min. The concentration of GSH was determinate [BEUTLER, Red cell metabolism, 1984], the methemoglobin (MetHb) was monitored [EVELYN; MALLOY, J.BioI.Chem., 126: 655, 1938], modified by BEUTLER et at. (1995) and tiie Heinz bodies (HB) was evaluated acording to BEUTLER et al. [J.Lab.&CIin.Med,, 45: 40, 1955], modified by CLARO (2002). A concentration decrease of GSH was observed (4.0 - 0.1 jimoles /g Hb) as a function of the increase of the concentration of TBH (0.5 - 1.0 mM). The formation of MetHb (8 - 35 %) and HB (2 -16 %), increased as a function of the TBH concentration (0.5 - 5 mM). The incubation with 100 (iM quercetin (10 - 30 min) partially prevented the GSH formation (0.25 - 1.3 jimoles/g Hb) induced by 1 mM TBH. Quercetin (2 - 20 pM) partially prevented HB formation (7.5 - 6.7 %) induced by 3 mM TBH. Erythrocyte samples oxidized by 0.5 mM PH and treated with 10 - 120 jiM quercetin had the formation of MetHb (4 - 3.6%) partially prevented. The 100 pM rutin partially prevented the depletion of GSH (0.4 junoles/g Hb) in the absence of TBH. The rutin (40 - 140 pM) partially prevented the formation of HB (7.6 - 4.9 %) induced by 3 mM TBH (9.0 %). HEV (0.1 mg/ml) partially prevented the depletion of GSH (4.4 ± 0.1 jimoles/g Hb) induced by 0.5 mM TBH while HEV (0.5 - 1.0 mg/ml) almost prevented the totally depletion of GSH (7.4 ± 0.4 and 7.3 ± 0 . 1 junoles/g Hb, respectively) induced by 0.5 mM TBH. HEV (1.0 - 5.0 mg/ml) partially prevented the formation of HB (6.4 - 4.0 %) induced by 3 mM TBH. The association of 100 JIM quercetin and 4 mM deferrioxamine mesilate, partially inhibited the formation of MetHb (30 ± 1.2 %) induced by 5 mM TBH. The results suggest that quercetin, at the used concentrations was partially effective against the oxidative stress promoted by PH. The erythrocyte oxidative stress promoted by TBH was partially prevented in the presence of quercetin, rutin and HEV.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-27T11:34:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1855386 bytes, checksum: 78dcb1f5fe444c68d596a83fdf8d900a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T11:34:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1855386 bytes, checksum: 78dcb1f5fe444c68d596a83fdf8d900a (MD5) Previous issue date: 2001-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dois ensaios biológicos foram realizados com o objetivo de avaliar os efeitos hipolipidêmicos e toxicológicos de complexos do flavonóide rutina com organoestânicos [SnCl2Ph2], [SnClPh3], [SnCl3Ph] e [SnCl4]. Inicialmente promoveu- se a síntese dos complexos obtendo-se os produtos: [SnCl2Ph2(Rut)].H2O, [SnClPh3(Rut)].6H2O, [SnClPh(Rut)].H2O, [SnCl(Rut)].H2O, (SN1, SN2, SN3, SN4, respectivamente). Estes produtos foram caracterizados a partir de análise elementar (CHN), ponto de fusão, espectroscopia no infravermelho, ressonância magnética nuclear de 119 Sn. Em posse dos resultados, realizou-se o primeiro ensaio biológico, com complexos sintetizados. Para fins de comparação e avaliação do efeito hipolipidêmico destas substâncias utilizou-se no mesmo ensaio, o flavonóide rutina isoladamente e a atorvastatina cálcica (presente no medicamento liptor). Estas substancias foram testadas no metabolismo de coelhos da raça Nova Zelândia Branco, com hiperlipidemia induzida por colesterol (0,5%) + ácido cólico (0,1%) administrados na ração dos animais, que receberam as substâncias em estudo encapsuladas, na dose de 5mg/dia. As dosagens foram efetuadas no 1°, 16° e 31° dias de realização do experimento. Todos os complexos foram eficazes na redução do colesterol total, sendo o mais eficiente o complexo do flavonóide rutina com o [SnCl4] ([SnCl(Rut)].H2O), apresentando um resultado bem similar ao expressado pela atorvastatina cálcica. Dentre os compostos o que promoveu maior elevação da lipoproteína colesterol-HDL foi o complexo do flavonóide rutina com o composto [SnClPh3] ([SnClPh3(Rut)].6H2O) aos 15 dias, e o principio ativo atorvastatina cálcica aos 30 dias. A redução da lipoproteína colesterol-LDL foi mais pronunciada também pelo complexo do flavonóide rutina com o composto [SnClPh3] ([SnClPh3(Rut)].6H2O). Os complexos não apresentaram taxas satisfatórias de redução da concentração de triacilgliceróis. Os complexos do flavonóide rutina com os organoestânicos [SnClPh3], ([SnClPh3(Rut)].6H2O) e [SnCl4] ([SnCl(Rut)].H2O) que apresentaram os melhores resultados no primeiro experimento, foram utilizados na dose de 100 mg/dia, no segundo experimento. Este ensaio biológico foi realizado com a finalidade de obter- se a toxicologia aguda destas substâncias. Efetuaram-se dosagens do colesterol total, triacilgliceróis, colesterol-HDL, glicose, proteínas totais, albumina, bilirrubina total, uréia, ácido úrico, fósforo, cálcio, gama glutamil transferase (Gama-GT) e as transaminase glutâmico-piruvica (TGP) e transaminase glutâmico oxaloacética (TGO) no 1°, 16° e 31° dias de realização do experimento. Nesta dosagem estas substâncias não apresentaram efeitos hiperlipidêmicos. As concentrações lipídica sanguínea apresentaram uma elevação considerável. Foram observadas elevações nas concentrações das transaminases glutâmico-piruvica (TGP) e glutâmico oxaloacética (TGO) bem como na concentração de ácido úrico aos 30 dias. Para os outros constituintes não se observou efeito tóxico destas substâncias. / Two biological assay were carried out to access the hipolipidemic and toxicologic effects of the complexes made by the rutin flavonoid add to organotin [SnCl2Ph2], [SnClPh3], [SnCl3Ph] and [SnCl4]. The reaticon of these two substance put together make the synthesis of the complexes: [SnCl2Ph2(Rut)].H2O, [SnClPh3(Rut)].6H2O, [SnClPh(Rut)].H2O, [SnCl(Rut)].H2O, (SN1, SN2, SN3, SN4, respectively). These compounds were characterized by elementary analysis (CHN), meelting point, infra-red spectroscopy, nuclear magnetic resonance of 119 Sn. One biological assay was carried out with synthecized complexes to access and compare the hipolipidemic effects of these substances. Two pararel treatements, one with flavonoid rutin and the other with atorvastatin (present in the liptor medicine) were tested in metabolism of rabbits of the White New Zeland race. These substances were tested in metabolism of rabbits with induced hiperlipidem for cholesterol (0.5%) + colic acid (0.1%) which fed the animals They received encapsulated substances in study in the dose of 5mg/day. The blood samples were take on the 1°, 16° and 31° days along the experiment. All the complexes had shown efficiency in reducing the total cholesterol, and the most efficient complex result to be the flavonoid rutina plus [SnCl4] ([SnCl(Rut)].H2O) presented a quite similar to that expressed by the calcic atorvastatina compound. Among these complexes one that caused the high level of the lipoprotein cholesterol-HDL were ([SnClPh3(Rut)].6H2O)] after the 15o day, and the atorvastatina after 30oday. The reduction of the lipoprotein cholesterol-LDL more intensive than that caused by ([SnClPh3(Rut)].6H2O) complex. The complexes did not present satisfactory rates of reduction in triglyceride concentration. The complexes ([SnClPh3(Rut)].6H2O) and ([SnCl(Rut)].H2O), which presented the best results in the first experiment were used in the dose 100 of mg/day in second experiment. This biological assay was carried out to reach a acute toxicology of these substances. Rates of total cholesterol, triglyceride, cholesterol-HDL, glucose, proteins, albumen, total bilirubin, urea, acid úrico, phosphorus, calcium, glutamil gamma transferase (Gama-GT), alanine aminotransferase (GPT) and aspartate aminotransferase (GOT) were analized on 1°, 16° and 31° days of the experimental period. In this dosagem these substances did not present hiperlipidemic effect. The lipidic concentrations in the blood presented a considerable rise. There were high concentrations of alanine aminotransferase (GPT) and aspartate aminotransferase (GOT) after 15o and 30o days of treatement but concentration of uric acid was high only after 30o days. No toxicologic effects was observed on the others constituents.

A rutina é um flavonol glicosídico pertencente a uma importante classe de flavonóides, sendo extensamente encontrados na natureza. Ela apresenta uma importância terapêutica em virtude de determinar a normalização da resistência e permeabilidade das paredes dos vasos capilares, além de inibir o processo de formação de radicais livres em vários estágios. O fruto do faveiro (Dimorphandra mollis Benth., uma espécie nativa brasileira) é uma das fontes para a extração em escala industrial da rutina. A sua aplicação em formas farmacêuticas para o uso externo é muito limitada devido a sua baixa solubilidade em água. Com esta finalidade, foi realizada a síntese química através da introdução de grupos carboxilatos nas hidroxilas dos grupamentos glicosídicos da molécula de rutina, utilizando-se piridina e diferentes anidridos, sendo eles: o succínico, o ftálico e o 2-fenil-glutárico à temperatura de 70 ºC por 24 horas. Estes três derivados sintetizados foram purificados em papel cromatográfico e caracterizados em 2 sistemas de proporções diferentes de eluentes. Além disso, foi feito um estudo comparativo entre as suas propriedades físico-químicas e as da rutina pela determinação da solubilidade e do coeficiente de extinção molar. Desta forma, avaliou-se a atividade antioxidante destes derivados com relação a rutina utilizando 2 ensaios diferentes, como a determinação de malondialdeído pela autoxidação do tecido cerebral e produção de radicais peroxilas pela termólise de um azo-iniciador, com os seus respectivos padrões de referência, o &#945;-tocoferol e o Trolox. O resultado do ensaio de solubilidade indicou que a rutina succinil, a ftaloil e a fenil-glutaroil foram cerca de 800, 85 e 5,5 vezes mais solúvel em água que a rutina. Já em relação aos outros ensaios verificou-se que os derivados sintetizados continuaram apresentando atividade antioxidante e absorvendo luz em seu pico máximo próximo de 392nm, o que mostrou pouca modificação química no núcleo flavonóide. No ensaio de anti-radicais, a rutina ftaloil foi entre os derivados hidrossolúveis a que apresentou um melhor resultado devido a sinergia do anel aromático com o núcleo flavonóide em seqüestrar radicais livres. / Rutin is a glycoside flavonol which belongs to an important class of flavonoids, being extensively found in the nature. It presents a therapeutical importance due to improve the resistance and permeability of capillaries vessels, and is able to suppress free radical processes in some stages. The fruit of the faveiro (Dimorphandra mollis Benth., a Brazilian native species) is one of the sources for the extration in industrial scale of the rutin. Its application in pharmaceutical forms for external use very is limited because it has low solubility in water. With this purpose, it was done the chemical synthesis introducing carboxylate groups on sugar moiety of rutin using pyridin and different anhydrides, such as: succinic, phtalic and the 2-phenyl glutaric at 70 ºC for 24 hours. These three synthesized derivatives had been purificated in chromatographic paper and characterized in 2 systems of different ratios of eluents. Moreover, a comparative study among their physico-chemical properties and of the rutin for the determination of the solubility and the molar extinction coefficient. With this in mind, it was evaluated antioxidant activity of these derivatives with regard to rutin using 2 different assays, as the determination of malondialdehyde by the brain homogenate autoxidation and generation of peroxyl radicals by the thermolysis of a azo compound, with its respective reference standards: &#945;-tocopherol and Trolox. The result of the solubility assay indicated that the succinyl, the phtaloyl and the phenyl glutaroyl rutin had been about 800, 85 and 5,5 times, respective, more soluble in water that the rutin. In respect to relationship to the other assays it was verified that the synthesized derivatives had continued presenting antioxidant activity and absorbing light in its maximum peak next to 392nm, showing that chemical modifications in the flavonoid nucleus had not been made significant. In the assay of anti-radicals, the phtaloyl rutin was the water-soluble derivative what it presented one better result, due one the presence of the aromatic ring that can enhanced the radical-scavenging efficiencies together to the flavonoid nucleus.