O câncer é um problema de saúde pública mundial, apresentando acréscimo na sua incidência a cada ano. O seu processo de evolução ainda não foi completamente desvendado, dificultando a elaboração de terapias adequadas. Na busca por um melhor prognóstico, pesquisas recentes têm discutido o papel das citocinas inflamatórias, do nicho perivascular e das células-tronco nos mecanismos de desenvolvimento e manutenção dos tumores malignos. Os tumores de glândula salivar representam uma pequena porcentagem das patologias malignas da região de cabeça e pescoço, podendo ocorrer em adultos e em crianças. O diagnóstico dificilmente é precoce e a taxa de sobrevida é extremamente baixa comparada aos demais tumores da região. Assim, este estudo teve como objetivo estudar as células provenientes dos tumores de glândula salivar do tipo adenoide cístico (CAC) e adenocarcinoma NOS (AdNOS) quanto ao seu perfil imunofenotípico, quanto à existência ou não de células-tronco tumorais nessa população, bem como investigar possíveis modificações na ativação de STAT3, Akt e ERK (moléculas envolvidas em vias de sinalização de manutenção do tumor), quando em contato com fatores secretados por células endoteliais. Foram coletados 5 CACs e 4 AdNOS, no Hospital da Universidade de Michigan (Ann Arbor, MI, EUA), durante 2010 e 2012. As células foram isoladas e caracterizadas em citometria de fluxo em P0 e P7, demonstrando um perfil de células CD44+ALDH+Lin- variando de 0,33 a 3,19% e 0,36 a 2,00%, respectivamente, entre 5 linhagens avaliadas. Na avaliação por western blotting, a e-caderina, o Snail e a actina de músculo liso foram ausentes em todos os tipos tumorais, enquanto que a citoqueratina 20 (Ck20) foi presente apenas nos AdNOS. Comparando os tumores com suas metástases, a presença de Ck20, p63 e β-catenina foi semelhante, enquanto que citoqueratina 7, a vimentina e o Bmi-1 foram maiores nas metástases. Tanto os AdNOS quanto CACs apresentaram receptores para IL-6, IL-8 e EGF. Foi observado que mediadores solúveis liberados pelas células endoteliais foram capazes de fosforilar STAT3, Akt e ERK em todas as células salivares estudadas, no entanto, a proteína recombinante humana IL-6, isoladamente, não foi capaz de ativar Akt. Orosferas foram geradas em todos os tipos tumorais, demonstrando o potencial de auto-renovação celular. Um maior número de esferas foi observado nas células metastáticas em relação às primárias. Células CD44+ALDH+, comparadas com CD44-ALDH-, geraram mais esferas, quando plaqueadas em alta densidade (5.000 células). No entanto, o inverso foi encontrado, quando uma única célula foi utilizada para o ensaio (p>0,05). Devido à dificuldade de obtenção e manipulação de células de tumores de glândula salivar, ainda há muito que se investigar mecanisticamente. Considerando a fosforilação de STAT3 na presença de IL-6, semelhante ao verificado em outros tumores, o uso de anticorpos contra IL-6, talvez sejam uma opção no futuro. / Cancer is a public health problem worldwide, with an increase in incidence every year. The process of its evolution is still not completely understood, hindering the development of appropriate therapies. In the search for a better prognosis, recent reports have discussed the role of inflammatory cytokines, perivascular niche and stem cells in the mechanisms of development and maintenance of malignant tumors. The salivary gland tumors represent a small percentage of malignancies of the head and neck and can occur in both adults and children. Early diagnosis is difficult and the survival rate is extremely low compared to other tumors in the same region. Thus, this study aimed to study cells from the adenoid cystic carcinoma (ACC) and adenocarcinoma NOS (AdNOS) tumors of salivary gland regarding its immunophenotypic profile and the existence or absence of tumor stem cells in this population, as well as investigate possible changes in the activation of STAT3, Akt and ERK (molecules involved in signaling pathways of tumor maintenance), when exposed to factors secreted by endothelial cells. ACCs (n=5) and AdNOS (n=4) were collected at the Hospital of the University of Michigan (Ann Arbor, MI, USA), during 2010 to 2012. Cells were isolated and characterized by flow cytometry at P0 and P7, showing a profile of ALDH+CD44+Lin- ranging from 0.33% to 3.19% and 0.36% and 2.00%, respectively, between 5 cell lines evaluated. In the protein profile, e-cadherin, Snail and SMA were absent in all tumor types. Ck20 was present only in AdNOS. Comparing primary tumors and their metastases, the presence of Ck20, and p63 β-catenin was similar, while Ck7, vimentin and Bmi-1 were higher in metastases. Both AdNOS as ACCs had receptors for IL-6, IL-8 and EGF. It was observed that soluble mediators released by endothelial cells were able to activate STAT3, Akt and ERK phosphorylation in all cells studied. However, recombinant human IL-6 alone was not able to activate Akt. Orospheres were generated in all tumor types, indicating the potential for cellular self-renewal. Highest number of spheres was observed in metastatic cells compared to primary. ALDH+CD44+ cells compared to ALDH-CD44- generated more spheres when plated in high density (5,000 cells), however, the opposite was found when one single cell seed was evaluated (p> 0.05). There is doubt if these cell markers would be consider for a stem cell model in salivary tumors. Due to the difficulty of obtaining and manipulating salivary gland tumor cells, there is still much to investigate mechanistically. As the phosphorylation of STAT3, in the presence of IL-6, was similar to that observed in other tumors, the use of antibodies against IL-6, may be an option in the future.

As neoplasias de glândula salivar (NGS) são tumores raros que despertam interesse por sua diversidade histopatológica e comportamento clínico. A compreensão da patobiologia assim como, dos mecanismos envolvidos no comportamento invasivo destas lesões é necessária para melhor entender a biologia das NGS e posteriormente delinear novas estratégias terapêuticas. A presente tese foi dividida em dois artigos. O objetivo do primeiro estudo foi descrever os dados demográficos, clinicopatológicos e de prognóstico das NGS diagnosticados em um centro de atenção terciário. Para tal, foi realizada uma análise retrospectiva utilizando os dados de arquivos e de prontuários. Foram identificados 109 casos de NGS cuja média de idade dos pacientes foi de 46.47 anos e a relação homens:mulheres foi de 0.94:1. As glândulas salivares maiores foram mais acometidas (75.2%) e os tumores benignos os mais prevalentes (75.2%) sendo o adenoma pleomórfico o tumor benigno mais comum e o carcinoma adenóide cístico o principal maligno. O objetivo do segundo estudo foi analizar o padrão de expressão da via de sinalização do HGF/c-Me/PI3K em NGS e correlacionar com o perfi proliferativo e desfechos clínicos das lesões. Foram construídos microarranjos de tecido (TMAs) de 93 casos de NGs e as lâminas foram submetidas a análise imunoistoquímica para HGF, p-Met, p-Akt e Ki67. Foi observada maior expressão de HGF nos tumores benignos (p=0.04), enquanto que as protínas p-Met (p=0.03), p-Akt (p=0.00) e Ki-67 (p=0.00) foram mais expressas nos tumores malignos. Nas neoplasias malignas houve maior ativação da via HGF observada pela maior expressão do seu receptor fosforilado (p-Met) bem como, maior ativação da via do PI3k pela fosforilação de Akt (p-Akt) resultando em um maior perfil proliferativo. Pode-se concluir que a via de sinalização do HGF/c-Met/PI3k parece estar ativa nas NGS regulando a proliferação especialmente nas neoplasias malignas. / Salivary gland tumors (SGT) are rare yet interesting neoplasms due to their histopatological diversity and clinical behavior. Understanding the pathobiology as well as the mechanisms involved in the invasive behavior of these lesions is needed to better comprehend the biology of SGT and further delineate new therapeutic strategies. This thesis was divided in two papers. The aim of the first study was to describe the demographic, clincopathological and prognostic data of SGT diagnosed in a tertiary care center. For this purpose, a retrospective analysis using data from the archives and records was performed. One hundred and nine cases of SGT were identified. The patients mean age was 46.47 years and the male:female ratio was 0.91:1. The major salivary glands were the most affected (75.2%) and the benign SGT were more prevalent (78%) being pleomorphic adenoma the most common benign tumor and adenoid cystic carcinoma the most common malignant tumor. The objective of the second study was to analyze the expression pattern of HGF/c-Met/PI3K signaling pathway in SGT and correlate the findings with the proliferative profile and clinical outcomes of cases. Tissue microarrays (TMAs) of 93 cases of SGT were constructed; the slides were submitted to immunohistochemical analysis for HGF, p-Met, p-Akt and Ki-67. Increased expression of HGF was observed in benign tumors (p = 0.04), while p-Met (P = 0.03), p-Akt (p = 0:00) and Ki-67 (p = 0:00) were most expressed in malignant tumors. In salivary glands carcinomas there was a higher activation of the HGF pathway observed by the higher expression of its phosporylated receptor (p-Met) as well as the higher activation of PI3k pathway through Akt (p-Akt) phosphorilation, resulting in a higher proliferative profile. It can be concluded that HGF/c-Met/PI3K signaling pathway appears to be active in SGT regulating the proliferation specially in malignant tumors.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T19:59:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 201088.pdf: 1396279 bytes, checksum: e949fffc6d2c921db627214224f60c61 (MD5) / Em crianças infectadas pelo HIV têm sido encontradas diversas manifestações estomatológicas. Dentre elas se destacam redução do fluxo salivar, alta prevalência e incidência da doença cárie e a doença das glândulas salivares associada ao HIV (DGS/HIV). Este estudo analítico transversal e de caso controle de base institucional teve como objetivo avaliar as alterações no pH e na taxa de fluxo salivar e sua relação com a DGS/HIV e o índice e atividade da doença cárie em crianças infectadas pelo HIV. A amostra foi composta por um grupo de estudo, constituído por 142 crianças infectadas pelo HIV, da faixa etária de 3 a 10 anos de idade, atendidas no Setor de Infectologia do Hospital Infantil Joana de Gusmão, Florianópolis, SC, Brasil, e por um grupo controle de 154 crianças sem história de infecção pelo HIV, atendidas no Curso de Odontologia da UFSC. A taxa de fluxo salivar em repouso (TFSR) foi mais baixa no grupo de estudo, com uma média de 0,39mL/min ± 0,32, variação de 0,0 a 1,4mL/min, do que no grupo controle, cuja média foi de 0,55mL/min ± 0,30, variação de 0,01 a 1,6mL/min (p< 0,0001). O pH, da saliva em repouso, não mostrou diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos e nem quanto à presença ou ausência de DGS/HIV. A população do grupo de estudo apresentou alta prevalência da doença cárie, com índice ceo-s e CPO-S médio de 19,98 e de 5,53, respectivamente, com uma média de 10 superfícies com lesões de cárie por indivíduo. No grupo controle, o ceo-s médio foi de 13,48 e o CPO-S de 1,76, com uma média de 4,4 superfícies com lesões de cárie por criança (p<0,0001). A doença cárie se manifestou em um maior número de indivíduos e com maior atividade e severidade de ataque nas crianças infectadas pelo HIV. A presença de DGS/HIV não mostrou diferença estatística com relação à prevalência da doença cárie e à TFSR. A alta prevalência de cárie mostrou associação, em ambos os grupos, com baixo fluxo salivar, hábitos alimentares irregulares e ausência de higiene bucal. O uso de terapia anti-retroviral e outros medicamentos, administrados por via oral em formulações contendo sacarose, representaram um fator adicional para o aumento da prevalência da doença cárie. Os exames de ultra-sonografia, realizados em 58 crianças infectadas pelo HIV, evidenciaram diferentes graus de envolvimento das glândulas parótidas. A DGS/HIV foi confirmada pelo exame de ultra-sonografia em 67,64% das crianças com história prévia e em 50% daquelas sem história, sugerindo que esta doença pode ter uma manifestação subclínica, o que poderia explicar a redução na taxa de fluxo salivar de indivíduos infectados pelo HIV. Os resultados deste estudo evidenciaram que o alto índice de cárie, observado nas crianças infectadas pelo HIV, apresentou relação com a falta de uma adequada atenção odontológica, com ênfase em medidas preventivas. O cirurgião dentista deve fazer parte da equipe que trata pacientes infectados pelo HIV, auxiliando no processo de diagnóstico precoce e tratamento das alterações do sistema estomatognático decorrentes desta infecção.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:45Z : No. of bitstreams: 1 000856112.pdf: 4422258 bytes, checksum: 675eb8d60dbbf40c256acc5ba1788f42 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os carrapatos Rhipicephalus sanguineus têm atraído, nos últimos anos, a atenção de pesquisadores, bem como de órgãos gerenciadores da saúde pública, por estarem se tornando grandes pragas urbanas, transmissoras de doenças para cães e humanos. Por esta razão, a busca por formulações com ação acaricida tem sido preocupação constante das indústrias farmacêuticas veterinárias. No entanto, a grande maioria dos produtos atualmente comercializados apresenta alta toxicidade aos hospedeiros dos ectoparasitas e ao meio ambiente, induzindo, inclusive, resistência nos carrapatos. Métodos alternativos de controle, como o uso de extratos de plantas, por exemplo, têm se tornado cada vez mais interessantes, já que apresentam menores custos e baixa toxicidade. Neste sentido, destaca-se a espécie Azadirachta indica (neem), cujos extratos de folhas e sementes apresentam reconhecido potencial repelente, inseticida e acaricida. Desta forma, este estudo teve como objetivo avaliar as alterações morfológicas observadas no ovário e nas glândulas salivares de fêmeas semiingurgitadas de carrapatos R. sanguineus, submetidas à aplicação tópica do óleo extraído das sementes de neem, nas concentrações de 20, 40 e 60%, utilizando-se etanol aquoso a 10% como solvente. Os órgãos foram coletados, fixados, e analisados por meio de técnicas de microscopia de luz convencional, microscopia confocal de varredura a laser e microscopia eletrônica de transmissão. De forma geral, a metodologia proposta neste trabalho permitiu a simulação de um tratamento tópico dos animais infestados, tornando os resultados obtidos mais próximos de uma aplicação prática em campo. Em ambos os órgãos analisados, o óleo de neem demonstrou efeitos claramente dose-dependentes. Os ovócitos e os ácinos glandulares de carrapatos R. sanguineus exibiram alterações morfológicas semelhantes, tais como sinais evidentes de desorganização citoplasmática,... / Rhipicephalus sanguineus ticks have attracted, in recent years, the attention of researchers as well as public health managers, since they have become major urban pests, transmitters of diseases to humans and dogs. For this reason, the search for formulations with acaricide action has been constant concern of veterinary pharmaceutical industries. However, the vast majority of products currently commercialized exhibits high toxicity to the hosts of these ectoparasites and to the environment, even inducing resistance in ticks. Alternative control methods such as the use of plant extracts, for example, have become increasingly interesting, since they have reduced costs and low toxicity. In this sense, Azadirachta indica (neem) species stands out, as its leaf and seed extracts have recognized repellent, insecticide and acaricide potential. Thus, this study aimed to evaluate the morphological alterations resulting from the action of neem in the ovary and salivary glands of semi-engorged R. sanguineus female ticks, subjected to the topical application of the oil extracted from neem seeds, at concentrations of 20, 40 and 60%, using 10% aqueous ethanol as solvent. The organs were collected and fixed, and analyzed by means of techniques in conventional light microscopy, confocal laser scanning microscopy and transmission electron microscopy. In general, the methodology proposed in this work allowed the simulation of a topical treatment of the infested animals, making the results closer to a practical application in field. In both analyzed organs, neem oil clearly demonstrated a dose-dependent effect. Oocytes and glandular acini of R. sanguineus ticks exhibited similar morphological changes, such as evident signs of cytoplasmic disorganization, cellular vacuolation, nuclear or nucleolar irregularities, dilation of mitochondrial cristae, as well as dilation in rough endoplasmic reticulum lumen. These facts show that, regardless of the organ, neem ...

Made available in DSpace on 2015-05-22T12:38:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000469173-Texto+Completo-0.pdf: 1264302 bytes, checksum: e68c7c79947a5c2f21eab8eb8bfce80d (MD5) Previous issue date: 2015 / Head and neck radiotherapy often involves major salivary glands and causes morphologic and functional alterations, resulting in hyposalivation and xerostomia. Literature was reviewed in the first manuscript, addressing the structural changes observed in the salivary glands resulting from oxidative stress caused by radiotherapy and pathogenic mechanisms involved. Preventive and regenerative therapies for altered acinar morphology and glandular function were also discussed. Among the acute and late microscopic alterations observed in glandular tissue, there are particularly changes indicative of cell death, hypovascularization, formation of fibrous tissue and edema. Considering the evidences before mentioned, the aim of this study was to evaluate the effect of low level laser therapy (LLLT) on radiotherapy-induced morphological changes and immunodetection of caspase-3 protein in parotids of mice.Forty-one Swiss mice were divided into a control group and three experimental groups: radiotherapy, 2 J laser and 4 J laser. The experimental groups were exposed to ionizing radiation in a single session of 10 Gy. In the laser groups, a GaAlAs laser (830 nm, 100 mW, 0. 028 cm2, 3. 57 W/cm2) was used on the region corresponding to the parotid glands, with 2 J energy (20 sec, 71 J/cm2) or 4 J (40 sec, 135 J/cm2) per point. The animals were euthanized 48 hours or seven days after radiotherapy and parotid glands were dissected for morphological analysis and immunodetection of caspase-3.There was no significant difference between groups in the immunodetection of caspase-3, but the laser groups had a lower percentage compared to the radiotherapy group. Furthermore, the results indicated that LLLT promoted the preservation of acinar structure, reduced the occurrence of cytoplasmic vacuolation and stimulated parotid gland vascularization. Of the two LLLT protocols, the one using 4 J of energy showed better results. Given the methodological limitations of this study, further researches should be conducted in irradiated animals, using different LLLT protocols and observing glandular response, not only in the short term but also long term, when the occurrence of late changes in the salivary glands can be analyzed. / A radioterapia direcionada à região de cabeça e pescoço frequentemente envolve as glândulas salivares maiores, as quais sofrem alterações morfológicas e funcionais, resultando em hipossalivação e xerostomia. No primeiro artigo desta dissertação foi realizada uma revisão da literatura com o objetivo de abordar as alterações estruturais observadas nas glândulas salivares e os possíveis mecanismos patogênicos pelos quais o estresse oxidativo, decorrente da radioterapia, causa disfunções salivares. Além disso, foram revisados os métodos de prevenção e regeneração da morfologia acinar e da função glandular. Entre as alterações microscópicas agudas e tardias observadas no tecido glandular irradiado, podem-se citar alterações indicativas de morte celular como a apoptose, hipovascularização, formação de tecido fibroso e edema.Considerando as evidências anteriormente mencionadas, o objetivo deste estudo foi avaliar, em glândulas parótidas de camundongos, o efeito da terapia laser de baixa potência (TLBP) sobre alterações morfológicas causadas pela radioterapia e na imunodetecção da proteína caspase-3. Quarenta e um camundongos Swiss foram distribuídos em um grupo controle e três grupos experimentais: radioterapia, laser 2 J e laser 4 J. Os grupos experimentais foram submetidos à radiação ionizante em sessão única de 10 Gy. Nos grupos laser, um laser de diodo, GaAlAs (830 nm, 100 mW, 0,028 cm2, 3,57 W/cm2) foi utilizado de forma pontual sobre a região correspondente às glândulas parótidas, com energia de 2 J (20 seg, 71 J/cm2) ou 4 J (40 seg, 135 J/cm2) por ponto. Os animais foram eutanasiados 48 h ou sete dias após a radioterapia e as glândulas parótidas dissecadas para análise morfológica e imunodetecção da caspase-3. Não houve diferença significativa entre os grupos na imunodetecção da caspase-3, entretanto, os grupos laser apresentaram percentuais inferiores aos do grupo radioterapia.Além disso, os resultados indicaram que a TLBP promoveu preservação da estrutura acinar, reduziu a ocorrência de vacuolização citoplasmática e estimulou a vascularização glandular. Entre os protocolos de TLBP, o que utilizou a energia de 4 J apresentou os melhores resultados. Tendo em vista as limitações metodológicas desta pesquisa, mais estudos devem ser conduzidos em animais irradiados, utilizando diferentes protocolos de TLPB e observando a resposta glandular, não apenas em curto prazo, como também em longo prazo, quando a ocorrência de alterações tardias nas glândulas salivares pode ser analisada.

Orientador: Luiz Eduardo Blumer Rosa / Banca: Decio dos Santos Pinto Junior / Banca: Carlos Eduardo Dias Colombo / Resumo: A carcinogênese consiste em um processo de alterações genéticas após contato celular com agentes físicos, químicos ou biológicos. Esta interação pode culminar em manifestações de fenótipos malignos celulares. No estudo experimental da carcinogênese em glândulas salivares animais, os autores são unânimes em apontar os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA) como potentes agentes carcinogênicos. O 7,12 - dimetilbenzantraceno (DMBA), pertencente ao grupo dos HPA, é considerado o carcinógeno químico de eleição para a tumorigênese de glândulas salivares animais. Este trabalho visou o estudo de DMBA injetado em glândulas salivares submandibulares de ratos. Foram utilizados 28 ratos (Rattus norvegicus), com três meses de idade e peso aproximado de 300g. Os resultados revelaram, na 5ª semana, sete casos de sialadenite crônica. Na 10ª semana, um caso com atipia celular ductal, dois casos de carcinoma epidermóide e quatro de sialadenite crônica. Entre a 15ª e 20ª semanas, foram observados três casos de hiperemia, três casos de carcinoma epidermóide, um caso de sarcoma e sete casos de carcinossarcoma. A análise dos dados, em porcentagem, revelou: 3,6% de atipia celular, 3,6% de sarcoma, 10,7% de hiperemia, 17,9% de carcinoma epidermóide, 25% de carcinossarcoma e 39,4% de sialadenite crônica. Conclusão: Os dados obtidos permitiram o estudo da história natural da carcinogênese glandular por DMBA desde os processos inflamatórios iniciais até à formação de neoplasias mesenquimais, epiteliais e mistas. / Abstract: The carcinogenesis consists in a process in which the direct contact between cells and some physical, chemical or biological agents results in cell malignization. In the scope of experimental salivary gland carcinogenesis there is a consensus in the use of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) as carcinogens. The 7,12 - dimethylbenzanthracene (DMBA) is the most used PAH. This paper aims the investigations of the DMBA injected in rats submandibular glands. For this purpose, 28 rats (Rattus norvegicus), three months old (300 gr. weight, approximately) were used. The animals were divided into four groups of seven each. All animals were anesthetized and shaved in the neck. After antisepsis, one ventral neck incision, followed by dissection was performed in each animal. The left submandibular gland was injected with 0.1 ml of 2% DMBA in acetone. The skin was closed with 3-Ø silk suture. By the end of the 5th, 10th, 15th and 20th weeks the animals were sacrificed by lethal doses of anesthetics. The results in the 5th week presented seven cases of chronic sialadenitis. After 10 weeks one case of ductal cell atypia was evident, two cases of squamous cell carcinoma and four cases of chronic sialadenitis were also seen. Between the 15th and 20th weeks the cases were diagnosed as follows: three cases of hyperemia, three cases of squamous cell carcinoma, one case of sarcoma and seven cases of carcinosarcoma. The data analysis showed 3.6% of cellular atypia, 3.6% of sarcoma, 10.7% of hyperemia, 17.9% of squamous cell carcinoma, 25% of carcinosarcoma and 39.4% of chronic sialadenitis. Conclusion: the results allowed the investigation of the glandular carcinogenesis natural history after DMBA injection, from the beginning of inflammatory changes to the neoplastic manifestation of mesenquimal, epithelial and mixed tumours. / Mestre

O câncer é um problema de saúde pública mundial, apresentando acréscimo na sua incidência a cada ano. O seu processo de evolução ainda não foi completamente desvendado, dificultando a elaboração de terapias adequadas. Na busca por um melhor prognóstico, pesquisas recentes têm discutido o papel das citocinas inflamatórias, do nicho perivascular e das células-tronco nos mecanismos de desenvolvimento e manutenção dos tumores malignos. Os tumores de glândula salivar representam uma pequena porcentagem das patologias malignas da região de cabeça e pescoço, podendo ocorrer em adultos e em crianças. O diagnóstico dificilmente é precoce e a taxa de sobrevida é extremamente baixa comparada aos demais tumores da região. Assim, este estudo teve como objetivo estudar as células provenientes dos tumores de glândula salivar do tipo adenoide cístico (CAC) e adenocarcinoma NOS (AdNOS) quanto ao seu perfil imunofenotípico, quanto à existência ou não de células-tronco tumorais nessa população, bem como investigar possíveis modificações na ativação de STAT3, Akt e ERK (moléculas envolvidas em vias de sinalização de manutenção do tumor), quando em contato com fatores secretados por células endoteliais. Foram coletados 5 CACs e 4 AdNOS, no Hospital da Universidade de Michigan (Ann Arbor, MI, EUA), durante 2010 e 2012. As células foram isoladas e caracterizadas em citometria de fluxo em P0 e P7, demonstrando um perfil de células CD44+ALDH+Lin- variando de 0,33 a 3,19% e 0,36 a 2,00%, respectivamente, entre 5 linhagens avaliadas. Na avaliação por western blotting, a e-caderina, o Snail e a actina de músculo liso foram ausentes em todos os tipos tumorais, enquanto que a citoqueratina 20 (Ck20) foi presente apenas nos AdNOS. Comparando os tumores com suas metástases, a presença de Ck20, p63 e β-catenina foi semelhante, enquanto que citoqueratina 7, a vimentina e o Bmi-1 foram maiores nas metástases. Tanto os AdNOS quanto CACs apresentaram receptores para IL-6, IL-8 e EGF. Foi observado que mediadores solúveis liberados pelas células endoteliais foram capazes de fosforilar STAT3, Akt e ERK em todas as células salivares estudadas, no entanto, a proteína recombinante humana IL-6, isoladamente, não foi capaz de ativar Akt. Orosferas foram geradas em todos os tipos tumorais, demonstrando o potencial de auto-renovação celular. Um maior número de esferas foi observado nas células metastáticas em relação às primárias. Células CD44+ALDH+, comparadas com CD44-ALDH-, geraram mais esferas, quando plaqueadas em alta densidade (5.000 células). No entanto, o inverso foi encontrado, quando uma única célula foi utilizada para o ensaio (p>0,05). Devido à dificuldade de obtenção e manipulação de células de tumores de glândula salivar, ainda há muito que se investigar mecanisticamente. Considerando a fosforilação de STAT3 na presença de IL-6, semelhante ao verificado em outros tumores, o uso de anticorpos contra IL-6, talvez sejam uma opção no futuro. / Cancer is a public health problem worldwide, with an increase in incidence every year. The process of its evolution is still not completely understood, hindering the development of appropriate therapies. In the search for a better prognosis, recent reports have discussed the role of inflammatory cytokines, perivascular niche and stem cells in the mechanisms of development and maintenance of malignant tumors. The salivary gland tumors represent a small percentage of malignancies of the head and neck and can occur in both adults and children. Early diagnosis is difficult and the survival rate is extremely low compared to other tumors in the same region. Thus, this study aimed to study cells from the adenoid cystic carcinoma (ACC) and adenocarcinoma NOS (AdNOS) tumors of salivary gland regarding its immunophenotypic profile and the existence or absence of tumor stem cells in this population, as well as investigate possible changes in the activation of STAT3, Akt and ERK (molecules involved in signaling pathways of tumor maintenance), when exposed to factors secreted by endothelial cells. ACCs (n=5) and AdNOS (n=4) were collected at the Hospital of the University of Michigan (Ann Arbor, MI, USA), during 2010 to 2012. Cells were isolated and characterized by flow cytometry at P0 and P7, showing a profile of ALDH+CD44+Lin- ranging from 0.33% to 3.19% and 0.36% and 2.00%, respectively, between 5 cell lines evaluated. In the protein profile, e-cadherin, Snail and SMA were absent in all tumor types. Ck20 was present only in AdNOS. Comparing primary tumors and their metastases, the presence of Ck20, and p63 β-catenin was similar, while Ck7, vimentin and Bmi-1 were higher in metastases. Both AdNOS as ACCs had receptors for IL-6, IL-8 and EGF. It was observed that soluble mediators released by endothelial cells were able to activate STAT3, Akt and ERK phosphorylation in all cells studied. However, recombinant human IL-6 alone was not able to activate Akt. Orospheres were generated in all tumor types, indicating the potential for cellular self-renewal. Highest number of spheres was observed in metastatic cells compared to primary. ALDH+CD44+ cells compared to ALDH-CD44- generated more spheres when plated in high density (5,000 cells), however, the opposite was found when one single cell seed was evaluated (p> 0.05). There is doubt if these cell markers would be consider for a stem cell model in salivary tumors. Due to the difficulty of obtaining and manipulating salivary gland tumor cells, there is still much to investigate mechanistically. As the phosphorylation of STAT3, in the presence of IL-6, was similar to that observed in other tumors, the use of antibodies against IL-6, may be an option in the future.

As neoplasias de glândula salivar (NGS) são tumores raros que despertam interesse por sua diversidade histopatológica e comportamento clínico. A compreensão da patobiologia assim como, dos mecanismos envolvidos no comportamento invasivo destas lesões é necessária para melhor entender a biologia das NGS e posteriormente delinear novas estratégias terapêuticas. A presente tese foi dividida em dois artigos. O objetivo do primeiro estudo foi descrever os dados demográficos, clinicopatológicos e de prognóstico das NGS diagnosticados em um centro de atenção terciário. Para tal, foi realizada uma análise retrospectiva utilizando os dados de arquivos e de prontuários. Foram identificados 109 casos de NGS cuja média de idade dos pacientes foi de 46.47 anos e a relação homens:mulheres foi de 0.94:1. As glândulas salivares maiores foram mais acometidas (75.2%) e os tumores benignos os mais prevalentes (75.2%) sendo o adenoma pleomórfico o tumor benigno mais comum e o carcinoma adenóide cístico o principal maligno. O objetivo do segundo estudo foi analizar o padrão de expressão da via de sinalização do HGF/c-Me/PI3K em NGS e correlacionar com o perfi proliferativo e desfechos clínicos das lesões. Foram construídos microarranjos de tecido (TMAs) de 93 casos de NGs e as lâminas foram submetidas a análise imunoistoquímica para HGF, p-Met, p-Akt e Ki67. Foi observada maior expressão de HGF nos tumores benignos (p=0.04), enquanto que as protínas p-Met (p=0.03), p-Akt (p=0.00) e Ki-67 (p=0.00) foram mais expressas nos tumores malignos. Nas neoplasias malignas houve maior ativação da via HGF observada pela maior expressão do seu receptor fosforilado (p-Met) bem como, maior ativação da via do PI3k pela fosforilação de Akt (p-Akt) resultando em um maior perfil proliferativo. Pode-se concluir que a via de sinalização do HGF/c-Met/PI3k parece estar ativa nas NGS regulando a proliferação especialmente nas neoplasias malignas. / Salivary gland tumors (SGT) are rare yet interesting neoplasms due to their histopatological diversity and clinical behavior. Understanding the pathobiology as well as the mechanisms involved in the invasive behavior of these lesions is needed to better comprehend the biology of SGT and further delineate new therapeutic strategies. This thesis was divided in two papers. The aim of the first study was to describe the demographic, clincopathological and prognostic data of SGT diagnosed in a tertiary care center. For this purpose, a retrospective analysis using data from the archives and records was performed. One hundred and nine cases of SGT were identified. The patients mean age was 46.47 years and the male:female ratio was 0.91:1. The major salivary glands were the most affected (75.2%) and the benign SGT were more prevalent (78%) being pleomorphic adenoma the most common benign tumor and adenoid cystic carcinoma the most common malignant tumor. The objective of the second study was to analyze the expression pattern of HGF/c-Met/PI3K signaling pathway in SGT and correlate the findings with the proliferative profile and clinical outcomes of cases. Tissue microarrays (TMAs) of 93 cases of SGT were constructed; the slides were submitted to immunohistochemical analysis for HGF, p-Met, p-Akt and Ki-67. Increased expression of HGF was observed in benign tumors (p = 0.04), while p-Met (P = 0.03), p-Akt (p = 0:00) and Ki-67 (p = 0:00) were most expressed in malignant tumors. In salivary glands carcinomas there was a higher activation of the HGF pathway observed by the higher expression of its phosporylated receptor (p-Met) as well as the higher activation of PI3k pathway through Akt (p-Akt) phosphorilation, resulting in a higher proliferative profile. It can be concluded that HGF/c-Met/PI3K signaling pathway appears to be active in SGT regulating the proliferation specially in malignant tumors.

O soalho da boca de alguns pacientes desdentados parciais ou totais pode apresentar tumefações do soalho da boca relacionadas às glândulas sublinguais que dificultam a adaptação de próteses totais ou parciais, às vezes requerendo tratamento cirúrgico. Erroneamente, estas tumefações têm sido atribuídas à hiperplasia glandular. Alterações decorrentes do envelhecimento têm sido aventadas como possível causa, mas a etiopatogenia continua incerta. Na busca de explicar a causa das tumefações do soalho da boca de desdentados, foi elaborada a presente pesquisa. Foram comparadas microscopicamente as glândulas sublinguais de cadáveres humanos com glândulas removidas em tratamento cirúrgico pré-protético das tumefações do soalho da boca de desdentados. Estudo morfológico e morfométrico foram realizados em indivíduos de idades cronológicas semelhantes. Os resultados foram analisados com nível de significância de 5%. No estudo morfológico foram analisados: atrofia acinar (p=0,758), autólise acinar (p=0,014), infiltrado mononuclear focal (p=1,000) e difuso (p=0,142), substituição do parênquima por tecido fibroso (p=0,547), substituição do parênquima por tecido adiposo (p=0,547), extravasamento de muco focal (p=0,192) e difuso (p=0,758) e oncocitose (p=0,883). As variáveis ductos e/ou estruturas ductiformes (p=1,000) e vasos sangüíneos congestos (p=0,043) foram classificadas em ausentes e presentes. Morfometricamente foi determinada a densidade de volume de ácinos (p=0,752), ductos (p=0,444), estroma (p=0,209) e tecido adiposo (p=0,794). A análise dos resultados mostrou diferença estatisticamente significante para os aspectos microscópicos autólise (p=0,014) e vasos sanguíneos congestos (p=0,043). As características microscópicas das glândulas sublinguais nas tumefações do soalho da boca de desdentados retratam o processo normal de envelhecimento das glândulas salivares. Concluiu-se que nas tumefações do soalho da boca de pacientes desdentados as glândulas sublinguais não são patológicas. / Mouth floor enlargements related to sublingual glands in edentulous or partially edentulous patients may be present, impairing denture fitting. Sometimes surgical treatment is needed. Erroneously, these enlargements have been attributed to glandular hyperplasia. Changes due to aging process have been suggested as a possible cause but the etiopathogenesis continues uncertain. The aim of the study was to explain the cause of mouth floor enlargements in edentulous patients. Human sublingual glands from necropsies and glands removed in pre-prosthetic surgical treatment of mouth floor enlargements in edentulous patients were microscopically compared. Morphological and morphometric studies were performed in individuals of similar chronological ages. Results were analyzed with significance set for p0,05. The morphological study analyzed: acinar atrophy (p=0,758), acinar autolysis (p=0,014), focal (p=1,000) and diffuse mononuclear infiltrate (p=0,142), replacement of parenchyma by fibrous tissue (p=0,547), replacement of parenchyma by adipose tissue (p=0,547), focal (p=0,192) and diffuse mucus overflow (p=0,758) and oncocytosis (p=0,883). The variables ducts and/or duct-like structures (p=1,000) and congested blood vessels (p=0,043) were classified in absent and present. The volumes densities of acini (p=0,752), ducts (p=0,444), stroma (p=0,209) and adipose tissue (p=0,794) were determined by the morphometric study. The results showed statically significant difference to the microscopic aspects: autolysis (p=0,014) and congested blood vessels (p=0,043). The microscopic aspects of the sublingual glands in mouth floor enlargements in edentulous patients revealed the normal aging process of the salivary glands. Concluding, the sublingual glands in mouth floor enlargements in edentulous patients are not pathological glands.

As neoplasias de glândula salivar (NGS) são tumores raros que despertam interesse por sua diversidade histopatológica e comportamento clínico. A compreensão da patobiologia assim como, dos mecanismos envolvidos no comportamento invasivo destas lesões é necessária para melhor entender a biologia das NGS e posteriormente delinear novas estratégias terapêuticas. A presente tese foi dividida em dois artigos. O objetivo do primeiro estudo foi descrever os dados demográficos, clinicopatológicos e de prognóstico das NGS diagnosticados em um centro de atenção terciário. Para tal, foi realizada uma análise retrospectiva utilizando os dados de arquivos e de prontuários. Foram identificados 109 casos de NGS cuja média de idade dos pacientes foi de 46.47 anos e a relação homens:mulheres foi de 0.94:1. As glândulas salivares maiores foram mais acometidas (75.2%) e os tumores benignos os mais prevalentes (75.2%) sendo o adenoma pleomórfico o tumor benigno mais comum e o carcinoma adenóide cístico o principal maligno. O objetivo do segundo estudo foi analizar o padrão de expressão da via de sinalização do HGF/c-Me/PI3K em NGS e correlacionar com o perfi proliferativo e desfechos clínicos das lesões. Foram construídos microarranjos de tecido (TMAs) de 93 casos de NGs e as lâminas foram submetidas a análise imunoistoquímica para HGF, p-Met, p-Akt e Ki67. Foi observada maior expressão de HGF nos tumores benignos (p=0.04), enquanto que as protínas p-Met (p=0.03), p-Akt (p=0.00) e Ki-67 (p=0.00) foram mais expressas nos tumores malignos. Nas neoplasias malignas houve maior ativação da via HGF observada pela maior expressão do seu receptor fosforilado (p-Met) bem como, maior ativação da via do PI3k pela fosforilação de Akt (p-Akt) resultando em um maior perfil proliferativo. Pode-se concluir que a via de sinalização do HGF/c-Met/PI3k parece estar ativa nas NGS regulando a proliferação especialmente nas neoplasias malignas. / Salivary gland tumors (SGT) are rare yet interesting neoplasms due to their histopatological diversity and clinical behavior. Understanding the pathobiology as well as the mechanisms involved in the invasive behavior of these lesions is needed to better comprehend the biology of SGT and further delineate new therapeutic strategies. This thesis was divided in two papers. The aim of the first study was to describe the demographic, clincopathological and prognostic data of SGT diagnosed in a tertiary care center. For this purpose, a retrospective analysis using data from the archives and records was performed. One hundred and nine cases of SGT were identified. The patients mean age was 46.47 years and the male:female ratio was 0.91:1. The major salivary glands were the most affected (75.2%) and the benign SGT were more prevalent (78%) being pleomorphic adenoma the most common benign tumor and adenoid cystic carcinoma the most common malignant tumor. The objective of the second study was to analyze the expression pattern of HGF/c-Met/PI3K signaling pathway in SGT and correlate the findings with the proliferative profile and clinical outcomes of cases. Tissue microarrays (TMAs) of 93 cases of SGT were constructed; the slides were submitted to immunohistochemical analysis for HGF, p-Met, p-Akt and Ki-67. Increased expression of HGF was observed in benign tumors (p = 0.04), while p-Met (P = 0.03), p-Akt (p = 0:00) and Ki-67 (p = 0:00) were most expressed in malignant tumors. In salivary glands carcinomas there was a higher activation of the HGF pathway observed by the higher expression of its phosporylated receptor (p-Met) as well as the higher activation of PI3k pathway through Akt (p-Akt) phosphorilation, resulting in a higher proliferative profile. It can be concluded that HGF/c-Met/PI3K signaling pathway appears to be active in SGT regulating the proliferation specially in malignant tumors.