Infestações com Rhipicephalus microplus, o carrapato dos bovinos, causam enormes prejuízos econômicos para a pecuária. Os carrapatos estão desenvolvendo resistência aos carrapaticidas que, além dessa desvantagem, deixam resíduos em carne e leite. Vacinas anticarrapato representam uma alternativa sustentável de controle de infestações, mas as atualmente disponíveis têm efeitos parciais e transitórios. Surge, assim, a necessidade de identificar novos antígenos vacinais. Para alcançar esse objetivo este trabalho explora o fato de que bovinos apresentam fenótipos contrastantes e herdáveis de infestações que são específicos de certas raças. Além disso, o nível de imunidade do hospedeiro afeta a transcrição de genes de glândulas salivares do carrapato, órgão que produz proteínas que medeiam o parasitismo. A hipótese de trabalho é a que os diferentes níveis da imunidade anticarrapato do hospedeiro afetam, também, a composição salivar do parasita. Assim, em carrapatos alimentando-se em hospedeiros resistentes as proteínas que são cruciais ao parasitismo poderão estar ausentes ou deficientes na sua saliva e por isso os carrapatos não terminam sua refeição de sangue. A neutralização dessas mesmas proteínas pela imunidade humoral pode ter o mesmo efeito e por isso, essas proteínas constituem bons antígenos vacinais. Assim, o objetivo do trabalho foi identificar novos antígenos vacinais em saliva de fêmeas e glândulas salivares de ninfas, machos e fêmeas de carrapatos alimentados em hospedeiros resistentes e suscetíveis, bem como em larvas não alimentadas oriundas de ovos de fêmeas alimentadas nestes mesmos hospedeiros. Para isso, foram empregadas abordagens de sequenciamento de nova geração \"RNA-Seq\" (454) e abordagens proteômicas, como análise diferencial em gel (DIGE) e Western Blots (imunoproteoma) seguido de sequenciamento de massa, além da tecnologia de identificação de proteínas multidimensionais (ou Multidimensional Protein Identification Technology, MudPIT) para descrever o proteoma das glândulas salivares e da saliva de fêmeas. A análise transcriptômica resultou no sequencimanto de 1.999.086 reads que permitiu identificar e classificar 11.676 sequências codificadoras (CDS), muitas das quais (3.600 CDS) contêm peptídeo sinal que é indicativo de secreção, portanto podendo estar presente na saliva e Resumo Gustavo Rocha Garcia apresentar função importante na hematofagia. Por meio de MudPIT, identificamos 321 proteínas salivares diferentes, além de 126 proteínas no DIGE e 266 proteínas nos imunoproteomas. Muitas dessas proteínas podem ser consideradas antígenos potenciais por estarem associadas com a hematofagia/parasitismo, tais como proteases, nucleases, inibidores de proteases, peptídeos antimicrobianos, proteínas de fixação, entre outros, inclusive proteínas ainda não caracterizadas. A maioria dos genes codificantes dessas proteínas está mais expressa em carrapatos alimentados em hospedeiros suscetíveis, principalmente em carrapatos machos. Além disso, muitas dessas proteínas não são reconhecidas por soros bovinos, inclusive soros de bovinos infestados, embora soros de bovinos infestados e resistentes ao carrapato apresente a maioria das reatividades. O conjunto dos resultados sugere que em nível de proteína a composição da saliva também é afetada pelos diferentes níveis de imunidade dos hospedeiros, além de variar com o ciclo de vida do carrapato. Desse modo, concluímos que as estratégias de investigação empregadas foram satisfatórias para identificar um conjunto de antígenos salivares do carrapato R. microplus que representam proteínas alvos para compor vacinas multicomponentes anticarrapato. / Infestation with Rhipicephalus microplus, the cattle tick, causes huge economic losses to livestock. Ticks are developing resistance to acaricides that, besides this disadvantage, leave residues in meat and milk. The anti tick vaccines represent a sustainable alternative of the infestations control, but the currently available has partial and transient effects. Thus arises the need to identify new vaccine antigens. To achieve this goal, this work explores the fact that cattle exhibit contrasting phenotypes and inheritable of infestations that are specific to certain breeds. Furthermore, the level of immunity of the host affects gene transcription tick salivary gland, organ that produces proteins that mediate the parasitism. The working hypothesis is that different levels of anti tick immunity of host affect also the salivary composition of the parasite. So in ticks feeding on resistant hosts the proteins that are crucial to parasitism may be absent or deficient in their saliva, and by this the ticks do not finish your meal blood. The neutralization of these same proteins by humoral immunity can have the same effect and by this, these proteins are good vaccine antigens. So, the aim of the study was to identify new vaccine antigens in saliva from females and salivary glands of nymphs, males and females of ticks fed on resistant and susceptible hosts as well as in unfed larvae originating from eggs of females fed on these same hosts. To this, were employed sequencing approaches of new generation \"RNA-Seq\" (454) and proteomic approaches, such as differential analysis in gel (DIGE) and Western Blots (immunoproteomics) followed by sequencing mass, besides the Multidimensional Protein Identification Technology (MudPIT) to describe the proteome of the salivary glands and saliva of females. The transcriptomics analysis identified 11,676 coding sequences (CDS), many of which (3,600 CDS) contain predicted signal peptide indicative of secretion, therefore may be present in saliva and provide an important function in blood feeding. Through MudPIT, we identify 321 different salivary proteins, besides 126 proteins in DIGE and 266 proteins in immunoproteomics. Many of these proteins may be considered as potential antigens to be associated with the blood meal/ parasitism, such as proteases, nucleases, protease inhibitors, antimicrobial peptides, proteins of attachment, among Abstract Gustavo Rocha Garcia others, including proteins not yet characterized. Most of the genes encoding of these proteins are more expressed in ticks fed on susceptible hosts, especially in male ticks. Moreover, many of these proteins are not recognized by bovine sera, including sera from infested hosts, although sera from infested and resistant host to tick present the most reactivities. The overall results suggest that in protein level, the composition of saliva is also affected by the different levels of immunity of the host, besides vary with the tick life cycle. Thus, we conclude that the research strategies employed were satisfactory to identify a set of tick salivary antigens from R. microplus that represent target proteins for composing anti tick multicomponent vaccines.

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas é a parasitose endêmica mais importante na América Latina. O acometimento das glândulas salivares nesta doença é ainda pouco estudado. Há estudo com portadores da doença através de sialografia convencional, o que motivou a realização deste estudo com a utilização da sialorressonância (sialo RM), por ter melhor sensibilidade e especificidade em relação a outros métodos e não ser invasiva, com o intuito de identificar alterações glandulares nos pacientes da forma indeterminada que possibilitem sua reclassificação para a forma digestiva. OBJETIVO: avaliar as alterações encontradas pela sialo RM e correlacionar com dados clínicos e laboratoriais. METODOLOGIA: Estudaram-se 180 glândulas salivares maiores em 45 pacientes pela sialo RM que foram divididos em três grupos: A portadores da doença de Chagas na forma clínica indeterminada; B portadores da doença de Chagas na forma digestiva; C controle. As idades médias encontradas foram: 48; 55 e 50 anos, respectivamente. Quanto ao sexo, 9; 11 e 10 pacientes dos grupos avaliados eram do feminino. Foram utilizadas seqüências anatômicas ponderadas em T1 e T2, e seqüências específicas para sialo RM T2 fast spin eco 2D e 3D. Realizou-se avaliação clínica específica, sialometria, nasofibroscopia, e dosagem sanguínea da amilase. RESULTADOS: Os volumes médios das glândulas parótidas nos grupos foram de: A (31,1cm3); B (27,4cm3); C (32,4cm3) e das submandibulares foram: A (6,1 cm3); B (5,2 cm3) e C (7,0 cm3). Observou-se um caso no grupo A e outro no grupo B, com afilamento e importante substituição gordurosa de uma das glândulas. O calibre médio dos ductos parotídeos principais foi de: A (1,5mm) tortuosidade e dilatação segmentar em um caso; B (1,3mm) um deles não visualizado e C (1,2mm). Os ductos submandibulares principais tiveram calibre médio de: A (1,5mm); B (1,7mm) - um deles não visualizado; C (1,3mm). Os ductos salivares secundários parotídeos não foram identificados em: A (13,3%); B (20,0%); C (6,7%) e submandibulares, apenas um caso no grupo B. Os ductos salivares terciários parotídeos não foram visualizados em: A (43,3%); B (43,3%); C (33,3%) e submandibulares: A (40,0%); B (23,3%); C (20,0%). Observou-se dilatação sacular/cisto em apenas um ducto parotídeo do grupo B. Das queixas clínicas a xerostomia foi a mais prevalente: A (40,0%); B (53,3%); C (13,3%), com p = 0,066. A sialometria após estímulo apresentou-se alterada nos grupos em: A (60%); B (86,67%) e C (53,33%). O diâmetro parotídeo principal dos indivíduos com amilase normal foi menor que nos indivíduos com amilase anormal (p=0,046). CONCLUSÕES: Os volumes médios das glândulas submandibulares foram menores e o calibre dos ductos salivares de Wharton foi maior nos pacientes infectados, com diferença estatística. Em 5 casos houve alteração na morfologia glandular e/ou ductal. Foram visualizados menos ramos ductais de segunda e terceira ordem das glândulas parótidas e submandibulares em relação ao controle. / INTRODUCTION: Chagas disease is the most important endemic parasitosis in Latin America. The salivary glands onsets for this disease have been poorly studied. For MR (magnetic resonance) sialography has a better sensibility and specificity when compared to different methods and for not being invasive, it is used to identify glandular alterations in patients in the undetermined form, which possibility its reclassification to the digestive form. OBJECTIVES: Present work intends to evaluate the alterations found by MR sialography in Chagas disease patient bearers and correlate them with clinical and laboratorial data. CASUISTIC and METHOD: 180 Major salivary glands were studied in 45 patients by MR sialography divided into 3 groups: A Chagas disease bearers in the uncertain clinical form; B Chagas disease bearers in the digestive form; C Control group. Average ages were: 48; 55 and 50 years, respectively. Concerning sex, nine; 11 and 10 of the evaluated groups were feminine. Anatomical sequences were pondered in T1 and T2, as well as specific sequences for MR sialography T2 fast spin eco 2D and 3D. Specific clinical evaluation, sialometry, nasofibroscopy and blood dosages of amilasis were also evaluated. RESULTS: The parotids glands volumes for groups and expressed, varied for as presented: A (31.1 cm3); B (27.4 cm3); C (32.4 cm3) and for submandibular glands were: A (6.1 cm3); B (5.2 cm3) and C (7,0 cm3). A case was observed in group A and another one in group B, presenting gauging and an important fatty substitution for one of the glands. Main parotid ducts caliber or firstrate order, varied from: A (1.5mm) tortuosity and segmental dilation in one case; B (1.3mm) one of them not visualized and C (1.2mm). Submandibular main ducts presented calibers of: A (1.5mm); B (1.7mm) - one of them not visualized; C (1.3mm). Secondary salivary ducts of the parotid were not identified in: A (13.3%); B (20.0%); C (6.7%) and concerning to submandibular glands, only one case in group B was not identified. Tertiary salivary ducts of the parotid gland were not visualized in: A (43.3%); B (43.3%); C (33.3%) and for submandibular glands: The (40.0%); B (23.3%); C (20.0%). Saccular dilatation was observed in only one parotid of the group B. Among the clinical complaints, xerostomy was the most prevailing A (40.0%); B (53.3%); C (13.3%) p = 0,066. The sialometry after stimulus showed to be altered in the groups as follows: A (60.0%); B (86.7%) and C (53.3%) - <0,001. The main parotid duct diameter of individuals with normal amilasis was smaller than those in the ones with abnormal amilasis (p=0,046). CONCLUSION: The salivary gland volumes were smaller and there was enlargement in Wharton ducts caliber in patients infected by the disease, with statistical difference. There was alteration in the glandular and/or ductal morphology in five cases. Ductal branches of second and third order salivary glands in Chagas disease chronic form bearers were not visualized more often than in healthy patients. Xerostomy was the most reported complaint by patients infected by Tripanosoma cruzi, and there was a bigger association with abnormal pharyngeal nasofibroscopy. Sialometry after stimulus showed to be altered in the groups, especially in patients with chronic digestive form.

A morfogênese das glândulas salivares envolve eventos complexos e coordenados, dependentes da interação epitélio-mesênquima e do microambiente. Fatores de crescimento coordenam vários desses processos biológicos e o fator transformador de crescimento-beta (TGF-) mostra-se relevante. Utilizando imunoistoquímica e imunofluorescência, a distribuição do TGF-1, 2 e 3 foi mapeada e sua expressão comparada com a expressão de marcadores de maturação em glândulas salivares humanas obtidas de fetos que tinham entre 4ª e 24ª semanas de vida intra-uterina. O TGF-1 foi detectado durante a fase pseudoglandular no mesênquima. Nas outras etapas da diferenciação glandular esse fator foi expresso no citoplasma das células acinares até a glândula salivar adulta. O TGF-2 foi detectado desde o estágio de botão inicial da glândula salivar. Sua expressão foi observada nas células ductais e sua presença aumentada ao longo da diferenciação glandular. O TGF-3 foi visto durante a fase pseudoglandular das glândulas salivares, inicialmente fraco nas células ductais e foi o único detectado em células mioepiteliais. A troca de subunidades de TGF- durante a maturação das glândulas salivares sugere mudanças estimuladas durante os complexos estágios de desenvolvimento dessas glândulas. O presente estudo reafirma essa evidência, e mostra que as subunidades do TGF- são fatores importantes durante a diferenciação de glândulas salivares. / Morphogenesis of salivary glands involves complex coordinated events. Synchronization between cell proliferation, polarization and differentiation, which are dependent on epithelialmesenchymal interactions and on the microenvironment, is a requirement. Growth factors mediate many of these orchestrated biological processes and transforming growth factor-beta (TGF- ) appears to be relevant. Using immunohistochemistry and immunofluorescence, we have mapped the distribution of TGF- 1, 2 and 3 and compared it with the expression of maturation markers in human salivary glands obtained from fetuses ranging from weeks 4 to 24 of gestation. TGF- 1 first appeared during pseudoglandular stage in the surrounding mesenchyme and, in the more differentiated stages, was expressed in the cytoplasm of acinar cells throughout the adult gland. The TGF- 2 was detected since the bud initial stage of the salivary gland. Its expression was observed in ductal cells and increased along gland differentiation. The TGF- 3 was detected from the pseudoglandular stage of the salivary gland, being weakly expressed on ductal cells, and it was the only factor detected on myoepithelial cells. The data suggest that TGF- have a role to play in salivary gland development and differentiation.

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas é a parasitose endêmica mais importante na América Latina. O acometimento das glândulas salivares nesta doença é ainda pouco estudado. Há estudo com portadores da doença através de sialografia convencional, o que motivou a realização deste estudo com a utilização da sialorressonância (sialo RM), por ter melhor sensibilidade e especificidade em relação a outros métodos e não ser invasiva, com o intuito de identificar alterações glandulares nos pacientes da forma indeterminada que possibilitem sua reclassificação para a forma digestiva. OBJETIVO: avaliar as alterações encontradas pela sialo RM e correlacionar com dados clínicos e laboratoriais. METODOLOGIA: Estudaram-se 180 glândulas salivares maiores em 45 pacientes pela sialo RM que foram divididos em três grupos: A portadores da doença de Chagas na forma clínica indeterminada; B portadores da doença de Chagas na forma digestiva; C controle. As idades médias encontradas foram: 48; 55 e 50 anos, respectivamente. Quanto ao sexo, 9; 11 e 10 pacientes dos grupos avaliados eram do feminino. Foram utilizadas seqüências anatômicas ponderadas em T1 e T2, e seqüências específicas para sialo RM T2 fast spin eco 2D e 3D. Realizou-se avaliação clínica específica, sialometria, nasofibroscopia, e dosagem sanguínea da amilase. RESULTADOS: Os volumes médios das glândulas parótidas nos grupos foram de: A (31,1cm3); B (27,4cm3); C (32,4cm3) e das submandibulares foram: A (6,1 cm3); B (5,2 cm3) e C (7,0 cm3). Observou-se um caso no grupo A e outro no grupo B, com afilamento e importante substituição gordurosa de uma das glândulas. O calibre médio dos ductos parotídeos principais foi de: A (1,5mm) tortuosidade e dilatação segmentar em um caso; B (1,3mm) um deles não visualizado e C (1,2mm). Os ductos submandibulares principais tiveram calibre médio de: A (1,5mm); B (1,7mm) - um deles não visualizado; C (1,3mm). Os ductos salivares secundários parotídeos não foram identificados em: A (13,3%); B (20,0%); C (6,7%) e submandibulares, apenas um caso no grupo B. Os ductos salivares terciários parotídeos não foram visualizados em: A (43,3%); B (43,3%); C (33,3%) e submandibulares: A (40,0%); B (23,3%); C (20,0%). Observou-se dilatação sacular/cisto em apenas um ducto parotídeo do grupo B. Das queixas clínicas a xerostomia foi a mais prevalente: A (40,0%); B (53,3%); C (13,3%), com p = 0,066. A sialometria após estímulo apresentou-se alterada nos grupos em: A (60%); B (86,67%) e C (53,33%). O diâmetro parotídeo principal dos indivíduos com amilase normal foi menor que nos indivíduos com amilase anormal (p=0,046). CONCLUSÕES: Os volumes médios das glândulas submandibulares foram menores e o calibre dos ductos salivares de Wharton foi maior nos pacientes infectados, com diferença estatística. Em 5 casos houve alteração na morfologia glandular e/ou ductal. Foram visualizados menos ramos ductais de segunda e terceira ordem das glândulas parótidas e submandibulares em relação ao controle. / INTRODUCTION: Chagas disease is the most important endemic parasitosis in Latin America. The salivary glands onsets for this disease have been poorly studied. For MR (magnetic resonance) sialography has a better sensibility and specificity when compared to different methods and for not being invasive, it is used to identify glandular alterations in patients in the undetermined form, which possibility its reclassification to the digestive form. OBJECTIVES: Present work intends to evaluate the alterations found by MR sialography in Chagas disease patient bearers and correlate them with clinical and laboratorial data. CASUISTIC and METHOD: 180 Major salivary glands were studied in 45 patients by MR sialography divided into 3 groups: A Chagas disease bearers in the uncertain clinical form; B Chagas disease bearers in the digestive form; C Control group. Average ages were: 48; 55 and 50 years, respectively. Concerning sex, nine; 11 and 10 of the evaluated groups were feminine. Anatomical sequences were pondered in T1 and T2, as well as specific sequences for MR sialography T2 fast spin eco 2D and 3D. Specific clinical evaluation, sialometry, nasofibroscopy and blood dosages of amilasis were also evaluated. RESULTS: The parotids glands volumes for groups and expressed, varied for as presented: A (31.1 cm3); B (27.4 cm3); C (32.4 cm3) and for submandibular glands were: A (6.1 cm3); B (5.2 cm3) and C (7,0 cm3). A case was observed in group A and another one in group B, presenting gauging and an important fatty substitution for one of the glands. Main parotid ducts caliber or firstrate order, varied from: A (1.5mm) tortuosity and segmental dilation in one case; B (1.3mm) one of them not visualized and C (1.2mm). Submandibular main ducts presented calibers of: A (1.5mm); B (1.7mm) - one of them not visualized; C (1.3mm). Secondary salivary ducts of the parotid were not identified in: A (13.3%); B (20.0%); C (6.7%) and concerning to submandibular glands, only one case in group B was not identified. Tertiary salivary ducts of the parotid gland were not visualized in: A (43.3%); B (43.3%); C (33.3%) and for submandibular glands: The (40.0%); B (23.3%); C (20.0%). Saccular dilatation was observed in only one parotid of the group B. Among the clinical complaints, xerostomy was the most prevailing A (40.0%); B (53.3%); C (13.3%) p = 0,066. The sialometry after stimulus showed to be altered in the groups as follows: A (60.0%); B (86.7%) and C (53.3%) - <0,001. The main parotid duct diameter of individuals with normal amilasis was smaller than those in the ones with abnormal amilasis (p=0,046). CONCLUSION: The salivary gland volumes were smaller and there was enlargement in Wharton ducts caliber in patients infected by the disease, with statistical difference. There was alteration in the glandular and/or ductal morphology in five cases. Ductal branches of second and third order salivary glands in Chagas disease chronic form bearers were not visualized more often than in healthy patients. Xerostomy was the most reported complaint by patients infected by Tripanosoma cruzi, and there was a bigger association with abnormal pharyngeal nasofibroscopy. Sialometry after stimulus showed to be altered in the groups, especially in patients with chronic digestive form.

INTRODUÇÃO: Xerostomia é um sintoma comum relacionado a diversas doenças e faz parte da complexa exocrinopatia que afeta glândulas salivares na síndrome de Sjögren (SS). Sintomas similares são encontrados em outras doenças crônicas auto-imunes, incluindo o lúpus eritematoso (LE). O principal achado histopatológico na SS é a infiltração linfocitária que destrói o epitélio ductal levando à atrofia glandular. No LE, alterações das glândulas salivares são raramente relatadas, e tem sido comumente associadas com a SS pela maioria dos autores. OBJETIVOS: Analisar e comparar as alterações histopatológicas e de imunofluorescência direta (IFD) das glândulas salivares menores de doentes com xerostomia e diagnóstico de LE ou SS. MÉTODO: No período de março de 2007 a março de 2009, 56 doentes (29 com diagnóstico de LE e 27 com SS) acompanhados na Divisão de Dermatologia e/ou de Reumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), foram avaliados. Todos os doentes apresentavam em comum a queixa de xerostomia e foram submetidos a biopsia das glândulas salivares labiais. Os espécimes foram submetidos a estudo histopatológico e de IFD. Todos os doentes foram também avaliados quanto ao uso de medicações, dados clínico-demográficos, comorbidades e duração dos sintomas. RESULTADOS: Dos 56 doentes examinados, 54 eram mulheres e apresentavam idades de 16 a 77 anos. Nas glândulas salivares de doentes com SS, observou-se, principalmente, sialadenite linfocítica moderada a intensa, com expressiva agressão ductal, fibrose e atrofia glandular. A intensidade da agressão tecidual correlacionou-se com a duração da SS. Nos doentes com LE, evidenciou-se sialadenite crônica leve na maioria dos casos acompanhada de espessamento e hialinização da membrana basal ductal e infiltrado linfocitário perivascular. A presença deste infiltrado correlacionou-se com a duração do LE. O exame de IFD revelou que 11 (41%) dos 27 doentes com SS apresentaram depósitos de IgA intercelulares no epitélio ductal. Os doentes com SS que demonstraram destruição glandular maciça (52%,n=14), apresentaram IFD negativa. Dezoito (62%) dos 29 doentes com LE apresentaram depósitos homogêneos de IgG na membrana basal dos ductos glandulares. CONCLUSÃO: As alterações histopatológicas e de IFD nas glândulas salivares de doentes com SS e LE são distintas. Na SS observa-se fundamentalmente infiltração linfocitária com agressão ductal e deposição de IgA, enquanto que no LE, a alteração principal é a hialinização da membrana basal ductal e deposição de IgG. Esses dados indicam que o envolvimento das glândulas salivares no LE é uma alteração específica da doença sialadenite lúpica, refletindo uma apresentação multissistêmica da mesma, sendo, portanto, inadequada a classificação dessas alterações como SS associada ao LE. / Background: Xerostomia is a symptom that can be triggered by chronic diseases such as Sjögren\'s syndrome (SS) and lupus erythematosus (LE). Many authors accredit most cases of salivary hypofunction in LE to secondary SS. Others believe that salivary changes in patients with LE might reflect a multisystem presentation of the disease. The present study compared histopathological and direct immunofluorescence (DIF) alterations in salivary glands of patients with xerostomia and diagnosis of LE or SS. Methods: From march of 2007 to march of 2009, in Hospital das Clínicas of São Paulo University, fifty-six salivary gland biopsies from patients with xerostomia and diagnosed with LE or SS were submitted to histopathological and DIF exams. Other clinical information was evaluated such as comorbidities and use of medication. Additionally, the patients were enquired about disease and dry mouth symptom duration. Results: From the 56 patients, 54 were women. Patients ages ranged from 16 to 77 years old. Twenty-seven had SS and 29 had LE. In SS, there was moderate to intensive sialadenitis, with infiltration and destruction of excretory salivary ducts. In LE, mild to moderate sialadenitis with thickening and hyalinization of the ductal basement membrane and perivascular lymphocytic infiltration were observed. DIF revealed that 41% (n=11) of SS patients presented intercellular ductal IgA deposits, whereas 62% (n=18) of LE patients demonstrated deposits of IgG in the ductal basement membrane. In 14 cases of SS, an intense glandular fibrosis was observed in histopathology and these cases were negative for all immunoglobulins in DIF. Conclusions: Taken together, the most important of our results indicate that alterations in minor salivary glands of patients with LE and SS are distinct both in their histopathological and immunofluorescence aspects. This reveals different mechanisms of xerostomia in these conditions. Salivary gland alterations in LE patients may be a specific manifestation of the LE process (lupus sialadenitis), reflecting its multisystemic presentation, instead of an association of secondary SS and LE.

A doença renal crônica (DRC) gera manifestações orais e alterações salivares nos pacientes, entretanto poucos estudos avaliaram os efeitos desta doença nas glândulas salivares. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da nefropatia crônica experimental na morfologia, metabolismo, estresse oxidativo e concentrações iônicas nas glândulas parótida (PA) e submandibulares (SM) de ratos. A nefropatia crônica experimental foi induzida pelos 5/6 de nefrectomia (grupo DRC) e os resultados foram comparados com os grupos Sham e Controle no tempo experimental de 12 semanas. Foram avaliados os pesos corpóreos iniciais e finais, níveis séricos e urinários de ureia e creatinina, a depuração de creatinina e excreção proteica urinária. A morfologia do córtex renal foi avaliada pela contagem de glomérulos em 30 campos x200 de aumento por grupo, além disso, foram avaliadas a presença de glomeruloesclerose e fibrose intersticial no grupo DRC. Nas glândulas PA e SM, foi realizada contagem de ductos em 30 campos x400 de aumento por grupo e avaliação de fibrose e de glicogênio no parênquima glandular. A análise metabólica avaliou os efeitos da DRC e estímulos simpáticos e parassimpáticos da salivação nos fluxos metabólicos glicolítico, oxidativo e anaplerótico utilizando infusões com [U-13C]Glicose ou [1,6-13C2]Glicose, [2-13C]Glicose e [U-13C]Ácidos graxos, e espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de próton (1H) e carbono 13 (13C) em alta resolução de extratos glandulares como técnica de detecção de incorporação de 13C em metabólitos intermediários. Atividades enzimáticas avaliadas foram: hexoquinase [HK], fosfofrutoquinase-1(PFK-1), piruvato quinase (PK), lactato desidrogenase (LDH), glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD), amilase, peroxidase e catalase. Além disso, foram quantificados os conteúdos de malondialdeído [MDA], glicogênio e concentrações iônicas de cálcio, fósforo e sódio. Foram observadas diminuições significativas dos pesos corpóreos finais, aumentos significativos das concentrações séricas e diminuições das concentrações urinárias de ureia e creatinina, diminuição da depuração de creatinina e aumento da excreção proteica no grupo DRC comparado aos grupos Controle e Sham. Na avaliação do córtex renal encontramos diminuição significativa da contagem glomerular, infiltrado inflamatório, atrofia tubular, glomeruloesclerose e fibrose intersticial. Na avaliação histológica glandular foi observado aumento significativo da contagem de ductos e diminuição de glicogênio na glândula SM. Na análise metabólica observamos a prevalência do fluxo glicolítico nas glândulas salivares. O estímulo salivar promoveu aumentos significativos na razão 12C-Lactato/12C-Alanina nos grupos Controle e Sham, com exceção do grupo DRC PA, onde em repouso se observou um aumento, comparando com os grupos Sham e Controle. No grupo DRC PA foram observadas diminuições significativas dos níveis de 12C-Alanina, 12C-Creatina e 12C-Glicose sem estímulo e aumento de 12C-Acetato com estimulo. No DRC SM detectaram-se aumento dos níveis de 12C-acetato e diminuição significativa da relação 13C3-Lactato/13C3-Acetato pós-estímulo indicativos de inibição do metabolismo oxidativo. Estas alterações nos níveis de metabólitos e suas razões, bem como nos níveis de enriquecimento 13C, denotam alterações profundas a nível metabólico nas glândulas salivares devido a DRC. Nas análises enzimáticas foram encontradas na glândula PA diminuições significativas das atividades da PFK-1 e LDH em relação ao grupo Controle e aumentos significativos da peroxidase e catalase comparado aos grupos Controle e Sham. Na glândula SM foi observada diminuição significativa na atividade enzimática da PFK-1 comparado ao grupo Controle. Além disso, foram observados aumentos significativos do conteúdo de MDA nas glândulas PA e SM e aumento significativo da concentração de sódio na glândula SM comparado aos grupos Controle e Sham. As modificações estruturais, metabólicas, oxidativas e iônica evidenciam a disfunção glandular na DRC e podem estar associadas às alterações salivares que caracterizam a doença. / Chronic kidney disease (CKD) promotes oral manifestations and salivary changes in patients, but few studies have evaluated the effects of this disease in the salivary glands. The aim of this study was to evaluate the effects of experimental chronic nephropathy in morphology, metabolism, oxidative stress and ionic concentrations in parotid (PA) and submandibular glands (SM) of rats. Experimental chronic nephropathy was induced by 5/6 nephrectomy (CKD group) and the results were compared with the Sham and Control groups at 12 weeks experimental period. The initial and final body weights, serum and urinary levels of urea and creatinine, creatinine clearance and protein excretion were evaluated. The morphology of the renal cortex was assessed by counting glomeruli in 30 fields x200 magnification per group, moreover, the presence of glomerulosclerosis and interstitial fibrosis in CKD group were also evaluated. The PA and SM histological evaluation was made by ducts count in 30 fields x400 magnification per group and assessment of fibrosis and glycogen in the glandular parenchyma. Metabolic analysis measured the effects of CKD and sympathetic and parasympathetic stimulation of salivation in glycolytic, oxidative and anaplerotic metabolic fluxes using infusions with [U-13C]Glucose or [1,6-13C2]Glucose, [2-13C]Glucose and [U-13C]Fatty acids, using high resolution proton (1H) and carbon 13 (13C) nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy of glandular extracts as detection technique of 13C incorporation in intermediary metabolites. Enzyme activities were measured: hexokinase [HK], 1-phosphofructokinase (PFK-1), pyruvate kinase (PK), lactate dehydrogenase (LDH), glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD), amylase, peroxidase and catalase. Furthermore, the malondialdehyde [MDA], glycogen content and calcium, phosphorus and sodium ionic concentrations were quantified. Significant decreases of final body weights, significant increases in serum concentrations and decreases in urinary concentrations of urea and creatinine, decreased creatinine clearance and increased protein excretion were observed in CKD group comparing with the Control and Sham groups. In the evaluation of the renal cortex, a significant decrease in glomerulus count, inflammatory infiltration, tubular atrophy, glomerulosclerosis and interstitial fibrosis were found. In glandular histological evaluation was observed a significant increase in the ducts count and reduced glycogen content in SM gland. Metabolic analysis revealed the prevalence of glycolytic flux in the salivary glands. The salivary stimulus promoted significant increases of 12C-Lactate/12C-Alanine ratio in the Control and Sham groups, except the DRC PA group, which at rest had an increase of the ratio compared to the sham and control groups. In DRC PA group significant decreases in the levels of 12C-Alanine, 12C-Creatine and 12C-Glucose without stimulation and increase of 12C-Acetate with stimulus were observed. In CKD SM were detected increased levels of 12C-acetate and significant decrease of the 13C-Lactate/13C-Acetate indicative of post-stimulus inhibition of oxidative metabolism. These changes in levels of metabolites and their ratios, as well as the enrichment levels 13C denote major changes at the metabolic level in salivary glands due to DRC. In the enzymatic analyzes, at DRC PA gland were found significant decreases of PFK-1 and LDH activities compared to the Control group and significant increases of peroxidase and catalase compared to control and Sham groups. In DRC SM gland was observed a significant decrease in the enzymatic activity of PFK-1 compared to Control group. In addition, significant increases in MDA content in PA and SM and significant increase in sodium concentration were observed in the SM compared to the control and Sham groups. Structural, metabolic, oxidative stress and ionic changes demonstrate the occurrence of glandular dysfunction in CKD, which might be associated with the salivary changes that characterize the disease.

Introdução: A saliva total (ST) além do produto das glândulas salivares estará acrescida de resíduos da descamação celular das mucosas oral, cavidade nasal, faringe; fluidos gengivais, leucócitos, bactérias, restos alimentares, hormônios, drogas e etc. Entre outras características está sua capacidade protetora e cicatrizante. Objetivo: Avaliar e verificar a atividade das enzimas, alfa amilase e peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais; pH e fluxo na ST não estimulada de recém nascido a termo (RNT) em aleitamento materno exclusivo. Casuística e Metodologia: As amostras salivares foram colhidas de 22 RNT em aleitamento materno exclusivo; do alojamento conjunto, do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU-USP), no período de setembro a outubro de 2017, após assinatura de termo de consentimento livre e esclarecido pelos responsáveis. Critérios de Inclusão: RNT saudáveis, em aleitamento materno exclusivo, com peso adequado para idade gestacional (AIG). Critérios de Exclusão: Portadores de doença sistêmica, Malformação Congênita, Doenças Neurológicas, Sepse neonatal, Distúrbios metabólicos de difícil correção (hipoglicemia refratária),Distúrbios hidroeletrolíticos, Distúrbios acido/básicos, Doenças hemolíticas, Infecções Congênitas do grupo ZTORCHS. Resultados: Verificamos a presença de todos os componentes do estudo (alfa amilase, peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais, pH e fluxo), em quantidade pequena, justificada pela imaturidade funcional das glândulas salivares, sem diferenças estatísticas entre elas. Verificamos para esta amostra diferenças estatisticamente significante quanto à: idade das mães de primeira gestação; a evolução das notas do índice Apgar de primeiro minuto para as notas do quinto minuto de vida extrauterina; como elemento mais significativo dos resultados, está a quantidade aumentada de alfa amilase para os recém nascidos de nota oito na índice de Apgar do primeiro minuto. Conclusão: A saliva total embora sofra modificações quantitativas e qualitativas com o crescimento desenvolvimento da criança, neste precoce período neonatal reflete não só seu caráter protetor e indiretamente imunológico; o funcionamento glandular; assim como através da quantidade aumentada de alfa amilase nos recém nascidos com nota oito do índice de Apgar, mostrando a ação do Sistema Nervoso Simpático e Parassimpático, uma vez que as glândulas salivares reagem de forma direta a seus estímulos / Introduction: The total saliva (TS) in addition to the salivary gland product will be increased by residues of the cellular desquamation of the oral mucosa, nasal cavity, pharynx; gingival fluids, leukocytes, bacteria, food debris, hormones, drugs, and so on. Among other characteristics is its protective and healing capacity. Objective: To evaluate and verify the activity of the enzymes, alpha amylase and peroxidases; sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins; pH and flow in the unstimulated ST of term newborn (TNF) in exclusive breastfeeding. Casuistry and Methodology: Salivary samples were collected from 22 TNF in exclusive breastfeeding; of the University Hospital of the University of São Paulo (HU-USP), from September to October 2017, after signing an informed consent form. Inclusion Criteria: RNT healthy, exclusively breastfed, with adequate weight for gestational age (AIG). Exclusion Criteria: Systemic disease carriers, Congenital malformation, Neurological diseases, Neonatal sepsis, Metabolic disorders of difficult correction (hypoglycemia refractory), Hydroelectrolytic disorders, Acid / basic disorders, Hemolytic diseases, Congenital infections of the ZTORCHS group. Results: We verified the presence of all components of the study (alpha amylase, peroxidases, sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins, pH and flow), in a small amount, justified by the functional immaturity of the salivary glands, without statistical differences between them . We verified for this sample statistically significant differences as to: the age of the mothers of first gestation; the evolution of the first-minute Apgar score notes to the fifth-minute notes of extrauterine life; as the most significant element of the results is the increased amount of alpha amylase for infants of note eight in the first minute Apgar score. Conclusion: Although total saliva undergoes quantitative and qualitative changes with the child\'s growth development, in this early neonatal period it reflects not only its protective and indirectly immunological nature; glandular functioning; as well as through the increased amount of alpha amylase in newborns with an eight note Apgar score, showing the action of the Sympathetic and Parasympathetic Nervous System, since the salivary glands react directly to their stimuli

Avaliamos a capacidade de indução de migração, invasão e secreção de protease pelo peptídeo derivado da laminina, C16 (KAFDITYVRLKF, cadeia g1) em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico humano. Laminina g1 foi imunolocalizada no carcinoma adenóide in vivo e in vitro. Ensaio de ferida, em câmara bipartite e em vídeo microscopia (time-lapse) mostraram que C16 estimula migração em células CAC2. C16 também estimulou invasão em ensaio com câmaras bipartites cobertas com Matrigel. Invasão depende de atividade de protease. Zimografia mostrou que C16 aumentou secreção de MMPs 2 e 9. Diferentes vias de sinalização podem estar relacionadas com os efeitos de C16. Immunoblot revelou que C16 aumentou a fosforilação de AKT e ERK. Para o estudo de possíveis receptores do peptídeo, preparações de membrana foram passadas em colunas de afinidade com C16 acoplado. Banda de 40kDa foi eluída e analisada por espectrometria de massa (LC-MS/MS) que identificou a cadeia a1 do colágeno. O fragmento de colágeno eluído poderia ser parte de um complexo protéico envolvendo C16. Integrinas são receptores de colágeno e candidatas a fazerem parte desse complexo. Células CAC2 expressaram as integrinas av, a5, b3 and b1. Silenciamento dessas integrinas promoveu redução da migração e secreção de protease induzidas por C16. Sugerimos que C16 estimularia migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma adenóide cístico através de integrinas a5b1 e avb3. O sinal gerado por C16 seria transduzido pelas vias AKT e ERK1/2. / We studied induction of migration, invasion and protease activity by laminin-derived peptide C16 (KAFDITYVRLKF, g1 chain) in a cell line (CAC2) from adenoid cystic carcinoma. Laminin g1 was immunolocalized in adenoid cystic carcinoma in vivo and in vitro. C16 increased migratory activity of CAC2 cells, as shown by monolayer wound assay, Transwell migration assay and time-lapse video microscopy. This peptide also stimulated cell invasion in Transwell chambers coated with Matrigel. Invasion depends on protease activity. Zymograms showed that C16 increased secretion of MMPs 2 and 9. Different signaling pathways could be related to C16 regulation in CAC2 cells. Immunoblot showed that C16 increased phosphorylation of both AKT and ERK compared to controls. To study putative receptors of this peptide we used affinity chromatography. Membrane preparations were run through C16-affinity columns. A 40kDa band was eluted and analyzed by mass spectrometry (LC-MS/MS) identifying a collagen a1 chain. The collagen fragment eluted could be part of a protein complex involving C16. This protein complex may include integrins, which are collagen receptors. CAC2 cells exhibited av, a5, b3 and b1 integrins. siRNA knockdown of these integrins inhibited both C16-induced migration and protease activity. We propose that C16 increases migration, invasion and protease activity of a human salivary gland adenoid cystic carcinoma cell line through a5b1 and avb3 integrins. The signal generated by C16 is transduced by AKT and ERK1/2 signaling pathways.

INTRODUÇÃO: Xerostomia é um sintoma comum relacionado a diversas doenças e faz parte da complexa exocrinopatia que afeta glândulas salivares na síndrome de Sjögren (SS). Sintomas similares são encontrados em outras doenças crônicas auto-imunes, incluindo o lúpus eritematoso (LE). O principal achado histopatológico na SS é a infiltração linfocitária que destrói o epitélio ductal levando à atrofia glandular. No LE, alterações das glândulas salivares são raramente relatadas, e tem sido comumente associadas com a SS pela maioria dos autores. OBJETIVOS: Analisar e comparar as alterações histopatológicas e de imunofluorescência direta (IFD) das glândulas salivares menores de doentes com xerostomia e diagnóstico de LE ou SS. MÉTODO: No período de março de 2007 a março de 2009, 56 doentes (29 com diagnóstico de LE e 27 com SS) acompanhados na Divisão de Dermatologia e/ou de Reumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), foram avaliados. Todos os doentes apresentavam em comum a queixa de xerostomia e foram submetidos a biopsia das glândulas salivares labiais. Os espécimes foram submetidos a estudo histopatológico e de IFD. Todos os doentes foram também avaliados quanto ao uso de medicações, dados clínico-demográficos, comorbidades e duração dos sintomas. RESULTADOS: Dos 56 doentes examinados, 54 eram mulheres e apresentavam idades de 16 a 77 anos. Nas glândulas salivares de doentes com SS, observou-se, principalmente, sialadenite linfocítica moderada a intensa, com expressiva agressão ductal, fibrose e atrofia glandular. A intensidade da agressão tecidual correlacionou-se com a duração da SS. Nos doentes com LE, evidenciou-se sialadenite crônica leve na maioria dos casos acompanhada de espessamento e hialinização da membrana basal ductal e infiltrado linfocitário perivascular. A presença deste infiltrado correlacionou-se com a duração do LE. O exame de IFD revelou que 11 (41%) dos 27 doentes com SS apresentaram depósitos de IgA intercelulares no epitélio ductal. Os doentes com SS que demonstraram destruição glandular maciça (52%,n=14), apresentaram IFD negativa. Dezoito (62%) dos 29 doentes com LE apresentaram depósitos homogêneos de IgG na membrana basal dos ductos glandulares. CONCLUSÃO: As alterações histopatológicas e de IFD nas glândulas salivares de doentes com SS e LE são distintas. Na SS observa-se fundamentalmente infiltração linfocitária com agressão ductal e deposição de IgA, enquanto que no LE, a alteração principal é a hialinização da membrana basal ductal e deposição de IgG. Esses dados indicam que o envolvimento das glândulas salivares no LE é uma alteração específica da doença sialadenite lúpica, refletindo uma apresentação multissistêmica da mesma, sendo, portanto, inadequada a classificação dessas alterações como SS associada ao LE. / Background: Xerostomia is a symptom that can be triggered by chronic diseases such as Sjögren\'s syndrome (SS) and lupus erythematosus (LE). Many authors accredit most cases of salivary hypofunction in LE to secondary SS. Others believe that salivary changes in patients with LE might reflect a multisystem presentation of the disease. The present study compared histopathological and direct immunofluorescence (DIF) alterations in salivary glands of patients with xerostomia and diagnosis of LE or SS. Methods: From march of 2007 to march of 2009, in Hospital das Clínicas of São Paulo University, fifty-six salivary gland biopsies from patients with xerostomia and diagnosed with LE or SS were submitted to histopathological and DIF exams. Other clinical information was evaluated such as comorbidities and use of medication. Additionally, the patients were enquired about disease and dry mouth symptom duration. Results: From the 56 patients, 54 were women. Patients ages ranged from 16 to 77 years old. Twenty-seven had SS and 29 had LE. In SS, there was moderate to intensive sialadenitis, with infiltration and destruction of excretory salivary ducts. In LE, mild to moderate sialadenitis with thickening and hyalinization of the ductal basement membrane and perivascular lymphocytic infiltration were observed. DIF revealed that 41% (n=11) of SS patients presented intercellular ductal IgA deposits, whereas 62% (n=18) of LE patients demonstrated deposits of IgG in the ductal basement membrane. In 14 cases of SS, an intense glandular fibrosis was observed in histopathology and these cases were negative for all immunoglobulins in DIF. Conclusions: Taken together, the most important of our results indicate that alterations in minor salivary glands of patients with LE and SS are distinct both in their histopathological and immunofluorescence aspects. This reveals different mechanisms of xerostomia in these conditions. Salivary gland alterations in LE patients may be a specific manifestation of the LE process (lupus sialadenitis), reflecting its multisystemic presentation, instead of an association of secondary SS and LE.

Introdução: A saliva total (ST) além do produto das glândulas salivares estará acrescida de resíduos da descamação celular das mucosas oral, cavidade nasal, faringe; fluidos gengivais, leucócitos, bactérias, restos alimentares, hormônios, drogas e etc. Entre outras características está sua capacidade protetora e cicatrizante. Objetivo: Avaliar e verificar a atividade das enzimas, alfa amilase e peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais; pH e fluxo na ST não estimulada de recém nascido a termo (RNT) em aleitamento materno exclusivo. Casuística e Metodologia: As amostras salivares foram colhidas de 22 RNT em aleitamento materno exclusivo; do alojamento conjunto, do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU-USP), no período de setembro a outubro de 2017, após assinatura de termo de consentimento livre e esclarecido pelos responsáveis. Critérios de Inclusão: RNT saudáveis, em aleitamento materno exclusivo, com peso adequado para idade gestacional (AIG). Critérios de Exclusão: Portadores de doença sistêmica, Malformação Congênita, Doenças Neurológicas, Sepse neonatal, Distúrbios metabólicos de difícil correção (hipoglicemia refratária),Distúrbios hidroeletrolíticos, Distúrbios acido/básicos, Doenças hemolíticas, Infecções Congênitas do grupo ZTORCHS. Resultados: Verificamos a presença de todos os componentes do estudo (alfa amilase, peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais, pH e fluxo), em quantidade pequena, justificada pela imaturidade funcional das glândulas salivares, sem diferenças estatísticas entre elas. Verificamos para esta amostra diferenças estatisticamente significante quanto à: idade das mães de primeira gestação; a evolução das notas do índice Apgar de primeiro minuto para as notas do quinto minuto de vida extrauterina; como elemento mais significativo dos resultados, está a quantidade aumentada de alfa amilase para os recém nascidos de nota oito na índice de Apgar do primeiro minuto. Conclusão: A saliva total embora sofra modificações quantitativas e qualitativas com o crescimento desenvolvimento da criança, neste precoce período neonatal reflete não só seu caráter protetor e indiretamente imunológico; o funcionamento glandular; assim como através da quantidade aumentada de alfa amilase nos recém nascidos com nota oito do índice de Apgar, mostrando a ação do Sistema Nervoso Simpático e Parassimpático, uma vez que as glândulas salivares reagem de forma direta a seus estímulos / Introduction: The total saliva (TS) in addition to the salivary gland product will be increased by residues of the cellular desquamation of the oral mucosa, nasal cavity, pharynx; gingival fluids, leukocytes, bacteria, food debris, hormones, drugs, and so on. Among other characteristics is its protective and healing capacity. Objective: To evaluate and verify the activity of the enzymes, alpha amylase and peroxidases; sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins; pH and flow in the unstimulated ST of term newborn (TNF) in exclusive breastfeeding. Casuistry and Methodology: Salivary samples were collected from 22 TNF in exclusive breastfeeding; of the University Hospital of the University of São Paulo (HU-USP), from September to October 2017, after signing an informed consent form. Inclusion Criteria: RNT healthy, exclusively breastfed, with adequate weight for gestational age (AIG). Exclusion Criteria: Systemic disease carriers, Congenital malformation, Neurological diseases, Neonatal sepsis, Metabolic disorders of difficult correction (hypoglycemia refractory), Hydroelectrolytic disorders, Acid / basic disorders, Hemolytic diseases, Congenital infections of the ZTORCHS group. Results: We verified the presence of all components of the study (alpha amylase, peroxidases, sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins, pH and flow), in a small amount, justified by the functional immaturity of the salivary glands, without statistical differences between them . We verified for this sample statistically significant differences as to: the age of the mothers of first gestation; the evolution of the first-minute Apgar score notes to the fifth-minute notes of extrauterine life; as the most significant element of the results is the increased amount of alpha amylase for infants of note eight in the first minute Apgar score. Conclusion: Although total saliva undergoes quantitative and qualitative changes with the child\'s growth development, in this early neonatal period it reflects not only its protective and indirectly immunological nature; glandular functioning; as well as through the increased amount of alpha amylase in newborns with an eight note Apgar score, showing the action of the Sympathetic and Parasympathetic Nervous System, since the salivary glands react directly to their stimuli