Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3355723 bytes, checksum: 62b4b87ccb61cdcbdc48ea8e77a66ee5 (MD5) Previous issue date: 2012-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bronze bug Thaumastocoris peregrinus Carpintero & Dellapé (Hemiptera: Thaumastocoridae) is a pest of Corymbia and Eucalyptus species and there are no effective strategies for its control in commercial plantations. Biological data of insects of the family Thaumastocoridae are scarce, mainly with species of the subfamily Xylastodorinae. Morphological studies of eggs and digestive and reproductive systems can provide important information to control T. peregrinus. This study described the morphology of eggs, salivary glands, alimentary canal and reproductive systems of males and females T. peregrinus. Thirty females and fifteen males of T. peregrinus with different ages were obtained from a mass rearing facility in a room with temperature at 25 ± 2ºC, 70 ± 10% RH and 12 h photophase and prepared for analysis in a light microscopy. Eggs of T. peregrinus were obtained from the mass rearing facility, coated with gold and analyzed in a scanning electron microscope. Thaumastocoris peregrinus has a pair of bilobed principal salivary glands located between the segments of the meso- and metathorax. The wall of the lobes is formed by a single layer of cubic cells with some of them binucleate. Each gland has a main duct formed by a single layer of flattened cells. The alimentary canal of T. peregrinus has a short faringe followed by a long and thin esophagus that ends in a simple proventriculus and a short estomodeal valve. The midgut of T. peregrinus comprises an anterior dilated region without gastric cecae, a long and narrow middle region and a short and dilated posterior one. The hindgut is composed by a transition region with the midgut where the insertion of two pairs of Malpighian tubules occurs, a short ileum and a rectum with a folded epithelial wall, thick cuticle and flattened cells. The male reproductive system of T. peregrinus is formed by a pair of testa with three large and globular follicles isolated by a peritoneal sheath and two pairs of tubular mesadenian accessory glands well developed. The female reproductive system of T. peregrinus is formed by a pair of ovaries with two meroistic telotrophic ovarioles each. The ovarioles open into two long lateral oviducts that join into a short common oviduct. The common oviduct ends in a large bursa copulatrix with many folds and both are lined by a thick cuticle. Eggs with embryos at the stages of anatrepsis, katatrepsis and also after the dorsal closure were observed in the reproductive tract of T. Peregrinus females. Eggs of T. peregrinus are oval-shaped and flattened dorso-ventrally with a strong depression in the center and black colored. The chorion of the egg is divided into exochorion, endochorion, air layer and an inner chorionic layer. The outer surface of the exochorion lacks perforations or pores and showed shallow and elongated depressions that were more circular in the posterior region of the egg. The opercular opening is located laterally in the eggs of T. peregrinus with the neck region showing around 27 circular and concave projections that appear to be aeromicropyles, reduced chorionic rim and a narrow sealing bar internally. The operculum is elliptical and flattened and has the same texture as the rest of the corium, except for the smooth texture of the outer opercular region. Thaumastocoris peregrinus has digestive and reproductive systems similar to other species of Thaumastocoridae, but the external characteristics of the eggs of this species differ from others of the same family. Studies of a larger number of species can contribute to the knowledge and importance of the structures evaluated for identifications at the level of subfamily, genus or species and to understand the phylogenetic relationships of Thaumastocoridae. / O percevejo bronzeado Thaumastocoris peregrinus Carpintero & Dellapé (Hemiptera: Thaumastocoridae) é praga de espécies de Corymbia e Eucalyptus e não existem estratégias eficientes para seu controle em plantios comerciais. Dados biológicos de insetos da família Thaumastocoridae são escassos, sendo, principalmente,com espécies da subfamília Xylastodorinae. Estudos morfológicos dos ovos e sistemas digestivo e reprodutor podem fornecer informações para o controle de T. peregrinus. Este estudo descreveu a morfologia dos ovos, das glândulas salivares, do canal alimentar e dos sistemas reprodutores de machos e fêmeas de T. peregrinus. Trinta fêmeas e quinze machos de T. peregrinus com diferentes idades foram obtidos de criação massal em sala climatizada à temperatura de 25 ± 2oC, 70 ± 10% de UR e fotofase de 12 horas e preaparados para análise em microscópio de luz. Ovos de T. peregrinus foram obtidos da criação massal, metalizados com ouro e analisados em microscópio eletrônico de varredura. Thaumastocoris peregrinus possui um par de glândulas salivares principais bilobadas entre os segmentos do meso e metatórax. As paredes dos lóbulos são formadas por uma camada simples de células cúbicas sendo algumas binucleadas. Cada glândula possui um ducto principal formado por uma camada simples de células achatadas. O canal alimentar de T. peregrinus é formado por uma faringe curta seguida por um esôfago longo e fino terminando em um proventrículo simples e uma válvula estomodeal curta. O intestino médio de T. peregrinus é composto por uma região anterior dilatada e sem cecos gástricos, uma região mediana longa e estreita e outra posterior curta e dilatada. O intestino posterior é composto por uma região de transição com o intestino médio onde ocorre a inserção de dois pares de túbulos de Malpighi, um curto íleo e um reto com parede epitelial com grande quantidade de dobras, cutícula espessa e células achatadas. O sistema reprodutor masculino de T. peregrinus é formado por um par de testículos com três folículos grandes e globulares isolados por uma bainha peritoneal e dois pares de glândulas acessórias mesadênias tubulares e bem desenvolvidas. O sistema reprodutor feminino de T. peregrinus é formado por um par de ovários com dois ovaríolos cada do tipo meroístico telotrófico. Os ovaríolos abrem-se em dois ovidutos laterais longos que se unem em um oviduto comum curto. O oviduto comum termina em uma bursa copulatrix ampla e com diversas dobras e ambos são revestidos por uma cutícula espessa. Ovos com embriões nos estágios de anatrepsis, catatrepsis e após o fechamento dorsal foram observados no trato reprodutivo de fêmeas de T. peregrinus. A forma dos ovos de T. peregrinus é oval e achatada dorso-ventralmente com forte depressão no centro e coloração preta. O cório do ovo é dividido em exocório, endocório, camada de ar e camada coriônica interna. A superfície externa do exocório apresentou depressões pouco profundas e alongadas ou com formato mais circular na região posterior do ovo sem perfurações ou poros. A abertura opercular é localizada lateralmente no ovo de T. peregrinus com a região do colo apresentando em torno de 27 projeções circulares côncavas que parecem ser aeromicrópilas, borda corial reduzida e, internamente, uma faixa de vedação estreita. O opérculo é elíptico e achatado e apresenta textura semelhante ao restante do cório, exceto pela textura lisa da região mais externa. Thaumastocoris peregrinus possui sistemas digestivos e reprodutor semelhantes a outras espécies de Thaumastocoridae, mas as características externas dos ovos diferiram das demas espécies dessa família. Estudos de um maior número de espécies poderão contribuir para o conhecimento e importância das estruturas avaliadas para identificações em nível de subfamília, gênero ou espécie e se compreender as relações filogenéticas de Thaumastocoridae.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4318879 bytes, checksum: f450e68114fd05e0f6ffba1575a94555 (MD5) Previous issue date: 2007-10-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The subfamily Asopinae presents a large number of predatory species, including Podisus distinctus (Stal) (Heteroptera: Pentatomidae) as one of the main species of this genus. These insects can be reared in laboratory and it presents potential for biological control of Lepidoptera defoliators in Brazilian eucalyptus plantations. This study aimed to describe the egg development (postdeposition dynamic), the immature stages (eggs and nymphs) and the midgut and salivary glands morphology of P. distinctus. This species presented eggs with oval to subglobe form, base narrower than the apex; convex circular operculum; 1.09 ± 0,03mm height; 0.90 ± 0.04mm diameter; clavated aeromicropilar processes in a circular row in the egg anterior pole, in number of 16.00 ± 2.00. The eggs of P. distinctus are similar to other species of the genus Podisus, but aspects as color, form, number of aero-micropilar processes, size and diameter can be used to differentiate them. Postdeposition alterations were observed on eggs of P. distinctus after one hour of being laid such as the change on orientation of the spines and aero-micropilar processes. The instars of P. distinctus can be identified based on characteristics presented by them, as number, arrangement and disposition of the abdominal stains and also, morphological characteristics, as total length (measured in the body medium line). Morphometric parameters as the width of the head at the eyes level and the pronotum length can also be used to identify the nymph stadiums. The recognition and differentiation of Asopinae species are easier after the third stadium when form and dorsolateral stains are more distinctive. However, the color is not a reliable character for this. Salivary glands complex and the midgut of P. distinctus are similar to those of other Asopinae species. The salivary system of P. distinctus is formed by a pair of principal bilobades glands and a pair of long and tubular accessory glands. The last one arise from the terminal portion of the accessory duct that suffers a camber. The P. distinctus principal salivary glands presents spherical and smaller anterior lobe than the posterior lobe, which has a prolonged sack form and dilated proximal portion. The P. distinctus midgut wall is formed by a simple layer of columnar cells externally covered by a well developed muscle layer, organized in a tunic composed by overlaid longitudinal and circular muscles. Podisus distinctus also present a bundle of longitudinal muscles along the whole midgut extension. / A subfamília Asopinae apresenta grande número de espécies predadoras, como Podisus distinctus (Stal) (Heteroptera: Pentatomidae), que se destaca como uma das principais desse gênero. Estes podem ser criados em laboratório e apresentam potencial para o controle biológico de lepidópteros desfolhadores em plantações de eucalipto no Brasil. Esse estudo objetivou descrever o desenvolvimento dos ovos (aspectos de formação e dinâmica pós- deposicional), os estágios imaturos (ovos e ninfas) e a morfologia do intestino médio e das glândulas salivares de P. distinctus. Essa espécie apresentou ovos com forma subglobosa a oval, base mais estreita que o ápice; opérculo circular convexo; altura de 1,09 ± 0,03mm; diâmetro de 0,90 ± 0,04mm; processos aero-micropilares clavados, em fileira circular no pólo anterior do ovo, em número de 16,00 ± 2,00. Os ovos de P. distinctus são semelhantes aos de outras espécies do gênero Podisus, mas aspectos como a cor, forma, número de processos aero-micropilares, tamanho e diâmetro dos mesmos, podem ser utilizados para diferenciá-las. Foram observadas alterações pós-deposicionais nos ovos de P. distinctus após uma hora de postura, como a mudança de orientação dos espinhos e dos processos aero-micropilares. Os estádios de P. distinctus podem ser identificados contrastando características apresentadas entre os mesmos, como o número, arranjo e a disposição das manchas abdominais dorsais e também, avaliando características morfométricas, como o comprimento total, medido na linha mediana do corpo. Parâmetros morfométricos como a largura da cabeça ao nível dos olhos e o comprimento do pronoto, podem ser utilizados em auxílio na identificação dos estádios. O reconhecimento e a diferenciação de espécies de Asopinae são facilitados a partir do terceiro estádio, quando forma e manchas dorso-laterais são características. Entretanto, a coloração não é um caracter confiável. O complexo de glândulas salivares e o intestino médio de P. distinctus são semelhantes aos de outros Asopinae. O sistema salivar de P. distinctus é formado por um par de glândulas salivares principais bilobadas e por um par de glândulas acessórias longas e tubulares. As glândulas acessórias de P. distinctus originam-se na porção terminal do ducto acessório, que sofre um abaulamento. As glândulas salivares principais de P. distinctus possuem o lóbulo anterior esférico, menor que o lóbulo posterior, que apresenta forma de saco alongado e porção proximal dilatada. A parede do intestino médio de P. distinctus é formada por uma camada simples de células colunares, revestida externamente por uma camada muscular bem desenvolvida, organizada em uma túnica externa composta por músculo longitudinal e outra interna, de músculo circular. Podisus distinctus apresentou ainda, um feixe de músculos longitudinais justapostos que segue por toda a extensão do intestino médio.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T14:13:01Z No. of bitstreams: 1 Melissa Moura Costa Abbehuden Imunização...2015.pdf: 2688379 bytes, checksum: ee3a425f3866123bc591a289919d408a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T14:13:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Melissa Moura Costa Abbehuden Imunização...2015.pdf: 2688379 bytes, checksum: ee3a425f3866123bc591a289919d408a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T14:13:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melissa Moura Costa Abbehuden Imunização...2015.pdf: 2688379 bytes, checksum: ee3a425f3866123bc591a289919d408a (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / As interações entre flebótomo, parasita e hospedeiro desempenham um papel importante na transmissão da leishmaniose. As moléculas provenientes do vetor são relevantes para estas interações e incluem as proteínas da saliva e do intestino médio. Nos flebótomos, as Leishmanias passam por um ciclo de desenvolvimento complexo dentro do intestino médio sob a proteção da matriz peritrófica, necessário para a geração de formas metacíclicas infectantes. As Leishmanias são transmitidas pelos flebótomos que co-injetam parasitas juntamente com a saliva, na derme do hospedeiro. Estudos anteriores demonstraram que a imunização de cães com duas proteínas salivares (LJM17 ou LJL143) de L. longipalpis, resultaram em uma imunidade mediada por células Th1 sistêmica e local afetando a sobrevivência do parasita in vitro. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade conferida pela imunização de cães com DNA e rCanarypoxvirus expressando o gene que codifica para as proteínas salivares de L. longipalpis (LJM17 e/ou LJL143). A imunização com ambas LJL143 e/ou LJM17 induziu uma forte resposta imune humoral. A produção específica do IFN-γ foi observada apenas nas CMSP dos grupos imunizados estimuladas com a proteína. Trinta dias após a última imunização, os cães foram desafiados por via intradérmica com 107 de L. infantum na presença de saliva de L. longipalpis, e a infecção foi detectada no segundo mês após o desafio em todos os grupos. Os cães imunizados com a LJM17 apresentaram maior produção de IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-7, IL-15, IL-18, TNF-α, IP-10 e GM-CSF durante a infecção quando comparados com os controles, indicando que o efeito da imunização induzida por LJM17 persistiu mesmo após o desafio. Adicionalmente, diversos estudos realizados no controle da malária, têm demonstrado o uso de antígenos provenientes do vetor para o desenvolvimento de vacinas bloqueadoras de transmissão. Esta estratégia altruísta de imunização visa criar anticorpos que interfiram no desenvolvimento do parasita no interior do vetor. Assim, na segunda etapa do nosso trabalho, foi testada em cães uma estratégia de imunização utilizando uma proteína extraída do intestino médio do L. longipalpis (Luloper1) para induzir a produção de anticorpos em cães saudáveis e infectados e a interrupção da transmissão no flebótomo. Dessa forma, a imunização de cães saudáveis não infectados ou infectados assintomáticos induziu uma potente produção de anticorpos, porém nenhum efeito de bloqueio de transmissão foi detectado em flebótomos alimentados com o sangue desses animais contendo promastigotas de L. infantum. / Sand fly, parasite, host interactions play an important role in the transmission of leishmaniasis. Vector molecules are relevant for such interactions and include midgut and salivary proteins. In vector sand fly species, Leishmania parasites undergo a complex developmental cycle within the midgut, protected by the peritrophic matrix that is necessary for generation of infectious metacyclics. Leishmania parasites are transmitted by sand flies that co-inject parasites and saliva, in the host’s skin. Previous studies showed immunization of dogs with two proteins (LJM17 or LJL143) from Lutzomyia longipalpis, resulted in a systemic and local Th1 cell-mediated immunity affecting parasite survival in vitro. In this work we evaluated the immunity conferredbyimmunization of dogs with DNA and recombinant Canarypoxvírusexpressing the gene encoding the salivary ofL.longipalpis (LJM17and/orLJL143). Immunization with both LJL143 and LJM17 induced a strong specific humoral response. Specific production of IFN-γ was observed only in protein stimulated PBMC immunized groups. Thirty days after last immunization, dogs were challenged intradermally with 107L. infantum in the presence of L. longipalpis saliva and infection was detected in the second month after challenge in all the groups. It was observed that dogs immunized with LJM17 presented higher IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-7, IL-15, IL-18, TNF-α, IP-10 and GM-CSF production during infection when compared with controls, indicating that the effect of immunization induced by LJM17 persisted even after challenge. Adittionally, previous studies, mostly with malaria control, have shown the use of several vector antigens for the development of transmission blocking vaccines. This altruist strategy of immunization aims to raise antibodies that could affect the development of the parasite inside the vector. Thus, in the second stage of our work we tested in dogs an immunization using a protein extracted from L. longipalpis midgut (Luloper1) to evaluate antibodies production in healthy and infected dogs and the interruption of transmission in the sand fly. Immunization of either healthy non infected or asymptomatic infected dogs induced a potent antibodies production, but no blocking transmission effect was detect in sand flies fed with blood of these animals containing L. infantum promastigotes

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29Bitstream added on 2014-06-13T19:15:37Z : No. of bitstreams: 1 martins_lg_me_sjc.pdf: 695176 bytes, checksum: fb089e33ad4b62aa9c5866bfb90390b7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A ação de beta-bloqueadores na melhoria da qualidade óssea e sua ação anti-inflamatória embasam a hipótese de que a modulação simpática pode influenciar a evolução da doença periodontal (DP). Estudos demonstram relação entre disfunção salivar e DP; no entanto, os efeitos da DP nas glândulas salivares, cuja secreção é controlada pelo sistema nervoso autônomo, são pouco estudados. Objetivou-se analisar os efeitos do bloqueio e da ativação de receptores beta-adrenérgicos na reabsorção alveolar na DP em ratos, assim como os efeitos da DP, associada ou não a tratamento adrenérgico, nas glândulas salivares. Foram utilizados 40 ratos divididos em quatro grupos: (1) Grupo Propranolol 0,1mg/Kg com indução de DP; (2) Grupo Isoproterenol 0,75mg/Kg e DP; (3) Grupo Controle sem DP, com administração solução fisiológica ; (4) Grupo Controle com DP, com administração solução fisiológica. Depois de 14 dias de tratamento, ocorreu a eutanásia. Removeram-se as hemimandíbulas e as glândulas submandibulares e sublinguais para análise. O suporte e a perda óssea alveolar foram determinados radiográfica e macroscopicamente. As glândulas foram pesadas, medidas e submetidas à preparação de rotina para coloração com hematoxilina e eosina e Alcian Blue. Avaliou-se histomorfometricamente a área de ácinos, ductos e a vacuolização celular. Após estatística (p<0,05), verificou-se menor suporte e maior perda alveolar na presença de ligadura e maior perda alveolar em animais com tratados com isoproterenol. O isoproterenol aumentou significantemente peso e dimensões glandulares, reduziu área ductal e vacuolização, e aumentou área acinar na submandibular. Propranolol apenas reduziu vacuolização em relação ao controle com DP, e as demais comparações não foram estatisticamente significantes... / The action of beta-blockers in the improvement of bone quality and their anti-inflammatory actions base the hypothesis that sympathetic nervous system modulation can influence periodontal disease (PD). Studies demonstrate a relationship between salivary dysfunction and PD; however, there are few studies about the effects of PD in salivary glands, whose secretion is controlled by the autonomic nervous system. The aim of this study was to analyze the effects of the blockade and of the activation of beta-adrenergic receptors in alveolar resorption in PD in rats, as well as the effects of PD, associated or not to adrenergic treatment, in salivary glands. Forty rats were divided into four groups: (1) group Propranolol 0.1mg/Kg with PD induction; (2) group Isoproterenol 0.75mg/Kg and PD; (3) group Control without PD, which received saline; (4) group Control with PD, which also received saline. After 14 days of treatment, euthanasia occurred. Hemimandibles and submandibular and sublingual glands were removed for analysis. Alveolar bone support and alveolar bone loss were evaluated by radiographic and macroscopic analysis. Gland weight and dimensions were measured, and then the samples were submitted to routine preparation for hematoxilin and eosin and Alcian blue stainings. Acinar and ductal area and cellular vacuolization were histomorphometrically evaluated. After statistical analysis (p <0.05), less alveolar bone support and larger alveolar loss were verified in animals with ligatures for PD induction and larger alveolar loss were also verified in rats treated with isoproterenol. Isoproterenol also increased significantly glandular weight, size and acinar area, and reduced ductal area and cellular vacuolization in submandibular glands. Group Propranolol presented less vacuolization than group Control with DP... (Complete abstract click electronic access below)

A morfogênese das glândulas salivares envolve eventos complexos e coordenados, dependentes da interação epitélio-mesênquima e do microambiente. Fatores de crescimento coordenam vários desses processos biológicos e o fator transformador de crescimento-beta (TGF-) mostra-se relevante. Utilizando imunoistoquímica e imunofluorescência, a distribuição do TGF-1, 2 e 3 foi mapeada e sua expressão comparada com a expressão de marcadores de maturação em glândulas salivares humanas obtidas de fetos que tinham entre 4ª e 24ª semanas de vida intra-uterina. O TGF-1 foi detectado durante a fase pseudoglandular no mesênquima. Nas outras etapas da diferenciação glandular esse fator foi expresso no citoplasma das células acinares até a glândula salivar adulta. O TGF-2 foi detectado desde o estágio de botão inicial da glândula salivar. Sua expressão foi observada nas células ductais e sua presença aumentada ao longo da diferenciação glandular. O TGF-3 foi visto durante a fase pseudoglandular das glândulas salivares, inicialmente fraco nas células ductais e foi o único detectado em células mioepiteliais. A troca de subunidades de TGF- durante a maturação das glândulas salivares sugere mudanças estimuladas durante os complexos estágios de desenvolvimento dessas glândulas. O presente estudo reafirma essa evidência, e mostra que as subunidades do TGF- são fatores importantes durante a diferenciação de glândulas salivares. / Morphogenesis of salivary glands involves complex coordinated events. Synchronization between cell proliferation, polarization and differentiation, which are dependent on epithelialmesenchymal interactions and on the microenvironment, is a requirement. Growth factors mediate many of these orchestrated biological processes and transforming growth factor-beta (TGF- ) appears to be relevant. Using immunohistochemistry and immunofluorescence, we have mapped the distribution of TGF- 1, 2 and 3 and compared it with the expression of maturation markers in human salivary glands obtained from fetuses ranging from weeks 4 to 24 of gestation. TGF- 1 first appeared during pseudoglandular stage in the surrounding mesenchyme and, in the more differentiated stages, was expressed in the cytoplasm of acinar cells throughout the adult gland. The TGF- 2 was detected since the bud initial stage of the salivary gland. Its expression was observed in ductal cells and increased along gland differentiation. The TGF- 3 was detected from the pseudoglandular stage of the salivary gland, being weakly expressed on ductal cells, and it was the only factor detected on myoepithelial cells. The data suggest that TGF- have a role to play in salivary gland development and differentiation.

Avaliamos a capacidade de indução de migração, invasão e secreção de protease pelo peptídeo derivado da laminina, C16 (KAFDITYVRLKF, cadeia g1) em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico humano. Laminina g1 foi imunolocalizada no carcinoma adenóide in vivo e in vitro. Ensaio de ferida, em câmara bipartite e em vídeo microscopia (time-lapse) mostraram que C16 estimula migração em células CAC2. C16 também estimulou invasão em ensaio com câmaras bipartites cobertas com Matrigel. Invasão depende de atividade de protease. Zimografia mostrou que C16 aumentou secreção de MMPs 2 e 9. Diferentes vias de sinalização podem estar relacionadas com os efeitos de C16. Immunoblot revelou que C16 aumentou a fosforilação de AKT e ERK. Para o estudo de possíveis receptores do peptídeo, preparações de membrana foram passadas em colunas de afinidade com C16 acoplado. Banda de 40kDa foi eluída e analisada por espectrometria de massa (LC-MS/MS) que identificou a cadeia a1 do colágeno. O fragmento de colágeno eluído poderia ser parte de um complexo protéico envolvendo C16. Integrinas são receptores de colágeno e candidatas a fazerem parte desse complexo. Células CAC2 expressaram as integrinas av, a5, b3 and b1. Silenciamento dessas integrinas promoveu redução da migração e secreção de protease induzidas por C16. Sugerimos que C16 estimularia migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma adenóide cístico através de integrinas a5b1 e avb3. O sinal gerado por C16 seria transduzido pelas vias AKT e ERK1/2. / We studied induction of migration, invasion and protease activity by laminin-derived peptide C16 (KAFDITYVRLKF, g1 chain) in a cell line (CAC2) from adenoid cystic carcinoma. Laminin g1 was immunolocalized in adenoid cystic carcinoma in vivo and in vitro. C16 increased migratory activity of CAC2 cells, as shown by monolayer wound assay, Transwell migration assay and time-lapse video microscopy. This peptide also stimulated cell invasion in Transwell chambers coated with Matrigel. Invasion depends on protease activity. Zymograms showed that C16 increased secretion of MMPs 2 and 9. Different signaling pathways could be related to C16 regulation in CAC2 cells. Immunoblot showed that C16 increased phosphorylation of both AKT and ERK compared to controls. To study putative receptors of this peptide we used affinity chromatography. Membrane preparations were run through C16-affinity columns. A 40kDa band was eluted and analyzed by mass spectrometry (LC-MS/MS) identifying a collagen a1 chain. The collagen fragment eluted could be part of a protein complex involving C16. This protein complex may include integrins, which are collagen receptors. CAC2 cells exhibited av, a5, b3 and b1 integrins. siRNA knockdown of these integrins inhibited both C16-induced migration and protease activity. We propose that C16 increases migration, invasion and protease activity of a human salivary gland adenoid cystic carcinoma cell line through a5b1 and avb3 integrins. The signal generated by C16 is transduced by AKT and ERK1/2 signaling pathways.

Infestações com Rhipicephalus microplus, o carrapato dos bovinos, causam enormes prejuízos econômicos para a pecuária. Os carrapatos estão desenvolvendo resistência aos carrapaticidas que, além dessa desvantagem, deixam resíduos em carne e leite. Vacinas anticarrapato representam uma alternativa sustentável de controle de infestações, mas as atualmente disponíveis têm efeitos parciais e transitórios. Surge, assim, a necessidade de identificar novos antígenos vacinais. Para alcançar esse objetivo este trabalho explora o fato de que bovinos apresentam fenótipos contrastantes e herdáveis de infestações que são específicos de certas raças. Além disso, o nível de imunidade do hospedeiro afeta a transcrição de genes de glândulas salivares do carrapato, órgão que produz proteínas que medeiam o parasitismo. A hipótese de trabalho é a que os diferentes níveis da imunidade anticarrapato do hospedeiro afetam, também, a composição salivar do parasita. Assim, em carrapatos alimentando-se em hospedeiros resistentes as proteínas que são cruciais ao parasitismo poderão estar ausentes ou deficientes na sua saliva e por isso os carrapatos não terminam sua refeição de sangue. A neutralização dessas mesmas proteínas pela imunidade humoral pode ter o mesmo efeito e por isso, essas proteínas constituem bons antígenos vacinais. Assim, o objetivo do trabalho foi identificar novos antígenos vacinais em saliva de fêmeas e glândulas salivares de ninfas, machos e fêmeas de carrapatos alimentados em hospedeiros resistentes e suscetíveis, bem como em larvas não alimentadas oriundas de ovos de fêmeas alimentadas nestes mesmos hospedeiros. Para isso, foram empregadas abordagens de sequenciamento de nova geração \"RNA-Seq\" (454) e abordagens proteômicas, como análise diferencial em gel (DIGE) e Western Blots (imunoproteoma) seguido de sequenciamento de massa, além da tecnologia de identificação de proteínas multidimensionais (ou Multidimensional Protein Identification Technology, MudPIT) para descrever o proteoma das glândulas salivares e da saliva de fêmeas. A análise transcriptômica resultou no sequencimanto de 1.999.086 reads que permitiu identificar e classificar 11.676 sequências codificadoras (CDS), muitas das quais (3.600 CDS) contêm peptídeo sinal que é indicativo de secreção, portanto podendo estar presente na saliva e Resumo Gustavo Rocha Garcia apresentar função importante na hematofagia. Por meio de MudPIT, identificamos 321 proteínas salivares diferentes, além de 126 proteínas no DIGE e 266 proteínas nos imunoproteomas. Muitas dessas proteínas podem ser consideradas antígenos potenciais por estarem associadas com a hematofagia/parasitismo, tais como proteases, nucleases, inibidores de proteases, peptídeos antimicrobianos, proteínas de fixação, entre outros, inclusive proteínas ainda não caracterizadas. A maioria dos genes codificantes dessas proteínas está mais expressa em carrapatos alimentados em hospedeiros suscetíveis, principalmente em carrapatos machos. Além disso, muitas dessas proteínas não são reconhecidas por soros bovinos, inclusive soros de bovinos infestados, embora soros de bovinos infestados e resistentes ao carrapato apresente a maioria das reatividades. O conjunto dos resultados sugere que em nível de proteína a composição da saliva também é afetada pelos diferentes níveis de imunidade dos hospedeiros, além de variar com o ciclo de vida do carrapato. Desse modo, concluímos que as estratégias de investigação empregadas foram satisfatórias para identificar um conjunto de antígenos salivares do carrapato R. microplus que representam proteínas alvos para compor vacinas multicomponentes anticarrapato. / Infestation with Rhipicephalus microplus, the cattle tick, causes huge economic losses to livestock. Ticks are developing resistance to acaricides that, besides this disadvantage, leave residues in meat and milk. The anti tick vaccines represent a sustainable alternative of the infestations control, but the currently available has partial and transient effects. Thus arises the need to identify new vaccine antigens. To achieve this goal, this work explores the fact that cattle exhibit contrasting phenotypes and inheritable of infestations that are specific to certain breeds. Furthermore, the level of immunity of the host affects gene transcription tick salivary gland, organ that produces proteins that mediate the parasitism. The working hypothesis is that different levels of anti tick immunity of host affect also the salivary composition of the parasite. So in ticks feeding on resistant hosts the proteins that are crucial to parasitism may be absent or deficient in their saliva, and by this the ticks do not finish your meal blood. The neutralization of these same proteins by humoral immunity can have the same effect and by this, these proteins are good vaccine antigens. So, the aim of the study was to identify new vaccine antigens in saliva from females and salivary glands of nymphs, males and females of ticks fed on resistant and susceptible hosts as well as in unfed larvae originating from eggs of females fed on these same hosts. To this, were employed sequencing approaches of new generation \"RNA-Seq\" (454) and proteomic approaches, such as differential analysis in gel (DIGE) and Western Blots (immunoproteomics) followed by sequencing mass, besides the Multidimensional Protein Identification Technology (MudPIT) to describe the proteome of the salivary glands and saliva of females. The transcriptomics analysis identified 11,676 coding sequences (CDS), many of which (3,600 CDS) contain predicted signal peptide indicative of secretion, therefore may be present in saliva and provide an important function in blood feeding. Through MudPIT, we identify 321 different salivary proteins, besides 126 proteins in DIGE and 266 proteins in immunoproteomics. Many of these proteins may be considered as potential antigens to be associated with the blood meal/ parasitism, such as proteases, nucleases, protease inhibitors, antimicrobial peptides, proteins of attachment, among Abstract Gustavo Rocha Garcia others, including proteins not yet characterized. Most of the genes encoding of these proteins are more expressed in ticks fed on susceptible hosts, especially in male ticks. Moreover, many of these proteins are not recognized by bovine sera, including sera from infested hosts, although sera from infested and resistant host to tick present the most reactivities. The overall results suggest that in protein level, the composition of saliva is also affected by the different levels of immunity of the host, besides vary with the tick life cycle. Thus, we conclude that the research strategies employed were satisfactory to identify a set of tick salivary antigens from R. microplus that represent target proteins for composing anti tick multicomponent vaccines.

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonfitto_VeraLuciaLeite_D.pdf: 2371427 bytes, checksum: 9766d47098dc3a0a8725d3d05732303e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A angiogênese induzida pelo tumor é o resultado não somente do balanço entre indutores e inibidores da angiogênese, mas também da demanda metabólica tumoral. Nos carcinomas salivares com diferenciação mioepitelial, a densidade microvascular (DMV) é mais baixa do que nos carcinomas sem tal diferenciação. Apesar do fenótipo antiangiogênico da célula mioepitelial, as razões para essa associação ainda não foram completamente esclarecidas. Com a finalidade de aumentar o conhecimento sobre os fenômenos envolvidos na vascularização de carcinomas salivares, analisamos a DMV em tumores de diferentes tipos e graus histológicos. Além disso, em carcinomas adenóides císticos (CAC) com transformação para alto grau (CAC-TAG) analisamos a expressão de proteínas relacionadas ao metabolismo celular e a DMV entre áreas convencionais e transformadas. Estes achados foram também comparados com aqueles encontrados no CAC clássico. Material e Métodos: Em 42 carcinomas salivares com diferenciação mioepitelial e em 56 sem tal diferenciação, a vascularização tumoral foi avaliada através da DMV em lâminas coradas pelo CD34 (marcador pan-endotelial) e pelo CD105 (marcador de neoangiogênese). Além disso, em 7 casos de CAC-TAG e em 18 CACs foram examinadas as expressões dos marcadores relacionados ao metabolismo celular: transportador de glicose transmembrana (GLUT1) e antígeno mitocondrial (AMT), e do Ki- 67 (para análise do índice de proliferação). Resultados: Somente a DMV-CD105 foi significantemente diferente entre os diferentes subgrupos de tumores. Os tumores de alto grau apresentaram DMV-CD105 significantemente aumentada em relação aos de baixo grau. Os carcinomas com diferenciação mioepitelial e o carcinoma de células acinares mostraram DMV-CD105 semelhantes. Nos CAC-TAG, o componente transformado caracterizava-se pela perda da camada mioepitelial e índice aumentado de Ki-67. As áreas convencionais do CAC-TAG e o CAC clássico foram negativas para GLUT1 na maioria dos casos (83,3% e 81,3%, respectivamente) e exibiam expressão baixa ou ausente de AMT (100% e 66,7% dos casos respectivamente). Em contraste, as áreas transformadas do CAC-TAG exibiam aumento da expressão de GLUT1 (50% dos casos) e de AMT (100%). No CAC-TAG, comparando a DMV entre áreas convencionais e transformadas não se notou alteração significante. Conclusões: Nos carcinomas salivares, as células mioepiteliais não aparentam desempenhar papel crucial na vascularização tumoral, a qual é influenciada por fatores não necessariamente relacionados à demanda metabólica e progressão tumoral. A correlação da neoangiogênese com grau histológico tumoral sugere que a agressividade do carcinoma salivar pode ser um dos fatores indutores, embora por mecanismos ainda não esclarecidos / Abstract: Tumor-induced angiogenesis is not only determined by the net balance between inductors and inhibitors but also by factors related to tumor metabolic demand. Salivary carcinomas with myoepithelial component have been reported to have a lower microvascular density (MVD) than others without such cells. Despite the anti-angiogenic phenotype of the myoepithelial cells, the reasons for this association remain unclear so far. To broaden our understanding of phenomena involved in vascularization of salivary carcinomas we analyzed the MVD in tumors of different histological types and grade. In addition, in adenoid cystic carcinomas (ACC) with high-grade transformation (ACC-HGT), the expression of proteins linked to cellular metabolism as well as MVD was compared between conventional and HGT areas. We also compared the findings with ordinary ACC. Material and Methods: In 42 salivary carcinomas with myoepithelial differentiation and 56 without, tumor vascularization was assessed by measuring MVD in CD34 (pan-endothelial marker) and CD105 (neoangiogenesis marker) stained sections. In addition, in seven cases of ACC-HGT and in 18 ACCs the expressions of GLUT1, mitochondrial antigen (MTA) and Ki-67 (for evaluation of proliferation index) were also examined. Results: Only CD105-MVD was significantly different among the different tumor subgroups. High-grade tumors showed significantly higher CD105-MVD. Carcinomas with myoepithelial differentiation and acinic cell carcinomas exhibited similar CD105-MVD. In ACC-HGT, loss of myoepithelial layer was found only in the HGT component, which also showed higher Ki-67 index. Conventional areas of both ACC-HGT and ACC were negative for GLUT1 in most cases (83.3% and 81.3%, respectively) and exhibited low or no expression of MTA (100% and 66.7% of cases respectively). In contrast, the HGT component presented increased expression of both proteins (GLUT1+ in 50% of cases; MTA+ in 100%). MVD did not differ significantly between conventional and HGT components. Conclusions: In salivary carcinomas, myoepithelial cells do not appear to play a pivotal role in tumor vascularization, which is influenced by factors not necessarily related to metabolic demand and carcinoma progression. The correlation between tumor degree and neoangiogenesis (MVD-CD105) suggests that carcinoma aggressiveness may be one of the inductors but the mechanisms remain to be clarified / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Kleber Fernando Pereira.pdf: 1118848 bytes, checksum: 4671bfd9ffd403997392e07dda224e2d (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The raccoon (Procyon cancrivorus) is a wild carnivore, reaching one meter in length including the tail, and weigh up to 10 kg. Known as raccoon or mouse naked hand washer has the peculiarity to dive in the water everything she eats. It has nocturnal and crepuscular, terrestrial and arboreal climber, a resident of shrub areas, preferably near water courses, is a good swimmer with great ability to dig, climb and is living alone. This thesis has generated the production of two articles. In the first article, entitled "Origin and anatomical distribution of the ischiatic nerve of raccoon", it was proposed to study the anatomy of the ischiatic nerve of raccoon in order to build morphological basis of this nerve with the aim of comparative neurology, and thus provide necessary support especially for the practices used in clinical medicine and surgery. The ischiatic nerve of the raccoon comes from the ventral ramus of the sixth and seventh nerves lumbar and first sacral nerve, resembling the origin of the guinea pig. Leaves the pelvic cavity through the greater ischiatic foramen, presenting themselves surrounded by the superficial gluteal muscles, biceps femoris and caudal crural abductor, this path similar to the dog and is distributed to the gluteus biceps, gluteus medius, gluteus deep, as well as observed in goats Saanen, and quadratus femoris muscles twin, resembling in dog, cat and pig, biceps femoris, semitendinosus, semimembranosus, observed in all specimens analyzed and adductor magnus, only observed raccoon. In all specimens are compared, the ischiatic nerve ends by bifurcating into the tibial and common peroneal nerve. In the second article, entitled "Morphological Aspects of the salivary glands of crab-eating raccoon (Procyon cancrivorus)" were described morphological aspects of salivary glands and their ducts located in Procyon cancrivorus and compare with literature data on the morphology of domestic and wild animals such as dogs, cats, skunks and raccoons. The salivary glands of the raccoon are formed by the parotid, mandibular, sublingual and zygomatic. The parotid gland shows irregular triangular shape and mandibular rounded contour is observed surrounded by a fibrous capsule. The sublingual is divided into two parts: a caudal part which lies in the region occiptomandibular the digastric muscle and the rostral part lies between the mucous membrane of the mouth and mylohyoid muscle with its respective duct. The zygomatic gland is small and rounded, situated in the rostral part of the pterygopalatine fossa. The anatomical knowledge of the origin and distribution of the ischiatic nerve and the morphology of the salivary glands when compared with bare hand domestic and wild animals, provides contributions to medicine and surgery in wild animals and for future studies on the general biology of the species. / O mão-pelada (Procyon cancrivorus) é um carnívoro silvestre, podendo chegar a 1 metro de comprimento incluindo a cauda, e pesar até 10 kg. Conhecido como guaxinim, mão-pelada ou rato lavador têm a peculiaridade de mergulhar na água tudo o que come. Possui hábito noturno e crepuscular, escalador arborícola e terrícola, habitante de áreas arbustivas, preferencialmente próximas a cursos de água, é um bom nadador com ótimas habilidades para cavar, escalar e tem vida solitária. A presente tese gerou a produção de dois artigos. No primeiro artigo, Origem e distribuição anatômica do nervo isquiático de mão-pelada , propôs-se estudar a anatomia do nervo isquiático de mão-pelada, a fim de assentar bases morfológicas deste nervo visando à neurologia comparativa, e assim fornecer subsídios necessários especialmente para as práticas utilizadas nas clínicas médica e cirúrgica. O nervo isquiático do mão-pelada origina-se do ramo ventral do sexto e sétimo nervos lombares e primeiro nervo sacral, assemelhando-se com a origem em preá. Deixa a cavidade pélvica através do forame isquiático maior, apresentando-se envolvido pelos músculos glúteo superficial, bíceps femoral e abdutor caudal crural, trajeto este semelhante com o cão e distribui-se para os músculos glúteo bíceps, glúteo médio, glúteo profundo, assim como observado em caprinos da raça Saanen, músculos quadrado femoral e gêmeo, assemelhando-se em cão, gato e suíno, músculos bíceps femoral, semitendíneo, semimembranáceo, observado em todos os espécimes analisadas e adutor magno, verificado apenas em mão-pelada. Em todos os espécimes comparados, o nervo isquiático termina bifurcando-se em nervo tibial e fibular comum. No segundo artigo, Morphological aspects of the salivary glands of crab-eating racoon (Procyon cancrivorus) foram descritos os aspectos morfológicos das glândulas salivares e a localização dos seus ductos em Procyon cancrivorus, e comparar com dados literários sobre a morfologia de animais domésticos e silvestres, como cão, gato, gambás e quatis. As glândulas salivares do mão-pelada são formadas pelas glândulas parótida, mandibular, sublingual e zigomática. A glândula parótida apresenta formato irregularmente triangular e a mandibular observa-se contorno arredondado circundada por uma cápsula fibrosa. A sublingual se divide em duas partes: uma parte caudal que se situa na região occiptomandibular do músculo digástrico e a parte rostral situa-se entre a túnica mucosa da boca e o músculo milo-hióideo com seu respectivo ducto. A glândula zigomática é pequena e arredondada, situada na parte rostral da fossa pterigopalatina. O conhecimento anatômico da origem e distribuição do nervo isquiático e da morfologia das glândulas salivares do mão-pelada, quando comparado com animais domésticos e silvestres, oferece contribuições para a clínica médica e cirúrgica em animais silvestres e para futuros estudos sobre a biologia geral da espécie.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:21:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao cintia f goncalves odontologia 2009.pdf: 430474 bytes, checksum: f21b41a1da7080f7f0755bb0019a8531 (MD5) Previous issue date: 2009-05-22 / Aims: Investigate the prognostic significance of cellular proliferation indexes and mucosecretional activity in Mucoepidermoid Carcinoma (MEC) of oral cavity minor salivary glands using the immunoexpression of the protein Ki-67 and the glycoprotein MUC1 in young people and adults, by correlating these markers to clinical and pathological parameters. Material and methods: From 1987 to 2007, 35 cases of MEC were diagnosed in minor salivary glands. Demographic clinical data were obtained from clinical records, the microscopic diagnosis was revisited and the specimens were reclassified in terms of histologic grading, according to the system used by Batsakis & Luna (1990). Qualitative and quantitative analyses of the expression of Ki-67 protein and MUC1 glycoprotein, obtained through immunohistochemistry, were correlated to the variables: age, gender and histologic grading. Results: The cases of MEC (n=35) were more frequently found in people over thirty (60%), with predilection for females (1.7:1) and occurred most frequently in the hard palate (54.3%). Of the cases studied, 42.9% were low grade, 37.1% intermediate and 20% high grade. A greater expression of Ki-67 was found for adults while the greater expression for young people was MUC1, although neither result was statistically significant (Ki-67 / P=0.44 e MUC1 / P=0.5). In addition no prognostic relation was seen between male and female, despite the greater expression of both markers for males (Ki-67 / P=0.58; MUC1 / P=0.4). In terms of histologic grading intermediate and high grade tumors presented a greater expression for both markers, but without any statistical significance (Ki-67 / P=0.18; MUC1 / P=0.6). Conclusions: MEC in minor salivary glands could present a tendency of lesser aggressiveness in younger patients when compared to adults; in females when compared to males, and in tumors of low histologic grade when compared to those of intermediate or high grade. Furthermore, this tumor may have a tendency to higher mucossecretory activity in young than in adults, in males than in females and in intermediate and high grade tumors. / Objetivos: Investigar a significância prognóstica dos índices de proliferação celular e da atividade mucossecretora no Carcinoma Mucoepidermóide (CME) de glândulas salivares menores de cavidade oral através da imunoexpressão da proteína Ki-67 e da glicoproteína MUC1 em indivíduos jovens e adultos, correlacionando-os aos parâmetros clínico-patológicos. Material e métodos: De 1987 a 2007, foram diagnosticados 35 casos de CME em glândulas salivares menores. Dados clínicos e demográficos foram obtidos dos prontuários, diagnóstico microscópico revisitado e os espécimes foram reclassificados, quanto à gradação histológica. Análises qualitativas e quantitativas da expressão da proteína Ki-67 e da glicoproteína MUC1, obtidas por imunoistoquímica, foram correlacionadas às variáveis: idade, gênero e gradação histológica, visando suas implicações prognósticas. Resultados: Os casos de CME (n=35) foram mais freqüentes em indivíduos acima dos 30 anos (60%), com predileção para o gênero feminino (1,7:1). O palato duro foi o sítio de maior ocorrência (54,3%). 42,9% foram de baixo grau; 37,1% intermediário e 20% alto grau. Foi observada uma maior expressão de Ki-67 para os adultos e de MUC1 para os jovens, embora, com resultados estatisticamente não significantes (Ki-67 / P=0,44 e MUC1 / P=0,5). Além disso, não foi observada relação prognóstica entre o gênero masculino e feminino, apesar da maior expressão de ambos marcadores para o gênero masculino (Ki-67 / P=0,58; MUC1 / P=0,4). Quanto à gradação histológica os tumores de grau intermediário e alto grau apresentaram maior expressão para ambos marcadores, embora, sem significância estatística (Ki-67 / P=0,18; MUC1 / P=0,6). Conclusões: O CME em glândula salivar menor pode apresentar tendência à menor atividade de proliferação celular no paciente jovem do que no adulto; no gênero feminino do que no gênero masculino, e em tumores de baixo grau histológico do que intermediário e alto grau. Além disso, este tumor pode apresentar tendência a maior atividade mucossecretora no indivíduo jovem que no adulto, no gênero masculino que no feminino e em tumores de intermediário e alto grau que em tumores de baixo grau histológico.