Os macrófagos são células fagocíticas derivadas dos monócitos sanguíneos produzidos pela medula óssea e estão diretamente envolvidos em um conjunto de processos biológicos vitais. Durante o repasto sanguíneo, fêmeas do mosquito Aedes aegypti inoculam saliva na pele de seu hospedeiro vertebrado e, devido sua localização estratégica nos tecidos, os macrófagos estão dentre as primeiras células residentes a ser exposta a saliva. Apesar dessa evidência fisiológica, pouco se sabe sobre os efeitos imunomoduladores da saliva desse mosquito sobre os macrófagos. Assim, o objetivo deste projeto foi avaliar o papel dos componentes salivares de A. aegypti em macrófagos murinos ativados por LPS+IFN-γ e o potencial efeito de uma proteína salivar no desenvolvimento da encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo experimental para estudo da esclerose múltipla. Em conclusão, o EGS de A. aegypti apresenta efeito imunomodulatório sobre macrófagos peritoneais ativados com LPS e IFN-γ. Além disso, nossos resultados sugerem que a proteína identificada com possível inibidor da IL-6 produzida por macrófagos ativados pode ser capaz de diminuir a polarização de respostas Th1 e Th17, afetando assim o desenvolvimento da EAE. / Macrophages are phagocytic cells derived from blood monocytes produced by the bone marrow and are directly engaged in a set of vital biological processes. During blood feeding, Aedes aegypti female mosquitoes inoculate saliva into the skin of their vertebrate hosts and, due to its strategic location in the tissues, macrophages are possibly among the first resident cells to be exposed to saliva. Despite this physiological evidence, little is known about the immunomodulatory effects of this mosquitos saliva on macrophages. Thus, the aim of this study was to evaluate the role of A. aegypti salivary components in LPS/IFN-γ-activated murine macrophages and the potential effect of a salivary protein on the development of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an experimental model for multiple sclerosis studies. In conclusion, A. aegypti SGE presents immunomodulatory effect on peritoneal macrophages activated by LPS/IFN-γ. Furthermore, our results suggest that the protein identified as a putative inhibitor of IL-6 produced by activated macrophages may be able to down modulate the polarization of Th1 and Th17 responses, thus affecting the development of EAE.

No presente trabalho, descrevemos na saliva do mosquito Aedes aegypti uma atividade de indução de morte de linfócitos caracterizada pela rápida exposição de fosfatidilserina na superfície celular, incorporação de iodeto de propídio, diminuição do tamanho celular, perda da expressão de CD62L e seletividade para linfócitos naïve. A molécula responsável por essa atividade foi identificada pelo fracionamento do extrato da glândula salivar (EGS) do mosquito por HPLC e espectrometria de massas. O RNA mensageiro que codifica essa molécula está presente abundantemente em fêmeas de A. aegypti mas não em machos, sugerindo sua participação no repasto sanguíneo. RNA de interferência foi utilizado para silenciar o gene responsável por essa atividade em fêmeas de A. aegypti e o EGS desses mosquitos perdeu a capacidade de induzir a morte de linfócitos, confirmando ser essa a molécula responsável pela atividade. Em conclusão, o presente trabalho identifica uma nova molécula presente na saliva de A. aegypti com atividade rápida, potente e seletiva sobre linfócitos. / In the present work, we described in the saliva of Aedes aegypti mosquito an activity of cell death induction for lymphocytes characterized by fast phosphatidylserine exposure in cell surface, incorporation of propidium iodide, cell shrinkage, loss of CD62L expression, and selectivity for naïve lymphocytes. The molecule responsible for this activity was identified by fractionation of mosquito salivary gland extract (SGE) by HPLC and mass spectrometry. The messenger RNA that codifies this molecule is abundantly present in A. aegypti females but not in males, suggesting its role in blood-feeding. RNA interference was employed to silence the gene responsible for this activity in A. aegypti females and the SGE of these mosquitoes lost the ability to induce lymphocyte death, confirming that this is the molecule responsible for the activity. In conclusion, this work identifies a new molecule from A. aegypti saliva with a fast, potent and selective activity on lymphocytes.

Aedes aegypti é importante vetor de patógeno causador de doença como dengue, febre amarela, febre Chikungunya e Zika. A fêmea realiza repasto sanguíneo a fim de adquirir nutriente para o desenvolvimento dos ovos. Neste contexto, a saliva possui papel fundamental, representando o elo entre o artrópode hematófago, seu hospedeiro vertebrado e o potencial patógeno a ser transmitido. Nessa saliva encontra-se um coquetel farmacológico com diversas atividades biológicas, como a presença de peptídeos antimicrobianos e moléculas com funções imunomoduladoras sobre células do hospedeiro vertebrado, com especial atenção aos macrófagos. Como os macrófagos também estão envolvidos nos mecanismos efetores da resposta contra protozoários do gênero Leishmania e a leishmaniose apresenta-se como uma doença de caráter zoonótico de grande relevância em saúde pública, o objetivo deste trabalho foi de avaliar o efeito do extrato de glândula salivar (EGS) de A. aegypti em infecções por Leishmania. Nossos resultados mostraram aumento da infecção in vivo e in vitro na presença do EGS, sugerindo fortemente que o EGS de A. aegypti é capaz de aumentar a infecção por Leishmania. / Aedes aegypti is an important vector of disease-causing pathogens such as dengue, yellow fever, Chikungunya and Zika fever. The mosquito female takes a blood meal in order to develop the eggs. In this context, a saliva plays a key role, representing the link between the hematophagous arthropod, its vertebrate host and the potential pathogen to be transmitted. During the evolutionary process, these insects developed a salivary cocktail with an arsenal of molecules presenting several immunomodulatory properties in host cells, such as macrophages. As macrophages are also involved in the mechanisms of response against protozoa of the genus Leishmania and leishmaniasis is a zoonotic disease of great relevance in public health, the aim of this work is to evaluate the effect of salivary gland extract (SGE) of A. aegypti in Leishmania infections. Our results showed increased infection, in vivo and in vitro, in the presence of SGE, strongly suggesting that A. aegypti EGS is able to increase infection by Leishmania.

A saliva de insetos hematófagos possui moléculas capazes de modular o sistema imune do hospedeiro. Com base na literatura a respeito das atividades presentes na saliva de Aedes aegypti, investigamos se o EGS dessa espécie era capaz de modular a EAE. Imunizamos animais C57BL/6 com MOG35-55, e realizamos um tratamento com EGS. O tratamento com EGS diminuiu a incidência da doença e provocou um atraso no aparecimento dos sinais clínicos, além de estes serem mais brandos. Observamos que a modulação se deu na fase de indução da resposta imune, não na efetora. De fato, o EGS consegue suprimir a doença por 4 vias: 1) diminuindo a expressão de MHCII, CD80 e CD86 em células dendríticas, e diminuindo a produção de citocinas responsáveis pela indução das respostas Th1/Th17; 2) induzindo células produtoras de IL-10 in vivo; 3) induzindo apoptose em linfócitos T naive; 4) induzindo células com perfil Th2 produtoras de IL-4 e IL-5. Concluímos que o EGS é capaz de atuar na supressão dos sintomas durante o curso da EAE e na inibição do início da resposta imune. / The saliva of hematophagous insects has molecules that can modulate the host immune system. Based on the literature about activities found in Aedes aegypti saliva, we investigate if SGE of this species could modulate EAE. We have immunized C57BL/6 mice with MOG35-55, and carried out a treatment with SGE. The treatment with SGE reduced the incidence of disease and caused a delay onset of clinical signs making them softer. We have observed that modulation occured in the induction phase of immune response, not in effector phase. In fact, SGE can suppress the disease by four ways: 1) decreasing the expression of MHCII, CD80 and CD86 in dendritic cells and decreasing the production of cytokines responsible for Th1/Th17 response induction; 2) inducing cells producing IL-10 in vivo; 3) inducing apopotosis in naive T lymphocytes; 4) inducing cells Th2 producing IL-4 e IL-5. We came to the conclusion that SGE can act in supressing symptoms during the course of EAE and inhibiting the beggining of autoimmune response.

A saliva de insetos hematófagos possui moléculas capazes de modular o sistema imune do hospedeiro. Com base na literatura a respeito das atividades presentes na saliva de Aedes aegypti, investigamos se o EGS dessa espécie era capaz de modular a EAE. Imunizamos animais C57BL/6 com MOG35-55, e realizamos um tratamento com EGS. O tratamento com EGS diminuiu a incidência da doença e provocou um atraso no aparecimento dos sinais clínicos, além de estes serem mais brandos. Observamos que a modulação se deu na fase de indução da resposta imune, não na efetora. De fato, o EGS consegue suprimir a doença por 4 vias: 1) diminuindo a expressão de MHCII, CD80 e CD86 em células dendríticas, e diminuindo a produção de citocinas responsáveis pela indução das respostas Th1/Th17; 2) induzindo células produtoras de IL-10 in vivo; 3) induzindo apoptose em linfócitos T naive; 4) induzindo células com perfil Th2 produtoras de IL-4 e IL-5. Concluímos que o EGS é capaz de atuar na supressão dos sintomas durante o curso da EAE e na inibição do início da resposta imune. / The saliva of hematophagous insects has molecules that can modulate the host immune system. Based on the literature about activities found in Aedes aegypti saliva, we investigate if SGE of this species could modulate EAE. We have immunized C57BL/6 mice with MOG35-55, and carried out a treatment with SGE. The treatment with SGE reduced the incidence of disease and caused a delay onset of clinical signs making them softer. We have observed that modulation occured in the induction phase of immune response, not in effector phase. In fact, SGE can suppress the disease by four ways: 1) decreasing the expression of MHCII, CD80 and CD86 in dendritic cells and decreasing the production of cytokines responsible for Th1/Th17 response induction; 2) inducing cells producing IL-10 in vivo; 3) inducing apopotosis in naive T lymphocytes; 4) inducing cells Th2 producing IL-4 e IL-5. We came to the conclusion that SGE can act in supressing symptoms during the course of EAE and inhibiting the beggining of autoimmune response.

Mosquitos são os mais importantes vetores de patógenos humanos, transmitindo um amplo espectro de doenças infecciosas emergentes e reemergentes. Nesse cenário, o mosquito Aedes aegypti está entre as espécies mais relevantes. No presente estudo investigamos as atividades do extrato de glândula salivar (EGS) desse mosquito vetor na biologia das células dendríticas e dos linfócitos T. Nossos dados revelam que o EGS não interfere na diferenciação, maturação e função de células dendríticas murinas. Entretanto, componentes salivares desse mosquito possuem um efeito direto sobre linfócitos. O mecanismo de ação do EGS envolveu a apoptose de células T naïve, enquanto células de memória foram mais resistentes a essa atividade. Uma molécula com peso molecular acima de 400 kDa é provavelmente a responsável por esse efeito. Em conjunto, os resultados gerados por esse trabalho contribuem com a elucidação dos efeitos biológicos da saliva de Ae. aegypti na imunidade de seus hospedeiros e, conseqüentemente, seu papel na transmissão de doenças. / Mosquitoes are the most important vectors of human pathogens, transmitting a wide range of emerging and re-emerging infectious diseases. In this scenario, Aedes aegypti is a relevant mosquito species. In the present study, we have investigated the activities of the salivary gland extract (SGE) of this mosquito vector on the dendritic cell and T lymphocyte biology. Our data reveals that the SGE does not interfere on the differentiation, maturation and function of murine dendritic cells. However, salivary components of these mosquitoes have a direct effect on lymphocytes. The mechanism of action of SGE involved apoptosis of naïve T cells, while memory cells were more resistant to this activity. A molecule with molecular weight above 400 kDa is likely responsible for this effect. .Taken together, the results generated by this work contribute to the understanding of the biological effects of Ae. aegypti saliva on the host and, consequently, its role on the transmission of diseases.

Mosquitos são os mais importantes vetores de patógenos humanos, transmitindo um amplo espectro de doenças infecciosas emergentes e reemergentes. Nesse cenário, o mosquito Aedes aegypti está entre as espécies mais relevantes. No presente estudo investigamos as atividades do extrato de glândula salivar (EGS) desse mosquito vetor na biologia das células dendríticas e dos linfócitos T. Nossos dados revelam que o EGS não interfere na diferenciação, maturação e função de células dendríticas murinas. Entretanto, componentes salivares desse mosquito possuem um efeito direto sobre linfócitos. O mecanismo de ação do EGS envolveu a apoptose de células T naïve, enquanto células de memória foram mais resistentes a essa atividade. Uma molécula com peso molecular acima de 400 kDa é provavelmente a responsável por esse efeito. Em conjunto, os resultados gerados por esse trabalho contribuem com a elucidação dos efeitos biológicos da saliva de Ae. aegypti na imunidade de seus hospedeiros e, conseqüentemente, seu papel na transmissão de doenças. / Mosquitoes are the most important vectors of human pathogens, transmitting a wide range of emerging and re-emerging infectious diseases. In this scenario, Aedes aegypti is a relevant mosquito species. In the present study, we have investigated the activities of the salivary gland extract (SGE) of this mosquito vector on the dendritic cell and T lymphocyte biology. Our data reveals that the SGE does not interfere on the differentiation, maturation and function of murine dendritic cells. However, salivary components of these mosquitoes have a direct effect on lymphocytes. The mechanism of action of SGE involved apoptosis of naïve T cells, while memory cells were more resistant to this activity. A molecule with molecular weight above 400 kDa is likely responsible for this effect. .Taken together, the results generated by this work contribute to the understanding of the biological effects of Ae. aegypti saliva on the host and, consequently, its role on the transmission of diseases.