Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-09T02:47:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-07-13T19:22:36Z (GMT) / Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-21T15:25:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-21T17:19:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T17:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Passiflora incarnata encontra-se entre as plantas medicinais mais estudadas no âmbito farmacológico, cujas propriedades medicinais são atribuídas principalmente aos seus fitoconstituintes, tais como compostos fenólicos, alcalóides e flavonoides. Já foi constatado que os fungos endofíticos, aqueles vivem no interior de plantas, compartilhando com as mesmas uma interação simbiótica. Estes endófitos estão presentes em todas as plantas e muitas vezes partilham dos mesmos metabólitos que sua hospedeira. Devido ao seu enorme potencial de exploração, os fungos endofíticos são considerados um dos mais importantes recursos para a obtenção de novos agentes terapêuticos, pois um grande número de metabólitos estruturalmente novos e biologicamente ativos tem sido relatado para esses organismos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar fungos endofíticos presentes em folhas de P. incarnata e avaliar seu potencial biotecnológico, quanto à presença de compostos fenólicos, flavonoides e atividade antioxidante. Das 120 folhas analisadas, um total de 315 fungos endofíticos foi obtido; foi possível identificar 16 táxons distintos, dentre eles Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp e representantes dos Mucoromycotina. A maioria dos isolados não apresentou esporulação. Os 60 endófitos utilizados nos ensaios produziram ao menos um composto fitoquímico, 60% (n=36) foram positivos para saponinas, 76% (n=46) para flavonoides, 93% (n=56) para compostos fenólicos, apenas 3% (n=2) para taninos, e nenhum fungo apresentou alcalóides no filtrado. O teor de flavonoides e fenóis totais do extrato de n-Butanol, determinado espectrofotometricamente revelou que a maioria dos fungos analisados foram bons produtores destes compostos, com destaque para os isolados Trichoderma sp./LMA 1684 e Aspergillus sp. 1/LMA 1720, com 213,69 mg.g-1 e 187,3 mg.g-1 , respectivamente, para flavonoides totais expressos em rutina, enquanto para fenóis totais os isolados LMA 1713 e LMA 1824, ambos fungos não esporulantes, apresentaram os teores 184,94 mg.g-1 e 187,05 mg.g-1 , respectivamente. Todos os endófitos apresentaram atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. O extrato butanólico do fungo Aspergillus versicolor/LMA 1705 (94%) foi maior que o padrão BHT (90,27%) e rutina (91,98%). A fração AcOEt e BuOH de cincos fungos selecionados apresentou metabólitos com atividade antioxidante, entre as amostras, a fração BuOH do fungo Trichoderma sp./LMA 1684 mostrou a atividade de eliminação do radical livre DPPH mais baixa (valor de IC50 de 304,18 mg/mL ), enquanto a fração AcOEt do fungo Chaetomium sp./LMA 1793 com um valor de IC50 de 0,21 mg/mL exibiu uma atividade antioxidante maior que os controles positivo BHT (0,42 mg/mL ), Rutina (0,25 mg/mL ), e Ácido Ascórbico (0,23 mg/mL). Foi realizada CG-EM da fração acetato de etila em cinco fungos previamente selecionados e foi constatada a presença do metabólito orcinol (3,19%) em Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-metoximetilfenol (4,79%), Sorbicillina (33,59%) e ergosterol (23,08%), presentes em Trichoderma sp./LMA 1684 e isopropenil-1,4-dimetil-1,2,3,3a,4,5,6,7-octahidroazuleno no endófito Fusarium sp. 4. O estudo mostrou um grande potencial de aplicação em biotecnologia dos endofíticos de P. incarnata. / Passiflora incarnata is among the most studied medicinal plants in the pharmacological field, whose medicinal properties are attributed mainly to its phytochemicals, such as phenolic compounds, alkaloids and flavonoids. It has been found that endophytic fungi, which are those living inside plants, share a symbiotic interaction with their hosts. These endophytes are present in all plants and often share the same metabolites as the plants they live. Due to their enormous potential for exploitation, endophytic fungi are considered one of the most important resources for obtaining new therapeutic agents, since a large number of structurally new and biologically active metabolites have been reported from these microorganisms. In this context, the objective of this work was to isolate endophytic fungi present in leaves of P. incarnata and to evaluate their biotechnological potential, regarding the presence of phytochemicals, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity. From a total of 120 leaves analyzed 315 endophytic fungi were obtained. It was possible to identify 16 distinct taxa, among them Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp. and Mucoromycotina representatives. Many showed no sporulation at all. All 60 endophytes used in the trials produced at least one phytochemical compound, 60% (n = 36) were positive for saponin, 76% (n = 46) for flavonoids, 93% (n = 56) for phenolic compounds, only 3% (n = 2) for tannins, and no one presented alkali in the filtrate. The total flavonoid and phenol contents of the n-Butanol extract, spectrophotometrically determined, showed that most of the analyzed fungi were good producers of these compounds, especially the isolate Trichoderma sp./LMA 1684 and Aspergillus sp. 1/LMA 1720 213.69 mg.g-1 and 187.3 mg.g-1 respectively, for total flavonoids expressed in rutin, and for total phenols the isolate LMA sp. 6 and LMA sp. 26 with 184.94 mg.g-1 and 187.05 mg.g-1 respectively. All endophytes presented antioxidant activity against free radical DPPH. Butanolic extract of the fungus Aspergillus versicolor/LMA 1720 (94%) was higher than the BHT (90.27%) and routine (91.98%) standard. The AcOEt and BuOH fraction of five fungi presented metabolites with antioxidant activity, among the samples, the BuOH fraction of the Trichoderma sp./LMA 1684. showed the lowest free radical DPPH elimination activity (IC50 value of 304.18 mg/mL), while the AcOEt fraction of Chaetomium sp./LMA 1793 with an IC50 value of 0.21 mg/mL showed better antioxidant activity than the BHT (0.42 mg/mL), rutin (0.25 mg/mL), and ascorbic acid (0.23 mg/mL). CG-MS of the ethyl acetate fraction was performed in five previously selected fungi and the presence of the orcinol (3.19%) in Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-methoxymethylphenol (4.79%), Sorbicillin (33.59%) and ergosterol (23.08%), present in Trichoderma sp./LMA 1684 and isopropenyl-1,4-dimethyl-1,2,3,3a, 4,5,6,7-octahydroazulene in the endophyte Fusarium sp. 4/LMA 1719. This study highlighted a great biotechnological application of the P. incarnata endophytes.

Submitted by THALITA CRISTINA MARQUES CERVEZAN null (tha_cerv@hotmail.com) on 2017-07-28T02:30:55Z No. of bitstreams: 1 Tese_final_Cervezan2017.pdf: 3225815 bytes, checksum: 72cc707821ac3d0f6e9ccdefd2c22aa4 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-31T19:54:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cervezan_tcm_dr_bot.pdf: 3225815 bytes, checksum: 72cc707821ac3d0f6e9ccdefd2c22aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T19:54:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cervezan_tcm_dr_bot.pdf: 3225815 bytes, checksum: 72cc707821ac3d0f6e9ccdefd2c22aa4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A malária é considerada uma doença infecciosa grave que atinge milhares de pessoas, principalmente em países tropicais e subtropicais. O controle dessa doença pode ser feito através de alguns tipos de medicamentos semissintéticos e bioativos naturais, entre eles os derivados da espécie Artemisia annua L.. Os principais derivados bioativos de A. annua L. são a artemisinina, diidroartemisinina, deoxiartemisinina, ácido artemisínico e arteanuina B. Com o aumento do valor dos princípios ativos naturais, estudos relacionados à pós-colheita e secagem de material vegetal tornam-se importantes para melhor conservação de suas propriedades fitoterápicas. O presente estudo teve como objetivos avaliar o efeito de diferentes tipos de processamento pós-colheita sobre a qualidade do fármaco e seus derivados. Folhas de A. annua L. foram submetidas a quatro tratamentos de desidratação sendo eles: campo em pleno Sol, campo na sombra, estufa de circulação de ar a temperatura de 28°C +/-2 e câmara de crescimento 15°C +/-2, por 29 dias. Foram realizadas as análises de teor de umidade, flavonoides, rendimento e quantificação de óleo essencial, avaliação do teor de artemisinina, diidroartemisinina, deoxiartemisinina, ácido artemisínico e arteanuina B. Cada tratamento apresentou influência distinta sobre o acúmulo de bioativos estudados. Entretanto, quando a biomassa foi processada em estufa com temperatura controlada, houve maior estabilidade para a maioria dos princípios ativos avaliados, com exceção da artemisinina. / Malaria is considered a serious infectious disease that affects thousands of people, occurring in tropical and subtropical countries. Disease control can be done through some types of semi-synthetic and bioactive natural drugs, including them the derivatives of the species Artemisia annua L.. Some major bioactive derivatives of A. annua L. are artemisinin, dihydroartemisinin, deoxiartemisinin, artemisinic acid and arteanuin B. With the increase in the value of the natural active principles, studies related to post-harvesting and drying of plant material become important for better conservation of its phytotherapic properties. The present study aims to evaluate the effect of different types of post-harvest processing on the quality of the drug and its derivatives. The leaves of A. annua L. were submitted to 4 post-harvest treatments: Leaves of A. annua L. were submitted to 4 post-harvest treatments: field in full sun, field shaded, air circulation oven dry at 28 °C +/-2 and grown chamber 15 °C +/-2 for 29 days. The analysis of moisture content, flavonoids, quantification of essential oil yield, evaluation of the artemisinin, dihydroartemisinin, deoxiartemisinin, artemisinic acid and arteanuin B contents were carried out. Were analyzed treatment had a different influence on the bioactives under study, however, the oven dry demonstrated to have greater stability in most of the active principles with the exception of artemisinin.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-14Bitstream added on 2014-06-13T20:59:21Z : No. of bitstreams: 1 pilon_ac_me_araiq.pdf: 768972 bytes, checksum: d0679df3c0e294a23794ae46d2fea361 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No presente trabalho foram detectados e analisados os metabólitos secundários majoritários das espécies Jatropha multifida L. e J. gossypifolia L., fazendo uso de ferramentas quimiométricas de vanguarda, visando a otimização do processo de extração para, posteriormente, obter cromatogramas de fingerprint através da técnica acoplada CLAE-UV/DAD. Para a espécie J. gossypifolia L. a mistura 1 : 1 clorofórmio : isopropanol apresentou a melhor condição de extração enquanto para J. multifida L. a composição 2/3 : 1/6 : 1/6 de etanol : acetona : 1,4-dioxano foi a que obteve a melhor resposta. Os cromatogramas de fingerprint foram realizados fazendo uso de uma coluna monolítica C-18 (5 µm), como fase estacionária, enquanto a fase móvel para análise da espécie J. gossypifolia L. foi composta por água e uma mistura de solventes orgânicos, MeOH : ACN, na proporção (68 : 32), em gradiente exploratório de 5-100% de fase orgânica. Para a espécie J. gossypifolia L., as condições otimizadas foram: temperatura de coluna de 30 °C, fluxo em 2,0 mL·min-1 e o volume de injeção de 30 µL. Para J. multifida L. a fase móvel foi composta por água e uma mistura MeOH : ACN 1 : 1 em gradiente exploratório 5-100% de fase orgânica. A temperatura de coluna de 40 °C, o fluxo de 2,5 mL·min-1 e o volume de injeção foi de 30 µL. Foram realizados bioensaios in vitro, tais como a redução do reagente DPPH (ação antioxidante), inibição da polimerização da hematina bovina (ação antimalárica), inibição enzimática de acetilcolinesterase (doença de Alzheimer) e o ensaio da inibição do crescimento de fungos fitopatógenos. Nenhum dos extratos brutos avaliados, apresentou atividade significativa quando comparados com os padrões. Quanto à detecção dos metabólitos, a aplicação de métodos de desreplicação aos extratos permitiram a identificação de algumas classes... / The main goal of this research was to detect and analyze major secondary metabolites from Jatropha multifida L. and J. gossypifolia L. species, using state of art techniques in chemometrics aiming the optimization of the extraction process prior to the acquisition of the fingerprint chromatogram using HPLC-UV/DAD. The optimized extraction condition for Jatropha gossypifolia was the binary mixture 1:1 chloroform:isopropanol, while to Jatropha multifida L. the mixture was ternary consisting of 2/3:1/6:1/6 ethanol:acetone:1,4-dioxane. The fingerprint chromatograms were runned using an exploratory gradient consisting of 5-100% of organic solvent, using a C-18 (5 µm) column, as stationary phase, and then the mobile phase was optimized, through the use of chemometrics for each species. In the case of Jatropha gossypifolia L. the phase consisted in a mixture of 68:32 MeOH:ACN, under a column temperature of 30 oC, injection volume of 30 µL and a flow of 2.0 mL.min-1. For Jatropha multifida L. was 1:1 MeOH:ACN, under column temperature of 40 oC, flow of 2,5 mL.min-1 and an injection volume of 30 µL. Some in vitro bioassays were performed, such as, reduction of the reagent DPPH (antioxidant action), inhibition of polymerization of the haematin bovine (antimalarial), enzymatic inhibition of the acetylcholinesterase (Alzheimer’s disease) and the assay of inhibition of the growth of phytopatogenic fungi. None of the crude extracts showed significant activities when compared to the used standards. The application of dereplication methods allowed the identification of some classes of compounds, already reported for Jatropha, such as terpenoids and flavonoids. The strategy developed to performed the dereplication, used an in silico approach through the matching and analysis of the spectrometric and spectroscopic data sets obtained using NMR and HPLC-HRMS(ESI)-MS2 with databases of high... (Complete abstract click electronic access below)

Mon travail de thèse a consisté à poursuivre le développement et l’application des matrices bithiophéniques spécifique aux alcaloïdes. Après l’optimisation d’un protocole efficace d’analyse, adapté à l’objectif de l’étude, la mise au point d’une méthode de dosage des alcaloïdes par MALDI dans des extraits végétaux et sans prétraitement préalable a été étudiée. Cette méthode a pu être validée en étudiant des alcaloïdes existant dans différents extraits des plantes toxiques. Ensuite, la synthèse et l’évaluation de nouveaux composés bithiophéniques ont été présentés de manière à évaluer les facteurs favorisant l’interaction avec les alcaloïdes. Ultérieurement, cinq nouvelles matrices intéressantes furent l’objet d’une étude plus détaillée. Sur la base des résultats obtenus, le dérivé fluoré F T3 s’avère le plus efficace. ll présente une meilleure sélectivité que la matrice courante CHCA vis-à-vis des alcaloïdes et plus performant pour analyser les alcaloïdes dans différents mélanges complexes tels que des extraits bruts de plantes, des insectes, et des solutions bio-actives commerciales (médicament et répulsif). À la fin, ces sont regroupés les résultats de l’étude des paramètres thermodynamiques de la matrice MT3P, ce qui permettra de proposer des hypothèses expliquant la sélectivité de la matrice bithiophéniques fonctionnalisée pour les alcaloïdes. / My thesis work consisted of pursuing the development and application of bithiophenic maldi matrices specific for alkaloids. After optimization of an efficient analysis protocol adapted to the objective of the study, a method for the determination of alkaloids in vegetable extracts by MALDI was developed. This method was validated by studying many alkaloids existing in extracts of different toxic plants. Subsequently, synthesis and evaluation of novel bithiophenic compounds were presented in order to evaluate the factors favoring the interaction with alkaloids. Then, five matrices among the molecules tested and having produced interesting results are chosen and were the subject of a more detailed study. On the basis of the results obtained, the fluorinated derivative PFPT3P proves to be the most effective molecules. It has a better selectivity with respect to alkaloids than the current matrix HCCA and performs better to analyze these metabolites in different complex mixtures such as crude extracts of plants,insects and commercial bioactive solutions (drug and repellent). At the end, the results of the study of the thermodynamic parameters of MT3P matrix are grouped. This will make possible to propose hypotheses explaining the selectivity of the functionalized bithiophene matrices for alkaloids.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Os recifes de corais são ecossistemas diversos com alta densidade de biodiversidade, o que leva a intensa competição entre as espécies. Estas espécies podem produzir substâncias desconhecidas, muitas com valor farmacológico. Chromonephthea braziliensis é um coral mole invasor, originário do Oceano Indo-Pacífico, que foi possivelmente transportado por plataformas de petróleo e cuja presença é uma ameaça para a biodiversidade da região de Arraial do Cabo (RJ). Esta espécie produz metabólitos secundários que são responsáveis pela indução de danos para o ecossistema local. A finalidade deste estudo é a busca de novas substâncias para quimioterapia geral com base na estrutura de compostos bioativos. Extratos desse coral foram preparados a partir de colônias liofilizadas (solventes: hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol). Realizaram-se análises químicas para a caracterização dos extratos e avaliaram-se as atividades: mutagênicas e citotóxicas, usando o ensaio de mutação reversa bacteriana (Salmonella/microssoma) com as linhagens TA97, TA98, TA100 e TA102; genotóxicas, utilizando análise da quebra do DNA e formação de micronúcleos na linhagem RAW 264,7 de macrófagos e; tóxicas para náuplios de microcrustáceos Artemia salina. Observou-se citotoxicidade, na presença de S9 mix, dos extratos diclorometano para a linhagem TA102 na concentração de 20 g/100 L/placa e metanol para a TA97 com 5 e 20 g/100 L/placa. Os extratos diclorometano, acetato de etila e metanol apresentaram genotoxicidade no DNA plasmidial em concentrações elevadas (250 g/mL), mas nenhum dano ao DNA foi observado no ensaio de micronúcleo. Todos os extratos foram tóxicos para os náuplios de microcrustáceos em pelo menos uma das concentrações usadas (0,01 1000 g/mL), e a LC50 pode ser determinada apenas para os extratos hexano, diclorometano e acetato de etila. / Coral reefs are diverse ecosystems that have a high density of biodiversity leading to intense competition among species. These species may produce unknown substances, many with pharmacological value. Chromonephthea braziliensis is an invasive soft coral from the Indo-Pacific Ocean that has been possibly transported by oil platforms and whose presence can be a threat to Arraial do Cabo regions biodiversity. This species produces secondary metabolites that are responsible for inducing damage to the local ecosystem. The purpose of this study is the search of new drugs for generally chemotherapy based on the structure of bioactive compounds. Coral extracts were prepared from dried colonies (solvents: hexane, dichloromethane, ethyl acetate, and methanol). Chemical analyses were performed to characterize the extracts and evaluated their cytotoxic and mutagenic activities, using the bacterial reverse mutation assay (Salmonella/microsome) with TA97 strains, TA98, TA100 and TA102; genotoxic activity, using DNA breakage analysis and micronucleus formation and; toxic effects for nauplii microcrustaceans. Cytotoxicity was observed in the presence of S9 mix for dichloromethane extract for strain TA102 at the 20 g/plate concentration and methanol extract for TA97 at 5 and 20 g/plate. The dichloromethane, ethyl acetate and methanol extracts present genotoxicity for plasmidial DNA at high concentrations (250 g/mL), but no DNA damage was observed in micronucleus assay. All extracts were toxic for nauplii microcrustaceans at least one of tested concentrations (0.01 1000 g/mL), but LC50 was calculated only for the hexane, dichloromethane and ethyl acetate extracts.

Cyanobacteria are well-known producers of secondary metabolites of different chemical structures and a wide range of biological functions. In the present thesis, the cytotoxic activity of cyanobacteria, originating from different habitats, was studied in order to reveal whether cytotoxicity is an environmentally dependent characteristic. In addition, the data were compared with the toxicity of these extracts to the model invertebrate Artemia salina. The obtained data suggest that cytotoxic cyanobacteria are favoured under some conditions and thus more frequent in particular localities. The majority of the studied extracts and fractions exhibited cytotoxitity to the Sp/2 cell line not accompanied by toxicity to A. salina. Moreover, in most of the strains with both activities to A. salina and Sp/2 cells the toxic effect was caused by an identical fraction. This result suggests that the toxic effect of the cyanobacterial secondary metabolites is mostly affecting basal cell metabolism rather than targeting specific organisms. In one of studied strains, Cylindrospermum sp. C24/1989, novel lipopeptides puwainaphycin F and G have been detected, isolated and their structure and biological effect have been characterized. Both of these structures interfere with eucaryotic membranes and cause a Ca2+ leakage into the cell. Subsequently, an enhanced tyrosine phosohorylation and relocalization of f-actin in the cell was observed. Lastly, the correlation between metabolite production and the reconstructed phylogeny was studied in planktonic Dolichospermopsis strains. Most of the detected compounds were found to be randomly disspersed across the reconstructed phylogeny and thus cannot be considered as good chemotaxonomic markers. This result also hampers the possible detection of toxic cyanobacteria by morphological methods or molecular detection based on the 16SrDNA gene.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente trabalho descreve o estudo fitoquÃmico de Pilocarpus sulcatus Skorupa e o levantamento acerca dos metabÃlitos secundÃrios jà isolados do tÃxon Pilocarpus. O trabalho envolveu a extraÃÃo e identificaÃÃo dos constituintes volÃteis das folhas, casca do caule, lenho do caule, cascas das raÃzes e lenho das raÃzes alÃm do isolamento e determinaÃÃo estrutural dos constituintes fixos das folhas e lenho do caule de P. sulcatus. Trata-se de uma espÃcie com descriÃÃo botÃnica recente, ainda sem estudo fitoquÃmico publicado, com localizaÃÃo geogrÃfica restrita ao sul do estado da Bahia e norte de Minas Gerais. Foram extraÃdos e identificados dezoito constituintes volÃteis dos Ãleos essÃncias das diversas partes de P. sulcatus estando as metilcetonas alifÃticas, pentadecan-2-ona e tridecan-2-ona, presentes em todos os cinco Ãleos analisados, onde, com exceÃÃo do Ãleo essencial das folhas, a tridecan-2-ona foi identificada como o constituinte majoritÃrio. No desenvolvimento deste trabalho foram isoladas e determinadas as estruturas de seis substÃncias. Do extrato etanÃlico das folhas de P. sulcatus foram isolados o triterpeno do tipo taraxerano taraxerol, a furanocumarina isopimpinelina e o esterÃide β-sitosterol. Do extrato etanÃlico do lenho do caule foram isoladas as furanocumarinas elisina e amirina alÃm da piranocumarina xantiletina. A determinaÃÃo estrutural dos metabÃlitos secundÃrios isolados envolveu o uso de tÃcnicas espectromÃtricas como IV e RMN 1H e 13C, incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC e HMBC), bem como comparaÃÃo com dados descritos na literatura. Os Ãleos essenciais extraÃdos foram analisados por CG-EM e a identificaÃÃo dos constituintes ocorreu atravÃs da interpretaÃÃo dos respectivos espectros de massa, pesquisa na espectroteca e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. / The present work describes the phytochemical study of Pilocarpus sulcatus Skorupa and survey about the secondary metabolites isolated from the taxon Pilocarpus. The work involved the extraction and identification of volatile leaves constituents, stem bark, stem wood, bark root and wood root besides the isolation and determination of the fixed constituents of the leaves and stem wood of P. sulcatus. This is a species with recent botanical description, still without a published phytochemical study. It is restricted located in the south of Bahia and the north of Minas Gerais. It was extracted and identified eighteen volatile constituents of essential oils from different parts of P. sulcatus, with the aliphatic methyl ketones, pentadecan-2-one and tridecan-2-one, present in all five essential oils tested, which, aside from the essential oil of leaves, tridecan-2-one was identified as the major constituent. In this work, six substances were isolated and had its structures determined. From the ethanolic extract of P. sulcatus were isolated the triterpene taraxerol, the furanocumarin isopimpinellin and the steroid β-sitosterol. From the ethanolic extract of the stem wood were isolated the furanocoumarins elisin and amyrin besides the pyranocoumarin xanthyletin. The structural determination of all secondary metabolites isolated in this work involved spectrometric techniques such as: IR e NMR including 2D experiments (COSY, HSQC e HMBC), as well as, comparison with published data. The essential oils extracted were analyzed by GC-MS and the constituents identification occurred by interpretation of their respective mass spectra, in spectra library search and comparison with previously reported data.

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O espaço intergênico (IGS) juntamente com suas subunidades flanqueadoras (cpcB) e (cpcA) do operon do ficocianina foi usado para identificar linhagens de cianobactérias. Dentro do domínio Bacteria somente as cianobactérias possuem o operon da ficocianina e a região cpcBA-IGS é suficientemente variável para diferenciar linhagens desses microrganismos. No presente estudo 25 linhagens de cianobactérias isoladas de diversos locais brasileiros foram caracterizadas usando a seqüência cpcBA-IGS. DNA genômico foi extraído das ordens Chroococcales (oito linhagens), Oscillatoriales (duas linhagens), Nostocales (onze linhagens) e Stigonematales (quatro linhagens). Os oligonucleotídeos iniciadores PCβF/PCαR, específicos para a seqüência cpcBA-IGS, foram usados para amplificar fragmentos de DNA de aproximadamente 685 pb. Os produtos da PCR foram clonados, seqüenciados e as seqüências foram comparadas pela análise BLAST. Todas as seqüências de Microcystis e também as seqüências de Radiocystis fernadoi SPC736, Planktothrix mougeotii SPC788, Geitlerinema splendidum SPC923, Microchaete investiens CENA64 e Gloeotrichia UFV-B2 mostraram identidades com seqüências do GenBank. Entretanto, nenhuma identidade foi encontrada para as seqüências restantes. As relações filogenéticas das seqüências de cpcBA-IGS foram investigadas junto com outras seqüências de cianobactéria do Genbank usando a análise “Neighbour Joining”. A topologia da árvore foi congruente com outras árvores de cianobactérias, com exceção de todas as seqüências sem identidades no GenBank, as quais formaram um agrupamento separado. Os dados das seqüências de cpcBA-IGS analisadas confirmam que as cianobactéria heterocitadas formam um grupo monofilético. Estudos anteriores realizados com linhagens de cianobactéria mostraram que estes microrganismos são uma fonte rica de produtos naturais. No presente estudo conduzido com 59 linhagens de cianobactérias, sendo a maioria isolada de ambientes brasileiros, isto foi confirmado. Para alcançar esse objetivo, dois conjuntos de iniciadores degenerados foram usados para produzir seqüências amplificadas por PCR das sintetases de peptídeos não-ribossômicos (NRPSs), e de sintases policetídeos (PKSs) modulares, as quais são enzimas multifuncionais envolvidas na produção de produtos naturais. O sistema híbrido NRPS/PKS também foi amplificado por PCR usando uma combinação de iniciadores de NRPS e de PKS. Essa abordagem molecular mostrou a presença de genes de NRPS e de PKS em 93% e 81% linhagens de cianobactérias, respectivamente. Genes de NRPS/PKS foram encontrados em 87% das cianobactérias examinadas. Numa tentativa de atribuir funções a oito fragmentos de PKS identificados por PCR, estas seqüências foram clonadas, seqüenciadas e analisadas filogeneticamente. As seqüências de PKSs da Microcystis aeruginosa NPCD1 e Fischerella CENA62 mostraram correlação com a síntese de sideróforo e de microcistina, respectivamente. Todas as 59 linhagens foram analisadas para a produção do microcistinas e 20 linhagens apresentaram resultados positivos. Para a maioria das linhagens potencialmente produtoras de microcistinas os produtos de PCR esperados de NRPS, PKS e NRPS/PKS foram amplificados. A produção de sideróforos foi testada em 28 linhagens e somente cinco produziram resultados positivos. Em três linhagens produtoras de sideróforos todos os três sistemas moleculares analisados estavam presentes. Estes resultados serão altamente valiosos na exploração futura de cada peptídeo dessas cianobactérias e para a elucidação da bioatividade de tais produtos naturais. / The intergenic spacer (IGS) together with its flanking subunits  (cpcB) and  (cpcA) of the phycocyanin operon has been used to identify cyanobacterial strains. Within the Bacteria domain only cyanobacteria present phycocyanin operon and the cpcBA-IGS region is variable enough to differentiate strains of these microorganisms. In the present study 25 cyanobacterial strains isolated from several Brazilian locations were characterized using the cpcBA-IGS sequence. Genomic DNA was extracted from the orders Chroococcales (eight strains), Oscillatoriales (two strains), Nostocales (eleven strains) and Stigonematales (four strains). The primers PCβF/PCαR targeting the cpcBA-IGS sequence were used to amplify DNA fragments of approximately 685 bp. The PCR products were cloned, sequenced and the sequences were compared by BLAST analysis. All Microcystis sequences and also sequences from Radiocystis fernadoi SPC736, Planktothrix mougeotii SPC788, Geitlerinema splendidum SPC923, Microchaete investiens CENA64 and Gloeotrichia UFV-B2 showed identities with sequences from GenBank. However, no identities were found for the remaining sequences. Phylogenetic relationships of the cpcBA-IGS sequences were investigated together with other cyanobacterial sequences from Genbank using the Neighbour Joining analysis. The tree topology was congruent with previous cyanobacterial trees, except for all sequences with no identities in the GenBank, which formed a separated cluster. The cpcBA-IGS sequences analysis data confirm that heterocyte-forming cyanobacteria are a monophyletic group. Previous studies carried out with cyanobacterial strains showed that these microorganisms are a rich source of natural products. This has been confirmed in the present study conducted with 59 cyanobacterial strains, with the majority of them isolated from Brazilian environment. To reach this goal, two sets of degenerate primers were used to generate PCR amplification sequences of nonribosomal peptide synthetases (NRPSs) and modular polyketide synthases (PKSs), which are multifunctional enzymes implicated in natural products production. Also, NRPS/PKS hybrid system was PCR amplified by using a combination of NRPS and PKS primers. This molecular approach revealed the presence of NRPS and PKS genes in 93% and 81% cyanobacterial strains, respectively. NRPS/PKS genes were found in 87% of cyanobacteria examined. In an attempt to attribute functions to eight PCR identified PKS fragments, these sequences were cloned, sequenced and phylogenetically analyzed. PKSs sequences of Microcystis aeruginosa NPCD1 and Fischerella CENA62 showed correlation with the synthesis of siderophore and microcystin, respectively. All 59 strains were analyzed for microcystin production and 20 strains presented positive results. For the majority of potentially producing-microcystin strains expected PCR products of NRPS, PKS and NRPS/PKS were amplified. The siderophores production was tested in 28 strains and only five gave positive results. In three producing-siderophore strains all three molecular systems analyzed were present. These results will be highly valuable for further exploring each of these cyanobacterial peptides and for elucidating the bioactivity of such natural products.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Periconia hispidula is an endophytic fungus isolated from dried leaves from semi-arid dunes of Bahia. The fungus was subjected to cultivation by varying nutritional factors in four different culture mediuns: MPD (malt, peptone and dextrose), BD (potato dextrose), BDL (potato, dextrose and yeast) and MntPL (mannitol, peptone and yeast), and analyzing the extracts on different incubation days (7, 14, 21, 28 days). A survey of primary cytotoxic activity was carried out from the extracts against tumor cell line of colon cancer (HCT-116). The MPD extracts - 28 days BDL - 28 days and BD - 21 days showed a promising cytotoxic activity and were preliminarily selected for the chemical study. The chromatographic fractionation of MPD-28 days extract resulted in the isolation of 11 secondary metabolites characterized as {4-chromanone, 6-hydroxy-(R) -methyl- (PS-1)}, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, {E, 1-(2,5 dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one (PS-3)}, {1-(2, 5 dihydroxyphenyl)-butan-1-one (PS-4)}, {Z-methyl-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate (PS-5)}, modiolide A (PS-7), fusanolide B (PS-8), stagonolide E (PS-9), {(3R,4R)-3,4-dihydro, 3,4,8- trihdroxy, naphthalen-1(2H)-one (PS-11)}, {(4S) isosclerona (PS-12)}, furtermore PS-10 without structural characterization yet. The BDL-BD-28 days and 21 days extracts presented a chromatographic profile very similar to MPD-28 days extract, thus, the chromatographic fractionations of both extracts were targeted for isolation of substances absent in MPD-28 days. The 3,4 dihydoxy-benzoic acid was isolated just from the BD-extract 21 days, while the fractionation of the extract BDL 28days gave (PS-13 without structural characterization yet) as different. Among the isolated metabolites, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, fusanolido B and PS10 (probably) showed were new compounds. The isolated compounds were shown to be inactive in cytotoxicity assays against strains of HCT-116 and MC-27 (breast adenocarcinoma). However, the 1- (2,5-dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one showed strong inhibition with a MIC of 62.5 Âg/mL to be subjected to antimicrobial test against strains of fungi Candida Krusei (ATCC 142432TM) and Candida albicans (ATCC 10231TM) and CIM of 125 Âg/mL against Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), while {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl-}, Z-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate methyl, modiolide A, estagonolide E, fusanolido B and 3R,4R-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-(2H) -naftalelone showed moderate activity with MIC of 500 Âg / mL.Usual chromatographic techniques including liquid-liquid partitioning, flash chromatography and high pressure liquid chromatography (HPLC) were used for the isolation of secondary metabolites, while the structural characterization was possible through the use of spectrometric techniques using infrared (IR), mass spectrometry (MS), and uni and bidimensional techniques of nuclear magnetic resonance (NMR), and comparison with literature data. / Periconia hipidula à um fungo endofÃtico isolado de folhas secas provenientes de dunas do semiÃrido do estado da Bahia. O fungo foi submetido ao cultivo atravÃs da variaÃÃo de fatores nutricionais em quatro meios diferentes: MPD (malte, peptona e dextrose), BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura) e MntPL (manitol, peptona e levedura), e anÃlise dos extratos em diferentes dias de incubaÃÃo (7, 14, 21, 28 dias). A prospecÃÃo da atividade citotÃxica preliminar foi realizada a partir dos extratos obtidos frente à linhagem de cÃlulas tumorais de cÃncer de cÃlon (HCT-116). Os extratos MPD â 28 dias, BDL - 28 dias e BD - 21 dias apresentaram uma atividade citotÃxica promissora e foram preliminarmente selecionados para o estudo quÃmico. O fracionamento cromatogrÃfico do extrato MPD-28 dias, resultou no isolamento de 11 metabÃlitos secundÃrios caracterizados como {(R), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-1)}, { (S), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-2)}, {E, 1-(2,5 diidroxi-fenil) but-2-en-1-ona (PS-3)}, {1-(2, 5 diidroxi-fenil)-butan-1-ona (PS-4)}, Z-3-(3 hidroxifenil) propenoato de metila (PS-5), modiolido A (PS-7), fusanolido B (PS-8), estagonolido E (PS-9), {(3R,4R)-3,4diidro,3,4,8 triidroxi,naftalen-1-(2H)-ona (PS-11)}, (4S)-isosclerona (PS-12), alÃm de PS-10 que se encontram em fase de caracterizaÃÃo estrutural. Os extratos BDL-28 dias e BD-21 dias apresentaram um perfil cromatogrÃfico bastante semelhante ao extrato MPD-28 dias, desta forma, os fracionamentos cromatogrÃficos de ambos os extratos foram direcionados para o isolamento de substÃncias ausentes em MPD-28 dias. O Ãcido 3,4 diidroxi-benzÃico (PS-6) foi isolado apenas do extrato BD-21 dias, enquanto que o fracionamento do extrato BDL 28d forneceu PS-13 (em fase de caracterizaÃÃo estrutural) como diferente. Dentre os metabÃlitos isolados, os compostos (2S)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, fusanolido B apresentaram carÃter inÃdito na literatura. Os compostos isolados mostraram-se inativos em ensaios de atividade citotÃxica frente a cepas de HCT-116 e MC-27 (adenocarcinoma de mama). No entanto, o composto 1-(2,5-diidroxifenil)-but-2-en-1-ona apresentou elevada inibiÃÃo com CIM de 62,5 Âg/mL ao ser submetido à ensaio antimicrobiano frente a cepas de fungos Candida Krusei (ATCC 142432TM) e Candida albicans (ATCC 10231TM) e 125 Âg/mL frente à Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), enquanto que o (2R)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, Z-3-(3-hidroxifenil)-propenoato de metila, o modiolido A, o estagonolido E, o fusanolido B e a 3,4-diidro- 3,4,8-triidroxi-1(2H)-naftalelona apresentaram moderada atividade com CIM de 500 Âg/mL. TÃcnicas cromatogrÃficas usuais, incluindo partiÃÃo lÃquido-lÃquido, coluna de sÃlica flash e cromatografia de alta eficiÃncia (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabÃlitos secundÃrios, enquanto que a caracterizaÃÃo estrutural foi possÃvel atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas utilizando infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM) e ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura.