Fungos filamentosos produzem uma ampla diversidade de metabólitos secundários que tem significativo impacto na sociedade. Alguns metabólitos são explorados pela sua atividade como antibióticos e fármacos e outros estão envolvidos em doenças, na interação dos fungos com plantas e animais. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi obter metabólitos secundários como pigmentos e metabólitos biologicamente ativos produzidos por fungos filamentosos. Foram selecionadas cinco linhagens sendo elas Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum e Penicillium sp. Estes fungos foram selecionados devido à sua capacidade de produzir e secretar pigmentos em meio ágar batata dextrose. Para confirmação ou identificação em nível de espécie dos fungos, foram utilizados o sequenciamento parcial da região intergênica (ITS) do DNA ribossomal e uma região do gene da β-tubulina. Quatro dos cinco fungos foram identificados como Fusarium graminearum, Monascus purpureus e duas linhagens de Penicillium chrysogenum (linhagens 1 e 2), sendo os primers para região ITS mais adequados para a identificação em nível de espécie. As quatro linhagens produziram pigmentos em resíduos agroindustriais sob cultivo submerso. Devido à diversidade de metabólitos com atividades antibióticas produzidos por fungos filamentosos, estes filtrados coloridos foram testados contra fungos e bactérias, sendo que de quinze filtrados testados onze apresentaram inibição contra fungos e bactérias de importância médica, alimentar e agronômica. Os filtrados de resíduo de uva e soro de queijo do fungo Penicillium chrysogenum 1 se destacaram, apresentando, também, atividade amebicida contra linhagem de Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Utilizando a técnica ESI-MS, foi realizado um perfil metabólico do filtrado de soro de queijo, sendo confirmada a presença de penicilina G, pela massa molar protonada e pelo perfil de fragmentação por ESI-MS/MS. Além disso, foi sugerida a presença dos metabólitos penicilina V e rugulosina, com comprovada atividade antibiótica. Portanto, o fungo Penicillium chrysogenum 1 foi selecionado para estudos futuros de caracterização dos pigmentos produzidos e análise mais detalhada dos metabólitos ativos, devido ao status GRAS atribuído a essa espécie, aos poucos estudos relacionados à produção de pigmentos e ao potencial de produzir metabólitos ativos em resíduos agroindustriais. / Filamentous fungi produce a diverse array of secondary metabolites that have a remarkable impact on society. Some metabolites are exploited for their antibiotic and pharmaceutical activities, other are involved in diseases, due to the fungi interactions with plants or animals. In this context, the goal of this work was the obtention of secondary metabolites as pigments and biologically active metabolites produced by filamentous fungi. Five strains were selected Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum and Penicillium sp. These fungi were selected due to the ability to produce and secrete pigments on potato dextrose agar. To confirm and/or identify the fungi at species level, we used the partial sequencing of the intergenic region (ITS) of the ribosomal DNA and a region of the β-tubulin gene. Four of the five fungi were identified as Fusarium graminearum, Monascus purpureus and two strains of Penicillium chrysogenum (strains 1 and 2) and the primers to the ITS region were more suitable for the identification at species. The four strains produced pigments on agro-industrial residues under submerged culture. Because of the diversity of antibiotic activity metabolites produced by fungi, these coloured filtrates were tested against fungi and bacteria. From the fifteen tested filtrates, eleven showed inhibition against bacteria and fungi with medical, food and agronomical importance. The filtrates of grape waste and cheese whey of the fungus Penicillium chrysogenum 1 showed higher activity, including, amoebicidal activity against a strain of Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Using an ESI-MS approach, a metabolic profile was obtained for the cheese whey filtrate, being confirmed the presence of penicillin G, because of the protonated molar mass and the fragmentation profile by ESI-MS/MS. In addition, was suggested the presence of the metabolites penicillin V and rugulosin, all with proven antibiotic activity. Therefore, the fungus Penicillium chrysogenum 1 was selected for future studies as the characterization of the produced pigments and more detailed analysis of the active metabolites, due to the GRAS status attributed to this specie, to the few studies related to the pigments production and to the potential to produce active metabolites on agro-industrial residues.

Fungos filamentosos produzem uma ampla diversidade de metabólitos secundários que tem significativo impacto na sociedade. Alguns metabólitos são explorados pela sua atividade como antibióticos e fármacos e outros estão envolvidos em doenças, na interação dos fungos com plantas e animais. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi obter metabólitos secundários como pigmentos e metabólitos biologicamente ativos produzidos por fungos filamentosos. Foram selecionadas cinco linhagens sendo elas Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum e Penicillium sp. Estes fungos foram selecionados devido à sua capacidade de produzir e secretar pigmentos em meio ágar batata dextrose. Para confirmação ou identificação em nível de espécie dos fungos, foram utilizados o sequenciamento parcial da região intergênica (ITS) do DNA ribossomal e uma região do gene da β-tubulina. Quatro dos cinco fungos foram identificados como Fusarium graminearum, Monascus purpureus e duas linhagens de Penicillium chrysogenum (linhagens 1 e 2), sendo os primers para região ITS mais adequados para a identificação em nível de espécie. As quatro linhagens produziram pigmentos em resíduos agroindustriais sob cultivo submerso. Devido à diversidade de metabólitos com atividades antibióticas produzidos por fungos filamentosos, estes filtrados coloridos foram testados contra fungos e bactérias, sendo que de quinze filtrados testados onze apresentaram inibição contra fungos e bactérias de importância médica, alimentar e agronômica. Os filtrados de resíduo de uva e soro de queijo do fungo Penicillium chrysogenum 1 se destacaram, apresentando, também, atividade amebicida contra linhagem de Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Utilizando a técnica ESI-MS, foi realizado um perfil metabólico do filtrado de soro de queijo, sendo confirmada a presença de penicilina G, pela massa molar protonada e pelo perfil de fragmentação por ESI-MS/MS. Além disso, foi sugerida a presença dos metabólitos penicilina V e rugulosina, com comprovada atividade antibiótica. Portanto, o fungo Penicillium chrysogenum 1 foi selecionado para estudos futuros de caracterização dos pigmentos produzidos e análise mais detalhada dos metabólitos ativos, devido ao status GRAS atribuído a essa espécie, aos poucos estudos relacionados à produção de pigmentos e ao potencial de produzir metabólitos ativos em resíduos agroindustriais. / Filamentous fungi produce a diverse array of secondary metabolites that have a remarkable impact on society. Some metabolites are exploited for their antibiotic and pharmaceutical activities, other are involved in diseases, due to the fungi interactions with plants or animals. In this context, the goal of this work was the obtention of secondary metabolites as pigments and biologically active metabolites produced by filamentous fungi. Five strains were selected Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum and Penicillium sp. These fungi were selected due to the ability to produce and secrete pigments on potato dextrose agar. To confirm and/or identify the fungi at species level, we used the partial sequencing of the intergenic region (ITS) of the ribosomal DNA and a region of the β-tubulin gene. Four of the five fungi were identified as Fusarium graminearum, Monascus purpureus and two strains of Penicillium chrysogenum (strains 1 and 2) and the primers to the ITS region were more suitable for the identification at species. The four strains produced pigments on agro-industrial residues under submerged culture. Because of the diversity of antibiotic activity metabolites produced by fungi, these coloured filtrates were tested against fungi and bacteria. From the fifteen tested filtrates, eleven showed inhibition against bacteria and fungi with medical, food and agronomical importance. The filtrates of grape waste and cheese whey of the fungus Penicillium chrysogenum 1 showed higher activity, including, amoebicidal activity against a strain of Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Using an ESI-MS approach, a metabolic profile was obtained for the cheese whey filtrate, being confirmed the presence of penicillin G, because of the protonated molar mass and the fragmentation profile by ESI-MS/MS. In addition, was suggested the presence of the metabolites penicillin V and rugulosin, all with proven antibiotic activity. Therefore, the fungus Penicillium chrysogenum 1 was selected for future studies as the characterization of the produced pigments and more detailed analysis of the active metabolites, due to the GRAS status attributed to this specie, to the few studies related to the pigments production and to the potential to produce active metabolites on agro-industrial residues.

OLIVEIRA, Francisco Carlos de. Estudo químico de fungos endofíticos associados a plantas do bioma caatinga. / Submitted by Weslayne Nunes de Sales (weslaynesales@ufc.br) on 2017-03-27T12:22:21Z No. of bitstreams: 1 2016_tesefco.pdf: 7955947 bytes, checksum: e5a6a0ebb719856087174dcc25f2c0c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-03-29T17:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tesefco.pdf: 7955947 bytes, checksum: e5a6a0ebb719856087174dcc25f2c0c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T17:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tesefco.pdf: 7955947 bytes, checksum: e5a6a0ebb719856087174dcc25f2c0c5 (MD5) Previous issue date: 2017 / The chemical study of endophytic fungi associated with plants of the Caatinga biome was carried out through the identification of volatile organic compounds (VOCs) and the isolation of non-volatile metabolites produced by ten fungi of the family Botryosphaeriaceae and one of the family Nectriaceae. In the identification of VOCs produced by the fungus Albonectria rigidiuscula (Nectriaceae), four different culture media (BD, BDA, peptone and rice) and three incubation periods (7, 14 and 21 days) were used, using the same techniques of extraction and analysis. In the study of identification of VOCs, the fungi were: L. gonubiensis, L. parva, L. pseudotheobromae, L. theobromae, Neosicoccum ribis, N. cordaticola, N. parvum, Botrysphaeria mamane and Pseudofusicoccum stromaticum cultivated in BD under the same conditions. As extraction and analytical technique, headspace solid phase microextraction (SPME-HS), coupled with gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), was used. The data of the analyzes were also submitted to statistical treatments of PCA and HCA. The identification of fungal VOCs was adequate to discriminate ten species of the family Botryosphaeriaceae. The discrimination of the N. parvum / N. Ribis pointed out the importance of VOCs as an auxiliary chemotaxonomic tool. In addition, α-bisabolol, which was produced at high level (88.83%) by the P. stromatium fungus, can be identified as a chemical marker for this specie. The production of VOCs by the A.rigidiuscula fungus showed greater qualitative and quantitative variations in nutrient poor media. The fungi N.parvum, L. gonubiensis and A. rigidiuscula presented cytotoxic potential and the study of non-volatile compounds showed significant variations in the fatty acids produced in the mycelia and extracted liquid media. The metabolites (3S, 4S)-4-hydroxymellein, cyclic (Leu-Pro), cyclic (S-Phe-S-Pro), (3S, 4R)-4-hydroxymellein mellein, pestalopyrone, xylitol, cyclo (L-Pro-L-Tyr) and tyrosol. The isolation of diketopiperazines suggests a relationship of these compounds with the cytotoxic potential of active extracts, since the anticâncer potential of this class is reported in the literature. / O estudo químico de fungos endofíticos associados a plantas do bioma Caatinga foi realizado através da identificação de compostos orgânicos voláteis (COVs) e do isolamento de metabolitos não voláteis produzidos por dez fungos da família Botryosphaeriaceae e um da família Nectriaceae. Na identificação de COVs produzidos pelo fungo Albonectria rigidiuscula (Nectriaceae) foram utilizados quatros meios de cultura diferentes (BD, BDA, peptona e arroz) e em três períodos de incubação (7, 14 e 21 dias), empregando-se as mesmas técnicas de extração e análise. No estudo de identificação de COVs, os fungos Lasiodiplodia citricola, L. gonubiensis, L. parva, L. pseudotheobromae, L. theobromae, Neosicoccum ribis, N. cordaticola, N. parvum, Botrysphaeria mamane e Pseudofusicoccum stromaticum foram cultivados em BD, sob as mesmas condições. Como técnica de extração e análise, utilizou-se a micro-extração em fase sólida por headspace (HS-MEFS), aliada à cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM). Os dados das análises foram ainda submetidos a tratamentos estatísticos de ACP e AAH. A identificação de COVs fúngicos se mostrou adequada para discriminar dez espécies da família Botryosphaeriaceae. A discriminação do complexo N. parvum/N. ribis apontou a importância de COVs como uma ferramenta quimiotaxonômica auxiliar. Além disso, o α-bisabolol que foi produzido em alto teor (88,83%) pelo fungo P. stromaticum, pode ser apontado como um marcador químico para a espécie. A produção de COVs pelo fungo A. rigidiuscula mostrou maiores variações qualitativas e quantitativas nos meios de cultura mais pobres em nutrientes. Os fungos N.parvum, L. gonubiensis e A. rigidiuscula apresentaram potencial citotóxico e o estudo de compostos não voláteis apontou variações significativas nos ácidos graxos produzidos nos micélios e meios líquidos extraídos. A partir dos extratos fúngicos ativos foram isolados os metabólitos (3S, 4S)-4-hidroximeleina, ciclo (Leu-Pro), ciclo (S-Phe-S-Pro), (3S, 4R)-4-hidroximeleína, (R)-meleina, pestalopirona, xilitol, ciclo (L-Pro-L-Tyr) e tirosol. O isolamento de dicetopiperazinas sugere uma relação destes compostos com o potencial citotóxico dos extratos ativos, uma vez que o potencial anticâncer desta classe é relatada na literatura.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-06T16:54:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T16:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos endofíticos constituem um grupo de micro-organismos produtores de metabólitos secundários bioativos. Dentro desta perspectiva, foi estudado o potencial antimicrobiano do endofítico Cochliobolus sativus, isolado do feijoeiro comum Phaseolus vulgaris. Foi investigada a capacidade deste fungo em produzir metabólitos secundários com atividade antifúngica e antibacteriana em diferentes condições de crescimento, levando em consideração o meio de cultura, o fotoperíodo e o tempo de incubação. Os extratos gerados nas diferentes condições foram testados contra quatro fitopatógenos de importância agrícola e bactérias Gram-positivas e Gram-negativas de interesse médico e industrial, utilizando o método de diluição em ágar e difusão em ágar, respectivamente. O extrato que apresentou os melhores resultados de inibição determinou a melhor condição de crescimento para a síntese desses compostos. Foi observado que a atividade do extrato E4 nos micro- organismos testados foi superior a atividade dos demais extratos, apresentando inibição significativa de 52%, 29,69% e 8,16% do crescimento micelial dos fungos Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani e Fusarium oxysporum. A inibição do fitopatógeno Colletotrichum lindemuntianum não foi significativa. Quanto as bactérias, a atividade dos extratos brutos só foi observadas nas Gram-positivas Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Enterococcus faecalis, apresentando os melhores halos de inibição, pelo extrato bruto 4, de 12 mm, 10 mm e 6,8 mm, respectivamente. A menor MIC (concentração mínima inibitória) do extrato bruto foi contra S. aureus (MIC = 32 μg mL -1 ), enquanto em B. subtillis e E. faecalis foi de 68 μg mL -1 . Sendo assim, foi selecionada a condição de crescimento correspondente ao extrato bruto E4 para otimização da síntese de metabólitos secundários em larga escala. Ensaios biológicos foram realizados, para averiguação da influência do pH do filtrado fúngico na extração com acetato de etila. Os resultados indicaram que não há necessidade de acidificação ou alcalinização do filtrado para se obter os compostos bioativos. Posteriormente, os extratos brutos foram submetidos a análises de cromatografia à gás, apontando inicialmente, para dois compostos majoritários. Procedimentos futuros serão empregados para o isolamento e caracterização completa desses compostos e será testada a capacidade do fungo para inibir o crescimento de fitopatógenos in vivo. / From this perspective, we investigated the potential antimicrobial activity of Cochliobolus sativus endophyte, isolated from the common bean Phaseolus vulgaris. We investigated the ability of this fungus to produce antifungal and antibacterial secondary metabolites in different growth conditions, taking into account the culture medium, photoperiod and incubation time. Extracts of the culture media generated under the various growth conditions were tested against four phytopathogenic fungi of agricultural importance and against gram- positive and gram-negative bacteria of medical and industrial interest, using the agar dilution method and agar diffusion, respectively. The extract that showed the best inhibition results determined the best growth condition for the synthesis of these compounds. Extract E4 showed the higher antifungal and antibacterial activities inhibiting 52%, 29.69%, and 8.16% of the mycelial growth of the fungus Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum, respectively. Also, this extract presented significant activity against gram-positive bacteria Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, and Enterococcus faecalis,producing inhibition zones of 12 mm, 10 mm, and 6.8 mm in diameter, respectively. MIC (minimum inhibitory concentration) values were determined as 32 ug mL -1 for S. aureus and 68 ug mL -1 for B. subtilis and E. faecalis . Therefore, the growth conditions that lead to extract E4 were selected for large scale fermentation and isolation of bioactive metabolites. Biological assays were performed to investigate the influence of the pH of the culture filtrates on the of extraction of the metabolites. The results indicated that there is no need for acidification or alkalinization of the filtrate to improve the extraction of the bioactive compounds. Subsequently, the crude extracts were subjected to analysis by Gas-Chromatography-Mass Spectrometry, pointing initially to two major compounds. Future procedures will be applied to the complete isolation and characterization of these compounds, which will be tested for its ability to inhibit in vivo growth of pathogens.

NASCIMENTO, Hélio Oliveira do. Estudo do potencial químico e citotóxico dos metabólitos secundários do fungo endofítico Periconia hispidula. 2016. 154 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-08-01T20:21:47Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-08-01T20:22:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:22:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) Previous issue date: 2016 / Periconia hipidula é um fungo endofítico isolado de folhas secas provenientes de dunas do semiárido do estado da Bahia. O fungo foi submetido ao cultivo através da variação de fatores nutricionais em quatro meios diferentes: MPD (malte, peptona e dextrose), BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura) e MntPL (manitol, peptona e levedura), e análise dos extratos em diferentes dias de incubação (7, 14, 21, 28 dias). A prospecção da atividade citotóxica preliminar foi realizada a partir dos extratos obtidos frente à linhagem de células tumorais de câncer de cólon (HCT-116). Os extratos MPD – 28 dias, BDL - 28 dias e BD - 21 dias apresentaram uma atividade citotóxica promissora e foram preliminarmente selecionados para o estudo químico. O fracionamento cromatográfico do extrato MPD-28 dias, resultou no isolamento de 11 metabólitos secundários caracterizados como {(R), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-1)}, { (S), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-2)}, {E, 1-(2,5 diidroxi-fenil) but-2-en-1-ona (PS-3)}, {1-(2, 5 diidroxi-fenil)-butan-1-ona (PS-4)}, Z-3-(3 hidroxifenil) propenoato de metila (PS-5), modiolido A (PS-7), fusanolido B (PS-8), estagonolido E (PS-9), {(3R,4R)-3,4diidro,3,4,8 triidroxi,naftalen-1-(2H)-ona (PS-11)}, (4S)-isosclerona (PS-12), além de PS-10 que se encontram em fase de caracterização estrutural. Os extratos BDL-28 dias e BD-21 dias apresentaram um perfil cromatográfico bastante semelhante ao extrato MPD-28 dias, desta forma, os fracionamentos cromatográficos de ambos os extratos foram direcionados para o isolamento de substâncias ausentes em MPD-28 dias. O ácido 3,4 diidroxi-benzóico (PS-6) foi isolado apenas do extrato BD-21 dias, enquanto que o fracionamento do extrato BDL 28d forneceu PS-13 (em fase de caracterização estrutural) como diferente. Dentre os metabólitos isolados, os compostos (2S)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, fusanolido B apresentaram caráter inédito na literatura. Os compostos isolados mostraram-se inativos em ensaios de atividade citotóxica frente a cepas de HCT-116 e MC-27 (adenocarcinoma de mama). No entanto, o composto 1-(2,5-diidroxifenil)-but-2-en-1-ona apresentou elevada inibição com CIM de 62,5 µg/mL ao ser submetido à ensaio antimicrobiano frente a cepas de fungos Candida Krusei (ATCC® 142432TM) e Candida albicans (ATCC® 10231TM) e 125 µg/mL frente à Candida parapsilosis (ATCC® 22019TM), enquanto que o (2R)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, Z-3-(3-hidroxifenil)-propenoato de metila, o modiolido A, o estagonolido E, o fusanolido B e a 3,4-diidro- 3,4,8-triidroxi-1(2H)-naftalelona apresentaram moderada atividade com CIM de 500 µg/mL. Técnicas cromatográficas usuais, incluindo partição líquido-líquido, coluna de sílica flash e cromatografia de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabólitos secundários, enquanto que a caracterização estrutural foi possível através do uso de técnicas espectrométricas utilizando infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM) e ressonância magnética nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura. / Periconia hispidula is an endophytic fungus isolated from dried leaves from semi-arid dunes of Bahia. The fungus was subjected to cultivation by varying nutritional factors in four different culture mediuns: MPD (malt, peptone and dextrose), BD (potato dextrose), BDL (potato, dextrose and yeast) and MntPL (mannitol, peptone and yeast), and analyzing the extracts on different incubation days (7, 14, 21, 28 days). A survey of primary cytotoxic activity was carried out from the extracts against tumor cell line of colon cancer (HCT-116). The MPD extracts - 28 days BDL - 28 days and BD - 21 days showed a promising cytotoxic activity and were preliminarily selected for the chemical study. The chromatographic fractionation of MPD-28 days extract resulted in the isolation of 11 secondary metabolites characterized as {4-chromanone, 6-hydroxy-(R) -methyl- (PS-1)}, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, {E, 1-(2,5 dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one (PS-3)}, {1-(2, 5 dihydroxyphenyl)-butan-1-one (PS-4)}, {Z-methyl-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate (PS-5)}, modiolide A (PS-7), fusanolide B (PS-8), stagonolide E (PS-9), {(3R,4R)-3,4-dihydro, 3,4,8- trihdroxy, naphthalen-1(2H)-one (PS-11)}, {(4S) isosclerona (PS-12)}, furtermore PS-10 without structural characterization yet. The BDL-BD-28 days and 21 days extracts presented a chromatographic profile very similar to MPD-28 days extract, thus, the chromatographic fractionations of both extracts were targeted for isolation of substances absent in MPD-28 days. The 3,4 dihydoxy-benzoic acid was isolated just from the BD-extract 21 days, while the fractionation of the extract BDL 28days gave (PS-13 without structural characterization yet) as different. Among the isolated metabolites, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, fusanolido B and PS10 (probably) showed were new compounds. The isolated compounds were shown to be inactive in cytotoxicity assays against strains of HCT-116 and MC-27 (breast adenocarcinoma). However, the 1- (2,5-dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one showed strong inhibition with a MIC of 62.5 µg/mL to be subjected to antimicrobial test against strains of fungi Candida Krusei (ATCC® 142432TM) and Candida albicans (ATCC® 10231TM) and CIM of 125 µg/mL against Candida parapsilosis (ATCC® 22019TM), while {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl-}, Z-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate methyl, modiolide A, estagonolide E, fusanolido B and 3R,4R-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-(2H) -naftalelone showed moderate activity with MIC of 500 µg / mL.Usual chromatographic techniques including liquid-liquid partitioning, flash chromatography and high pressure liquid chromatography (HPLC) were used for the isolation of secondary metabolites, while the structural characterization was possible through the use of spectrometric techniques using infrared (IR), mass spectrometry (MS), and uni and bidimensional techniques of nuclear magnetic resonance (NMR), and comparison with literature data.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Retido.pdf: 19733 bytes, checksum: 6aad255badc436a06364517de2344ab6 (MD5) Previous issue date: 2014-10-31 / Universidade Federal de Minas Gerais / Few studies are targeted concerning the chemistry of the secondary metabolism from endophytic fungi associated to edible fruits. In this sense, it is worth to explore the the microbial metabolic skills, particularly from the fungi species naturally present in this host, since a plethora of compounds from different biossintetic groups with diverse bioactivities may have been directly introduced to human diet. Therefore, the aim of the work encompassed the chemical and metabolic investigation of the fungus isolated from sympthomless apple fruits, the specie Talaromyces rugulosus, as well as the fungus Setophoma sp. isolated from healthy guava fruits. The study was based on the chemical prospecting of the fungal metabolism by means of OSMAC approach. In this step, besides the screening of known metabolites, the investigation was carried out in order to encounter new natural products biossintetized by the studied strains. Aiming to reach a fast and effective dectection, the UHPLC-HRMS based dereplication combined to dedicated database queries was extensively applied. The use of these integrated approaches allowed the establishment of a broad chemical profile owned to each microorganism and has led to the identification of seven new depsides produced by Setophoma sp. and novel halogenated alkaloids by T. rugulosus through spectroscopic data, chiefly NMR and HRMS-MS. In addition to these results, the induction of known perilenequinones produced by Setophoma sp. strain was observed when it was submitted to the co-cultive with other fungi species. Some of the novel poliketides showed moderate antimicrobial activity against S.aureus, while the perilenequinones comprised a seeming inhibition of some tested Penicillium species. Concerning T. rugulosus, it was also verified if the fungus showed to be skillfull in biotransformations of compounds naturally owned to apples chemical composition, such as flavonoids and organic acids. Whereas any product from this proposal was detected, a remarkable production of multicolanic acid was observed by the use of the tested substrates into the culture medium, suggesting a likely marker for this specie. Finally, taking into account the fact that fruits represent a rich source of nutrients for its associated microbial inhabitants, it is worth to consider that secondary metabolites biosynthesis in loco be favoured. Therefore it was proposed the monitoring of the most common metabolites produced by T. rugulosus into commercial apple extracts. The detection study was carried out by UHPLC-MS/MS via dynamic MRM experiments, which allowed the detection of compounds potentially produced by the fungus in the evaluated apple extracts. / Poucos são os estudos dirigidos aos fungos endofíticos associados a frutos comestíveis no que tange a química do metabolismo secundário destes organismos. Neste sentido, esforços para o melhor conhecimento com relação à capacidade metabólica da microbiota fúngica existente nestes hospedeiros são relevantes já que, compostos das mais diversas classes biossintéticas e bioatividades podem ser potencialmente incorporados diretamente à dieta humana. Portanto, a proposta do trabalho envolveu a exploração química e metabólica de fungos isolados a partir de frutos saudáveis de maçã, a espécie Talaromyces rugulosus e a espécie Setophoma sp., isolada de goiaba. O estudo baseou-se na prospecção química do metabolismo fúngico aplicando-se a abordagem OSMAC. Neste enfoque, além do screening de compostos conhecidos, a investigação foi direcionada ao encontro de novos produtos naturais biossintetizados pelas espécies. Para uma detecção rápida e eficaz, a metodologia de derreplicação via UHPLC-HRMS e consultas a bancos de dados comerciais e in house foi amplamente utilizada. A prática destas abordagens integradas permitiu o estabelecimento do perfil químico inerente a cada micro-organismo o que conduziu à identificação de sete novos depsídeos produzidos por Setophoma sp. e novos alcaloides halogenados por T. rugulosus através de dados espectroscópicos de RMN e de HRMS-MS. Pela mesma abordagem, também houve o conhecimento sobre a indução da produção de conhecidas perilenequinonas por Setophoma sp. quando em co-cultivo a outras espécies fúngicas. Alguns dos novos policetídios isolados deste micro-organismo apresentaram moderata atividade antimicrobiana frente à bactéria S.aureus, enquanto que a perilenequinona estenfiperilenol, demonstrou aparente inibição ao crescimento de espécies do gênero Penicillium. A capacidade do sistema enzimático de T. rugulosus em biotransformar substratos naturais à composição dos frutos de maçã, como alguns ácidos orgânicos e flavonóides também foi avaliada. Não foram detectados produtos de biotransformação, porém constatou-se alta indução metabólica de ácido multicolâncio pela ação dos substratos testados, evidenciando um possível marcador da espécie quando em estresse ambiental. Por fim, considerando-se os frutos uma rica fonte nutricional à microbiota ali existente, podendo favorecer a biossíntese de metabólitos secundários in loco por estes organismos, foram monitorados alguns compostos comumente produzidos por T. rugulosus nos meios de cultura avaliados (que mimetizam o habitat natural microbiano. Através das técnicas analíticas de UHPLC-MS/MS via experimentos de MRM dinâmico, foram detectados dois metabólitos potencialmente produzidos por T. rugulosus nos extratos de maçãs comerciais avaliados.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2209.pdf: 3433970 bytes, checksum: f1696bf3d4dba44ef3cb8eb1b129cdf5 (MD5) Previous issue date: 2008-10-11 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describes the investigation of part of the secondary metabolism of actinomicete Streptomyces clavuligerus and endophytic filamentous fungus Penicillium sp isolated from Murraya paniculata; Penicillium brasilianum and Aspergillus aculeatus isolated from Melia azedarach and Penicillium griseoroseum isolated from the grains of Coffea arabica. Preliminary tests were realized to define the best composition of medium culture and the best condition of cultivation Streptomyces clavuligerus. On the other hand, the endophytic fungus were cultivated in rice and Czapec´k (medium liquid). The anthranilic acid and the 7-hydroxy-2- methyl-chromone were identified from the extracts of S. clavuligerus by spectroscopic methods 1D e 2D NMR and mass spectrometry. Methodologies of analysis for detection of β-lactam antibiotics were developed by liquid chromatography combined with mass spectrometry. The identification was based on studies of standard compounds and comparison with literature data. These methodologies were efficient in the analysis of this type of substances and they allowed the detection and identification of β-lactam antibiotics such as the penicillin N, the cephamycin C, deacetoxy-cephalosporin C and the clavulanic acid in small amounts in S. clavuligerus the extracts. In the endophytic fungus extracts were possible to identify the 6-aminopenicillanic acid, precursor of the penicillin G and metabolites no β-lactams as nucleotides thymine and adenine. / Este trabalho descreve a investigação química de uma parte do metabolismo secundário do actinomiceto Streptomyces clavuligerus e dos fungos endofíticos filamentosos Penicillium s.p isolado de Murraya paniculata; Penicillium brasilianum e Aspergillus aculeatus isolados de Melia azedarach e Penicillium griseoroseum isolado dos grãos de Coffea arabica. Inicialmente, foram realizados testes preliminares para definir a melhor composição do meio de cultura e as melhores condições de cultivo para Streptomyces clavuligerus, já os fungos endofíticos foram cultivados em arroz e em meio líquido Czapec k. Dos extratos de S. clavuligerus foram identificados, por métodos espectroscópicos de RMN 1D e 2D e espectrometria de massas, o ácido antranílico e a 7-hidroxi-2-metilcromona. Com o objetivo de determinar a presença de antibióticos β-lactâmicos e outros metabólitos nos extratos foram desenvolvidas metodologias de detecção por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas. A identificação das substâncias foi feita com base no estudo de padrões comerciais e levantamento bibliográfico. Estas metodologias se mostraram eficientes na análise deste tipo de substâncias e permitiu a detecção de antibióticos β-lactâmicos como a penicilina N, a cefamicina C, a deacetoxicefalosporina C e o ácido clavulânico nos extratos de S. clavuligerus. Estas metodologias foram aplicadas nas análises dos extratos fúngicos onde foi identificado o ácido 6-aminopenicilânico, precursor da penicilina G e metabólitos não β-lactâmicos como os nucleotídeos timina e adenosina.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:07Z : No. of bitstreams: 1 cafeu_mc_dr_araiq.pdf: 2687839 bytes, checksum: 6f78bffb8a9f427b48e9b75f8cda9db6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve a triagem de 21 fungos endofíticos associados a espécies vegetais de Cerrado e Mata Atlântica. Os extratos brutos fornecidos por estes fungos foram avaliados quimicamente (CLAE e RMN1H) e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostraram promissores. Após esta triagem, os fungos Xylaria sp. E Colletotrichum crassipes, associados a Casearia sylvestris, foram selecionados para o estudo químico/biológico. Estes fungos foram cultivados nos meios líquido (MDB) e sólido (milho) para obtenção dos extratos brutos. O extrato bruto de Xylaria sp. em milho foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento da griseofulvina, 7-desclorogriseofulvina e citocalasina B, enquanto que o extrato obtido do meio líquido conduziu ao isolamento da citocalasina D, citocalasina C e 5-carbóxi-6-hidroxi-3-metil-3,4- diidroisocumarina. Após fracionamento do extrato bruto do endófito C. crassipes no meio líquido MDB foram isoladas 8 substâncias da classe de dicetopiperazinas, N-(2-feniletil)acetamida, tirosol e as substâncias inéditas 1-hidroxi-1-feniletil-tirosol e (6-metil-3- (feniletóxi)-1,4-dioxan-2-il)metanol. Algumas substâncias puras foram submetidas à bioensaios e apresentaram potencial bioatividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum e nos ensaios antioxidante e anticolinesterásico. As citocalasinas D e B isoladas durante este trabalho e outras 5 citocalasinas isoladas anteriormente foram submetidas à avaliação da citotoxicidade utilizando linhagens de células de adenocarcinoma murino e se mostraram muito ativas. Os fungos endofíticos Xylaria sp. e C. crassipes foram utilizados em biotransformação do substrato 4-etilciclohexanona. Este experimento foi realizado através do cultivo... / This work describes the screening of 21 endophytic fungi from plant species from Cerrado and Atlantic Forest. The crude extracts produced by these fungi after fermentation in potato dextrose broth (PDB) were evaluated by HPLC, 1HNMR and potential biological activities: antifungal, antioxidant and anticholinesterasic. After screening, the extracts of Xylaria sp. and Colletotrichum crassipes, isolated from Casearia sylvestris, were selected, based on the chemical/biological results. These endophytic fungi were cultivated in PDB and corn for crude extract preparation. The crude corn extract of Xylaria sp. led to isolation of griseofulvin, 7- dechlorogriseofulvin and cytochalasin B while the crude PDB extract led to isolation of cytochalasin C, cytochalasin D and 5-carboxy-6- hidroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin. The crude PDB extract of Colletotrichum crassipes led to isolation of eight diketopiperazines, N-(2-phenylethyl)acetamide, tyrosol, 1-hidroxy-1- phenylethyl-tyrosol and (6-methyl-3-(phenethyloxy)-1,4-dioxan-2- yl)methanol. The some of them pure compounds showed potential antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaeropermum, antioxidant and anticholinesterasic activities. The Cytochalasins D and B, isolated in this work, and other five cytochalasins produced by Xylaria sp.1 showed potential activity for cytotoxic activity against adenocarcinomatous murine cells. The fungi Xylaria sp. and C. crassipes were evaluated as biocatalysts for biotransformation of 4-ethylcyclohexanone. Four biotransformation products were isolated. Their structures were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques and comparison with published data.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-13T19:56:49Z No. of bitstreams: 1 2016_RodrigoTheodoroRocha.pdf: 3894776 bytes, checksum: 1c81a5970509cf6762b3a7714e52434c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-28T16:39:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RodrigoTheodoroRocha.pdf: 3894776 bytes, checksum: 1c81a5970509cf6762b3a7714e52434c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T16:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RodrigoTheodoroRocha.pdf: 3894776 bytes, checksum: 1c81a5970509cf6762b3a7714e52434c (MD5) / Metabólitos secundários (MS) são moléculas heterogêneas de baixo peso molecular e, alternativamente aos metabólitos primários, não estão diretamente envolvidas no crescimento do organismo que as produz. Entre os microrganismos produtores de MS destacam-se os fungos filamentosos do gênero Aspergillus, abrangendo diversas espécies com estilos de vida variados e produzindo inúmeros compostos de importância para os homens, animais e plantas. A espécie A. terreus é produtora de diversos MS, entre eles destaca-se a lovastatina, fármaco da classe das estatinas, que são mundialmente utilizadas para a redução dos níveis de colesterol. Visando a bioprospecção de cepas de A. terreus produtoras de lovastatina utilizamos a genômica comparativa para detalhar a estrutura e variabilidade dos genes responsáveis por sua biossíntese. Oito cepas de A. terreus isoladas no Brasil foram submetidas a sequenciamento de segunda geração utilizando a plataforma Illumina. Os dados resultantes foram mapeamentos contra o genoma de referência da espécie (cepa NIH 2624) e observou-se uma conservação de 86% de todo genoma entre as cepas. No entanto, grandes regiões com tamanho maior que 10 kb apresentaram cobertura anômala, e posteriormente verificou-se que se tratava de variantes estruturais (grandes indels) nos genomas das cepas, inclusive no agrupamento gênico de biossíntese (BCG) de lovastatina. As variantes estruturais dentro deste loco foram validadas experimentalmente via ensaios de PCR e a ausência de genes essenciais à biossíntese da lovastatina explica o fenótipo não produtor em algumas cepas. A observação variabilidade genômica entre as cepas motivou o desenvolvimento de uma nova metodologia para detecção de BCGs em geral. Esta baseia-se na estrutura de grafos de Bruijn coloridos e pode ser aplicada diretamente nos dados brutos de sequenciamento, sem necessitar montagens genômicas de alta qualidade. Com esta abordagem foi possível identificar os limites gênicos dos agrupamentos de biossíntese dos metabólitos acetilaranotina, terretonina e outros. As análises de genômica comparativa neste estudo apontam as relevantes diferenças na composição gênica de indivíduos da mesma espécie, as quais podem ser correlacionadas com fenótipos de interesse biotecnológico. Ademais, ressaltam a complexa história evolutiva dos fungos e a plasticidade de seus genomas. Assim como acontece em muitos procariotos, os genomas dos fungos filamentosos devem ser representados por um pan-genoma. / Secondary metabolites (SM) are a heterogeneous class of low molecular weight compounds not directly involved in the growth of the producing organism. Among the SM producing microorganisms stands out the genus Aspergillus, a diverse group of filamentous fungi of medical and biotechnological relevance. The species A. terreus is known to produce several metabolites, noticeably lovastatin, belonging to the statins class with worldwide application as cholesterol lowering drugs. Aiming at the bioprospection of lovastatin producing strains we employed a comparative genomics study to pinpoint the structure and variability of the genes involved in its biosynthesis. Eight A. terreus strains, isolated in different locations, were sequenced by second generation genome sequencing platform Illumina. The resulting reads were mapped against the reference genome of A. terreus (strain NIH 2624) unveiling a 86% genome-wide conservation between the strains. However, large blocks spanning over 10 kb showed anomalous mapping coverage depth, and further analyses showed that these were structural variants (large indels) occurring in the genome of the strains. Strikingly, some strains exhibited structural variations in the lovastatin biosynthetic gene cluster (BCG), further validated by PCR assays, which offers a plausible explanation for the non-producing phenotype observed in some strains. The observation of strain-specific genome variation prompted the development of a new BCG detection methodology based on colored de Bruijn graphs and directly applied to raw sequencing data without the necessity of a high quality reference genome. This approach uncovered the presence and the gene boundaries of several BCGs in our study, such as the biosynthetic clusters for the metabolites acetilranotin, terretonin and others. The comparative genomic analyses in this study highlight the gene composition differences among individuals of the same species and the correlation with biotechnological relevant phenotypes. Moreover, underlies the complex fungal evolutive pathways and the plasticity of microbial genomes.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa De Pós-Graduação Em Ciências Médicas, Université Des Antilles Et de La Guyane, École Doctorale Santé, Environnement Et Sociétés Dans Les Amériques, 2014. / Orientador em co-tutela: Dr. Didier Stien. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-24T17:07:12Z No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-26T13:00:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-26T13:00:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Devido à natureza simbiótica dos micro-organismos endofíticos, este estudo teve como objetivo investigar a atividade antibacteriana, antifúngica e citotóxica em metabólitos secundários de extratos de fungos endofíticos foliares de plantas do bioma Amazônia e Cerrado. Neste trabalho de tese foram isolados 147 micro-organismos cultiváveis (130 fungos, 3 bactérias e 14 fungos não-identificados ou desconhecidos) a partir de 28 plantas (4 espécies coletadas no Brasil e 24 na Guiana Francesa). Todos os micro-organismos foram identificados por análise molecular de regiões específicas de DNAr, com uso de técnicas de sequenciamento genômico. Fungos endofíticos da ordem Xylariales foram os de maior frequência de isolamento neste estudo, representados por 25 isolados. Extratos brutos em AcOEt foram produzidos a partir de culturas de cada micro-organismo isolado. Uma proporção relativa significante (23,1%) dos extratos demonstrou atividade em Candida albicans ATCC 10213, enquanto 4% foram ativos em Staphylococcus aureus ATCC 29213. O potencial citotóxico dos extratos foi avaliado para as linhagens celulares humanas KB (carcinoma cervical uterino), MDA-MB-435 (melanoma), e MRC-5 (fibroblastos de pulmão normal), resultando em proporção significante com atividade de inibição da proliferação celular (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectivamente). Dezoito metabólitos secundários foram isolados a partir do fracionamento de oito extratos brutos endofíticos. Dezessete destas substâncias já tinham sido descritas anteriormente na literatura: ácido pilifórmico (24) e griseofulvina (25) isoladas de Xylaria cubensis SNB-GCI02; phomopirona A (26), pyrenocina A (27), alterperilenol (28) e novae-zelandina A (29) isoladas de Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-metilmelleina (31) e Dihidrosporothriolida (32) isoladas de Xylaria sp. SNB-GTC2501; mycoleptodiscina A (34) e mycoleptodiscina B (35) isoladas de Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; mycoepoxidieno (36) e altiloxina A (37) isoladas de Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; acremonisol A (40), semicochliodinol A (41) e cochliodinol (42) isoladas de Chaetomium globosum SNB-GTC2114; colletofragarona A2 (43) isolada de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; flavoglaucina (44) isolada de Eurotium rubrum BBS01. Dentre estas substâncias, a flavoglaucina (44) isolada de E. rubrum BBS01, demonstrou atividade comparável ao controle fluconazol em C. albicans (CIM de 4 μg.mL-1). Esta substância (44) apresentou IC50 >10 μM em células normais MRC-5, tornando-se candidata para estudos posteriores. Neste trabalho foi identificado pela primeira vez a atividade citotóxica da colletofragarona A2 (43), isolada de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201. A substância inédita nomeada pyrrocidina C (30) foi isolada a partir de L. infectoria SNB-GTC2402 e identificada através de análises espectroscópicas (Casella et al., 2013). A pyrrocidina C (30) foi ativa em S. aureus ATCC 10213 (CIM de 2 μg.mL-1), e não foi considerada citotóxica para as células normais MRC-5 (IC50 >10 μM), demonstrando seletividade na ação antimicrobiana. Estes resultados demonstram a grande diversidade fúngica endofítica em plantas do bioma Amazônia e Cerrado, e a quimiodiversidade associada aos metabólitos secundários destes micro-organismos. Fungos endofíticos tropicais, como os vistos neste trabalho, podem emergir como uma nova fonte de substâncias antimicrobianas e citotóxicas. ____________________________________________________________________________________ RÉSUMÉ / En raison de la nature symbiotique des micro-organismes endophytes, cette étude visait à étudier l'activité antibactérienne, antifongique et cytotoxique chez les métabolites secondaires des extraits endophytes foliaires de plantes de l'Amazonie brésilienne et du Cerrado. Dans ce travail de thèse 147 micro-organismes cultivables ont été isolés (130 champignons, 3 bactéries e 14 champignons non-identifiés ou inconnus) à partir de 28 plantes (4 espèces collectées au Brésil et 24 en Guyane Française). Tous les micro-organismes furent identifiés par analyse moléculaire des régions spécifiques de l'ADNr en utilisant des techniques de séquençage génomique. Des champignons endophytes de l’ordre des Xylariales furent ceux de plus importante fréquence d’isolation dans cette étude, représentés par 25 isolats. Des extraits bruts à l’AcOEt furent produits à partir de cultures de chaque micro-organisme isolé. Une proportion relative signifiante (23,1%) des extraits démontra une activité sur Candida albicans ATCC 10213, pendant que 4% furent actifs sur Staphylococcus aureus ATCC 29213. Le potentiel cytotoxique des extraits fut évalué pour des lignées cellulaires humaines KB (carcinome cervical utérin), MDA-MB-435 (mélanome), et MRC-5 (fibroblastes de poumon normal), résultant en proportion signifiante avec activité d’inhibition de la prolifération cellulaire (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectivement). Dix-huit métabolites secondaires furent isolés et identifiés à partir du fractionnement des extraits bruts de huit endophytes. Dix-sept de ces substances furent déjà décrites précédemment dans la littérature: l’acide piliformique (24) et la griséofulvine (25) isolés à partir de Xylaria cubensis SNB-GCI02; La phomopirone (26), la pyrenocine (27), l’alterpérilenol (28) et la novae-zelandine (29), isolés de Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-métilmelleina (31) et la dihidrosporothrioride (32) isolées à partir de Xylaria sp. SNB-GTC2501; La mycoleptodiscine (34) et la mycoleptodiscine B (35) isolées à partir de Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; le mycoepoxidiène (36) et la altiloxina A (37) isolés à partir de Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; L’acremonisol (40), le semicochliodinol (41) et le cochliodinol (42) isolés à partir de Chaetomium globosum SNB-GTC2114; la colletofragarone A2 (43) isolée à partir de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; la flavoglaucine (44) isolée à partir de Eurotium rubrum BBS01. Parmi ces substances, la flavoglaucine (44) isolée à partir de E. rubrum BBS01 démontra une activité comparable au contrôle fluconazol en C. albicans (CIM de 4 μg.mL-1). La substance (44) présenta IC50 >10 μM sur cellules normales MRC-5, ce qui en fait un candidat pour des études ultérieures. Dans ce travail, fut identifié pour la première fois l’activité de la colletofragarone A2 (43) isolée à partir de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201. La substance inédite nommée pyrrocidine C (30) fut isolée à partir de L. infectoria SNB-GTC2402 et identifiée par des analyses spectroscopiques (Casella et al., 2013). La pyrrocidine C (30) fut active en S. aureus ATCC 10213 (CIM de 2 μg.mL-1) et ne fut pas considérées cytotoxique pour les cellules normales MRC-5 (IC50 >10 μM), démontrant une sélectivité dans l’action antimicrobienne. Ces résultats démontrent la grande diversité des endophytes fongiques chez les plantes de l'Amazonie brésilienne et du Cerrado et la grande chimiodiversité associée aux métabolites secondaires de ces micro-organismes. Des champignons endophytes tropicaux, comme ceux présentés dans cette étude, peuvent apparaître comme une nouvelle source de substances antimicrobiennes et cytotoxiques. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Because of the symbiotic nature of endophytes, this survey aims to investigate the probality of discovering antibacterial, antifungal and cytotoxic activities in secondary metabolites of leaf endophytes isolated from plants of Amazon and Cerrado biomes. In this study, 147 cultivable microorganisms were isolated (130 fungi, 3 bacteria and 14 unidentified or unknown microbes) from 28 plant species (4 species collected in Brazil and 24 in French Guyana). All endophytes were identified by molecular analyses of specific rDNA regions, with genomic sequencing techniques. Fungal endophytes belonging to Xylariales order were the most frequently isolated in this study, represented by 25 isolates. Crude AcOEt extracts were produced from cultures of each isolated endophyte. A significant relative proportion (23,1%) of extracts showed activity in Candida albicans ATCC 10213, while 4% were active in Staphylococcus aureus ATCC 29213. The cytotoxic potencial of the extracts was evaluated for human cell lines KB (uterin cervical carcinome), MDA-MB-435 (melanoma) and MRC-5 (normal lung fibroblasts), and a significant proportion of them showed cellular proliferation inhibition (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectively). Eighteen secondary metabolites were isolated by the fractionation of eight endophytic extracts. Seventeen of these substances had already been previously described in the literature: piliformic acid (24) and griseofulvin (25) isolated from Xylaria cubensis SNB-GCI02; phomopiron A (26), pyrenocin A (27), alterperilenol (28) and novae-zelandin A (29) isolated from Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-metilmellein (31) and dihidrosporothriorid (32) isolated from Xylaria sp. SNB-GTC2501; mycoleptodiscin A (34) and mycoleptodiscin B (35) isolated from Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; mycoepoxidien (36) and altiloxin A (37) isolated from Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; acremonisol A (40), semicochliodinol A (41) and cochliodinol (42) isolated from Chaetomium globosum SNB-GTC2114; colletofragaron A2 (43) isolated from Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; flavoglaucin (44) isolated from Eurotium rubrum BBS01. Among these substances, flavoglaucin (44), isolated from E. rubrum BBS01, showed comparable antifungal activity with the positive control fluconazol in C. albicans (MIC of 4 μg.mL-1). Flavoglaucin (44) also showed IC50 >10 μM in normal MRC-5 cells, becoming a good candidate for further studies. In this work, the cytotoxic activity of colletofragaron A2 (43), isolated from Colletotrichum sp. SNB-GTC0201 was described for the first time. The unpublished substance named pyrrocidin C (30) isolated from L. infectoria SNB-GTC2402 was identified by spectroscopic analyses (Casella et al., 2013). The pyrrocidin C (30) was active in S. aureus ATCC 10213 (MIC of 2 μg.mL-1), and was not considered cytotoxic for normal MRC-5 cells (IC50 >10 μM), showing selectivity in antimicrobial activity. These results demonstrate the great endophytic fungal diversity in plants of Amazon and Cerrado biomes, along with the chemodiversity associated to the secondary metabolites of these endophytes. Tropical fungal endophytes, like those seen in this work, may emerge as a new source of antimicrobial and cytotoxic substances.