A infecção por Cryptosporidium serpentis é uma das enfermidades mais importantes em répteis e se caracteriza por infecção crônica, clínica ou subclínica, e presença de gastrite hipertrófica severa, regurgitação, perda de peso progressiva, mortalidade eventual e eliminação contínua e intermitente de oocistos em fezes. O objetivo deste estudo foi padronizar um teste imunoenzimático (ELISA) indireto para detecção de anticorpos contra C. serpentis, e acompanhar a evolução clínica, parasitológica e da resposta imune humoral em serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis. Foram utilizadas 21 serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis e alojadas no Instituto Butantan, São Paulo, Brasil. As análises clínica e parasitológica foram realizadas em 21 serpentes por meio do registro diário dos sinais clínicos apresentados e pesquisa mensal da eliminação fecal de oocistos, em lâminas coradas pela técnica de Kinyoun. A avaliação sorológica foi realizada mensalmente utilizando o ELISA indireto para pesquisa de anticorpos anti-C. serpentis, pelo período de 12 meses em 8 animais, 8 meses em 3 animais e 6 meses em 1 animal. O ELISA indireto foi padronizado em bloco com utilização de antígeno produzido a partir de oocistos de C. serpentis, IgY de galinha anti-gamaglobulinas de serpentes e conjugado contendo IgG de coelho anti-IgY de galinha ligada à peroxidase. Os sintomas clínicos observados foram regurgitação, inapetência alimentar e perda de peso progressiva. A análise parasitológica revelou eliminação de quantidade variável de oocistos, de forma intermitente, em todas as serpentes, com positividade de 92% (116/126). O ELISA indireto apresentou positividade em 42,9% (54/126) das amostras. Foi observada resposta imune humoral na maioria dos animais, no entanto, com presença título flutuante de anticorpos e alternância de resultados positivos e negativos, em um mesmo animal. / Infection by Cryptosporidium serpentis is one of the most important diseases in reptiles, and is characterized by chronic infection, clinical or subclinical, and the presence of severe hypertrophic gastritis, food regurgitation, progressive weight loss, mortality, and intermittent and continuous shedding of oocysts in feces. The objective of this study was to standardize an indirect enzyme immunoassay (ELISA) to detect antibodies against C. serpentis, and evaluate the clinical, parasitological and humoral immune response in snakes naturally infected with C. serpentis. Twenty one snakes naturally infected with C. serpentis and housed at the Instituto Butantan, São Paulo, Brazil, were used for accomplish clinical and parasitological analyzes of C. serpentis infection, through the daily record of clinical signs and monthly survey of fecal shedding of oocysts using Kinyoun staining technique. The serological evaluation was performed monthly using the indirect ELISA for the detection of anti-C. serpentis antibodies, for a period of 12 months in eight animals, eight months in three animals, and six months in one animal. The indirect ELISA was standardized on the basis of block titration using antigen produced from oocysts of C. serpentis, chicken IgY anti-snake gamaglobulins and a conjugate containing rabbit IgG anti-chicken IgY linked to peroxidase. Clinical symptoms consisted in food regurgitation, inappetence, and progressive weight loss. The parasitological analysis revealed intermittent fecal shedding of variable number of oocysts in all snakes, with positivity in 92% (116/126) of the samples. The indirect ELISA was positive in 42.9% (54/126) of the samples. Humoral immune response was observed in most animals, however, fluctuating antibodies levels with rotation of positive and negative results were observed in some snakes.

As serpentes são um grupo altamente diversificado, encontradas em praticamente todas as regiões do planeta, ocupando diferentes ambientes. Sua diversidade adaptativa indica a grande variabilidade dos órgãos sensoriais, adaptados ao hábitat e hábitos de cada espécie. Estudos sobre o sistema visual das serpentes são escassos e tem grande importância na compreensão de caracteres ecológicos, comportamentais e filogenéticos. Nos vertebrados as informações visuais são projetadas na retina e inicialmente processadas nessa camada neural, antes do processamento que ocorre no sistema nervoso central. Os tipos de células encontradas na retina, bem como sua densidade e distribuição variam entre as espécies e determinam especializações do sistema visual. Neste trabalho foi feita uma quantificaçao comparativa de fotorreceptores e neurônios da camada de células ganglionares (CCG) de duas espécies de serpentes colubrídeas diurnas, Philodryas olfersii e P. patagoniensis. Para tanto foram utilizadas técnicas de imunohistoquímica de opsinas e de marcação de Nissl. Serpentes adultas obtidas no Instituto Butantan foram anestesiadas com tiopental (30mg/kg) e sacrificadas com CO2. Os olhos foram enucleados e as retinas dissecadas e fixadas em paraformaldeido 4%. Um olho de cada serpente foi utilizado para fazer cortes radiais e testar diferentes tipos e concentrações de anticorpos. Para a preparação das retinas planas foram utilizados o anticorpo JH455, produzido em coelhos contra opsinas sensíveis aos comprimentos de onda curto de humanos (cones S) e o anticorpo JH492, produzido em coelhos contra opsinas sensíveis aos comprimentos de onda médio e longo de humanos (cones L/M). Foi utilizado anticorpo secundário biotinilado (gt -rb biot) e a revelação feita com estreptavidina acoplada a molécula florescente CY3. Os cortes radiais e as retinas planas foram observadas em microscópio fluorescente equipado com câmara digital conectada a microcomputador dotado de programa para captura de imagens. A partir de imagens da retina obtidas com espaçamento mínimo de 0,5 mm foram feitas as contagens das células e os mapas de isodensidade celular. A densidade média dos fotorreceptores foi semelhante nas duas espécies (11.183,1 ± 1.107,4 células/mm2 em P. olfersii e 11.531,2 ± 1.054,9 células/mm2 em P. patagoniensis), assim como a proporção dos diferentes tipos de cones (3% cones S e 83% cones L/M em P. olfersii, e 5% cones S e 85% cones L/M em P. patagoniensis). As densidades de células da CCG também foram semelhantes (10.117,5 ± 1.026 células/mm2 em P. olfersii e 9.834,9 ± 2.772,2 células/mm2 em P. patagoniensis). Entretanto, os mapas de isodensidade mostraram diferentes regiões de especialização. P. olfersii apresentou uma faixa horizontal e duas areas centralis de maior densidade celular, uma na região central e uma na região caudal, indicando a melhor acuidade visual nos campos de visão frontal e lateral, o que possivelmente auxilia na locomoção e forrageamento no extrato arbóreo. P. patagoniensis apresentou maior densidade celular na região ventral e rostral, indicando a maior acuidade no campo visual superior e posterior, auxiliando na percepção da aproximação de predadores e animais maiores, importante para a sobrevivência de serpentes terrestres e possivelmente para a percepção de presas localizadas em estrato arbustivo. / Snakes are a diversified group found in almost all regions of the planet, occupying different habitats, with exception to Polar Regions, a few islands and the deeper ocean waters. Its diversity indicates the high variability of sensory organs, which are adapted to the habits and habitats of each species. Studies about snakes visual system are scarce and have a great importance for the understanding of their ecology, behavior and phylogeny. In vertebrates the visual information is projected in the retina and initially processed in this neural tissue, before its processing in the central nervous system. The different kinds of cells present, as well as its density and distribution in the retina, vary between species and determinate specializations of the visual system. In this study we compared the density and distribution of photoreceptors and neurons of the ganglion cells layer (GCL) of two diurnal colubridae snakes, the arboreal Philodryas olfersii and the terrestrial P. patagoniensis, with opsins immunohistochemistry and Nissl staining. Adult snakes obtained in Instituto Butantan were anesthetized with thiopental (30mg/Kg) and the euthanasia was done with CO2. The eyes were enucleated and the retinas dissected and fixed in paraformaldeid 4%. One eye of each species was sectioned to test different antibodies and the counting for the determination of topographic distribution of density was made in flattened wholemount retinas. In the wholemounts retinas it was utilized the antibodies JH455 produced in rabbit against human S cone opsins and JH492 produced in rabbit against human L/M cone opsins. The photoreceptors density were similar in the two species (11,1831 ± 1,107.4 cells/mm2 in P. olfersii and 11,531.2 ± 1,054.9 cells/mm2 in P. patagoniensis), as well as the proportion of the different types of cells (3% S cones and 83% L/M cones in P. olfersii, and 5% S cones and 85% L/M cones in P. patagoniensis). The GCL cells density were also similar (10,117.5 ± 1,026 cells/mm2 in P. olfersii and 9,834.9 ± 2,772.2 cells/mm2 in P. patagoniensis). However, the isodensity maps showed different specializations regions. P. olfersii showed a horizontal streak and two areae (area centralis) with higher density, in the central and in the caudal regions, indicating a better visual acuity in the lateral and in the frontal visual field, what is possibly very important for locomotion and searching for preys (foraging) in the arboreal layer. P. patagoniensis showed a higher cell density in the ventral and rostral regions of the retina, indicating a better visual acuity in the superior and posterior visual field, what is important to perceive the approaching of predators and terrestrial animals and preys located in underbushes above the snake.

As serpentes pitvipers Crotalus durissus e Bothrops jararaca apresentam um ciclo reprodutivo sazonal com um estágio de desenvolvimento folicular ativo (vitelogênese Tipo II) no final do verão e início de outono. A cópula ocorre no outono (março até maio) e a gestação na primavera até o início do verão quando os nascimentos acontecem (Dezembro até Março). Depois do parto as serpentes permanecem em estado de quiescência folicular, o que as impede de reproduzir na próxima estação do mesmo ano. Assim, cada fêmea madura da população reproduz-se a cada dois anos caracterizando um ciclo reprodutivo bienal. A morfologia do trato reprodutivo em ambas as espécies mostra ovários e ovidutos assimétricos. Cada oviduto é dividido em três regiões distintas, a saber o infundíbulo, o útero (posterior e anterior) e a vagina. A assincronia entre a vitelogênese e a fertilização promove uma estocagem de esperma obrigatória. Esse processo ocorre na porção posterior do útero, por meio de uma contração muscular. Estudos morfofisiológicos do oviduto da jararaca e da cascavel combinados, com o uso de microscopias de luz, transmissão e varredura nunca foram conduzidos antes. A anatomia macroscópica do útero depois da cópula é caracterizada por uma torção e uma contração da musculatura uterina lisa longitudinal, a qual forma uma espiral. O útero permanece visivelmente contraído até a ovulação em setembro (início de primavera). O desenvolvimento embrionário ocorre no útero. Cada ovo ou embrião é isolado por uma constrição que funciona como uma implantação. A íntima aposição epitélio corioalantóico com o epitélio uterino indica que a placenta é do tipo epiteliocorial. As especializações da alantoplacenta em ambas as espécies caracteriza a placenta como (Tipo II). Em ambas as serpentes o oviduto parece ser um órgão capaz de exercer funções diferentes como a retenção e estocagem de esperma, manutenção e transporte dos ovos, fertilização e manutenção do embrião (gestação e placentação uterina). Machos de Bothrops e Crotalus mostram dois testículos alongados que se comunicam bilateralmente na cloaca por meio dos ductos deferentes convolutos. O diâmetro mais largo do ducto deferente, na porção distal foi observado no verão e outono, devido a espermiogênese, que ocorre um pouco antes da cópula. Em ambas as espécies observam-se um aumento dos testículos na primavera e verão provavelmente relacionada a espermatogênese, a qual também não é sincronizada com a cópula (outono) e a fertilização (setembro/outubro). Todas estas estratégias fisiológicas e morfológicas, tanto em machos quanto em fêmeas das duas espécies de serpentes promovem a liberação simultânea dos gametas no início da primavera (setembro), de modo a tornar harmônico o ciclo reprodutivo dos machos e das fêmeas. / The neotropical pitvipers Crotalus durissus and Bothrops jararaca show a sazonal reproductive cycle with an active stage of follicular development (vitellogenesis Type II) in late austral autumn and winter. Mating occurs in early to middle autumn (March to May) and gestation occurs in spring up to early summer when birth takes place (December up to March). After parturition snakes show a follicular quiescence which prevents them to reproduce in the following season of the same year. Therefore they skip one reproductive season characterizing a biennial reproductive cycle. Morphology of the reproductive tracts in both species showed the presence of unpaired ovaries and oviducts. Each oviduct is divided in four distinct regions, namely infundibulum, posterior and anterior uterus, and vagina. The lack of synchrony between vitellogenesis and fertlization, makes female store sperm obligatory. Sperm storage in both snakes occurs in the posterior portion of the uterus by means of a uterine muscle contraction and convolution. Morphological studies of the oviduct of jararaca and rattlesnakes combining the use of LM, TEM and SEM has never been carried out before. Macroscopical anatomy of the uterus after mating is characterized by convolution and contraction of the longitudinal smooth musculature which formed a spiral. The uterus remains visibly convoluted until ovulation occurs in September (early spring). Embryo development occurs in the uterus; each egg or embryo is isolated by a uterine short constricted segment that probably works as an implantation chamber like a placenta. The intimate apposition of the uterine lining with the chorioallantois indicates that the placenta is epitheliochorial type. The allantoplacenta, in both species develop folds in uterine and embryonic epithelia characterizing the second category of placenta (Type II). In both the species the oviduct has demonstrated to be an organ capable of some different functions such as sperm retaining and storage, egg uptake and transport, fertilization, maintenance of the embryo (uterine gestation and placentation) and parturition. Males of Bothrops and Crotalus show two elongated testes which communicate bilaterally with the cloaca through the coiled deferent ducts. The largest diameter of deferent ducto, was observed in summer and autumn, due to intense spermiogenesis, just before the mating season. In both species an increase in size of the testes was observed in spring and summer probably related with seasonal spermatogenesis, which is asynchronous in relation to mating (autumn). All these physiological and morphological strategies both in male and female B. jararaca and C. Durissus promote simultaneous liberation of gamets in early spring (september), in such a way to make reproductive cycle harmonic in these crotaline pitvipers.

The Bothrops alternatus is a terrestrial pitviper of the Crotalinae sub-family, Bothriopsini tribe, measuring, approximately, 1690mm. It presents a vertical distribution of approximately 700 m above sea level, and is found in Brazil, Paraguay, Uruguay and Argentina. In Brazil, it is found in the states of Minas Gerais, Goiás, São Paulo, Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul and Mato Grosso. It inhabits swamps, marshes, riverbanks and other wet habitats, fields and rocky areas, as well as farmlands. In this study, 207 specimens of Bothrops alternatus were analyzed with the objective of broadening the knowledge available about its diet and reproductive biology in the southern region of Brazil. The analysis of the digestive tube content indicated that the species is a specialist in mammals (Muridae: 80,8 %, Caviidae: 9,6 %, and Didelphidae: 9,6%). Most of the snakes began ingesting the prey at the frontal region of their bodies (93,4 %). The reproductive cycle of this species is long. Vitellogenic follicles were found throughout the year, embryos from November to January, and births were registered in February, March, April, June and August. Males possess an aseasonal reproduction and reach sexual maturity with a shorter snout-vent length than females. The smallest mature male (enlarged and opaque efferent ducts) measured 438 mm in snout-vent length and the smallest female (follicles > 10 mm) measured 701 mm. Adult females storage spermatozoids in the uterus. The number of offspring varied from 5 to 20 and their snout-vent length varied from 146 to 252 mm. Mature females possessed a greater snout-vent length than mature males, but their tails were proportionately smaller. / Bothrops alternatus, serpente viperídea, subfamília Crotalinae, tribo Bothriopsini, apresenta hábito terrestre, medindo aproximadamente 1690mm. Sua distribuição vertical é de aproximadamente 700 m em relação ao nível do mar, ocorrendo no Brasil, Paraguai, Uruguai, e Argentina. No Brasil é encontrada em Minas Gerais, Goiás, São Paulo, Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul e Mato Grosso. Esta espécie habita áreas pantanosas, ribeirinhas, brejos e outros hábitats úmidos, campos e áreas rochosas além de áreas cultivadas. Neste estudo, foram analisados 207 exemplares de Bothrops alternatus com o objetivo de ampliar o conhecimento sobre a dieta e a biologia reprodutiva da espécie na região sul do Brasil. A análise do conteúdo do tubo digestório indicou que esta espécie é especialista em mamíferos (Muridae: 80,8 %, Caviidae: 9,6 %, e Didelphidae: 9,6%). A maioria das serpentes iniciou a ingestão pela região anterior do corpo da presa (93,4 %). O ciclo reprodutivo desta espécie é longo. Folículos vitelogênicos foram encontrados ao longo de todo o ano, embriões de novembro a janeiro, e nascimentos foram registrados em fevereiro, março, abril, junho e agosto. Machos possuem reprodução assazonal e atingem a maturidade sexual com comprimento rostro-cloacal (CRC) menor que fêmeas. O menor macho maduro (ductos deferentes enovelados e opacos) mediu 438 mm de CRC, e a menor fêmea madura (folículos > 10 mm), 701 mm. Fêmeas adultas estocam espermatozóides no útero. O número de filhotes variou de 5 a 20 e seu CRC de 146 a 252 mm. Fêmeas maduras possuem CRC maior que o de machos maduros, mas suas caudas são proporcionalmente menores.

This thesis paper examines how I turned real life experiences and observations into a fictionalized screenplay that explores the potential for vice inherent in tip-based service industry jobs. After that, I move on to the preproduction process and touch on casting, location scouting, visualization, production design, budgeting and crewing. Next I discuss how the preproduction and on-set efforts of individuals were all critical to our production. Then I chronicle the ups and downs of postproduction. Finally, I conclude with an admittedly subjective analysis of the effectiveness of the movie itself.

Active contours have been proven to be a powerful semiautomatic image segmentation approach, that seems to cope with many applications and different image modalities. However, they exhibit inherent drawbacks, including the sensibility to contour initialization due to the limited capture range of image edges and problems with concave boundary regions. The Gradient Vector Flow replaces the traditional image force and provides an enlarged capture range as well as enhanced concavity extraction capabilities, but it involves an expensive computational effort and considerably increased memory requirements at the time of computation. In this paper, we present an enhancement of the active contour model to facilitate semiautomatic contour detection in huge images. We propose a tile-based image decomposition accompanying an image force computation scheme on demand in order to minimize both computational and memory requirements. We show an efficient implementation of this approach on the basis of general purpose GPU processing providing for continuous active contour deformation without a considerable delay.

O município de São Paulo possui 62.356 ha e apenas 16 % de áreas verdes. Desenvolvemos um estudo sobre a composição de espécies, história natural, diversidade e distribuição das serpentes no município. Ao longo de 44 meses, registramos 38 espécies de cinco famílias. Comparamos a diversidade de espécies de três unidades climáticas: áreas Norte, Central e Sul. Houve predominância de espécies terrícolas e anurófagas. Maior abundância foi observada na estação chuvosa, e deve estar relacionada à abundância de presas e/ou reprodução. A espécie dominante foi Oxyrhopus guibei, com 24 % de dominância, seguida por Sibynomorphus mikanii (21 %) e Bothrops jararaca (16 %). A área Central apresentou maior diversidade, com espécies típicas de diferentes fisionomias vegetais, como Cerrado, Serra da Mantiqueira e Serra do Mar. Historicamente, a região do município apresentava um mosaico de diferentes formações vegetais, que apesar de encontrarem-se fragmentadas atualmente, ainda abrigam conjuntamente alta diversidade de serpentes. / The municipality of São Paulo has 62,356 ha, and only 16 % of green areas. We developed a study on species composition, natural history, diversity and distribution of snakes of the municipality. In 44 months, we recorded 38 species of snakes belonging to five families. We compared the species diversity of three climatic units: Northern, Central and Southern areas. The terrestrial and anurophagous species were predominant. Greater abundance was observed in the rainy season, and should be related to prey abundance and/or reproduction. The dominant species were Oxyrhopus guibei, with 24% of dominance, followed by Sibynomorphus mikanii (21 %), and Bothrops jararaca (16 %). The Central area showed larger diversity, with typical species from different physiognomic forms as Cerrado, Serra da Mantiqueira, and Serra do Mar. Historically, the municipality region showed a mosaic of different physiognomic forms that despite of being fragmented nowadays, still enclose together a high diversity of snakes.

A proteólise de componentes do plasma e da matriz extracelular é um fator importante no quadro hemorrágico desencadeado pela ação de venenos de serpentes. Neste estudo, avaliamos o papel dos domínios estruturais de metaloproteinases na interação com seus alvos. Ensaios de hidrólise in vitro mostraram que as metaloproteinases HF3 e bothropasina (classe P-III), e BJ-PI (classe P-I) do veneno da Bothrops jararaca, degradaram proteínas plasmáticas (fibrinogênio, fibronectina e vitronectina), além de colágeno VI e Matrigel, mostrando diferentes perfis de hidrólise. Experimentos de N-deglicosilação das proteinases mostraram que suas porções glicosídicas são importantes para a manutenção da integridade de suas estruturas e da atividade proteolítica. E ensaios para avaliar a interação das proteinases e da proteína DC (domínios tipo disintegrina/rico em cisteínas) com alguns substratos protéicos mostraram que além de seus domínios estruturais (catalítico/tipo disintegrina/rico em cisteínas) suas cadeias de carboidratos também são importantes no reconhecimento dos mesmos. / Proteolysis of plasma and extracellular matrix proteins is a key factor in the local hemorrhage induced by snake venom metalloproteinases (SVMPs). In this work we evaluated the role of the structural domains of SVMPs in the interaction with their targets. In vitro hydrolysis assays showed that the SVMPs HF3 and bothropasin (P-III class) and BJ-PI (P-I class) from Bothrops jararaca venom degraded plasma proteins (fibrinogen, fibronectin and vitronectin), collagen VI and Matrigel resulting in different hydrolysis profiles. N-deglycosylation of these proteinases showed that their carbohydrate moieties are important for keeping their structural integrity and proteolytic activity. The assays to analyze the interaction of the proteinases and of the DC protein (composed of the disintegrin-like and cysteine-rich domains) with some proteins confirmed that not only the structural domains (catalytic, disintegrin-like and cysteine-rich) but also the sugar moieties are important in the recognition of plasma and extracellular matrix proteins.

There is a large number of species existing in the world; each year, however, the number of the endangered ones rapidly increases. Nowadays, captive breeding becomes an option for their survival in refugees. Sufficient population with satisfactory breeding management gives hope for survival to the endangered species (in mid-term) or even possible future reintroduction to their natural habitat. WAZA is currently the world's leading association of worldwide zoos and similar breeding facilities. Because these institutions operate as a network to facilitate the exchange of reared individuals, for conservation purposes, their captive populations may be seen as one large population characterized by its size, i.e., the total number of individuals. Such view is currently recognized by many conservationists as the so-called concept of Noah's Ark. The space on the Ark is limited, therefore it is needed to heed the characteristics of the species aboard to maximize the conservation potential. Many factors influence the presence of species in zoological gardens. Following previous studies we selected some factors that may be important, i.e., body lenght, taxonomy, and IUCN status. Analysis of these factors among the main reptile clades shall reveal the pattern of reptile composition in worldwide zoos. One of the factors...

Snakes (Serpentes) are a group of squamate reptiles (Squamata) including more than 3600 species. The vast majority of snakes are from the group Caenophidia, which includes approximately 90% of all extant snake species and represents the most studied lineage. Squamate reptiles are variable in sex determination and genome organisation, however, caenophidian snakes are quite stable in these respects. The typical - and probably ancestral - snake karyotype is composed of 36 chromosomes with 16 macro- and 20 microchromosomes. In all snake species, genotypic sex determination (GSD) is expected and it was assumed until recently that all snakes possessed ZZ/ZW sex chromosomes. The main reason for this is that most of the studied snakes were from the group Caenophidia and in the rest of the snake lineages it was believed that their sex chromosomes were homologous. In fact, the sex chromosomes of non-caenophidian snakes have not yet been identified - with the single exception of Acrantophis dumerili. Nevertheless, a recent study showed that there was an independent evolution of XX/XY sex chromosomes in pythons and boas. Sex chromosomes of these snakes are homomorphic and so far they have not been detected by classical cytogenetic methods. In this context, the aim of this study is to explore whether it is...