Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

A Leishmaniose visceral é um problema que cresce no Estado de São Paulo afetando o homem e o cão. Os exoantígenos da membrana das leishmanias são liberados no meio de cultura. Os exoantígenos são importantes na indução da imunidade mediada pelas células T e B estimulando a produção elevada de anticorpos. Realizamos uma avaliação comparativa por ELISA e Immunoblotting de exoantígenos e antígenos totais de L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis e L. (L.) chagasi, no diagnóstico da leishmaniose visceral humana e canina. Obteve-se por ELISA sensibilidade de 100% para ambos os preparados antigênicos independente da espécie de Leishmania. A melhor especificidade em humanos e cães foi com os exoantígenos. O exoantígeno da L. (L.) chagasi teve a melhor especificidade e média de absorbâncias comparadas aos das outras espécies (p<0.005). Para o hospedeiro humano o ELISA com exoantígenos, não discriminou pacientes com leishmaniose cutânea e ou mucocutânea. O Immublotting dos exoantígenos de L. (L.) chagasi (IBleish) apresentou 100% de sensibilidade e especificidade para os cães. Os dados do IBleish-L. (L.) chagasi demonstraram a possibilidade de sua utilização como método confiável para a confirmação do diagnóstico da leishmaniose canina. / The visceral leishmaniasis is a new problem that grows in the State of São Paulo, affecting men and dogs. The exoantigens from the membrane of the Leishmania, are released out of culture medium. The exoantigens are important in the induction of immunity mediated by T and B cells, stimulating the production of antibodies. This work was carried out an evaluation of ELISA and Immunoblotting using comparatively exoantigens and total antigens of L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi for the diagnosis of canine and human visceral leishmaniasis. ELISA sensitivity was 100% for all different antigens, independent of the species of Leishmania employed. The best specificity for both human and dogs were obtained with exoantigens. Exoantigen from L. (L.) chagasi was what showed the best specificity and mean absorbance compared to those of other species (p<0.05). The ELISA with exoantigens for the human host not discriminate individuals with leishmaniasis cutaneous or mucocutaneous. The Immunoblotting that used the exoantigens of L. (L.) chagasi (IBleish) showed 100% sensitivity and specificity for the dogs. The IBleish-L. (L.) chagasi showed the possibility of its use as a reliable method to confirm the diagnosis of canine leishmaniasis.

Vem se verificando uma crescente preocupação por parte de diversos países e de órgãos internacionais de saúde e conservação animais quanto à necessidade de monitoramento da ocorrência e da distribuição de enfermidades infecciosas em populações de animais silvestres, devido ao potencial destas doenças de causarem impacto na dinâmica e conservação de espécies silvestres, na saúde dos animais domésticos e na saúde pública. A ocorrência de brucelose vem sendo relatada em diversas espécies de mamíferos marinhos, em vários centros de pesquisa no mundo, contudo, não há dados na literatura científica sobre a ocorrência desta infecção em mamíferos aquáticos fluviais brasileiros. Nos cetáceos, a brucelose é causada pela Brucella ceti, sendo associada a problemas reprodutivos, quadros de meningoencefalite e infecções em tecidos linfóides. Assim, o presente trabalho teve como objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Brucella spp. em botos-vermelhos de vida livre da Amazônia (Inia geoffrensis), procedentes da Reserva de Desenvolvimento Sustentável de Mamirauá, Tefé, Amazonas, Brasil. A pesquisa foi realizada em animais de vida livre, de ambos os sexos e várias idades, sendo realizadas duas expedições para colheita de amostras, nos anos de 2010 e 2011. De cada animal foram coletadas amostras de sangue, leite e suabes genital, anal, nasal, oral e de eventuais lesões cutâneas apresentadas. Um total de 161 animais foi capturado. A detecção de anticorpos séricos anti-Brucella foi realizada utilizando-se as provas de soroaglutinação com antígeno acidificado tamponado (AAT), teste do 2-mercaptoetanol (2-ME) e o teste de polarização fluorescente (PF). As amostras de leite e de suabes foram submetidos ao cultivo microbiológico e à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção direta de Brucella spp. As colônias bacterianas que apresentaram características morfológicas compatíveis com Brucella spp. foram identificadas pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se os primers específicos para detecção do gênero Brucella, direcionados ao DNA codificador da região interespaçadora do RNA ribossomal de Brucella (PCR-ITS). As amostras que apresentaram resultados positivos, foram caracterizadas quanto ao gene recA pela amplificação (PCR-recA) e posterior sequenciamento do produto amplificado. A PCR-ITS também foi empregada para o diagnóstico direto das infecções por Brucella spp. nas amostras de sangue, leite e suabes, as quais foram caracterizadas da mesma forma que as colônias bacterianas isoladas. As 67 amostras de soros colhidas apresentaram resultados negativos nos testes de AAT, PF e IDGA. Das 369 amostras submetidas ao cultivo microbiológico, duas amostras de suabe apresentaram características compatíveis com o gênero Brucella e resultados positivos pela PCR-ITS. Uma delas foi identificada como pertencendo à espécie Ochrobactrum intermedium. A segunda amostra não pôde ser caracterizada por não ter sido obtida em cultura pura. Das 118 amostras de sangue total analisadas pela PCR-ITS, seis (7,08%) apresentaram resultados positivos. Das 248 amostras de suabes analisadas pela PCR-ITS, uma (0,4%) apresentou resultado positivo. Das 29 amostras de leite analisadas pela PCR-ITS, cinco (17,24%) apresentaram resultados positivos. Considerando os 128 animais amostrados, 11 (8,59%) apresentaram resultado positivo pela PCR-ITS em pelo menos uma amostra testada. Das 12 amostras biológicas que apresentaram resultados positivos pela PCR-ITS e foram submetidas à PCR-recA, apenas duas apresentaram o produto amplificado no tamanho esperado. De acodo com a análise filogenética utilizada, uma delas apresentou similaridade aos microrganismos Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus. A segunda amostra foi agrupada juntamente com as bactérias Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans e Propionibacterium propionicum com maior proximidade com a espécie P. propionicum. De acordo com os resultados apresentados, não foi evidenciada a ocorrência de infecções por Brucella spp. na população amostrada pelos métodos sorológicos e microbiológicos. Foi isolada uma estirpe de Ochrobactrum intermedium de um exemplar da espécie Inia geoffrensis, contudo, a importância sanitária destes resultados para esta espécie de boto não pôde ser determinada. / There is a growing concern among several countries and international institutions of animal health and conservation regarding the surveillance of infectious diseases in wildlife populations, because these infections may cause impact on the dynamics and conservation of wildlife species, as well as on the health of livestock and public health. Brucellosis has been reported in several species of marine mammals in various research centers worldwide. However, there is no data about the occurrence of brucellosis in aquatic mammals in Brazil. Brucellosis in cetacean is caused by Brucella ceti and has been associated to reproductive problems, meningoencephalitis and lymphoid tissues infections. The objective of this study was to investigate the occurrence of Brucella spp. infection in free living amazon river dolphin (Inia geoffrensis), from Mamirauá Sustainable Development Reserve, in Tefé municipality, Amazonas State, Brazil. Samples were collected from free-living animals from both sexes and different ages during two expeditions, in 2010 and 2011. Samples of serum, whole blood and milk as well as genital, anal, nasal, oral and cutaneous lesions swabs were collected. One hundred and sixty one animals were samples. Serodiagnosis was performed using the acidified buffered antigen test (ABAT), the 2-mercaptoethanol (2ME) test and the fluorescent polarization assay (FPA). Milk and swabs samples were submitted to microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR) to the direct diagnosis of Brucella spp. Bacterial colonies showing morphologies compatible with Brucella spp. were tested by a PCR using specific primers directed to the 16S-23S interpace region of the ribosomal DNA of Brucella (ITS-PCR). Samples with positive results by ITS-PCR were amplified using primers specific to the gene recA (PCR-recA), and the amplicon was sequenced. ITSPCR was also used to diagnosis of Brucella spp. infections directly in samples of blood, milk and swabs which were characterized as the bacterial colonies. All 67 serum samples were negative in the three serological tests used. Eleven of the 128 (8.59%) animals showed positive results by ITS-PCR in at least one biological sample. Of the 369 samples tested by microbiological culture, two had positive results in ITS-PCR. Accroding to the characterization of recA gene, one of them was identified as Ochrobactrum intermedium and the other sample could not be characterized because it was not isolated in pure culture. Of the 118 whole blood samples, six (7.08%) were positive by ITS-PCR. Five of the 248 (17.24%) milk samples and one of the 248 (0.4%) swab samples were positive by ITS-PCR. Of the 12 psoitive samples by ITS-PCR, only two were amplified by the recA-PCR and sequenced. According to the phylogenetic analysis, one sample clustered with Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus group showing major similarity with C. fimi. The other sample clustered with the bacteria Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans, being more similar to Propionibacterium propionicum. An Ochrobactrum intermedium strain was isolated from a dolphin, however, the sanitary importance of the detection could not be determined.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T19:05:14Z No. of bitstreams: 1 Andréia Carvalho dos Santos. Diagnostico sorologico...2011.pdf: 1884519 bytes, checksum: 6aff70f55415c00ce177ca938c909c5e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T19:05:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andréia Carvalho dos Santos. Diagnostico sorologico...2011.pdf: 1884519 bytes, checksum: 6aff70f55415c00ce177ca938c909c5e (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A confirmação da leptospirose utilizando o Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) requer amostras da fase aguda e convalescente para identificar soroconversão ou aumento de quatro vezes nos títulos. A Organização Mundial de Saúde (OMS) recomenda que a coleta da amostra convalescente seja realizada ≥14 dias após a coleta da amostra aguda. No entanto, a dificuldade na coleta de amostras convalescentes impede a confirmação dos casos e é uma das principais causas para sub-notificação da leptospirose. Este estudo investigou a viabilidade da coleta de uma amostra de soro aguda tardia de casos internados com leptospirose e avaliou se a análise sorológica desta amostra pode melhorar a eficiência do protocolo de confirmação diagnóstica de leptospirose. De 2003 a 2009, uma vigilância hospitalar ativa em Salvador-Brasil, identificou prospectivamente pacientes hospitalizados com suspeita clínica da leptospirose. Três amostras de sangue foram coletadas para cada caso: uma amostra aguda precoce, uma amostra aguda tardia e uma amostra convalescente, coletadas respectivamente nas primeiras 24 horas após hospitalização, e 4 e ≥14 dias depois da coleta da primeira amostra. Os pacientes identificados tiveram o diagnóstico de leptospirose confirmado por soroconversão, aumento de quatro vezes de títulos, ou título único ≥1:800 no MAT. O desempenho diagnóstico do MAT e do ELISA IgM na avaliação combinada das amostras aguda precoce e aguda tardia foi comparado ao desempenho da avaliação das amostras aguda precoce e convalescente que segue a recomendação de testagem da OMS. Nós confirmamos 643 (68%) dos 938 casos suspeitos. A coleta de amostra convalescente foi possível para 63% dos pacientes confirmados, e 55% dos pacientes suspeitos. Em contraste, a amostra da fase aguda tardia foi coletada para 77% e 66% dos pacientes confirmados e suspeitos, respectivamente. Para os 302 casos confirmados que tiveram as três amostras de soro coletadas, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA na análise das amostras aguda precoce e tardia foi de 97% (IC95%, 94-99%) e 96% (93-98%), respectivamente, em comparação aos resultados da análise das amostras aguda precoce e convalescente. Em contraste, considerando apenas as amostras agudas destes 302 pacientes, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA foi de 44% (38-50%) e 75% (69-79%), respectivamente. Amostra aguda tardia e convalescente foi obtida dos casos suspeitos de leptospirose que evoluíram para óbito de 32% e 6%, respectivamente. Os resultados indicam que a coleta e o teste sorológico da amostra aguda tardia de pacientes hospitalizados por leptospirose é viável e melhora a eficiência dos atuais protocolos de confirmação laboratorial de casos de leptospirose. / Confirmation of leptospirosis with MAT requires evaluating acute and convalescent-phase sera samples to identify seroconversion or fourfold rise in titers. Current World Health Organization (WHO) protocols recommend that convalescent samples are collected with ≥14days after the acute sample collection. However, the difficulty in collecting convalescent samples hampers case confirmation and is a major cause for leptospirosis under-reporting. This study evaluated feasibility of collecting a late acute-sera sample from hospitalized cases of leptospirosis and determined to serological analysis of this sample can improve the efficiency of the protocol to confirm the diagnosis of leptospirosis. From 2003 to 2009, active hospital-based surveillance in Salvador-Brazil prospectively identified hospitalized cases of patients with clinical suspicion of leptospirosis. Three blood samples were collected for each case: an early acute sample, a sample of late acute and convalescent sample collected during the first 24 hours after hospitalization 4 and ≥ 14 days after the first sampling, respectively. The identified patients were diagnosed with leptospirosis by seroconversion, fourfold rise in titers, or a titer ≥1:800 in the MAT. The diagnostic performance of the MAT and IgM ELISA in the combined sample of early acute and late acute sample performance was compared to the early assessment of acute and convalescent samples following a WHO recommendation for testing. We confirmed the leptospirosis diagnosis in 643 (68%) of 938 suspected cases. Convalescent-phase samples were collected from 63% of the confirmed patients, but in only 55% of the suspected cases. In contrast, the late acute phase sample was collected for 77% and 66% of confirmed and suspected patients, respectively. Among the 302 confirmed cases which all three samples were obtained, the sensitivity of MAT and IgM-ELISA was 97% (IC95%, 94-99%) and 96% (93-98%), respectively, when results of early and late acute-phase samples were evaluated in comparison to the results of the early acute and convalescent samples. In contrast, the sensitivity of MAT and IgM-ELISA was 44% (38-50%) and 75% (69-79%), respectively, when only a single early acute-phase sample was evaluated. Late acute-phase and convalescent-phase samples were obtained from 32% and 6% of the suspected leptospirosis and deaths, respectively. These findings indicate that collection and serologic testing of a late-acute-phase sample among hospitalized patients with suspected leptospirosis may significantly increase the efficiency of protocols for laboratory case confirmation.

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-08-01T13:26:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-01T13:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Bio-Manguinhos / A AIDS é um problema mundial de Saúde Pública. Com a necessidade de ampliar o acesso ao diagnóstico laboratorial da infecção causada pelo HIV, foi incentivado pelo Ministério da Saúde o desenvolvimento de testes de elevada sensibilidade e especificidade, além de baixo custo para uso em rotina, visando a detecção de anticorpos para o HIV no sangue humano. Esses testes sorológicos são instrumentos para auxiliar no diagnóstico clínico, na proteção do suprimento de sangue e no monitoramento da infecção pelo HIV. Bio-Manguinhos, Unidade Técnica da Fiocruz, voltada para o desenvolvimento e produção de imunobiológicos, biofármacos e reativos para diagnóstico, tem estimulado o estabelecimento de plataformas tecnológicas que permitam o desenvolvimento e a incorporação de novos produtos e processos para a Saúde Pública. Na presente avaliação, amostras de plasma de indivíduos soropositivos e negativos para a infecção pelo HIV e de doadores de sangue, além de um painel comercial de título misto para anticorpos contra o HIV, foram utilizadas na validação de reagentes e insumos disponíveis no mercado nacional em comparação aos importados, em uso, atualmente, na produção do tampão de corrida do Teste Rápido para Diagnóstico de HIV-1/2, de Bio-Manguinhos. O desempenho do tampão de corrida que compõe esse kit, formulado com insumos importados, frente ao tampão preparado com produtos encontrados no mercado nacional foi o mesmo, com relação à intensidade da linha teste e ao tempo da visualização da linha controle, a partir da adição da amostra e do referido tampão de corrida. No presente estudo foi verificado que não houve diferença estatística entre os reagentes analisados em um nível de significância de α=0,05. Além disso, todos os ensaios apresentaram percentuais de sensibilidade e especificidade de 100%, sugerindo que os reagentes nacionais podem ser utilizados em substituição aos importados, sem prejuízo no desempenho da reação imunológica inerente ao processo. Neste estudo não foram verificadas diferenças significativas no custo dos sete reagentes nacionais (Cloreto de sódio; Soro de Galinha; Sulfato de estreptomicina; Tween 20; EDTA Dissódico; Fosfato de Sódio Dibásico e EDTA Tetrassódico) avaliados frente aos importados. Sendo assim, de forma preliminar, podemos dizer que os reagentes nacionais apresentam o mesmo desempenho em relação aos importados, minimizando desta forma, os entraves burocráticos, permitindo maior agilidade no ato da compra e contribuindo para reduzir o período de espera da chegada do produto para o prosseguimento do processo produtivo do kit Teste Rápido por Bio-Manguinhos. / AIDS is a global problem of Public Health. With the need to expand access to the laboratory diagnosis of HIV infection it was encouraged by the Ministry of Health the development of tests of high sensitivity, specitivity and low cost for routine, in order to detect antibodies to HIV in human blood. These serological tests are important tools in clinical diagnosis, have in protecting the blood supply and in monitoring of HIV/AIDS. Bio-Manguinhos, a Technical Unit of Fiocruz on development and manufacturing of immunobiological, biopharmaceutical and reagents for diagnosis, have encouraged the establishment of technological platforms for the development and incorporation of new products and processes for Public Health. In the present study clinical samples from seropositive and nonreactive individuals for the HIV/AIDS infection and blood donors samples together with a mixed titer commercial panel were used in the validation of reagents and supplies obtained in internal market compared to those imported products currently used in the production of the running buffer of Rapid Test for Diagnosis of HIV – 1 / 2 Bio-Manguinhos. The performance of the running buffer of the kit, formulated with imported reagents in comparison with products found in the internal market was the same with respect to the intensity of the test line and to the time line view of control, from the moment of sample and the running buffer addition. In the study it was found that within a range of 95% there was no statistical difference between the reagents tested in α=0,05 significance level. Moreover, all the tests presented sensitivity and specificity percentages of 100% suggesting that the reagents obtained in the internal market may be used to replace imported ones without impairing performance of the immune response inherent to the process. In this study no significant differences in the cost of the seven reagents tested were observed (national or imported ones). Thus, in a preliminary way one can say that national reagents have the same performance in relation to those imported, thus minimizing the bureaucratic obstacles, allowing greater flexibility in the purchase and contributing to reduce the period for the arrival of the product the communication of the productive process Test Kit Rapid Bio-Manguinhos.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Mestrado (Priscila dos Santos).pdf: 1949971 bytes, checksum: 5d2bfc6944be7acb2dd8d954eea44bdd (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O diagnóstico da toxoplasmose baseia-se principalmente, na detecção de anticorpos específicos em soro de pacientes, por meio de ensaios sorológicos. As maiores limitações referem-se à alta prevalência de anticorpos de IgG e IgM persistentes por longos períodos, dificultando o diagnóstico da infecção aguda. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho da imunofluorescência indireta por citometria de fluxo para a pesquisa de anticorpos anti-taquizoítas fixados (AATF) de T. gondii e avidez de IgG no sorodiagnóstico da toxoplasmose aguda humana. Foram analisadas amostras de pacientes com toxoplasmose aguda (AG), crônica (CR), indivíduos não-infectados (NI) e pacientes portadores de outras doenças. A pesquisa de AATF IgM permitiu segregar os grupos AG e CR utilizando a diluição de soro 1:32.000 e ponto de corte (PC) de 40% de porcentagem de parasitos fluorescentes positivos (PPFP), com sensibilidade de 100% e especificidade de 90%. Na avaliação da reatividade cruzada de IgM foram encontrados resultados falso-positivos, apenas para pacientes portadores de malária e mononucleose infecciosa. Entretanto, a pesquisa de AATF IgG, utilizando PC de 10% PPFP e diluição do soro de 1:32.000 permitiu segregar apenas os grupos AG e NI, com 93,3% de sensibilidade e 100% de especificidade. Quanto à pesquisa de AATF subclasses de IgG, as diluições séricas escolhidas aplicadas no diagnóstico da toxoplasmose aguda, utilizando como controle o grupo NI foram 1:32.000 para IgG1, 1:400 para IgG2, 1:2.000/1:8.000 para IgG3 e 1:400/1:1.600 para IgG4 e PC de 10% PPFP, para todas as subclasses. Entretanto, apenas AATF IgG2 e AATF IgG4 apresentaram 100% de sensibilidade e especificidade. A pesquisa da avidez de IgG quando aplicada na segregação dos grupos AG e CR, apresentou 100% de sensibilidade e especificidade. Utilizando-se a pesquisa de AATF IgM como ensaio inicial, e avidez de IgG como ensaio confirmatório, foi possível estabelecer o diagnóstico da toxoplasmose aguda. Os índices de desempenho demonstraram melhor desempenho da pesquisa de anticorpos IgM anti-T. gondii e avidez de IgG por citometria de fluxo do que pelo sistema VIDAS® TOXO (ELFA Enzyme Linked Fluorescente Assay) no diagnóstico da toxoplasmose aguda. Esses resultados demonstram a aplicabilidade da citometria de fluxo para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii, como uma importante ferramenta no diagnóstico da toxoplasmose aguda. / The diagnosis of toxoplasmosis is based mainly on the detection of specific antibodies in sera of patients by serological tests. The major limitations of these tests are the high prevalence of IgG and IgM antibodies, which persist for long periods of time, hampering the diagnosis of acute infection. Therefore, the objective of this study was to evaluate the performance of an indirect immunofluorescence assay based on flow cytometry for the detection of the reactivity of anti-fixed tachyzoites antibodies (AFTA) of T. gondii and IgG avidity in the serodiagnosis of human acute toxoplasmosis. Serum samples from patients with acute toxoplasmosis (AC), chronic toxoplasmosis (CHR), non-infected individuals (NI), and patients with other diseases were analyzed. The analysis of AFTA IgM allowed to segregate groups AC and CHR using a serum dilution of 1:32,000 and a percentage of positive fluorescent parasites (PPFP) of 40% as cut off, resulting in 100% and 90% of sensitivity and specificity, respectively. However, the analysis of AFTA IgG using a PPFP of 10% as cut off and a serum dilution of 1:32,000 allowed to segregate only the group AC and NI, with 93,3% of sensitivity and 100% of specificity. The serum dilutions applied on the study of AFTA IgG subclasses in the diagnosis of acute toxoplasmosis using NI as control group were: 1:32,000 for IgG1, 1:400 for IgG2, 1:2,000 and 1:8,000 for IgG3, and 1:400 and 1:1,600 for IgG4. It was used a PPFP of 10% as a cut off for all subclasses. Moreover, only AFTA IgG2 and AFTA IgG4 showed 100% of sensitivity and specificity. The analysis of IgG avidity when to groups AC and CHR, showed 100% of sensitivity and specificity. Using the AFTA IgM as the initial test and IgG avidity as a confirmatory test, it was possible to establish the diagnosis of human acute toxoplasmosis. The evaluation of IgM cross-reactivity demonstrated false-positive results only for patients with malaria and infectious mononucleosis. The detection of IgM anti-T. gondii antibodies and IgG avidity by flow cytometry showed a better performance in comparison to the VIDAS® TOXO (ELFA - Enzyme Linked Fluorescent Assay) in the diagnosis of acute toxoplasmosis. These results demonstrate the applicability of the detection of anti-T. gondii antibodies by flow cytometry and its importance in the diagnosis of human acute toxoplasmosis.

A Fibrose Cística (FC) é uma doença letal, de caráter autossômico recessivo, que acomete populações de diferentes etnias. A doença caracteriza-se pelo comprometimento sistêmico das glândulas exócrinas e, na maioria dos pacientes, a doença pulmonar acaba tornando-se a patologia predominante. A infecção por P. aeruginosa é a principal causa de mortalidade dos pacientes com FC. O Sistema de Secreção Tipo III da bactéria é expresso na fase aguda da doença e é responsável por injetar proteínas citotóxicas no interior da célula eucariótica. Há um grande interesse em se investigar a resposta de anticorpos anti P. aeruginosa em pacientes com FC a fim de diagnosticar a colonização e ou infecção pulmonar antes da cultura, permitindo a antibioticoterapia preventiva, a fim de se evitar a infecção pulmonar crônica. Nesta tese, investigamos a resposta de anticorpos (IgG+IgM+IgA) contra as proteínas do SSTT de P. aeruginosa, através do Western-Blot. Participaram do estudo 51 pacientes com FC, de 1.1 a 16.8 anos acompanhados no Departamento de Pneumologia do Instituto Fernandes Figueira - FioCruz, durante um período aproximado de 2 anos. De cada paciente foram coletadas de 1 a 4 amostras de sangue, com intervalo médio de 6 meses entre as coletas. O grupo controle negativo consistiu de 28 indivíduos não fibrocísticos, de 2 a 17 anos, atendidos no Hospital Universitário Pedro Ernesto - HUPE UERJ. As proteínas do SSTT foram extraídas das cepas PAO1 e PAO&#916;ExsA (regulador da expressão do SSTT) de P. aeruginosa. Controles positivos e negativos foram utilizados em todas as reações. Para a identificação das proteínas do SSTT na reação utilizou-se antisoro de camundongos imunizados com a proteína recombinante PcrV. Doze (75%) dos 16 pacientes fibrocísticos considerados não infectados por P. aeruginosa tiveram a primeira sorologia positiva para PopB e 15 (93,75%) para ExoS/ExoT, indicando a colonização ou infecção por P. aeruginosa. Aproximadamente 25% e 35,7% dos soros do grupo controle mostraram reatividade fraca com PopB ou ExoS/ExoT, respectivamente. O tempo decorrido entre a primeira sorologia positiva e o primeiro isolamento de P. aeruginosa nestes pacientes variou de 18 a 30 meses. Concluindo, é possível fazer o diagnóstico sorológico da infecção pulmonar por P. aeruginosa antes do isolamento da bactéria pela cultura. / Cystic Fibrosis (CF) is a lethal disease of autosomal recessive character, which affects people of different ethnicities. The disease is characterized by the involvement of systemic exocrine glands and in most patients, the lung disease becomes the predominant pathology. The infection with P. aeruginosa is the leading cause of mortality in patients with CF. The Type III Secretion System (TTSS) of bacteria is expressed during acute disease and injects cytotoxic proteins inside the host cell. There is a great interesting in investigate the antibody response to P. aeruginosa in CF patients in order to diagnose a pulmonary infection or colonization before the culture. Then, preventive antibiotic treatment can be initiated before the installation of chronic lung infection. We investigated the antibody response (IgG + IgA + IgM) against TTSS proteins of P. aeruginosa by Western-blot. The study included 51 patients with CF, from 1.1 to 16.8 years attending the Pediatric Pulmonology Unit of Fernandes Figueira Institute (IFF) FIOCRUZ, Rio de Janeiro, for a period of approximately 2 years. Most patients had or 4 blood samples collected for antibody analyses. Samples were obtained with a mean interval of 6 months. The negative control group consisted of 28 non-CF individuals, from 2 to 17 years, attended at Pedro Ernesto University Hospital - HUPE - UERJ. The TTSS proteins were extracted from strains PAO1 and PAO&#916;ExsA (regulator of TTSS proteins expression) of P. aeruginosa. Positive and negative controls were used in all reactions. For the identification of TTSS proteins in the reaction we used antisera from mice immunized with the recombinant protein PcrV. Twelve (75%) of 16 CF patients considered not infected by P. aeruginosa had their first serology positive for "PopB" and 15 (93.75%) for "ExoS/ExoT. These results indicated that these patients were colonized or infected by P. aeruginosa. About 25% e 35,7% of negative control sera showed a weak reactivity with PopB or ExoS, respectively. The time between the first positive serology and the first isolation of P. aeruginosa in these patients ranged from 18 to 30 months. In conclusion, it is possible to make a serological diagnosis of pulmonary infection by P. aeruginosa before the isolation of the bacterium by culture.

Canine atopic dermatitis (CAD) is a common dermatosis, defined as a genetic-based disease, which predisposes to cutaneous inflammation and pruritus, mediated by class IgE immunoglobulins directed against specific antigens in most cases. Clinical diagnosis may be later complemented by skin allergic and/or serological tests (ELISA). The aim of these tests is to identify possible allergens in order to enable the clinicians to select candidate antigens for allergen specific immunotherapy. This work aimed to identify the sensitization profile of 58 dogs with atopic dermatitis diagnosis. All animals were submitted to intradermic test (IDT) and screened for the presence of antibodies against different allergens using a serologic test. House dust mites are described as the most frequent allergens in all continents. However, the positivity to C. dactylon is not commonly described and may be characteristic for the region. With this work it was possible to identify the main allergens involved in the immunologic response of atopic dogs residing in Rio Grande do Sul, pointing to the importance to include C. dactylon in screening tests for allergy. / A dermatite atópica canina (DAC) é uma dermatose comum, definida como uma doença de cunho genético que predispõe à inflamação e ao prurido cutâneo, mediada por imunoglobulinas da classe IgE dirigidas contra antígenos específicos na maior parte dos casos. O diagnóstico da DAC é clínico e pode ser posteriormente complementado por testes alérgicos cutâneos e/ou sorológicos. O objetivo desses testes é identificar possíveis alérgenos e, com isso, possibilitar ao clínico a seleção de antígenos candidatos para a imunoterapia alérgeno-específica. No presente trabalho buscou-se identificar o perfil de sensibilização de 58 cães diagnosticados com dermatite atópica. Todos os animais foram submetidos ao teste intradérmico (TID) e à detecção de anticorpos específicos para diferentes alérgenos através de teste sorológico (ELISA). Os ácaros domiciliares são descritos como os alérgenos mais frequentes em todos os continentes. Entretanto, a positividade ao C. dactylon não é usualmente descrita e pode ser característica da região. Com esse trabalho foi possível identificar os principais alérgenos envolvidos na resposta imunológica de cães atópicos residentes no Rio Grande do Sul, ressaltando-se a importância da inclusão do extrato de C. dactylon em testes alérgicos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 926741 bytes, checksum: 18d302c22a4907755b01b95cb9c1ea36 (MD5) Previous issue date: 2013-06-04 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The diseases associated with PCV2 (PCVAD) require various factors to occur, however, the virus infection is critical to the development of any one of the syndromes. The present study aimed to determine differences in serologic and viremic profiles for PCV2 in the swine breed Piau and a commercial line (Landrace x Large White x Pietrain) at a subclinically infected farm by the virus studied. The experiment was conducted at the Genetic Improvement Pig Farm (GMS), Federal University of Viçosa (UFV), in which it isn´t carried out vaccination against PCV2. This study conducted a cross-sectional sample of sows (> 2 parity), pigs for 1-3 weeks, 3-8 weeks and 8-22 weeks of age. The serum samples were used to measure the level of total antibodies by ELISA and quantitation of viremia by real time PCR. The results showed that, at the age of 3-8 weeks, the Piau breed piglets seroconverted earlier than the commercial line piglets and the Piau breed sows showed lower levels of total antibodies in relation to the commercial line. There were no differences in viremia between the different stages of production within each genetic group or between groups. This work provides evidence that the breed Piau has a different humoral immune response than the commercial line studied when facing a natural PCV2 subclinical infection. The results of this study reinforce the importance of the conservation of native breeds that have not been used for development of high productivity commercial lines. / As doenças associadas ao PCV2 (PCVAD) necessitam de vários fatores para ocorrer, no entanto, a infecção pelo vírus é fundamental para o desenvolvimento de qualquer uma das síndromes. O presente estudo teve como objetivo verificar diferenças nos perfis sorológicos e virêmicos para o PCV2 entre suínos da raça Piau e de uma linhagem comercial (Landrace x Large White x Pietrain) em uma granja subclinicamente infectada pelo vírus estudado. O experimento foi realizado na Granja de Melhoramento Genético (GMS) da Universidade Federal de Viçosa (UFV), na qual não é realizada a vacinação contra o PCV2. O presente estudo realizou uma amostragem transversal em porcas (>2º parto), suínos de 1-3 semanas, 3-8 semanas e 8-22 semanas de idade. As amostras de soro obtidas foram utilizadas para mensuração dos níveis de anticorpos totais por ELISA indireto e quantificação da viremia por PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que, na idade de 3-8 semanas, os leitões da raça Piau soroconverteram mais precocemente em relação aos leitões da linhagem comercial e as porcas da raça Piau apresentaram menores níveis de anticorpos totais em relação às da linhagem comercial. Não houve diferença na viremia entre as diferentes fases de produção dentro de cada grupo genético ou entre os grupos. Este trabalho fornece indícios de que a raça Piau apresenta uma resposta imune humoral diferente da desenvolvida pela linhagem comercial estudada diante de uma infecção subclínica natural pelo PCV2. Os resultados obtidos neste estudo reforçam a importância da conservação das raças nativas que não foram utilizadas para formação de linhagens de alta produtividade.