Orientador: Hélio Langoni / Coorientador: Rodrigo Costa da Silva / Banca: Simone Baldini Lucheis / Banca: Cassiano Victoria / Banca: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Resumo: A leishmaniose visceral canina (LVC), conhecida como leishmaniose visceral americana (LVA) ou calazar é uma antropozoonose, causada pelo protozoário flagelado do gênero Leishmania, com ampla distribuição mundial. No Brasil, o agente responsável pela doença é a Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitida pela picada da fêmea do flebotomínio da espécie Lutzomyia longipalpis, e o principal reservatório doméstico é o cão. É uma doença sistêmica grave, de curso lento e crônico, de diagnóstico complexo. Entre as estratégias de controle da LVC está o inquérito sorológico canino, com a eliminação dos cães reagentes, sendo que diferentes técnicas podem ser utilizadas para o diagnóstico desta enfermidade. Muitos avanços têm ocorrido nos últimos anos, mas a respeito dos testes disponíveis para o seu diagnóstico, nenhum apresenta 100% de sensibilidade e especificidade. Neste contexto, o presente projeto teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos para L. chagasi, em 164 cães capturados pelo CCZ de Bauru, SP, área epidêmica para LVC, comparar as técnicas de imunofluorescência indireta, ensaio imunoenzimático (ELISA) e aglutinação direta (DAT); determinar a carga parasitária pela técnica de PCR em tempo real, a partir da punção de linfonodo poplíteo e de medula óssea; e identificar possíveis variantes genotípicas de Leishmania. spp a partir do sequenciamento e genotipagem, a fim de contribuir para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina, a partir da análise obtida nos diferentes testes, bem como pela avaliação dos sintomas apresentados pelos animais. A sensibilidade apresentada pelas provas DAT e ELISA tendo a RIFI como padrão-ouro foi respectivamente, de 94% e 87%, enquanto a especificidade foi de 28% e 93%. Do total de amostras de sangue, linfonodo e medula óssea submetidas a PCR gênero e espécie- específica, 20 foram positivas somente para gênero, e estas foram sequenciadas ... / Abstract: The canine visceral leishmaniasis (LCV), known as American visceral leishmaniasis (LVA) or kala-azar is a anthropozoonosis caused by the flagellate protozoan of the genus Leishmania, with worldwide distribution. In Brazil, the agent responsible for the disease is Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitted by the bite of the female of the species Lutzomyia longipalpis, and the main reservoir is the domestic dog. It is a severe systemic disease, with chronic and slow course and complex diagnostic. Among the strategies for control of LVC are the canine serological survey, with the elimination of reagents dogs and different techniques can be used to diagnose this disease. Many advances have occurred in recent years, but about the tests available for diagnosis, none had 100% sensitivity and specificity. In this context, this project aimed to determine the prevalence of antibodies to L. chagasi in 164 dogs captured by the CCZ, Bauru, SP, epidemic area for LVC, to compare the techniques of indirect immunofluorescence, enzyme immunoassay (ELISA) and direct agglutination (DAT) to determine the parasite burden by PCR in real time from peripheral blood puncture, popliteal lymph node and bone marrow of animals serologically positive, and identify potential genotypic variants of Leishmania. spp. from the sequencing in order to contribute to the diagnosis of canine visceral leishmaniasis, from the analysis obtained for the different tests as well as for assessment of symptoms presented by the animals. The sensitivity shown by DAT and ELISA with IFA as the gold standard were respectively, 94% and 87%, while specificity was 28% and 93%. Of the total sample of blood, lymph node and bone marrow subjected to PCR genus and species-specific, 20 were positive only for gender, and these were sequenced and characterized, yielding cleavage bands profile and common sequences belonging to the species L.donovani complex / Mestre

A toxoplasmose é uma das enfermidades parasitárias mais difundidas entre as transmissíveis. Novos aspectos parecem justificar o reaparecimento da questão da toxoplasmose, uma vez que ela vem sendo diagnosticada em um número crescente de pacientes com imunossupressão devida a várias causas tais como doenças malignas, transplantes de órgãos e principalmente, a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). Mais de 50% da população humana mundial acha-se infectada pelo Toxoplasma gondii com variações determinadas por fatores climáticos, sócio-econômicos, tipo de contato com animais, em especial o gato e costumes alimentares relacionados ao consumo de carnes. O T. gondii é um protozoário que infecta praticamente todas as espécies animais. A caprinocultura é uma atividade bastante exercida no Estado, sendo que representa 0,4% de sua atividade pecuária total. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel desempenhado pela espécie caprina na transmissão do T.gondii. A amostragem foi estratificada por idade e gênero. Foram analisadas 360 amostras de soros de caprinos, através da técnica de Hemaglutinaçao Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). Os resultados obtidos pela HAI estimam uma freqüência de 19 % de soro-positividade e pela IFI de 30%, o que representa índices elevados. Em relação a Hemaglutinação Indireta, na variável gênero, foi observada uma freqüência de 20,1% de soropositividade para os machos e 19,3% para as fêmeas, enquanto que na variável idade, os resultados demonstraram freqüências de 16,5% para os indivíduos jovens e 21,1% para os adultos. No que tange à Imunofluorescência Indireta, a variável gênero demonstrou uma freqüência de 14,44% de soropositivos para os machos e 15,56% para as fêmeas. Na variável idade, através desta mesma técnica, observou-se uma freqüência de soropositividade de 13,06% para indivíduos jovens e de 16,94% para indivíduos adultos. Ao compararem-se as duas técnicas os dados obtidos revelam uma associação significativa entre elas, com uma índice de co-positividade para a HAI de 78,6% e de co-negatividade de 81,7%. O índice Kappa utilizado para medir o grau de concordância entre as duas técnicas foi igual a 0,5% que evidencia um grau de concordância moderado entre as técnicas, recomendando, desta forma o uso cauteloso da HAI na espécie caprina. Os dados obtidos nos permitem concluir que os caprinos criados na região estudada podem ser fonte de transmissão de T. gondii.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-08T14:30:49Z No. of bitstreams: 1 Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T14:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37ºC; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test. / O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37ºC; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizouse o conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade, com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100% respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8% e 10,3% respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, atesta-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-10-14T13:03:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DANIELLE_MEDEIROS_MARQUES_TESE_BC_UFPE_2016[1] 18ago.pdf: 1939643 bytes, checksum: e745bb62b8c1fd6f324e774f998313d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T13:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DANIELLE_MEDEIROS_MARQUES_TESE_BC_UFPE_2016[1] 18ago.pdf: 1939643 bytes, checksum: e745bb62b8c1fd6f324e774f998313d0 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CNPq / A hanseníase ainda representa um grave problema de Saúde Pública no Brasil, com número absoluto de casos novos atingindo em torno de 30.000/ano. O Programa Nacional de Controle da Hanseníase (PNCH), no sentido de aumentar a detecção e tratamento precoce da doença, preconiza a avaliação dermatoneurológica e a vacinação BCG em contatos intradomiciliares de hanseníase. Além desta avaliação clínica, estudos sorológicos utilizando antígenos específicos do M. leprae vêm demonstrando alta especificidade, sendo relatada a relação entre a positividade sorológica nos contatos e o maior risco de adoecimento. O presente estudo teve como objetivos estimar a soroprevalência anti-NDO-LID-1 em contatos de casos novos de hanseníase e avaliar a adesão dos mesmos ao PNCH, através de um estudo transversal e um estudo caso-controle, respectivamente. Metodologia: a população estudada foram os contatos de casos novos de hanseníase residentes na cidade de João Pessoa, Paraíba nos anos de 2012 e 2013 (na etapa transversal) e no ano de 2013 (na etapa caso-controle). Utilizou-se o teste sorológico rápido NDOLID- 1 para aferir a soroprevalência e a adesão ao PNCH foi aferida através da resposta a um questionário padronizado. Toda a coleta de dados foi domiciliar. Resultados da etapa transversal: foram identificados 135 casos novos de hanseníase, com 405 contatos estudados. A soroprevalência foi de 23% (93/405), sendo maior no sexo feminino (25,9%-58/224), com tempo médio de convívio entre cinco e 10 anos (44%- 22/50) e naqueles que dormiam no mesmo cômodo e na mesma cama (26,3%-31/118) do caso índice. Em menores de quinze anos, a soroprevalência alcançou 27,7% de positividade. Não houve associação da com variáveis biossociais (faixa etária e sexo), passado de tratamento pra hanseníase, vacinação BCG e variáveis relacionadas ao caso índice (grau de parentesco, frequência de contato e tempo de convívio). Resultados da etapa caso-controle: dentre os 231 contatos, apenas 31 (13,4%) haviam aderido ao PNCH, através da realização do exame dermatoneurológico. Não foi observada associação significativa da baixa adesão com as variáveis do contato como sexo, cor da pele, faixa etária, escolaridade, estado civil, renda familiar, tabagismo, etilismo, uso de drogas ilícitas e distância do posto de saúde. Observou-se maior adesão ao PNCH dos contatos de casos de hanseníase com maior idade média e naqueles relacionados às formas dimorfa e virchowiana. A maioria dos contatos que não aderiram ao Programa 8 Nacional de Controle da Hanseníase relataram como justificativa a desinformação sobre a necessidade de fazê-lo, fator este determinante para a não adesão ao programa (OR=0,04, p-valor=0,001). Conclusões: a população de contatos estudada apresentou uma elevada taxa de soroprevalência e uma baixa adesão ao exame dermatoneurológico, denotando haver um alta carga bacilar do M. leprae circulante e uma vigilância sobre os contatos ainda negligenciada. / Leprosy is a serious health public problem in Brazil, with new absolute cases ranging around 30,000 / year. The National Program of Leprosy Control (NPLC) recommends skin and nerves examination and BCG vaccination in all households leprosy contacts (HHC). Besides, serological studies using specific antigens of M. leprae had demonstrated correlation between seropositivity in contacts and increased risk of illness. This study aimed to assess positivity to anti- NDO-LID-1 test and to evaluate the adherence to NPLC among contacts of newly leprosy cases at João Pessoa, Paraíba, 2012 and 2013, using a cross-sectional and a case-control study. Methodology: the study population were contacts of new leprosy cases residents at João Pessoa, Paraíba in 2012 and 2013 (cross-sectional study) and 2013 (casecontrol study). The serological test used to assess seroprevalence was anti-NDOLID- 1 rapid test and the adherence to PNCH was measured by response to a standard questionnaire. All data collection was did at home.Cross-sectional results: there were identified 135 new cases of leprosy, with 405 contacts studied. Serological positivity to anti-NDO-LID-1 was 23% (93/405), higher in females (25.9% -58 / 224), with average living time between five and 10 years (44% - 22/50) and those who slept in the same room and the same bed (26.3% -31 / 118) of the index case. The seroprevalence among contacts under fifteen years reached 27.7% positivity. There was no association with biossocial variables (age and gender), past treatment for leprosy, BCG vaccination and variables related to the index case (degree of relationship, frequency of contact and interaction time). Case-control results: 13.4% (31/231) of the contacts had accomplished the skin and nerves examination, as recommended. There was no significant association with gender, age, ethnicity, instruction degree, marital status, family income, smoking, alcohol use, illicit drugs use and distance from the health center. There was better adherence in contacts of elderly index cases and from borderline and lepromatous forms. Misinformation about the need of doing the dermatologic exam was a determinant factor for non-adherence to the program (OR=0.04, p-value= 0.001). Conclusions: the seropositivity in leprosy contacts was high and adherence to NPLC was low, showing that surveillance needs to be improved.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-08-26T15:21:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Lucianna Corrêa Tezza.pdf: 1579457 bytes, checksum: efdbc58030f80c7e763a91fe9239fda7 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T13:24:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Lucianna Corrêa Tezza.pdf: 1579457 bytes, checksum: efdbc58030f80c7e763a91fe9239fda7 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T13:26:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Lucianna Corrêa Tezza.pdf: 1579457 bytes, checksum: efdbc58030f80c7e763a91fe9239fda7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T13:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Lucianna Corrêa Tezza.pdf: 1579457 bytes, checksum: efdbc58030f80c7e763a91fe9239fda7 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Introduction:Studies have demonstrated the presence of RHD variants in sickle cell patients, resulting in subsequent alloimuzation, because of the Rh protein having structural function in membranes of these cells, other factors derived from these polymorphisms may impact on the length of life of the erythrocyte. The frequency of RHD variants is not yet known in sickle cell patients in the state of Amazonas and if there the possibility of association between these variants and blood transfusion in these individuals. Objective: Our aim was to investigate the variants of RHD in sickle cell patients in the State of Amazonas Materials and methods: We performed phenotyping of samples from patients with sickle cell disease by hemagglutination tube method using the reagent anti-D IgG clone MS201 and anti-D IgM clone MS26. The Multiplex PCR genotyping method was performed for characterization RHD regions of the Intron 4 and exon 7 and the exons 3, 4, 5, 6, 7 and 9 for the characterization of vari ant RhD.The statistical method of Chi Square was used for analysis of retrospective information on the number of transfusions and the presence of RhD variants. Results: We analyzed 128 samples, of which 45 (35.15%) showed discrepant results in serology for detec tion of RhD antigen and 12 (9.37%) patients with RhD variants. However 03 of these showed no discrepancies in RhD serology. While 33 discrepant samples in serological test s were not characterized as RhD variant. Among the variants, 07 (58.33%) were characterized as DVa, where such individuals were concentrated up to 32 RhD positive red cells without developing anti-RhD, 01 (8.33%) DFR presenting the frequency of transfusion 18 concentrated RhD positive red cells also without the presence of anti-RhD and 04 (33.33%) samples classified as indeterminate, and 2 of these patients had alloimmunization by anti-RhD. Discussion: Our results demonstrate that not all discrepancies in serological tests is indicative of variant RhD and that these results can be found 4 crosses for two reagents. The DVa variant was more frequent in our sickle cell patients and this is not associated with anti-RhD alloimmunization by patients with multiple transfusions in RhD positive red blood cells, thus contrasting with the frequency of DIIIa found in these type of patients studied in other regions of Brazil and associated with increased risk of alloimmunization. Conclusion: In conclusion, we observed that molecular biology tests are needed to detect the RHD gene. The variations DVa patients may not develop anti-D when transfused with RhD-positive erythrocytes. We found indications that the presence of RhD variants are not associated with the need for transfusions in patients with sickle cell disease. / Introdução: Estudos têm demonstrado a presença de variantes RHD em pacientes falciforme, resultando em aloimunizações subsequentes. Em razão da proteína Rh ter função estrutural na membrana destas Células, outros fatores derivados destes polimorfismos podem impactar na diminuição do tempo de vida do eritrócito. A frequência de variantes RHD ainda não é conhecida, nos pacientes falcêmicos do Estado do Amazonas e nem se há uma possível associação entre estas variantes e a transfusão sanguínea nestes indivíduos. Objetivo: Nosso objetivo foi investigar a as variantes do RHD em pacientes falciformes do Estado do Amazonas Casuísticae métodos: Pacientes falciformes atendidos no Hemocentro do Amazonas, nos quais realizamos a fenotipagem RhD, pelo método de hemaglutinação em tubo, utilizando reagentes anti-RhD IgG clone MS201 e IgM clone MS26 e genotipagem pelo método PCR multiplex para a caracterização de regiões do Intron 4 e exon 7 do gene RHD e outra PCR multiplex para detecção de regiões dos exons3, 4, 5, 6, 7 e 9 para caracterização de variantes RhD. O método estatístico do Qui Quadrado, foi utilizado para análise das informações retrospectivas do número de transfusões e a presença de variantes RhD. Resultados: Foram estudadas 128 amostras, das quais encontramos 45 (35,15%) com resultados discrepantesna sorologia para detecção do antígeno RhD e ainda 12 (9,37%) pacientes com RhD variantes, mas que 03 destes, não apresentaram discrepâncias na sorologia RhD. Ao passo que 33 amostras discrepantes nos testes sorológicos não foram caracterizadas como RhD variante. Dentre as variantes, 07 (5,33%), foram caracterizadas como DVa, em que tais indivíduos receberam até 32 concentrados de hemácias RhD positivo em desenvolver anti-RhD, 01 (8,33%) DFR apresentando a frequência de transfusão de 18 concentrados de hemácias RhD positivo tambémsem presença de anti-RhD e de 04 (33,33%) amostras que classificamos como indeterminados, sendo que 2 (50%) dos pacientes considerados indeterminados, apresentaram alo imunização por anticorpo anti-RhD. Discussão: Nossos resultados demonstram que nem toda discrepância no teste sorológico é indicativo de RhD variante e que estes podem ser encontrados mesmos resultados 4 cruzes nos dois reagentes utilizados. A variante DVa foi a mais frequente em nossos pacientes falciformes não estando associada à aloimunizaçãopor anti-RhD em pacientes politransfundidos com hemácias RhD positivo, contrastando assim com a frequência de DIIIa encontrada nestes tipo de pacientes estudados em outras regiões do Brasil e associada ao aumento de risco de aloimunização. Conclusão: Diante dos nossos resultados, observ amos que testes de biologia molecular são necessários para a detecção do gene RHD e ainda que pacientes com variantes DVa, podem não desenvolver anticorpo anti-D quando transfundidos com hemácias RhD positivo. Encontramos indicativos de que presença de variantes RhD caracterizadas nas amostras estudadas, não estão associadas à necessidade de transfusões em pacientes portadores da doença falciforme.

Orientador: Carlos Emilio Levy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:09:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mauch_RenanMarrichi_M.pdf: 2012702 bytes, checksum: 947bbc196f2331b0a48b9596a06effdc (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética decorrente da disfunção da proteína reguladora da condutância transmembrana (CFTR), essencial para o transporte de íons e água pela membrana celular, sendo a doença pulmonar a mais preponderante das manifestações, havendo colonização bacteriana seguida de infecções, principalmente por Pseudomonas aeruginosa, bactéria de maior relevância para pacientes com FC. Neste estudo, buscamos padronizar e avaliar o valor diagnóstico e prognóstico de um teste de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) para pesquisa de anticorpos séricos IgG anti-P. aeruginosa, comparando os resultados com a cultura microbiológica de material respiratório (padrão-ouro atual). Os níveis de anticorpos foram avaliados primeiramente em um estudo transversal, com 117 pacientes com FC atentidos no HC-Unicamp, buscando determinar a acurácia do teste, e paralelamente em um estudo longitudinal, com 78 pacientes inicialmente sem infecção crônica por P. aeruginosa, buscando monitorar a variação dos níveis de anticorpos em diferentes períodos de coleta de amostras. Observamos que a taxa de soropositividade e a mediana dos níveis de IgG anti-Pseudomonas foram significativamente maiores em pacientes cronicamente infectados pela bactéria, tendo o teste sensibilidade de 96,8%, especificidade de 98,1%, valor preditivo positivo de 96,8% e valor preditivo negativo de 98,1% para a detecção da infecção crônica. Houve aumento progressivo dos níveis de anticorpos dos pacientes ao longo do tempo, com maior significância em dois períodos de coleta, entre pacientes que apresentaram evolução no perfil de colonização/infecção por P. aeruginosa. Foi possível, pela pesquisa de anticorpos, a detecção da bactéria até 15 meses antes do primeiro isolamento positivo em cultura e pacientes com níveis de anticorpos elevados no início do estudo apresentaram maior risco de posterior evolução no perfil de colonização/infecção por P. aeruginosa. Concluímos que a sorologia pode ser um recurso diagnóstico de grande utilidade para a detecção precoce da infecção pulmonar P. aeruginosa em pacientes com FC, complementando resultados da cultura microbiológica. Introduzindo-a na rotina de acompanhamento dos pacientes, será possível a terapia antimicrobiana precoce, o que poderá ajudar a melhorar a função pulmonar dos pacientes e sua qualidade de vida / Abstract: Cystic Fibrosis (CF) is a genetic disease, resulting from disfunction of the CFTR protein, which is essential for the transportation of ions and water across the cell membrane, being the pulmonary disease the most prominent manifestation, where there is bacterial colonization followed by infections, mainly caused by Pseudomonas aeruginosa, the most relevant bacterium for CF patients. The aim of this study was to standardize and to evaluate the diagnostic and prognostic values of an ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) test for detection of serum anti-P. aeruginosa IgG antibodies, comparing the results with the microbiological respiratory culture (current gold standard). The antibody levels were first evaluated in a cross sectional study, with 117 CF patients attended at the HC-Unicamp, seeking to evaluate the accuracy of the test, and in a parallel longitudinal study, with 78 patients initially without P. aeruginosa chronic infection, seeking to monitor the variation in the antibody levels in different periods of sample collection. We observed that the seropositivity rate and the median of the anti-Pseudomonas IgG antibody levels were significantly higher in chronically infected patients, with the serological test presenting a sensitivity of 96.8%, specificity of 98.1%, positive predictive value of 96.8% and negative predictive value of 98.1% for detection of chronic infection. There was a progressive increase of the antibody levels in the patients over time, with greater significance, in two collection periods, among patients who presented evolution in the P. aeruginosa colonization/infection status. Through antibody measurement, we could detect the bacterium until 15 months before the first positive isolation in microbiological culture and the patients with elevated antibody levels in the baseline showed higher risk for later evolution in the P. aeruginosa colonization/infection status. We conclude that serology can be a very useful diagnostic resource for early detection of P. aeruginosa pulmonary infection, complementing microbiological results. By introducing it on the follow-up routine, the early antimicrobial therapy will be possible, which will help to improve the patients¿ lung function and quality of life / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3520_1.pdf: 2089848 bytes, checksum: ce399cd21571e603ce8338019a00fc4f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A exposição freqüente a sangue e derivados é uma importante rota para transmissão do vírus da hepatite B (HBV), portanto pacientes hemodialisados apresentam um alto risco para a aquisição do mesmo devido ao tratamento de rotina. Em muitos países, a transmissão do vírus da hepatite B tem sido controlada em centros de hemodiálise, devido à utilização das precauções universais, práticas de controle da infecção e vacinação freqüente nos pacientes susceptíveis. Todavia algumas unidades apresentam pacientes com infecção oculta para o HBV, variando de 0 a 58% em algumas regiões do mundo. Os objetivos desse trabalho foram identificar infecção oculta para o HBV e os fatores de riscos para a infecção em pacientes hemodialisados de 5 clínicas da cidade de Recife/PE, no período de agosto de 2006 a agosto de 2007. A população estudada foi constituída por 780 pacientes, com média de idade de 50 ± 15,1 e de ambos os sexos. Os hemodialisados, após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido, foram submetidos a uma entrevista para aquisição de dados epidemiológicos. Foram coletados antes do tratamento hemodialítico, 10 mL de sangue pela fistula. As amostras foram encaminhadas em tempo hábil de 4 horas ao laboratório para processamento e armazenamento a - 80°C até o momento de realização dos testes. O ELISA foi realizado para pesquisa dos marcadores sorológicos (anti-HBc total, HBsAg e anti-HBs). Os soros que apresentaram negatividade para o anti-HBc total e HBsAg foram organizados em pools . As amostras anti-HBc total positiva e os pools foram submetidas à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para pesquisa do DNA viral. As reações positivas foram seqüenciadas para a identificação do genótipo e para análise de mutação para a região S do vírus. As informações foram armazenadas e analisadas no Epiinfo 6.0., para posterior análise univariada e multivariada das variáveis estudadas. A soroprevalência para o anti-HBc total, HBsAg e anti-HBs foi de 29,4% (229/780), 3,3% (26/780) e 66,2% (135/203), respectivamente e o DNA viral foi encontrado em 2,2% (17/780) das amostras. Em dois pacientes anti-HBc total + anti-HBs reagentes e em um paciente com anti-HBc total isolado foram encontrados o DNA-HBV, observando uma infecção oculta de 0,4% (3/752). O genótipo A foi encontrado em 81,25% (13/16), o genótipo D em 12,5% (2/16) e o genótipo F em 6,25% (1/16) das amostras HBsAg positivas. Os genótipos verificados nos pacientes com infecção oculta foram o A (2/3) e D (1/3). Nenhuma mutação foi encontrada nas seqüências virais analisadas. As variáveis sexo, idade, tempo de hemodiálise e quantidade de transfusões é que estão mais estreitamente associadas com a soropositividade para o anti-HBc total. Os marcadores sorológicos avaliam bem a infecção pelo HBV, porém deve-se ter sempre o respaldo de testes moleculares para a verificação de infecções ocultas, pois evidencia pacientes que para a clínica são considerados negativos e na verdade albergam o vírus, podendo disseminar o vírus aos demais

Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T18:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Osti_NeusaMaria_D.pdf: 3553850 bytes, checksum: 32da446130cb92750f4abca1d5addd65 (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado

Orientadores: João Aristeu da Rosa, Mário Steindel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T12:48:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_AlineRimoldi_D.pdf: 21726449 bytes, checksum: 28ac88cc86cc90e738eb70f9dca45f0b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Trypanosoma cruzi, protozoário que faz parte da família Trypanosomatidae é o agente causador da doença de Chagas que afeta 6-8 milhões de pessoas na América Latina. A origem dessa família pode ser estudada por meio de técnicas moleculares, como a investigação da região V7V8 - SSUrRNA. Trypanosoma cruzi é subdividido em seis grupos independentes TcI-TcVI denominados Unidades Discretas de Tipagem (DTUs). A caracterização biológica e molecular de onze cepas de T. cruzi pertencentes aos grupos TcI (Bolívia; Tlenti; Tmelanocephala; SC90), TcII (Famema; SC96; SI8; Y) e TcIII (QMM3; QMM5; SI5) isoladas de cinco espécies de triatomíneos esclarece fatores biológicos por parâmetros como a cinética de crescimento, curva parasitêmica, taxa de infeção celular, caracterização molecular, ação de metaloproteinases, perfil protéico e sorologia. O objetivo do trabalho foi a caracterização biológica e molecular de cepas de T. cruzi isoladas de triatomíneos da Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. O grupo TcII de T. cruzi mostrou maior capacidade multiplicativa em formas epimastigotas durante a cinética de crescimento, seguido por TcI e TcIII. A curva parasitêmica evidenciou variabilidade entre os camundongos Balb/c, contudo ao comparar os grupos TcI, TcII e TcIII de T. cruzi o perfil parasitêmico mostrou-se equivalente. Acrescentando os dados biológicos estudou-se a taxa de infecção de T. cruzi em linhagens celulares J774 e macrófagos peritoneais. O grupo TcI de T. cruzi apresentou maior taxa de infecção e menor tempo exigido para a multiplicação de formas amastigotas, assim como macrófagos peritoneias mostraram-se mais atrativos para T. cruzi. A caracterização molecular, por meio da região V7V8, mostrou que essas cepas pertencem às DTUs TcI, TcII e TcIII. A separação dos grupos torna-se evidente ao comparar o perfil protéico em formas epi e tripomastigotas de T. cruzi. O grupo TcI apresentou mais proteínas nos géis de acrilamida, particularidade que pode ser associada a intra-específicidade de TcI. A ação de metaloproteinases foi observada em formas epi e tripomastigotas sugerindo presença ativa e estável durante parte do ciclo do parasito. A reatividade sorológica foi comprovada nos grupos TcI, TcII e TcIII, por meio de ELISA em diluições de 1/100 até 1/12.800. A adição da técnica de Western Blotting aos ensaios por SDS-PAGE em soros de animais infectados após 50 dias mostrou o perfil protéico da cepa Y em membrana de nitrocelulose. Em conjunto, os resultados mostraram que as onze cepas de T. cruzi apresentaram diferenças entre os grupos do parasito. O grupo TcI mostrou maior taxa de infecção em células; TcII, os maiores valores para a cinética de crescimento e TcIII filogenéticamente próximo a TcV, grupo híbrido. A associação parasito-hospedeiro pode explicar diferenças biológicas e moleculares em cepas de T. cruzi, neste sentido o estudo de onze cepas isoladas de diferentes hospedeiros pode agregar informações a literatura e esclarecer alguns aspectos biológicos desse patógeno / Abstract: Trypanosoma cruzi, a protozoan from the family Trypanosomatidae, is responsible for Chagas disease which affects about 6 to 8 million people in Latin America. The origin of this family can be studied through molecular techniques, for instance the investigation of the region V7V8 ¿ SSurRNA. The protozoan is subdivided in six independents groups TcI-TcVI known as Discrete Typing of Units (DTUs). The biological and molecular characterization of eleven strains of T. cruzi from the group TcI (Bolivia; Tlenti; Tmelanocephala; SC90), TcII (Famema; SC96; SI8; Y) and TcIII (QMM3; QMM5; SI5) isolated from five different species of triatomine are able to elucidate biological factors through the kinetic growth, parasitemic curve, cell infection rate, molecular characterization, metalloproteinase action, proteic and serological profile. This investigation was conducted to provide a biological and molecular characterization of T. cruzi isolated from specimens of triatomines. The group TcII of T. cruzi demonstrated higher replicative capacity in epimastigotes forms during the kinetic growth curve, followed by TcI and TcIII. The parasitemic curve demonstrated variability between Balb/c mice; however, the groups TcI, TcII and TcIII showed equivalent parasitemic profile. Furthermore, the cell infection rate in J774 cellular lineages and peritoneal macrophages was used to corroborate the biological data. The group TcI of T. cruzi demonstrated higher infection rate and less time to amastigotes forms multiplication and the peritoneal macrophages showed more attractive to T. cruzi. The molecular characterization through the V7V8 region indicated that these strains belong to DTUs TcI, TcII and TcIII. The groups segregation is important to compare the proteic profile of epimastigotes and tripomastigotes forms of T. cruzi. The groups TcI presented more proteins in acrylamide gels, which can be associated with intra-specif of TcI. The metalloproteinase action was observed in epimastigotes and tripomastigotes forms, demonstrating active and stable presence at the parasite life cycle. The serological reactivity was proven in the groups TcI, TcII and TcIII through ELISA dilutions of 1/100 to 1/12.800. Moreover, the Western Blotting technique was added to SDS-PAGE experiments in infected animals¿ serum after 50 dias and the proteic profile of Y strain was observed in nitrocellulose membrane. The results demonstrated that these eleven strains of T. cruzi have differences between the groups of the parasite. The group TcI showed higher infection rate in cells; TcII, higher value for kinetic growth and TcIII is phylogenetically closer to TcV, which is a hybrid group. The association between parasite and host is able to explain the biological and molecular differences in T. cruzi strains; for this reason, the study of eleven strains isolated from different hosts can add information to the literature and clarify some of the biological aspects of the parasite / Doutorado / Parasitologia / Doutora em Parasitologia

Resumo:A raiva é uma importante zoonose que acomete os mamíferos e tem os morcegos como reservatórios, tanto em áreas urbanas quanto rurais. Desde 1998 a região Noroeste do Estado de São Paulo tem registrado casos de raiva em morcegos, predominantemente em áreas urbanas. O objetivo deste trabalho foi investigar a circulação do vírus da raiva em morcegos da região noroeste do Estado de São Paulo por meio da pesquisa do vírus em diversas espécies e da pesquisa de anticorpos neutralizantes em morcegos hematófagos. Um total de 1490 amostras de cérebro de morcegos encaminhadas ao Laboratório de Raiva e de 125 amostras de soros obtidos de morcegos vampiros capturados de quatro abrigos da região foi avaliado durante o período de 2008 a 2012. O vírus da raiva foi detectado em 26 (1,97%) dos 1314 morcegos não-hematófagos, por meio da imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC) e em nenhum dos 176 morcegos vampiros examinados. Por outro lado, 7% (9/125) dos morcegos vampiros apresentaram título de anticorpos neutralizantes acima de 0,5UI/mL, 65% (81/125) tinham títulos baixos (0,10 a 0,5UI/mL) e 28% (35/125) foram negativos pela técnica de microneutralização simplificada (SFIMT) em células BHK21. O índice de positividade observado foi de 1,74% o que está acima do percentual médio de 1,3% registrado anteriormente nesta região. A alta percentagem de morcegos vampiros com anticorpos neutralizantes para o vírus da raiva indica uma exposição recente ao vírus o que confirma que, medidas de vigilância devem ser implementadas para evitar um aumento na ocorrência da doença / Abstract:Rabies is a major zoonosis which affects mammals from all over the world and has bats as reservoirs of, both urban and rural areas. Since 1998 cases of rabies in bats have been recorded in the northwest region of São Paulo State, predominantly in urban areas. The objective of this study was to investigate the circulation of rabies in bats in the northwestern region of São Paulo by searching of the virus in different species and the presence of rabies neutralizing antibodies in vampire bats. A total of 1,490 brain samples from bats were sent to the Laboratory of Rabies and 125 serum samples of vampire bats from four shelters in the region were examined from 2008 to 2012. The virus presence was determined by fluorescent antibodies test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) while neutralizing antibodies were determined by the simplified microneutralization (SFIMT) in BHK21 cells. Rabies virus was detected in 26 (1.97%) out of 1,314 non-hematophagous bats and in none of the 176 vampire bats examined. Only 7% (9/125) of vampire bats had antibody titers above 0.5UI/ml, 65% (81/125) had low titers (0.10 to 0.5UI/ml) and 28% (35/125) were negative. The positivity rate observed was 1.74% which is above the average rate of 1.3% recorded previously in this region. The high percentage of vampire bats with neutralizing antibodies to rabies virus indicates a recent exposure to the virus which confirms that surveillance measures must be in place to avoid an increase in disease occurrence / Orientador:Luzia Helena Queiroz / Banca:Silvana Regina Favaretto Lazarini / Banca:Avelino Albas / Mestre