Thesis (MSc.(Anatomy)--Faculty of Health Sciences)-University of Pretoria, 2006. / Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3255493 bytes, checksum: e4ccfc1992b603193191f051cce2e358 (MD5) Previous issue date: 2007-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The male reproductive system of the Lymeon dieloceri and Myschocyttarus atramentarius parasitoids is formed by a pair of testes with one folicles each, a pair of accessory glands, a pair of vasa deferentia and one ejaculatory duct. The vasa deferentia are thin, long, without characteristic dilatation of the seminal vesicle, and they get in the base of the testicular lobule. The accessory glands open in the vas deferens and, in Lymeon dieloceri they are oval shape and in M. atramentarius parasitoid, they are spherical. In both Ichneumonidae the spermatozoa are similar to those ones described for other Hymenoptera, with : (1) the acrosome formed by the acrosomal vesicle covering the perforatorium, which has its base inserted in a gap located in the nucleus point; (2) thin and long nucleus with a electron-dense chromatin; (3) an electron-dense centriole adjunct located between the nucleus and one of the two mitochondrial derivatives; (4) axoneme with 9+9+2 microtubes arrangement; (5) two long mitochondrial derivatives with peripheral cristae and; (6) two accessory bodies located between the two mitochondrial derivatives and the axoneme. They also present structural characteristics only common to the parasitic wasps, as a layer of extracellular material involving the acrosome and one region of the nucleus and the axoneme accessory microtubes ending before the other ones. However, the male reproductive system and the sperm presented morphologic characteristics that allowed differentiating themselves, as the form of the accessory glands and the mitochondrial derivatives. In L. dieloceri, the glands have an oval shape and the mitochondrial derivatives are symmetrical, no longer, in the M. atramentarius parasitoid, the glands have a spherical shape and asymmetrical derivatives. Therefore, this work shows that, in Hymenoptera, the male reproductive system and the spermatozoa supply morphologic characters that can be used in phylogenetic analyses in different taxonomic levels. / O sistema reprodutor masculino de Lymeon dieloceri, parasitóide do Symphyta Digelasinus diversipes e do parasitóide do Vespidae Myschocyttarus atramentarius é formado por um par de testículos com um folículo cada, um par de glândulas acessórias, um par de ductos deferentes e um ducto ejaculatório. Os ductos deferentes são finos, longos, sem dilatação característica de vesícula seminal, e se enovelam na base do folículo testicular. As glândulas acessórias desembocam nos ductos deferentes e, em Lymeon dieloceri elas são ovaladas e no parasitóide de M. atramentarius, esférica. Os espermatozóides desses dois Ichneumonidae são semelhantes àqueles descritos para os demais Hymenoptera, apresentando: (1) o acrossomo formado pela vesícula acrossômica revestindo o perforatorium, o qual tem sua base inserida em uma cavidade na ponta do núcleo; (2) núcleo fino, longo e de cromatina eletrondensa; (3) um adjunto do centríolo eletrondenso e localizado entre o núcleo e um dos dois derivados mitocondriais; (4) axonema com arranjo 9 + 9 + 2 microtúbulos; (5) dois derivados mitocondriais longos com cristas periféricas e; (6) dois corpos acessórios localizados entre os dois derivados mitocondriais e o axonema. Os espermatozóides também apresentam características estruturais comuns apenas às vespas parasíticas, como uma camada de material extracelular envolvendo o acrossomo e parte do núcleo e os microtúbulos acessórios do axonema terminado antes dos demais. Entretanto, tanto o sistema reprodutor como os espermatozóides apresentaram características morfológicas que permitiram diferenciá-las entre si, como a forma das glândulas acessórias e dos derivados mitocondriais. Onde em L. dieloceri as glândulas são ovaladas e os derivados mitocondriais são simétricos, já no parasitóide de M. atramentarius as glândulas são esféricas e os derivados assimétricos. Portanto, esse trabalho confirma que, em Hymenoptera, tanto o sistema reprodutor masculino como os espermatozóides fornecem caracteres morfológicos que podem ser usados em análises filogenéticas em diferentes níveis taxonômicos.

Introdução: Doze a 29 % dos ejaculados tem viscosidade seminal aumentada. Uma das técnicas recomendadas para diminuir a viscosidade do sêmen consiste num processo físico em que se passa o sêmen, 4 vezes, por uma seringa de 10 mL com agulha 18G. Ao fim desse processo, ter-se-ia modificado o comportamento molecular das fibrilas protéicas do esperma, tornando-o mais liquefeito, sem dano aparente a morfologia ou motilidade dos espermatozoides. Atualmente, discute-se sobre a total inocuidade desta técnica, uma vez que ela poderia provocar aumento da fragmentação do DNA dos espermatozoides. A hiperviscosidade seminal, além de reduzir a concentração e a motilidade dos espermatozoides, pode afetar a capacitação e a reação acrossômica, podendo ter implicações na integridade do DNA e no desenvolvimento embrionário normal. Objetivo: Comparar a fragmentação do DNA de espermatozoides humanos em amostras com viscosidade diminuída, fisiológica e aumentada, e avaliar se o processo de expulsão do sêmen através da agulha e seringa altera significativamente as taxas de fragmentação do DNA dos espermatozoides. Método: Após a coleta e avaliação dos parâmetros seminais das amostras de sêmen, aquelas que estiverem com viscosidade aumentada passarão pelo processo de expulsão através da seringa de 10 mL com agulha 18G por 4 vezes, para diminuir a viscosidade seminal. Posteriormente, serão feitas análises da fragmentação do DNA dos espermatozoides através da técnica de TUNEL em todas as amostras. Resultados: A fragmentação do DNA entre amostras com viscosidade fisiológica, diminuída e aumentada não apresentou diferença estatisticamente significativa (P=0,857). A fragmentação do DNA aumentou significativamente (P=0,035) nas amostras com viscosidade aumentada após passar na seringa e agulha quando comparadas com as mesmas amostras antes de passar pela mesma. Conclusão: O processo de expulsão do sêmen através de seringa e agulha visando redução da viscosidade seminal aumenta a fragmentação do DNA no espermatozoide, devendo este processo ser substituído por um processo inócuo. / Background: Twelve to 29 % of the ejaculated have the semen viscosity increased. One of the techniques recommended to decrease the viscosity of semen is a physical process in which the semen passes four times through a 10mL syringe with a 18G needle. At the end of this process would have modified the molecular behavior of the protein fibrils of the sperm making it more liquefied, without apparent damage to the morphology or motility of spermatozoa. Currently, the debate is about the complete safety of this technique since it could result in increased DNA fragmentation of spermatozoa. The seminal viscosity moreover reduces the concentration and motility of sperm, can affect the capacitation and acrosome reaction which may have implications for DNA integrity and normal embryonic development. Objective: To compare the DNA fragmentation in human semen samples with reduced, physiological and increased viscosity and evaluate if the process of expulsion of semen through the needle and syringe significantly alter rates of sperm DNA fragmentation. Methods: After collecting and evaluating semen parameters of semen samples, those that are with increased viscosity will pass through the process of expulsion through the 10 mL syringe with a 18G needle four times to reduce the viscosity of semen. After that, analysis of spermatozoa DNA fragmentation through the TUNEL technique will be made in all samples. Results: The fragmentation of DNA between samples with physiological, reduced and increased viscosity is not statistically significant (P=0.857). The DNA fragmentation increased significantly (P=0.035) in samples with increased viscosity after passing the syringe and needle when compared with the same samples before going through the same. Conclusion: The process of expulsion of semen through a syringe and needle in order to reduce the semen viscosity increases the DNA fragmentation in sperm, and this shall be replaced by a harmless process.

Orientador: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A membrana espermática é caracterizada por uma significativa quantidade de lipídios relacionados com funções específicas da célula, tais como fusogenicidade e permeabilidade, necessárias para o espermatozoide alcançar e fundir-se ao oócito. O perfil lipídico dos espermatozoides difere entre as espécies e indivíduos da mesma espécie, o que pode conferir maior ou menor manutenção da integridade plasmática e crioresistência, uma vez que a exposição desta célula a baixas temperaturas modifica a composição e a organização lipídica da membrana, diminuindo a longevidade e consequentemente sua capacidade fecundante. A presença e a quantidade de lipídios específicos, como as fosfatidilcolinas, esfingomielinas, seminolipídios, plasmalogênios e ácidos graxos com diferentes graus de saturação, além do colesterol exercem importantes funções associadas aos processos de capacitação, motilidade, viabilidade e preservação da integridade da membrana espermática. Assim, um maior estudo sobre a composição lipídica do sêmen e a influência destas macromoléculas sobre a qualidade espermática após a criopreservação possibilitará desenvolver novas estratégias para tornar a célula espermática mais resistente frente ao processo de criopreservação. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-18Bitstream added on 2014-06-13T19:17:41Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_fm_me_jabo.pdf: 732796 bytes, checksum: 9bcaa86558c023e3a8b866ae27e2da36 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As alterações constantes do meio ambiente com diminuição do habitat natural dos primatas brasileiros têm estimulado o desenvolvimento de biotecnologias na área da reprodução, visando à preservação de espécies. Este estudo teve por objetivo avaliar, pela primeira vez, técnicas de criopreservação de sêmen de Alouatta caraya. Foram colhidas 26 amostras de sêmen de seis Alouatta caraya machos adultos e sadios, mantidos em cativeiro no Centro Nacional de Primatas (CENP), Ananindeua, PA. As amostras foram analisadas imediatamente após a colheita quanto aos parâmetros volume, pH, concentração, motilidade total e progressiva, integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma, atividade citoquímica mitocondrial, estresse oxidativo (TBARS) e fragmentação de DNA (SCSA). Após as análises iniciais, as amostras foram congeladas com quatro diluidores diferentes – Test-gema de ovo com glicerol 3 ou 4% e Test-lecitina de soja com glicerol 3 ou 4%, utilizando máquina de congelação automática TK 3000. As amostras foram descongeladas e analisadas aos 10, 40 e 80 minutos pós-descongelação. Diluidores à base de gema de ovo foram mais adequados para congelação de sêmen dessa espécie, quando comparados aos diluidores à base de lecitina de soja. Não houve diferença estatística quanto à concentração de glicerol, porém para o diluidor à base de gema de ovo, a concentração de 4% apresentou melhores resultados. Este trabalho trouxe informações inéditas a respeito de características seminais e aspectos da criopreservação de sêmen dessa espécie, todavia os protocolos de congelação testados não foram considerados adequados para a preservação das amostras estudadas / The constant environmental changes with reduction of the natural habitat of the Brazilian primates require the development of assisted reproductive techniques (ARTs) for species conservation. The objective of this study was to evaluate, for the first time, cryopreservation techniques for Alouatta caraya semen. Twenty-six semen samples were collected from six captive adult Alouatta caraya from the National Primate Center, Ananindeua, PA – Brazil. Samples were analyzed immediately after collection for the following parameters: volume, pH, concentration, total and progressive motility, plasma membrane integrity, acrosome integrity, oxidative stress (TBARS), and DNA fragmentation (SCSA). After initial evaluation, samples were frozen in four different extenders – Test-egg yolk with 3 or 4% glycerol and Test-soy lecithin with 3 or 4% glycerol – using an automatic freezer TK 3000. Samples were thawed and analyzed for the same parameters at 10, 40 and 80 minutes post-thaw. Egg yolk-based extenders seemed better for cryopreservation of semen from this species when compared to soy lecithin-based extenders. Although there was no statistical difference between the different glycerol concentrations, for the egg yolk-based extenders, 4% glycerol had better results. This study brought novel information on semen characteristics and cryopreservation aspects for this species, although the protocols tested were not considered suitable for the cryopreservation of the samples studied

Introdução: Doze a 29 % dos ejaculados tem viscosidade seminal aumentada. Uma das técnicas recomendadas para diminuir a viscosidade do sêmen consiste num processo físico em que se passa o sêmen, 4 vezes, por uma seringa de 10 mL com agulha 18G. Ao fim desse processo, ter-se-ia modificado o comportamento molecular das fibrilas protéicas do esperma, tornando-o mais liquefeito, sem dano aparente a morfologia ou motilidade dos espermatozoides. Atualmente, discute-se sobre a total inocuidade desta técnica, uma vez que ela poderia provocar aumento da fragmentação do DNA dos espermatozoides. A hiperviscosidade seminal, além de reduzir a concentração e a motilidade dos espermatozoides, pode afetar a capacitação e a reação acrossômica, podendo ter implicações na integridade do DNA e no desenvolvimento embrionário normal. Objetivo: Comparar a fragmentação do DNA de espermatozoides humanos em amostras com viscosidade diminuída, fisiológica e aumentada, e avaliar se o processo de expulsão do sêmen através da agulha e seringa altera significativamente as taxas de fragmentação do DNA dos espermatozoides. Método: Após a coleta e avaliação dos parâmetros seminais das amostras de sêmen, aquelas que estiverem com viscosidade aumentada passarão pelo processo de expulsão através da seringa de 10 mL com agulha 18G por 4 vezes, para diminuir a viscosidade seminal. Posteriormente, serão feitas análises da fragmentação do DNA dos espermatozoides através da técnica de TUNEL em todas as amostras. Resultados: A fragmentação do DNA entre amostras com viscosidade fisiológica, diminuída e aumentada não apresentou diferença estatisticamente significativa (P=0,857). A fragmentação do DNA aumentou significativamente (P=0,035) nas amostras com viscosidade aumentada após passar na seringa e agulha quando comparadas com as mesmas amostras antes de passar pela mesma. Conclusão: O processo de expulsão do sêmen através de seringa e agulha visando redução da viscosidade seminal aumenta a fragmentação do DNA no espermatozoide, devendo este processo ser substituído por um processo inócuo. / Background: Twelve to 29 % of the ejaculated have the semen viscosity increased. One of the techniques recommended to decrease the viscosity of semen is a physical process in which the semen passes four times through a 10mL syringe with a 18G needle. At the end of this process would have modified the molecular behavior of the protein fibrils of the sperm making it more liquefied, without apparent damage to the morphology or motility of spermatozoa. Currently, the debate is about the complete safety of this technique since it could result in increased DNA fragmentation of spermatozoa. The seminal viscosity moreover reduces the concentration and motility of sperm, can affect the capacitation and acrosome reaction which may have implications for DNA integrity and normal embryonic development. Objective: To compare the DNA fragmentation in human semen samples with reduced, physiological and increased viscosity and evaluate if the process of expulsion of semen through the needle and syringe significantly alter rates of sperm DNA fragmentation. Methods: After collecting and evaluating semen parameters of semen samples, those that are with increased viscosity will pass through the process of expulsion through the 10 mL syringe with a 18G needle four times to reduce the viscosity of semen. After that, analysis of spermatozoa DNA fragmentation through the TUNEL technique will be made in all samples. Results: The fragmentation of DNA between samples with physiological, reduced and increased viscosity is not statistically significant (P=0.857). The DNA fragmentation increased significantly (P=0.035) in samples with increased viscosity after passing the syringe and needle when compared with the same samples before going through the same. Conclusion: The process of expulsion of semen through a syringe and needle in order to reduce the semen viscosity increases the DNA fragmentation in sperm, and this shall be replaced by a harmless process.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The ruminant fertility is influenced by intrinsic sperm factors, like chromatin or proteins. Considering that the reproductive efficiency is dependent on a balanced and feasible nutrition, the cashew nut meal (CNM) is a low cost byproduct that must be analyzed for possible effects on sperm chromatin and proteins.Study 1:. The objectives of study 1 were to determine failures of chromatin condensation, expression levels and cellular localizations of histones; H3.3, H2B and H4, respectively in spermatozoa from low (LF) vs. high fertility (HF) bulls. The data were analyzed by t test and Pearson correlation (P < 0.05). We demonstrated that aniline blue staining was different within LF (1.73 (0.55, 0.19)) and HF Groups (0.67 (0.17, 0.06) (P < 0.0001), which was also negatively correlated with in vivo bull fertility (r = -0.90; P < 0.0001). Although those histones were consistently immune-detectable and specifically localized in bull sperm, this was not different between the two groups. Except H2B variants, H3.3 and H4 showed 100% identity and conserved among bovine, mouse and human. The H2B variants were more conserved between bovine and human than those of mouse. In conclusion, we showed that H2B, H3.3 and H4 were detectable in bull spermatozoa and that sperm chromatin condensation status, changed by histone retention, is related with bull fertility. Study 2: The objectives of study 2 were evaluate the effects of 13% of CNM inclusion in the diet of Morada Nova rams on the semen parameters, chromatin integrity and sperm proteins. Twenty rams were distributed in two equal groups: cashew nut group (CNG) and control group (COG) that received 13% and 0% of CNM in the diet for 90 days, respectively. The groups were compared for live weight, scrotal circumference, seminal parameters, chromatin integrity and sperm protein profile at 0, 45 and 90 days of the experiment. The data were evaluated by GLM for repeated measures (P < 0.05). At 90 days, CNG (69.00% (7.38; 2.33)) presented percentage of motile sperm superior than control group (60,00% (9,43; 2,98)) (P<0.05). There was not effect from the diet with CNM on chromatin integrity. But, the percentages of protein expression from ODF1 and H2B were larger in the CNG (P<0.05). The proteins: ODF1, GPX4, FTL and H2B were negatively correlated with sperm chromatin quality. In conclusion, the cashew nut meal did not affect negatively the semen quality. / A fertilidade em ruminantes à influenciada por fatores intrÃnsecos espermÃticos como a cromatina e as proteÃnas. Considerando que a eficiÃncia reprodutiva do macho depende de uma nutriÃÃo balanceada e viÃvel, o farelo de castanha de caju (FCC) à um subproduto de baixo custo que deve ser analisado quanto a possÃveis efeitos na integridade cromatÃnica e proteica dos espermatozoides. Estudo 1: O estudo 1 teve como objetivos determinar: falhas na condensaÃÃo da cromatina, nÃveis de expressÃo e localizaÃÃo celular das histonas: H3.3, H2b e H4B, respectivamente, em espermatozoides de touros de baixa (BF) e alta fertilidade (AF). Os dados foram avaliados pelo teste t e correlaÃÃo de Pearson (P < 0,05). Os resultados do teste do azul de anilina foram diferentes entre os grupos BF (1.73 (0.55, 0.19)) e AF (0,67 (0,17, 0,06) (P < 0,0001), os quais tambÃm foram negativamente correlacionados com a fertilidade in vivo de touros (r = -0,90; P < 0,0001). Apesar das histonas terem sido consistentemente imunodetectadas e localizadas nos espermatozoides, estas nÃo apresentaram diferenÃas entre os grupos. As proteÃnas H3.3 e H4 apresentaram 100% de identidade e foram conservadas entre bovinos, murinos e seres humanos. Entretanto, as variantes H2B foram mais conservadas entre touros e humanos do que entre humanos e camundongos. Em conclusÃo, as proteÃnas H2B, H3.3 e H4 foram detectÃveis em espermatozoides de touros e a condensaÃÃo da cromatina espermÃtica, alterada pela retenÃÃo de histonas, à relacionada com a fertilidade de touros. Estudo 2: O estudo 2 objetivou avaliar os efeitos da inclusÃo de 13% de FCC na dieta de carneiros Morada Nova sobre as caracterÃsticas seminais, integridade de cromatina e perfil das proteÃnas espermÃticas. Vinte carneiros foram divididos em dois grupos: castanha (GCA) e controle (GCO).que receberam na dieta 13% e 0% de FCC durante 90 dias, respectivamente. Os grupos foram comparados quanto ao peso vivo, circunferÃncia escrotal, parÃmetros seminais, integridade de cromatina e perfil das proteÃnas espermÃticas aos 0, 45 e 90 dias de experimento. Os dados foram analisados pelo mÃtodo GLM para medidas repetidas (P < 0,05). Aos 90 dias o GCA (69,00% (7,38; 2,33) apresentou porcentagem de espermatozoides mÃveis superior ao GCO (60,00% (9,43; 2,98)) (P<0.05). NÃo houve efeito da dieta contendo FCC sobre a integridade da cromatina. PorÃm, os percentuais das proteÃnas ODF1 e H2B foram mais elevados nos carneiros do GCA (P < 0,05). As proteÃnas: ODF1, GPX4, FTL e H2B foram negativamente correlacionadas com a qualidade da cromatina espermÃtica. Em conclusÃo, a inclusÃo de FCC na dieta de carneiros nÃo afetou negativamente a qualidade seminal.

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T03:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arroteia_KelenFabiola_D.pdf: 15193315 bytes, checksum: b6b3930ea05ff1d7b858f560e01c178a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve testículos, epidídimos, ductos deferentes e trato reprodutor feminino. No epidídimo, a superfície dos espermatozóides pode sofrer diversas modificações, em um processo conhecido como maturação epididimária. Diversas proteínas sintetizadas e secretadas pelas células epiteliais do epidídimo serão posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo spermatozóide tem sido correlacionada à esta nova organização das moléculas de membrana proporcionada durante o trânsito epididimário. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, ou pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação tem constituído uma importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto e também um antígeno expresso nas células epiteliais da cabeça do epidídimo e em espermatozóides da luz deste órgão. A molécula secretada percorre a luz do epidídimo no sentido ântero-posterior e, neste percurso, é incorporada pelos espermatozóides em trânsito. Com o intuito de contribuir para a compreensão dos complexos mecanismos que preparam o espermatozóide para a fecundação, o presente trabalho buscou identificar e reconhecer a estrutura protéica e a função biológica do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo. No futuro, os resultados obtidos poderão contribuir com a geração de novas ferramentas clínicas para a solução de problemas relacionados à biologia da reprodução / Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, through a process known as epididymal maturation. Several proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation has been considered an important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 recognizes an antigen located in spermatids of seminiferous tubules of C57 BL/6 mice more than 24 days old and also in a specific population of epithelial cells in epididymal caput and in the luminal spermatozoa. The synthesis and release of the epididymal antigen occur in an androgen-dependent manner and independent of the testicular expression. Released antigen moves down the epididymis and is further incorporated by luminal spermatozoa. This work was performed in order to comprehend the complex mechanisms that prepare spermatozoa for the fertilization process. The molecular structure of the epididymal protein and its biological functions were investigated and solved. In a near future, the obtained results can contribute with new clinical tools for solving problems in reproductive biology / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Mary Anne Heidi Dolder, Jose Lino Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_PedroValedeAzevedo_M.pdf: 5058045 bytes, checksum: a8e944c3ea7b5a920db9f092ea469fc2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Hymenoptera é uma das maiores ordens de inseto no mundo e nenhum outro grupo possui tantas espécies benéficas para o homem quanto esse. A morfologia dos espermatozóides tem provado ser capaz de fornecer dados úteis para estudos filogenéticos em diversos grupos de insetos, inclusive os Hymenoptera. Porém, os estudos existentes até o momento descrevendo a morfologia dos espermatozóides nessa ordem ainda não são suficientes para permitir inferências filogenéticas mais abrangentes. Neste trabalho descrevemos a morfologia dos espermatozóides de Melittobia hawaiiensis e M. australica (Chalcidoidea) e de Neochrysis lecointei (Chrysidoidea) resultando em dois manuscritos que estão em fase de submissão. Comparando os dados desse estudo com os disponíveis na literatura observamos que algumas características como a presença de estruturas espiraladas nos espermatozóides, presença de material extracelular associado ao ápice dos espermatozóides e a ordem de desorganização dos microtúbulos do axonema no final do flagelo, parecem fornecer informações possíveis de serem utilizadas na filogenia das superfamílias de Hymenoptera. Outras características, como a morfologia do adjunto do centríolo e dos derivados mitocôndrias, parecem ser capazes de fornecer informações que indicam as relações de parentesco entre táxons inferiores, inclusive gêneros (ou tribos) da mesma família / Abstract: Hymenoptera is one of the largest insect orders in the world and no other group presents so many benefic species for humanity. In spite of these insects¿ importance, there are still many uncertainties about this group¿s phylogeny. Spermatozoa morphology has proved useful in resolving phylogenetic questions in many insects¿ orders, including Hymenoptera, although the available studies describing sperm morphology in this order do not include enough taxa to allow detailed phylogenetic studies. This study describes the sperm morphology of Melittobia hawaiiensis and M. australica (Chalcidoidea) and of Neochrysis lecointei (Chrysidoidea), which resulted in two manuscripts to be submitted for publication. Comparing data obtained in this study with those available in the literature there are some characteristics such as the presence of spiraling structures in spermatozoa, the extracellular material coating spermatozoa apex and the order of disorganization of the axoneme microtubules at the flagellum end that could be used to provide information about the Hymenoptera superfamilies¿ phylogeny. Other characteristics, such as the centriolar adjunct and mitochondrial derivatives¿ morphology, provide information about the relationships among inferior taxons, including those of the same genera, or tribes of the same family / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Introdução: Doze a 29 % dos ejaculados tem viscosidade seminal aumentada. Uma das técnicas recomendadas para diminuir a viscosidade do sêmen consiste num processo físico em que se passa o sêmen, 4 vezes, por uma seringa de 10 mL com agulha 18G. Ao fim desse processo, ter-se-ia modificado o comportamento molecular das fibrilas protéicas do esperma, tornando-o mais liquefeito, sem dano aparente a morfologia ou motilidade dos espermatozoides. Atualmente, discute-se sobre a total inocuidade desta técnica, uma vez que ela poderia provocar aumento da fragmentação do DNA dos espermatozoides. A hiperviscosidade seminal, além de reduzir a concentração e a motilidade dos espermatozoides, pode afetar a capacitação e a reação acrossômica, podendo ter implicações na integridade do DNA e no desenvolvimento embrionário normal. Objetivo: Comparar a fragmentação do DNA de espermatozoides humanos em amostras com viscosidade diminuída, fisiológica e aumentada, e avaliar se o processo de expulsão do sêmen através da agulha e seringa altera significativamente as taxas de fragmentação do DNA dos espermatozoides. Método: Após a coleta e avaliação dos parâmetros seminais das amostras de sêmen, aquelas que estiverem com viscosidade aumentada passarão pelo processo de expulsão através da seringa de 10 mL com agulha 18G por 4 vezes, para diminuir a viscosidade seminal. Posteriormente, serão feitas análises da fragmentação do DNA dos espermatozoides através da técnica de TUNEL em todas as amostras. Resultados: A fragmentação do DNA entre amostras com viscosidade fisiológica, diminuída e aumentada não apresentou diferença estatisticamente significativa (P=0,857). A fragmentação do DNA aumentou significativamente (P=0,035) nas amostras com viscosidade aumentada após passar na seringa e agulha quando comparadas com as mesmas amostras antes de passar pela mesma. Conclusão: O processo de expulsão do sêmen através de seringa e agulha visando redução da viscosidade seminal aumenta a fragmentação do DNA no espermatozoide, devendo este processo ser substituído por um processo inócuo. / Background: Twelve to 29 % of the ejaculated have the semen viscosity increased. One of the techniques recommended to decrease the viscosity of semen is a physical process in which the semen passes four times through a 10mL syringe with a 18G needle. At the end of this process would have modified the molecular behavior of the protein fibrils of the sperm making it more liquefied, without apparent damage to the morphology or motility of spermatozoa. Currently, the debate is about the complete safety of this technique since it could result in increased DNA fragmentation of spermatozoa. The seminal viscosity moreover reduces the concentration and motility of sperm, can affect the capacitation and acrosome reaction which may have implications for DNA integrity and normal embryonic development. Objective: To compare the DNA fragmentation in human semen samples with reduced, physiological and increased viscosity and evaluate if the process of expulsion of semen through the needle and syringe significantly alter rates of sperm DNA fragmentation. Methods: After collecting and evaluating semen parameters of semen samples, those that are with increased viscosity will pass through the process of expulsion through the 10 mL syringe with a 18G needle four times to reduce the viscosity of semen. After that, analysis of spermatozoa DNA fragmentation through the TUNEL technique will be made in all samples. Results: The fragmentation of DNA between samples with physiological, reduced and increased viscosity is not statistically significant (P=0.857). The DNA fragmentation increased significantly (P=0.035) in samples with increased viscosity after passing the syringe and needle when compared with the same samples before going through the same. Conclusion: The process of expulsion of semen through a syringe and needle in order to reduce the semen viscosity increases the DNA fragmentation in sperm, and this shall be replaced by a harmless process.