Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2014-08-13T17:59:41Z : No. of bitstreams: 1 000775944.pdf: 1525174 bytes, checksum: 243559115d903e6589baa6f94c5ac6c3 (MD5) / As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of ....

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-20Bitstream added on 2014-08-27T15:57:12Z : No. of bitstreams: 1 000734833.pdf: 2189317 bytes, checksum: 8cc1e7c303126f49a3ecd91ad07bb881 (MD5) / O trabalho investigou o potencial antimicrobiano fotodinâmico (PACT) mediado por um fotossensibilizador (FS) natural, curcumina (C), exposto a uma fonte de luz LED azul (L) aplicado sobre biofilme maduro de Streptococcus mutans (SM) formado sobre discos de hidroxiapatita e comparou esse potencial com biofilmes submetidos a imersão única com solução de clorexidina a 0.12% (CHX). Adicionalmente, verificou-se a eficácia de uma fonte de luz de amplo espectro (luz branca) de alta intensidade de potência na presença de C e azul de toluidina (T) a baixas concentrações expostos a um tempo extra curto de iluminação. Material e Método: Biofilmes de SM foram submetidos a tratamento com soluções de C e iluminadas com um LED azul (L) a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 e a imersão em CHX. Adicionalmente, uma fonte de luz branca (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) foi utilizada na presença de baixas concentrações de C e T por um período extra curto de iluminação sobre suspensões de SM. A eficácia das tratamentos foi realizada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mg de biofilme seco e UFC/ml de suspensão) e análise morfológica dos biofilmes foram realizadas por meio de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura ambiental. Resultados: PACT (C a 2.5 mM e L a 48 J/cm2) apresentou a maior redução bacteriana substancial quando comparada a CHX. A luz branca apresentou fotossensibilização letal nos parâmetros utilizados. Conclusão: A utilização da curcumina, um corante natural e a luz branca, capaz de ativar FS em curtos períodos de tempo, são avanços nesse campo antimicrobiano alternativo. / This work investigated the antimicrobial photodynamic potential (PACT) mediated by a natural photosensitizer (PS), curcumin (C), exposure to an source of blue LED (L) applied over a Streptoccocus mutans (SM) mature biofilm formed on hidroxiapatite discs and compared this potential with biofilms submitted to single immersion of chlorhexidine at 0.12% (CHX). Additionally, it was verified the efficacy of a broad visible spectrum light source (white light) of high potency intensity in the presence of C and toluidine blue (T) at low concentrations and exposure to an extra short illumination time. Materials: SM biofilms were submitted to a treatment with C solutions and exposure to a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 of L and immersion in CHX. Furthermore, a white light source (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) was used in the presence of low concentrations of C and T for an extra short period over SM suspensions. The efficacy of the treatments were performed by colony forming units counting (CFU/mg of dry biofilm and CFU/ml of suspension) and the morphological analysis of biofilms were performed using confocal laser scanning microscopy images and environmental scanning electron microscopy. Results: PACT (C at 2.5 mM and L at 48 J/cm2) presented a bacterial substantial reduction when compared with CHX treatment. The white light showed lethal photossensibilization in the utilized parameters. Conclusion: The use of curcumin, a natural compound and the white light, able to activate FS at shorts periods, are advance on this antimicrobial alternative field.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúde, da universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Pneumococcal meningitis is a severe infectious disease of the central nervous system. This pathology is associated with acute inflammation and can cause damage to the host, such as deafness, blindness, seizure and learning deficits. Furthermore, infectious diseases can play a significant role in the etiology of neuro psychiatric disturbances. In this context, it was evaluated the depressive-like behavior in pneumococcal meningitis survivor rats. Wistar rats weighing 250-300g were underwent a magna cistern tap receiving either 10μL sterile saline or a Streptococcus pneumoniae suspension at the concentration 5×109 cfu/mL. After 3 days of the meningitis induction, the animals were treated with imipramine at 10 mg/kg or saline during 14 days (days 3-17). After 10 days of the induction of meningitis, it was measured the sweet food intake for 7 days (days 10-17). After 17 days of the induction, the animals were anesthetized and blood was removed for analysis of corticosterone and adrenocorticotropic hormone (ACTH). Adrenal gland and the hippocampus were isolated and weighed. The concentration of TNF-_ in the hippocampus and pre-frontal cortex was measured by the ELISA test. In the meningitis group, sucrose consumption was reduced in approximately 60% when compared to sham group. The treatment with imipramine reversed the reduction of sweet food intake in approximately 290% when compared to meningitis group. Regarding the weight of the adrenal gland and the hippocampus, it was any diference between meningitis and imipramine group. There was an increase in ACTH and corticosterone levels in the meningitis group compared to sham. In the meningitis group in comparison with the sham group, the levels of TNF-_ was increased in the pré-frontal cortex. In the hippocampus there was no changes in the TNF-_ levels. The treatment with imipramine decreased levels of ACTH and corticosterone in animals when compared with meningitis group. These results supported the hypothesis that survivor animals of the pneumococcal meningitis showed depressive-like behavior and alterations in the hypothalamus-pituitary-adrenal axis. / A meningite pneumocócica é uma doença grave que acomete o sistema nervoso central. Esta patologia está associada a uma inflamação aguda, que pode ocasionar danos ao hospedeiro, tais como surdez, cegueira, convulsões e prejuízos de memória e aprendizagem. Adicionalmente, as doenças infecciosas também podem desempenhar um papel importante em transtornos neuropsiquiátricos. Nesse contexto, foi avaliado o comportamento semelhante à depressão em ratos sobreviventes à meningite pneumocócica tratados com imipramina. Ratos Wistar, pesando entre 250-300g, foram submetidos à inoculação na cisterna magna com 10μL de solução salina estéril, ou um volume equivalente da suspensão de Streptococcus pneumoniae na concentração de 5x109 UFC/mL. Três dias após a indução da meningite, os animais foram tratados com imipramina 10mg/Kg ou com solução salina, durante 14 dias (3º ao 17º dia). Após dez dias da indução da meningite foi avaliado o consumo de alimento doce, durante 7 dias (10º ao 17º dia). Dezessete dias após a indução da meningite, os animais foram anestesiados e o sangue foi coletado para a análise dos níveis dos hormônios corticosterona e adrenocorticotrófico (ACTH). A glândula adrenal e o hipocampo foram isolados e pesados. A concentração de TNF-_ no hipocampo e no córtex pré-frontal foi determinada utilizando teste ELISA. No grupo meningite, o consumo de alimento doce foi reduzido em aproximadamente 60% quando comparado ao grupo controle. No entanto, o tratamento com imipramina no grupo meningite preveniu a redução do consumo de alimento doce em aproximadamente 290%, quando comparado com o grupo meningite. Em relação ao peso da glândula adrenal e do hipocampo, não houve diferença quando comparado ao grupo controle. Os níveis de corticosterona e ACTH estavam aumentados no grupo meningite quando comparados ao grupo controle. Já os níveis de TNF-_ estavam aumentados apenas no córtex pré-frontal dos animais. No hipocampo, os níveis de TNF-_ não foram alterados. Entretanto, o tratamento com a imipramina preveniu o aumento dos níveis de corticosterona e ACTH nos animais quando comparado com o grupo meningite. Assim, estes resultados corroboram a hipótese de que os animais sobreviventes à meningite pneumocócica apresentam comportamento semelhante à depressão e alterações no eixo hipotálamo-hipófise-adrenal.

Orientador: Lourdes Aparecida Martins dos Santos-Pinto / Banca: Alessandra Nara Souza Rastelli / Banca: Osmir Batista de Oliveira Junior / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Banca: Simone Duarte / Resumo: O trabalho investigou o potencial antimicrobiano fotodinâmico (PACT) mediado por um fotossensibilizador (FS) natural, curcumina (C), exposto a uma fonte de luz LED azul (L) aplicado sobre biofilme maduro de Streptococcus mutans (SM) formado sobre discos de hidroxiapatita e comparou esse potencial com biofilmes submetidos a imersão única com solução de clorexidina a 0.12% (CHX). Adicionalmente, verificou-se a eficácia de uma fonte de luz de amplo espectro (luz branca) de alta intensidade de potência na presença de C e azul de toluidina (T) a baixas concentrações expostos a um tempo extra curto de iluminação. Material e Método: Biofilmes de SM foram submetidos a tratamento com soluções de C e iluminadas com um LED azul (L) a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 e a imersão em CHX. Adicionalmente, uma fonte de luz branca (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) foi utilizada na presença de baixas concentrações de C e T por um período extra curto de iluminação sobre suspensões de SM. A eficácia das tratamentos foi realizada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mg de biofilme seco e UFC/ml de suspensão) e análise morfológica dos biofilmes foram realizadas por meio de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura ambiental. Resultados: PACT (C a 2.5 mM e L a 48 J/cm2) apresentou a maior redução bacteriana substancial quando comparada a CHX. A luz branca apresentou fotossensibilização letal nos parâmetros utilizados. Conclusão: A utilização da curcumina, um corante natural e a luz branca, capaz de ativar FS em curtos períodos de tempo, são avanços nesse campo antimicrobiano alternativo. / Abstract: This work investigated the antimicrobial photodynamic potential (PACT) mediated by a natural photosensitizer (PS), curcumin (C), exposure to an source of blue LED (L) applied over a Streptoccocus mutans (SM) mature biofilm formed on hidroxiapatite discs and compared this potential with biofilms submitted to single immersion of chlorhexidine at 0.12% (CHX). Additionally, it was verified the efficacy of a broad visible spectrum light source (white light) of high potency intensity in the presence of C and toluidine blue (T) at low concentrations and exposure to an extra short illumination time. Materials: SM biofilms were submitted to a treatment with C solutions and exposure to a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 of L and immersion in CHX. Furthermore, a white light source (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) was used in the presence of low concentrations of C and T for an extra short period over SM suspensions. The efficacy of the treatments were performed by colony forming units counting (CFU/mg of dry biofilm and CFU/ml of suspension) and the morphological analysis of biofilms were performed using confocal laser scanning microscopy images and environmental scanning electron microscopy. Results: PACT (C at 2.5 mM and L at 48 J/cm2) presented a bacterial substantial reduction when compared with CHX treatment. The white light showed lethal photossensibilization in the utilized parameters. Conclusion: The use of curcumin, a natural compound and the white light, able to activate FS at shorts periods, are advance on this antimicrobial alternative field. / Doutor

Thesis (Masters Diploma(Technology))--Cape Technikon, Cape Town, 2000 / Streptococcus pneumoniae (S.pneumoniae) infections are an important cause of morbidity and mortality in adults and children worldwide. Mortality rates are highest amongst the very young and the elderly. Streptococcus pneumoniae is the most common form of community acquired bacterial pneumonia. Other diseases commonly caused by Streptococcus pneumoniae include meningitis, pericarditis, bacteraemia and septicaemia. Penicillin is today still consid3red the drug of choice when treating pneumococcal infections. The emergence of resistant pneumococcal strains has made it necessary to adapt antimicrobial regimens when treating pneumococcal infections. Hansman (1967) reported the first penicillin resistant strain, which was isolated from a woman in Australia in 1967. Since then penicillin and multi-resistant Streptococcus pneumoniae strains have been observed worldwide, including South Africa. Streptococcus pneumoniae infections may be caused by anyone of the 84 serotypes recognized to date. The distribution of serotypes varies, depending on geographical area, age and site of infection. High-level penicillin resistance and multiple resistant Streptococcus pneumoniae strains have been recognised worldwide in a few pneumococcal serotypes. Pneumococcal vaccines have been used since the seventies. These capsular polysaccharide vaccines are generally recommended for at risk population such as the elderly and immunocompromised patients. This vaccine is not effective in children under 2 years old. The current vaccine in South Africa (Pneumovax, MSD) consists of purified capsular polysaccharides of 23 pneumococcal serotypes. Conjugated polysaccharide vaccines have been developed to overcome the problems of efficacy in children < 2 years old. These vaccines consist of a capsular polysaccharide linked to a protein carrier, which makes them immunogenic in infants. Clinical trials of these vaccines are currently under way to demonstrate safety, efficacy and immunogenicity. Knowledge of serotype distribution and antimicrobial susceptibility patterns are important in relation to the treatment of pneumococcal diseases and vaccination programmes.

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Liliana Scorzoni / Resumo: As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Abstract: Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of .... / Mestre

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O gÃnero Guettarda (Rubiaceae) compreende plantas extensamente distribuÃdas em Ãreas tropicais. Com relaÃÃo à espÃcie Guettarda sericea, a literatura demonstra que existe uma ampla carÃncia acerca de estudos botÃnicos e fitoquÃmicos. Assim, o presente trabalho buscou avaliar o efeito antibacteriano do extrato etanÃlico das folhas de G. sericea (EEFGS) e suas fraÃÃes sobre o crescimento de Streptococcus oralis ATCC 10557 e S. salivarius ATCC 7073, nas formas planctÃnicas e de biofilmes. Diferentes metodologias foram empregadas para a verificaÃÃo do potencial antimicrobiano. Dentre estas estÃo a determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (MIC), a determinaÃÃo da curva de morte e a avaliaÃÃo da concentraÃÃo bactericida mÃnima (MBC). AlÃm disso, a quantificaÃÃo da biomassa e do nÃmero de cÃlulas viÃveis do biofilme foi realizada, respectivamente, atravÃs da coloraÃÃo pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colÃnia (UFC). Os controles, negativo e positivo utilizados em todos os ensaios foram, respectivamente, DMSO 4% e Gluconato de Clorexidina com concentraÃÃo ajustada de acordo com os dados da CIM de cada micro-organismo. Para a determinaÃÃo da toxicidade do EEFGS utilizou-se o ensaio de toxicidade sobre nÃuplios de Artemia. Os dados mostraram que o extrato e as subfraÃÃes 13 a 17 da fraÃÃo clorofÃrmio apresentaram um marcante efeito antimicrobiano, sendo capazes de inibir o crescimento planctÃnico, bem como o desenvolvimento de biofilmes da cepa de S. oralis atà a concentraÃÃo de 62,5 Âg.mL-1. Com relaÃÃo a S. salivarius, apenas a subfraÃÃo 12 interferiu sobre o crescimento bacteriano. No tocante à toxicidade, foi observado que a morte dos nÃuplios de Artemia ocorreu em concentraÃÃes mais elevadas do que aquelas que apresentaram efeito antibacteriano. A partir de tais resultados pode-se concluir que EEFGS e as subfraÃÃes 13 a 17 podem ser utilizados como insumos para o controle da formaÃÃo de biofilmes de S. oralis. Em adiÃÃo, metodologias complementares que busquem a purificaÃÃo dos compostos ativos e seus efeitos citotÃxicos sobre cÃlulas eucariÃticas necessitam ser realizadas, visando sua utilizaÃÃo como um agente fitoterÃpico. / The genus Guettarda (Rubiaceae) comprises plants widely distributed in tropical areas. Regarding the Guettarda sericea species, the literature shows that there is a lack of botanical and phytochemicals studies. Thus, the present study aimed to evaluate the antibacterial effect of ethanol extract of leaves of G. sericea (EEFGS) and its fractions on the growth of Streptococcus oralis ATCC 10557 and S. salivarius ATCC 7073 in both the planktonic and biofilms states. Different methods were employed to verify the antimicrobial potential. Among these are the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) determination of the death curve and evaluation of minimum bactericidal concentration (MBC). Furthermore, quantification of biomass and the number of viable cells of the biofilm were performed, respectively, by staining with crystal violet and counting colony forming units (CFU). The negative and positive controls used in all assays were respectively 4% DMSO and chlorhexidine gluconate with concentration adjusted according to the data of the MIC of each microorganism. To determine the toxicity of EEFGS, it was used the toxicity test on Artemia nauplii. The data showed that the extract and subfractions 13 to 17 of the chloroform fraction show a remarkable antimicrobial effect, able to inhibit the growth of planktonic and development of biofilms of S. oralis strain until the concentration of 62.5 &#956;g.mL-1. With respect to S. salivarius, only subfraction 12 interfered on bacterial growth. Regarding the toxicity, it was observed that death of Artemia nauplii occurred at higher concentrations than those that exhibited antibacterial effect. From these results it can be concluded that EEFGS and subfractions 13-17 can be used as agents for the control of biofilm formation of S. oralis. In addition, complementary methodologies that seek purification of the active compounds and their cytotoxic effects on eukaryotic cells need to be held, aiming its use as an herbal agent.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim of this study was to evaluate the efficacy of the flavonoid epigallocatechin-3-gallate (EGCG) in concentrations of 0.5%, 1% and 2% as an antimicrobial solution in artificially carious dentin, with 2% chlorhexidine and 0.9% saline solution as controls. Twenty-five slabs of human dentin (4 mm x 4 mm) were immersed for five days in Brain Heart Infusion broth (BHI-broth) inoculated at first day with Streptococcus mutans UA159 (Batch Culture Model). On the fifth day of the experiment, the blocks were randomly divided into five groups: group I - negative control - 0.9% saline solution, group II - positive control - 2% chlorhexidine, group III - 0.5% EGCG, group IV - 1% EGCG, group V - 2% EGCG. Each slab was subjected to 15 Âl of the tested solution for 60 seconds. After treatments, artificially carious dentin was removed from the dentin slabs and analyzed by counting colony forming units (CFUs). All experiments were performed in triplicate and the data obtained in CFUs mean values converted to log base-10. The statistical tests used were analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test. There was no statistical difference between EGCG concentrations and saline (p > 0.05). Furthermore, there is no statistical difference between EGCG concentrations (p > 0.05). However, there was statistically significant difference between chlorhexidine and the other groups (p < 0.05). From the data obtained in this study, is possible to conclude that the substance tested is not effective on elimination of pathogen S. mutans when used in a concentration of 0.5%, 1% and 2% in artificially carious dentin. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficÃcia do flavonÃide epigalocatequina-3-galato (EGCG) nas concentraÃÃes de 0,5%, 1% e 2% como soluÃÃo antimicrobiana em dentina artificialmente cariada, tendo a clorexidina 2% e a soluÃÃo salina 0,9% como controles. Vinte e cinco blocos de dentina humana (4 mm x 4 mm) foram imersos por cinco dias em BHI-caldo inoculado com Streptococcus mutans UA159 no primeiro dia do experimento. No quinto dia do experimento, os blocos foram aleatoriamente distribuÃdos em cinco grupos: grupo I â controle negativo â soluÃÃo salina 0,9%; grupo II â controle positivo â clorexidina 2%; grupo III â EGCG 0,5%; grupo IV â EGCG 1%; grupo V - EGCG 2%. Cada bloco recebeu tratamento de 15 Âl da soluÃÃo testada, que permaneceu em contato com o bloco por 60 segundos. ApÃs os tratamentos, amostras dentinÃrias foram removidas com emprego de lÃmina de bisturi e foram analisadas a partir da contagem de UFCs (unidades formadoras de colÃnias). Os experimentos foram realizados em triplicata e os dados, obtidos em UFCs foram convertidos em log base-10. Os testes estatÃsticos empregados foram anÃlise de variÃncia (ANOVA), seguida de Teste de Tukey. NÃo houve diferenÃa estatÃstica entre as concentraÃÃes de EGCG empregadas e a soluÃÃo salina (p > 0,05). AlÃm disso, nÃo houve diferenÃa estatÃstica entre as concentraÃÃes de EGCG (p > 0,05). No entanto, houve diferenÃa estatisticamente significativa entre a clorexidina e os demais grupos (p < 0,05). Conclui-se, a partir dos dados encontrados, que a substÃncia investigada nÃo deve ser empregada em preparos cavitÃrios com a finalidade de eliminaÃÃo de patÃgenos, visto que nÃo se mostrou eficaz como antimicrobiano nas concentraÃÃes testadas.

No tratamento de lesões profundas de cárie, a Remoção Parcial de Dentina Cariada (RPDC) e restauração tem sido proposta como alternativa conservadora para evitar perda de tecido dentário e exposição pulpar. Existe uma hipótese de que uma seleção de bactérias ocorre abaixo de restaurações devido a um acesso limitado de nutrientes. No entanto, há falta de conhecimento sobre a diversidade e potencial de virulência das bactérias cariogênicas residuais seladas abaixo de restaurações sobre dentina cariada. O objetivo deste estudo foi caracterizar Streptococcus mutans e lactobacilos isolados de dentina cariada antes e após o estresse nutricional por selamento da cavidade. S. mutans e lactobacilos foram obtidos por cultivo da dentina cariada de lesões cavitadas de quatro e seis pacientes, respectivamente. Duas amostras de dentina cariada foram coletadas e cultivadas por paciente: uma antes e outra após três meses de selamento da cavidade. Colônias de S. mutans e lactobacilos preditos foram selecionadas, isoladas e analisadas por coloração de Gram. Genes “housekeeping” foram utilizados na identificação da espécie (gtfB para S. mutans e pheS/rpoA/groEL/16SrRNA para lactobacilos) e a técnica de AP-PCR foi utilizada para genotipagem. A análise fenotípica (produção de ácido e de tolerância ao ácido) foi realizada. Um total de 48 isolados representativos de S. mutans foram analisados (31 antes e 17 após estresse nutricional por meio do selamento). O número de genótipos diferentes de S. mutans encontrado foi de nove e seis antes e após selamento, respectivamente. Pelo menos um dos genótipos encontrados antes do selamento foi também encontrado na dentina após o estresse nutricional por meio do selamento. Em relação aos lactobacilos, analisou-se 86 cepas, 41 antes e 45 após estresse nutricional. L. paracasei e L. rhamnosus prevaleceram e apenas quatro isolados não pertenciam a estas espécies. Um total de 27 e 15 genótipos de lactobacilos diferentes foram encontrados antes e após selamento, respectivamente. Não houve diferença entre isolados de S. mutans e lactobacilos de dentina cariada antes e após o estresse nutricional na produção de ácido ou tolerância ao ácido. L. paracasei apresentaram menor valor de pH em 48h de crescimento. Em conclusão, a diversidade genotípica diminuiu após o estresse nutricional, mas a virulência de S. mutans e lactobacilos permaneceu a mesma. L. rhamnosus foi selecionado após o estresse nutricional. Algumas espécies de lactobacilos apareceram após o selamento, sugerindo pressão seletiva no sítio antes do selamento pela alta disponibilidade de nutrientes. Mais estudos avaliando outras características de virulência são necessários para entender melhor a cariogenicidade das cepas residuais seladas abaixo de restaurações e para compreender a resistência de L. rhamnosus a este sítio. / A hypothesis exists that a selection of bacteria occurs underneath restoration due to a limited access of nutrients. However, there is a lack of evidence regarding their role in the progression of carious process beneath restorations after Partial Dentin Caries Removal. It still unclear if the diversity and the virulence potential of the sealed bacteria remain the same after sealing. The aim of this study was to characterize Streptococcus mutans and Lactobacillus species isolated from caries dentin before and after starvation stress by cavity sealing. S. mutans and lactobacilli were obtained by culture of carious dentin from four and six patients, respectively. Two carious dentin samples were collected and cultured per patient: 1st before and 2nd after three months of cavity sealing. Presumptive S. mutans and lactobacilli were selected, isolated and analyzed by Gram staining. Housekeeping genes sequencing were used to the species identification (gtfB for S. mutans and pheS/rpoA/groEL/16SrRNA for lactobacilli) and Arbitrary Primer-PCR (AP-PCR) was used for genotyping. Phenotypic analysis (acid production and acid tolerance) was performed. A total of 48 representative S. mutans isolates were genotyped (31 before and 17 after the sealing). The number of different genotypes identified was nine and six before and after sealing, respectively. At least one of the genotypes found before the sealing was also found on dentin after the sealing in all patients. Regarding lactobacilli, it was analyzed 86 strains, 41 before and 45 after starvation stress by sealing. L. paracasei and L. rhamnosus prevailed and only four isolates did not belong to these species. A total of 27 and 15 different genotypes were found before and after sealing, respectively. There was no difference between isolates from carious dentin before and after starvation stress, neither regarding acid production or acid tolerance, although L. paracasei showed lower pH value in 48 h of growth. In conclusion, genotypic diversity of S. mutans decreased after starvation stress, but the virulence traits of S. mutans remained unchangeable. L. paracasei and L. rhamnosus were the most prevalent species of this genus, besides L. rhamnosus was selected after starvation stress. There was a decreased genotypic diversity of lactobacilli at the strains level and an increased diversity of species in sealed carious dentin. More studies evaluating other virulence traits are necessary to better understand the cariogenicity of the residual strains underneath restorations and to understand the resistance of L. rhamnosus to this site.

Um novo monômero, brometo de metacriloiloxidodecilpiridínio (MDPB), com efeito antibacteriano e capacidade de co-polimerizar com outros monômeros, foi apresentado por Imazato, Torii e Tsuchitani (1993). Este estudo avaliou a adesão bacteriana, em 16, 40 e 64 horas, à resina composta contendo ou não o monômero antibacteriano MDPB. A adesão foi testada para Streptococcus sanguinis e Streptococcus sobrinus. Após as amostras terem sido submetidas à incubação, o biofilme foi coletado e a contagem de UFCs foi realizada. Os dados foram comparados pelo método ANOVA complementado por teste de Tukey. Os resultados demonstraram que, para o S. sanguinis, a adesão sobre o MDPB foi significativamente maior (p<0.05) quando comparado ao controle em 16 horas, mas diminuiu significativamente em 40 horas, não apresentando diferenças quando comparado ao controle neste tempo (p<0.01). Para o S. sobrinus, o controle apresentou aumento significativo da adesão bacteriana em 64 horas quando comparado com 16 horas (p<0.01), sendo significativamente maior que para o MDPB em 64 horas (p<0.05). Assim, o estudo mostrou que o MDPB é capaz de inibir a adesão de S. sobrinus sem interferir na adesão do S. sanguinis. Portanto, nas condições deste estudo os resultados sugerem que a incorporação do MDPB a resinas compostas pode ser de importância na prevenção de cáries secundárias favorecendo a adesão de bactérias comensais em detrimento de bactérias com potencial cariogênico. / A new antibacterial monomer, Methacryloyloxydodecylpyridinium bromide (MDPB), with antibacterial property and ability to co-polymerize with other monomers, was introduced by Imazato, Torii and Tsuchitani (1993). This study aimed to analyze the effect of MDPB on bacterial adherence to resin composites containing or not MDPB. Streptococcus sanguinis and Streptococcus sobrinus were used. The biofilms were collected from the samples and the colony forming units (CFUs) were counted after 16, 40 e 64 h of incubation. The data were compared by ANOVA complemented by the Tukey’s test. The results showed that the adhesion of S. sanguinis to MDPB-containing resin composite was significantly higher (p<0.05) than to control samples at 16 h, but significantly diminished at 40 h, reaching values similar to those of control samples (p<0.01). The adherence of S. sobrinus to control samples significantly increased throughout the experimental time (p<0.01) and was considerably higher than to MDPB at 64 h (p<0.05). Thus, the study showed that MDPB is capable of inhibit adhesion of S. sobrinus with no interference on the adhesion of S. sanguinis. Thus, at the conditions of this study we suggest that MDPB incorporated to resin composites could be of importance to prevent secondary caries favoring adhesion of commensal bacteria and impairing adhesion of cariogenic bacteria.