A nutrição é o principal fator que interfere com o desempenho reprodutivo de mamíferos e vários metabólitos e hormônios, envolvidos no metabolismo energético, funcionam como sinalizadores para o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal. O fato de a insulina ser o principal regulador da homeostase de glicose e exercer controle em diversas etapas do metabolismo de gorduras e proteínas, fez desse hormônio, ao longo do processo evolutivo, um modulador da reprodução. Neste estudo, no experimento 1, foi comparado o efeito da hiper e da hipoinsulinemia, no desempenho reprodutivo relacionado ao processo de superovulação em ovelhas. Para tanto foram utilizadas 27 ovelhas, distribuídas em 3 grupos: a) controle; b) grupo diabético (induzido pela aplicação I.V. de 50mg/kg de Alloxano); e c) grupo hiperinsulinêmico (suplementado com 1 UI/kg ao dia, S.C.). Todos os animais receberam um pessário vaginal, contendo 60 mg de medroxiprogesterona no D0 e foram superovulados, com 250UI de FSH em 6 aplicações, iniciadas no D10. No D12 aplicaram-se 250UI de eCG e 125 g de cloprostenol sódico. As ovelhas foram submetidas à monta natural e a colheita dos embriões foi realizada no sétimo dia após o início do estro. Em média, os teores de insulina medidos a partir da remoção dos pessários até a colheita dos embriões foram de 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectivamente para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico. Os valores para glicemia, medida no mesmo período, para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico foram de 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectivamente. O grupo diabético apresentou menor produção de corpos lúteos que os animais controle e hiperinsulinêmicos (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 e 11,3±1, P<0,01); pior qualidade do CL (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 e 1.3±0,1, P<0,01), menor número de embriões (2.3±1.2 vs 7.9±1.97e 7.4±1.2, P<0,01), que por sua vez também foram de pior qualidade (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 e 1.7±0.1, P<0,01). De um modo geral, os animais hiperinsulinêmicos apresentaram desempenho reprodutivo semelhante aos do grupo controle; entretanto, embora o número de embriões colhidos não tenha sido estatísticamente diferente, os dados são sugestivos de que o estado de hiperinsulinemia pode favorecer o crescimento embrionário, acelerando seu desenvolvimento. Histologicamente, os CL do grupo diabético se apresentaram com hipotrofia das LLC, aumento no número de células apoptóticas por campo, quando comparados aos dos tratamentos controle e hiperinsulinêmico. Adicionalmente, no experimento 2, foram testadas formulações de nanopartículas de quitosana, para liberação sustentada de insulina, bem como permeação da mucosa gastrintestinal. A formulação de insulina nanoestruturada, sem proteção lipídica,administrada pela via SC, liberou 92,1 ± 3,01% da quantidade inicial de insulina, in vitro, porém o padrão desejado de liberação sustentada não foi atingido. No teste in vivo, a redução da glicemia foi apenas parcial (em média 60,8±3,2% em relação à linha de base). O sistema composto por nanopartículas incorporadas à matriz lipídica, no teste in vitro, liberou apenas 15,6 ± 4,9% da quantidade inicial. Entretanto, quando administrada pela via oral, no teste in vivo, reduziu, embora parcialmente, a glicemia de ovinos diabéticos alloxano induzidos (em média 79,88±4,3% em relação à linha de base). Concluiu-se, com base no experimento 1 que, na dose empregada, a insulina não foi capaz de produzir benefícios reprodutivos que justifiquem seu uso em protocolos de superovulação de ovelhas. As concentrações subfisiológicas de insulina, observadas nos animais diabéticos podem ser responsáveis por uma série de alterações metabólicas, que, em conjunto, comprometeram os índices de desempenho reprodutivo, relacionados ao processo de superovulação e induziram um quadro inicial de regressão de CL. Com isso, observou-se que o uso de ovelhas, como modelo animal, para estudo dos efeitos reprodutivos da insulina, foi satisfatório. Pela análise do experimento 2, concluiu-se que o sistema de nanopartículas revestidas por lipídios foi capaz de carrear a insulina, ao longo do trato digestivo de um ruminante, no teste in vivo, e compatibilizar sua permeação através da mucosa intestinal, mantendo a atividade biológica do hormônio, o que consiste em um fato inédito. / Nutrition is the main factor that interferes with the reproductive development of all mammals and many of the matobolites and hormones involved in the energetic metabolism work as signaling factors for the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The fact of insulin being the main regulator of glucose homeostasis and having control in various steps of fat and protein metabolism, has made this hormone, along the evolution process, a reproductive modulator. In the first experiment of this study, the effect of hyper and hypoinsulinemia were compared as to how it affects the reproductive performance related to superovulation in sheep. For this, 27 sheep were used, distributed in 3 groups a) control, b) diabetic group (induced by IV injection of 50mg/kg of Alloxan); and c) hyperinsulinemic group (supplemented with 1 UI/kg per day, SC). All animals received a vaginal pessary, containing 60 mg of medroxiprogesterone on D0 and were superovulated, with 250UI of FSH in 6 applications, starting on D10. On D12 250UI of eCG and 125 g of sodium cloprostenol were administered. The sheep were submitted to natural breeding and embryo collection was performed on the seventh day after the beginning of estrus. In average, the insulin levels recorded starting on the day of pessary removal until the day of embryo collection were 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectively for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups. The values for glycemia, measured during the same period, for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups were 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectively. The diabetic group showed less corpus lutea production than the control and hyperinsulinemic groups (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 and 11,3±1, P<0,01); worse CL quality (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 and 1.3±0,1, P<0,01), less number of embryos (2.3±1.2 vs 7.9±1.97 and 7.4±1.2, P<0,01), which by its turn were also of worse quality (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 and 1.7±0.1, P<0,01). Overall, hyperinsulinemic animals presented a reproductive performance similar to the control group; however, although the number of embryos recovered were not statiscally different, the data suggest that the state of hyperinsulinemy can favor embryo growth, acceleratting its development. Histologically, the CLs from the diabetic group showed hypotrophy of LLC and an increase in the number of apoptotic cells per field when compared to the control and hyperinsulinemic treatments. In addiction, the second experiment, chitosan nanoparticles formulations were tested, for sustained release of insulin as well as gastrointestinal mucosal permeability. The nanostructured insulin formulation without lipid protection, administered SC, released 92,1 ± 3,01% of the initial insulin amount, in vitro, however, the desired standard for sustained release was not reached. In the in vivo test, the reduction in glycemia was only partial (on average 60,8±3,2% in relation to base line ). In the in vitro test, the system made up of nanoparticles incorporated to the lipid matrix, released only 15,6 ± 4,9% of the initial amount. However, when administered orally, in the in vivo test, it reduced, although only partially, the glycemia of the alloxan induced diabetic ovines (on average 79,88±4,3% in relation to base line). In conclusion, based on the first experiment, the applied insulin dose was not able to produce any reproductive benefits that may justify its use in sheep superovulation protocols. The sub-physiologic insulin concentrations observed in the diabetic animals may be responsable for various metabolic alterations, that together compromised the reproductive performance levels related to the superovulation process and induced an initial state of CL regression. With that, it was noticed that the use of sheep as an animal model for the study of the effects of insulin on reproduction was satisfatory. By analyzing the second experiment, it was concluded that the nanoparticles system coated with lipids was able to carry insulin along the ruminant digestive during the in vivo test, show permeability through the intestinal mucosa, maintaining the hormone biologic activity, which is a new and unpublished fact.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.

Research Doctorate - Doctor of Philosophy (PhD ) / In Australia almost 40% of the carnivorous marsupials, or dasyurids, are threatened. Assisted reproductive techniques (ART), especially genome resource banking, have the potential to contribute to the conservation of these species by reducing the loss of genetic diversity. This project aimed to advance the knowledge of ART in dasyurids by focusing on the long term preservation of male and female gametes and establishing protocols for the production of mature oocytes for use in future ART. These studies used the fat tailed dunnart (Sminthopsis crassicaudata) as a model dasyurid and replicated many of the findings on threatened dasyurids. Dasyurid spermatozoa had a relatively unstable acrosome which lacked acrosomal membrane disulphide stabilisation. There was no evidence that S. crassicaudata spermatozoa were susceptible to high concentrations of cryoprotectants, but spermatozoa frozen with up to 40% glycerol using a rapid freezing protocol were not viable. Nonetheless the morphology and acrosomal integrity of frozen spermatozoa was normal and there was no evidence of DNA damage. The lack of success with cryopreservation is likely to be an artifact of cold shock, which was observed in S. crassicaudata and had not previously been described in any other marsupial. This susceptibility to low temperature can be overcome by slow cooling spermatozoa to 0 ºC at 0.5 ºC minute -1 with up to 20% egg yolk, and it is likely that this finding will result in successful sperm cryopreservation in the near future. Freeze drying spermatozoa represents an additional strategy for long term sperm preservation and freeze dried S. crassicaudata spermatozoa had normal morphology and nuclear integrity. In this study preserved dasyurid spermatozoa were immotile and non-viable but had no nuclear damage, suggesting that fertilisation may be achieved with intracytoplasmic sperm injection (ICSI). As ICSI requires a large number of mature oocytes to be collected, a reliable timed ovarian stimulation protocol was established in S. crassicaudata. This protocol enabled the collection of up to 28 oocytes which were either mature, or able to be cultured to the first polar body stage within 48 hours. Despite the success of induced ovulation, methods for preservation of the female gamete are essential to genome resource banking. This study also described a protocol for the enzymatic dissociation of dasyurid ovarian tissue allowing collection of high quality individual preantral follicles. The oocytes inside these follicles were able to be vitrified without any loss of viability and short term in vitro culture of immature follicles repaired the small amount of vitrification-induced damage to the surrounding granulosa cells. This collection of studies describes progress in genome resource banking for spermatozoa and oocytes from dasyurids and the development of protocols allowing the collection of a large number of oocytes for use in fertilisation experiments. These advances provide a solid and comprehensive framework for continuing the study of dasyurid ART which is timely due to the urgent need for genome resource banking in several threatened dasyurid marsupials.

Reclamation of Canada’s threatened wood bison (Bison bison athabascae) herd is complicated by cattle diseases. As part of an overall goal to conserve bison genetics, five studies were conducted to develop or adapting present reproductive technologies to produce disease-free in vivo-derived wood bison embryos. In Chapter 4, the efficacy of pLH and hCG for inducing ovulation and whether the effect was related to the size of the dominant follicle at the time of treatment was examined in wood bison during the anovulatory season . Ovulation rate with hCG (94%) was nearly two times greater than with pLH (54%), and bison with a growing follicle of ≥10 mm had a greater ovulatory response than those of 8-9 mm. In Chapter 5, the efficacy of pLH and hCG after superstimulation with single or two doses (48 hours apart) of FSH diluted in 0.5% hyaluronan was determined in wood bison. A greater superovulatory ovarian response was found in cows treated with hCG vs. LH during the anovulatory and ovulatory seasons (6.6 vs. 2.8 and 6.3 vs. 3.8 corpora lutea respectively). In addition, dividing the dose of FSH two resulted in greater superovulatory response in wood bison. However, the number of corpora lutea was still lower than expected as compared to cattle using the same two dose method of superovulation (15 corpora lutea; Tribulo et al., 2012). Therefore, in Chapter 6, the effect of the addition of a low dose of eCG at the end of the superstimulation protocol on ovarian response and embryo quality was examined. Although the number of ova/embryos recovered was higher in this study when compared with previous reports in wood bison, no effect of eCG on the number of corpora lutea and embryo quality was found. In Chapters 5 and 6, the effect of exogenous progesterone on embryo quality in wood bison during the anovulatory season was evaluated. We found that progesterone did not improve the number of freezable embryos in either study. In Chapter 7, the effect of lengthening of FSH treatment protocol on superovulatory response and embryo quality during the ovulatory and anovulatory seasons was examined. There was no effect of lengthening the FSH treatment protocol on ovarian response and embryo quality during the anovulatory season. However, embryo quality and ovulation rate were increased by the lengthened treatment protocol during the ovulatory season. Additionally, more freezable embryos (Grades 1 and 2) were obtained during the ovulatory season (1.8 embryos) vs. the anovulatory season (0.3 embryos). Overall, results confirm that superovulation can be performed in wood bison throughout the year, but a higher number of freezable embryos were obtained during the ovulatory season. The final chapter (Chapter 8) focused in the production of disease-free embryos in wood bison. Following superovulation, in vivo-derived wood bison embryos were exposed in vitro to Brucella abortus biovar 1. After incubation, embryos were submitted to the 10-step washing procedures recommended by the IETS to remove the pathogen. When the washing medium contained antibiotics, 100% Brucella-free embryos were obtained. These findings validate the washing procedures for the production of Brucella-free embryos in wood bison.

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Julio Cesar Ferraz Jacob / Resumo: O presente estudo tem como objetivo verificar a resposta ovulatória e recuperação embrionária em éguas após o tratamento com FSHp (Folltropin-V®) em diferentes momentos, com diferentes doses e na raça BH. O crescimento folicular foi acompanhado diariamente e os tratamentos (i.m. a cada 12h) foram mantidos até que o maior(es) folículo(s) atingiu 32mm, a indução da ovulação (2500 UI de hCG i.v.) foi realizada quando o maior(es) folículo(s) atingiu 35mm e a colheita de embriões no D8. No experimento 1, a dose de 25mg de FSHp foi testada em 28 éguas para determinação do melhor momento após aspiração folicular: 13mm (n=7, salina, controle), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); ou em um dia determinado do ciclo: D6 (n=7, FSHp- D6). No experimento 2, a dose de 50mg de FSHp foi testada em 17 éguas quando o maior folículo atingiu 13mm (n=7, FSHp-13) e comparada ao grupo controle (n=10). No experimento 3, em 26 éguas BH inciou-se os seguintes tratamentos no D6: salina (n=7, controle), 25mg de FSHp (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg de EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg de FSHp (n=5, 50FSHp-D6). Usou-se a análise de variância de perfil, seguida do método de Tukey e para os dados de embriões/ovulação foi realizado o teste exato de Fisher (5% de significância). Os tratamentos com 25mg ou 50mg não promoveram aumento significativo no número de ovulações e de embriões recuperados, mas promoveu aumento no diâmetro máximo atingido por F3. O início do tratamento quando o maior folículo da onda induzida atingiu 20mm reduziu o tempo de tratamento. Conclui-se que os tratamentos com FSHp não promoveram resposta satisfatória e que o início do tratamento próximo ao desvio permitiu redução no tempo de tratamento. / Abstract: The present study aims to verify the ovulatory response and embrionary recover in mares treated at different moments with pFSH (Folltropin-V®), with different doses and in BH breeding mares. The follicular growth was daily accompanied and treatments (i.m. BID) were kept until major follicles reached 32mm, ovulation induction (2500 UI of hCH i.v.) was done when major follicles reached 35mm and embryo collection at D8. In experiment 1, 25mg of pFSH was tested in 28 mares for determination of the best moment for start of treatment after follicle ablation: 13mm (n=7, saline, control), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); or in a previously determined cycle day: D6 (n=7, FSHp-D6). In experiment 2, 50mg of pFSH was tested in 17 mares when the largest follicle achieved 13mm (n=7, FSHp-13) and compared to a control grupo (n=10). In experiment 3, in 26 BH mares was initiated the following treatments beginning at D6: saline (n=7, control), 25mg of pFSH (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg of EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg of pFSH (n=5, 50FSHp-D6). For statistical analysis, Profile analysis followed by Tuckey method and, for embryo/ovulation, Fisher test were used (significance at 5%). Treatments with 25mg or 50mg did not promote a significative increase on ovulations and embryo recover, but increased maximum diameter of F3. The start of treatment when the largest follicle of an induced follicular wave achieved 20mm reduced time of treatment. It is concluded that pFSH treatment did not promote a satisfactory response and that beginning of treatment close to deviation allowed the reduction of treatment time. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:17:40Z : No. of bitstreams: 1 gimenes_am_me_botfmvz.pdf: 692315 bytes, checksum: 7da5bd34c5afb8b570d2c0e11f7e30c9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo visou avaliar a resposta ovariana e a taxa de recuperação embrionária em éguas tratadas com EPE nas doses de 6, 8 e 12,5 mg sendo o tratamento iniciado após a aplicação de prostaglandina F2 no oitavo ou sexto dia após a ovulação com a finalidade de reduzir o tempo e custo do tratamento. Foram realizados dois experimentos, para o experimento 1, 40 ciclos estrais de éguas Mangalarga Marchador, entre cinco e 24 anos, e para o segundo experimento 30 ciclos estrais de éguas mestiças entre quatro e 12 anos de idade, foram estudados. Foi aplicada 7,5 mg i.m.de prostaglandina F2 (Dinoprost Trometamina) no oitavo (experimento 1) ou sexto (experimento 2) dia após a ovulação. Nesse momento as éguas foram distribuídas aleatoriamente em cinco grupos para o experimento 1: (n=8 ciclos estrais/grupo): Grupo F20-23mm 6mg e F20-23mm 8mg receberam 6 e 8mg, respectivamente, de EPE por via i.m. a cada 12 horas, a partir da detecção de folículo(s) entre 20-23mm de diâmetro. Nos Grupos D8 - 6mg e D8 - 8mg foi aplicado 6 ou 8 mg de EPE, respectivamente, a cada 12 horas por via i.m. a partir do D8 (concomitante a PGF2 ). No Grupo F20-23mm Salina (Controle): as éguas receberam solução salina respeitando os mesmos intervalos que os grupos tratados com EPE a partir da detecção de folículo(s) entre 20-23mm de diâmetro. No experimento 2, a metodologia foi similiar ao experimento 1, contudo, as éguas receberam 12,5 mg de EPE, e o tratamento foi iniciado no sexto dia após a ovulação para o Grupo D6-12,5 mg (n=9), ou quando detectou-se folículo(s) entre 20-23mm, Grupo F20-23mm 12,5 mg (n=10) e F20-23mm Salina (Controle, n=10). Em todos os grupos (Exp. 1 e 2) o tratamento (EPE ou salina) foi mantido até 12 horas anterior a detecção de folículo(s) com diâmetro 35 mm, nesse momento a ovulação foi induzida com única dose de 2500 U.I. de hCG, i.v. (Vetecor®)... / The present study aimed to evaluate the ovarian response and embrionary recovery in mares treated with doses of 6, 8 and 12.5 mg of EPE. The treatment was started after application of prostaglandin F2 for reduce the period and cost of treatment. Two experiments were conducted, for the experiment one, 40 estrous cycles of Mangalarga Marchador mares and ranged in age from 5 to 24 yrs, and for the second experiment 30 estrous cycles of crossbreed mares ranged in age from four to 12 yrs was used. In the eighth (experiment 1) or sixth (experiment 2) after ovulation was applied 7.5 mg i.m. of prostaglandin F2 (Dinoprost Trometamina). In this moment, all mares in experiment 1 was randomly assigned to treatment and control groups as follows: Groups 1 and 2 (n=8 cycles/group) received 6 mg of EPE, i.m. twice daily, beginning when largest follicle (s) was (were) 20-23 mm (Group F20-23mm 6mg) or regardless of follicle size on Day 8 (Group D8 – 6 mg); Groups 3 and 4 (n=8 cycles/group), received 8 mg of EPE, i.m. twice daily, beginning when largest follicle was 20-23 mm (Group F20-23 mm 8 mg) or regardless of follicle size on Day 8 (Group D8 – 8mg); Group F20-23mm Saline (Control, n=8 cycles) received saline, i.m. beginning when largest follicle (s) was (were) 20-23 mm in the same range of groups treated with EPE. In the second experiment was used the same methodology of the experiment 1, however, the mares received 12.5mg of EPE, and the treatment began in the sixth day after ovulation for the Group D6- 12.5mg (n=9), or when the largest follicle (s) was (were) 20-23 mm, Group F20-23mm 12,5 mg (n=10) e F20-23mm Saline (Control, n=10). Treatments with EPE or saline continued until 12 hours before detection of follicle (s) reached 35 mm, at which time a single dose of hCG (2500 U.I., i.v., Vetecor®) was given. Groups were compared using ANOVA and mean differences among groups were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: Respostas superovulatórias satisfatórias têm sido reportadas em éguas com o uso do Extrato de Pituitária Eqüina (EPE) e FSH purificado eqüino (eFSH), contudo as taxas de recuperação embrionária permanecem inconsistentes. O objetivo deste estudo foi avaliar as concentrações plasmáticas de estradiol, inibina, FSH e LH em éguas superovuladas com eFSH e EPE (em doses constantes ou decrescentes): antes, durante e imediatamente após o término da administração hormonal. Foram utilizadas seis éguas as quais foram submetidas aos seguintes tratamentos: Grupo I (GI) recebeu 25mg de EPE intramuscular (I.M.), Grupo II (GII) foram tratadas com EPE (I.M.) em doses decrescentes. No Grupo IIl (GIII), o EPE foi substituído por 12,5mg de eFSH (I.M.). O Grupo IV (GIV) foi utilizado como controle. Sangue foi coletado diariamente para avaliar as concentrações hormonais por radioimunoensaio. As coletas foram iniciadas dois dias antes da primeira aplicação medicamentosa, encerrando 48horas após a última ovulação do estro. As diferenças nos níveis plasmáticos hormonais foram comparadas utilizando-se o ANOVA, sendo considerada diferença estatística quando P0,05. O número médio de ovulações foi de 3,3; 4,8; 5,0 e 1,0 nos grupos 1 a 4, respectivamente, tendo sido maior (P<0,05) em todos os grupos superovulados em relação ao controle. As concentrações de estrógeno, inibina, FSH e LH não diferiram entre os grupos durante o período 1. No período 2, os valores de estradiol foram maiores (P<0,05) em éguas sob tratamento superovulatório com eFSH (GIII) 29,52pg/ml, os grupos I e II, apresentaram valores intermediários (GI: 16,75pg/ml, GII: 16,26pg/ml) e o GIV (7,78pg/ml) menor estatisticamente aos demais. Foi verificada uma correlação altamente positiva (R=0,615; P=0,01) entre os valores de estradiol e inibina, os quais, durante os tratamentos, foram maiores (P<0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Satisfactory superovulatory responses have been reported in mares with the use of equine pituitary extract (EPE) and purified equine FSH (eFSH), however embryo recovery rates are still inconsistent. Recent studies demonstrated that the superovulatory treatment disturbs oocyte maturation and transport. The main objective of the present study was to evaluate the plasmatic concentrations of estradiol, inhibin, FSH and LH in super ovulated mares treated with eFSH and EPE (with constant or decreasing doses): Six mares were used in a crossover experiment in four different groups: Group I mares received 25mg of EPE every twelve hours, Group II received EPE in decreasing doses and Group IlI mares received 12.5mg of eFSH (IM). Group IV served as control. Embryo flushes were performed 8 days pos ovulation. Blood was collected daily to evaluate hormonal concentrations through radioimuneassay, starting two days before the first administration, until 48 hours post-ovulation. Mean and daily hormonal concentrations of estradiol, inhibin, FSH and LH were evaluated. Hormonal concentrations were submitted to statistical analysis using ANOVA. Significance levels were set as P<0.05. Mean number of ovulations was 3.3; 4.8; 5.0 and 1.0 in groups 1 to 4, respectively, being higher (P<0.05) in all super ovulated groups, when compared to control. Concentrations of estrogen, inhibin, FSH and LH did not differ between groups during the first period. In period 2, estradiol levels were higher (P<0.05) in mares with superovulatory treatment eFSH (GIII) 29.52pg/ml, the groups GI and GII (GI: 16.75pg/ml, GII: 16.26pg/ml) values intermediary, and GIV (7.78pg/ml) levels lower. A positive correlation between estradiol levels and number of follicles ≥30mm (R=0.917; P<0.05), recovered embryos (R=0.945; P<0.05) and ovulations (R=0.75; P<0.05) was identified in super ovulated mares. A positive correlation (R=0.615; P=0.01) between estradiol and inhibin concentrations. / Mestre

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Marcelo Alcindo de Barros Vaz Guimarães / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O conhecimento das técnicas de reprodução assistida nas espécies selvagens pode ser importante para futuros programas de conservação in situ e ex situ. Nosso objetivo foi estabelecer um protocolo de superovulação para o veado-catingueiro (Mazama gouazoubira). Para tanto, foram realizados dois experimentos: (1) No ano de 2007, seis fêmeas da espécie M. gouazoubira receberam um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®) por 8 dias seguido por uma aplicação i.m. de 0,5mg de BE no momento da inserção (D-8) e de 265μg de cloprostenol (PGF2α) no momento da retirada (D0). Posteriormente foram divididas em três grupos (n=2): no primeiro os animais receberam 600UI de eCG (Tratamento A), no segundo 300UI de eCG (Tratamento B) e no terceiro 250UI de FSH+PVP. (Tratamento C), todos administrados no dia 4 (D-4). O segundo experimento (2) foi desenvolvido no ano de 2009 e utilizou outras seis fêmeas da mesma espécie, divididas em dois grupos (n=3): o primeiro recebeu CIDR® por 8 dias, seguido por uma aplicação i.m. de 0,25mg de BE no D-8, 700UI eCG no D-4 e 265μg PGF2α no D0 (Tratamento D) e o segundo recebeu CIDR® por 7,5 dias seguido por uma aplicação i.m. de 0,25mg de BE no D-7,5; 130mg de FSH em oito doses iguais (iniciando em D-3 e finalizando em D-0,5) e 265μg de PGF2α no D0 (Tratamento E). Em cada experimento os tratamentos foram delineados no esquema "cross-over", com um intervalo de 44 dias após a remoção do CIDR®. Todas as fêmeas receberam uma aplicação i.m. de PGF2α 14 dias após a retirada do CIDR®. Um macho fértil foi utilizado para a detecção do estro e fertilização. A eficácia dos Tratamentos foi avaliada pelo comportamento reprodutivo, contagem de CLs e folículos (maiores que 3mm) e colheita de embriões por laparoscopia, sete dias após a primeira cópula. No Experimento 1, ainda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Knowledge of assisted reproduction techniques for wild animals is useful for future in situ and ex situ conservation programs. The present study aimed to establish a superovulation protocol for brown brocket deer (Mazama gouazoubira) by evaluating the ovulation rate, the presence of functional corpora lutea (CL), the number of embryos and their development stages after superovulation using different treatments. For this, two experiments were realized: (1) in 2007, six female Mazama gouazoubira received an intravaginal device (CIDR) for 8 days, followed by 0.5mg i.m. injection of OB at the time of insertion (D-8) and 265μg of cloprostenol (PGF2α) at the time of removal (D0). Next, the hinds were divided into 3 groups (n=2): group 1 received an i.m. injection of 600IU eCG (Treatment A), group 2 300IU of eCG (Treatment B) and group 3 250IU of FSH+PVP (Treatment C), all on D4 (D-4). The second Experiment (2) was developed in 2009 and also used six hinds from the same species divided into 2 groups (n=3): the first received CIDR for 8 days, followed by 0.25mg i.m. injection of OB on D-8, 700IU of eCG on D-4 and 265μg of PGF2α on D0 (Treatment D) and the second received CIDR for 7.5 days followed by 0.25mg i.m. injection of OB on D-7.5, 130mg of FSH divided into eight equal doses [beginning on D-3 and ending D-0.5] and 265μg of PGF2α on D0 (Treatment E). In each experiment, the treatments were „crossed over‟ with 44 day intervals after CIDR removal. All the hinds received an i.m. injection of PGF2α 14 days after CIDR® removal. A fertile male was used for estrus detection and fertilization. Treatment efficacy was evaluated by reproductive behavior, observation of CL, unruptured follicles (over 3mm) and embryo collection via laparoscopy 7 days after the first copulation. In Experiment 1, feces were collected... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A nutrição é o principal fator que interfere com o desempenho reprodutivo de mamíferos e vários metabólitos e hormônios, envolvidos no metabolismo energético, funcionam como sinalizadores para o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal. O fato de a insulina ser o principal regulador da homeostase de glicose e exercer controle em diversas etapas do metabolismo de gorduras e proteínas, fez desse hormônio, ao longo do processo evolutivo, um modulador da reprodução. Neste estudo, no experimento 1, foi comparado o efeito da hiper e da hipoinsulinemia, no desempenho reprodutivo relacionado ao processo de superovulação em ovelhas. Para tanto foram utilizadas 27 ovelhas, distribuídas em 3 grupos: a) controle; b) grupo diabético (induzido pela aplicação I.V. de 50mg/kg de Alloxano); e c) grupo hiperinsulinêmico (suplementado com 1 UI/kg ao dia, S.C.). Todos os animais receberam um pessário vaginal, contendo 60 mg de medroxiprogesterona no D0 e foram superovulados, com 250UI de FSH em 6 aplicações, iniciadas no D10. No D12 aplicaram-se 250UI de eCG e 125 g de cloprostenol sódico. As ovelhas foram submetidas à monta natural e a colheita dos embriões foi realizada no sétimo dia após o início do estro. Em média, os teores de insulina medidos a partir da remoção dos pessários até a colheita dos embriões foram de 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectivamente para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico. Os valores para glicemia, medida no mesmo período, para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico foram de 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectivamente. O grupo diabético apresentou menor produção de corpos lúteos que os animais controle e hiperinsulinêmicos (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 e 11,3±1, P<0,01); pior qualidade do CL (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 e 1.3±0,1, P<0,01), menor número de embriões (2.3±1.2 vs 7.9±1.97e 7.4±1.2, P<0,01), que por sua vez também foram de pior qualidade (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 e 1.7±0.1, P<0,01). De um modo geral, os animais hiperinsulinêmicos apresentaram desempenho reprodutivo semelhante aos do grupo controle; entretanto, embora o número de embriões colhidos não tenha sido estatísticamente diferente, os dados são sugestivos de que o estado de hiperinsulinemia pode favorecer o crescimento embrionário, acelerando seu desenvolvimento. Histologicamente, os CL do grupo diabético se apresentaram com hipotrofia das LLC, aumento no número de células apoptóticas por campo, quando comparados aos dos tratamentos controle e hiperinsulinêmico. Adicionalmente, no experimento 2, foram testadas formulações de nanopartículas de quitosana, para liberação sustentada de insulina, bem como permeação da mucosa gastrintestinal. A formulação de insulina nanoestruturada, sem proteção lipídica,administrada pela via SC, liberou 92,1 ± 3,01% da quantidade inicial de insulina, in vitro, porém o padrão desejado de liberação sustentada não foi atingido. No teste in vivo, a redução da glicemia foi apenas parcial (em média 60,8±3,2% em relação à linha de base). O sistema composto por nanopartículas incorporadas à matriz lipídica, no teste in vitro, liberou apenas 15,6 ± 4,9% da quantidade inicial. Entretanto, quando administrada pela via oral, no teste in vivo, reduziu, embora parcialmente, a glicemia de ovinos diabéticos alloxano induzidos (em média 79,88±4,3% em relação à linha de base). Concluiu-se, com base no experimento 1 que, na dose empregada, a insulina não foi capaz de produzir benefícios reprodutivos que justifiquem seu uso em protocolos de superovulação de ovelhas. As concentrações subfisiológicas de insulina, observadas nos animais diabéticos podem ser responsáveis por uma série de alterações metabólicas, que, em conjunto, comprometeram os índices de desempenho reprodutivo, relacionados ao processo de superovulação e induziram um quadro inicial de regressão de CL. Com isso, observou-se que o uso de ovelhas, como modelo animal, para estudo dos efeitos reprodutivos da insulina, foi satisfatório. Pela análise do experimento 2, concluiu-se que o sistema de nanopartículas revestidas por lipídios foi capaz de carrear a insulina, ao longo do trato digestivo de um ruminante, no teste in vivo, e compatibilizar sua permeação através da mucosa intestinal, mantendo a atividade biológica do hormônio, o que consiste em um fato inédito. / Nutrition is the main factor that interferes with the reproductive development of all mammals and many of the matobolites and hormones involved in the energetic metabolism work as signaling factors for the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The fact of insulin being the main regulator of glucose homeostasis and having control in various steps of fat and protein metabolism, has made this hormone, along the evolution process, a reproductive modulator. In the first experiment of this study, the effect of hyper and hypoinsulinemia were compared as to how it affects the reproductive performance related to superovulation in sheep. For this, 27 sheep were used, distributed in 3 groups a) control, b) diabetic group (induced by IV injection of 50mg/kg of Alloxan); and c) hyperinsulinemic group (supplemented with 1 UI/kg per day, SC). All animals received a vaginal pessary, containing 60 mg of medroxiprogesterone on D0 and were superovulated, with 250UI of FSH in 6 applications, starting on D10. On D12 250UI of eCG and 125 g of sodium cloprostenol were administered. The sheep were submitted to natural breeding and embryo collection was performed on the seventh day after the beginning of estrus. In average, the insulin levels recorded starting on the day of pessary removal until the day of embryo collection were 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectively for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups. The values for glycemia, measured during the same period, for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups were 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectively. The diabetic group showed less corpus lutea production than the control and hyperinsulinemic groups (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 and 11,3±1, P<0,01); worse CL quality (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 and 1.3±0,1, P<0,01), less number of embryos (2.3±1.2 vs 7.9±1.97 and 7.4±1.2, P<0,01), which by its turn were also of worse quality (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 and 1.7±0.1, P<0,01). Overall, hyperinsulinemic animals presented a reproductive performance similar to the control group; however, although the number of embryos recovered were not statiscally different, the data suggest that the state of hyperinsulinemy can favor embryo growth, acceleratting its development. Histologically, the CLs from the diabetic group showed hypotrophy of LLC and an increase in the number of apoptotic cells per field when compared to the control and hyperinsulinemic treatments. In addiction, the second experiment, chitosan nanoparticles formulations were tested, for sustained release of insulin as well as gastrointestinal mucosal permeability. The nanostructured insulin formulation without lipid protection, administered SC, released 92,1 ± 3,01% of the initial insulin amount, in vitro, however, the desired standard for sustained release was not reached. In the in vivo test, the reduction in glycemia was only partial (on average 60,8±3,2% in relation to base line ). In the in vitro test, the system made up of nanoparticles incorporated to the lipid matrix, released only 15,6 ± 4,9% of the initial amount. However, when administered orally, in the in vivo test, it reduced, although only partially, the glycemia of the alloxan induced diabetic ovines (on average 79,88±4,3% in relation to base line). In conclusion, based on the first experiment, the applied insulin dose was not able to produce any reproductive benefits that may justify its use in sheep superovulation protocols. The sub-physiologic insulin concentrations observed in the diabetic animals may be responsable for various metabolic alterations, that together compromised the reproductive performance levels related to the superovulation process and induced an initial state of CL regression. With that, it was noticed that the use of sheep as an animal model for the study of the effects of insulin on reproduction was satisfatory. By analyzing the second experiment, it was concluded that the nanoparticles system coated with lipids was able to carry insulin along the ruminant digestive during the in vivo test, show permeability through the intestinal mucosa, maintaining the hormone biologic activity, which is a new and unpublished fact.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: O presente estudo teve por objetivo a utilização do hormônio agonista de GnRH, Deslorelina, para controle da população folicular, com intuito de homogeneizar a onda folicular ao início do tratamento de múltiplas ovulações e transferência de embriões (MOET), reduzindo os efeitos deletérios do folículo dominante no tratamento superovulatório com hormônio folículo estimulante, foltropina de pituitária suína. Foram utilizadas 24 ovelhas deslanadas mestiças da raça santa inês, com idades entre 2 e 4 anos, divididas em dois grupos, Controle (Contr), e Deslorelina (Des). Os experimentos foram conduzidos na propriedade rural denominada ‘’Sítio Panorama’’, no município de Porangaba-SP, situado na latitude -23.15050993 e longitude -48.09904348, estando a uma altitude de 583m. As ovelhas foram monitoradas ultrassonograficamente por um período de sete dias quanto ao dinâmica de crescimento folicular e presença de corpo lúteo. Após determinação da ciclicidade ovariana todas as ovelhas receberam dispositivo intravaginal com 60mg de medroxiprogesterona no dia 0, que foi substituído por um novo dispositivo no dia 7 e que foi mantido até o dia 14, as fêmeas receberam única dose de 125 µg de clopostenol no dia 7. O tratamento superovulatório foi realizado com aplicação de Hormônio Folículo Estimulante Suíno- pFSH, na dose total de 200mg (10 mL), divididas em oito aplicações decrescentes com intervalo de 12h iniciando no decimo segundo dia (40 e 40; 30 e 30; 20 e 20; 10 e 10 mg, respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study main objective was to use the GnRH agonist hormone deslorelin to control ovarian follicular population, achieving this way a more homogenous follicular wave at the beginning of multiple ovulations and embryo transfer (MOET) program, reducing deleterious effects from dominant follicles over the superovulatory protocol with porcine Follicle Stimulating Hormone (pFSH). Twenty four Santa Inês breed sheep were used, aging from 2 to 4 years, and divided into two groups: control (Contr), and Deslorelin (DES). The experiment was conducted in a private property, located in Brazil, São Paulo, City of Porangaba, latitude -23.15050993 and longitude -48.09904348. All sheep were monitored ultrassonographicaly for seven days, until the presence of a corpus luteum was detected. All sheep received intravaginal sponges containing 60mg of medroxiprogesteron on day 0, and new sponges on day 7 maintained until day 14, among side a single cloprostenol 125 µg dose. Superovulatory treatment was achieved using porcine Follicular Stimulating Hormone -FSH, with the total dose of 200mg (10ml), spread in eight decreasing administrations with 12 hours’ interval between them, starting on the twelve day. On day 14, 300 UI of equine chorionic gonadotrophin – eCG was administrated. On the treated group, in addition to the treatment described above, 3 doses of 100µg of GnRH agonist Deslorelin were administrated with 72 hours’ intervals, starting at day 4 after sponge insertion (day 3, day 6 a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre