Made available in DSpace on 2016-05-02T13:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 sandy_pereira_ioc_mest_2015.pdf: 4606163 bytes, checksum: dd466130d43a2f24db28ac921bec5343 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os macrófagos são um dos principais fagócitos do sistema imunológico atuando tanto na resposta imune inata quanto na adaptativa. Na infecção por Leishmania são as principais células infectadas nos hospedeiros vertebrados, tendo, portanto, a função de controlar ou favorecer a proliferação do parasito. Diferentes espécies do parasito produzem diferentes manifestações clínicas, mas o perfil genético assim como a resposta imunológica do hospedeiro pode modular o desenvolvimento da doença. Para melhor compreensão da biologia das leishmanioses, utilizam-se modelos de infecção experimental em camundongos como ferramenta para estudo da imunologia, resistência e suscetibilidade ao parasito. Neste trabalho estudamos a infecção por Leishmania amazonensis em macrófagos de três linhagens de camundongos com diferentes graus de suscetibilidade ao parasito. Para isso macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/10 e C3H/He foram infectados com promastigotas de L. amazonensis para avaliação da multiplicação de amastigotas intracelulares, produção de óxido nítrico (NO) e produção de citocinas. Macrófagos de C3H/He infectados por 2 MOI de L. amazonensis apresentaram número de amastigotas e taxa de infecção similares a células de BALB/c e C57BL/10 nas primeiras 48h de infecção. No entanto, a partir de 72 horas a taxa de infecção e número total de amastigotas foi menor quando comparadas com células de origem BALB/c. Quando as células foram estimuladas com LPS e IFN-!, a carga parasitária dos macrófagos das três linhagens foram reduzidas, porém os macrófagos BALB/c permaneceram com carga parasitária maior do que os de origem C3H/He A produção de NO pelas células infectadas só foi diferente sob estimulação, quando os macrófagos de origem BALB/c produziram menos NO do que os C3H/He e C57BL/10. A dosagem de citocinas no sobrenadante das culturas sem estimulo mostrou que os macrófagos de C3H/He apresentaram altos níveis de IFN-!, IL-12 e IL-10, sendo este último exacerbado pela infecção, quando comparados as demais linhagens. A estimulação por LPS e IFN-! aumentou a produção de citocinas dos macrófagos de BALB/c e C57BL/10. Já as células de origem C3H/He quando estimuladas mostraram pouca ou nenhuma produção de IL-1", IL12 e IL-10 e uma estimulação moderada de TNF e IL-6. Finalmente, a inibição da iNOS pela aminoguanidina não foi capaz de diminuir a resistência dos macrófagos de C3H/He. Podemos, portanto, concluir que macrófagos de camundongos C3H/He são menos suscetíveis a infecção por L. amazonensis, mas essa sua resistência não é dependente da produção de óxido nítrico e nem de uma resposta do tipo Th1 / Macrophages are the main phagocytes of the imune system, participating on the inate and adaptative responses. They are the main host cell during Leishmania infection, participating on the control or multiplication of the parasite.Different species of the parasite produce different clinical manifestations, but the genetic background and the imune response of the host may modulate the development of the disease. In order to understand the biology of the leishmaniasis the mouse experimental model is used as a tool for the study of immunology and resistance/susceptibility to the parasite. In this work we have studied Leishmania amazonensis infection in macrophages obtained from three different inbred mouse strains, presenting different degrees of susceptibility to infection. Therefore, peritoneal macrophages of BALB/c, C57BL/10 and C3H/He mice were infected with L. amazonensis promastigotes in order to evaluate the number of intracelular amastigotes and infection rate. C3H/He macrophages infected with 2 MOI of L. amazonensis presented similar number of amastigotes and infection rate as BALB/c and C57BL/10 cells on the first 48 hours after infection. However, after 72 hours infection rate and number of amastigotes per cells were higher in BALB/c cells. When cells were stimulated with LPS and IFN-!, parasite load of all three inbred strains was reduced, but macrophages from BALB/c remained with a higher parasite load than C3H/He. Nitric oxide production by infected macrophages was only different under stimulation, when macrophages from BALB/c produced less NO than C3H/He and C57BL/10. Cytokine dosage of culture supernatants showed that all non-stimulated cultures produced of macrophages from C3H/He produced high levels of IFN-!, IL-12 and IL-10, the later being further exacerbated by infection, when compared with the others stains. Stimulation by LPS and IFN-! enhanced cytokine production by BALB/c and C57BL/10 macrophages. C3H/He cells when stimulated showed low or no production of IL1 ", IL-12 and IL-10 and a moderate enhancement of TNF and IL-6. Finally, iNOS inhibition by aminoguanidine was not able to reduce the resistance of C3H/He macrophages. We can then conclude that macrophages from C3H/He are less susceptible to L. amazonensis infection, but resistance is not dependent on nitric oxide production of a Th1 response. / 2016-12-17

QUEIROZ, Cristina Maria Fernandes. Ácido anacárdico como agente de limpeza cavitária em odontologia adesiva. 2015. 57 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-16T16:23:47Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_cmfqueiroz.pdf: 1386704 bytes, checksum: cbfdeaa6c277895fa12eafde388d3e7a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-16T16:36:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_cmfqueiroz.pdf: 1386704 bytes, checksum: cbfdeaa6c277895fa12eafde388d3e7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-16T16:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_cmfqueiroz.pdf: 1386704 bytes, checksum: cbfdeaa6c277895fa12eafde388d3e7a (MD5) Previous issue date: 2015 / The aim of this in vitro study was to evaluate the performance of anacardic acid as a cavity-cleaning agent in adhesive restorations. Three cleaning agents were used: distilled water (DW), chlorhexidine digluconate solution at 2% (CHX) and anacardic acid (AA). Each cleaning agent was used in two strategies adhesive: after acid etching with phosphoric acid with etch&rinse adhesive or prior to the primer application in self-etch adhesive. Scanning electron microscopy (SEM) analysis was performed to evaluate the morphology of dentin substrate when it was exposed to phosphoric acid or anacardic acid, and when exposed to DW, CHX or AA with the two adhesive strategies. Additionally, spectrophotometry analysis was performed (FTIR) to assess the occurrence of chemical interactions between AA and CHX cleaning agents with dentine. The bond strength to dentin was evaluated by microtensile test, in a total of six experimental groups (2 adhesive strategies x 3 cleaning agents). Flat dentin surfaces were prepared in extracted human teeth. After the use of each cleaning agent and the respective adhesive procedure, teeth were incrementally restored with resin composite up to of 5 mm built-up. The specimens were stored in 37ºC distilled water for 24 h, and were sectioned longitudinally in either direction to obtain the specimens in the form of beams with cross-section area of 1 mm2. Each specimen was tensioned until fracture to with 0.5 mm ̸ min speed in a universal testing machine. The fracture mode was observed using a stereoscope at 60x and 10% of the specimens had their surfaces covered with gold and evaluated under SEM. The bond strength values were statistically evaluated using two-way ANOVA with a 5% significance level. The morphological analysis showed that AA is not able to demineralize dentin and does not alter the substrate surface morphology. The resulting dentin morphological pattern was than that caused by phosphoric acid. FTIR analysis showed that there was a chemical interaction between the AA and dentin as well as it was found an interaction between DG and dentin. Concerning the microtensile bond strength results, there was no statistically significant difference between groups (p> 0.05). The highest percentage of failures was mixed fracture in each group. The anacardic acid did not affect the bond strength after 24 h of storage and analysis showing that it can be used as cavity-cleaning agent. / O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar o desempenho do ácido anacárdico como agente de limpeza cavitária em restaurações adesivas. Foram utilizados três agentes de limpeza: água destilada (AD), solução de digluconato de clorexidina a 2% (CHX) e solução de ácido anacárdico (AA). Cada agente de limpeza foi utilizado em duas estratégias adesivas: após o condicionamento com ácido fosfórico, na técnica adesiva de condicionamento total, e previamente à aplicação do primer na técnica adesiva autocondicionante. Realizou-se uma análise através de microscopia eletrônica de varredura (MEV), no intuito de avaliar a morfologia do substrato quando exposto ao ácido fosfórico ou ao AA, e quando exposto aos agentes de limpeza, nas duas estratégias adesivas propostas. Adicionalmente, foi realizada uma análise através de espectrofotometria (FTIR) para se avaliar a ocorrência de interações químicas entre os agentes de limpeza CHX e AA com a dentina. A resistência de união à dentina foi avaliada pelo teste de microtração, num total de seis grupos experimentais (duas estratégias adesivas x três agentes de limpeza). Superfícies dentinárias planas foram preparadas em dentes humanos extraídos e, após o uso de cada agente e o respectivo procedimento adesivo, os dentes foram restaurados com resina composta, de forma incremental até atingir uma altura de material restaurador de 5 mm. Os espécimes foram armazenados em água destilada a 37ºC por 24 h, e foram seccionados longitudinalmente em sentidos perpendiculares entre si para que se obtivessem espécimes em forma de palitos com área de secção transversal de 1 mm². Cada espécime foi tracionado a uma velocidade média de 0,5 mm ̸ min em uma máquina de ensaios universal. O modo de fratura foi observado sob uso de lupa com 60x de aumento e 10% dos espécimes tiveram suas superfícies recobertas com ouro e avaliadas em MEV. Os valores de resistência de união foram estatisticamente avaliados pelo ANOVA dois critérios, com nível de significância de 5%. Na análise morfológica, foi observado que o AA não é capaz de desmineralizar o substrato dentinário e não altera sua morfologia superficial. Encontrou-se um padrão morfológico resultante na dentina diferente daquele provocado pelo ácido fosfórico. A análise por FTIR mostrou que houve interação química entre o AA e a dentina, assim como foi encontrada interação entre DG e o substrato dentinário. Em relação aos resultados de microtração, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos (p>0.05). O maior percentual de falhas foi de fratura mista em cada grupo. O ácido anacárdico não afetou a resistência de união após 24 h de armazenagem e as análises indicam que ele pode ser usado como agente de limpeza cavitária.

Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / With the intensive glycemic control and longer survival of type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients, cardiovascular disease has been the main cause of mortality. Oxidized LDL is considered a critical factor in the atherosclerotic process and the aim of our study was evaluate the absorbance of different wavelengths of oxidized phospholipids and oxidation rate of LDL particles in vitro in T1DM. We studied 54 patients aged 29.1 12.11 years and with a disease duration of 14.6 8.43 years and 28 non-diabetic volunteers. The two groups had carried where they were measured lipid profile, glucose, uric acid, blood pressure, urinary albumin excretion and spectrophotometry analysis of the oxidation of LDL cholesterol before and 1, 3, 6 and 24 hours after addition of substance oxidant copper sulfate. The coefficients of oxidation (Cox) of LDL from both groups had similar reading at all times with a significant difference between the baseline and after 1 hour (p <0 .001) and between the time after 3 and 6 hours after addition of sulfate copper (p <0 .001) for both groups. In the multiple regression model, the result was the Cox model = 8.246 to 13.93 to 10.21 + -2.71 b c (R2 = 0.835), here "a", "b" and "c" represent the absorbance (205 nm , 232 nm and 280 nm, respectively). We conclude that in our sample the wavelengths 232 nm and 280 nm related to the reading of conjugated diene and protein faction of LDL, respectively, were more important in determining the oxidation rate of the particle. / Com a intensificação do controle glicêmico e maior sobrevida dos pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1), houve mudança progressiva das causas de mortalidade, com maior destaque para a doença cardiovascular (DCV). Em função da LDL oxidada ser considerada ponto fundamental na patogênese da doença aterosclerótica, o presente estudo objetivou avaliar as absorbâncias obtidas nos diferentes comprimentos de onda dos fosfolipídios oxidados e o coeficiente de oxidação da partícula de LDL in vitro em pacientes com diabetes mellitus tipo 1. Foram avaliados 54 pacientes com DM1 com idade de 29,1 12,11 e de duração de doença de 14,6 8,43 e 28 voluntários não diabéticos. Os pacientes e voluntários foram submetidos à avaliação clínica e laboratorial onde foram mensurados perfil lipídico, glicêmico, ácido úrico, níveis pressóricos, excreção urinária de albumina e análise espectofotométrica da oxidação do LDL colesterol antes e 1, 3, 6 e 24 horas após adição de substância oxidante- sulfato de cobre. Os coeficientes de oxidação (Cox) do LDL dos dois grupos apresentaram leitura semelhante em todos os momentos com diferença significativa entre o tempo basal e após 1h (p<0, 001) e entre o momento após 3 e 6 horas após adição de sulfato de cobre ( p< 0,001) para os grupos avaliados. No modelo de regressão múltipla, o resultado obtido foi o modelo Cox = 8,246 13,93a -2,71b + 10,21c (R2=0,835), onde a, b e c representam as absorbâncias (205 nm, 232 nm e 280 nm, respectivamente). Concluímos que em nossa amostra os comprimentos de onda 232 nm e 280 nm referentes à leitura dos dienos conjugados e a fração protéica da LDL, respectivamente apresentaram maior importância na determinação do coeficiente de oxidação da partícula.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / With the intensive glycemic control and longer survival of type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients, cardiovascular disease has been the main cause of mortality. Oxidized LDL is considered a critical factor in the atherosclerotic process and the aim of our study was evaluate the absorbance of different wavelengths of oxidized phospholipids and oxidation rate of LDL particles in vitro in T1DM. We studied 54 patients aged 29.1 12.11 years and with a disease duration of 14.6 8.43 years and 28 non-diabetic volunteers. The two groups had carried where they were measured lipid profile, glucose, uric acid, blood pressure, urinary albumin excretion and spectrophotometry analysis of the oxidation of LDL cholesterol before and 1, 3, 6 and 24 hours after addition of substance oxidant copper sulfate. The coefficients of oxidation (Cox) of LDL from both groups had similar reading at all times with a significant difference between the baseline and after 1 hour (p <0 .001) and between the time after 3 and 6 hours after addition of sulfate copper (p <0 .001) for both groups. In the multiple regression model, the result was the Cox model = 8.246 to 13.93 to 10.21 + -2.71 b c (R2 = 0.835), here "a", "b" and "c" represent the absorbance (205 nm , 232 nm and 280 nm, respectively). We conclude that in our sample the wavelengths 232 nm and 280 nm related to the reading of conjugated diene and protein faction of LDL, respectively, were more important in determining the oxidation rate of the particle. / Com a intensificação do controle glicêmico e maior sobrevida dos pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1), houve mudança progressiva das causas de mortalidade, com maior destaque para a doença cardiovascular (DCV). Em função da LDL oxidada ser considerada ponto fundamental na patogênese da doença aterosclerótica, o presente estudo objetivou avaliar as absorbâncias obtidas nos diferentes comprimentos de onda dos fosfolipídios oxidados e o coeficiente de oxidação da partícula de LDL in vitro em pacientes com diabetes mellitus tipo 1. Foram avaliados 54 pacientes com DM1 com idade de 29,1 12,11 e de duração de doença de 14,6 8,43 e 28 voluntários não diabéticos. Os pacientes e voluntários foram submetidos à avaliação clínica e laboratorial onde foram mensurados perfil lipídico, glicêmico, ácido úrico, níveis pressóricos, excreção urinária de albumina e análise espectofotométrica da oxidação do LDL colesterol antes e 1, 3, 6 e 24 horas após adição de substância oxidante- sulfato de cobre. Os coeficientes de oxidação (Cox) do LDL dos dois grupos apresentaram leitura semelhante em todos os momentos com diferença significativa entre o tempo basal e após 1h (p<0, 001) e entre o momento após 3 e 6 horas após adição de sulfato de cobre ( p< 0,001) para os grupos avaliados. No modelo de regressão múltipla, o resultado obtido foi o modelo Cox = 8,246 13,93a -2,71b + 10,21c (R2=0,835), onde a, b e c representam as absorbâncias (205 nm, 232 nm e 280 nm, respectivamente). Concluímos que em nossa amostra os comprimentos de onda 232 nm e 280 nm referentes à leitura dos dienos conjugados e a fração protéica da LDL, respectivamente apresentaram maior importância na determinação do coeficiente de oxidação da partícula.

Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Agricultores envolvidos no cultivo do tabaco estão constantemente expostos a uma grande variedade de químicos. O uso de agrotóxicos em larga escala tem provocado danos à saúde destes trabalhadores assim como a manipulação das folhas de fumo úmidas, pois além de substâncias antropogênicas persistentes outros compostos orgânicos com potencial pesticida estão presentes nas folhas do tabaco. A nicotina, através do contato dermal com as folhas do fumo, tem causado um envenenamento agudo nos trabalhadores da lavoura. O conjunto de sintomas desta exposição é conhecido como doença da folha verde. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito genotóxico em fumicultores expostos ocupacionalmente a agroquímicos e nicotina. A instabilidade genômica, a morte celular, a dosagem de colinesterase, cotinina e marcadores de estresse oxidativo bem como o conteúdo de elementos traço foram analisados nas células destes trabalhadores. Para verificar a possível modulação de genes de suscetibilidade com os resultados dos biomarcadores, os polimorfismos dos genes GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 e XRCC4 foram avaliados. No primeiro momento, amostras de sangue periférico foram coletadas de 30 indivíduos expostos e de 30 indivíduos não expostos com o intuito de investigar o risco ocupacional em três diferentes períodos da safra de fumo (entresafra, aplicação intensa de pesticidas e na colheita da folha). Neste estudo foi observado aumento significativo de dano ao DNA, avaliado pelo ensaio Cometa, em fumicultores comparados ao grupo não exposto em todos os períodos da safra e, um significante aumento nas frequência de células micronucleadas na entresafra. Correlação entre idade e tempo de exposição em relação aos resultados do ensaio Cometa e do teste de MN não foi encontrado. O dano ao DNA foi maior em homens comparado a mulheres, mas diferença significativa foi observada apenas na entresafra. Não houve diferença na atividade da colinesterase entre os grupos estudados. Elevado nível de cotinina foi observado na colheita da folha de fumo, demonstrando exposição à nicotina. Em um segundo momento, amostras de sangue periférico e de mucosa oral foram coletadas de aproximadamente 111 agricultores em dois períodos da safra (na aplicação intensa de pesticidas e na colheita) e de 56 indivíduos não expostos. Os resultados destes testes demonstraram anomalias nucleares nas células de fumicultores expostas a misturas de substâncias com potencial genotóxico e citotóxico. Diferença nos resultados foi percebida entre os dois momentos da safra de fumo investigados. Modulação no dano ao DNA e na morte celular em células da mucosa oral foi observada nos genes PON1 e CYP2A6. Diferença entre gênero e tempo de exposição não foi encontrada nos diferentes parâmetros analisados. Houve correlação entre idade e os resultados obtidos no teste de MN em linfócitos no grupo não exposto e no momento da aplicação de pesticidas. Em relação ao uso do equipamento de proteção individual, diferença na frequência de MN no momento da aplicação de pesticidas foi observada. Dos nove marcadores de suscetibilidade estudados, somente GSTM1 nulo e CYP2A6*9, demonstraram associação com os resultados obtidos pelo teste de MN em linfócitos. Diferença na atividade da colinesterase e nos níveis de cotinina não foi observada em relação aos diferentes genótipos de PON1 e de CYP2A6, respectivamente. Aumento de cromo, magnésio, alumínio, cloro, zinco e potássio foram percebidos no momento da aplicação de pesticidas em relação ao grupo não exposto e à colheita. Maior atividade da superóxido dismutase no grupo exposto em relação ao grupo não exposto foi observada. Atividade da catalase e a medida de TBARS apresentaram aumento significativo na colheita da folha de fumo em relação ao grupo não exposto e ao momento da aplicação de pesticidas. Finalmente, esta investigação sugere níveis maiores de dano ao DNA avaliados pelo ensaio Cometa e pelo teste de MN em linfócito e em mucosa oral, nos diferentes momentos da safra do fumo (aplicação de pesticides e colheita), chamando a atenção o significativo aumento de dano ao DNA no momento da entresafra. Modulação dos genes de metabolismo foi observada, onde GSTM1 nulo e PON1 Gln/Gln tiveram maiores níveis de dano ao DNA, em linfócitos e em células da mucosa oral respectivamente, no momento da aplicação de pesticidas e CYP2A6*1/*1 e CYP2A6*9/- tiveram maiores níveis de dano ao DNA (em linfócitos) e de morte celular (em células da mucosa oral) na colheita. Não houve influência dos genes envolvidos no reparo em relação aos diferentes biomarcadores no grupo exposto. Os resultados indicam que exposição crônica a pesticidas, tanto químicos sintéticos como natural, pode ativar o sistema de enzimas antioxidantes. Por fim, nosso estudo chama a atenção à necessidade de formação profissional e informação sobre práticas seguras no uso de pesticidas e, além disso, na fumicultura, na manipulação das folhas fumo. / Agricultural workers engaged in tobacco cultivation are constantly exposed to large amounts of pesticides as well as to the nicotine present in raw tobacco leaves. Pesticides have been considered potential chemical mutagens. Studies have assumed that nicotine absorbed through the skin results in the characteristic green tobacco sickness (GTS), an occupational illness reported by tobacco workers. This study sought to determine genotoxic effects in farm workers occupationally exposed to agrochemicals and nicotine. The genomic instability, cell death as well as cholinesterase and cotinine levels in the blood of tobacco farmers were investigated. In order to verify relation of genetic susceptibility with biomarkers results, GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 and XRCC4 genes polymorphisms was evaluated. Determination of oxidative stress markers and trace elements content was accomplished. In the first moment, peripheral blood samples were collected from 30 agricultural workers and 30 non-exposed subjects to investigate occupational exposure in three different crop times (off-season, during pesticides application and leaf harvest). In this study a significant increase in DNA damage, assessed by Comet assay, was observed in tobacco farmers compared to the nonexposed group, for all different crop times, and a significant increase in micronucleated cells was detected in the off-season group. No correlation was found between age and exposure time in relation to biomarker tests. The DNA damage was greater in males than in females, but with a significant difference only in off-season group. No difference, in cholinesterase activity, was seen among the group of farmers and non-exposed group. Increased level of cotinine was observed in leaf harvest group. In the second moment, peripheral blood and buccal cells samples were collected about from 111 agricultural workers, at two different crop times (during pesticides application and leaf harvest), and 56 non-exposed individuals. Results showed nuclear anomalies in the blood and buccal cells in tobacco farmers exposed to mixture of the substances with genotoxic and cytotoxic potential. Difference in blood and buccal micronucleus cytome assay results was found among two different times in the tobacco crop. Effects of PON1 and CYP2A6 genetic polymorphisms on the modulation of DNA damage induced by pesticides and cell death were observed in buccal micronucleus cytome (BMNcyt) assay. No statistically significant difference was found between genders and exposure time for all parameters analyzed. No difference was observed in hematocrit values between the groups. Correlation was observed in age and cytokinesis-blocked micronuclei (CBMN) assay results in nonexposed and pesticide application group. In relation to personal protective equipment (PPE) use, increased MN frequency in pesticide application was observed. From the nine markers of individual susceptibility studied in the CBMN assay, only GSTM1 null and CYP2A6*9, showed significant associations with results in farmers cells. Increase in cotinine level was observed in leaf harvest, when compared to non-exposed group. Cholinesterase (BChe) level was similar in the farmer and non-exposed group. No significant effect on the BChe activity and cotinine level was observed in exposed group with reference to different PON1 and CYP2A6 genotypes, respectively. In pesticide application was found increase in chromiun, magnesium, aluminum, chloride, zinc and potassium, when compared to non-exposed and leaf harvest group. Superoxide dismutase (SOD) activity presented a significant increase in exposed groups (pesticide application and leaf harvest) in relation to non-exposed group, and pesticide application presented higher values than leaf harvest group. The catalase (CAT) activity and TBARS presented a significant increase in leaf harvest than non-exposed group and pesticide application. Finally, this investigation suggests that DNA damage increases, analyzed by Comet, CBMN and BMNcyt assays, at different tobacco crop stages (pesticides application and tobacco leaf harvest), calling attention to the significant increase in the DNA damage during the off-season. Effect of individual genotype of the metabolism genes on the level of different biomarkers evaluated in exposed group demonstrated an influence on increase in damage of GSTM1 null (blood cells) and PON1 Gln/Gln (buccal cells) on pesticides application group, and a influence of CYP2A6*1/*1 (blood cells) and CYP2A6*9/- (buccal cells) on tobacco leaf harvest group. Individual genotype of the DNA repair genes of exposed groups did not show influence on the different biomarkers in this study. In pesticide application was found increase of trace elements content. The results also indicated that chronic exposure to pesticides, synthetic and natural, can influence antioxidant enzymes activity. Our study drives the attention once more to the need for occupational training on safe working practices and safe work environment for farm workers. Developing countries should use such data to establish safety occupational rules during the use of pesticides and mainly during tobacco leaf harvest.

Agricultores envolvidos no cultivo do tabaco estão constantemente expostos a uma grande variedade de químicos. O uso de agrotóxicos em larga escala tem provocado danos à saúde destes trabalhadores assim como a manipulação das folhas de fumo úmidas, pois além de substâncias antropogênicas persistentes outros compostos orgânicos com potencial pesticida estão presentes nas folhas do tabaco. A nicotina, através do contato dermal com as folhas do fumo, tem causado um envenenamento agudo nos trabalhadores da lavoura. O conjunto de sintomas desta exposição é conhecido como doença da folha verde. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito genotóxico em fumicultores expostos ocupacionalmente a agroquímicos e nicotina. A instabilidade genômica, a morte celular, a dosagem de colinesterase, cotinina e marcadores de estresse oxidativo bem como o conteúdo de elementos traço foram analisados nas células destes trabalhadores. Para verificar a possível modulação de genes de suscetibilidade com os resultados dos biomarcadores, os polimorfismos dos genes GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 e XRCC4 foram avaliados. No primeiro momento, amostras de sangue periférico foram coletadas de 30 indivíduos expostos e de 30 indivíduos não expostos com o intuito de investigar o risco ocupacional em três diferentes períodos da safra de fumo (entresafra, aplicação intensa de pesticidas e na colheita da folha). Neste estudo foi observado aumento significativo de dano ao DNA, avaliado pelo ensaio Cometa, em fumicultores comparados ao grupo não exposto em todos os períodos da safra e, um significante aumento nas frequência de células micronucleadas na entresafra. Correlação entre idade e tempo de exposição em relação aos resultados do ensaio Cometa e do teste de MN não foi encontrado. O dano ao DNA foi maior em homens comparado a mulheres, mas diferença significativa foi observada apenas na entresafra. Não houve diferença na atividade da colinesterase entre os grupos estudados. Elevado nível de cotinina foi observado na colheita da folha de fumo, demonstrando exposição à nicotina. Em um segundo momento, amostras de sangue periférico e de mucosa oral foram coletadas de aproximadamente 111 agricultores em dois períodos da safra (na aplicação intensa de pesticidas e na colheita) e de 56 indivíduos não expostos. Os resultados destes testes demonstraram anomalias nucleares nas células de fumicultores expostas a misturas de substâncias com potencial genotóxico e citotóxico. Diferença nos resultados foi percebida entre os dois momentos da safra de fumo investigados. Modulação no dano ao DNA e na morte celular em células da mucosa oral foi observada nos genes PON1 e CYP2A6. Diferença entre gênero e tempo de exposição não foi encontrada nos diferentes parâmetros analisados. Houve correlação entre idade e os resultados obtidos no teste de MN em linfócitos no grupo não exposto e no momento da aplicação de pesticidas. Em relação ao uso do equipamento de proteção individual, diferença na frequência de MN no momento da aplicação de pesticidas foi observada. Dos nove marcadores de suscetibilidade estudados, somente GSTM1 nulo e CYP2A6*9, demonstraram associação com os resultados obtidos pelo teste de MN em linfócitos. Diferença na atividade da colinesterase e nos níveis de cotinina não foi observada em relação aos diferentes genótipos de PON1 e de CYP2A6, respectivamente. Aumento de cromo, magnésio, alumínio, cloro, zinco e potássio foram percebidos no momento da aplicação de pesticidas em relação ao grupo não exposto e à colheita. Maior atividade da superóxido dismutase no grupo exposto em relação ao grupo não exposto foi observada. Atividade da catalase e a medida de TBARS apresentaram aumento significativo na colheita da folha de fumo em relação ao grupo não exposto e ao momento da aplicação de pesticidas. Finalmente, esta investigação sugere níveis maiores de dano ao DNA avaliados pelo ensaio Cometa e pelo teste de MN em linfócito e em mucosa oral, nos diferentes momentos da safra do fumo (aplicação de pesticides e colheita), chamando a atenção o significativo aumento de dano ao DNA no momento da entresafra. Modulação dos genes de metabolismo foi observada, onde GSTM1 nulo e PON1 Gln/Gln tiveram maiores níveis de dano ao DNA, em linfócitos e em células da mucosa oral respectivamente, no momento da aplicação de pesticidas e CYP2A6*1/*1 e CYP2A6*9/- tiveram maiores níveis de dano ao DNA (em linfócitos) e de morte celular (em células da mucosa oral) na colheita. Não houve influência dos genes envolvidos no reparo em relação aos diferentes biomarcadores no grupo exposto. Os resultados indicam que exposição crônica a pesticidas, tanto químicos sintéticos como natural, pode ativar o sistema de enzimas antioxidantes. Por fim, nosso estudo chama a atenção à necessidade de formação profissional e informação sobre práticas seguras no uso de pesticidas e, além disso, na fumicultura, na manipulação das folhas fumo. / Agricultural workers engaged in tobacco cultivation are constantly exposed to large amounts of pesticides as well as to the nicotine present in raw tobacco leaves. Pesticides have been considered potential chemical mutagens. Studies have assumed that nicotine absorbed through the skin results in the characteristic green tobacco sickness (GTS), an occupational illness reported by tobacco workers. This study sought to determine genotoxic effects in farm workers occupationally exposed to agrochemicals and nicotine. The genomic instability, cell death as well as cholinesterase and cotinine levels in the blood of tobacco farmers were investigated. In order to verify relation of genetic susceptibility with biomarkers results, GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 and XRCC4 genes polymorphisms was evaluated. Determination of oxidative stress markers and trace elements content was accomplished. In the first moment, peripheral blood samples were collected from 30 agricultural workers and 30 non-exposed subjects to investigate occupational exposure in three different crop times (off-season, during pesticides application and leaf harvest). In this study a significant increase in DNA damage, assessed by Comet assay, was observed in tobacco farmers compared to the nonexposed group, for all different crop times, and a significant increase in micronucleated cells was detected in the off-season group. No correlation was found between age and exposure time in relation to biomarker tests. The DNA damage was greater in males than in females, but with a significant difference only in off-season group. No difference, in cholinesterase activity, was seen among the group of farmers and non-exposed group. Increased level of cotinine was observed in leaf harvest group. In the second moment, peripheral blood and buccal cells samples were collected about from 111 agricultural workers, at two different crop times (during pesticides application and leaf harvest), and 56 non-exposed individuals. Results showed nuclear anomalies in the blood and buccal cells in tobacco farmers exposed to mixture of the substances with genotoxic and cytotoxic potential. Difference in blood and buccal micronucleus cytome assay results was found among two different times in the tobacco crop. Effects of PON1 and CYP2A6 genetic polymorphisms on the modulation of DNA damage induced by pesticides and cell death were observed in buccal micronucleus cytome (BMNcyt) assay. No statistically significant difference was found between genders and exposure time for all parameters analyzed. No difference was observed in hematocrit values between the groups. Correlation was observed in age and cytokinesis-blocked micronuclei (CBMN) assay results in nonexposed and pesticide application group. In relation to personal protective equipment (PPE) use, increased MN frequency in pesticide application was observed. From the nine markers of individual susceptibility studied in the CBMN assay, only GSTM1 null and CYP2A6*9, showed significant associations with results in farmers cells. Increase in cotinine level was observed in leaf harvest, when compared to non-exposed group. Cholinesterase (BChe) level was similar in the farmer and non-exposed group. No significant effect on the BChe activity and cotinine level was observed in exposed group with reference to different PON1 and CYP2A6 genotypes, respectively. In pesticide application was found increase in chromiun, magnesium, aluminum, chloride, zinc and potassium, when compared to non-exposed and leaf harvest group. Superoxide dismutase (SOD) activity presented a significant increase in exposed groups (pesticide application and leaf harvest) in relation to non-exposed group, and pesticide application presented higher values than leaf harvest group. The catalase (CAT) activity and TBARS presented a significant increase in leaf harvest than non-exposed group and pesticide application. Finally, this investigation suggests that DNA damage increases, analyzed by Comet, CBMN and BMNcyt assays, at different tobacco crop stages (pesticides application and tobacco leaf harvest), calling attention to the significant increase in the DNA damage during the off-season. Effect of individual genotype of the metabolism genes on the level of different biomarkers evaluated in exposed group demonstrated an influence on increase in damage of GSTM1 null (blood cells) and PON1 Gln/Gln (buccal cells) on pesticides application group, and a influence of CYP2A6*1/*1 (blood cells) and CYP2A6*9/- (buccal cells) on tobacco leaf harvest group. Individual genotype of the DNA repair genes of exposed groups did not show influence on the different biomarkers in this study. In pesticide application was found increase of trace elements content. The results also indicated that chronic exposure to pesticides, synthetic and natural, can influence antioxidant enzymes activity. Our study drives the attention once more to the need for occupational training on safe working practices and safe work environment for farm workers. Developing countries should use such data to establish safety occupational rules during the use of pesticides and mainly during tobacco leaf harvest.

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortiz_SilviaCollettaBarretodaCosta_M.pdf: 2223480 bytes, checksum: 1e2219d880f15f009d33fae0450e4a34 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Trabalhos descritos anteriormente evidenciam que vários genes estão envolvidos na regulação da resposta imune à infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi. O objetivo do presente trabalho foi identificar a região cromossomial que conferisse resistência ou susceptibilidade ao parasita, utilizando linhagens isogênicas de camundongos livres de patogênos específicos como modelo. Foram avaliados os níveis de parasitemia e a taxa de mortalidade de animais inoculados com a cepa "Y" do T cruzi. Desta maneira, as linhagens C57BL/6 e CBA foram caracterizadas como resistentes enquanto que, as linhagens A/J e C3H/HeP foram classificadas como susceptíveis à infecção pelo parasita. Acasalamentos recíprocos entre as linhagens A/J (susceptível) e C57BL/6 (resistente) foram realizados para determinação do tipo de herança e para análise da resistência nos animais híbridos (F1) e segregantes (F2). A análise dos DNAs dos animais resistentes e susceptíveis foi feita através do estudo dos marcadores polimórficos utilizando-se da técnica de PCR ("Polymerase Chain Reaction") nos cromossomos 1, 2, 4 , 8, 10, 13, 15, 16, e 19 dos animais segregantes. Os resultados obtidos não permitiram detectar uma concentração do gene da linhagem parental resistente (C57BL/6), ou da linhagem parental susceptível (A/J), significativamente maior do que seria esperado numa distribuição ao acaso. Entretanto, esses dados experimentais abrem novas perspectivas de pesquisa que permitem dar continuidade ao estudo da genética de resistência, investigando agora os cromossomos restantes / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Helena Stangler Kraemer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biral_AnaCristinaWestphalCheraria_M.pdf: 8667247 bytes, checksum: c127a462b302f100f7038554539e5f28 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Introdução- A psoríase é uma doença de pele crônica, inflamatória com genes envolvidos na predisposição à doença, localizados na região altamente polimórfica do complexo principal de histocompatibilidade, no cromossomo 6p21.3. O objetivo desse estudo foi identificar, avaliar a distribuição e determinar as associações genéticas dos genes HLA de classe I e os microssatélites do Fator de Necrose Tumoral (TNF) em pacientes brasileiros com psoríase. Pacientes e Métodos- As tipagens HLA-A, -B, -C foram realizadas em 92 pacientes com psoríase e 160 indivíduos sadios como grupo-controle através do DNA genômico, utilizando-se o método PCR/SSP. Desses 92 pacientes, com psoríase, foram tipados 70 pacientes e 71 indivíduos sadios para os microssatélites do TNF, classificados de acordo com o número de alelos (TNFa, b, c, d, e) e amplificados através do DNA genômico pela reação em cadeia da polimerase, visualizadosem gel desnaturante de poliacrilamida, em condições específicaspara cada loco. Resultados- Dos 92 pacientes, 43,3% foram HLA-Cw*06 positivo (p<0,0001 e OR=5.3). Os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLAB* 57 Cw*06 e HLA-B*39 Cw*12 mostraram-se aumentados nos pacientes com psoríase, com significânciaestatística (P<0,05), quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Os microssatélites TNFa4, TNFb1, TNFe1 e o haplótipo TNFa2 b1 c2 d4 e1 mostraram-se com fTeqüência diminuída e com significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. O alelo HLA-B*13 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, TNFa11 b4 c1 d3 e3, mostraram-se com freqüências aumentadas e significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase tipo TI quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Também foi encontrado na comparação de pacientes psoríase tipo I com o grupo-controle de indivíduos sadios, um haplótipo estendido nessa região cromossômica, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, com signifiQânciaestatística (P<0,05). Conclusões- Esse estudo mostrou uma associação positiva entre os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, Cw*06, Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06, HLAB* 39 Cw*12, TNFa11 b4 c1 d3 e3 e o haplótipo estendido HLA-B*57 Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 e3, dete~~~o susceptibilidade para o desenvolvimento da psoríase. Também foram encontrados os microssatélites TNFa4, TNFbI, TNFel e o haplótipo TNFa2 bl c2 d4 el com associação negativa, sugerindo um fator de proteção na psoriase. Esses resultados apontam para o fato de que a detecção dos polimorfismos do HLA classe I e microssatélites no loco TNF poderiam ser marcadores de susceptibilidade e proteção genética na doença em pacientes brasileiros / Abstract: Introduction - Psoriasis is a genetic chronic inflammatory skin disorder with genes involved in disease predisposition located within the highly polymorphic Major Histocompatibility Complex (MHC) region on the chromosome 6p21.3. The goal of the present study was to identify, evaluate distribution and determine genetic associations of HLA class I genes and Tumor Necrosis Factor (TNF) microsatellites with psoriasis in Brazilian patients. Patients and Methods - HLA-A,-B, -C typingwas carriedout in 92 psoriasispatientsand 160 healthy individuaIs through genomic DNA using the PCR-SSP method. Typing ofTNF microsatellites was carried out in 70 of the 92 psoriasis patients and in 71 healthy controls. TNF microsatellites were classified according to the number of alleles (TNFa, b, c, d, e) amplified through genomic DNA by polymerase chain reaction and visualized in denaturing polyacrylamine gel, in specific conditions for each locus. Results - Of the 92 patients, 43.3% were HLA-Cw*06 positive (p<0.0001 and OR=5.3). HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 alleles and HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06 and HLA-B*39 Cw*12 haplotypes were found to be increased in patients with psoriasis, with a statistical significance (p<0.05) when compared to healthy individuaIs. TNFa4, TNFbl, TNFel microsatellites and the TNFa2 bl c2 d4 el haplotype showed a decreased frequency and a statistical significance (p<0.05) in psoriasis patients when compared to healthy individuals. HLA-B*13 allele and HLA-B*13 Cw*06, TNFall b4 c1 d3 e3 haplotypes showed increased frequencies and a statistical significance (p<0.05) in patients with type II psoriasis when compared to healthy individuaIs. We further found an extended haplotype in that chromosomic region, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, with a statistical significance (p<0.05). Conclusions - This study shows a positive association between the HLA-B*13, HLA-B*57, Cw*06, Cw*12 alleles and the B*13 Cw*06, B*57 Cw*06, B*39 Cw*12, TNFall b4 cl d3 e3 haplotypes and the extended haplotype HLA-B*57 Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 e3, which determines susceptibility to the development ofpsoriasis. We further found TNFa4, TNFbl, TNFel microsatellites and the TNFa2 bl c2 d4 el haplotype with negative association, which suggests a protection factor against psoriasis. Results point to the fact that detection of HLA class I polymorphisms and microsatellites in the TNF locus may be markers of either genetic susceptibility, or protection against the disease in Brazilian patients / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas