La cryptogéine, une protéine sécrétée par l'oomycète Phytophthora cryptogea, provoque la mise en place de mécanismes de défense chez le tabac, mobilisant au cours des étapes précoces de la signalisation associée, des protéines localisées dans la membrane plasmique (MP). Une fraction membranaire résistante à la solubilisation par les détergents (DIM pour Detergent Insoluble Membrane), enrichie en stérols et en sphingolipides avait été purifiée à partir de la MP de tabac : cette fraction contenait plusieurs protéines impliquées dans la cascade de signalisation induite par la cryptogéine. Chez l'animal, l'association dynamique de protéines à des microdomaines riches en stérols et sphingolipides en réponse à un stress biotique joue un rôle essentiel dans la régulation de la signalisation cellulaire. L'objectif de ce travail était de tester l'hypothèse qu'un tel phénomène puisse se produire dans notre modèle d'étude. La comparaison du protéome de fractions DIMs, purifiées à partir de cellules traitées ou non pendant 5 minutes à la cryptogéine a été réalisée à l'aide d'un marquage isotopique (15N ou 14N) et d'une approche de protéomique quantitative. Le premier résultat est que l'abondance de la majorité des protéines n'est pas modifiée dans les DIMs en réponse à la cryptogéine. Une seule protéine est enrichie dans les DIMs, une isoforme de 14-3-3, tandis que quatre dynamines (DRPs pour Dynamin Related Proteins), impliquées dans le trafic vésiculaire, sont exclues des DIMs en réponse à la cryptogéine. L'étude d'une des dynamines identifiées, DRP1A, a été menée. Nous avons caractérisé les différents gènes codant DRP1A dans le génome du tabac, puis utilisé une approche ARN antisens pour altérer l'expression de cette protéine et nous avons étudié sa localisation subcellulaire à l'aide d'anticorps spécifiques et en observant en microscopie confocale cette protéine fusionnée à la GFP. Cette approche a permis de confirmer la présence de DRP1A dans la fraction DIMs et la diminution transitoire de son association à cette fraction en réponse à la cryptogéine, suite à une dissociation de la fraction membranaire. Ces travaux constituent la première mise en évidence d'une association/dissociation dynamique de protéines aux DIMs de plantes en réponse à un stimulus biologique

Antecedentes: En España, hasta 3.200 defunciones anuales son atribuidas al tabaquismo pasivo. La exposición al humo ambiental del tabaco (HAT) aumenta el riesgo de padecer enfermedades crónicas como cáncer de pulmón, enfermedades cardiovasculares y enfermedades respiratorias. Hipótesis: 1) Existe una relación entre la exposición al HAT medida mediante cuestionario y la concentración de cotinina en saliva. 2) La exposición al HAT y la concentración de cotinina en saliva es mayor en los trabajadores del sector de la hostelería que en la población general. 3) El aumento de medidas de control del tabaquismo reduce la prevalencia de exposición al HAT. Objetivos: 1) Caracterizar la exposición al HAT en la población general no fumadora mediante un cuestionario y biomarcador antes de la entrada en vigor de la ley 28/2005 de medidas frente al tabaquismo. 2) Comparar la concentración de cotinina en población general y en trabajadores del sector de la hostelería antes de la entrada en vigor de la ley 28/2005 de medidas frente al tabaquismo. 3) Evaluar la correlación entre las medidas de control del tabaquismo y la prevalencia de exposición al HAT en 27 países de la Unión Europea. Metodología: Para conseguir los objetivos marcados se ha realizado un estudio transversal de la población general de Barcelona, un estudio de una cohorte de trabajadores del sector de la hostelería en 5 Comunidades Autónomas antes de la entrada en vigor de la ley (octubre-diciembre 2005) y seguidos durantes 2 años después de la ley (octubre-diciembre 2007) y un estudio ecológico a partir de los datos del Eurobarometro sobre tabaco. Conclusiones: 1) La prevalencia de exposición al HAT entre los no fumadores en España antes de la entrada en vigor de la ley 28/2005 es elevada y tiene una asociación inversamente con la edad. La concentración de cotinina en saliva se asocia con el número de fumadores en casa y la cantidad de cigarrillos fumados en presencia del no fumador. 2) La prevalencia de exposición al HAT y la concentración de cotinina en saliva en España es mayor entre los trabajadores de la hostelería en comparación con la población general antes de la entrada en vigor de la ley 28/2005. 3) El apoyo a la ley 28/2005, la percepción de su cumplimiento y el acuerdo en prohibir definitivamente el consumo de tabaco en todos los lugares públicos, incluidos bares y restaurantes, ha aumentado entre los trabajadores del sector de la hostelería 2 años después de la entrada en vigor de la ley. 4) A nivel ecológico, los países de la Unión Europea con mayor implementación de políticas sanitarias frente al tabaquismo (medidas mediante la escala propuesta por Joossens y Raw) presentan menor prevalencia de consumo de tabaco y menor prevalencia de exposición al HAT en casa y en el trabajo. Además estos países con mayores políticas frente al tabaquismo tienen un mayor apoyo a las medidas de regulación del consumo de tabaco en todos los lugares públicos. / Background: In Spain, up to 3,200 deaths per year were attributable to secondhand smoke (SHS) exposure. SHS has been associated with a variety of health effects among non-smokers, especially lung cancer and ischemic heart disease, and respiratory diseases. Hypotheses: 1) There is a relationship between exposure to SHS measured by questionnaire and cotinine concentration in saliva. 2) Exposure to SHS and salivary cotinine concentration are higher in hospitality workers than in the general population. 3) The increasing of the tobacco control measures reduces the prevalence of exposure to SHS. Objectives: 1) To describe the exposure to SHS in non-smokers from the general population using a questionnaire and salivary cotinine concentration before the Spanish smoking ban. 2) To compare the salivary cotinine concentration between non-smokers from the general population and non-smokers hospitality workers before the Spanish smoking ban. 3) To assess the correlation between tobacco control policies and the prevalence of exposure to SHS in the 27 countries of the European Union. Conclusions: 1) The prevalence of exposure to SHS in general population was high before the Spanish smoking ban and it decreases with the age. Salivary cotinine concentration in the general population depends of the number of smokers and the number of cigarettes smoked in presence of non-smokers at home. 2) The prevalence of exposure and salivary cotinine concentration were higher among non-smoker hospitality workers than in the general population before the Spanish smoking ban. 3) Positive attitudes (in favour) towards smoking ban increased after the ban among hospitality workers. 4) At ecological level, the Tobacco Control Scale scores were strongly associated with a lower prevalence of smokers and a lower self-reported exposure to SHS. Moreover, countries with more tobacco control policies have higher support towards smoking bans in all workplaces (including restaurants, bars, pubs and clubs, and other indoor workplaces).

PtaRHE1 is a poplar (Populus tremula x P. alba) gene encoding a REALLY INTERESTING NEW GENE (RING) domain-containing protein. RING proteins are largely represented in plants and play important roles in the regulation of many developmental processes as well as in plant-environment interactions. In this thesis, we present a functional characterization of PtaRHE1. To gain further insight into the role of this gene, molecular and genetic alteration approaches were used. The results of in vitro ubiquitination assays indicate that PtaRHE1 protein is a functional E3 ligase and this activity was shown to be specific with the human UbCH5a, among the tested ubiquitin-conjugating enzymes. Histochemical GUS stainings showed that the PtaRHE1 promoter is induced by plant pathogens and by elicitors such as salicylic acid and cellulase and is also developmentally regulated. In silico predictions and the transient expression of PtaRHE1-GFP fusion protein in N. tabacum epidermal cells revealed that PtaRHE1 is localized both in the plasma membrane and in the nucleus. The localization of expression of PtaRHE1 in poplar stem by in situ hybridization indicated that PtaRHE1 transcripts are localized within the cambial zone mainly in ray cells, suggesting a role of this gene in vascular tissue development and/or functioning. The overexpression of PtaRHE1 in tobacco resulted in a pleiotropic phenotype characterized by a curling of leaves, the formation of necrotic lesions on leaf blades, growth retardation as well as a delay in flower transition. Plant genes expression responses to PtaRHE1 overexpression provided evidence for the up-regulation of defence and/or programmed cell death (PCD) related genes. Moreover, genes coding for WRKY transcription factors as well as for MAPK, such as WIPK, were also found to be induced in the transgenic lines as compared to the wild type (WT). Taken together, our results suggest that the E3 ligase PtaRHE1 plays a role in the signal transduction pathways leading to defence responses against biotic and abiotic stresses. Identification of PtaRHE1 target(s) is required in order to fully assess the role of this E3 ligase in the ubiquitination-mediated regulation of defence response./<p>RÉSUMÉ<p><p><p>PtaRHE1 est un gène qui code pour une protéine possédant un domaine RING (REALLY INTERESTING NEW GENE) chez le peuplier (Populus tremula x P. alba). Les protéines de type RING sont très répandues chez les végétaux où elles jouent de rôles importants dans la régulation de plusieurs processus de développement et également dans les interactions plantes-environnement. Dans le cadre de ce travail, nous avons procédé à la caractérisation fonctionnelle du gène PtaRHE1. Dans le but de découvrir la fonction de ce gène, nous avons adopté une stratégie faisant usage d’approches moléculaires ainsi que de l’altération de l’expression génique. Les résultats obtenus montrent que la protéine PtaRHE1 est une E3 ligase et que cette activité enzymatique est spécifique à l’Ubiquitin-Conjugating enzym humaine UbCH5a. Les résultats du test histochimique GUS ont montré que le promoteur du gène PtaRHE1 est induit par des pathogènes et aussi par l’acide salicylique et la cellulase. Par ailleurs, ce promoteur est aussi régulé au cours du développement végétal. Les prédictions in silico et l’expression transitoire d’une fusion traductionnelle GFP-PtaRHE1, au niveau de l’épiderme des feuilles du tabac N. tabacum, ont révélé que la protéine PtaRHE1 se situe tant au niveau de la membrane cytoplasmique qu’au niveau du noyau. La localisation de l’expression du gène PtaRHE1, par les techniques d’hybridation in situ, montre que les transcrits de ce gène se retrouvent principalement au niveau des cellules de rayon, dans la zone cambiale, suggérant que ce gène pourrait jouer un rôle dans le développement ou la formation du tissu vasculaire. La surexpression du gène PtaRHE1 chez le tabac a conduit à l’obtention d’un phénotype pléiotropique caractérisé par un recroquevillement (incurvation) des feuilles, la formation des lésions nécrotiques sur le limbe, un retard de croissance ainsi qu’un retard dans la transition florale. L’analyse de la réponse de l’expression de différents gènes à la surexpression de PtaRHE1 a mis en évidence l’induction des gènes liés à la défense et ou à la mort cellulaire programmée. En outre, l’expression des gènes codant pour des facteurs de transcription WRKY et aussi des MAPKs, tel que WIPK, était aussi plus élevée chez les plantes transgéniques comparées au type sauvage. Les résultats de ce travail suggèrent que PtaRHE1, comme E3 ligase, pourrait jouer un rôle dans la transduction des signaux cellulaires conduisant aux réactions de défense contre les stress biotiques et abiotiques. L’identification de la (des) cible(s) de PtaRHE1 est indispensable pour la compréhension du rôle de cette protéine dans la régulation des réponses de défense par l’intermédiaire de l’ubiquitination.<p> / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Au cours de ces dernières années, des études ont montré l’existence d’une compartimentation latéraledes composants de la membrane plasmique végétale, de manière analogue à ce qui avait été montréchez les animaux et les levures. L’objectif de cette thèse était d’apporter de nouveaux éléments decaractérisation de cette compartimentation (propriétés physiques de domaines particuliers, mécanismesde mise en place de ces domaines, de contrôle de leur taille, etc…) et d’étudier son rôle dans laphysiologie de la cellule végétale.Le développement d’une méthodologie de microscopie confocale spectrale couplée à l’utilisationd’une sonde environnementale a permis d’apporter la première description à l'échellesubmicrométrique de l’organisation du plasmalemme en territoires aux propriétés physiquesdifférentiées. Ces domaines coexistent au sein de la membrane plasmique de cellules en suspension,comme à celle de membranes artificielles composées de lipides modèles ou de lipides de membranescellulaires, de vésicules géantes constituées de membrane plasmique purifiée, ou de protoplastes.Cependant, les différences de l’organisation latérale observées chez ces différentes membranes ontpermis de montrer l’importance des phytostérols qui seraient, par le biais d'interactions spécifiquesavec d’autres lipides végétaux tels que les GIPCs, des composés essentiels pour la formation locale dedomaines lipidiques ordonnés. La grande diversité des lipides végétaux organiserait ainsi lacompartimentation de la membrane plasmique permettant la ségrégation dynamique des composantsmembranaires. Si les stérols augmentent de manière importante le degré de compaction de la bicouche,les protéines le diminuent. Le cytosquelette et la paroi ne semblent, quant à eux, modifier ni laprésence, ni l’organisation des domaines ordonnés de la membrane plasmique. Nous avons égalementmontré que l’organisation de ces domaines évolue transitoirement lors des étapes précoces de lacascade de signalisation induite par des réactions de défense. De fait, nous avons identifié desmodifications des propriétés physiques globales et de l’organisation fine de la membrane provoquéespar différents éliciteurs de réactions de défense, dont la cryptogéine, une protéine sécrétée parl’oomycète Phytophthora cryptogea. Nous avons montré que ces modifications sont un élémentgénérique de la signalisation de défense, sous la dépendance de phénomènes de phosphorylation, leburst oxydatif étant également une étape clé de l’augmentation du degré d’ordre observé dans lesphases précoces de cette signalisation. La cryptogéine, qui présente une aptitude singulière pour piégerles stérols, a également montré une capacité spécifique à augmenter la fluidité membranaire, ceparamètre pouvant contrôler l’intensité de la cascade de signalisation, mesurée par la production deformes actives d’oxygène.Ces résultats ouvrent de nouvelles perspectives dans la compréhension des interactions cellule-élicitineet apportent un nouvel éclairage sur le rôle des lipides végétaux dans l’organisation latérale de lamembrane plasmique végétale et positionne la dynamique membranaire comme un élément designalisation de défense des plantes. / Recent studies have shown the existence of lateral sub-compartmentalization of plant plasmamembrane similar to that of animal cells and yeasts. The aim of this thesis was to provide newelements to characterize this compartmentalization (physical properties of specific domains,mechanisms of their formation, determination of their size, etc...) and to study its role in thephysiology of plant cells.The development spectral confocal microscopy coupled with the use of an environment-sensitiveprobe enabled to obtain the first description at the submicron scale of plasma membrane organizationinto domains exhibiting various physical properties. These domains coexist at the plasma membranesurface of tobacco suspension cells as well as the membrane of vesicles composed of models lipids orcell plasma membrane lipids, purified plasma membrane vesicles, and protoplasts. However,differences in the lateral organization observed in these membranes have shown the importance ofphytosterols which are, through specific interactions with neighboring plant lipids such as GIPCs,essential for local formation of ordered domains. The huge diversity of plant lipids drives thecompartmentalization of the plasma membrane allowing the dynamic segregation of membranecomponents. Sterols greatly increase membrane order, whereas proteins tends to decrease it.Cytoskeleton and cell wall do alter neither presence nor organization of ordered domains of the plasmamembrane. We have also shown that the organization of these domains is transiently modified duringthe early stages of defense signaling cascade. In fact, we have identified changes in overall physicalproperties and fine lateral organization of the membrane caused by various elicitors of defensereactions, including cryptogein, a protein secreted by the oomycete Phytophthora cryptogea. We haveshown that these changes are a generic element of defense signaling cascade and depend onphosphorylation processes; oxidative burst being also a major actor of the control of the increase ofmembrane order observed during the very early stages of the signalling process. Cryptogein, whichexhibits the particular ability to trap sterols, also showed a specific capacity to increase membranefluidity and amplify the intensity of the signalling cascade, as measured by the production of reactiveoxygen species.These results open new perspectives in the understanding of cell-elicitin interactions and provide anew view on the central role of sterol composition in the lateral organization of plant plasmamembrane. They also identify membrane dynamics as a new player in the signalling cascade occurringduring plant defense.

Le virus Y de la pomme de terre (PVY) est l’un des virus les plus dommageables sur tabac. Pour contrôler les épidémies de PVY, différents allèles du gène de résistance récessive va ont été introgressés dans des variétés de tabac. Ce gène récemment cloné code pour une copie du facteur d’initiation de la traduction (eIF4E-1). Toutefois, l’émergence de variants de PVY contournant va, dont des isolats nécrotiques particulièrement sévères, montre que cette résistance n’est pas toujours durable. L’objectif du travail de thèse était i) de comprendre les mécanismes génétiques modulant la durabilité de la résistance va ii) d’identifier des facteurs génétiques différents de va, contrôlant une tolérance aux symptômes de nécrose nervaire induits par certains isolats de PVY. Le phénotypage, le génotypage et l’analyse du transcriptome de 13 variétés résistantes portant va montrent que le type de mutation affectant le locus eIF4E-1 ainsi que la fonctionnalité et le niveau d’expression d’autres copies d’eIF4E impactent la durabilité de va. Nos données permettent de proposer un modèle de leurre où la surexpression de la copie eIF4E-2, sous l’effet de la délétion complète du gène eIF4E-1 et partielle du gène eIF4E-3, limiterait l’apparition de variants contournants, augmentant ainsi la durabilité de la résistance contrôlée par va. En parallèle, un gène R de type NB-LRR nommé NtTPN1 (pour Nicotiana tabacum Tolerance to PVY-induced Necrosis1) a été identifié comme étant directement impliqué dans l’absence de développement de la nécrose nervaire induite par les isolats nécrotiques de PVY. Le phénotype de tolérance au PVY conféré par NtTPN1 ouvre de nouvelles perspectives de contrôle du PVY et en particulier des isolats nécrotiques capables de contourner la résistance liée à va. / Potato virus Y (PVY) is one of the most damaging viruses on tobacco crops. To control PVY, allelic forms of the recessive resistance gene va were introgressed into many tobacco cultivars. This gene was recently identified and encodes a copy of eukaryotic initiation translation factor (eIF4E-1). However, the va-mediated resistance is sometimes overcome by resistance-breaking variants including particularly severe necrotic isolates. The present PhD project had two objectives i) to further our understanding of the mechanism(s) modulating va-mediated resistance durability ii) to identify new, vaindependent genetic factors confering tolerance to veinal necrosis symptoms induced by necrotic PVY isolates. Phenotypic, genetic and transcriptomic analyses of 13 resistant tobacco accessions showed that the type of mutation at the locus eIF4E-1, together with the functionality and expression levels of other eIF4E copies, impact va-mediated resistance durability. The results obtained support a decoy model where the overexpression of the eIF4E-2 gene, as a consequence of the complete deletion of eIF4E-1 and of the partial deletion of eIF4E-3, would limit the ability of PVY to evolve towards resistancebreaking, increasing va-mediated resistance durability. In parallel, a NB-LRR R gene, called NtTPN1 (for Nicotiana tabacum Tolerance to PVY-induced Necrosis1) directly involved in the tolerance to PVY-induced systemic veinal necrosis symptoms in tobacco was identified. The phenotype of tolerance to PVY conferred by NtTPN1 opens novel breeding options to minimize the impact of the emerging and so far uncontrolled va-mediated resistance breaking necrotic PVY isolates.

Chez les mammifères, le glutamate est un neuromédiateur bien connu au niveau du système nerveux central et plus récemment un rôle immunomodulateur lui a été reconnu. Le glutamate est le ligand de récepteurs ionotopiques (iGluRs) qui sont des récepteurs-canaux perméables à divers cations dont le calcium (non-selective cation channels, NSCC). Chez Arabidopsis thaliana, une famille de 20 gènes de iGluRs homologues des iGluRs de mammifères a été identifiée et leur implication dans divers processus biologiques est suggérée. Dans ce travail où nous utilisons des suspensions de cellules de tabac (Nicotiana tabacum var Xanthi), divers arguments suggèrent que ces iGluR sont fonctionnels dans le tabac : influx de calcium et élévation rapide et transitoire de la concentration en calcium cytosolic libre en réponse à l’addition de glutamate, inhibition de ces effets par 4 antagonistes de iGluRs animaux (compétitifs ou non compétitifs), désensibilisation, et pH dépendance des effets. Pour la première fois chez les plantes nous montrons que le glutamate induit la production de NO très vraisemblablement via l’activation de iGluRs. De plus, nous démontrons que ce(s) iGluRs sont impliqués dans le mode d’action, via les flux de calcium, de la cryptogéine une protéine de 10 kDa de Phytophthora cryptogea, éliciteur des réactions de défense chez le tabac. Néanmoins, à ce niveau, les iGluRs ne sont pas impliqués dans la plupart des événements calcium-dépendants induits par la cryptogéine dont l’activation des MAPKs et de canaux anioniques, la production de H2O2 (activation de la NADPH-oxydase) et la réponse hypersensible. En revanche, ils sont tout ou partiellement responsables de la production de NO décrite pour la première fois par le passé en réponse à la cryptogéine. Ces résultats suggèrent que différents types de canaux calciques activés par divers médiateurs, génèrent, via le calcium, des messages spécifiques décodés par des protéines associées à chacun de ces types de canaux et impliquées dans des réponses biologiques différentes. Dans le mode d’action de la cryptogéine, nous démontrons que l’activation des iGluRs est possible grâce à l’exocytose de glutamate dans l’apoplaste, induite par la cryptogéine. Ainsi, ce travail est la première démonstration du rôle de iGluRs potentiels dans la défense chez les plantes et de leur implication dans la production de NO. Nos résultats sont un argument supplémentaire à la conservation des mécanismes de la défense dans le monde vivant et posent le problème du rôle du glutamate dans la signalisation chez les plantes. / Glutamate is recognized as the primary excitatory neurotransmitter in the mammalian central nervous system (CNS) but recent studies have shown that glutamate has an important additional immunomodulator role. Glutamate is the ligand of ionotropic glutamate receptors (iGluRs), which are non-selective cation channels (NSCC), permeable to calcium. In plants, animal iGluR homologs were found that were involved in many developmental processes. Here we demonstrate the involvement of putative iGluRs in calcium signalling in response to cryptogein which is a 10 kDa protein secreted by the oomycete Phytophthora cryptogea and is an elicitor of defence in tobacco. Using transformed tobacco cell suspensions expressing aequorin in the cytosol or in the nucleus, our results have shown that glutamate induces a strong and transient [Ca2+]cyt elevation without [Ca2+]nuc changes. Glutamate-induced [Ca2+]cyt elevation was a result of calcium influx from the extracellular medium and was inhibited by different GluR inhibitors. This data suggest the presence of functional calcium channels of GluRs-type in tobacco. Nevertheless, glutamate does not induce some of the calcium-dependent characteristic events of the defence pathways, which are H2O2 production, MAPK activation and hypersensitive response, but promoted NO production. Further, Ca2+ influx,[Ca2+]cyt elevation and NO production induced by cryptogein were shown to be partially inhibited by the glutamate receptor inhibitors, suggesting that cryptogein treatment could activate a calcium channel of the GluR-type leading to plant defense signalling through NO production. We have also demonstrated that cryptogein induces an efflux of glutamate in the apoplast by the process of exocytosis thus activating the GluRs in tobacco. This is the first demonstration for a potential GluR(s) involvement in plant defense signalling, furthermore by mechanisms that showed homology with glutamate effect on neuronal cells.

L’objectif de ce travail de thèse est de tester l'efficacité du paradigme de la communication engageante appliqué à la prévention des conduites dopantes. Les conduites dopantes sont la consommation de substances (principalement des drogues licites ou illicites) afin d’améliorer les performances physiques et psychologiques. Dans le sport, certaines de ces substances sont interdites et les conduites dopantes sont simplement appelées "dopage". Les conduites dopantes, et bien plus encore dans le sport, sont souvent considérées comme problématiques car elles peuvent générer des risques pour la santé et également de la tricherie. Trois recherches-actions sont réalisées. La première, auprès de 52 sportifs de haut niveau volontaires, montre que l'engagement semble produire un effet allant dans le sens d’une meilleure prévention du dopage. La deuxième étude teste un dispositif de communication engageante avec 111 athlètes d’élite volontaires : les résultats montrent une diminution de la consommation des compléments alimentaires, excitants et substances contre la douleur, en condition libre choix et actes publics. La troisième recherche se déroulait dans le contexte réel d’une prévention. Les résultats des 760 élèves montrent une diminution de la consommation de tabac et de cannabis après l'action de communication engageante, et une augmentation de l'affirmation de soi. Une réflexion sur l’application et la faisabilité du paradigme de la communication engageante appliquée au domaine de la prévention est proposée en fin de thèse. / The aim of this work is to test the effectiveness of the binding communication paradigm applied to doping behavior prevention. A doping behavior is the use of a substance (mainly a licit or an illicit drug) with the aim to enhance physical or psychological performance. In sports, some of these substances are prohibited, and doping behaviors are simply named "doping". Doping behaviors, and much more doping in sport, are often regarded as problematic, because they may generate health hazards, and cheating as well. Three studies are conducted. The first one, among 52 top-level volunteers athletes, shows that commitment seems to produce an effect which is in line with a better doping prevention. The second study tests a "committing communication" device with 111 elite volunteers athletes: results show a decrease in consumption of dietary supplements, stimulating products and substances against pain, with conditions of free choice and public acts. The third search occurs in the real context of a prevention. The 760 pupils' results show a decrease of tobacco and cannabis consumption after "committing communication" action, and increasing self-affirmation. A reflexion on the application and feasibility of the binding communication paradigm applied to the field of prevention is proposed at the end of the thesis.

En France, la question du tabagisme des jeunes demeure un défi majeur pour la santé publique. Si l'influence des pairs peut encourager l'usage du tabac, on constate que l'éducation par les pairs a aussi un potentiel bénéfique pour changer le comportement tabagique des adolescents. En outre, il a été démontré que la Théorie du comportement planifié (TCP) donnait la meilleure prédiction des intentions et du comportement dans plusieurs domaines de la santé. Cependant, la TCP est peu utilisée pour développer des interventions contre le tabac. Dans le programme de P2P, des lycéens professionnels volontaires ont conçu et réalisé leur propre intervention basée sur la TCP (avec l'aide d'éducateurs formés), visant à réduire le tabagisme de leurs camarades. Notre objectif était de mesurer l'impact de la première année de P2P sur une population particulièrement exposée de lycéens professionnels. L'hypothèse principale est que P2P évite l’augmentation de la prévalence du tabagisme quotidien au cours de l'année dans le groupe d'intervention comparativement au groupe de contrôle. / In France, the issue of youth smoking remains a major challenge for public health. If peer pressure may encourage smoking, the peer education also has a positive potential to change smoking behavior of adolescents. In addition, it was demonstrated that the theory of planned behavior (TPB) gave the best prediction of intentions and behaviors in many domains of health. However, the TPB is usually not used to develop interventions against tobacco. In the P2P program, voluntary professional school students have designed and built their own TPB-based intervention (with the help of trained educators), aimed at reducing smoking peers. Our goal was to measure the impact of one year of P2P on a population particularly vulnerable professional students. The main hypothesis is that P2P avoids the increasing of daily smoking during the year in the intervention group compared to the control group

La cryptogéine, une protéine sécrétée par l’oomycète Phytophthora cryptogea, provoque la mise en place de mécanismes de défense chez le tabac, mobilisant au cours des étapes précoces de la signalisation associée, des protéines localisées dans la membrane plasmique (MP). Une fraction membranaire résistante à la solubilisation par les détergents (DIM pour Detergent Insoluble Membrane), enrichie en stérols et en sphingolipides avait été purifiée à partir de la MP de tabac : cette fraction contenait plusieurs protéines impliquées dans la cascade de signalisation induite par la cryptogéine. Chez l’animal, l’association dynamique de protéines à des microdomaines riches en stérols et sphingolipides en réponse à un stress biotique joue un rôle essentiel dans la régulation de la signalisation cellulaire. L’objectif de ce travail était de tester l’hypothèse qu’un tel phénomène puisse se produire dans notre modèle d’étude. La comparaison du protéome de fractions DIMs, purifiées à partir de cellules traitées ou non pendant 5 minutes à la cryptogéine a été réalisée à l’aide d’un marquage isotopique (15N ou 14N) et d’une approche de protéomique quantitative. Le premier résultat est que l’abondance de la majorité des protéines n’est pas modifiée dans les DIMs en réponse à la cryptogéine. Une seule protéine est enrichie dans les DIMs, une isoforme de 14-3-3, tandis que quatre dynamines (DRPs pour Dynamin Related Proteins), impliquées dans le trafic vésiculaire, sont exclues des DIMs en réponse à la cryptogéine. L’étude d’une des dynamines identifiées, DRP1A, a été menée. Nous avons caractérisé les différents gènes codant DRP1A dans le génome du tabac, puis utilisé une approche ARN antisens pour altérer l’expression de cette protéine et nous avons étudié sa localisation subcellulaire à l’aide d’anticorps spécifiques et en observant en microscopie confocale cette protéine fusionnée à la GFP. Cette approche a permis de confirmer la présence de DRP1A dans la fraction DIMs et la diminution transitoire de son association à cette fraction en réponse à la cryptogéine, suite à une dissociation de la fraction membranaire. Ces travaux constituent la première mise en évidence d’une association/dissociation dynamique de protéines aux DIMs de plantes en réponse à un stimulus biologique / Cryptogein, a protein secreted by the oomycete Phytophthora cryptogea, induces defense mechanisms in tobacco. Several proteins involved in the associated signaling pathway were identified and localized on the plasma membrane (PM). A fraction resistant to solubilization by detergent named DIMs for Detergent Insoluble Membranes, enriched in sterols an sphigolipids had been isolated from tobacco PM. It was proved to contain proteins previously identified as actors of the signaling cascade triggered by cryptogein. In animal cells, the dynamic association of proteins to sterol and sphingolipid rich microdomains under the influence of a biological stimulus plays an essential role in the regulation of cellular signaling. The purpose of this work was to test the hypothesis that such a phenomenon might occur in our model. The comparison using isotopic labeling (15N or 14N) and quantitative proteomics, of the composition of DIMs extracted from tobacco cells treated or not by cryptogein, revealed that, although the association to DIMs of most proteins remained unchanged, five proteins had their relative abundance modified after 5 minutes of treatment. One of these was a signaling protein (a 14-3-3 protein) and the four others were related to cell trafficking (4 DRPs, Dynamin Related Proteins). We characterized the DRP1A gene family in tobacco, and set up an antisens RNA antisense to down-regulate the expression of this protein. We studied the intracellular localization of DRP1 using specific antibodies and a GFP fusion. The results confirmed the presence of DRP1 in DIMs and its depletion from this fraction upon cryptogein treatment, through a dissociation from the PM. This is the first evidence of a dynamic association/dissociation of proteins to microdomains in plants upon a biological stimulus

Nous avons défini le complexe tabagique selon quatre champs applicables : les pipes à fumer, le tabac, le rôle du tabac dans les rapports Autochtones-Européens et dans les échanges. Le but de ce mémoire est de mieux saisir ce que les pipes à fumer de la période historique nous dévoilent dans le contexte de l’archipel montréalais. Le dépouillement des rapports de fouille a permis de retirer d’innombrables fragments de pipes à fumer que nous retrouvons dans les contextes archéologiques de l’archipel montréalais pour la période 1642−1760. Les récits d’époque nous informent sur les habitudes reliées à la consommation du tabac ainsi que les rôles du tabac et des pipes à fumer dans les relations entre Autochtones et Européens et des processus d’échange. Des recherches sur le tabac sont venues ajouter des éléments cruciaux à ces deux sources d’information. Cette étude a été limitée à l’archipel montréalais, plus une aire de 10 km autour de celui-ci. La période étudiée est de 1642 à 1760. Nous avons constaté que les fragments des pipes à fumer se retrouvent majoritairement dans les zones de contact démontrant ainsi l’importance de ces objets dans les échanges. Ces zones de contact sont les endroits où le métissage prend place. Le tabac, que nous ne pouvons dissocier des pipes à fumer, joue aussi un rôle majeur dans les relations amérindiennes-européennes. Des dons de Nicotiana tabacum ont permis de solidifier des liens de confiance primordiaux entre les deux groupes dans les processus d’échange. Le tabac et les pipes à fumer, ont aussi subit le processus de transfert culturel, mais, le degré varie selon le type de pipes à fumer. / We defined the smoking complex according to four applicable fields: smoking pipes, tobacco, Indigenous -European relations and the role of tobacco in trade. The purpose of this research is to better understand what smoking pipes reveal to us in the context of the Montreal archipelago. The review of the excavation reports allowed us to retrieve information regarding the innumerable fragments of smoking pipes that we find in the archaeological contexts of the Montreal archipelago for the period 1642−1760. The ethnohistorical publications inform us about the habits and customs related to the use of tobacco as well as the roles that tobacco and smoking pipes played in Indigenous-European relations and exchanges. Tobacco studies have also added crucial elements to these two sources of information. This study was limited to the Montreal archipelago, plus an area of 10 km around it. The study period is from 1642 to 1760. We found that the fragments of smoking pipes are mostly found in contact zones demonstrating the cultural importance of these objects. Nicotiana tabacum strengthened bonds of trust between the two groups. These contact zones are the places where métissage takes place. Inseparable from smoking pipes, tobacco also played a major role in Amerindian-European relations. Gifts of Nicotiana tabacum favoured consolidation between the two groups and built the primordial trust necessary in exchange processes. Tobacco and smoking pipes are also part of the process of cultural transfer, but to a variable degree according to the type of smoking pipes.