Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Heverton.pdf: 3726246 bytes, checksum: d1604716538cf27f6497805271c49501 (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Terpenes are a very promising class of skin penetration enhancers especially due to their low potential of irritation in the skin. In this work, we have used the electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy of the small spin label di-tert-butyl nitroxide (DTBN), which partitions the aqueous and hydrocarbon phases, to study the interaction of the terpenes ®-terpineol, 1,8-cineole, L(-)-carvone and (+)-limonene with the uppermost skin layer, the stratum corneum, and the membrane models of 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero- 3-phosphatidylcholine (DPPC) and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC). The EPR spectra indicated that the terpenes increase both the partition coe±cient and the rotational di®usion rate of the spin labels in the stratum corneum membranes whereas for DMPC and DPPC bilayers were observed similar e®ects only at temperatures below the liquid-crystalline phase. The EPR parameter associated to probe polarity inside the membranes showed thermotropic induced changes, suggesting relocations of spin probe, which were dependent of the membrane phases. While DMPC and DPPC bilayers showed abrupt changes in the partitioning and rotational correlation time parameters at the phase transitions, the SC membranes were characterized by slights changes in whole interval of measured temperatures, presenting the greatest changes or membranes reorganizations in the temperature range of v50 to v74±C. The results suggest that the terpenes act as spacers that weaken the hydrogen-bonded network at the polar interface thus °uidizing the stratum corneum lipids and, in consequence, increase the permeation of small polar molecules across the membranes. 2 / Os terpenos são uma classe muito promissora de facilitadores de permeação da pele devido aos seus baixos potenciais de irritação na pele. Neste trabalho utilizamos a espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica (RPE) do pequeno marcador de spin di-terc-butil nitróxido (DTBN) que particiona na fase aquosa e hidrocarbônica, para estudar a interação dos terpenos ®-terpineol, 1,8-cineol, L(-)-carvona e (+)-limoneno com a camada superior da pele, o estrato córneo, e membranas modelos de 1,2-dimiristoil-sn- glicero-3-fosfocolina (DMPC) e 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC). Os espectros de RPE indicaram que os terpenos aumentam o coeficiente de partição e a taxa de difusão rotacional do marcador de spin nas membranas de estrato córneo, enquanto que para as bicamadas de DMPC e DPPC o efeito foi semelhante somente nas temperaturas abaixo da fase líquido-cristalina. O parâmetro de EPR associado µa polaridade do marcador de spin no interior das membranas mostrou mudanças induzidas termotropicamente, sugerindo que a posição média da molécula marcada muda com a temperatura e fases das membranas. Enquanto as bicamadas de DMPC e DPPC mostraram abruptas mudanças nos parâmetros da partição e do tempo de correlação rotacional com as transições de fase, as membranas de EC forão caracterizadas por suaves mudanças em todo o intervalo de temperatura medido, apresentando as maiores mudanças ou reorganizações das membranas na faixa de temperatura de ~50 a ~74°C. Os resultados sugerem que a terpenos atuando como espaçadores dos lipídios que compõem as membranas, enfraquecem as redes de ligações de hidrogênio na interface polar, e isto leva a um aumento da °uidez dos lipídios do estrato córneo e, em consequência, a uma maior permeação de moléculas polares através das membranas.

A literatura relata variações espaciais e rítmicas para diferentes classes de metabólitos secundários, entretanto os dados são consistentes apenas para espécies que ocorrem em áreas temperadas. Lychnophora ericoides Mart. tem sido muito empregada popularmente como antiinflamatório e analgésico. É relatado o uso de suas partes aéreas pela população que vive nas proximidades de seu habitat em tratamentos de lesões cutâneas. L. eriocides representa uma das várias espécies da família Asteraceae endêmicas ao cerrado que biossintetizam uma ampla gama de terpenoides. Embora pouco estudada, sabe-se que a fração volátil de suas partes aéreas apresenta constituição terpênica. O presente estudo tem como objetivo determinar a constituição química desta fração volátil por meio de técnicas brandas de pré-concentração dos analitos e avaliar a variabilidade química desta fração a nível intraespecífico e temporal. Dessa forma, as coletas foram realizadas durante um período de 15 meses e utilizou-se HSSPME e CG-EM para avaliar as amostras coletadas. Um método para pré-concentração dos compostos voláteis (COVs) foi desenvolvido a partir da otimização dos parâmetros para obtenção do equilíbrio termodinâmico em HS-SPME. A obtenção de cromatogramas, determinação de índices de retenção relativos e aquisição de espectros de massas com ionização por elétrons possibilitaram a identificação de 7 monoterpenos majoritários e 1 sesquiterpeno também majoritário. Foi detectada a presença de um sesquiterpeno em amostras analisadas por HS-SPME que não se faz presente, de forma majoritária, nos óleos essenciais. Foram também realizados processos de hidrodestilação para obtenção dos óleos essenciais. A partir dos óleos essenciais foi possível isolar 3 sesquiterpenos por meio de CCDP e, para duas dentre estas substâncias, foram adquiridos dados de IES-EM, IES-EM/EM e RMN uni e bidimensionais. Um sesquiterpeno inédito na literatura, o acetato de bisabolila, teve sua estrutura elucidada por meio dos espectros adquiridos a partir de material isolado. Este sesquiterpeno, que está presente em preparados hidroalcoólicos utilizados na medicina popular, foi submetido a ensaios para avaliação do potencial anti-nociceptivo in vitro utilizando-se macrófagos peritoneais de ratos Wistar. Os resultados sugerem um efeito analgésico, devido à redução dos mediadores IL-1X e TNF-Y, os quais estão envolvidos no processo da dor inflamatória. É possível observar uma uniformidade intraespecífica nos níveis de COVs e uma tendência de comportamento a nível intraplanta e a nível circadiano de apresentar percentuais mais elevados de sesquiterpenos em épocas chuvosas e quentes (verão) e, analogamente, menos elevados em períodos de menor temperatura ambiente (durante a noite). Nas folhas mais jovens há uma têndencia destes valores relativos serem mais elevados / Literature does report spatial and time-scale shifting on several secondary metabolites, despite such data are relevant just for those species which occurs within a temperate clime region. Lychnophora ericoides Mart. has been widely used as a folk medicine against pain and inflammation process. Off the region where is located L. ericoidess habitat there is an evident and extensive use of its aerial parts by the people which live there in order to treat several types of skin wound. In Brazilian Cerrado, tropical savanna, there a large numbers of endemic Asteraceae species, including L. ericoides, which are capable of biosynthesizing a wide variety of terpenoids. Considering the poor number of studies carried out concerning the L. ericoides volatile fraction it can be said that this fraction is quite formed by different classes of terpenes. This work aims to find the chemical composition of L. ericoides volatile fraction by using soft pre concentration techniques of compounds and investigate the chemical variability at time-scale and intraspecific levels. Thus, harvests were done throughout a 15 months period and HS-SPME & GC-MS were used to analyze the samples. A pre concentration method was developed by reaching optimum values for parameters involving the ideal thermodynamic equilibrium in HSSPME. The chromatograms acquisition, relative retention index calculations and electron ionization mass spectra acquisition, combined, made possible the identification of 7 monoterpenoids and 1 sesquiterpenoid. A particular sesquiterpene could have been identified only by using HS-SPME pre concentration and not by essential oils analysis. Using prep-TLC of the essential oils, 3 sesquiterpenes were isolated. The ESI-MS, ESI-MS/MS as well as 1D and 2D NMR spectra of two of these three isolated terpenes were acquired. One new sesquiterpene, bisabolyl acetate, had his structure elucidated at the end of this process. This sesquiterpene is displayed in hydro alcoholic extracts used in folk medicine. Bioassays for in vitro antinociceptive investigations using peritoneal macrophages isolated of Wistar rats were done using the bisabolyl acetate. Results on this investigation may suggest that a pain relief effect could be described for this compound, every since it was possible to notice a reducing on IL-1X and TNF-Y levels. These two cytokines are involved in inflammatory pain. A regular pattern on volatile levels within the samples couldve been noticed, and it is what could be called an intraspecific uniformity. A trend on both intraplant and circadian investigations couldve been observed and what tends to happen is a rising on sesquiterpenes level by the period of year which the rainy and warm summer is governing the weather. In an opposite way these levels tend to diminish by the period in which the lower temperatures are registered (throughout the night time). Among the younger leaves there is also a trend on higher sesquiterpenes levels to occur.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-03-12T18:21:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Luiza Stolz Cruz.pdf: 10331435 bytes, checksum: 9b1d4ec95714f86c9315354c7d388689 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-12T18:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Luiza Stolz Cruz.pdf: 10331435 bytes, checksum: 9b1d4ec95714f86c9315354c7d388689 (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns tem seu látex utilizado, etnofarmacologicamente, para tratamento de câncer, incluindo leucemias. Uma doença maligna que atinge os leucócitos, com alta incidência, sendo o tipo de câncer mais comum na infância. O tratamento quimioterápico é, na maioria dos casos, o mais recomendado, mas apresenta-se como terapia muito agressiva e com diversos efeitos colaterais. Por conseguinte, o objetivo deste trabalho foi o de avaliar o potencial citotóxico da fração hexano do látex de Euphorbia umbellata suas subfrações e da substância isolada, eufol, frente a linhagens modelo de leucemia. Para tanto as células, Jurkat e HL-60, foram tratadas por 72 horas com a fração hexano (1,25-75 μg/mL), subfrações éter de petróleo, diclorometano, etanol e metanol (1,25-75 μg/mL) e com o eufol (10-50 μg/mL), sendo sua viabilidade celular avaliada pelo ensaio de redução do MTT ao final deste período. Para a subfração diclorometano (mais ativa) foi avaliada a viabilidade celular no período de 24 e 48 horas, além de ter sido determinado o índice de seletividade. Cabe ressaltar que a fração hexano e as subfrações foram obtidas por fracionamento em extrator de Soxhlet, enquanto o eufol, por precipitação ácida, seguida de cromatografia em coluna, e sendo identificado por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas. A fração hexano e as subfrações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas. A avaliação cromatográfica das subfrações permitiu sugerir 10 substâncias, os triterpenos: eufol; lanosterol; cicloartenol; tirucalol; taraxasterol e lupeol, os diterpenos: forbol-12,13,20- triacetato; 4-β forbol e 3-desoxo-3- 16-dihidroxi-12-desoxiforbol-3-13-16-20- tetracetato, e o esteroide sitosterol. Como resultado do ensaio citotóxico obteve-se, para a fração hexano uma CI50 de 0,061 ± 1,226 μg/mL para as células HL-60 e 4,624 ± 1,088 μg/mL para células Jurkat; para o eufol uma CI50 de 21,031 ± 1,778 μg/mL (HL-60) e 35,925 ± 5,011 μg/mL (Jurkat). Dentre as subfrações a diclorometano apresentou o melhor perfil de resposta com valores de 0,005±0,098 μg/mL (HL-60) e 0,200±0,957 μg/mL (Jurkat), revelando que o tratamento é tempo dependente. Ademais a subfração diclorometano mostrouse seletiva para o tratamento de leucemia com índices de seletividade superior a 2. Portanto, conclui-se que a subfração diclorometano é a promissora para o tratamento de leucemia, possivelmente por ação sinérgica dos terpenos nela presente. / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns has its latex used, ethno-pharmacologically, for the treatment of cancer, including leukemias. A malignant disease that affects leukocytes, with high incidence, being the most common type of cancer in childhood. Chemotherapy treatment is, normally, the most recommended, but it presents as very aggressive therapy and with several side effects. Therefore, the objective of this work was to evaluate the cytotoxic potential of the hexane fraction of Euphorbia umbellata latex, the subfraction of that and the isolated substance, euphol, against leukemia model lines. For this, the cells, Jurkat and HL-60, were treated for 72 hours with the hexane fraction (1.25-75 μg/mL), subfractions petroleum ether, dichloromethane, ethanol and methanol (1.25-75 μg/mL), and euphol (10-50 μg/mL), and their cell viability was evaluated by the assay of MTT reduction at the end of this period. For the dichloromethane subfraction (the most active), the cell viability was evaluated in the period of 24 and 48 hours, in addition, the selectivity index was determined. It should be noted that the hexane fraction and subfractions were obtained by fractionation in Soxhlet extractor, while euphol by acid precipitation, followed by column chromatography, and being identified by nuclear magnetic resonance and mass spectrometry. The hexane fraction was partitioned and the resulting subfractions were analyzed by gas chromatography coupled to the mass spectrometer. The chromatographic evaluation of the subfractions allowed to suggest 10 substances, the triterpenes: euphol; lanosterol; cycloartenol; tirucallol; taraxasterol and lupeol, the diterpenes: phorbol-12,13,20-triacetate; 4- β-phorbol and 3-deoxo-3-16-dihydroxy-12-deoxyphorbol-3-13-16-20-tetracetate, and the steroid sitosterol. As a result of the cytotoxic assay, an IC50 of 0.061 ± 1.226 μg/mL was obtained for HL-60 cells and 4.624 ± 1.088 μg/mL for Jurkat cells; and for euphol an IC50 of 21.031 ± 1.778 μg/ml (HL-60) and 35.925 ± 5.011 μg/ml (Jurkat). Among the subfractions, the dichloromethane presented the best response profile with values of 0,005±0,098 μg/mL (HL-60) and 0,200±0,957 μg/mL (Jurkat), revealing that the treatment is time dependent. In addition, the dichloromethane subfraction was selective for the treatment of leukemia with indexes of selectivity superior to 2.Therefore, it is concluded that the subfraction dichloromethane is promising for the treatment of leukemia, possibly by synergistic action of the terpenes in it.

A reatividade das lupulonas, terpenos, flavonoides prenilados e compostos contendo grupos tióis livre foi avaliada frente ao radical 1-hidroxietila (HER) para melhor conhecer o balanço redox da cerveja. As constantes de velocidade aparentes (kap) para a reação entre HER e os substratos supracitados foram obtidas via cinética de competição utilizando a armadilha química 4-POBN como competidor e monitorando-se o aduto radical formado por RPE. A partir dos valores obtidos de kap (108 L mol-1 s-1 para as lupulonas, 105 a 107 L mol-1 s-1 para terpenos, 109 L mol-1 s-1 para os flavonoides prenilados, e 108 a 109 L mol-1 s-1 para tióis) e pelas concentrações médias destes compostos na cerveja, pôde-se inferir que a extensão da degradação térmica destes compostos na bebida aumenta na ordem: lupulonas > tióis > flavonoides prenilados > terpenos. Os produtos de reação foram identificados por espectrometria de massas, e através de investigações eletroquímicas e cálculos ab initio empregando-se DFT se propôs um mecanismo de reação. Os produtos de degradação pela reação com HER foram: derivados hidroxilados e compostos de adição do radical HER para as lupulonas; derivados hidroxilados para os terpenos; derivados de adição do radical HER para os flavonoides prenilados; e dissulfetos para os tióis. Em experimento similar foram determinadas as kap para a reação entre metil ésteres derivados de ácidos graxos insaturados e esteróis com o HER, cujos valores de kap variaram de (2,7 ± 0,1) x 107 até (5,2 ± 0,1) x 107 L mol-1 s-1 para o metil docosahexanoato e ergosterol, respectivamente. Os dados cinéticos aqui obtidos contribuem para um melhor conhecimento da degradação térmica oxidativa da cerveja, bem como sugerem que os polifenóis prenilados podem conferir um significativo efeito antioxidante ao organismo humano quando do seu consumo e absorção. / The reactivity of lupulones, terpenes, prenilated flavonoids and thiol-containing compounds was evaluated towards the 1-hydroxyethyl radical (HER) to provide a better knowledge of the redox balance of beer. The apparent rate constants (kap) for the reaction between HER and the substrates were obtained through a competitive kinetic approach using the spin-trap 4-POBN as a competitor and by monitoring the radical adduct by EPR. From the obtained values of kap (108 L mol-1 s-1 for lupulones, from 105 to 107 L mol-1 s-1 for terpenes, 109 L mol-1 s-1 for prenylated flavonoids, and from 108 to 109 L mol-1 s-1 thiol compounds) and the average concentrations of these compounds in beer, it is possible to infer that the extension of the thermal degradation on the beverage is enhanced according to: lupulones > thiol compounds > prenylated flavonoids > terpenes. The reaction products were identified by mass spectrometry, and by electrochemical investigations and ab initio (DFT) calculation, a reaction mechanism has been proposed. The degradation products for the reaction with HER were: hydroxide derivatives and HER addition products for the lupulones; hydroxide derivatives for terpenes; HER addition derivatives for prenylated flavonoids; and disulfides for thiol cmpounds. In similar experiments it was determined the kap for the reaction among methyl ester derivatives of unsaturated fatty acids and sterols with HER, with kap values ranging from (2.7 ± 0.1) x 107 to (5.2 ± 0.1) x 107 L mol-1 s-1 for the methyl docosahexanoate and ergosterol, respectively. The obtained kinetic data may contribute for a better knowledge of the thermal oxidative degradation of beer, as well as may suggest that prenylated polyphenols could present a significant antioxidant effect in the human body through its consumption and absorption.

A presente dissertação descreve um estudo químico das cascas do tronco de Guarea guidonia (L.) Sleumer (Meliaceae). Do extrato hexânico de cascas coletadas de um espécimen localizado em Campo Grande (MS) foram isolados e identificados cinco sesquiterpenos: o trans 1(10)-epóxi-4(15)-cariofileno; o 1(10)-epóxi-4,7-humuladieno; o 10-aloaromadendranol (viridiflorol); o 1(10),4-diepóxi-7-humuleno e o 3-oxa-10-aloaromadendranol e quatro esteróides: o sitosterol, o estigmasterol, o palmitato do sitosterol e o oleato do sitosterol. Esteróides glicosilados foram também detectados nesse extrato. Uma destilação por arraste a vapor d\'água forneceu o óleo essencial que foi comparado por cromatografia gasosa, com o óleo extraído de cascas de uma planta localizada em Araraquara (SP). Os cromatogramas dos dois óleos indicam que eles possuem composições químicas muito semelhantes. Do óleo essencial obtido do espécimen de Araraquara foram identificados onze sesquiterpenos: o 1(10),4(15),5-germacratrieno (germacreno D), o cis 4,10(14)-cadinadieno (γ-muuroleno), o trans 4,10(14)-cadinadieno, o 1(10),4-cadinadieno (σ-cadineno), o 1(10),4(15)-cariofiladieno, o 1,3,11-elematrieno (β-elemeno), o 1(10),4,7-humulatrieno (α-humuleno), o cis e o trans 1(10)-epóxi-4(15)-cariofileno, o 1(10)-epóxi-4,7-humuladieno e o 10-aloaromadendranol (viridiflorol). Os três últimos sesquiterpenos foram encontrados também no extrato hexânico do espécimen que vive em Campo Grande. As substâncias foram isoladas através de cromatografias de adsorção em sílica gel e desta impregnada com AgNO3 e identificadas por espectroscopias de RMN de 1H e de 13C (PND e DEPT 1350) e de massas. / This work describes a chemical study of the bark wood of Guarea guidonia (L.) Sleumer (Meliaceae). The hexanic extract of barks collected from an especimen growing at Campo Grande (MS) afforded five sesquiterpenes: the trans 1(10)-epoxi-4(15)-cariofileno; the 1(1 0)-epoxi-4,7-humuladieno; the 10-aloaromadendranol (viridiflorol); the 1(10),4-diepoxi-7-humuleno and the 3-oxa-10-aloaromadendranol and four steroids: the sitosterol, the stigmasterol, the palmitato of sitosterol and the oleato of sitosterol. From this extract were also detected glycosyl steroids. The essencial oil obtained from a steam water extraction of this barks was compared with that extract fiom the barks of an Araraquara\'s plant (SP). The chromatograms of the oils showed that the chemical composition of both oils are very similar. From the Araraquara\'s oil were identified eleven sesquiterpenes: the 1(10),4(15),5-germacratrieno (germacreno D), the cis 4,10(14)-cadinadieno (γ-muuroleno), the trans 4,10(14)-cadinadieno, the 1(10),4-cadinadieno (σ-cadineno), the 1(10),4(15)-cariofiladieno, the 1,3,11-elematrieno (β-elemeno), the 1(10),4,7-humulatrieno (α-humuleno), the cis and the trans 1(10)-epoxi-4(15)-cariofileno, the 1(10)-epoxi-4,7-humuladieno and the 10-aloaromadendranol (viridiflorol). The last three sesquiterpenes were also isolated fiom the hexanic extract. The compounds were isolated by adsortion chromatography on silica gel and on silica gel impregnated by AgNO3 and identified by 1H and 13C NMR (PND and DEPT 1350) and mass spectroscopy.

A natureza e diversidade das estruturas químicas com atividade farmacológica que se tem encontrado nos organismos marinhos justificam a busca por novos compostos que são de interesse nas mais diversas áreas de aplicação. As espécies de macroalgas vermelhas, em especial Laurencia spp., merecem destaque pela enorme variedade de terpenos e acetogeninas que produzem, sendo consideradas de grande potencial na produção de novos fármacos. O estudo de seus constituintes pode fornecer importantes subsídios para a quimiotaxonomia, ecologia química, caracterização das espécies e avaliação do potencial biotecnológico. Baseado nisso, Laurencia aldingensis, L. dendroidea e Laurenciella sp. foram selecionadas para o presente estudo para isolamento, caracterização e teste de atividades biológicas dos seus compostos. A técnica do DNA barcoding foi utilizada como ferramenta de diagnóstico para garantir a similaridade entre as amostras de cada espécie, que foram coletadas em época e locais diferentes. Do extrato orgânico de Laurencia aldingensis, nove substâncias foram isoladas, sendo quatro esfingosinas (1-4), três terpenos (5-7) e duas novas substâncias halogenadas (8 e 9). Do extrato orgânico de Laurencia dendroidea formam isolados dois terpenos halogenados conhecidos (10, 11) e, do extrato de Laurenciella sp. três novas substâncias halogenadas alifáticas insaturadas (12-14), assim como um ácido graxo (15) e um esterol (16) conhecidos. Dentre elas, a 8 apresentou atividade citotóxica, mas não se mostrou seletivo, e as substâncias 4 e 11 apresentaram atividade esquistossomicida, bastante promissora. No entanto, nenhum deles apresentou atividade antioxidante. Diante desta investigação, podemos dizer que as informações geradas com os estudos de Laurencia aldingensis, L. dendroidea e Laurenciella sp. expandiram significantemente o conhecimento no que tange a diversidade química no gênero e o potencial biológico-farmacêutico dos mesmos. / The nature and diversity of chemical structures with pharmacological activity that have been found in marine organisms justifies the search for new compounds that may have applications in various areas of interest. Species of red seaweeds, especially Laurencia spp., are special because of the unprecedented variety of terpenes and acetogenins they produce that are considered potentially useful for the production of new drugs. Study of their constituents can also provide important insights relating to their chemotaxonomy, chemical ecology, characterization of species and biotechnological potential. On this basis Laurencia aldingensis, L. dendroidea and Laurenciella sp., were selected for study and isolation, characterization, and biological activity assessment of isolatable quantities of their compounds. The technique of DNA barcoding was used as a diagnostic tool to ensure similarity between samples of each species collected at different times and places. From the organic extract of Laurencia aldingensis nine compounds were isolated; four sphingosines (1-4), three terpenes (5-7) and other two new halogenated compound (8, 9). From the organic extract of Laurencia dendroidea two known halogenated terpenes (10, 11) were isolated while from a similar extract of Laurenciella sp., three new halogenated aliphatic compounds (12-14) were isolated together with known fatty acid (15) and sterol (16). Among all isolates, 8 demonstrated unspecific cytotoxic activity and compounds 4 and 11 showed promising schistosomicidal activity. In applied antioxidant assays none of the isolates we noted to have activity. From the overall investigation it is also clear that the information gleaned from the studies of Laurencia aldingensis, L. dendroidea and Laurenciella sp., significantly expanded our knowledge base concerning chemical diversity in the genus Laurencia and their biological-pharmaceutical potential.

A natureza e diversidade das estruturas químicas com atividade farmacológica que se tem encontrado nos organismos marinhos justificam a busca por novos compostos que são de interesse nas mais diversas áreas de aplicação. As espécies de macroalgas vermelhas, em especial Laurencia spp., merecem destaque pela enorme variedade de terpenos e acetogeninas que produzem, sendo consideradas de grande potencial na produção de novos fármacos. O estudo de seus constituintes pode fornecer importantes subsídios para a quimiotaxonomia, ecologia química, caracterização das espécies e avaliação do potencial biotecnológico. Baseado nisso, Laurencia aldingensis, L. dendroidea e Laurenciella sp. foram selecionadas para o presente estudo para isolamento, caracterização e teste de atividades biológicas dos seus compostos. A técnica do DNA barcoding foi utilizada como ferramenta de diagnóstico para garantir a similaridade entre as amostras de cada espécie, que foram coletadas em época e locais diferentes. Do extrato orgânico de Laurencia aldingensis, nove substâncias foram isoladas, sendo quatro esfingosinas (1-4), três terpenos (5-7) e duas novas substâncias halogenadas (8 e 9). Do extrato orgânico de Laurencia dendroidea formam isolados dois terpenos halogenados conhecidos (10, 11) e, do extrato de Laurenciella sp. três novas substâncias halogenadas alifáticas insaturadas (12-14), assim como um ácido graxo (15) e um esterol (16) conhecidos. Dentre elas, a 8 apresentou atividade citotóxica, mas não se mostrou seletivo, e as substâncias 4 e 11 apresentaram atividade esquistossomicida, bastante promissora. No entanto, nenhum deles apresentou atividade antioxidante. Diante desta investigação, podemos dizer que as informações geradas com os estudos de Laurencia aldingensis, L. dendroidea e Laurenciella sp. expandiram significantemente o conhecimento no que tange a diversidade química no gênero e o potencial biológico-farmacêutico dos mesmos. / The nature and diversity of chemical structures with pharmacological activity that have been found in marine organisms justifies the search for new compounds that may have applications in various areas of interest. Species of red seaweeds, especially Laurencia spp., are special because of the unprecedented variety of terpenes and acetogenins they produce that are considered potentially useful for the production of new drugs. Study of their constituents can also provide important insights relating to their chemotaxonomy, chemical ecology, characterization of species and biotechnological potential. On this basis Laurencia aldingensis, L. dendroidea and Laurenciella sp., were selected for study and isolation, characterization, and biological activity assessment of isolatable quantities of their compounds. The technique of DNA barcoding was used as a diagnostic tool to ensure similarity between samples of each species collected at different times and places. From the organic extract of Laurencia aldingensis nine compounds were isolated; four sphingosines (1-4), three terpenes (5-7) and other two new halogenated compound (8, 9). From the organic extract of Laurencia dendroidea two known halogenated terpenes (10, 11) were isolated while from a similar extract of Laurenciella sp., three new halogenated aliphatic compounds (12-14) were isolated together with known fatty acid (15) and sterol (16). Among all isolates, 8 demonstrated unspecific cytotoxic activity and compounds 4 and 11 showed promising schistosomicidal activity. In applied antioxidant assays none of the isolates we noted to have activity. From the overall investigation it is also clear that the information gleaned from the studies of Laurencia aldingensis, L. dendroidea and Laurenciella sp., significantly expanded our knowledge base concerning chemical diversity in the genus Laurencia and their biological-pharmaceutical potential.

A literatura relata variações espaciais e rítmicas para diferentes classes de metabólitos secundários, entretanto os dados são consistentes apenas para espécies que ocorrem em áreas temperadas. Lychnophora ericoides Mart. tem sido muito empregada popularmente como antiinflamatório e analgésico. É relatado o uso de suas partes aéreas pela população que vive nas proximidades de seu habitat em tratamentos de lesões cutâneas. L. eriocides representa uma das várias espécies da família Asteraceae endêmicas ao cerrado que biossintetizam uma ampla gama de terpenoides. Embora pouco estudada, sabe-se que a fração volátil de suas partes aéreas apresenta constituição terpênica. O presente estudo tem como objetivo determinar a constituição química desta fração volátil por meio de técnicas brandas de pré-concentração dos analitos e avaliar a variabilidade química desta fração a nível intraespecífico e temporal. Dessa forma, as coletas foram realizadas durante um período de 15 meses e utilizou-se HSSPME e CG-EM para avaliar as amostras coletadas. Um método para pré-concentração dos compostos voláteis (COVs) foi desenvolvido a partir da otimização dos parâmetros para obtenção do equilíbrio termodinâmico em HS-SPME. A obtenção de cromatogramas, determinação de índices de retenção relativos e aquisição de espectros de massas com ionização por elétrons possibilitaram a identificação de 7 monoterpenos majoritários e 1 sesquiterpeno também majoritário. Foi detectada a presença de um sesquiterpeno em amostras analisadas por HS-SPME que não se faz presente, de forma majoritária, nos óleos essenciais. Foram também realizados processos de hidrodestilação para obtenção dos óleos essenciais. A partir dos óleos essenciais foi possível isolar 3 sesquiterpenos por meio de CCDP e, para duas dentre estas substâncias, foram adquiridos dados de IES-EM, IES-EM/EM e RMN uni e bidimensionais. Um sesquiterpeno inédito na literatura, o acetato de bisabolila, teve sua estrutura elucidada por meio dos espectros adquiridos a partir de material isolado. Este sesquiterpeno, que está presente em preparados hidroalcoólicos utilizados na medicina popular, foi submetido a ensaios para avaliação do potencial anti-nociceptivo in vitro utilizando-se macrófagos peritoneais de ratos Wistar. Os resultados sugerem um efeito analgésico, devido à redução dos mediadores IL-1X e TNF-Y, os quais estão envolvidos no processo da dor inflamatória. É possível observar uma uniformidade intraespecífica nos níveis de COVs e uma tendência de comportamento a nível intraplanta e a nível circadiano de apresentar percentuais mais elevados de sesquiterpenos em épocas chuvosas e quentes (verão) e, analogamente, menos elevados em períodos de menor temperatura ambiente (durante a noite). Nas folhas mais jovens há uma têndencia destes valores relativos serem mais elevados / Literature does report spatial and time-scale shifting on several secondary metabolites, despite such data are relevant just for those species which occurs within a temperate clime region. Lychnophora ericoides Mart. has been widely used as a folk medicine against pain and inflammation process. Off the region where is located L. ericoidess habitat there is an evident and extensive use of its aerial parts by the people which live there in order to treat several types of skin wound. In Brazilian Cerrado, tropical savanna, there a large numbers of endemic Asteraceae species, including L. ericoides, which are capable of biosynthesizing a wide variety of terpenoids. Considering the poor number of studies carried out concerning the L. ericoides volatile fraction it can be said that this fraction is quite formed by different classes of terpenes. This work aims to find the chemical composition of L. ericoides volatile fraction by using soft pre concentration techniques of compounds and investigate the chemical variability at time-scale and intraspecific levels. Thus, harvests were done throughout a 15 months period and HS-SPME & GC-MS were used to analyze the samples. A pre concentration method was developed by reaching optimum values for parameters involving the ideal thermodynamic equilibrium in HSSPME. The chromatograms acquisition, relative retention index calculations and electron ionization mass spectra acquisition, combined, made possible the identification of 7 monoterpenoids and 1 sesquiterpenoid. A particular sesquiterpene could have been identified only by using HS-SPME pre concentration and not by essential oils analysis. Using prep-TLC of the essential oils, 3 sesquiterpenes were isolated. The ESI-MS, ESI-MS/MS as well as 1D and 2D NMR spectra of two of these three isolated terpenes were acquired. One new sesquiterpene, bisabolyl acetate, had his structure elucidated at the end of this process. This sesquiterpene is displayed in hydro alcoholic extracts used in folk medicine. Bioassays for in vitro antinociceptive investigations using peritoneal macrophages isolated of Wistar rats were done using the bisabolyl acetate. Results on this investigation may suggest that a pain relief effect could be described for this compound, every since it was possible to notice a reducing on IL-1X and TNF-Y levels. These two cytokines are involved in inflammatory pain. A regular pattern on volatile levels within the samples couldve been noticed, and it is what could be called an intraspecific uniformity. A trend on both intraplant and circadian investigations couldve been observed and what tends to happen is a rising on sesquiterpenes level by the period of year which the rainy and warm summer is governing the weather. In an opposite way these levels tend to diminish by the period in which the lower temperatures are registered (throughout the night time). Among the younger leaves there is also a trend on higher sesquiterpenes levels to occur.

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Este trabalho objetivou analisar fitoquimicamente a esp?cie Byrsonima coccolobifolia Kunth e fazer um estudo de atividade biol?gica nos extratos de B. coccolobifolia, B. verbascifolia e B. intermedia, investigando a atividade antioxidante, a a??o inibit?ria da acetilcolinesterase e atividade antimicrobiana nessas esp?cies. As partes a?reas das plantas foram coletadas no Vale do Jequitinhonha-MG e secas a temperatura ambiente. Folhas e galhos foram separados, pulverizados e submetidos ? extra??o exaustiva com solventes de polaridade crescente (hexano, acetato de etila e metanol), que foram removidos por evaporador rotat?rio. Os extratos em hexano e em acetato de etila de B. coccolobifolia foram submetidos a m?todos cromatogr?ficos cl?ssicos e, atrav?s de t?cnicas espectrosc?picas (IV e RMN de 1H e 13C), foi poss?vel elucidar nos extratos das folhas as seguintes subst?ncias: friedelina, ?-sitosterol, mistura de ?-amirina e ?-amirina e derivados do ?cido olean?lico e urs?lico. Na identifica??o dos compostos presentes no extrato metan?lico de folhas e galhos de B. coccolobifolia, utilizou-se a t?cnica de espectrometria de massas por electrospray (ESI-MS), por inser??o direta dos extratos dissolvidos em metanol. Identificaram-se tr?s classes de metab?litos no extrato metan?lico: ?cidos fen?licos e derivados (galato de metila, ?cido qu?nico, ?cidos mono-, di-, tri- e tetragaloilqu?nico), proantocianidinas (d?mero e tr?mero epicatequina) e flavon?ides (quercetina e derivados glicosilados). As esp?cies B. coccolobifolia e B. intermedia apresentaram os melhores resultados para conte?do fen?lico e para atividade antioxidante de captura de radical e de poder redutor. Isso mostrou o potencial dos extratos polares dessas plantas como recurso para a busca de subst?ncias ?teis na preven??o ou no tratamento de doen?as associadas a radicais livres. No que diz respeito ? atividade inibit?ria da acetilcolinesterase (AChE), tamb?m investigada nas tr?s esp?cies de Byrsonima, o extrato hex?nico dessas plantas apresentou maior quantidade de compostos ativos frente a enzima AChE. E somente a esp?cie B. coccolobifolia apresentou atividade contra os microrganismos testados (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli e Candida albicans). Sendo assim, o presente trabalho mostrou a import?ncia de continuar estudando a flora do cerrado brasileiro e as esp?cies do g?nero Byrsonima, sejam seus aspectos qu?micos ou medicinais. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2011. / ABSTRACT Byrsonima species are popularly known as "murici" and there are reports in previous work of many medicinal uses of these plants, some of them already confirmed as anti-inflammatory, antimicrobial and antioxidant activities. The aim of this study was to analyze phytochemically Byrsonima coccolobifolia Kunth and to make a study of biological activity in extracts of B. coccolobifolia, B. verbascifolia and B. intermedia, investigating the antioxidant activity, acetylcholinesterase inhibitory action and antimicrobial activity in these species. The aerial parts of plants were collected in Jequitinhonha Valley, Minas Gerais, Brazil, and dried at room temperature. Leaves and branches were separated, powdered and subjected to exhaustive extraction with solvents of increasing polarity (hexane, ethyl acetate and methanol), that were removed by rotary evaporator. The extracts in hexane and ethyl acetate of B. coccolobifolia were submitted at classical chromatographic methods and, by spectroscopic methods (IR and 1H and 13C NMR), it was possible to elucidate the following substances in leaves extracts: friedelin, ?-sitosterol, a mixture of ?-amyrin and ?-amyrin and oleanolic and ursolic acid derivatives. In the identification of compounds in methanol extracts of leaves and branches of B. coccolobifolia was used mass spectrometry with electrospray (ESI-MS) by direct infusion of the extracts dissolved in methanol. Three classes of metabolites were identified in methanol extracts: phenolic acids and derivatives (methyl gallate, quinic acid, mono-, di-, tri- and tetragalloylquinic acids), proanthocyanidins (epicatechin dimer and trimer) and flavonoids (quercetin and glycosides derivatives). The species B. coccolobifolia and B. intermedia showed better results for phenolic content and antioxidant activity of radical scavenging and reducing power. This showed the potential of polar extracts of these plants as a resource to search for substances useful in preventing or treating diseases associated with free radicals. Concerning the inhibitory activity of acetylcholinesterase (AChE), also investigated in three Byrsonima species, hexane extract of these plants had higher amounts of active compounds against AChE. And only B. coccolobifolia revealed activity against the microorganisms tested (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli and Candida albicans). Thus, this investigation supported the importance of further studying the flora of Brazilian cerrado and the species of the genus Byrsonima, in their chemical or medicinal aspects.

A reatividade das lupulonas, terpenos, flavonoides prenilados e compostos contendo grupos tióis livre foi avaliada frente ao radical 1-hidroxietila (HER) para melhor conhecer o balanço redox da cerveja. As constantes de velocidade aparentes (kap) para a reação entre HER e os substratos supracitados foram obtidas via cinética de competição utilizando a armadilha química 4-POBN como competidor e monitorando-se o aduto radical formado por RPE. A partir dos valores obtidos de kap (108 L mol-1 s-1 para as lupulonas, 105 a 107 L mol-1 s-1 para terpenos, 109 L mol-1 s-1 para os flavonoides prenilados, e 108 a 109 L mol-1 s-1 para tióis) e pelas concentrações médias destes compostos na cerveja, pôde-se inferir que a extensão da degradação térmica destes compostos na bebida aumenta na ordem: lupulonas > tióis > flavonoides prenilados > terpenos. Os produtos de reação foram identificados por espectrometria de massas, e através de investigações eletroquímicas e cálculos ab initio empregando-se DFT se propôs um mecanismo de reação. Os produtos de degradação pela reação com HER foram: derivados hidroxilados e compostos de adição do radical HER para as lupulonas; derivados hidroxilados para os terpenos; derivados de adição do radical HER para os flavonoides prenilados; e dissulfetos para os tióis. Em experimento similar foram determinadas as kap para a reação entre metil ésteres derivados de ácidos graxos insaturados e esteróis com o HER, cujos valores de kap variaram de (2,7 ± 0,1) x 107 até (5,2 ± 0,1) x 107 L mol-1 s-1 para o metil docosahexanoato e ergosterol, respectivamente. Os dados cinéticos aqui obtidos contribuem para um melhor conhecimento da degradação térmica oxidativa da cerveja, bem como sugerem que os polifenóis prenilados podem conferir um significativo efeito antioxidante ao organismo humano quando do seu consumo e absorção. / The reactivity of lupulones, terpenes, prenilated flavonoids and thiol-containing compounds was evaluated towards the 1-hydroxyethyl radical (HER) to provide a better knowledge of the redox balance of beer. The apparent rate constants (kap) for the reaction between HER and the substrates were obtained through a competitive kinetic approach using the spin-trap 4-POBN as a competitor and by monitoring the radical adduct by EPR. From the obtained values of kap (108 L mol-1 s-1 for lupulones, from 105 to 107 L mol-1 s-1 for terpenes, 109 L mol-1 s-1 for prenylated flavonoids, and from 108 to 109 L mol-1 s-1 thiol compounds) and the average concentrations of these compounds in beer, it is possible to infer that the extension of the thermal degradation on the beverage is enhanced according to: lupulones > thiol compounds > prenylated flavonoids > terpenes. The reaction products were identified by mass spectrometry, and by electrochemical investigations and ab initio (DFT) calculation, a reaction mechanism has been proposed. The degradation products for the reaction with HER were: hydroxide derivatives and HER addition products for the lupulones; hydroxide derivatives for terpenes; HER addition derivatives for prenylated flavonoids; and disulfides for thiol cmpounds. In similar experiments it was determined the kap for the reaction among methyl ester derivatives of unsaturated fatty acids and sterols with HER, with kap values ranging from (2.7 ± 0.1) x 107 to (5.2 ± 0.1) x 107 L mol-1 s-1 for the methyl docosahexanoate and ergosterol, respectively. The obtained kinetic data may contribute for a better knowledge of the thermal oxidative degradation of beer, as well as may suggest that prenylated polyphenols could present a significant antioxidant effect in the human body through its consumption and absorption.