Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / En la práctica clínica se han observado grandes variaciones interindividuales, tanto en la respuesta como en la toxicidad asociadas con las terapias anticancerígenas. El presente trabajo tiene por objetivo estudiar la asociación entre polimorfismos genéticos en enzimas de biotransformación y la toxicidad del esquema cisplatino-etopósido-bleomicina (PEB) en pacientes con cáncer testicular y evaluar la influencia del polimorfismo genético en GSTM1 en la farmacocinética de cisplatino. Para el cumplimiento de los objetivos se realizó la genotipificación de los polimorfismos CYP3A4*1B, GSTM1 nulo, GSTT1nulo y BLMH (A1450G) realizadas mediante PCR-RFLP a partir del ADN genómico total obtenido de sangre periférica de sesenta y tres (63) pacientes con cáncer testicular. Adicionalmente, a ocho (8) pacientes reclutados se les realizó un estudio farmacocinético en donde recibieron una infusión intravenosa por 2 horas de cisplatino (100 mg/m2). Los niveles plasmáticos de cisplatino fueron medidos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados muestran que los pacientes con el genotipo GSTM1 presente experimentan más leucopenia grado 3-4 (OR=0,2058; 95% IC 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 Fisher). Linfocitopenia severa fue más frecuente en pacientes con el genotipo GSTT1 nulo (OR=29, 95% IC 1,29-650,0, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los pacientes con el genotipo BLMH A/G experimentaron más toxicidad hematológica grado 3-4 (OR=7,67, 95% IC 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 Fisher) y leucopenia grado 3-4 (OR=29, 95% IC 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los datos farmacocinéticos se ajustaron a un modelo de dos compartimentos, el promedio poblacional estimado para el aclaramiento (CL) fue de 9,97 L/hr y el volumen de distribución en el compartimento central (V1) fue 6,48 L. Ninguna covariable mejoró la variabilidad intersujeto asociada con los parámetros farmacocinéticos. No se observó ninguna asociación significativa entre la farmacocinética y GSTM1. En conclusión, los polimorfismos GSTM1 nulo, GSTT1 nulo y BMLH (A1450G) están relacionados con la toxicidad luego del esquema de quimioterapia en pacientes con cáncer testicular. En el estudio farmacocinético preliminar de cisplatino, ningún parámetro se ve influenciado por el genotipo GSTM1 / In the clinical practice were observed large interindividual variations both the response and the toxicity in the anticancer therapy. The present work aimed to study the association among the genetics polymorphisms in the biotransformation enzymes and toxicity in cisplatin-etoposide-bleomycin (PEB) chemotherapy in testicular cancer patients and to evaluate the influence of genetic polymorphism in GSTM1 on the pharmacokinetics of cisplatin. Genotyping of CYP3A4*1B, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH (A1450G) polymorphisms was performed by PCR – RFLP of genomic DNA obtained from the peripheral blood of sixty three (63) testicular cancer patients. Additionally, the eight (8) patients recruited to the pharmacokinetics study received a 2 hours intravenous infusion of cisplatin (100 mg/m2). Plasma levels of cisplatin were measured by high-performance liquid chromatography (HPLC). Results showed that the patients GSTM1 present genotype experienced more grade 3-4 leucopenia (OR=0,2058; 95% CI 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 fisher). Severe linfocitopenia was more frequent in patients GSTT1 null genotype (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Patients BLMH A/G genotype experienced more grade 3-4 hematological toxicity (OR=7,67, 95% CI 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 fisher) and grade 3-4 leucopenia (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Dates pharmacokinetics were adjusted to a linear two-compartment model, the mean population estimates for clearence (CL) were 9,97 L/hr and central distribution volume (V1) were 6,48 L. No covariate improved the intersubject variability associated with pharmacokinetics parameters. No association among pharmacokinetics parameters and GSTM1 genotype were significant. In conclusion, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH A1450G polymorphisms were related with toxicity from chemotherapy testicular cancer. In the pharmacokinetics preliminary study of cisplatin, no parameters were influenced for GSTM1 genotype. Key words: Pharmacogenetics, polymorphisms, testicular cancer

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / A pesar que se sabe de la existencia de importantes diferencias interindividuales en la respuesta a la mayoría de los medicamentos que se utilizan en terapéutica humana, y que justifica los distintos esquemas posológicos utilizados en diferentes poblaciones de pacientes, todavía no es posible conocer completamente sus causas. Respecto a estas diferencias interindividuales se sabe que aproximadamente el 99,9% de la secuencia del ADN de dos individuos diferentes es la misma y que una proporción significativa de las diferencias encontradas en los individuos, es decir, sus diferencias fenotípicas y/o susceptibilidades a ciertas enfermedades, radica en el 0,1% de variación; a este tipo de variaciones genéticas se les conoce como polimorfismos genéticos, los cuales representan diferentes formas en las secuencias de ADN. En el presente trabajo se analizaron seis polimorfismos de los cuales uno no fue posible llevar a cabo, de estos cinco polimorfismos restantes, se estudió la frecuencia de UGT1A1*28 (uno de los cinco mencionados) en un sub-grupo de la población general chilena, y los mismos cinco polimorfismos anteriores se analizaron en 15 pacientes con cáncer testicular que fueron tratados con el esquema Etopósido y Cisplatino (EP), mediante PCR-RFLP, SSCP y tiempo real. Los genotipos fueron estudiados en relación a toxicidad y efectividad en los pacientes con objeto de evaluar la respuesta terapéutica a la quimioterapia. Junto a esto, se analizó el perfil de toxicidad del esquema específico EP y se evaluó la existencia de relación entre genotipo y reacción adversa mediante chi-cuadrado. Finalmente, se realizó una comparación de toxicidad entre los esquemas EP y PEB (Etopósido, Cisplatino y Bleomicina) que corresponden a quince y diecinueve pacientes respectivamente. El estudio fue realizado considerando todas las normativas éticas y clínicas aplicables, incluyendo las Buenas Prácticas Clínicas, la Ley de deberes y derechos de los pacientes y la Declaración de Helsinki. De acuerdo a lo anterior, los voluntarios de la población general y los pacientes debieron firmar un consentimiento informado de acuerdo al protocolo aprobado por los comités de ética del Servicio de Salud Metropolitano Norte (SSMN) y de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. Los resultados mostraron que la población chilena posee semejanza a la población española o alemana en cuanto a frecuencias para el alelo (TA)7 (31%) y (TA)6 (68,9%). Estos valores son considerablemente diferentes comparado con población asiática. En cuanto a la eficacia del tratamiento, todos los pacientes presentaron buena respuesta al tratamiento, a excepción de tres casos con DHL alta y uno con β-HCG alta en que costó llegar a valores clínicamente aceptables. Sólo un paciente presentó recidivas, diagnosticado con seminoma clásico, y que había sido sometido a cuatro ciclos de quimioterapia con buena respuesta y marcadores tumorales dentro de rangos normales, para el que finalmente se decidió realizar cuatro ciclos de cisplatino, vinblastina e ifosfamida. La toxicidad del tratamiento Etopósido y Cisplatino (EP) mostró que las reacciones adversas (RAMs) más frecuentes fueron los vómitos, náuseas, neutropenia y anemia. Estas últimas dos RAMs junto con la leucopenia, linfocitopenia, trombocitopenia y toxicidad hematológica dejan de manifiesto a las reacciones de tipo hematológicas como las de mayor consideración tanto en frecuencia como en gravedad. En este respecto se encontró que el grado de náusea que puede presentar un paciente se relaciona con el genotipo presente para el alelo MDR1 3435. Finalmente en la comparación del esquema EP vs PEB se observó que el esquema EP resulta ser más propenso a producir diarrea, cefalea, alopecia y reacciones dermatológicas que el esquema PEB. Por otra parte, el esquema EP presentó menor ocurrencia de efectos adversos tales como anemia, leucopenia, linfocitopenia, neutropenia, neutropenia febril, neurotoxicidad y trombocitopenia que el esquema PEB. En conclusión se observó que no existe asociación estadísticamente significativa entre el grado de las reacciones adversas analizadas y los polimorfismos CYP3A4*1B, CY3A5*3, UGT1A1*28 y MDR1 3435, a excepción de náuseas que se observó se encontraron asociadas con MDR1 3435. Este estudio resulta una investigación preliminar para establecer la necesidad de aumentar el número de pacientes analizados para estudios futuros con el fin de apreciar relaciones que pudieran haber sido más sutiles / Genetic variants in related proteins with etoposide pharmacokinetics and its influence in therapeutic response to patients with testicular cancer. Despite to know the existence of important interindividual differences, in response to the drugs used in human therapeutic, the ones that justify different posologic schemes used in different patients, it is not yet possible to completely understand the causes of this. Regarding these interindividual differences, it is know that about 99,9% of the DNA sequence of two different individuals; a significant proportion of the found differences come from phenotype and/or susceptibilities to certain diseases. This variation lies in 0, 1%, known as genetic polymorphisms, which represents different shapes in the DNA sequence. In this investigation, there were six polymorphisms analyzed, one of them was not possible to carry out. From the remaining five polymorphisms, the frequency of UGT1A1 * 28 was analyzed in a sub-group of the Chilean population. These five polymorphisms were analyzed in 15 patients with testicular cancer, who were treated with etoposide and cisplatin scheme (EP), using PCR-RFLP, SSCP in real time. The genotypes were studied in relation to toxicity and effectiveness in patients in order to assess the therapeutic response to chemotherapy. Alongside this, the toxicity profile of the specific scheme EP is analyzed and the existence of relationship between genotype and adverse reaction was assessed using chi-square. Finally, a comparison of toxicity between EP and PEB schemes (etoposide, cisplatin and bleomycin) corresponding to fifteen and nineteen patients was performed, respectively. The study was conducted considering all applicable ethical standards and clinics, including Good Clinical Practices, the duties and rights of patients and the Declaration of Helsinki. In relation to the last, the volunteers from the general population and patients had to sign a consent form approved by the ethical committee from the North Metropolitan Health Service (SSMN) and the Medicine Faculty, University of Chile. The results showed that the Chilean population has resemblance to Spanish or German population regarding frequencies for allele (TA) 7 (31%) and (TA) 6 (68.9%). These values are significantly different compared to Asian population. As for the effectiveness of treatment, all patients had good response to treatment, except for three cases with high DHL and one high β-HCG in which cost reach clinically acceptable values. Only one patient had recurrences diagnosed with classic seminoma, and had been subjected to four cycles of chemotherapy with good response and tumor markers within normal ranges, for which finally decided to four cycles of cisplatin, vinblastine and ifosfamide. Treatment toxicity Etoposide and Cisplatin (EP) showed that the most common adverse reactions (ADRs) were: vomiting, nausea, neutropenia and anemia. These last two RAMs with leukopenia, lymphocytopenia, thrombocytopenia and hematologic toxicity leave apparent hematological reactions, such as further consideration both in frequency and severity. In this regard, it was found that the degree of nausea that a patient may present is related to the present MDR1 genotype for the 3435 allele. Finally, in comparison to EP scheme PEB it was observed that EP scheme is more likely to produce: diarrhea, headache, alopecia and skin reactions scheme PEB. Moreover, the EP scheme had lower occurrence of adverse effects such as anemia, leukopenia, lymphopenia, neutropenia, febrile neutropenia, thrombocytopenia, neurotoxicity that scheme PEB. In conclusion, it was found that there is no statistically significant association between the degree of adverse reactions analyzed and CYP3A4 * 1B, CY3A5 * 3, UGT1A1 * 28 and MDR1 3435 polymorphisms, except for nausea which was observed were found associated with MDR1 3435. This study is a preliminary investigation to establish the need to increase the number of patients analyzed for future studies in order to assess relationships that may have been more subtle

Orientador: Maria Aparecida Custodio Domingues / Resumo: As neoplasias testiculares constituem aproximadamente 1% dos cânceres masculinos. Dentre eles, os tumores que têm origem nas células germinativas (TTCG) são os mais frequentes. Por sua natureza, esses tumores têm padrão morfológico variado, sendo distribuídos em dois subgrupos: os seminomas e os não-seminomas. Esses últimos, por sua vez, são classificados em carcinomas embrionários, tumores do seio endodérmico, coriocarcinomas, teratomas e tumores mistos de células germinativas. Há consenso na literatura de que a invasão vascular verificada histologicamente no tumor primário é o melhor indicador preditivo de progressão da doença e recidiva. Estudos recentes demonstram o papel dos fatores de crescimento e seus receptores para avaliação prognóstica dos TTCG, no que o uso da imuno-histoquímica é fundamental. O presente estudo procurou avaliar pela técnica imuno-histoquímica à ocorrência da expressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), do Her2 e do c-Kit em uma série de TTCG não-seminomas primários de testículo. Além disso, explorou a possível relação entre a expressão desses marcadores com a evolução dos pacientes após terapêutica convencional. A série foi constituída de amostras parafinadas existentes no Laboratório de Anatomia Patológica e Citologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú, totalizando 103 pacientes que receberam o diagnóstico de tumor testicular de células germinativas não-seminomas (TTCGNS) no período 1996-2010. Dentre os 103 casos, predominaram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Testicular neoplasms constitute approximately 1% of male cancers. Among these, germ cell tumors (TGCT) are the most prevalent. These tumors show varied morphological patterns and are distributed into two subgroups: seminomas and non-seminomas. The latter, in turn, are classified as embryonal carcinomas, endodermal sinus tumors, choriocarcinomas, teratomas and mixed germ cell tumors. The consensus in the literature is that histological verification of vascular invasion (VI) in the primary tumor is the best predictor of disease progression and recurrence. However, recent studies have highlighted the role of growth factors and their receptors for prognostic evaluation of TGCT, in which the use of immunohistochemistry is fundamental. This study sought to evaluate the occurrence of epidermal growth factor receptor (EGFR), Her2 and c-Kit in a series of primary non-seminoma TGCTs. In addition, possible relationships between the expression of these markers and patient evolution following conventional therapy was investigated. The series consisted of paraffin-embedded samples from the Laboratory of Anatomical Pathology and Cytology of Amaral Carvalho Hospital in Jaú, SP, Brazil, of 103 patients diagnosed with testicular non-seminoma germ cell tumor (NSGCT) over a 15-year period (1996-2010). Among the 103 cases, testicular NSGCT predominated (57.3%), and among these, staining for EGFR and c-Kit predominated. EGFR was expressed when the choriocarcinoma component was predominant, and c-K... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by FRANCISCO CARLOS QUEVEDO null (fcqjau@gmail.com) on 2017-09-15T16:19:40Z No. of bitstreams: 1 _TTCG FINAL 260715 FCQ [2].pdf: 2024513 bytes, checksum: 9e2b5af27bf3e7a02eb1625af9c3c0fc (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-09-15T16:27:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 quevedo_fc_dr_bot.pdf: 2024513 bytes, checksum: 9e2b5af27bf3e7a02eb1625af9c3c0fc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-15T16:27:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 quevedo_fc_dr_bot.pdf: 2024513 bytes, checksum: 9e2b5af27bf3e7a02eb1625af9c3c0fc (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / As neoplasias testiculares constituem aproximadamente 1% dos cânceres masculinos. Dentre eles, os tumores que têm origem nas células germinativas (TTCG) são os mais frequentes. Por sua natureza, esses tumores têm padrão morfológico variado, sendo distribuídos em dois subgrupos: os seminomas e os não-seminomas. Esses últimos, por sua vez, são classificados em carcinomas embrionários, tumores do seio endodérmico, coriocarcinomas, teratomas e tumores mistos de células germinativas. Há consenso na literatura de que a invasão vascular verificada histologicamente no tumor primário é o melhor indicador preditivo de progressão da doença e recidiva. Estudos recentes demonstram o papel dos fatores de crescimento e seus receptores para avaliação prognóstica dos TTCG, no que o uso da imuno-histoquímica é fundamental. O presente estudo procurou avaliar pela técnica imuno-histoquímica à ocorrência da expressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), do Her2 e do c-Kit em uma série de TTCG não-seminomas primários de testículo. Além disso, explorou a possível relação entre a expressão desses marcadores com a evolução dos pacientes após terapêutica convencional. A série foi constituída de amostras parafinadas existentes no Laboratório de Anatomia Patológica e Citologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú, totalizando 103 pacientes que receberam o diagnóstico de tumor testicular de células germinativas não-seminomas (TTCGNS) no período 1996-2010. Dentre os 103 casos, predominaram os TTCGMNS (57,3%). Nestes, observou-se o predomínio de marcação para EGFR e c-Kit. O EGFR foi expresso quando o componente coriocarcinoma era predominante e o c-Kit no componente epitelial do teratoma. A hipótese do estudo, que os casos positivos para os marcadores analisados estariam correlacionados com sobrevida menor, não foi confirmada pela analise estatística de Kaplan-Meier; seria necessário um maior número de casos para se chegar a uma conclusão quanto à sobrevida. Superexpressão, amplificação gênica e mutações ativadoras são frequentes em tumores testiculares germinativos; deste modo, o uso da técnica de Hibridização Fluorescente in situ (FISH) foi utilizada para avaliação dos eventos gênicos relativos a imunoexpressão proteica, observada pelos resultados encontrados no estudo imuno-histoquímico. Somente um caso, classificado como TTCGM, apresentava amplificação para gene EGFR. Este caso apresentou bom prognóstico. Considerou-se que, a ausência de amplificação observada na maioria dos casos, deve-se a qualidade inadequada do material parafinado e estocado. Conclui-se que, na série estudada, os TTCGNS expressam os marcadores EGFR, Her2 e c-Kit, a depender do subtipo histológico; entretanto, estas proteínas não tiveram impacto prognostico. A amplificação gênica para o EGFR pode ocorrer de forma isolada, porem devido a condições técnicas restritivas, não foi possível observa-la nos demais casos positivos para EGFR pela técnica de imuno-histoquímico. / Testicular neoplasms constitute approximately 1% of male cancers. Among these, germ cell tumors (TGCT) are the most prevalent. These tumors show varied morphological patterns and are distributed into two subgroups: seminomas and non-seminomas. The latter, in turn, are classified as embryonal carcinomas, endodermal sinus tumors, choriocarcinomas, teratomas and mixed germ cell tumors. The consensus in the literature is that histological verification of vascular invasion (VI) in the primary tumor is the best predictor of disease progression and recurrence. However, recent studies have highlighted the role of growth factors and their receptors for prognostic evaluation of TGCT, in which the use of immunohistochemistry is fundamental. This study sought to evaluate the occurrence of epidermal growth factor receptor (EGFR), Her2 and c-Kit in a series of primary non-seminoma TGCTs. In addition, possible relationships between the expression of these markers and patient evolution following conventional therapy was investigated. The series consisted of paraffin-embedded samples from the Laboratory of Anatomical Pathology and Cytology of Amaral Carvalho Hospital in Jaú, SP, Brazil, of 103 patients diagnosed with testicular non-seminoma germ cell tumor (NSGCT) over a 15-year period (1996-2010). Among the 103 cases, testicular NSGCT predominated (57.3%), and among these, staining for EGFR and c-Kit predominated. EGFR was expressed when the choriocarcinoma component was predominant, and c-Kit when the epithelial component of the teratoma was predominant. The initial hypothesis that positive cases for any marker would be correlated to lower survival was not confirmed by Kaplan-Meier survival probability studies. A larger number of cases is required to reach any conclusions concerning survival. Gene overexpression and amplification and activating mutations are common in testicular germinal tumors, thus fluorescent in situ hybridization (FISH) was used to validate the genic events results obtained in the immunohistochemical study. Only one case, classified as mixed TGCT, showed EGFR gene amplification, and this case presented good prognosis. The lack of amplification observed in most cases was due to the inadequate quality of the stored, paraffinembedded materials. In conclusion, in the series studied, testicular NSGCT expressed EGFR, Her2 and c-Kit markers depending on the histological subtype; however, these proteins had no prognostic impact. Gene amplification for EGFR may occur in isolation, but due to the limited technical conditions, it was not observed in the other cases positive for EGFR using immunohistochemistry.

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-22Bitstream added on 2014-06-13T20:51:07Z : No. of bitstreams: 1 goiozo_pfi_me_botfmvz.pdf: 543267 bytes, checksum: 76d6c0af24937d881e8bd45fcc0340b8 (MD5) / Outros / O presente estudo objetivou avaliar a influência de afecções testiculares sobre as características biométricas, morfométricas e seminais em touros. Utilizou-se 56 touros da raça Nelore, pesando entre 420 e 600 kg e com idade entre 30 e 40 meses. A mensuração do perímetro escrotal e amostras de sêmen foram coletadas em três períodos com intervalos de 15 dias, e o espermograma foi realizado por métodos convencionais e coloração de Feulgen para estimativa dos percentuais de fragmentação nuclear. Os animais foram orquiectomizados e fragmentos de testículos foram submetidos a analises bacteriológicas, histopatológicas e morfométricas. Dentre os animais avaliados, 14 não apresentaram alterações testiculares, 15 orquite bacteriana, 10 degeneração, 10 orquite inespecífica e 7 hipoplasia testicular. As médias do perímetro escrotal não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. Os resultados das análises seminais mostraram que a motilidade em animais normais é superior aos animais com orquite inespecífica e estatisticamente semelhante aos demais grupos. Quanto ao percentual de espermatozóides normais, animais normais e animais com hipoplasia testicular, apresentaram percentuais superiores aos demais grupos. Os defeitos de cabeça espermática e fragmentação nuclear de animais com orquite inespecífica foram superiores aos animais com testículos normais e hipoplásicos, e semelhantes os outros grupos. Animais com orquite inespecífica apresentaram área de epitélio seminífero inferior aos demais grupos e área de células de Leydig superior aos animais com testículos normais. Os touros avaliados mostraram um alto índice de alterações testiculares e um alto percentual de animais inaptos para reprodução. A biometria testicular não permitiu o diagnóstico das afecções testiculares. / The present study aimed at to evaluate the testis changes influences about biometrics, morphometrics and seminal characteristics in bulls. Fifty six Nelore bulls, weighing between 420 and 600 kg and with age between 30 and 40 months were used. The scrotal perimeter measurement and semen samples were collected in three periods with intervals of 15 days, and the spermogrammes were evaluated by conventional methods and by Fuelgen stain for nuclear fragmentation evaluate. The animals were orqiectomyzeds and testis fragments were submitted to bacteriological, histhopatologicals and morphometrical analyses. Among the evaluated animals, 14 don’t showed testis changes, 15 bacterial orchitis, 10 testicular degeneration, 10 unspecific orchitis and e 7 testicular hipoplasia. The scrotal perimeter averages didn’t showed significant differences between groups. The results of the seminal analyses showed that the mobility in normal animals, it is superior to the animals with unspecific orchitis and statistically similar to the other groups. The percentage of the normal sperms in normal animals and animals with testicular hipoplasia was greater that others groups. The sperm head defects and nuclear fragmentation in animals with unspecific orchitis was greater that animals with normal and hipoplasic testis, and similar to others groups. Animals with unspecific orchitis showed somniferous epithelium area lower to others groups and Leydig cells area higher to animals with normal testicles. The bulls evaluated showed a high index of the testicular changes and a high percentage of the inapt animals to reproduction. The testicular biometric analysis don’t allowed testicular diseases diagnose.

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Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-10-13T19:41:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTACAO GIOVANNA GUSMÃO.pdf: 640329 bytes, checksum: eb48b6d00fc9a30b18bc1c3414978fc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T19:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTACAO GIOVANNA GUSMÃO.pdf: 640329 bytes, checksum: eb48b6d00fc9a30b18bc1c3414978fc5 (MD5) Previous issue date: 1998-11-13 / Os hormônios tireoidianos são essenciais para um crescimento e desenvolvimento normal pós natal. Várias investigações têm tentado estabilizar o papel específico dos hormônios tireoidianos nas funções e desenvolvimento do trato reprodutor masculino. Os hormônios tireoidianos possivelmente exercem uma ação recíproca entre o esteróide testicular e as células de Sertoli durante o período prematuro. O presente estudo tentou avaliar o efeito da tiroxina sobre os níveis de testosterona no soro e no fluido intersticial testicular (FIT) em ratos machos. O hipertireoidismo foi induzido com a tiroxina (20 g\kg) em ratos Wistar machos com 22 dias de idade, pesando 80g por um período de 5,10, 15 e 20 dias de tratamento. Os grupos controles receberam solução salina 0,1 ml/100g do peso corporal, como veículo. Após cada período de tratamento, os animais foram pesados e sacrificados, para obtenção do sangue, e os testículos foram pesados, para coleta do fluido intersticial testicular (FIT). Os nossos resultados mostram que a tiroxina em ratos sexualmente prematuros, promove um aumento de testosterona, tempdependente. Observa-se também, que a nível testicular, no FIT, os níveis de testosterona encontram-se elevados. A tiroxina promoveu um aumento do peso corporal e testicular, modificando a função metabólica. Estudos evidenciaram que os receptores de LH e hCG é regulado em homogeneizado celular de testículo em ratos tratados com tiroxina por 20 dias. A capacidade de ligação específica foi obtida pela motodologia envolvendo a saturação de receptores do LH e hCG, aumentando a concentração de LH marcado e hCG não marcado. Outros resultados mostram que a tiroxina é capaz de alterar os níveis de receptores de LH de alta afinidade presentes em homogeneizado testicular, promovendo uma redução da capacidade de ligação específica (Bmax), obtido através da Análise de Scatchard. Conclui-se que a tiroxina pode acelerar a formação de testosterona no lumen intersticial no processo de maturação sexual, modificando possivelmente o mecanismo intracelular das células testiculares, e que a capacidade de ligação do LH e hCG é alterada após o tratamento com tiroxina. / Thyroid hormones are essential for normal pos-natal growth and development. Several investigators have attempted to establish a specific role of thyroid hormones in reproductive tract growth and function. The thyroid hormones possibly exert a reciprocal action between the testicular steroid and the Sertoli cells during the early period. The present study tried to evaluate the effect of the thyroxine over the serum levels of the testosterone and in the interstitial fluid of the testis in male rats. The hyperthyroidism was induced with the thyroxine (20 g\kg), In Wistar male rats 22 days of age, weighing 80kg for a period of 5, 10, 15 and 20 days. The control group received 0,9% saline solution as vehicle. After each treatment period, the animals were weighty and killed to obtainment of blood, and the testis was weighty to collect of testicular interstitial fluid (TIF). These results show that the thyroxin in premature rats, promote an increase of testosterone, dependent time. It is observed either an increase on testosterone level in the TIF. The thyroxin promoted an increase the corporeal and testicular weighty, capable in modify a metabolic function. In the previos study the regulation of LH and hCG receptors by homogenized testicular cells of the 20 days treatment. The specific binding capacity was also obtained by LH and hCG receptors with increasing concentration LH labelled and hCG no labelled. The Scatchard analysis of the saturad curve has show that a affinity constant (ka) is around 108 M-1. This result demonstred that the control present more binding specific that thyroxine wich is a maximum induction of hCG receptor. These results indicate that the thyroxine is able to accelerate the formation the interstitial lumen in the process of sexual maturation, altering possibly the intra-cell mechanism of testicular cells, and the LH and hCG binding capacity is changed after the thyroxine treatment.

Responsáveis pela produção dos gametas masculinos e pela biossíntese de hormônios essenciais à função reprodutiva masculina, os testículos requerem uma ação hormonal orquestrada para regular seu desenvolvimento e metabolismo, a fim de desenvolver testículos adultos férteis. Três hormônios vêm sendo descritos como indispensáveis para a regulação da fisiologia testicular: FSH, insulina e IGF-1. A sinalização hormonal mediada por receptores de membrana é essencial para a regulação de diversas funções celulares. A maneira como cada interação entre ligante e receptor produz o seu próprio padrão específico de regulação da função celular é uma questão fundamental na biologia. A grande maioria das ações hormonais se dá através da ativação de vias de sinalização intracelular, as quais direcionam a fisiologia celular de acordo com as necessidades dos tecidos e órgãos. O presente trabalho tem como objetivo investigar o envolvimento da via da PI3K/PKB nas ações da insulina e do IGF-1 sobre o potencial de membrana e os transportes de cálcio, aminoácidos e glicose em células de Sertoli de ratos imaturos. Buscamos ainda, identificar os efeitos do FSH e do IGF-1 sobre o metabolismo de células de Sertoli humanas cultivadas in vitro, através da análise do consumo e produção de metabólitos, da atividade da lactato desidrogenase (LDH) e da expressão de proteínas relacionadas ao metabolismo dessas células. Os efeitos estimulantes da insulina e do IGF-1 sobre a captação de cálcio e sobre o transporte de aminoácidos e glicose foram completamente inibidos pela ação do wortmannin, bloqueador da PI3K. O que indica que ambos os hormônios se valem dessa via de sinalização para regular o metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos. Em células de Sertoli humanas, o IGF-1 foi capaz de estimular a produção de lactato por essas células através do aumento da atividade da LDH, enquanto o FSH não apresentou qualquer efeito. Concluímos, que a via de sinalização PI3K/PKB é um importante meio de regulação hormonal do metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos utilizado por FSH, insulina e IGF-1, gerando despolarização da membrana pelo influxo de cálcio e consequente aumento no transporte de aminoácidos e glicose. Entretanto, em células de Sertoli humanas adultas, o IGF-1 parece ser um importante regulador do metabolismo celular, embora o FSH, a exemplo do que acontece em testículos de ratos adultos, tem pouco ou nenhum efeito sobre o metabolismo dessas células. Mais estudos são necessários para identificar as vias de sinalização pelas quais o IGF-1 regula o metabolismo das células de Sertoli.