A testosterona é um hormônio esteróide androgênico responsável pelas características masculinas, com importante função na fisiologia testicular. A nandrolona é um esteróide sintético derivado da testosterona, com ação anabólica e androgênica. A catequina é um flavonóide encontrado em frutas e chás, que possui efeito antioxidante, anticarcinogênico e antienvelhecimento no organismo. Estudos mostram um possível mecanismo de ação destes esteróides e do flavonóide como agonistas do receptor androgênico de membrana. Objetivo: Verificar a ação não-clássica de andrógenos (testosterona, nandrolona) e catequina nas células de Sertoli de ratos Wistar imaturos. Materiais e Métodos: Eletrofisiologia: O potencial de membrana foi registrado utilizando túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares preenchidos com KCl 3mmol/L acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica do esteróide testosterona (1M), nandrolona (0.1, 0.5 e 1 M) e do flavonóide catequina (0.1, 0.5 e 1, M) isoladamente e também após a perfusão com a flutamida (1M), diazoxida (100 M) e U73122 (1 M). Captação de 45Ca2+: Os testículos (n=5) foram pré incubados em KRb com 45Ca2+ por 60 minutos para equilibrar o meio intra e extra-celular de 45Ca2+após o equilíbrio, as gônadas foram incubadas por 5 minutos em KRb com 45Ca2+ com ou sem nandrolona (1μM) ou catequina. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados da variação do potencial de membrana foram analisados pelo teste T student e ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. Resultados: A testosterona (1M) produziu uma resposta despolarizante sobre o potencial de membrana (PM) alterando de -44,62±0,53mV para -41,41 ±0,81* mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,05) (n=9 células de Sertoli). Esta resposta despolarizante foi observada mesmo após a perfusão com flutamida (1M). A catequina (1M) causou uma resposta de despolarização semelhante à da testosterona, alterando o PM de -40,20 ± 0,51 mV para -35,62 ± 1,07mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,001) (n=9 células de Sertoli). A nandrolona (1μM) provocou uma despolarização alterando o PM de -38,20 ± 0,71 para -33,42± 0,63 *p<0,05. A resposta da catequina e de nandrolona foi observada em diferentes doses e mesmo após a perfusão com flutamida (1M), diazoxida (100μM) e U73122 (2μM) anularam o efeito de nandrolona (1μM) e catequina (1μM). A nandrolona e catequina produziram aumento na captação de 45Ca2+ em 5 minutos de incubação em testículos de ratos imaturos. Conclusão: Os andrógenos testosterona, nandrolona e o flavonóide catequina apresentam uma ação despolarizante sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos Wistar, observada mesmo após o bloqueio do receptor de andrógenos intracelular (flutamida). A perfusão com U73122(bloqueador de PLC) e a perfusão com diazoxida (agonista do canal de K+ATP) anulou o efeito de nandrolona e catequina, indicando a participação da PLC e de canais de K+ATP na resposta despolarizante observada. Estes resultados indicam que nandrolona e catequina atuam em um receptor de andrógenos de membrana, assim como a testosterona, agindo através de uma via não-clássica sobre as células de Sertoli de testículos de ratos. / Testosterone is an androgenic steroid hormone responsible for male characteristics, with an important role in testicular physiology. The synthetic steroid nandrolone ia an anabolic and androgenic derivative of testosterone, Catechin is a flavonoid found in fruits and teas, which have antioxidant, anticarcinogenic and anti-aging effects in the body. Studies show a possible mechanism of action of these steroids and flavonoid as agonists of the androgen receptor membrane. Objective: The aim of this work is to investigate the non-classical effect of androgens (testosterone, nandrolone) and catechin in Sertoli cells from immature rats. Materials and Methods: Electrophysiological experiments: The membrane potential was recorded using isolated seminiferous tubules of testes of rats 15 days old. The intracellular recording of Sertoli cell was performed using microcapillary filled with KCl 3mmol/L coupled to an electrometer. We performed a topical application of testosterone (1M), nandrolone (0.1, 0.5 and 1M) and the flavonoid catechin (0.1, 0.5 and 1M) alone and also after infusion with flutamide (1M), diazoxide (100M) or U73122 (1M). 45Ca2+ uptake : The testes (n=5 in each group) are pre-incubated in KRb with 45Ca2+ (2.7kBq/sample) for 60 min in a Dubnoff metabolic incubator to equilibrate intra- and extracellular 45Ca2+ levels until they reached a plateau. Following equilibration, the gonads were incubated for 5 min in KRb with 45Ca2+, with or without nandrolone (1 μM) or catechin.The results were given as mean ± SEM. The data of the change in membrane potential were analyzed by ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. Results: Testosterone (1M) produced a depolarizing response in the membrane potential (MP) by changing from -44.62 ± 0.53 mV to -41.41 ± 0.81 mV *, at 120 seconds after application (* p <0.05) (n = 9 Sertoli cells.) This depolarizing response was observed even after perfusion with flutamide (1M). Catechin (1  M) showed a similar response to depolarization of testosterone, changing the PM of -40.20 ± 0.51 mV to -35.62 ± 1.07 mV at 120 seconds after application (* p <0.001) (n = 9 Sertoli cells) after its application. The nandrolone (1μM) showed a depolarization of the PM changing -38.20 ± 0.71 to -33.42 ± 0.63 * p <0.05. The response of catechin and nandrolone was observed at different doses and even after perfusion with flutamide (1M). diazoxidae (100μM) and U73122 (2μM) nullified the effect of nandrolone (1μM) and catechin (1μM). Nandrolone and catechin increase 45Ca2+ uptake within 5 minutes of incubation with immature testes. Conclusion: The androgen testosterone, nandrolone and flavonoid catechin have a depolarizing action on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats, observed even after the blockade of intracellular androgen receptor. The U73122 infusion and perfusion with diazoxide nullified the effect of nandrolone and catechin, indicating the involvement of PLC and K+ATP channels in depolarizing response observed. These results indicate that nandrolone and catechin act on an androgen membrane receptor, as well as testosterone through a non-classical pathway on Sertoli cells from rat testes.

Resumo não disponível

Os esteróides sexuais (andrógenos e estrógenos) são importantes reguladores do metabolismo ósseo em machos e fêmeas, respectivamente. A Testosterona, o hormônio andrógeno natural, predominante no sexo masculino, tem papel fundamental em relação à manutenção da massa óssea, pela sua ação sistêmica. O objetivo deste trabalho foi avaliar histologicamente a ação do Propionato de Testosterona (PT) sobre o tecido ósseo, aplicado de forma tópica na tíbia de ratos machos, observando a regeneração óssea e, se ele promove aceleração nesta regeneração. Defeitos ósseos de 1,5mm de diâmetro, foram realizados nas duas tíbias de 30 ratos, sendo que 15 haviam sido castrados previamente e os outros 15 não. Após randomização, numa das tíbias do grupo experimental foi aplicado esponja de colágeno (Gelfoan®(G))+PT e na outra G+Óleo Mineral (OM). No grupo controle, uma das tíbias recebeu apenas Gelfoan e na outra foi realizado apenas o defeito ósseo. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados aos 15 e 30 dias pósoperatórios, e os dos grupos controle, foram sacrificados aos 15 dias pós-operatórios. Os ratos que foram sacrificados aos 30 dias receberam duas aplicações das substâncias em avaliação. Realizou-se análise macroscópica das peças, além das análises histológicas descritiva/comparativa e descritiva semi-quantitativa. Com relação a formação de osso entre as corticais (cicatrização do defeito ósseo criado), tanto G isolado como G+PT ou G + OM, apresentaram diferentes graus de cicatrização óssea entre os diferentes grupos: castrados e não castrados, sacrificados aos 15 dias pós-operatórios e aos 30 dias. Foi achado que o grupo castrado sacrificado aos 15 dias que recebeu G+PT teve cicatrização óssea, contrariamente ao grupo não castrado que não cicatrizou. Também no grupo castrado sacrificado aos 30 dias pós-operatórios observou-se formação de osso lamelar, estruturado nos animais tratados com G+PT. Pode-se dizer que o PT tópico nestes grupos contribuiu para neoformação óssea. Concluiu-se que: 1°) em dois grupos experimentais o PT teve melhores resultados, mas os dados obtidos não permitem uma conclusão definitiva; 2°) a Testosterona empregada de forma tópica mostrou-se promissora quanto a ativação da regeneração óssea; 3°) o Propionato de Testosterona não parece ser a forma farmacêutica mais apropriada, devido a sua forma de liberação muito lenta do hormônio e conseqüente pouca eficiência, devendose utilizar como alternativas para aplicação da Testosterona, a mesma diluída em outro veículo e introduzida nos defeitos através de cápsulas de lisina tricalcio fosfato calcinado ou através de implantes combinando a Testosterona com partículas de poly(D,L-(lactide-co-glycolide)) conforme verificado na literatura. Estes resultados obtidos merecem ser aprofundados e aperfeiçoados, utilizando curvas dose-resposta, outros preparados de Testosterona e tempos distintos.

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

Orientadoesr: Wagner Eduardo Matheus, Ubirajara Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T13:05:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_ElcioDias_D.pdf: 1974038 bytes, checksum: e1e7b084d346a50a85fec60666fbf526 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Objetivo: avaliar a eficácia relativa do leuprolide 3,75 mg, leuprolide 7,5 mg e goserelina 3,6 mg quanto à redução da testosterona sérica, em níveis de castração. Método: foram avaliados 60 pacientes com carcinoma avançado de próstata, com indicação de bloqueio hormonal. Os pacientes foram divididos em 3 grupos de 20: Grupo 1) pacientes que receberam leuprolide na dose 3,75 mg; Grupo 2) receberam leuprolide 7,5 mg, Grupo 3) receberam goserelina 3,6 mg. Todos os grupos foram tratados por aplicação mensal das respectivas medicações. Os pacientes foram avaliados com dosagens de testosterona sérica em 2 momentos: pré-tratamento e após 3 meses de tratamento. Resultados: a idade dos pacientes foi semelhante nos três grupos, com mediana de 72, 70 e 70 anos, respectivamente aos grupos 1, 2 e 3. Dos pacientes que receberam leuprolide 3,75 mg, leuprolide 7,5 mg e goserelina 3,6 mg, 26,3%, 25% e 35%, respectivamente, não obtiveram nível de castração, considerando nível de corte de testosterona ? 50 ng/dl; e 68,4%, 30% e 45%, respectivamente, não obtiveram nível de castração, considerando nível de corte de testosterona ? 20 ng/dl. Conclusão: não houve diferença significativa na obtenção de níveis de castração com leuprolide 3,75 mg, leuprolide 7,5 mg e goserelina 3,6 mg, quando comparadas as três substâncias em conjunto. Quando comparados os grupos dois a dois, houve diferença estatisticamente significativa na análise do leuprolide 3,75 mg com o leuprolide 7,5 mg, havendo maior obtenção de nível de castração com 7,5 mg, quando se considera este nível como igual ou menor que 20 ng/dl. A importância dessa eventual diferença, no entanto, deve ser vista com cautela, já que a comparação dos três grupos simultaneamente, muito embora próximo, não atingiu o nível de significância estabelecido / Abstract: Purpose: to evaluate the relative efficiency of leuprolide 3.75 mg, leuprolide 7.5 mg, and goserelin 3.6 mg in relation to the reduction of serum testosterone, regarding the levels of castration. Methods: we evaluated prospectively 60 randomized patients with advanced prostate carcinoma, with indication for hormone blockade. The patients were divided into 3 groups of 20: Group 1) received leuprolide 3.75 mg; Group 2) received leuprolide 7.5 mg; group 3) received goserelin 3.6 mg. All groups were treated with monthly application of the respective drugs. Results: the patients' ages were similar within the three groups, with a median of 72, 70, and 70 in groups 1, 2, and 3, respectively. Of the patients that received leuprolide 3.75 mg, leuprolide 7.5 mg, and goserelin 3.6 mg, 26.3%, 25%, and 35%, respectively, did not reach castration levels, considering a testosterone cut of ?50 ng/dl. 68.4%, 30%, and 45%, respectively, did not reach castration levels, considering a testosterone cut of ?20 ng/dl. Conclusions: There were no statiscally significant differences in the levels of castration when comparing with leuprolide 3.75 mg, leuprolide 7.5 mg, and goserelin 3.6 mg, when comparing the three substances altogether. When compared in groups of two, there was a statiscally significant difference between leuprolide 3.75 mg and leuprolide 7.5 mg, in which the latter presented better results in reaching castration levels, when considered equal or less than 20ng/dl. The importance of this difference, however, must be measured with caution, since the comparison of the three groups simultaneously did not reach the established significance level, even though it came close / Doutorado / Fisiopatologia / Doutor em Ciências

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los anuros hacen uso de señales acústicas para comunicarse en sus interacciones sociales. Entre ellas se encuentran el canto o llamada de advertencia, que atrae a las hembras e indica la presencia de quien lo emite a otros machos, y el canto agresivo. Las hormonas esteroidales pueden modificar la producción y el procesamiento sensorial de estas señales en los individuos emisor y receptor, respectivamente. Una forma en que las hormonas podrían actuar, es modulando los umbrales de intensidad a los cuales responden a estas señales los machos conespecíficos. Para probar esta hipótesis, se expuso en terreno a 18 machos de Pleurodema thaul a experimentos de estimulación acústica. Imitaciones sintéticas del canto o llamada de advertencia de esta especie fueron presentadas, a intensidades crecientes, para establecer los umbrales de respuesta vocal evocada y de respuesta agresiva. Finalizada la estimulación, se tomaron muestras de sangre para determinar las concentraciones plasmáticas de testosterona (T) mediante radioinmunoensayo. No se encontró una correlación entre los niveles de T y los umbrales de respuesta vocal evocada y agresiva. Los resultados sugieren que la testosterona no afecta directamente los umbrales de dichas respuestas y que probablemente actúe de manera indirecta, junto a otros factores hormonales como arginina vasotocina, en la modulación de la percepción acústica

Los perros son una especie que genera problemas para la salud humana por su alta prolificidad. Para controlar la sobrepoblación canina se usa métodos como albergues, esterilización quirúrgica y esterilización química . Actualmente, el gluconato de zinc es uno de los más usados. El objetivo del presente estudio fue evaluar los parámetros de tamaño testicular , y niveles séricos de testosterona en 38 caninos machos aparentemente saludables, con edades entre 1 y 10 años, castrados con una inyección de Gluconato de Zinc en el distrito de San Jerónimo- Cusco. La evaluación se realizó a los cero, seis y doce meses post inyección. La dosis a inyectar se calculó para cada testículo. Se recolectaron muestras de sangre que fueron centrifugadas para la obtención de suero. Se realizó la medición de los niveles de testosterona usando la prueba de ELISA. Los valores observados se presentaron gráficamente con BOXPLOT y se verifico la normalidad usando la prueba Shapiro-Wilk. Los resultados fueron analizados mediante la prueba de regresión múltiple. Para el testículo derecho, el tamaño testicular disminuyó significativamente entre el inicio, 6 meses y al año (19,9mm vs17,5mm vs 14,5mm respectivamente, p<0.001). Para el testículo izquierdo la disminución fue significativa, también (19.9mm vs 17,8mm vs 14,32mm, p<0.001). Se observó una reducción final de 27% para el testículo derecho y de 28 % para el testículo izquierdo. Los niveles séricos de testosterona presentaron un promedio de 5,9ng/ml, 4,4ng/ml y 3,6ng/ml a los 0, 6 y 12 meses respectivamente, mostrando también una diferencia significativa. Con estos resultados concluimos que el producto es capaz de alterar la estructura testicular, generando infertilidad y una reducción en el tamaño testicular más no elimina la producción de testosterona por lo que las enfermedades relacionadas a esta hormona no podrían ser prevenidas mediante este método en su totalidad. / Dogs are a species that generates problems for human health because of their high prolificacy. To control the canine overpopulation various methods are used such as shelters, surgical sterilization and chemical sterilization. Currently, zinc gluconate is one of the most used. The aim of this study was to evaluate the parameters of testicular size, and serum testosterone levels in 38 apparently healthy male dogs, aged 1 to 10 years, castrated with an injection of Zinc Gluconate in the district of San Jeronimo Cusco. The evaluation was performed at zero, six and twelve months post injection. The injected dose was calculated for each testicle. Blood samples were collected and then were centrifuged to obtain serum. Measuring testosterone levels was performed using ELISA. Observed values are presented graphically with Boxplot and normality was verified using the Shapiro-Wilk test. The results were analyzed using multiple regression test. To the right testicle, testicular size decreased significantly between baseline, 6 months and one year (19,9mm vs17,5mm vs 14.5mm respectively, p <0.001). The left testis decreased significantly, too (19.9mm vs vs 17,8mm 14,32mm, p <0.001). A final reduction of 27% for the right and 28% for the left testicle testicle was observed. Serum testosterone levels had mean 5,9ng / ml, 4,4ng / ml and 3,6ng / ml at 0, 6 and 12 months respectively, also showing significant difference. With these results we conclude that the product is capable of altering the testicular structure, cauising infertility and decreased testicular size but not eliminate testosterone production so diseases related to this hormone could not be prevented by this method in its entirety. Keywords: Canine, chemical castration,Zinc gluconate, testicular size,testosterone.

Memoria de título para optar al título profesional de Bioquímico / La testosterona es la principal hormona sexual masculina, responsable de múltiples efectos en el organismo. Dentro de estos, se ha descrito que es capaz de producir hipertrofia cardiaca tanto in vitro como in vivo. Una de las etapas claves en el desarrollo de la hipertrofia del cardiomiocito consiste en el aumento del consumo de glucosa, como estrategia para aumentar la producción de energía asociada al crecimiento hipertrófico. Si bien la testosterona es capaz de producir hipertrofia cardiaca, no se ha descrito que además aumente la captación de glucosa en cardiomiocitos. Como hipótesis a este problema, se planteó que la testosterona aumenta la captación de glucosa en cardiomiocitos a través del transportador de glucosa GLUT4. Para evaluar esta hipótesis, se realizó cultivo primario de cardiomiocitos de ratas neonatas y se evaluó la captación de glucosa por medio de la glucosa fluorescente 2-NBDG (2-(N-(7-nitrobenzo-2- oxa-1,3-diazol-4-il) amino)-2-deoxiglucosa) y 2-deoxi-[3H] glucosa en cardiomiocitos estimulados con testosterona. Adicionalmente, se evaluó la participación del transportador de glucosa GLUT4, la proteína Akt, la proteína dependiente del complejo Ca2+/calmodulina (CaMKII) y la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) en el proceso. Los resultados obtenidos a través de microscopía de epifluorescencia y centelleo líquido, indican que la testosterona aumentó la captación de la glucosa 2-NBDG y 2-deoxi- [3H] glucosa, respectivamente, alcanzando un valor máximo luego de 2 h de estímulo. La inhibición selectiva del transporte de glucosa a través de GLUT4 con indinavir, bloqueó el aumento en la captación de glucosa por testosterona, sugiriendo la participación de GLUT4 en el proceso. Adicionalmente, cardiomiocitos transfectados con el plasmidio GLUT4myceGFP revelaron que la testosterona aumentó la translocación de GLUT4 a la membrana plasmática. Mediante ensayos de Western blot se determinó que la testosterona aumentó la fosforilación de las proteínas CaMKII y AMPK (alcanzando un máximo en su fosforilación luego de 15 y 60 min de estímulo, respectivamente), las que resultaron ser claves tanto en la translocación de GLUT4 a la membrana plasmática, como en la captación de glucosa por testosterona. Finalmente, es posible concluir que la testosterona aumenta la captación de glucosa a través de GLUT4 por medio de la activación de la vía de señalización CaMKII/AMPK. Lo anterior revela el papel de la testosterona en la captación de glucosa en cardiomiocitos, lo cual puede constituir un mecanismo de captación de glucosa destinada a la producción de energía celular, síntesis de componentes necesarios para el crecimiento hipertrófico y otros procesos anabólicos importantes para estas células. / Testosterone is the principal male sexual hormone, and plays a key role in the development of male reproductive tissues. It has been reported that testosterone induces cardiac hypertrophy, both in vivo and in vitro. One critical step during cardiac hypertrophy development is the induction of glucose uptake to improve energy production during cardiac growth. Although it is known that testosterone induces cardiac hypertrophy, its effect on glucose uptake in cardiomyocytes remains unknown. The hypothesis of this work is that testosterone increases GLUT4-dependent glucose uptake by the activation of the CaMKII/AMPK signaling pathway. Experiments were performed in primary cell culture of neonatal cardiomyocytes. To evaluate testosterone-induced glucose uptake in cardiomyocytes, the fluorescent analog of glucose 2-NBDG (2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxyglucose) and 2-deoxy- [H3] glucose were used. Moreover, participation of the glucose transporter GLUT4, as well as the protein Akt, Ca2+/calmodulin complex dependent protein kinase (CaMKII) and AMP-activated protein kinase (AMPK) were assessed. Testosterone increased both 2-NBDG and 2-deoxy-[H3] glucose uptake (by epifluorescence microscopy and liquid scintillation counting, respectively), reaching a peak after 2 h of testosterone stimulation. Indinavir, a specific GLUT4 blocker, inhibited testosterone-induced glucose uptake in cardiomyocytes. In addition, western blot assays showed that testosterone increased phosphorylation levels of both CaMKII and AMPK, after 15 and 60 min of stimulation, respectively. Moreover, both proteins were crucial for GLUT4 translocation to the plasma membrane and glucose uptake induced by testosterone in cardiomyocytes. Taken together, data showed that testosterone increases GLUT4-dependent glucose uptake through CaMKII/AMPK signaling pathway activation. These findings suggest that testosterone increases glucose uptake in cardiomyocytes, which could be necessary for energy production required for cellular homeostasis, cardiomyocyte growth and other important anabolic process in cardiac cells.

Glicocorticóides modulam a resposta imune de forma complexa em vertebrados expostos a diferentes estressores. Dado que as populações naturais têm estado expostas a uma multiplicidade de estressores, uma melhor compreensão da associação funcional entre a duração e a intensidade da resposta ao estresse, as mudanças resultantes nos níveis dos hormônios esteróides e seu impacto sobre os diferentes aspectos da imunocompetência emergem como um ponto chave para as estratégias de conservação dos vertebrados. Nós investigamos as relações entre os níveis plasmáticos de hormônios esteróides e a imunocompetência inata em anfíbios anuros, incorporando as metodologias de desafio de contenção, elevação experimental dos níveis de corticosterona por aplicação transdérmica, capacidade bactericida por espectrofotometria e o desafio imunológico com fitohemaglutinina. Nossos resultados demonstram que a capacidade bactericida plasmática (CBP) medida por espectrofotometria é um método confiável e preciso para estimar a imunocompetência de anfíbios anuros, além disso, mostramos a existência de uma grande diversidade interespecífica na CBP de anuros machos. Quando quatro diferentes espécies de Bufonídeos foram submetidas a um desafio de contenção, as respostas gerais incluíram aumento dos níveis plasmáticos de corticosterona (CORT) e da relação neutrófilo/linfócito (N:L) e diminuição dos níveis plasmáticos de testosterona (T). As respostas da CBP à contenção foram muito mais variáveis, com R. ictérica mostrando diminuição e R. marina mostrando aumento dos valores de CBP. Adicionalmente, CORT e N:L tenderam a aumentar mais em resposta à contenção com restrição de movimento do que à contenção sem restrição de movimento, indicando que os sapos demostraram um aumento da resposta ao estresse quando submetidos ao estressor mais intenso. Todas as variáveis estudadas mostraram variação interespecífica. Rhinella ornata apresentou os maiores níveis basais de CORT quando comparado com as outras espécies, enquanto R. ornata e R. ictérica mostraram os maiores valores basais de CBP. Entretanto, as mudanças na relação N:L, nos níveis de T e na CBP, não foram correlacionadas com o aumento em CORT, dentro ou entre espécies. A aplicação transdérmica de corticosterona eficientemente simulou eventos repetidos de resposta ao estresse agudo em Rhinella ictérica, sem alterar os parâmetros imunitários, mesmo após treze dias de tratamento. Curiosamente, o cativeiro a longo prazo não atenuou a resposta ao estresse, uma vez que estes sapos mantiveram um aumento de três vezes em CORT mesmo depois de três meses sob estas mesmas condições. Além disso, a manutenção em cativeiro a longo prazo, nas mesmas condições, aumentou a contagem total de leucócitos (TLC) e gerou uma diminuição ainda maior na CBP, sugerindo que as consequências da resposta ao estresse podem ser agravadas pelo tempo em cativeiro. Com base em nossos resultados, consideramos que uma avaliação cuidadosa é necessária para compreender a modulação da resposta imunitária pelo estresse a nível intra e interespecífico. A inclusão de diferentes segmentos da resposta imune é desejável, e a padronização da coleta de dados para todas as espécies sob o mesmo período (em geral, dentro ou fora da época reprodutiva) e mesma atividade (em geral, vocalizando ou forrageando) se faz obrigatória / Glucocorticoids modulate the immune response in complex ways in vertebrates exposed to different stressors. Given that natural populations have been exposed to a multitude of stressors, a better understanding of the functional association between duration and intensity of the stress response, the resulting changes in steroid hormone levels and their impact on different aspects of immunocompetence emerges as a cornerstone for vertebrate conservation strategies. We investigated the relationships between steroids levels and innate immunocompetence in anuran amphibians, incorporating the methodology of restraint challenge, experimental elevation of corticosterone levels by transdermal application, bacterial killing ability by spectrophotometry and the immune challenge with phytohemagglutinin. Our results demonstrate that the bacterial killing ability (BKA) measured by spectrophotometry is a reliable and accurate method to estimate the immunocompetence of anuran amphibians, additionally showed the existence of a large interspecific diversity in BKA from male anurans. When four different species of Bufonids were submitted to a restraint challenge, the general responses included increased in corticosterone plasma levels (CORT) and neutrophil/lymphocyte ratio (N:L) and decreased in testosterone plasma levels (T). The responses of BKA to restraint were much more variable, with R. icterica showing decreased and R. marina showing increased values. Additionally, CORT and N:L tended to increase more in response to restraint with movement restriction than to restraint without movement restriction, indicating that toads showed an increased stress response to the more intense stressor. All variables studied show interspecific variation. Rhinella ornate showed higher baseline CORT when compared to other species, while R. ornate and R. icterica showed the highest baseline BKA values. However, changes in N:L ratio, T levels and BKA, were not correlated to increased CORT within or between species. Transdermal application of corticosterone efficiently mimics repeated acute stress response events in Rhinella icterica, without changing the immune parameters even after thirteen days of treatment. Interestingly, long-term captivity did not mitigate the stress response, since the toads maintained three fold increased CORT even after three months under these conditions. Moreover, long-term captivity in the same condition increased total leukocyte count (TLC) and generated an even greater decrease in BKA, suggesting that consequences of the stress response can be aggravated by time in captivity. Based on our results, we consider that a careful evaluation is necessary in order to understand the modulation of the immune response by stress at intra and interspecific levels. The inclusion of different segments of the immune response is desirable, and a standardized data collection for all the species under the same period (e.g. inside or outside of breeding season) and same activity (e.g. calling or foraging) is mandatory

A partir de estudos sobre o controle endócrino do comportamento reprodutivo em anuros sabemos que diversos aspectos do comportamento vocal e das interações agonísticas nestes animais encontram-se associados a alterações dos níveis hormonais de testosterona e corticosterona. Dentre as espécies de anuros neotropicais de grande interesse para estudos a respeito do controle endócrino do comportamento reprodutivo destaca-se Hypsiboas faber, uma espécie de hilídeo caracterizada pela presença de machos territorialistas, cujas interações agonísticas abrangem uma diversidade de padrões vocais com agressividade escalar, podendo culminar em embate físico, além da construção de ninhos para oviposição e comportamento facultativo de guarda deste ninho. O objetivo deste trabalho foi entender as inter-relações entre os níveis plasmáticos de corticosterona e testosterona, e os comportamentos de vocalização e defesa territorial em machos de H. faber durante a atividade reprodutiva. Tais interrelações foram investigadas através da observação do comportamento durante as atividades vocais, seguidas de coleta de sangue para dosagem hormonal. Contamos adicionalmente com uma abordagem experimental, que consistiu no uso de gravações do coaxo de anúncio (playback), simulando a invasão de outro macho no território dos indivíduos focais, seguida de observação comportamental e coleta de sangue para dosagem hormonal. O estímulo experimental não surtiu qualquer efeito sobre os níveis plasmáticos de corticosterona e testosterona, nem sobre a maior parte das variáveis comportamentais. Conseguimos identificar um padrão de variação sazonal nos níveis de corticosterona e testosterona, bem como uma correlação positiva entre estes hormônios. Adicionalmente, indivíduos que vocalizam a taxas mais altas apresentam níveis mais elevados de corticosterona durante o início da temporada reprodutiva, enquanto níveis mais elevados de testosterona aparecem nos indivíduos mais responsivos a estímulos provindos do entorno social. / From studies on the endocrine control of reproductive behavior in anurans, we know that many aspects of vocal behavior and agonistic interactions of these animals are related to changes in plasma levels of testosterone and corticosterone. Among the species of neotropical frogs of great interest for studies on the endocrine control of reproductive behavior stands out Hypsiboas faber, a hylid characterized by the presence of territorial males, whose agonistic interactions cover a variety of vocal patterns with aggressiveness scale, which may culminate in physical conflict. Males of H. faber also build nests for oviposition and presents optional guard of the nests with eggs. The aim of this study was to understand the interrelationships between plasma levels of corticosterone and testosterone with calling behavior and territorial defense in males of H. faber during reproductive season. These relationships were investigated by focal observations during the vocal activities, followed by blood sampling for hormonal assay. We additionally used an experimental approach, which consisted of using recorded advertisement calls (playback), simulating an invasion of another male in the territory of the focal subjects, followed by behavioral observation and blood sampling for hormonal assay. The experimental stimulus had no effect on plasma levels of corticosterone and testosterone, neither on the majority of behavioral variables. We can identify a pattern of seasonal variation in levels of corticosterone and testosterone, as well as a positive correlation between these hormones. Additionally, individuals who vocalize at higher rates have higher levels of corticosterone during the beginning of reproductive season, while higher levels of testosterone appear in individuals more responsive to stimuli from the social environment.