Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290486.pdf: 1666475 bytes, checksum: bb23fc6e1b917c81adfeef1749eecfa9 (MD5) / O lipopolissacarídeo (LPS) é um componente da parede de bactérias Gram-negativas capaz de induzir respostas inflamatórias sistêmicas pela capacidade de ativar o fator de transcrição nuclear .B (NF-.B). Além do LPS, a presença de citocinas como IFN-., também promovem a ativação do NF-.B. Uma vez que este fator é ativado, inúmeros genes pró-inflamatórios são transcritos, elevando a expressão de citocinas como TNF-a, IL-1, IL-6, IFN-. e a enzima NOS-2. Um dos mecanismos endógenos anti-inflamatórios mais importantes é a ativação de receptores de glicocorticoides (GR). Utilizando um modelo in vitro baseado em aspectos relevantes da sepse, uma doença de cunho inflamatório, mostrou-se que células musculares lisas (CML) de aorta de rato da linhagem A7r5 são ativadas pelo estímulo LPS/IFN produzindo NO, dosado na forma do seu metabólito, nitrito. De forma inédita, observou-se que a ativação das CML depende de um pulso inicial de NO oriundo de NOS constitutivas, uma vez que a inibição do mesmo diminui substancialmente a ativação celular. Além do pulso de NO, ocorre também uma rápida produção de EROs após estimulação das células com LPS. A caracterização e presença de GR funcionais nestas células permitiram o acompanhamento da sua dinâmica após estimulação com LPS/IFN. Surpreendentemente, a estimulação com LPS/IFN induz um aumento na translocação nuclear destes receptores de forma concomitante com a translocação nuclear do NF-.B, cuja intensidade de translocação é parcialmente regulada pelo NO. Outro fator que parece intermediar a translocação nuclear de GR e NF-.B e exercer um papel fundamental no curso da ativação celular é o peroxinitrito, que pode estar sendo formado imediatamente após a estimulação das células pela reação do pulso de NO com o ânion superóxido. Os resultados mostram que o NO e seus derivados desempenham um papel fundamental no início da ativação celular e na translocação nuclear de GR, contribuindo para o entendimento do início do processo de ativação celular.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-14T14:37:43Z No. of bitstreams: 1 Publico-39222.pdf: 1977138 bytes, checksum: fc8aa8b1fdd51076eef8be3cb204c292 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-14T14:39:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-39222.pdf: 1977138 bytes, checksum: fc8aa8b1fdd51076eef8be3cb204c292 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T14:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-39222.pdf: 1977138 bytes, checksum: fc8aa8b1fdd51076eef8be3cb204c292 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Muitos pacientes ainda morrem devido a infecções. Crescentes relatos da literatura atual têm atribuído ao intestino o papel de agravamento de doenças graves, e/ou a sua participação na gênese da sepse por mecanismo de translocação bacteriana (TB). Objetivo: Avaliar de forma cinética a TB e suas repercussões microcirculatórias e imunológicas. Método: Ratos Wistar-EPM (n=162) foram aleatoriamente distribuídos em grupo Sham (n=72) e grupo TB (n=90), e avaliados nos períodos de 2h, 6h, 24h, 72h, 7 e 14 dias, em relação a índice de translocação bacteriana; microscopia intravital; perfusão tecidual; e componentes celulares e humorais da linfa mesentérica por linfograma, citometria de fluxo e CBA-Flex. Resultado: A TB ocorreu somente no grupo TB e foi expressiva nas primeiras 24 horas tornando-se negativa somente com 7 dias. A conseqüência de um episódio de TB repercutiu na celularidade e citocinas pró e antiinflamatórias da linfa mesentérica associado a lesões da microcirculação e hipoperfusão tecidual de forma local e sistêmica. A citometria de fluxo mostrou que a linfa mesentérica eferente pós TB difere significativamente do grupo Sham quanto a número e subpopulação de linfócitos. Conclusão: Um episódio agudo de TB determinou uma recuperação máxima bacteriana com 6 horas e sua completa depuração entre 3 e 7 dias, além de provocar alterações da microcirculação intestinal e sistêmica associadas à ativação do GALT, principalmente no período de permanência das bactérias translocadas no hospedeiro, sendo a via linfática mesenterial uma importante rota na intercomunicação imunológica entre o ambiente intestinal e sistêmico. / Introduction: Many patients still die from infection. Currently, growing evidences have pointed out the role of the gut in the worsening of the critical illness, and/or its participation in the genesis of the bacterial translocation. Objective: Evaluate the bacterial translocation (BT) kinetics and its repercussion on microcirculation and immune response. Method: Wistar-EPM rats (n=162) were randomly distributed in Sham group (n=72) and BT group (n=90), and were monitored at 2h, 6h, 24h, 72h, 7 and 14 days periods in relation to bacterial translocation index, intravital microscopy, tissue perfusion index, and cellular and humoral components of the mesenteric lymph by lymphogram, flow cytometry and CBA-Flex. Results: Bacterial recovery was positive only in BT-group and it was expressive in the first 24 hours, becoming negative only after seven days. The consequences of one episode of BT could be seen in the cellularity and proinflammatory and antiinflammatory citokines of the efferent mesenteric lymph associated to local and systemic microcirculation and tissue hypoperfusion. The flow cytometry showed that efferent mesenteric lymph after BT was significantly different as compared to Sham group in relation to lymphocites number and their subtype. Conclusion: An acute episode of BT determined maximal bacterial recovery at 6h and its complete clearance occurred between 3 and 7 days, in addition to the gut and systemic microcirculation injuries due to the GALT activation, specially at the presence of translocated bacteria in the host, demonstrating the importance of the lymphatic route in the immune crosstalk between the gut and systemic enviroment. / FAPESP: 05/53826-7

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:46Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10861a.pdf: 1594177 bytes, checksum: 4331be569c42350ac8b394dd64505ff3 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:46Z : No. of bitstreams: 2 Publico-10861a.pdf: 1594177 bytes, checksum: 4331be569c42350ac8b394dd64505ff3 (MD5) Publico-10861b.pdf: 1245251 bytes, checksum: 946a07c6a233ca2614cea282bb8d314c (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:46Z : No. of bitstreams: 3 Publico-10861a.pdf: 1594177 bytes, checksum: 4331be569c42350ac8b394dd64505ff3 (MD5) Publico-10861b.pdf: 1245251 bytes, checksum: 946a07c6a233ca2614cea282bb8d314c (MD5) Publico-10861c.pdf: 1168973 bytes, checksum: 52297e627ce7149b800b96678eafb89a (MD5) / Introdução: A monossomia parcial 5p (síndrome de cri-du-chat) e a trissomia parcial 5p são síndromes bem caracterizadas clinicamente com vários casos descritos na literatura. No entanto, este é o primeiro estudo citogenético -molecular e clínico com as duas síndromes presentes em uma mesma família. No presente estudo existe onze afetados vivos com a monossomia ou trissomia parcial 5p. decorrente de uma translocação equilibrada t(5;15)(p13;p12) parental. Objetivos: Este trabalho teve como objetivos: realizar a identificação citogenética e clínica dos casos com monossomia e trissomia 5p na família e dos indivíduos portadores da translocação na forma equilibrada; produzir subsídios para o aconselhamento genético da família; avaliar as variações fenotípicas intra-familial e a correlação genótipo-fenótipo na monossomia 5p e trissomia 5p e determinar o ponto de quebra envolvido na translocação; . Casuística e métodos: Quatro gerações de uma família. A avaliação citogenética foi realizada por culturas de linfócitos e posterior bandamento G TG e NOR. A técnica de Hibridação in situ por fluorescência (FISH) utilizando clones de BACs foi utilizada para a determinação do ponto de quebra em 5p. Resultados: Foram identificados seis indivíduos com a monossomia parcial 5p e cinco com a trissomia parc ial 5p, apresentando cariótipos: 46,XX ou XY,der(5)t(5;15)(p13;p12) e cariótipo 46,XX ou XY,der(15)t(5;15)(p13;p12), respectivamente , além de sete portadores da translocação equilibrada, seis deles com filhos afetados. Após a utilização de 12 clones de BACs o ponto de quebra foi mapeado na região correspondente ao BAC RP11 -1079N14 em 5p13.3, resultando em deleção ou duplicação de cerca de 32 Mb nos pacientes em questão. A avaliação clínica intrafamilial dos portadores da monossomia 5p demonstrou que estes pacientes apresentam a maioria das características descritas na síndrome de cri-du-chat, enquanto que nos pacientes com a trissomia 5p existe uma maior heterogeneidade clínica, comparado aos casos da literatura, decorrente da região em triplicata presente na família estudada. Conclusões: O estudo identificou os indivíduos com monossomia ou trissomia 5p e os possíveis portadores da translocação na forma equilibrada possibilitando o aconselhamento genético da família. Por haver vários indivíduos afetados e, por ter sido identificado o ponto de quebra, foi possível uma melhor caracterização clínica das duas síndromes e uma maior correlação do segmento cromossômico em desequilíbrio com as alterações fenotípicas. / Introduction: Partial monosomy 5p (Cri du Chat syndrome) and partial trisomy 5p are clinically well characterized syndromes, with several cases described in the literature. This, however, is the first molecular-cytogenetic and clinical study with both syndromes present in the same family. We describe eleven alive affected individuals with partial 5p monosomy or trisomy resulting from a parental balanced translocation t(5;15)(p13;p12). Objectives: The objectives of this work were to identify cytogenetically and clinically the 5p monosomy and trisomy cases and the carriers of the balanced translocation in the family, to determine molecularly the breakpoint involved in the translocation, to evaluate the intrafamilial phenotypic variations, to establish a genotype-phenotype correlation in 5p monosomy and trisomy, and to provide genetic counseling to the family. Casuistic and methods: Four generations of a family were studied. Cytogenetic evaluation was performed on G- and NOR-banded cultured lymphocytes. The fluorescence in situ hybridization (FISH) technique with bacterial artificial chromosome (BAC) probes was used to determine the breakpoint on 5p. Results: Six individuals with partial 5p monosomy and five with partial 5p trisomy were identified, presenting the karyotypes 46,XX or XY,der(5)t(5;15)(p13;p12) and 46,XX or XY,der(15)t(5;15)(p13;p12), respectively. Seven carriers of the balanced translocation were identified, six of them with affected children. After using 12 BAC probes, the breakpoint was mapped to the region corresponding to BAC RP11-1079N14, at 5p13.3, resulting in a deletion or duplication of about 32 Mb in the studied patients. The intrafamilial clinical evaluation of the patients with 5p monosomy showed that they presented most of the characteristics described in the cat eye syndrome, whereas the patients with 5p trisomy displayed a greater clinical variability, compared to the cases from the literature. Conclusions: The study identified the individuals with 5p monosomy and trisomy and the carriers of the balanced translocation, thus enabling to provide genetic counseling to the family. The determination of the breakpoint and of the unbalanced chromosome segment made it possible to establish a more precise karyotype-phenotype correlation and to better characterize the partial 5p monosomy and trisomy syndromes. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A translocação recíproca é o rearranjo equilibrado mais comum em humanos. Frequentemente, indivíduos com rearranjos equilibrados não apresentam manifestações clínicas, entretanto, na meiose, o pareamento entre cromossomos translocados forma uma figura quadrivalente em forma de cruz que torna a disjunção cromossômica incerta e dependendo do rearranjo, o individuo pode vir a ser infértil, apresentar um risco aumentado de abortamento espontâneo e/ou da prole apresentar alterações fenotípicas. Neste projeto, investigamos duas famílias de pacientes inférteis, portadores de translocações cromossômicas. O objetivo foi caracterizar as alterações citogenéticas e citogenômicas relacionadas à infertilidade masculina em pacientes portadores de rearranjos aparentemente equilibrados, associando técnicas de citogenética clássica (bandeamento GTG), citogenética molecular (FISH) e citogenômica (array-CGH). Foram estudados sete indivíduos da família 1, sendo diagnosticados três portadores da translocação (X;22), sendo um deles azoospérmico. Nesta família foram ainda detectados dois casos de mosaicismo para síndrome de Turner. A família 2 foi composta por dois irmãos oligozoospérmicos, portadores de translocação (8;13). Com a aplicação da técnica de FISH, definimos o cariótipo final dos portadores dos rearranjos como 46,XX ou 46,XY,t(X;22)(p22.3;q11.2) para a família 1 e 46,XY,t(8;13)(q13;q14)para a família 2. A técnica de array-CGH (plataforma 2x400K, Agilent) detectou alterações no número de cópias de alguns genes candidatos relacionados ao fenótipo de infertilidade, sendo a sequência 132 de piRNAs, os genes DDX11, Jagged 2 e ADAM18 na família 1 e os genes candidatos ADAM18 e POTE nos pacientes da família 2. / Reciprocal translocations are the most common balanced rearrangement in humans. Often individuals with balanced rearrangements show no clinical findings. However, in meiosis, the pairing between translocated chromosomes forms a quadrivalent cross-shaped figure which has the effect of making chromosome disjunction uncertain and, depending on the rearrangement, and on the segregation of the unbalanced chromosomes, the individual can be infertile, can present with an increased risk of spontaneous abortions or can have an offspring with abnormal phenotype. We have studied two families of infertile patients, who were carriers of chromosomal translocations. The objective was to characterize the cytogenetic and cytogenomic alterations related to male infertility in patients with apparently balanced rearrangements using classical cytogenetic techniques (GTG banding), molecular cytogenetics (FISH) and cytogenomics (array-CGH). Seven subjects of the family 1 were studied, including three carriers of translocation (X;22), one azoospermic. Two cases of mosaicism for Turner syndrome were detected in this family. The second family consisted of two oligozoospermic brothers with translocation (8;13). FISH was used to characterize the karyotypes as 46, XX or 46,XY, t(X;22)(p22.3;q11.2) for the members of the family 1 and 46,XY,t(8;13)(q13;q14) for family 2. Array-CGH was also performed using the Agilent platform 2x400K, to detect associated copy number variations of some of the candidate genes that could be related to infertility. In the family 1 the candidate genes were 132 piRNAs sequences and DDX11,Jagged 2 and ADAM18 genes. The candidate genes for the family 2 were ADAM18 and POT.

PGC-1 é uma família de coativadores de fatores de transcrição que controlam a expressão de diversos genes envolvidos na homeostase energética celular. As isoformas PGC-1 e estão presente em tecidos com alto metabolismo oxidativo e são capazes de aumentar biogênese mitocondrial, -oxidação de ácidos graxos e gliconeogênese em resposta à exposição ao frio, jejum e exercício. Inicialmente mostramos que macrófagos in vitro aumentaram a expressão de PGC-1 após 1h da exposição à zymosan. Com isso, hipotetizamos que PGC-1 poderia ter sua expressão aumentada em resposta a um insulto bacteriano. Para verificar nossa hipótese analisamos a expressão de PGC-1 em um modelo de pancreatite aguda (PA), caracterizada por uma forte resposta inflamatória estéril inicial, seguida, após poucos dias, por translocação bacteriana intestinal e infecção disseminada. PA foi induzida por infusão retrograda de taurocolato de sódio (2,5%). Também analisamos PGC-1 em um modelo de sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP), cujo conteúdo intestinal é depositado no peritôneo, causando infecção grave local e disseminada. Animais tratados com Imipenem durante 48h após PA também foram analisados, bem como a interferência de PGC-1 ASO no processo de fagocitose. A expressão de PGC-1 e foi medida por PCR quantitativo. PA foi confirmada pelo aumento da amilase sérica e a inflamação sistêmica ratificada por leucocitose. PGC1 aumentou no baço e nos leucócitos circulantes 48h após PA e no lavado peritoneal 24h após PA e CLP. No entanto, PGC1 diminuiu no baço 24h após PA. Tratamento com Imipenem diminuiu PGC- 1. A diminuição de PGC-1 após transfecção com ASO levou à redução do processo de fagocitose. Assim, concluímos que ocorre aumento de PGC-1 na presença de bactérias e esse aumento está relacionado com fagocitose / PGC1 is a family of transcriptional coactivators that controls the expression of several genes involved in cell energy homeostasis. PGC1 isoforms and are present in tissues with high oxidative metabolism and are able to enhance mitochondrial biogenesis, -oxidation of fatty acids and gluconeogenesis in response to exposure to cold, fasting and exercise. Initial results showed macrophages in vitro present increased PGC-1 expression after 1h exposure to zymosan. Thus, we hypothesized that PGC-1 could be up-regulated in response to bacterial insult. We tested our hypothesis following PGC-1 expression in an acute pancreatitis (AP) model, characterized initially by a strong sterile inflammatory response, followed, few days later, by bacterial intestinal translocation and disseminated infection. AP was induced by retrograde infusion of sodium taurocholate (2.5%). We also analysed PGC-1 in a model of sepsis by cecal ligation and puncture (CLP), whose intestinal content is deposited in the peritoneum, causing a severe local and disseminated infection. Animals submitted to PA and treated with Imipenem for 48 hours were also analyzed, as well as the interference of PGC-1 ASO in phagocytosis process. PGC-1 and expression were measured by quantitative PCR. AP was confirmed by increased blood amylase and the systemic inflammation was noted by leukocytosis after 48h. PGC1 was increased in spleen and circulating leukocytes 48h after AP and in peritoneal lavage 24h after AP and CLP. On the other hand, PGC1 was decreased in spleen 24h after AP induction. Imipenem treatment decreased PGC-1. The decreased of PGC-1 after ASO transfection led to a reduction of phagocytosis process. Thus, we conclude there is a PGC-1 increase in bacterial presence and this increase is related to phagocytosis

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hugo Freire Nunes.pdf: 9223555 bytes, checksum: 727e689aec4609cbe403ed62b05a1443 (MD5) Previous issue date: 2011-02-11 / Healthy radio-exposed individuals, who received low levels of Cesium-137 radiation, during the accident that happened in Goiania, in 1987 and their familiars were tested for the detection of t(14;18) rearranged B cells in peripheral blood, using a high sensitive real-time quantitative PCR method. Also were tested a control group comprised of healthy non exposed age matched men. The chromosomal translocation t(14;18)(q32;q21) is characteristic of Follicular Lymphoma and it is a frequent abnormality in other types of non-Hodgkin lymphoma. This translocation leads to constitutive activation of the BCL2 oncogene by the enhancers of the immunoglobulin heavy chain loco. T(14;18) translocation constitute the genetic hallmark and early initiating event of Follicular Lymphoma. In healthy individuals, the same translocation may also be found in a small fraction of peripheral blood lymphocytes and positive cells might serve as an indicator for environmental exposure to carcinogens and possibly correlate with the cumulative risk of developing t(14;18)-positive non-Hodgkin lymphoma. Eight healthy radio-exposed, five relatives including three children, and four not exposed healthy men were tested for the detection of this translocation. Only one unexposed individual from the control group was positive for the chromosomal translocation, healthy radio-exposed individuals presented lower levels of cells bearing the BCL-2/JH rearrangement when compared to the levels of the patients with Follicular Lymphoma before treatment, however, test more cells would be required to confirm the total absence of circulating cells bearing the rearrangement BCL2/JH. / Indivíduos radioexpostos saudáveis que receberam acidentalmente baixas doses de radiação ionizante de Césio -137 no acidente ocorrido em Goiânia em 1987 e familiares, foram testados neste trabalho para a presença de células B em sangue periférico apresentando a translocação t(14;18) MBR. Da mesma maneira foram testados voluntários sem histórico de exposição à radiação ionizante, componentes de um grupo controle. Foi utilizado um método de PCR quantitativo em tempo real muito sensível. A translocação cromossômica t(14;18)(q31; q21) é característica de Linfomas Foliculares e é uma anormalidade freqüente em outros Linfomas não Hodgkin. Esta translocação acarreta em uma ativação constitutiva do oncogene BCL2 por uma região do gene de imunoglobulina de cadeia pesada. A ocorrência da translocação é considerada um evento marcante e inicial para o desenvolvimento de Linfoma Folicular. Em indivíduos saudáveis a mesma translocação pode ser encontrada em pequenas frações dentre os linfócitos de sangue periférico. As células translocadas são importantes referências para exposição ambiental à carcinógenos e possivelmente podem ser correlacionadas ao risco acumulativo de desenvolvimento de Linfoma não Hodgkin t(14;18) positivo. Oito radio expostos, cinco familiares e quatro voluntários não expostos foram testados para a detecção desta translocação cromossômica. Não foram encontras células t(14;18) MBR nos radioexpostos e familiares. Apenas um indivíduo não exposto pertencente ao grupo controle apresentou o rearranjo BCL2/JH, assim foi possível determinar com o estudo que os radioexpostos e familiares não apresentam freqüência da célula B t(14;18) similares das encontradas em média no sangue periférico de indivíduos com Linfoma Folicular antes do tratamento segundo outros estudos, entretanto apenas testando maiores quantidades de DNA de cada indivíduo será possível determinar abstenção total de células portando o rearranjo BCL2/JH

PGC-1 é uma família de coativadores de fatores de transcrição que controlam a expressão de diversos genes envolvidos na homeostase energética celular. As isoformas PGC-1 e estão presente em tecidos com alto metabolismo oxidativo e são capazes de aumentar biogênese mitocondrial, -oxidação de ácidos graxos e gliconeogênese em resposta à exposição ao frio, jejum e exercício. Inicialmente mostramos que macrófagos in vitro aumentaram a expressão de PGC-1 após 1h da exposição à zymosan. Com isso, hipotetizamos que PGC-1 poderia ter sua expressão aumentada em resposta a um insulto bacteriano. Para verificar nossa hipótese analisamos a expressão de PGC-1 em um modelo de pancreatite aguda (PA), caracterizada por uma forte resposta inflamatória estéril inicial, seguida, após poucos dias, por translocação bacteriana intestinal e infecção disseminada. PA foi induzida por infusão retrograda de taurocolato de sódio (2,5%). Também analisamos PGC-1 em um modelo de sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP), cujo conteúdo intestinal é depositado no peritôneo, causando infecção grave local e disseminada. Animais tratados com Imipenem durante 48h após PA também foram analisados, bem como a interferência de PGC-1 ASO no processo de fagocitose. A expressão de PGC-1 e foi medida por PCR quantitativo. PA foi confirmada pelo aumento da amilase sérica e a inflamação sistêmica ratificada por leucocitose. PGC1 aumentou no baço e nos leucócitos circulantes 48h após PA e no lavado peritoneal 24h após PA e CLP. No entanto, PGC1 diminuiu no baço 24h após PA. Tratamento com Imipenem diminuiu PGC- 1. A diminuição de PGC-1 após transfecção com ASO levou à redução do processo de fagocitose. Assim, concluímos que ocorre aumento de PGC-1 na presença de bactérias e esse aumento está relacionado com fagocitose / PGC1 is a family of transcriptional coactivators that controls the expression of several genes involved in cell energy homeostasis. PGC1 isoforms and are present in tissues with high oxidative metabolism and are able to enhance mitochondrial biogenesis, -oxidation of fatty acids and gluconeogenesis in response to exposure to cold, fasting and exercise. Initial results showed macrophages in vitro present increased PGC-1 expression after 1h exposure to zymosan. Thus, we hypothesized that PGC-1 could be up-regulated in response to bacterial insult. We tested our hypothesis following PGC-1 expression in an acute pancreatitis (AP) model, characterized initially by a strong sterile inflammatory response, followed, few days later, by bacterial intestinal translocation and disseminated infection. AP was induced by retrograde infusion of sodium taurocholate (2.5%). We also analysed PGC-1 in a model of sepsis by cecal ligation and puncture (CLP), whose intestinal content is deposited in the peritoneum, causing a severe local and disseminated infection. Animals submitted to PA and treated with Imipenem for 48 hours were also analyzed, as well as the interference of PGC-1 ASO in phagocytosis process. PGC-1 and expression were measured by quantitative PCR. AP was confirmed by increased blood amylase and the systemic inflammation was noted by leukocytosis after 48h. PGC1 was increased in spleen and circulating leukocytes 48h after AP and in peritoneal lavage 24h after AP and CLP. On the other hand, PGC1 was decreased in spleen 24h after AP induction. Imipenem treatment decreased PGC-1. The decreased of PGC-1 after ASO transfection led to a reduction of phagocytosis process. Thus, we conclude there is a PGC-1 increase in bacterial presence and this increase is related to phagocytosis

314f. / Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-03-25T18:04:18Z No. of bitstreams: 1 Brondani%20Dissertacao.pdf: 4102928 bytes, checksum: d8ef393abc9da627b34778bd2f26563c (MD5) / Approved for entry into archive by Ednaide Gondim Magalhães(ednaide@ufba.br) on 2013-04-10T13:31:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Brondani%20Dissertacao.pdf: 4102928 bytes, checksum: d8ef393abc9da627b34778bd2f26563c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-10T13:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brondani%20Dissertacao.pdf: 4102928 bytes, checksum: d8ef393abc9da627b34778bd2f26563c (MD5) Previous issue date: 2010 / A presente tese vem apresentar uma pesquisa que possui como ponto de partida as teorias sobre imagem e imaginário, em Bachelard, apoiando-se, também, na ideia bachelardiana de um Fundo Comum dos Sonhos que se perpetua e se renova através de um DNA imaginal que punge a realidade por meio dos impulsos criativos e atitudes lúdicas, agindo no corpo do pesquisator, através de um processo de imaginação e de, segundo Lecoq, um Fundo Poético Comum. Tais processos de pungências, na realidade objetiva, alastram-se rizomaticamente por toda a história da humanidade, não tendo limites de tempo, cultura, espaço e território. Advindo de uma esfera imaterial, mas sensível, o DNA imaginal conecta-se aos Bufões, às manifestações espetaculares populares brasileiras e às máscaras dell’arte e é, principalmente, através dele e da formação de circuitos musculares e energéticos, que é possível acessar as máscaras da commedia dell’arte, fazendo um transcurso pelas técnicas do Bufão, de translocação e transdução caleidoscópicas. / Salvador

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-11T17:18:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1845175 bytes, checksum: 81666d114b976fa74a0143514c789a59 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T17:18:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1845175 bytes, checksum: 81666d114b976fa74a0143514c789a59 (MD5) Previous issue date: 2005-05-24 / Em plantas, a energia luminosa é transformada em energia química na forma de carboidratos, os quais são alocados entre os diferentes tecidos vegetais através do floema. Durante este processo, a sacarose, principal carboidrato transportado em plantas superiores, é “carregada” e “descarregada” no floema com o auxílio de transportadores localizados na membrana plasmática. A proteína SBP (“sucrose binding protein”) foi inicialmente identificada pela sua capacidade em ligar a sacarose e, pelo menos, dois homólogos da proteína, SBP1 e SBP2, têm sido descritos em soja. Neste trabalho, nós analisamos a função de SBP2 em plantas transgênicas de tabaco expressando o cDNA na orientação antisenso e caracterizamos os cis-elementos presentes no promotor que controlam a expressão espacial do gene SBP. Plantas anti- senso na geração T2 apresentaram crescimento e desenvolvimento reduzidos. Este fenótipo, característico de plantas com inibição do transporte de sacarose a longa distância, foi associado a alterações fisiológicas e metabólicas ocorridas, principalmente, na fase vegetativa do desenvolvimento. As plantas apresentaram reduzida fotossíntese e alteração no particionamento de carboidratos, com preferência para o acúmulo de amido nas folhas em detrimento à síntese de sacarose. Nossos dados suportam a hipótese que SBP provavelmente atua no transporte de sacarose a longa distancia no floema, alterando a expressão ou a atividade de proteínas envolvidas em sistemas alternativos de transporte de carboidratos, já que a manipulação dos níveis de SBP também alterou a atividade da invertase e da sintase da sacarose. Consistente com o papel da proteína no transporte de sacarose, um fragmento de 2 kb do promotor de SBP2 dirigiu a expressão do gene repórter de β- glicuronidase (GUS) para as células do floema de folhas, caules e raízes. A caracterização dos cis-elementos presentes no promotor de SBP2 foi realizada por deleções sucessivas na região 5’ e por deleções internas. A deleção da seqüência de - 2000 a -703 causou o acúmulo de GUS em todos os tecidos de folhas, caule e raízes analisados, indicando a presença de cis-elementos que reprimem a atividade do promotor em tecidos, que não o floema, a jusante da posição -703 pb. Deleções sucessivas até a posição -92 indicaram que a atividade tecido-específica do promotor é coordenada pela interação complexa entre elementos negativos e positivos. De fato, elementos negativos fortes foram identificados na seqüência delimitada pelas posições -495 e -370, os quais foram confirmados por experimentos de ganho de função, e também, entre -243 e -193. Foi identificada também uma região silenciadora do meristema radicular na região entre -136 e -92. Uma seqüência curta de 92pb a partir do códon de iniciação de tradução foi capaz de manter altos níveis de expressão basal em todos os tecidos analisados e, portanto, provavelmente representa um promotor eucariótico mínimo em plantas. / The plants are autotrophic organisms with specialized organs that transform the sun light energy in chemical energy as organic compounds, the carbohydrates, which are transported in part to the other organs by phloem. In plants, sucrose is the major transported form of photoassimilated carbon and its translocation involves loading and unloading of the phloem by membrane specific transporters. A sucrose binding protein, SBP, was initially identified by its capacity to bind sucrose and, at least, two SBP homologues, SBP1 and SBP2, have been described in soybean. Here, we analyzed the SBP2 homologue function in tobacco transgenic plants expressing the cDNA in the antisense orientation and characterized the cis-acting elements involved in spatial regulation of the SBP2 promoter. Typical phenotypes of an inhibition of long distance sucrose translocation were observed in the antisense T2 transgenic lines. In general, the growth and development of the transgenic lines was retarded when compared with control plants. This growth-related phenotype was associated with physiological and metabolic alterations during the early plant development. The photosynthetic rate was decreased and the leaf starch content was higher in antisense lines in comparison with control plants. Our data support the hypothesis that SBP may have a regulatory role in phloem sucrose transport by regulating the expression or activity of alternative carbohydrate uptake systems, since the manipulation of the level of the SBP homologue also altered invertase activity and sucrose synthase activity. Consistent with the involvement of SBP in long-distance sucrose transport, the SBP promoter directed the expression of the β-glucuronidase (GUS) reporter gene with high specificity to phloem of leaves, stems and roots of the transgenic tobacco plants. In order to identify potential cis-regulatory elements controlling the spatial expression of SBP promoter, we performed 5’ and internal deletion promoter analyses in transgenic tobacco. The repression of the SBP2 promoter activity in all other tissues of root, stem and leaf is alleviated by deletion of sequences upstream of -703. This indicates that the phloem-specific expression of SBP2 promoter is contributed by tissue-specific silencers in distal sequences as well as phloem-specific elements within proximal sequences of SBP2 promoter. Further deletions of 5’ flanking sequences indicate that SBP2 promoter activity and tissue-specificity is coordinated by negative and positive combinatorial modules that interact to each other in a complex way. Strong negative elements were found in sequences delimited by positions -495 to -370, which were further confirmed by gain-of-function experiments and also between positions -243 and -193. In addition, a root meristem-specific silencer was identified within the region between -136 and -92. A short sequence, spanning from -92 to the start codon, was able to maintain high level of basal expression and may represent a potential eukaryotic minimal promoter. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-03T12:16:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 491553 bytes, checksum: 138fa47ef938ed8448468cac3a6815bd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T12:16:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 491553 bytes, checksum: 138fa47ef938ed8448468cac3a6815bd (MD5) Previous issue date: 2002-10-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram avaliadas quatro variedades de café arábica (Acaiá IAC-474-19, Icatu Amarelo IAC-3282, Rubi MG-1192 e Catuaí Vermelho IAC-99) quanto à produtividade e eficiência nutricional. O experimento foi conduzido em Viçosa – MG, em condições de campo, no delineamento experimental em blocos completos casualizados envolvendo quatro variedades, quatro repetições e três níveis de adubação (baixo, normal e alto). As parcelas úteis constituíram-se de nove plantas com espaçamento de 2 x 1 m. Determinaram-se os teores e conteúdos de N, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu e Zn em raízes, caule, ramos, folhas e frutos de uma planta com trinta e um meses de idade, em cada parcela experimental. Avaliaram-se a produtividade, eficiência agronômica, eficiência de produção de raízes, eficiência de absorção de nutrientes, eficiência de translocação de nutrientes, eficiência de utilização de nutrientes e eficiência de recuperação de macronutrientes. A variedade Icatu Amarelo IAC-3282 foi a mais produtiva no ambiente com restrição de nutrientes, enquanto as variedades Rubi MG-1192 e Catuaí Vermelho IAC-99 mostraram-se mais produtivas em ambientes com alto suprimento de nutrientes. Por sua vez, a variedade Acaiá IAC-474-19 apesar de responder positivamente à adubação, foi menos produtiva que as demais, principalmente no nível baixo de adubação. A melhor produtividade do Icatu Amarelo IAC-3282 no nível baixo de adubação pode ser devido à sua alta eficiência de utilização de P, enquanto as elevadas produtividades do Rubi MG-1192 e do Catuaí Vermelho IAC-99 no nível alto de adubação podem estar relacionadas às suas altas eficiências de utilização de nutrientes para produção de frutos. Estudaram-se, ainda, as correlações entre eficiências nutricionais por meio da análise de trilha. Encontraram-se altas correlações entre a eficiência de utilização (EUB) e de absorção (EAB) de boro, as quais medem relação de causa e efeito, pela elevada magnitude da estimativa de EUB sobre EAB. / This study was carried out under field conditions, in Viçosa - MG, Brazil, to evaluate the productivity and nutritional efficiency of four Coffea arabica cultivars: Acaiá IAC-474-19, Icatu Amarelo IAC-3283, Rubi MG-1192, and Catuí Vermelho IAC-99. The contents of N, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu and Zn were determined in the roots, stem, branches, leaves and fruits of a 31-month old coffee plant in each experimental plot. The productivity and agronomic efficiency were evaluated, as well as the efficiencies of root yield, nutrient uptake, nutrient translocation, and nutrient utilization. The Icatu Amarelo IAC- 3283 cv. showed to be more productive under nutrient restriction, whereas the cultivars Rubi MG-1192 and Catuaí Vermelho IAC-99 were productive under high nutrient inputs. Although showing a positive response to fertilization, the Acaiá IAC-474-19 cv. was less productive than the other ones, mainly at low fertilization level. The better productivity of the Icatu Amarelo IAC-3283 cv. at low fertilization level might be due to its high efficiency in using P, while the high productivities of Rubi MG-1192 and Catuaí Vermelho IAC-99 at the high level of fertilization might be related to their high efficiencies in using the nutrients for fruit production.