No Rio Grande do Sul (RS), uma cepa de Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) foi identificada como o principal microrganismo causador de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA), nos últimos anos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a multiplicação e a recuperação da S. Enteritidis SE86 em diluentes, meios de cultura e métodos de semeadura, após a exposição ao Dicloroisocianurato de sódio (NaDCC). Em um primeiro momento, o microrganismo foi ativado em caldo BHI e exposto a 200ppm de NaDCC, por cinco minutos. Em seguida, ele foi diluído em diferentes soluções, as quais foram armazenadas a 7º C e 30º C, separadamente, sendo amostradas e analisadas microbiologicamente, a cada hora, durante seis horas. Em um segundo momento, foi avaliada a recuperação do microrganismo, antes e após exposição ao NaDCC, através de semeadura em superfície e pelo método da Camada Fina de Ágar (Thin Agar Layer - TAL), em cinco diferentes meios de cultura [Agar Triptona de Soja (TSA), Agar Verde Brilhante Manitol Lisina Cristal de Violeta (MLCB), Agar Verde Brilhante (BGA), Agar Salmonella Shigella (SS) e Agar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD)]. Na terceira fase do estudo, foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de dois outros sorovares de Salmonella, além da S. Enteritidis SE86, utilizando o diluente, o meio de cultura e o método de semeadura que demonstraram os melhores resultados nas fases antecedentes. Os resultados demonstraram que houve multiplicação significativa (P < 0,05) da S. Enteritidis SE86 não exposta ao NaDCC, armazenada a 30º C, nos diluentes Água peptonada (P), Água peptonada + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (P + N), Solução salina + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (SaS + N) e Água peptonada + Solução salina (P + SaS). O diluente Solução salina (SaS) não propiciou multiplicação durante as seis horas de incubação, mas manteve as células viáveis, sendo, portanto, escolhido para os demais experimentos. Células expostas e não expostas ao NaDCC não foram capazes de se multiplicar em nenhum dos diluentes testados, a 7º C. Da mesma forma, após exposição ao NaDCC, nenhuma multiplicação significativa foi observada nos diluentes armazenados a 30º C. Não houve diferença significativa (P < 0,05) nas contagens de S. Enteritidis SE86 exposta ao NaDCC quando semeada em TSA, meios seletivos ou meios seletivos adicionados de sobre camada de TSA (TAL). O meio XLD foi escolhido para os demais experimentos, uma vez que permitiu praticamente a mesma multiplicação que o meio TSA. Quando foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium e S. Bredeney, expostas e não expostas ao NaDCC, diluídas em SaS e semeadas em TSA, XLD e XLD + sobre camada de TSA (TAL), não houve diferença significativa entre as contagens de células obtidas nos meios e no TAL, sugerindo que a semeadura direta em XLD pode ser um método adequado para a quantificação de Salmonella exposta ao NaDCC, em condições laboratoriais. / In Rio Grande do Sul State (RS), a strain of Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) was identified as the main causative microorganism of foodborne diseases, in recent years. The aim of this study was to evaluate diluents, media and plating methods for growth and recovery of this pathogen, after exposure to Sodium dichloroisocyanurate (NaDCC). At first, the microorganism was exposed to 200 mg kg-1 NaDCC by five minutes. Then it was diluted in different diluent solutions, which were stored at 7º C and 30° C, separately, being sampled and microbiologically analyzed for six hours. In a second step, the recovery of the microorganism before and after exposed by NaDCC was evaluated, through surface plating method and Thin Layer Agar (TAL) method, in five different culture media [Tryptic Soy Agar (TSA), Mannitol Lysine Crystal Violet Brilliant Green Agar (MLCB); Brilliant Green Agar (BGA), Salmonella Shigella Agar (SS) and Xylose Lysine Desoxychole Agar (XLD)]. In the third phase of this study, the growth and recovery of S. Enteritidis SE86 and two other serovars of Salmonella were evaluated, using the diluent, the culture medium and plating method that showed the best results in previous phases. The results showed significant multiplication (P < 0.05) of S. Enteritidis SE86 not exposed to NaDCC, stored at 30 °C, in diluents Peptone water (P), Peptone water + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (P + N), Saline solution + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (SaS + N) and Peptone water + Saline solution (P + SaS). Saline solution (SaS) did not sustain bacterial multiplication, but maintained viable cells, being chosen for the next experiments. Exposed and not exposed cells were not able to multiply in any of the diluents at 7º C during six hours of storage. After NaDCC exposure, no significant multiplication was observed in any of the diluents stored at 30º C. No significant difference (P < 0,05) in growth of S. Enteritidis SE86 exposed to NaDCC was observed on TSA, selective medium or on selective media overlayed with TSA (TAL). The XLD medium was chosen for the next experiments, since it allowed the same multiplication that TSA. When the multiplication and recovery of exposed and not exposed S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium, and S. Bredeney were evaluated after dilution in SaS and plating on TSA, XLD, and XLD overlayed with TSA, there was no significant difference in counts obtained on media and TAL, suggesting that direct plating on XLD could be an adequate method for the quantification of Salmonella exposed to NaDCC, under laboratory conditions.

No Brasil existem poucos relatos sobre casos de Shigelose, um fator que contribui com o pouco conhecimento a respeito dessa doença. Além disso, a falta de obrigatoriedade por parte da legislação vigente em relação à pesquisa de Shigella tem contribuído com este fato. O presente trabalho teve por objetivo isolar, identificar e caracterizar isolados de Shigella envolvidas em surtos alimentares ocorridos no Rio Grande do Sul, além de comparar tais isolados de alimentos com amostras isoladas de fezes de pacientes com diarréia envolvidos nesses surtos. Após a identificação, os isolados foram submetidos à caracterização por suscetibilidade a antimicrobianos e PCR-Ribotipificação. Entre agosto de 2007 e agosto de 2008, foram isoladas três linhagens de Shigella (2 S. flexneri e 1 S. sonnei) a partir de placas de meio de cultura utilizadas pela FEPPS/LACEN/RS para pesquisa de Salmonella em alimentos suspeitos. Uma vez que a análise foi considerada negativa para a presença Salmonella, o resultado nas estatísticas epidemiológicas do RS possivelmente foi expresso como "agente do surto não identificado". Das 149 linhagens de Shigella isoladas pelo mesmo órgão, entre 2003 e 2007, 71,14 % foram identificados como S. flexneri, 21,48% como S. sonnei, 0,67% como S. dysenteriae e 6,71% foram classificados apenas como Shigella sp. Os resultados também demonstraram um aumento no percentual de isolados de S. sonnei, que em 2003 era nulo e em 2007 foi de 43,48 %, ao mesmo tempo o percentual de isolados de S. flexneri passou de 100% em 2003 para 47,83% em 2007. Em relação ao teste de resistência a antimicrobianos os isolados provenientes de fezes (n=149) demonstraram altas percentagens de resistência, sendo que as maiores foram observadas contra estreptomicina (88,59%), ampicilina (84,56%) e sulfametoxazol-trimetoprim (80,53%). Os maiores percentuais de sensibilidade foram para ciprofloxacina (96,64%), ácido nalidíxico (89,26%) e gentamicina (83,22 %). A resistência múltipla foi verificada em 90,19% dos isolados. Dos 73 perfis de resistência encontrados, 82,23 % apresentaram resistência a pelo menos três antimicrobianos. Seis perfis agruparam mais de quatro isolados (A, B, C, D, E e F). O mais resistente dos isolados de alimentos apresentou resistência à gentamicina e resistência intermediária à tetraciclina e ao cloranfenicol. Quando os isolados de Shigella foram submetidos à PCR-Ribotipificação, somente três perfis (SH1, SH2 e SH3) foram identificados. O perfil SH1 agrupou 76,31% dos isolados (todos S. flexneri) e o perfil SH2 agrupou 23% dos isolados (todos S. sonnei). De acordo com os resultados, várias linhagens de Shigella apresentaram o mesmo padrão de bandas na PCR-Ribotipificação e também o mesmo perfil de resistência, sugerindo tratar-se da mesma linhagem de Shigella; Os resultados obtidos no presente estudo indicam a necessidade do monitoramento contínuo da resistência da Shigella e também que a PCRRibotipificação pode ser útil na investigação de surtos de Shigeloses alimentares. / In Brazil, there are few reports about foodborne Shigellosis and the Brazilian regulation do no requires compulsory investigation for Shigella in foods, contributing to the lack of knowledge about this disease. The objective of the present study was to isolate, identify and characterize isolates of Shigella involved in outbreaks occurred in Rio Grande do Sul (RS), Southern Brazil, and compare the strains isolated from foods with those isolated from fecal stools of foodborne shigellosis victims. Food isolates were sampled between August 2007 and August 2008 from plates of selective medium used for Salmonella detection in suspect foods analysed by official Laboratory of RS (FEPPS/LACEN/RS), while fecal isolates were isolated from victim stools analysed between 2003 and 2007 by the same Laboratory. Bacterial samples were identified by FEPPS/LACEN/RS and submitted to antimicrobial susceptibility testing and PCR-Ribotyping. Results indicated that three Shigella (1 S. sonnei and 2 S. flexneri) were isolated from foods and 149 were isolated from fecal stools (71.14 % S. flexneri, 21.48 % S. sonnei, 0.67 % S. dysenteriae, and 6.71 % Shigella sp.). Results also showed an increase on the isolation percentage of S. sonnei from fecal samples, which was zero in 2003 increasing to 43.48 % in 2007. At the same period, the percentage of isolation of S. flexneri decreased from 100 % in 2003 to 47.83 % in 2007. Fecal stool isolates demonstrated high percentages of resistance, mainly for streptomycin (88.59 %), ampicillin (84.56 %) and sulfamethoxazole-trimethoprim (80.53 %). The highest percentage of sensitivity was observed for ciprofloxacin (96.64 %), nalidixic acid (89.26%) and gentamicin (83.22 %). Multiple resistance was observed in 137 isolates (90.19 %). Experiments revealed that 73 resistance patterns were found, and 82.23 % of the isolates showed resistance to at least three drugs. Six patterns grouped more than four isolates (A, B, C, D, E, and F). The most resistant isolates from foods showed only resistance to gentamicin and intermediate resistance to tetracycline and to chloramphenicol. PCR-Ribotyping identified three banding patterns (SH1, SH2, and SH3). The profile SH1 grouped 76.31 % of the isolates (all S. Flexneri) and profile SH2 grouped 23 % of isolates (all S. sonnei). According to the results, various Shigella isolates showed the same PCR-Ribotyping banding patterns and also the same resistance profile, suggesting it is the same strain of Shigella. The results indicate the need for continuous monitoring of resistance of Shigella and that the PCR-Ribotyping could be useful in the investigation of foodborne Shigellosis.

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:29:36Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71830.pdf: 2736652 bytes, checksum: 9835f8cf2dae1d7296d4ade3aacbc556 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-24T14:07:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71830.pdf: 2736652 bytes, checksum: 9835f8cf2dae1d7296d4ade3aacbc556 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T14:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71830.pdf: 2736652 bytes, checksum: 9835f8cf2dae1d7296d4ade3aacbc556 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Atualmente, os vírus entéricos, principalmente os norovírus humanos (NoV), são descritos como os principais causadores de surtos de doenças transmitidas por alimentos (DTA), especialmente os de rápido preparo e consumo, como frutas e frios. Devido às baixas concentrações de vírus entéricos em amostras de alimentos, é necessário dispor de um método de detecção rápido e eficiente que permita esclarecer surtos de origem alimentar e implementar medidas de prevenção quando necessárias. Este estudo teve como objetivo adaptar e avaliar a metodologia de floculação orgânica com leite desnatado para recuperação de vírus em frutas e queijos, comparando sucesso e eficiência de recuperação viral com outras metodologias previamente estabelecidas, assim como avaliar a qualidade microbiológica destes alimentos em municípios do Estado do Rio de Janeiro incluindo a pesquisa de vírus gastroentéricos. Ensaios de contaminação artificial em morangos, tomates e queijos foram realizados para recuperação de NoV GII.4 e norovírus murino 1 (MNV-1). O método de floculação orgânica por leite se mostrou eficiente para recuperação de NoV a partir de morangos e tomates quando comparado com métodos de polietileno glicol (PEG) e filtração por membranas carregadas negativamente. Entretanto, não se mostrou eficiente na recuperação viral em queijos, quando comparado com o método de extração direta por TRIzol® Para avaliação da qualidade microbiológica destes alimentos, 270 amostras (90 de cada matriz) obtidas comercialmente foram concentradas por floculação orgânica (morangos e tomates) e TRIzol® (queijos). Todas as amostras foram testadas por PCR quantitativo (qPCR) para investigação de NoV GI, GII e adenovírus humanos (HAdV). MNV-1 foi utilizado com sucesso como controle interno de processo em todas as reações. NoV foram identificados apenas nas amostras de queijos, enquanto a presença de HAdV foi observada em frutas e queijos. Adicionalmente foram realizadas analises bacteriológicas que revelaram coliformes termotolerantes em amostras de morangos e queijos. Nas amostras de queijos também se observou contaminação por Staphyloccocus coagulase positiva, abaixo dos padrões determinados pela legislação brasileira. Concluindo, os resultados obtidos neste estudo apresentam a metodologia de floculação orgânica como alternativa de baixo custo, para frutas, e o uso do TRIzol® em queijos que auxiliarão na vigilância laboratorial de surtos, gerando informações que permitam uma estimativa mais exata da proporção de surtos de NoV atribuídos a transmissão de origem alimentar / Currently, enteric víruses, primarily human norovírus (NoV), are described as the main cause of foodborne disease outbreaks (FBD), especially those of rapid preparation and consumption, like fruits and dairy. Due to the low concentrations of enteric vírus in food samples, it is necessary to have a fast and efficient detection method that allows to elucidate foodborne outbreaks and to implement preventive measures when necessary. This study aimed to adapt and evaluate the skimmed milk organic flocculation methodology for vírus recovery in fruits and cheeses, comparing success and the efficiency of viral recovery with other previously established methods, and assess the microbiological quality of food in the State of the Rio de Janeiro municipalities including gastroenteric vírus. Artificially contaminated strawberries, tomatoes and cheeses were evaluated for NoV GII.4 and murine norovírus 1 (MNV-1) recovery. The organic flocculation method was efficient for the NoV recovery from strawberries and tomatoes as compared to polyethylene glycol (PEG) and filtration negatively charged membranes. However, this methodology was not efficient for viral recovery in cheese when compared with the method of direct extraction by TRIzol® To evaluate the microbiological quality of food, 270 samples (90 of each matrix) commercially obtained were concentrated by organic flocculation (strawberries and tomatoes) and TRIzol® (cheese). All samples were assayed by quantitative PCR (qPCR) for investigation NoV GI, GII and human adenovírus (HAdV). MNV-1 was successfully used as an internal control process in all reactions. NoV were identified only in the cheeses samples, while the presence of HAdV was observed in fruits and cheese. In addition bacteriological analysis revealed that fecal coliforms in samples of strawberries and cheese. In cheese samples was also observed contamination for Staphylococcus coagulase positive below the Standards Brazilian. In conclusion, the results of this study present a skimmed milk organic flocculation methodology as a low cost alternative, for fruits, and the use of TRIzol® in cheeses that can assist in laboratory surveillance of outbreaks, generating information for a more accurate estimate of the proportion of NoV outbreaks attributed to foodborne transmission

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-12T21:44:56Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EpidemiologiaRiquetsiosesÁrea.PDF: 5058201 bytes, checksum: 49dcb477bb4df804ac26bb580665dbc9 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T15:59:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EpidemiologiaRiquetsiosesÁrea.PDF: 5058201 bytes, checksum: 49dcb477bb4df804ac26bb580665dbc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T15:59:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EpidemiologiaRiquetsiosesÁrea.PDF: 5058201 bytes, checksum: 49dcb477bb4df804ac26bb580665dbc9 (MD5) Previous issue date: 2007 / A Ordem Rickettsiales abriga um grupo de parasitas intracelulares obrigatórios, responsáveis por várias doenças humanas conhecidas como riquetsioses. Artrópodes hematófagos e seus hospedeiros são responsáveis pela disseminação da doença ao homem. Desde a década de 20, o Brasil apresenta histórico de doença riquetsial, onde a febre maculosa Brasileira destaca-se como a mais comum e a mais letal dessas riquetsioses. Embora os métodos sorológicos ainda sejam os mais indicados na confirmação da doença, o emprego de técnicas de biologia molecular vem modelando uma nova realidade ao diagnosticar e detectar cada vez mais patógenos específicos em todo o mundo. O município de Santa Cruz do Escalvado, localizado no Vale do Piranga, Zona da Mata, Minas Gerais, é considerado foco antigo para riquetsioses. Dentro do município, na localidade de Soberbo foi construída em 2004, a Usina Hidrelétrica de Candonga, alterando assim, a paisagem natural da região. Com o objetivo de compreender a atual situação desse município, dentro de uma concepção de ocupação e transformação do espaço geográfico como nosso marco teórico, buscamos avaliar o nível de transmissão de riquetsioses na população de animais domésticos e silvestres coletados em duas localidades pertencentes ao município, utilizando métodos sorológicos e ferramentas da biologia molecular. Foram capturados 94 vertebrados silvestres dentre eles, os roedores Rattus rattus, Nectomys squamipes e Oryzomys subflavus, além de gambás Didelphis aurita. Dos roedores capturados, foram obtidos tecidos (fígado e baço). Foram coletados 427 ectoparasitos, entre Amblyomma cajennense, Rhipicephalus sanguineus, Anocentor nitens, Boophilus microplus e pulgas da espécie Ctenocephalides canis em animais domésticos (cães e eqüinos). Foram também coletadas 166 amostras de soro dos roedores e dos animais domésticos, sendo estas submetidas à reação de imunofluorescência indireta utilizando antígenos específicos para Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia bellii e Rickettsia amblyommii. Após a extração de DNA das amostras de tecidos de roedores e de pools dos ectoparasitos coletados, foi realizada a amplificação através de PCR duplex, contendo pares de oligonucleotídeos iniciadores gênero-específicos (CS e 17kDa), sendo o produto obtido reamplificado com um par de iniciadores internos de 17 kDa (full nested PCR). Os produtos amplificados foram visualizados em gel de poliacrilamida 8% corado pela prata e as amostras positivas foram purificadas, seqüenciadas e comparadas com outras seqüências depositadas no GenBank. A análise das seqüências obtidas de tecidos de roedores permitiu a identificação do gênero Rickettsia em pools de ectoparasitos das espécies A. cajennense, A. nitens e B. microplus coletados em eqüinos e da espécie R. sanguineus em pulgas coletadas em cães. Os dados sorológicos apontam o R. rattus como o único roedor sororeativo com 81,25% de positividade para riquétsias do Grupo da febre maculosa, comparado aos demais roedores capturados, cujos resultados sorológicos foram negativos. Foi também encontrada uma freqüência sorológica relativamente expressiva entre os gambás capturados apresentando 14,3% para R. rickettsii e 14,3% para riquétsias do Grupo da febre maculosa (GFM). Os eqüídeos apresentaram 5,4% de sororeatividade para R. bellii e 2,7% para riquétsias do GFM, enquanto os cães apresentaram somente 2% para R. rickettsii e 2% para R. parkeri. ___________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The Order Rickettsiales evolves a group of obligate intracellular parasites, responsible for many diseases known as rickettsioses. Hematophagous arthropods and their hosts are responsible for the disease dissemination to man. Since the 20’s, Brazil shows a description of the rickettsial disease, where the Brazilian spotted fever appears as the most common and with more high case-fatality ratio rickettsiose. Although serologic methods continues to be most indicated in the disease’s confirmation, the use of molecular biology techniques has been molding a new reality in diagnoses and detect even more specific pathogens in the whole wide world. The city of Santa Cruz do Escalvado, located in the Piranga Valley, Zona da Mata, Minas Gerais, is considered an old focus for rickettsioses. In the city, in Soberbo, was built in 2004 the hydroelectric UHE-Candonga, modifying then, the natural landscape of the place. Trying to comprehend the current situation of this place, considering the occupation and transformation of the geographic space, we have investigated the level of rickettsioses infection in domestic and wild animal’s population of two localities of the city, by using serologic and molecular biology methods. There were captured 94 wild vertebrates among them, the rodent Rattus rattus, Nectomys squamipes and Oryzomys subfalus, and also Didelphis marsupialis opossum. Of the rodents captured, was made a tissue collection (liver and spleen). There were collected 427 ectoparasites among Amblyomma cajennense, Rhipicephalus sanguineus, Anocentor nitens, Boophilus microplus and Ctenocephalides canis fleas in domestic animals (canines and equines). There were also collected 166 samples of serum of rodents and of domestic animals, and those samples were evaluated through indirect immunofluorescence reaction using specific antigen for Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettisia bellii, and Rickettisia amblyommii. DNA obtained from rodent tissue samples and from pools of collected ectoparasites, was amplified by a PCR duplex system, with oligonucleotides primers pairs (CS and 17kDa genes), and the obtained product was re-amplified with a pair of inner primers for 17 kDa gene (full nested PCR). The amplified product were visualized in polyacrylamide gel 8% silver stained and the positive samples were purified, sequenced, and compared with others sequences in the GenBank. The analysis of the sequences obtained from rodent tissues allowed the identification of Rickettsia ssp sequence, as well as in pools of ectoparasites from A. cajennense, A. nitens and B. microplus species collected in equines and the R. sanguineus and fleas collected in canines. The serologic data points the R. rattus as the only rodent with 81,25% of seroreactivity to spotted fever-group rickettsiae (SFG) when compared to the rest of captured rodents, with negative serologic results. There were also found a relatively expressive serologic frequency among opossums captured with 14,3% to R. rickettsii and 14,3% to spotted fever-group rickettsiae (SFG). The equines showed 5,4% of seroreactivity to R. bellii and 2,7% to spotted fever-group rickettsiae (SFG), while canines showed only 2% to R. rickettsii and 2% to R. parkeri.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:50Z : No. of bitstreams: 1 000860445.pdf: 1297564 bytes, checksum: 7fa2ff28bbc7d5672a1c49b6aaceef4a (MD5) / Anaplasma marginale é o mais prevalente patógeno transmitido por carrapatos em bovinos nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. A Proteína Principal de Superfície 1 alpha (MSP1a) do A. marginale contém um número variável de sequências repetidas na região animo-terminal e tem sido utilizada para a caracterização da diversidade genética desse patógeno. Nós realizamos um estudo longitudinal para averiguar a diversidade genética do A. marginale em um rebanho bovino leiteiro de Seropédica no estado do Rio de Janeiro e Taiaçu no estado de São Paulo, Brasil. Vinte bezerras foram avaliadas a cada três meses durante o primeiro ano de vida por esfregaço sanguíneo, Ensaio de Imunoadsorção Enzimático Indireto (ELISA), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia da Polimerase (nPCR/qPCR). Adicionalmente, as amostras positivas para o gene msp1a usando nPCR foram sequenciadas. A frequência do A. marginale variou de 10 - 90% no esfregaço sanguíneo, 20 - 80% no ELISA/RIFI e 15 - 100% na qPCR. O número de copias da msp1a por mL de sangue variou de 1,04 x 101 a 6.76 x 1012 (Seropédica RJ) e 1.20 x 101 a 5.17 x 106 (Taiaçu SP). Os resultados mostraram que a diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Taiaçu (SP) foi baixa, com apenas três diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E. No entanto, os resultados mostraram que o diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Seropédica (RJ) foi elevada, com dezenove diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E e G. As estirpes 4-63-27 (27.4%) e α-β3-Γ (77.8%) foram as mais comumente observadas em bezerras do estado do Rio de Janeiro e São Paulo, respectivamente. O novo conjunto de repetição da MSP1a 190 foi descrito em bezerras de Taiaçu e vinte e uma repetições em tandem da MSP1a resultou em novas sequências com alterações de... / Anaplasma marginale is the most prevalent tick-borne pathogen in cattle in tropical and subtropical regions of the world. The A. marginale major surface protein 1 alpha (MSP1a) contains a variable number of tandem repeats in the amino terminal region and has been used for the characterization of pathogen genetic diversity. We conducted a longitudinal study to ascertain the genetic diversity of A. marginale in in a dairy cattle herd in Seropédica state of Rio de Janeiro and Taiaçu state of São Paulo, Brazil. Twenty calves were evaluated every three months during the first year of life by blood smear, Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA), Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (nPCR/qPCR). Additionally, samples positive for the msp1a gene using nPCR were sequenced. The prevalence of A. marginale ranged from 10 to 90% according to blood smears, 20-80% using ELISA/IFAT and 15-100% using qPCR. The number of msp1a copies per mL of blood ranged from 1,04x101 to 6.76x1012 (Seropédica RJ) and 1.20 x 101 to 5.17 x 106 (Taiaçu SP). The results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Taiaçu (SP) was low, with only three different strains identified, showing the microsatellite genotype E. However, the results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Seropédica (RJ) was high, with nineteen different strains identified, showing the microsatellite genotype E and G. The strains 4-63-27 (27.4%) and α-β3-Γ (77.8%) were the most commonly observed in calves of Seropédica RJ and Taiaçu SP, respectively. The new MSP1a tandem repeat 190 was described in calves from Taiaçu and twenty-two MSP1a tandem repeats resulted in new sequences with amino acid changes, which were labeled as 165-186 in calves from Seropédica. In Seropedica, three animals were born infected, with strains 4-63-27, 78-242-25-31 and ...

Orientadora : Profª Dra. Sila Mary Rodrigues / Coorientadora : Profª Dra. Lize Stangarlin-Fiori / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Alimentação e Nutrição. Defesa: Curitiba, 19/07/2016 / Inclui referências / Resumo: O objetivo desse trabalho foi avaliar os Serviços de Alimentação de Curitiba, PR, Brasil, e caracterizar os processos de trabalho e o perfil dos profissionais envolvidos nas inspeções sanitárias, durante uma década de vigência da legislação nacional de Boas Práticas. A pesquisa foi dividida em duas etapas: a primeira refere-se a um estudo quantitativo, retrospectivo e analítico, de delineamento longitudinal, desenvolvido a partir dos dados das inspeções sanitárias realizadas em Serviços de Alimentação do município, no período de 1º de janeiro de 2005 a 1º de julho de 2015, cadastrados no Sistema Municipal de Informação de Vigilância Sanitária e Ambiental (Simivisa), da Secretaria Municipal de Saúde de Curitiba - PR, com intuito de avaliar o número de Serviços de Alimentação inspecionados, seu ramo de atividade; o motivo das inspeções sanitárias realizadas, as condições higiênico-sanitárias dos mesmos, as principais irregularidades encontradas e as medidas administrativas adotadas, após as inspeções sanitárias. A segunda etapa refere-se a um estudo quantitativo, exploratório de delineamento transversal, realizado com base em formulário composto por questões abertas e fechadas, de conteúdo socioedemográfico, educacional e da rotina de trabalho, o qual foi entregue aos profissionais da Vigilância Sanitária que realizavam inspeções sanitárias na área de alimentos do município, para identificar o seu perfil e avaliar seu processo de trabalho. Os dados do Simivisa foram tabulados no Microsoft Excel® e analisados no software SAS®, com análises estatísticas descritivas, medidas de associação, regressão linear e correlação de Pearson, todos com nível de significância de p<0,05. Os dados sobre o perfil dos profissionais foram tabulados em formulário on line desenvolvido no Google Drive®, e analisados com estatística descritiva. Os resultados demonstram número expressivo de Serviços de Alimentação registrados (n=14901), com ampla variedade de segmentos, no qual destacaram-se os ramos restaurantes e similares (n= 5137); lanchonetes, casas de chá, de sucos e similares (n= 3528); e minimercados, supermercados e hipermercados (n= 2411). No período pesquisado, foram realizadas 84201 inspeções sanitárias, com destaque às inspeções realizadas em função de solicitações dos estabelecimentos (60,25%), seguidas por denúncias (25,66%) e, por inspeções programadas pelas equipes (14,09%). As irregularidades registradas no sistema demonstraram que a maioria dos estabelecimentos (70%) inspecionados apresentavam condições higiênico-sanitárias inadequadas. As principais irregularidades cadastradas foram Procedimentos e Processos de Trabalho (27,44%), Estrutura Física (20,42%) e Condições Higiênico-Sanitárias inadequadas (11,7%). Entre as Medidas Administrativas adotadas, após a realização das inspeções, prevaleceram Medidas Educativas (65,64%) sobre as Medidas Punitivas (9,99%). O perfil dos profissionais revelou que a maioria são mulheres (83,72%), com idade entre 31 e 50 anos (73,75%), com formação e qualificação voltada para a área de alimentos (>70%). Porém, a distribuição desigual dessas profissionais no município, o pouco tempo de serviço (45,24%< 5 anos) e a ausência de uma política de capacitação e formação profissional frequente voltada à área de Visa, aliadas a precárias condições de trabalho e falta de visibilidade das atividades desenvolvidas, resulta em processos de trabalho diferentes e, entre outras questões, no não reconhecimento de sua importância perante a sociedade e o próprio Setor Saúde. Com os resultados desse estudo foi possível estabelecer um diagnóstico do perfil dos Serviços de Alimentação, das ações da Visa e dos profissionais atuantes, no qual constatou-se: um perfil mais emergencial do processo de trabalho; a necessidade de capacitação dos profissionais em priorização de critérios de risco relacionados ao processo de produção e manipulação do alimento em si; e práticas atreladas ao procedimento da inspeção e de responsabilização exclusiva. Isso demonstra que a Visa do município necessita rever seu processo de trabalho, incorporando os conceitos de territorialização, planejamento e co-responsabilização, reforçar suas articulações com outros setores que se fizerem necessários, no sentido de superar o desafio do conhecimento e implementação da legislação sanitária vigente, para ser reconhecida, efetivamente, como agente transformador da saúde pública. Palavras-chave: Vigilância Sanitária; Legislação sobre Alimentos; Doenças Transmitidas por Alimentos; Restaurantes; Inocuidade de Alimentos; Recursos Humanos em Saúde; Inspeção de Alimentos; Controle e Fiscalização de Alimentos e Bebidas. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the Curitiba, PR, Brazil, Food services, and to characterize the work processes and the profile of the professionals involved in health inspections during a decade of operation of the national Good Practices legislation. The research was divided into two stages: the first refers to a quantitative, retrospective, analytical study, with a longitudinal design, developed from the data of the health inspections carried out in the municipality Food Services in the period January 1st, 2005 to July 1st, 2015, registered at the Municipal System of Health Surveillance and Environmental Information (Simivisa), of the Municipal Health Department of Curitiba - PR, in order to assess the number of inspected Food services, its field of activity and location; the reason of health inspections, their sanitary conditions , the main irregularities found and administrative measures adopted after the health inspections. The second stage refers to a quantitative, exploratory study, with a cross-sectional design, carried out on a form consists of open and closed issues, the basis on socioedemografic, educational and routine work contents, which was delivered to health surveillance professionals that performed sanitary inspections in the food area of the municipality to identify their profile and evaluate their work process. The Simivisa data were tabulated in Microsoft Excel® and analyzed in SAS® software with descriptive statistical analysis, measures of association, linear regression and Pearson correlation, all p significance level of <0.05. Data of the professional profile were tabulated in online form developed in Google Drive®, and analyzed with descriptive statistics. The results demonstrate significant number of registered Food Services (n = 14901), with a wide variety of segments, in which stood out the restaurants and similar (n = 5137); Snack bars, tea houses, juices and the like (n = 3528); and mini markets, supermarkets and hypermarkets (n = 2411). In the period studied, 84201 sanitary inspections were carried out, with emphasis on inspections in establishments requests function (60,25%), followed by denunciations (25,66%), and scheduled inspections by teams (14,09%). The irregularities recorded in the system showed that the majority of establishments (70%) surveyed had inadequate sanitary conditions. The main irregularities were registered Procedures and Work Processes (27,44%), Physical Structure (20,42%) and inadequate Hygienic-Sanitary conditions (11,7%). Among the Administrative Measures adopted after the completion of inspections, prevailed Educational measures (65,64%) over the Punitive measures (9,99%). The profile of professionals revealed that most are women (83,72%), aged between 31 and 50 years (73,75%), with training and qualification geared to the food area (> 70%). However, the uneven distribution of these professionals in the city, the little service time (45,24% < 5 years) and the absence of a training policy and frequent training focused on Visa area, coupled with poor working conditions and lack of visibility of activities, results in different work processes and, among other things, the nonrecognition of its importance to society and the very Sector Health. With the results of this study it was possible to establish a diagnosis of the Food Services profile, Visa's and professionals actions in which it was found: a more emergency profile of the work process; the need for training of professionals in risk prioritization criteria related to the production process and handling of food itself; and practices linked to the procedure of inspection and exclusive responsibility. This shows that the Visa municipality needs to review its work process, incorporating the concepts of territorial, planning and coresponsibility, strengthen their links with other sectors that may be necessary in order to overcome the challenge of knowledge and implementation of health legislation current, to be recognized, effectively as an agent of public health. Keywords: Sanitary Surveillance; Food Legislation; Foodborne Diseases; Restaurants; Food Safety; Human Resources for Health, Food Inspection; Control and Supervision of Food and Beverage. .

No Brasil existem poucos relatos sobre casos de Shigelose, um fator que contribui com o pouco conhecimento a respeito dessa doença. Além disso, a falta de obrigatoriedade por parte da legislação vigente em relação à pesquisa de Shigella tem contribuído com este fato. O presente trabalho teve por objetivo isolar, identificar e caracterizar isolados de Shigella envolvidas em surtos alimentares ocorridos no Rio Grande do Sul, além de comparar tais isolados de alimentos com amostras isoladas de fezes de pacientes com diarréia envolvidos nesses surtos. Após a identificação, os isolados foram submetidos à caracterização por suscetibilidade a antimicrobianos e PCR-Ribotipificação. Entre agosto de 2007 e agosto de 2008, foram isoladas três linhagens de Shigella (2 S. flexneri e 1 S. sonnei) a partir de placas de meio de cultura utilizadas pela FEPPS/LACEN/RS para pesquisa de Salmonella em alimentos suspeitos. Uma vez que a análise foi considerada negativa para a presença Salmonella, o resultado nas estatísticas epidemiológicas do RS possivelmente foi expresso como "agente do surto não identificado". Das 149 linhagens de Shigella isoladas pelo mesmo órgão, entre 2003 e 2007, 71,14 % foram identificados como S. flexneri, 21,48% como S. sonnei, 0,67% como S. dysenteriae e 6,71% foram classificados apenas como Shigella sp. Os resultados também demonstraram um aumento no percentual de isolados de S. sonnei, que em 2003 era nulo e em 2007 foi de 43,48 %, ao mesmo tempo o percentual de isolados de S. flexneri passou de 100% em 2003 para 47,83% em 2007. Em relação ao teste de resistência a antimicrobianos os isolados provenientes de fezes (n=149) demonstraram altas percentagens de resistência, sendo que as maiores foram observadas contra estreptomicina (88,59%), ampicilina (84,56%) e sulfametoxazol-trimetoprim (80,53%). Os maiores percentuais de sensibilidade foram para ciprofloxacina (96,64%), ácido nalidíxico (89,26%) e gentamicina (83,22 %). A resistência múltipla foi verificada em 90,19% dos isolados. Dos 73 perfis de resistência encontrados, 82,23 % apresentaram resistência a pelo menos três antimicrobianos. Seis perfis agruparam mais de quatro isolados (A, B, C, D, E e F). O mais resistente dos isolados de alimentos apresentou resistência à gentamicina e resistência intermediária à tetraciclina e ao cloranfenicol. Quando os isolados de Shigella foram submetidos à PCR-Ribotipificação, somente três perfis (SH1, SH2 e SH3) foram identificados. O perfil SH1 agrupou 76,31% dos isolados (todos S. flexneri) e o perfil SH2 agrupou 23% dos isolados (todos S. sonnei). De acordo com os resultados, várias linhagens de Shigella apresentaram o mesmo padrão de bandas na PCR-Ribotipificação e também o mesmo perfil de resistência, sugerindo tratar-se da mesma linhagem de Shigella; Os resultados obtidos no presente estudo indicam a necessidade do monitoramento contínuo da resistência da Shigella e também que a PCRRibotipificação pode ser útil na investigação de surtos de Shigeloses alimentares. / In Brazil, there are few reports about foodborne Shigellosis and the Brazilian regulation do no requires compulsory investigation for Shigella in foods, contributing to the lack of knowledge about this disease. The objective of the present study was to isolate, identify and characterize isolates of Shigella involved in outbreaks occurred in Rio Grande do Sul (RS), Southern Brazil, and compare the strains isolated from foods with those isolated from fecal stools of foodborne shigellosis victims. Food isolates were sampled between August 2007 and August 2008 from plates of selective medium used for Salmonella detection in suspect foods analysed by official Laboratory of RS (FEPPS/LACEN/RS), while fecal isolates were isolated from victim stools analysed between 2003 and 2007 by the same Laboratory. Bacterial samples were identified by FEPPS/LACEN/RS and submitted to antimicrobial susceptibility testing and PCR-Ribotyping. Results indicated that three Shigella (1 S. sonnei and 2 S. flexneri) were isolated from foods and 149 were isolated from fecal stools (71.14 % S. flexneri, 21.48 % S. sonnei, 0.67 % S. dysenteriae, and 6.71 % Shigella sp.). Results also showed an increase on the isolation percentage of S. sonnei from fecal samples, which was zero in 2003 increasing to 43.48 % in 2007. At the same period, the percentage of isolation of S. flexneri decreased from 100 % in 2003 to 47.83 % in 2007. Fecal stool isolates demonstrated high percentages of resistance, mainly for streptomycin (88.59 %), ampicillin (84.56 %) and sulfamethoxazole-trimethoprim (80.53 %). The highest percentage of sensitivity was observed for ciprofloxacin (96.64 %), nalidixic acid (89.26%) and gentamicin (83.22 %). Multiple resistance was observed in 137 isolates (90.19 %). Experiments revealed that 73 resistance patterns were found, and 82.23 % of the isolates showed resistance to at least three drugs. Six patterns grouped more than four isolates (A, B, C, D, E, and F). The most resistant isolates from foods showed only resistance to gentamicin and intermediate resistance to tetracycline and to chloramphenicol. PCR-Ribotyping identified three banding patterns (SH1, SH2, and SH3). The profile SH1 grouped 76.31 % of the isolates (all S. Flexneri) and profile SH2 grouped 23 % of isolates (all S. sonnei). According to the results, various Shigella isolates showed the same PCR-Ribotyping banding patterns and also the same resistance profile, suggesting it is the same strain of Shigella. The results indicate the need for continuous monitoring of resistance of Shigella and that the PCR-Ribotyping could be useful in the investigation of foodborne Shigellosis.

No Rio Grande do Sul (RS), uma cepa de Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) foi identificada como o principal microrganismo causador de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA), nos últimos anos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a multiplicação e a recuperação da S. Enteritidis SE86 em diluentes, meios de cultura e métodos de semeadura, após a exposição ao Dicloroisocianurato de sódio (NaDCC). Em um primeiro momento, o microrganismo foi ativado em caldo BHI e exposto a 200ppm de NaDCC, por cinco minutos. Em seguida, ele foi diluído em diferentes soluções, as quais foram armazenadas a 7º C e 30º C, separadamente, sendo amostradas e analisadas microbiologicamente, a cada hora, durante seis horas. Em um segundo momento, foi avaliada a recuperação do microrganismo, antes e após exposição ao NaDCC, através de semeadura em superfície e pelo método da Camada Fina de Ágar (Thin Agar Layer - TAL), em cinco diferentes meios de cultura [Agar Triptona de Soja (TSA), Agar Verde Brilhante Manitol Lisina Cristal de Violeta (MLCB), Agar Verde Brilhante (BGA), Agar Salmonella Shigella (SS) e Agar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD)]. Na terceira fase do estudo, foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de dois outros sorovares de Salmonella, além da S. Enteritidis SE86, utilizando o diluente, o meio de cultura e o método de semeadura que demonstraram os melhores resultados nas fases antecedentes. Os resultados demonstraram que houve multiplicação significativa (P < 0,05) da S. Enteritidis SE86 não exposta ao NaDCC, armazenada a 30º C, nos diluentes Água peptonada (P), Água peptonada + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (P + N), Solução salina + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (SaS + N) e Água peptonada + Solução salina (P + SaS). O diluente Solução salina (SaS) não propiciou multiplicação durante as seis horas de incubação, mas manteve as células viáveis, sendo, portanto, escolhido para os demais experimentos. Células expostas e não expostas ao NaDCC não foram capazes de se multiplicar em nenhum dos diluentes testados, a 7º C. Da mesma forma, após exposição ao NaDCC, nenhuma multiplicação significativa foi observada nos diluentes armazenados a 30º C. Não houve diferença significativa (P < 0,05) nas contagens de S. Enteritidis SE86 exposta ao NaDCC quando semeada em TSA, meios seletivos ou meios seletivos adicionados de sobre camada de TSA (TAL). O meio XLD foi escolhido para os demais experimentos, uma vez que permitiu praticamente a mesma multiplicação que o meio TSA. Quando foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium e S. Bredeney, expostas e não expostas ao NaDCC, diluídas em SaS e semeadas em TSA, XLD e XLD + sobre camada de TSA (TAL), não houve diferença significativa entre as contagens de células obtidas nos meios e no TAL, sugerindo que a semeadura direta em XLD pode ser um método adequado para a quantificação de Salmonella exposta ao NaDCC, em condições laboratoriais. / In Rio Grande do Sul State (RS), a strain of Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) was identified as the main causative microorganism of foodborne diseases, in recent years. The aim of this study was to evaluate diluents, media and plating methods for growth and recovery of this pathogen, after exposure to Sodium dichloroisocyanurate (NaDCC). At first, the microorganism was exposed to 200 mg kg-1 NaDCC by five minutes. Then it was diluted in different diluent solutions, which were stored at 7º C and 30° C, separately, being sampled and microbiologically analyzed for six hours. In a second step, the recovery of the microorganism before and after exposed by NaDCC was evaluated, through surface plating method and Thin Layer Agar (TAL) method, in five different culture media [Tryptic Soy Agar (TSA), Mannitol Lysine Crystal Violet Brilliant Green Agar (MLCB); Brilliant Green Agar (BGA), Salmonella Shigella Agar (SS) and Xylose Lysine Desoxychole Agar (XLD)]. In the third phase of this study, the growth and recovery of S. Enteritidis SE86 and two other serovars of Salmonella were evaluated, using the diluent, the culture medium and plating method that showed the best results in previous phases. The results showed significant multiplication (P < 0.05) of S. Enteritidis SE86 not exposed to NaDCC, stored at 30 °C, in diluents Peptone water (P), Peptone water + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (P + N), Saline solution + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (SaS + N) and Peptone water + Saline solution (P + SaS). Saline solution (SaS) did not sustain bacterial multiplication, but maintained viable cells, being chosen for the next experiments. Exposed and not exposed cells were not able to multiply in any of the diluents at 7º C during six hours of storage. After NaDCC exposure, no significant multiplication was observed in any of the diluents stored at 30º C. No significant difference (P < 0,05) in growth of S. Enteritidis SE86 exposed to NaDCC was observed on TSA, selective medium or on selective media overlayed with TSA (TAL). The XLD medium was chosen for the next experiments, since it allowed the same multiplication that TSA. When the multiplication and recovery of exposed and not exposed S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium, and S. Bredeney were evaluated after dilution in SaS and plating on TSA, XLD, and XLD overlayed with TSA, there was no significant difference in counts obtained on media and TAL, suggesting that direct plating on XLD could be an adequate method for the quantification of Salmonella exposed to NaDCC, under laboratory conditions.

No Rio Grande do Sul (RS), uma cepa de Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) foi identificada como o principal microrganismo causador de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA), nos últimos anos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a multiplicação e a recuperação da S. Enteritidis SE86 em diluentes, meios de cultura e métodos de semeadura, após a exposição ao Dicloroisocianurato de sódio (NaDCC). Em um primeiro momento, o microrganismo foi ativado em caldo BHI e exposto a 200ppm de NaDCC, por cinco minutos. Em seguida, ele foi diluído em diferentes soluções, as quais foram armazenadas a 7º C e 30º C, separadamente, sendo amostradas e analisadas microbiologicamente, a cada hora, durante seis horas. Em um segundo momento, foi avaliada a recuperação do microrganismo, antes e após exposição ao NaDCC, através de semeadura em superfície e pelo método da Camada Fina de Ágar (Thin Agar Layer - TAL), em cinco diferentes meios de cultura [Agar Triptona de Soja (TSA), Agar Verde Brilhante Manitol Lisina Cristal de Violeta (MLCB), Agar Verde Brilhante (BGA), Agar Salmonella Shigella (SS) e Agar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD)]. Na terceira fase do estudo, foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de dois outros sorovares de Salmonella, além da S. Enteritidis SE86, utilizando o diluente, o meio de cultura e o método de semeadura que demonstraram os melhores resultados nas fases antecedentes. Os resultados demonstraram que houve multiplicação significativa (P < 0,05) da S. Enteritidis SE86 não exposta ao NaDCC, armazenada a 30º C, nos diluentes Água peptonada (P), Água peptonada + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (P + N), Solução salina + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (SaS + N) e Água peptonada + Solução salina (P + SaS). O diluente Solução salina (SaS) não propiciou multiplicação durante as seis horas de incubação, mas manteve as células viáveis, sendo, portanto, escolhido para os demais experimentos. Células expostas e não expostas ao NaDCC não foram capazes de se multiplicar em nenhum dos diluentes testados, a 7º C. Da mesma forma, após exposição ao NaDCC, nenhuma multiplicação significativa foi observada nos diluentes armazenados a 30º C. Não houve diferença significativa (P < 0,05) nas contagens de S. Enteritidis SE86 exposta ao NaDCC quando semeada em TSA, meios seletivos ou meios seletivos adicionados de sobre camada de TSA (TAL). O meio XLD foi escolhido para os demais experimentos, uma vez que permitiu praticamente a mesma multiplicação que o meio TSA. Quando foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium e S. Bredeney, expostas e não expostas ao NaDCC, diluídas em SaS e semeadas em TSA, XLD e XLD + sobre camada de TSA (TAL), não houve diferença significativa entre as contagens de células obtidas nos meios e no TAL, sugerindo que a semeadura direta em XLD pode ser um método adequado para a quantificação de Salmonella exposta ao NaDCC, em condições laboratoriais. / In Rio Grande do Sul State (RS), a strain of Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) was identified as the main causative microorganism of foodborne diseases, in recent years. The aim of this study was to evaluate diluents, media and plating methods for growth and recovery of this pathogen, after exposure to Sodium dichloroisocyanurate (NaDCC). At first, the microorganism was exposed to 200 mg kg-1 NaDCC by five minutes. Then it was diluted in different diluent solutions, which were stored at 7º C and 30° C, separately, being sampled and microbiologically analyzed for six hours. In a second step, the recovery of the microorganism before and after exposed by NaDCC was evaluated, through surface plating method and Thin Layer Agar (TAL) method, in five different culture media [Tryptic Soy Agar (TSA), Mannitol Lysine Crystal Violet Brilliant Green Agar (MLCB); Brilliant Green Agar (BGA), Salmonella Shigella Agar (SS) and Xylose Lysine Desoxychole Agar (XLD)]. In the third phase of this study, the growth and recovery of S. Enteritidis SE86 and two other serovars of Salmonella were evaluated, using the diluent, the culture medium and plating method that showed the best results in previous phases. The results showed significant multiplication (P < 0.05) of S. Enteritidis SE86 not exposed to NaDCC, stored at 30 °C, in diluents Peptone water (P), Peptone water + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (P + N), Saline solution + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (SaS + N) and Peptone water + Saline solution (P + SaS). Saline solution (SaS) did not sustain bacterial multiplication, but maintained viable cells, being chosen for the next experiments. Exposed and not exposed cells were not able to multiply in any of the diluents at 7º C during six hours of storage. After NaDCC exposure, no significant multiplication was observed in any of the diluents stored at 30º C. No significant difference (P < 0,05) in growth of S. Enteritidis SE86 exposed to NaDCC was observed on TSA, selective medium or on selective media overlayed with TSA (TAL). The XLD medium was chosen for the next experiments, since it allowed the same multiplication that TSA. When the multiplication and recovery of exposed and not exposed S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium, and S. Bredeney were evaluated after dilution in SaS and plating on TSA, XLD, and XLD overlayed with TSA, there was no significant difference in counts obtained on media and TAL, suggesting that direct plating on XLD could be an adequate method for the quantification of Salmonella exposed to NaDCC, under laboratory conditions.

No Brasil existem poucos relatos sobre casos de Shigelose, um fator que contribui com o pouco conhecimento a respeito dessa doença. Além disso, a falta de obrigatoriedade por parte da legislação vigente em relação à pesquisa de Shigella tem contribuído com este fato. O presente trabalho teve por objetivo isolar, identificar e caracterizar isolados de Shigella envolvidas em surtos alimentares ocorridos no Rio Grande do Sul, além de comparar tais isolados de alimentos com amostras isoladas de fezes de pacientes com diarréia envolvidos nesses surtos. Após a identificação, os isolados foram submetidos à caracterização por suscetibilidade a antimicrobianos e PCR-Ribotipificação. Entre agosto de 2007 e agosto de 2008, foram isoladas três linhagens de Shigella (2 S. flexneri e 1 S. sonnei) a partir de placas de meio de cultura utilizadas pela FEPPS/LACEN/RS para pesquisa de Salmonella em alimentos suspeitos. Uma vez que a análise foi considerada negativa para a presença Salmonella, o resultado nas estatísticas epidemiológicas do RS possivelmente foi expresso como "agente do surto não identificado". Das 149 linhagens de Shigella isoladas pelo mesmo órgão, entre 2003 e 2007, 71,14 % foram identificados como S. flexneri, 21,48% como S. sonnei, 0,67% como S. dysenteriae e 6,71% foram classificados apenas como Shigella sp. Os resultados também demonstraram um aumento no percentual de isolados de S. sonnei, que em 2003 era nulo e em 2007 foi de 43,48 %, ao mesmo tempo o percentual de isolados de S. flexneri passou de 100% em 2003 para 47,83% em 2007. Em relação ao teste de resistência a antimicrobianos os isolados provenientes de fezes (n=149) demonstraram altas percentagens de resistência, sendo que as maiores foram observadas contra estreptomicina (88,59%), ampicilina (84,56%) e sulfametoxazol-trimetoprim (80,53%). Os maiores percentuais de sensibilidade foram para ciprofloxacina (96,64%), ácido nalidíxico (89,26%) e gentamicina (83,22 %). A resistência múltipla foi verificada em 90,19% dos isolados. Dos 73 perfis de resistência encontrados, 82,23 % apresentaram resistência a pelo menos três antimicrobianos. Seis perfis agruparam mais de quatro isolados (A, B, C, D, E e F). O mais resistente dos isolados de alimentos apresentou resistência à gentamicina e resistência intermediária à tetraciclina e ao cloranfenicol. Quando os isolados de Shigella foram submetidos à PCR-Ribotipificação, somente três perfis (SH1, SH2 e SH3) foram identificados. O perfil SH1 agrupou 76,31% dos isolados (todos S. flexneri) e o perfil SH2 agrupou 23% dos isolados (todos S. sonnei). De acordo com os resultados, várias linhagens de Shigella apresentaram o mesmo padrão de bandas na PCR-Ribotipificação e também o mesmo perfil de resistência, sugerindo tratar-se da mesma linhagem de Shigella; Os resultados obtidos no presente estudo indicam a necessidade do monitoramento contínuo da resistência da Shigella e também que a PCRRibotipificação pode ser útil na investigação de surtos de Shigeloses alimentares. / In Brazil, there are few reports about foodborne Shigellosis and the Brazilian regulation do no requires compulsory investigation for Shigella in foods, contributing to the lack of knowledge about this disease. The objective of the present study was to isolate, identify and characterize isolates of Shigella involved in outbreaks occurred in Rio Grande do Sul (RS), Southern Brazil, and compare the strains isolated from foods with those isolated from fecal stools of foodborne shigellosis victims. Food isolates were sampled between August 2007 and August 2008 from plates of selective medium used for Salmonella detection in suspect foods analysed by official Laboratory of RS (FEPPS/LACEN/RS), while fecal isolates were isolated from victim stools analysed between 2003 and 2007 by the same Laboratory. Bacterial samples were identified by FEPPS/LACEN/RS and submitted to antimicrobial susceptibility testing and PCR-Ribotyping. Results indicated that three Shigella (1 S. sonnei and 2 S. flexneri) were isolated from foods and 149 were isolated from fecal stools (71.14 % S. flexneri, 21.48 % S. sonnei, 0.67 % S. dysenteriae, and 6.71 % Shigella sp.). Results also showed an increase on the isolation percentage of S. sonnei from fecal samples, which was zero in 2003 increasing to 43.48 % in 2007. At the same period, the percentage of isolation of S. flexneri decreased from 100 % in 2003 to 47.83 % in 2007. Fecal stool isolates demonstrated high percentages of resistance, mainly for streptomycin (88.59 %), ampicillin (84.56 %) and sulfamethoxazole-trimethoprim (80.53 %). The highest percentage of sensitivity was observed for ciprofloxacin (96.64 %), nalidixic acid (89.26%) and gentamicin (83.22 %). Multiple resistance was observed in 137 isolates (90.19 %). Experiments revealed that 73 resistance patterns were found, and 82.23 % of the isolates showed resistance to at least three drugs. Six patterns grouped more than four isolates (A, B, C, D, E, and F). The most resistant isolates from foods showed only resistance to gentamicin and intermediate resistance to tetracycline and to chloramphenicol. PCR-Ribotyping identified three banding patterns (SH1, SH2, and SH3). The profile SH1 grouped 76.31 % of the isolates (all S. Flexneri) and profile SH2 grouped 23 % of isolates (all S. sonnei). According to the results, various Shigella isolates showed the same PCR-Ribotyping banding patterns and also the same resistance profile, suggesting it is the same strain of Shigella. The results indicate the need for continuous monitoring of resistance of Shigella and that the PCR-Ribotyping could be useful in the investigation of foodborne Shigellosis.