Ces travaux de thèse concernent l’étude phytochimique de cinq plantes médicinales dont les espèces sélectionnées sont endémiques du Venezuela : Palicourea demissa Standl. et Hydrocotyle umbellata L., mais aussi Bauhinia cumanensis H.B.K, Guazuma ulmifolia Lam. et Urena sinuata L. Vingt-deux composés ont été purifiés et identifiés à partir des différents extraits étudiés ; il s’agit notamment de terpènes, de flavones et de saponines. Six de ces substances naturelles, parmi lesquelles figurent plusieurs saponines de types spirostane et ergostane, sont décrites pour la première fois. / This work is dedicated to the phytochemical study of five medicinal plants whose selected species are endemic of Venezuela: Palicourea demissa Standl., and Hydrocotyle umbellata L., but also Bauhinia cumanensis H.B.K, Guazuma ulmifolia Lam., and Urena sinuata L. Twenty-two compounds were purified and identified from the various studied extracts; they are in particular terpenes, flavones and saponins. Six of these natural products, among which appear several spirostane- and ergostane-types saponins, are described for the first time.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BRUNA MIKULIS LEMES.pdf: 2339856 bytes, checksum: 090063d94222c9d5a81d2f53dd692a81 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The abusive use of anti-inflammatory drugs entails health risks and this fact has increasingly led researchers to seek alternative new drugs and safer formulations.Consequently the development of new, modified drug delivery systems and the search for new drugs, presents itself as a great research field. The extracts from plant species stand out as a matrix of interest due to the presence of possible active compounds. These compounds include the class of phenolic compounds, which is a structurally diversified class whose antioxidant and anti-inflammatory activity have already been well-studied and recognised. The species Euphorbia umbellata has attracted attention in recent years in relation to its ethnopharmacological use for the treatment of cancer and inflammation and it presents as candidate to be used in formulations with antiinflammatory activity, which is especially present among in its metabolites, i.e. phenoliccompounds. Consequently, this study developed, characterised and evaluated chitosan membranes containing the methanol fraction of E. umbellata for topical application in relation to their antioxidant and antimicrobial potential. Initially, the quantitative determination of phenolic compounds (total flavonoids and phenolics) present in the crude extract and its fractions (hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol) were performed using UV-VIS, and a qualitative chromatographic evaluation of the methanolic fraction was performed using UHPLC-MS. The physicochemical characterisation of the membranes was performed using SEM and EGF techniques,density, XRD, FTIR, DSC, TGA, colour measurements, and pharmacological evaluation in vitro by determining the scavenging (DPPH and ABTS) and antimicrobial potential, in addition to ex vivo permeation testing. The quantification of phenolic compounds demonstrated that the methanolic fraction contained the highest amount ofthese compounds (225.205 mg.g-1) and the chromatographic evaluation of themethanolic fraction made it possible to suggest 23 molecules of phenolic substances belonging to the classes of simple phenolic acids, tannins and flavonoids. The characterisation tests showed variations related to the addition of the methanolic fraction of the chitosan matrix, which showed interaction between the chitosan matrix and the polymer structure. The antioxidant and antimicrobial tests indicated the positive potential of the membranes in relation to the studied models. Similarly, these formulations also stood out in the antimicrobial assay. There was no permeation of the Franz cell model, suggesting a local activity. Thus, it was possible to demonstrate that interactions occurred between the methanolic fraction and the polymer. These formulations show promising potential for topical application in relation to antiinflammatory action. / O uso abusivo de medicamentos anti-inflamatórios traz riscos à saúde da população e tal fato preocupa e instiga cada vez mais os pesquisadores a buscar alternativas de novos fármacos e formulações mais seguros. Neste sentido o desenvolvimento de novas formas farmacêuticas de liberação modificada e a busca de novos fármacos, apresentase como um campo de pesquisa de grande importância. Os extratos de espécies vegetais se destacam com uma matriz de interesse em decorrência da presença de possíveis moléculas bioativas. Entre estes compostos destacam-se os fenólicos, que se destacam como uma classe bastante diversificada estruturalmente e cuja atividade antioxidante e anti-inflamatória são bem estudadas e reconhecidas. A espécie Euphorbia umbellata tem despertado interesse nos últimos anos quanto ao seu uso etnofarmacológico para tratamento de quadros de câncer e inflamação, e apresenta-se como candidata a ser empregada em formulações com atividade anti-inflamatória, especialmente por apresentar entre seus metabólitos, os compostos fenólicos. Sendo assim, no presente estudo, membranas de quitosana contendo a fração metanólica de E. umbellata para aplicação tópica foram desenvolvidas, caracterizadas e avaliadas quanto ao seu potencial antioxidante e antimicrobiano. Para tanto, inicialmente foram realizadas a determinação quantitativa dos compostos fenólicos (fenólicos e flavonoides totais) presentes no extrato bruto e suas frações (hexano, clorofórmio, acetato de etila e metanol) por UV-VIS e a avaliação cromatográfica qualitativa da fração metanólica por UHPLC-MS. A caracterização físico-química das membranas foi desenvolvida por meio de técnicas de MEV, FEG, densidade, DRX, FTIR, DSC, TGA, determinação de cor e avaliação farmacológica in vitro mediante a determinação do potencial scavenger (DPPH e ABTS) e antimicrobiano, além do teste de permeação ex vivo. A quantificação de fenólicos revelou que a fração metanólica é a que possui maior quantidade desses compostos (225,205 mg.g-1) e a avaliação cromatográfica da mesma permitiu sugerir 23 moléculas de substâncias fenólicas pertencentes as classes dos ácidos fenólicos simples, taninos e flavonoides. Os testes de caracterização evidenciaram variações relacionadas à adição da fração metanólica à matriz de quitosana, o que demonstra a interação desta com a estrutura do polímero. Os ensaios antioxidante e antimicrobiano indicaram favorável potencial das membranas M50FM e M100FM, nos modelos estudados. Da mesma forma, estas formulações também se destacaram no ensaio antimicrobiano. Não foi observada permeação cutânea o modelo de célula de Franz, o que aponta para uma atividade local. Deste modo, foi possível indicar que ocorrem interações entre a fração metanólica e o polímero, entretanto as formulações são candidatas promissoras à aplicação tópica para ação anti-inflamatória.

Orientador: Rafael Silva Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T23:35:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_AlineLopese_M.pdf: 3394396 bytes, checksum: 696ed48aed8374dfcb4e215ad3c94135 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Eventos de neblina constituem uma importante fonte de água em vários ecossistemas terrestres, pois molham as superfícies foliares das plantas sem aumentar significativamente o conteúdo de água no solo. A água interceptada pode escoar ou ser absorvida diretamente pelas folhas inclusive de espécies lenhosas. No entanto, pouco se sabe sobre o papel ecológico desse processo e os mecanismos e estruturas envolvidos no transporte de água do exterior para os tecidos foliares, especialmente em espécies tropicais. Nesse contexto, avaliamos as vias anatômicas envolvidas na absorção de água pelas folhas e elucidamos as consequências desse processo no desempenho ecofisiológico, crescimento e sobrevivência de três espécies lenhosas comuns em matas nebulares do sudeste brasileiro, Drimys brasiliensis, Eremanthus erythropappus e Myrsine umbellata. Experimentos com água deuterada e sais traçadores apoplásticos mostraram que as espécies são capazes de obter água diretamente pelas folhas. A absorção foliar pode contribuir em até 42% do conteúdo de água das folhas em D. brasiliensis, que inclusive apresentou fluxo reverso de seiva e menores taxas de transpiração noturna quando expostas à neblina. A água pode difundir diretamente pelas cutículas foliares em todas as espécies. Os tricomas tectores de E. erythropappus e os tricomas glandulares peltados de M. umbellata parecem ser estruturas importantes para a absorção de água nessas espécies. Após transpor a barrreira cuticular, as soluções podem difundir pelas vias apoplásticas da epiderme e do parênquima das folhas das três espécies e atingir o xilema de E. erythropappus e acumular nas células coletoras de M. umbellata. A alta concentração de compostos hidrofílicos nos tecidos foliares de D. brasiliensis e M. umbellata pode ter contribuído na retenção das soluções no mesofilo destas espécies. A borrifação de ramos causou aumento imediato do status hídrico foliar nas espécies, benefício também observado em um experimento de longa duração. Após dois meses, plantas das três espécies que receberam neblina exclusivamente na parte aérea apresentaram maior potencial hídrico, fotossíntese e condutância estomática em comparação às plantas do tratamento de seca em casa de vegetação. D. brasiliensis apresentou 100% de mortalidade após um mês no tratamento de seca. O conteúdo relativo de água no solo das plantas dessa espécie sob neblina manteve-se constante ao longo do experimento, indicando que a neblina pode ter sido usada como fonte de água transpirada neste período. E. erytropappus foi a única espécie que manteve taxas de crescimento e sobrevivência semelhantes entre os tratamentos, sendo que e os benefícios da nebulização só se tornaram evidentes no final do segundo mês. O conteúdo de água no solo das plantas de M. umbellata foi reduzido nos tratamentos de neblina e seca, mas não observamos reduções no potencial hídrico, condutância estomática e fotossíntese. Estes dados sugerem que a absorção de água pelas folhas desta espécie causou um desacoplamento das relações hídricas foliares e das trocas gasosas em relação à disponibilidade de água no solo. Demonstramos que durante eventos de neblina, as três espécies lenhosas de matas nebulares tropicais podem absorver água diretamente pelas folhas. Este processo favorece a hidratação, o desempenho ecofisiológico, o crescimento e a sobrevivência das plantas, mesmo sob baixa disponibilidade de água no solo. / Abstract: Fog deposition is an important water source in several terrestrial ecosystems. Fog water intercepted by the plants can run off to the soil or be absorbed by the leaves. However, very little is known about the ecological role of fog and the mechanisms and structures involved in foliar water uptake by woody species in tropical environments. In this context, we investigated the anatomical pathways involved in the process of foliar uptake of water and evaluated the consequences of this process in the ecophysiological performance, growth and survival of three common woody species from Brazilian cloud forests: Drimys brasiliensis, Eremanthus erythropappus e Myrsine umbellata. Greenhouse experiments using artificial fog enriched in deuterium and labelling experiments with fluorescent apoplastic tracers demonstrated that the three species absorbed water directly through their leaf surfaces. Leaf water uptake contributed to as much as 42% of total foliar water content in D. brasiliensis. Fog exposition caused reversals in sap flow and reduced nighttime transpiration for this species. Water diffused directly through leaf cuticles in all species. Tector trichomes of E. erythropappus and glandular peltate trichomes of M. umbellata are important pathways for water uptake in these species. After the cuticular barrier was transposed, solutions moved through apoplast routes at the epidermis and parenchyma in all species, reaching the xylem in E. erythropappus and accumulating on collector cells of M. umbellata. The high abundance of hidrofilic compounds found on leaf surfaces of D. brasiliensis and M. umbellata may have contributed to the great retention of solution with apoplastic tracers in the mesophyll of these species. Sprayed water on isolated branches caused an immediate increase in leaf water status in the three species, a benefit also observed in a long-term experiment. After two months, plants under the fog treatment improved leaf water potential, photosynthesis and stomatal conductance in relation to plants exposed to drought in a greenhouse experiment. Species responses to the treatments were different. D. brasiliensis had 100% mortality after a month under drought. Soil water content (SWC) of fogged plants was constant throughout the experiment, suggesting that fog water might have been used as the main water source for transpiration during this period. E. erytroppappus was the only species with similar growth and survival rates in all treatments and the beneficial effects of fog water was only observed after two months. For M. umbellata, SWC decreased substantially in the drought and fog treatments but no decrease in water potential, photosynthesis and stomatal conductance was observed. For this species, fog water deposition caused a decoupling of foliar water relations and gas exchange from soil water availability.We demonstrated that the three cloud forest woody species can absorb water directly through their leaves during fog deposition, allowing shoot rehidratation and improving ecophysiological performance, growth and survival when soils are dry. / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

As plantas medicinais constituem importante recurso terapêutico no tratamento da saúde humana, principalmente das nações em desenvolvimento. Servem tanto à conhecida \"medicina caseira\", que faz parte da cultura popular destes países, como de matéria prima para elaboração de medicamentos fitoterápicos ou extração de compostos químicos farmacologicamente ativos. O presente trabalho estuda duas espécies medicinais da família Piperaceae, conhecidas popularmente como pariparoba, e usadas para o tratamento de problemas do fígado: Piper regnellii (Miq.) D.CD. e Pothomorphe umbellata (L.) Miq., esta inscrita na primeira edição da Farmacopéia Brasileira. Foram avaliadas, comparativamente, as capacidades antioxidantes dos extratos hidroalcoólicos das folhas, caules e raízes das duas espécies vegetais, utilizando uma combinação de modelos experimentais: 1) co-oxidação de substrato constituído por β-caroteno/ácido linoléico com determinação espectrofotométrica da cinética do processo oxidativo e por cromatografia em camada delgada, utilizando como revelador o carotenóide. 2) inibição da lipoperoxidação espontânea em homogenato de cérebro com determinação das substâncias geradas no processo e que reagem com o ácido tiobarbitúrico (TBARS), bem como a medida da inibição da quimiluminescência espontaneamente emitida. Do extrato das raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. foi isolado e caracterizado o composto fenólico 4- nerolidilcatecol como o responsável pela maior atividade antioxidante deste órgão vegetal. No modelo que utiliza o homogenato de cérebro como substrato, o composto catecólico demonstrou uma capacidade antioxidante aproximadamente 20 vezes superior à do α-tocoferol usado como referência. Complementarmente, as folhas da espécie Piper regnellii (Miq.) C.DC. mostraram-se potencialmente ativas, estimulando a continuidade do trabalho no sentido de caracterizar o(s) componente(s) ativo(s), à semelhança do que foi feito com as raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. / Medicinal plants are an important therapeutic resource in human health care mainly in developing nations. They are used in herbal medicine, a tradition in those countries, as well as raw material for the manufacture of phytomedicinals and the extraction of pharmacological active compounds. In this research two medicinal species of the Piperaceae family are studied, known by the popular name pariparoba and used in treatment of liver diseases: Piper regnellii (Miq.)C.DC. and Pothomorphe umbellata (L.) Miq., the last one included in the first edition of the Brazilian Pharmacopoeia. The antioxidant properties of hidroalcoholic extracts of leaves, stems and roots of both species were appraised by means of a combination of experimental models: 1) co-oxidation of β-carotene/linoleic acid with spectrophotometric determination of the oxidation process kinetic and TLC apllying the carotenoid as detection agent 2) inhibition of spontaneous lipoperoxidation in rat brain homogenate, determining thiobarbituric reactants formed in the process (TBARS) and measuring the inhibition of the spontaneous chemiluminescence. From the root extract of Pothomorphe umbellata a phenolic compound, α-nerolidycathecol, was isolated and found to be the major antioxidant constituent of this plant organ. With the brain-homogenate model it was possible to demonstrate a 20 times higher activity of the catecholic compound when compared with a-tocopherol. In addition the leaves of Piper regnellii showed to be potentially active justifying further research to identify active compounds.

Submitted by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2009-06-22T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 CarolinaBecker.pdf: 503088 bytes, checksum: 6691aa24c9b4dfc671a9feae5b2172a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-06-22T17:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaBecker.pdf: 503088 bytes, checksum: 6691aa24c9b4dfc671a9feae5b2172a0 (MD5) / O uso de compostos químicos sintéticos para o controle de pragas é amplamente utilizado no cultivo de plantas, os quais desfavorecem a estabilidade ecológica de sistemas naturais. Por serem menos agressivos e possuírem mais de um princípio ativo, os pesticidas naturais de origem vegetal podem minimizar as conseqüências indesejadas. Avaliou-se no presente trabalho o potencial acaricida dos óleos essenciais das espécies vegetais Acanthospermum australe, Casearia sylvestris e Pothomorphe umbellata, em duas concentrações de solução etanólica (0,5% e 2,0%), além da análise de compisição dos extratos destas plantas por cromatografia gasosa e espectrometria de massas. Na análise de composição das plantas, os compostos em maior concenctração encontrados foram ß-elemeno (31,7%) e α-humuleno (28,2%) em C. sylvestris, apiol (46,6%) e dill apiol (14,5%) em P. umbellata. Em A. australe o elemento com maior concentração (81,0%) não foi identificado. A atividade acaricida foi constatada para as três plantas, após 72 horas na concentração 2,0%. O óleo de Acanthospermum australe foi o que apresentou desempenho mais próximo do acaricida comercial utilizado como controle negativo.

As plantas medicinais constituem importante recurso terapêutico no tratamento da saúde humana, principalmente das nações em desenvolvimento. Servem tanto à conhecida \"medicina caseira\", que faz parte da cultura popular destes países, como de matéria prima para elaboração de medicamentos fitoterápicos ou extração de compostos químicos farmacologicamente ativos. O presente trabalho estuda duas espécies medicinais da família Piperaceae, conhecidas popularmente como pariparoba, e usadas para o tratamento de problemas do fígado: Piper regnellii (Miq.) D.CD. e Pothomorphe umbellata (L.) Miq., esta inscrita na primeira edição da Farmacopéia Brasileira. Foram avaliadas, comparativamente, as capacidades antioxidantes dos extratos hidroalcoólicos das folhas, caules e raízes das duas espécies vegetais, utilizando uma combinação de modelos experimentais: 1) co-oxidação de substrato constituído por β-caroteno/ácido linoléico com determinação espectrofotométrica da cinética do processo oxidativo e por cromatografia em camada delgada, utilizando como revelador o carotenóide. 2) inibição da lipoperoxidação espontânea em homogenato de cérebro com determinação das substâncias geradas no processo e que reagem com o ácido tiobarbitúrico (TBARS), bem como a medida da inibição da quimiluminescência espontaneamente emitida. Do extrato das raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. foi isolado e caracterizado o composto fenólico 4- nerolidilcatecol como o responsável pela maior atividade antioxidante deste órgão vegetal. No modelo que utiliza o homogenato de cérebro como substrato, o composto catecólico demonstrou uma capacidade antioxidante aproximadamente 20 vezes superior à do α-tocoferol usado como referência. Complementarmente, as folhas da espécie Piper regnellii (Miq.) C.DC. mostraram-se potencialmente ativas, estimulando a continuidade do trabalho no sentido de caracterizar o(s) componente(s) ativo(s), à semelhança do que foi feito com as raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. / Medicinal plants are an important therapeutic resource in human health care mainly in developing nations. They are used in herbal medicine, a tradition in those countries, as well as raw material for the manufacture of phytomedicinals and the extraction of pharmacological active compounds. In this research two medicinal species of the Piperaceae family are studied, known by the popular name pariparoba and used in treatment of liver diseases: Piper regnellii (Miq.)C.DC. and Pothomorphe umbellata (L.) Miq., the last one included in the first edition of the Brazilian Pharmacopoeia. The antioxidant properties of hidroalcoholic extracts of leaves, stems and roots of both species were appraised by means of a combination of experimental models: 1) co-oxidation of β-carotene/linoleic acid with spectrophotometric determination of the oxidation process kinetic and TLC apllying the carotenoid as detection agent 2) inhibition of spontaneous lipoperoxidation in rat brain homogenate, determining thiobarbituric reactants formed in the process (TBARS) and measuring the inhibition of the spontaneous chemiluminescence. From the root extract of Pothomorphe umbellata a phenolic compound, α-nerolidycathecol, was isolated and found to be the major antioxidant constituent of this plant organ. With the brain-homogenate model it was possible to demonstrate a 20 times higher activity of the catecholic compound when compared with a-tocopherol. In addition the leaves of Piper regnellii showed to be potentially active justifying further research to identify active compounds.

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sacoman_JulianaLessa_M.pdf: 21702719 bytes, checksum: 1522ff705d917fd77eec5e23216a58ea (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os primeiros registros históricos da humanidade já relatavam o uso.de plantas para tratamento de diversos males e, com o aprimoramento dos estudos e técnicas de purificação, isolamento e identificação dos princípios ativos, foi possível o desenvolvimento de medicamentos para utilização em diversas patologias, inclusive na quimioterapia do câncer. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anticâncer de duas espécies da flora brasileira, Anacardium humile St. Hil. e Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, de uso medicinal popular. Os extratos brutos diclorometânico (EBD) e etanólico (EBE) das folhas dessas espécies foram avaliados em ensaio de citotoxicidade in vitro em cultura de células tumorais humanas. Como o EBD de P. umbellata apresentou o melhor perfil de atividade in vitro, foi selecionado para avaliação em modelo de câncer murino, o tumor ascítico de Ehrlich. Nesse modelo, esse extrato apresentou atividade anti-tumoral dose dependente e, com isso, a identificação dos princípios responsáveis por essa atividade tomou-se fundamental. Desse modo, o EBD foi submetido a diversos procedimentos cromatográficos, sendo as frações obtidas biomonitoradas pelo teste de citotoxicidade. Esse procedimento permitiu a identificação de duas frações com elevada potência e seletividade anticâncer, sendo que na primeira fração (A) foram identificados derivados do ácido oxálico e na segunda (C), esteróides e triterpenos. A indução de morte celular por apoptose, avaliada por imunocitoquímica, foi significativa nas células UACC-62, OVCAR-3 e NCIADR/ RES quando tratadas pela fração A e nas células UACC-62, OVCAR-3 e 786-0, quando tratadas pela fração C. Uma outra fração (B), constituída principalmente do composto 4-nerolidilcatecol, não apresentou atividade anticâncer significativa. Esses resultados estimulam a continuidade dos estudos com a P. umbellata, com o objetivo de identificar os princípios ativos, determinar o mecanismo de ação anticâncer e comprovar sua atividade em modelos experimentais de câncer in vivo / Abstract: Plants are used in folk medicine since old times of human history, and improvements in techonology, research, purification techniques, isolation and identification of active principIes have allowed the discovery and development of new molecules as drugs for terapheutics of many diseases, such as cancer. This work aimed the evaluation of the anticancer activity of two Brazilian species, Anacardium humile St. Hil. and Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, used in folk medicine. Dichlorometanic (DCE) and ethanolic (ECE) crude extracts obtained from leaves of both species were tested in an in vitro citotoxicity assay against human cancer celllines. As long as P. umbellata's DCE showed the best anticancer activity profile, it was also evaluated in a murine cancer model, the Ehrlich Ascite Tumor (EAT). In this experiment, DCE also demonstrated a dose response relationship anticancer activity; therefore the isolation and identification of the active principIe responsible for that activity became the major focus of this work. As a result, DCE was submitted to many cromatographic procedures which were bioguided by the anticancer assay in vitro. This chromatographic purifications permitted identification of two main fractions with high potency and selectivity: fraction A consitituted by oxalic acid derivatives, and fraction C by steroids and triterpenes. The quantification of apoptosis induction by immuncytochemical analysis were significant for UACC-62, OVCAR-3 and NCI-ADR/ RES celllines treated with fraction A, whereas UACC-62, OVCAR-3 and 786- o cells lines went to apoptosis when exposed to fraction C. A third fraction, denominated fraction B, was rich in 4-nerolidylcathecol, widely knowm for this plant specie, and did not show any significative anticancer activity. These results encouraged following up on studies with P. umbellata, priorizing the identification of active principIes, the determination of anticancer mechanism of action and to prove the anticancer activity in experimental cancer models in vivo / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-12-03T19:39:48Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - César Aparício de Araújo Júnior - 2011.pdf: 4079787 bytes, checksum: 5002d4212ba0c8afd8a62b9525a28dc8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-12-04T14:56:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - César Aparício de Araújo Júnior - 2011.pdf: 4079787 bytes, checksum: 5002d4212ba0c8afd8a62b9525a28dc8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-04T14:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - César Aparício de Araújo Júnior - 2011.pdf: 4079787 bytes, checksum: 5002d4212ba0c8afd8a62b9525a28dc8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-08-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Pothomorphe umbellata (L.) Miq. Piperaceae is known in Brazil as "caapeba", "caapeba North" or "Pariparoba" being widely used as an analgesic, anti-inflammatory and antispasmodic. According to scientific studies, 4-nerolidylcatechol (4-CN) is the main secondary metabolite of P. umbellata, has antioxidant activity greater than that of vitamin E. The incorporation of the extracts of P. umbellata (L.) Miq. in solid dosage forms is an interesting strategy to enable its use as an oral antioxidant and stabilizing its active labile 4-NC. Pellets are oral dosage forms which have good flow properties due to their spherical shape, narrow size distribution, in addition, the pellets allow to obtain uniform dispersion of doses of drug and incorporation of large amounts of active substances incompatible in the same pharmaceutical form. The objective of this study was to obtain an extract of P. umbellata, develop and characterize a multi-particulate solid dosage form and evaluate the stability of the developed formulations containing 4-NC. The roots of the plant material of P. umbellata was subjected to analysis of content, residual moisture, determination of swelling index, total ash content and granulometric determination. The identification of plant constituents of the sample was made by thin layer chromatography (TLC). Obtaining the hydroalcoholic extract was made by percolation. Quantitation of 4-NC was performed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC-UV-Vis). The analytical method was validated for the parameters required in Resolution N°. 899, ANVISA. The determination of antioxidant activity of the isolated 4-NC and the percolated was evaluated using UV-Vis spectrophotometer using a technique that measures the activity of scavenging free radical 2,2-diphenyl-1-picril-hydrazyl (DPPH •). The pellets were produced by extrusion technique / spheronisation using granulation liquid consisting of the percolated, colloidal silicon dioxide and polysorbate 80. The excipients were microcrystalline cellulose, lactose and hydroxypropyl methylcellulose (HPMC). The drying of the pellets was done in an oven and fluidized bed coating. HPMC, povidone and copolymer (polyvinyl alcohol polyethylene glycol graft copolymer) were tested in the polymer coating. Accelerated photostability study was performed according to standards described by the ICH International Conference on Harmonisation evaluating 4-NC degradation in the extraction solution (percolated) and the solid dosage form (uncoated and coated pellets). The pellets were characterized by size distribution, morphology and friability. The external morphology of the pellets was evaluated through a stereomicroscope and the thickness of the coating was observed by Scanning Electron Microscopy (SEM). The result obtained for the moisture content was 6.33 ± 0.305% for total ash content: 8.25% ± 0.61 and swelling index of 3.30 ± 0.87mL and an average particle size of the powder was 170.26μm. The analytical method for 4-NC was linear in the range 10 to 200µg/mL. LQ and LD were calculated 1.42 and 0.42 µg/mL. The accuracy showed less than 5.0% relative standard deviation (RSD). The percolation process was efficient in the extraction of 4-NC. The production of pellets from the extrusion technique/spheronisation was presenting a satisfactory product was uniform with an average size of 1000 μm. In the study of antioxidant activity, the effective concentration (EC50) value found for the isolated 4-NC and present in the percolated was about two times more potent than vitamin E. In the study of photostability of 4-NC present in the coated pellets, the copolymer coating was used in which offered more protection to the active 4-NC against photodegradation. Given the impossibility of obtaining solid dosage forms with pure active, the use of the extract containing the 4-NC is considered more advantageous since the pharmaceutical technology can improve the stability of the asset against degradation. / A Pothomorphe umbellata (L.) Miq. é uma espécie da família Piperaceae, conhecida no Brasil como “Caapeba”, “Caapeba do Norte” ou “Pariparoba” sendo muito utilizada como analgésico, antiinflamatório e anti-espasmódico. De acordo com estudos científicos, o 4nerolidilcatecol (4-NC) que é o principal metabólito secundário da P. umbellata, apresenta atividade antioxidante superior à da vitamina E. A incorporação dos extratos de P. umbellata (L.) Miq. em formas farmacêuticas sólidas (FFS) é uma estratégia interessante para viabilizar seu uso como agente antioxidante de uso oral e para estabilização de seu princípio ativo lábil, o 4-NC. Os pellets são FFS de uso oral que apresentam boas propriedades de escoamento, devido a sua forma esférica; estreita distribuição de tamanho, além disso, os pellets permitem obter dispersão uniforme das doses dos fármacos e incorporação de grande quantidade de substâncias ativas incompatíveis em uma mesma forma farmacêutica. O objetivo deste trabalho foi obter um extrato de P. umbellata, desenvolver e caracterizar uma forma farmacêutica sólida multiparticulada e avaliar a estabilidade do 4-NC nas formulações desenvolvidas. As raízes de P. umbellata foram submetidas às análises de umidade residual, de determinação do índice de intumescência, de teor de cinzas totais e determinação granulométrica. A identificação de constituintes da amostra vegetal foi realizada por cromatografia de camada delgada (CCD). A obtenção do extrato hidroalcoólico foi realizada por percolação. A quantificação de 4-NC foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) UV-Vis. O método analítico foi validado segundo a Resolução RE n° 899 da ANVISA. A determinação da atividade antioxidante do 4-NC isolado e do percolado foi avaliada utilizando-se espectrofotômetro UV-Vis através da técnica que avalia a atividade sequestradora do radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazila, (DPPH•). Os pellets foram produzidos pela técnica de extrusão/esferonização utilizando-se líquido de granulação constituído pelo percolado, dióxido de silício coloidal e polissorbato 80. Os excipientes utilizados foram celulose microcristalina, lactose e hidroxipropilmetilcelulose (HPMC). A secagem dos pellets foi feita em estufa e o revestimento em leito fluidizado. HPMC, povidona e copolímero - composto de polivinilálcool:polietilenoglicol (75:25) - foram os polímeros testados no revestimento. O estudo da fotoestabilidade acelerada foi realizado segundo as normas descritas pelo International Conference on Harmonisation (ICH), avaliando-se a degradação do ativo em solução, na solução extrativa (percolado) e na forma farmacêutica sólida (pellets não revestidos e revestidos). Os pellets foram caracterizados através da distribuição de tamanho, morfologia e friabilidade. A morfologia externa dos pellets foi avaliada através de estereomicroscópio e a espessura do revestimento foi verificada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O teor de umidade da droga vegetal foi de 6,33% ± 0,305, o teor de cinzas totais foi de 8,25% ± 0,61 o índice de intumescência de 3,30mL ± 0,87 e o tamanho médio do pó foi de 170,26 µm. O método analítico para o 4-NC foi linear na faixa de 10 a 200 μg/mL. Os limites de quantificação (LQ) e de detecção (LD) calculados foram de 1,42 e 0,42μg/mL. A precisão apresentou desvio padrão relativo (DPR) menor que 5,0%. A percolação foi um processo eficiente na extração do 4-NC. A produção dos pellets a partir da técnica de extrusão/esferonização foi satisfatória apresentando um produto de tamanho uniforme em média de 1000 μm. No estudo da atividade antioxidante, o valor da concentração efetiva (CE50) encontrada para o 4-NC isolado e o presente no percolado foi cerca de duas vezes mais potente que a vitamina E. No estudo de fotoestabilidade do 4-NC presente nos pellets revestidos, o copolímero utilizado no revestimento foi o que ofereceu maior proteção do 4-NC contra a fotodegradação. Considerando a inviabilidade de obtenção de formas farmacêuticas sólidas com o ativo puro, conclui-se que o uso do extrato contendo o 4-NC é considerado mais vantajoso uma vez que a tecnologia farmacêutica pode melhorar a estabilidade do ativo contra a degradação.

Entre as estratégias de fotoproteção encontra-se a inibição da formação e/ou o seqüestro de radicais livres e espécies reativas de oxigênio geradas em conseqüência da exposição à radiação UV, mediante aplicação tópica de antioxidantes. No presente trabalho avaliou-se a permeação cutânea e o efeito da aplicação tópica de um extrato de Pothomorphe umbellata nos efeitos da exposição aguda e crônica à radiação ultravioleta, na pele de camundongos sem pêlo. No estudo de permeação cutânea foram testadas três formulações (gel, gel-creme e creme) contendo o princípio ativo do extrato (4-nerolidilcatecol) isolado. Também foram testadas duas formulações (gel, e gel-creme) contendo o extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata, quanto à permeação do princípio ativo 4-nerolidilcatecol. A formulação gel tanto para o princípio ativo isolado, quanto para o princípio ativo presente no extrato, apresentou o melhor desempenho, sendo o gel o veículo escolhido para preparação da formulação utilizada nos ensaios de exposição crônica e aguda à radiação ultravioleta. Nos estudos de exposição aguda à radiação UVB não foram observadas alterações significativas nos níveis de ácido ascórbico e na atividade enzimática, mas sim uma redução de 40% (p<0,01) na concentração de &#945;-tocoferol na pele do grupo de. camundongos sem pêlo, controle irradiado. No grupo tratado com P. umbellata, o &#945;-tocoferol foi totalmente preservado, quando comparado aos níveis encontrados no grupo controle não irradiado (&#8776;100%, p>0,05). No estudo de exposição crônica dos camundongos sem pêlo à radiação ultravioleta, os grupos irradiados que não receberam tratamento com gel de P. umbellata apresentaram a pele fotoenvelhecida. O grupo irradiado e tratado com o gel de Pothomorphe umbellata não apresentou diferença significativa em relação ao grupo controle não irradiado, o que demostra que o extrato de Pothomorphe umbellata pode ser empregado com sucesso como agente foto protetor tópico no fotoenvelhecimento da pele. / Topical administration of antioxidants provides an efficient way to enrich the endogenous antioxidant system and thus may be a successful strategy for diminishing ultraviolet radiation-mediated oxidative damage in the skin. The Brazilian Flora is rich in medicinal plants with a high potential to provide these antioxidant substances. Crude dried root ethanolic extracts of Pothomorphe umbellata, from the piperaceae family, demonstrated a significant activity in the prevention of in vitro spontaneous brain lipid peroxidation. This activity was attributed to 4-nerolidylcathecol, a compound isolated from the hexane extracts of roots and leaves of P. umbellata. In this work we evaluated the influence of topical application of P. umbellata root extract gel, containing 0,1% of 4-nerolidylcathecol, on the antioxidant network in ultraviolet-induced oxidative damage in hairless mouse skin. In this study we evaluated the influence of three different formulations (gel, gel-emulsion and emulsion) on the percutaneous absorption of 4-nerolidylcathecol, an antioxidant compound isolated from Pothomorphe umbellata root extracts. Also the absorption of the isolated 4-nerolidylcathecol was compared with its absorption when dried Pothomorphe umbellata root ethanolic extract was incorporated in gel and gel-emulsion formulations. The 4-nerolidylcathecolgel formulation presented the higher rate of penetration, leading to higher dry drug levels in the tissue.4-nerolidylcathecol was also absorbed in biological conditions and was stable when exposed to UV-irradiation. The UV-irradiation had no influence on ascorbic acid levels, or on the antioxidant enzymes activities, but topical P. umbellata treatment protected &#945;-tocopherol from depletion after UV-irradiation. After UV-irradiation &#945;-tocopherol concentration decreased significantly (&#8776;40%, p<0.01) in irradiated control groups, while in the P. umbellata treated group, a-tocopherol was totally preserved (&#8776;100%, p>0.05). We also tested the extract activity on animals chronically exposed to UV-radiation. The extract was able to prevent photoaging of the irradiated animals skin. These data demonstrate that P. umbellata may successfully employed as a topical photoprotective agent.

O uso de antioxidantes de origem natural apresenta uma perspectiva promissora na prevenção dos efeitos adversos causados pela radiação ultravioleta, incluindo o fotoenvelhecimento e a fotocarcinogênese. As atividades antioxidante, fotoprotetora e antienvelhecimento cutâneo foram demonstradas para o extrato de Pothomorphe umbellata. No entanto, seu potencial protetor da fotocarcinogênese ainda não foi estabelecido. O objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da aplicação tópica do gel de extrato de raiz de P. umbelallta nas alterações promovidas pelas exposições aguda (dose única - 0,20 KJ/m2) e crônica (4 semanas, dose total de 8,6 KJ/m2, 5 semanas, 13,17KJ/m2, 15 semanas, 55,51 KJ/m2) à radiação ultravioleta B na pele de camundongos sem pelo. Para avaliação dos antioxidantes não enzimáticos, ácido ascórbico e &#945;-tocoferol, foram utilizados métodos de cromatografia líquida de alta eficiência e para avaliação dos enzimáticos, catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase e glutationa redutase, métodos espectrofotométricos. As modulações das proteínas p53 e PCNA foram avaliadas por imunohistoquímica. Os resultados demonstram que o tratamento com gel de extrato de raiz de P. umbellata é capaz de modular o sistema antioxidante na pele de camundongos sem pêlo, proporcionando maior proteção frente à exposição à radiação UVB. Além disso, os resultados sugerem que a aplicação tópica de extrato de P. umbellata protege contra os danos causados pela radiação modulando vias de reparo e/ou morte celular. Estes resultados contribuem para elucidação do mecanismo de ação do extrato de P.umbellata na pele exposta à radiação UVB, indicando sua capacidade em preservar a pele sadia após a irradiação. / Topical application of botanical antioxidants has been appreciated as a viable approach to reduce the occurrence of deleterious damage cased by sunlight exposure, such as photoaging and photocarcinogenesis. The plant Pothomorphe umbellata has been shown to exert a potent antioxidant activity on the skin and to delay the onset and reduce the incidence of UVB-induced skin damage and photoaging. The purpose of this study was to evaluate the effects of topical P. umbellata treatment on acute (single dose 0.20 KJ/m2) and chronic (4 weeks, total dose 8.6 KJ/m2, 5 weeks, 13.17KJ/m2, 15 weeks, 55.51 KJ/m2) UVB-induced damage hairless mouse epidermis. Nonenzymic antioxidants, ascorbic acid and &#945;-tocopherol, were assayed by high performance liquid chromatography and enzymic antioxidants, catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione reductase, spectrophotometrically. UVB-induced p53 and PCNA were deteted by immunohistochemical technique. The data collected here suggest that topical application of P. umbellata extract affords strong protection against UVB-induced damages in skin epidermis by either preventing DNA damage or enhancing repair and inhibiting UVB-caused apoptosis and sunburn cell formation. Moreover, the results also suggest that P. umbellata extract modulates the cutaneous antioxidant network resulting in reduced susceptibility to UVB-induced oxidative damage. Together these results contribute for the elucidation of the mechanism of action of P.umbellata on UVB exposed skin and indicate the capacity of this extract to preserve skin health after irradiation.