Neste trabalho, um eletrodo compósito à base de grafite e poliuretana (EGPU) 60% (grafite, m/m) foi avaliado quanto ao seu potencial para determinação dos antibióticos da família das tetraciclinas em amostras de água natural, de urina bovina e humana, e em amostras de leite bovino e humano. Visando desenvolver métodos simples, de baixo custo e com baixa geração de resíduos, o eletrodo foi usado sem modificação, para atender a estes propósitos e considerando os níveis de concentração das tetraciclinas nas amostras biológicas. A otimização dos parâmetros em voltametria de pulso diferencial (DPV) foi realizada para a determinação dos antibióticos tetraciclina (TC), oxitetraciclina (OTC) e clortetraciclina (CTC) em tampão fosfato 0,10 mol L-1 pH 2,3, permitindo atingir limites de detecção de 2,6 µmol L-1, 1,7 µmol L-1 e 0,82 µmol L-1, respectivamente, sem a necessidade de renovação da superfície, entre as medidas sucessivas. Durante as determinações de TC e OTC em amostras de água natural e purificada, foram observadas recuperações entre 92,6% e 100%, após etapa de pré-concentração. As amostras de urina foram acidificadas, em seguida centrifugadas para a remoção de partículas sólidas e proteínas. A TC e OTC foram determinadas diretamente, na amostra de urina tratada e diluída em tampão fosfato 0,10 mol L-1 pH 2,3. Durante a determinação de TC e OTC nas amostras de urina, após o preparo da amostra, foram obtidas recuperações entre 96% e 100%. As amostras de leite bovino e humano foram intencionalmente contaminadas com TC. Após preparo das amostras, estas foram submetidas à extração, usando cartucho para extração em fase sólida (SPE). Após eluição e retomada do analito retido no cartucho, a quantidade de TC presente nas amostras foi determinada pelo método de adição de padrão, usando DPV, com EGPU 60% (grafite, m/m). Foram obtidas recuperações entre 76% e 103% para as amostras de leite bovino e recuperações entre 91% e 100 % para as amostras de leite humano, que mostram que o eletrodo proposto pode ser usado neste tipo de determinação com as características postuladas acima. / A bare graphite-polyurethane composite electrode 60% (graphite, m/m) (GPUE) was evaluated in the determination of tetracycline (TC) class antibiotics in natural water as well as, in human and bovine urine and in milk samples. Thus, a DPV procedure was optimized for the determination of tetracycline, oxytetracycline (OTC) and chlortetracycline (CTC) antibiotics in phosphate buffer 0.10 mol L-1 pH 2.3, resulting in LOD of 2.6 µmol L-1, 1.7 µmol L-1 and 0.82 µmol L-1, respectively. During the determination of TC and OTC in the water samples, recoveries between 92.6 and 100% were found, after pre-concentration stage. The urine samples were submitted to acidification followed by centrifugation to remove solids and proteins. During the determination of TC and OTC in urine samples, after pre-treatment of urine, recoveries between 96 and 100% were found. The composite electrode was also evaluated in the determination of TC in the bovine and human milk samples. During the determination of TC in milk, recoveries between 76 and 103% were found for bovine milk and recoveries between 91 and 100% were found for human milk after pre-concentration stage, showing the feasibility of the procedure.

Orientador: Marileda Bonafim Carvalho / Banca: Luciano Henrique Giovaninni / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Resumo: A cistite idiopática felina (CIF) é a causa mais comum de doença do trato urinário inferior felino (DTUIF), enquanto a cistite bacteriana é diagnosticada somente em 1% a 3% dos casos. No período de março de 2011 a outubro de 2012, 45 gatos com sinais de trato urinário inferior (STUI) e cinco gatos sadios foram incluídos no estudo. Os gatos foram avaliados por meio de exame físico e ultrassonografia abdominal. Foram coletadas amostras de sangue e urina para análises laboratoriais (hematologia, bioquímica clínica, urinálise e urocultura). Para os 45 gatos com STUI, os diagnósticos incluíram CIF não obstrutiva, CIF obstrutiva e cistite bacteriana. Não houve diferença significativa quanto à densidade, pH e qualidade do sedimento urinário entre as diferentes categorias etiológicas de DTUIF. A hematúria foi maior em gatos com STUI, e a piúria foi associada principalmente com cistite bacteriana. Adicionalmente, outros achados sugerem que raças específicas, idade, gênero e castração não estão associados com as manifestações de STUI em felinos / Abstract: Feline idiopathic cystitis (FIC) is the most common cause of feline lower urinary tract disease (FLUTD), whereas bacterial cystitis is diagnosed only in 1% to 3% of the cases. In the period from March 2011 to October 2012, 45 cats presenting signs of lower urinary tract (LUTS) and five health cats were included in the study. The cats went through a physical examination and abdominal ultrasonography. Blood and urine samples were collected for laboratorial analysis (hematology, clinical chemistry, urinalysis and urine culture). For the 45 cats presenting LUTS, the diagnosis included non-obstructive FIC, obstructive FIC, and bacterial cystitis. There were no significant differences in the urine specific gravity, pH and quality of the urine sediment in the different etiological FLUTD categories. The hematuria was higher in cats with LUTS, and piuria was associated mainly to bacterial cystitis. Additionally, other findings suggest that specific breed, age, gender, and neutering are not associated with manifestation of feline LUTS / Mestre

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Banca: Simone Biagio Chiacchio / Banca: Rogério Martins Amorim / Banca: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Banca: Júlio Augusto Naylor Lisboa / Resumo: A urolitíase obstrutiva apresenta elevada incidência em ovinos, principalmente nos animais confinados, e sua etiologia é multifatorial. Estudos relativos à litogênese, diagnóstico, tratamento e prevenção são necessários e tem aplicabilidade direta na produção intensiva de cordeiros. O objetivo geral deste trabalho foi desenvolver um modelo experimental para estudo da urolitíase em ovinos. De modo específico, pretendeu-se testar este modelo por avaliações laboratoriais (urinálise, hemogasometria, dosagem sérica de ureia e creatinina), confirmação do diagnóstico por exame ultrassonográfico e identificação dos tipos de cálculo (análise química). Utilizaram-se 100 ovinos, machos, com idade aproximada de três meses, confinados, divididos aleatoriamente em três grupos: Grupo I (n=40) 400mg/kg/PV de cloreto de amônio/animal/dia por 21 dias consecutivos; Grupo II (n=40) 400mg/kg/PV de cloreto de amônio/animal/dia por 42 dias consecutivos; Grupo III (n=20) controle, não recebeu cloreto de amônio. O cloreto de amônio foi adicionado no cocho junto com a ração total, que era constituída de 85% de concentrado e 15% de feno triturado de Coast-cross. Os Momentos (M) de colheita de amostras e avaliação clínica foram realizados com intervalo de sete dias, sendo M0 (imediatamente antes do início do tratamento com cloreto de amônio), M1 (sete dias após), M2, M3 (suspensão do cloreto de amônio em GI), M4, M5 e M6, totalizando 56 dias de confinamento. Colheram-se amostras de urina e de sangue total de todos os animais, nos diferentes momentos, para urinálise, hemogasometria e dosagem sérica de ureia e creatinina. Procedeu-se avaliação ultrassonográfica dos rins e da bexiga e, o exame físico dos animais em todos os momentos. Recuperaram-se cálculos no post-mortem após o final de experimento, que foram enviados para análise química... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The obstructive urolithiasis has the highest incidence in sheep, especially in confined animals, and its etiology is multifactorial. Studies on lithogenesis, diagnosis, treatment and prevention are needed and have direct applicability in intensive production of lambs. The aim of this study was to assemble an experimental model for the study of urolithiasis in sheep. Specifically, it was intended to test this model through laboratory evaluations (urinalysis, blood gas analysis, serum urea and creatinine), confirmation of diagnosis by ultrasound examination and identification of the types of calculi (chemical analysis). It was used 100 male feedlot sheep, aged approximately three months, randomly divided into three groups: Group I (n=40) - 400mg/kg/PV of ammonium chloride/animal/day for 21 consecutive days; Group II (n=40) - 400mg/kg/PV of ammonium chloride/animal/day for 42 consecutive days; Group III (n=20) - control, the animals did not receive ammonium chloride. Ammonium chloride was added in the trough along with the total ration , that was constituted by 85% of concentrate and 15 % of Coast-cross's hay triturated. The moments (M) of samples and clinical evaluation were performed with an interval of seven days, M0 (immediately prior to initiation of treatment with ammonium chloride, 15 days of feedlot), M1, M2, M3 (suspension of ammonium chloride in GI, 35 days of feedlot), M4, M5 and M6 (total 56 days of feedlot). Urine and whole blood samples were taken from all animals at different times, for urinalysis, blood gas analysis and serum urea and creatinine dosage. Ultrasound evaluation of the kidneys and bladder, and physical examination of animals were performed at all moments. Calculi were recovered in the post-mortem after the end of the experiment, which were sent for chemical analysis. In urinalysis, GIII did not showed cylinders... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luis Cuadrado Martin / Coorientador: Vanessa dos Santos Silva / Banca: Adriana Polachino do Vale / Banca: Maria Almerinda Vieira Fernandes / Resumo: Há discordância na literatura quanto à necessidade da realização da microscopia de fase para avaliação da origem da hematúria (glomerular ou não glomerular), isso mostra a necessidade de mais estudos para validar as modalidades de avaliação morfológica da hematúria. Os objetivos deste trabalho foram determinar o melhor ponto de corte da porcentagem dos diferentes padrões de células dismórficas na detecção da hematúria glomerular pelo microscópio óptico convencional e contraste de fase, verificar se a presença de proteinúria ou albuminúria pode auxiliar no diagnóstico da origem da hematúria e determinar o melhor ponto de corte para este parâmetro. Foram avaliadas de maneira cega 131 amostras de urina sendo 66 amostras de portadores de glomerulopatias e 65 amostras dos portadores de litíase renal da Faculdade de Medicina de Botucatu. Utilizaram-se amostras isoladas com densidade >1007 e com mais de 5 hemácias por campo de grande aumento. Verificou-se a presença e a porcentagem de codócitos e acantócitos tanto em microscópio óptico convencional com sedimento fresco e fixado submetidos à coloração de Papanicolaou e Panótico rápido LB e sedimento urinário fresco avaliado em microscópio de contraste de fase, além de determinar o índice de proteinúria e o índice de albuminúria. Os resultados desses métodos foram comparados entre si. Realizou-se regressão linear e diagrama de Bland-Altman das hemácias dismórficas para comparar os diferentes métodos. Curvas ROC foram traçadas para determinar a área sob a curva (ASC) e o melhor ponto de corte (PC) foi determinado pela maior soma de sensibilidade e especificidade. Nesse ponto foram calculadas a sensibilidade (S) e especificidade (Es), Valor Preditivo Positivo (VPP) e Valor Preditivo Negativo (VPN). No microscópio óptico convencional com sedimento urinário fresco, a ASC do dismorfismo eritrocitário total foi a que apresentou ... / Abstract: There is disagreement over the literature regarding the performance of phase microscopy to assess the origin f hematuria (glomerular or nonglomerular). This shows the need for further investigation in order to validate the best form of morphological evaluation of hematuria. The aims of this study were to determine the optimal cutoff point percentage for different patterns of dysmorphic cells in the detection of glomerular hematuria by conventional optical microscopy and phase contrast microscopy, to verify whether the presence of proteinuria or albuminuria may assist in the diagnosis of hematuria and also to establish an optimal cutoff point for this parameter. One hundred thirty-one urine samples were blinded evaluated at the Faculdade de Medicina de Botucatu, 66 samples of patients with glomerulopathies and 65 samples of patients with nephrolithiasis. Isolated samples with density greater than 1007 and with more than 5 erythrocytes per high-power field were used. The presence and percentage of codocytes and acanthocytes were verified by conventional optical microscopy using fresh and fixed urinary sediment subjected to Papanicolaou and Panótico Rápido LB staining and fresh urinary sediment was evaluated by phase contrast microscopy. Proteinuria and albuminuria rates were determined. The results of these methods were compared using linear regression analysis and Bland-Altman diagram of dysmorphic red blood cells. ROC curve plots were generated to determine the area under the ROC curve (AUC) and also an optimal cutoff point with the highest sum of sensitivity and specificity. At this point, it was possible to calculate sensitivity (TPR) and specificity (ES), positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV). In conventional optical microscope with fresh urinary sediment, the AUC of total dysmorphic erythrocytes showed the best result for the diagnosis of hematuria with AUC (IC 95%) ... / Mestre

Orientador: Paulo Roberto Kawano / Coorientador: Carmen Regina Pentean Ruiz Amaro / Banca: Hamilto Akihissa Yamamoto / Banca: Claudia Rucco Penteado Detregiachi / Resumo: INTRODUÇÃO: A Litíase do Trato Urinário (LTU) é uma afecção altamente prevalente na prática clínica diária, sendo conhecida há vários séculos. Sabe-se que, na maioria dos pacientes, os cálculos recorrentes apresentam composição similar aos previamente formados, sugerindo que este processo seja multifatorial e influenciado também pelas características da urina. Neste sentido, a variação do pH urinário exerceria papel fundamental na composição do cálculo renal. Classicamente, a urina 24h tem se constituído como uma das mais importantes ferramentas auxiliares na investigação e no tratamento dos fatores envolvidos na etiologia da LTU. Entretanto, a coleta desse tipo de exame apresenta grandes dificuldades práticas. Pesquisas recentes sugerem que a determinação do pH urinário obtido em amostra isolada de urina poderia ser tão representativa quanto a dosagem realizada na urina de 24 horas. Diante do exposto, novos estudos são necessários para auxiliar na determinação da metodologia ideal de avaliação e monitoramento do pH urinário em pacientes portadores de litíase renal. PACIENTES E MÉTODO: Foram avaliados prospectivamente 114 pacientes, portadores de litíase renal, acompanhados no ambulatório de metabolismo em nefrolitíase do Hospital de Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu. Após análise das principais características clínicas, todos os pacientes realizaram coleta de urina de 24 horas (U24h) e, uma segunda amostra foi obtida em jejum (Ujj), no dia da entrega do exame. Duas metodologias distintas (tira reagente e a leitura com pHmetro digital) foram empregadas para a determinação dos valores de pH urinário. RESULTADOS: Dos 114 indivíduos avaliados, 44 (39%) eram homens e 70 (61%) mulheres, com média de idade de 51,11 ± 12,93 anos. O índice de massa corporal médio (IMC) foi de 28,71 ± 4,56 Kg/m2. Na U24h, a análise do pH por tira reagente apresentou pH médio de 6,07 ± 0,74; valor ... / Abstract: INTRODUCTION: Urinary lithiasis (UL) is a highly prevalent condition in clinical practice, and has been known for centuries. In most patients, recurrent calculi composition is similar to the original ones, suggesting that it may be a multifactorial process, also influenced by urine characteristics. Thus, urinary pH variation may have an important role in calculus composition. Classically, 24-h urine collection (U24-h) is considered one of the most useful tools in investigation and treatment of urinary lithiasis etiology. However, this test is cumbersome to perform. Recent research suggests that a fasting urine pH may be as representative as U24-h. Therefore, further studies are necessary to determine the ideal methodology for evaluating and monitoring the urinary pH in patients with nephrolithiasis. SUBJECTS AND METHODS: A total of 114 patients with nephrolithiasis that are in use of citrate potassium were prospectively evaluated. All patients collected 24-h urine (U24h); and an aditional fasting sample was obtained (Uf) when delivering the first one at the lab. Two different methods (pH test paper and digital pHmeter) were used for the urinary pH determination. RESULTS: Among the 114 individuals evaluated, 44 (39%) were male and 70 (61%) female; mean age was 51.11 ± 12.93 years old and average body mass index (BMI) was 28.71 ± 4.56 kg / m2. Mean U24-h pH for test paper was 6.07 ± 0.74 and 6.02 ± 0.82 for Uf. Likewise, considering the digital pHmeter methodology, mean pH was 5.8 ± 0.78 and 5.75 ± 0.83, for U24-h and Uf, respectively. There was a good statistical correlation between urinary pH values obtained from pH test paper and pHmeter, for both types of urine sample (U24-h and Uf). CONCLUSION: The pH measurement in fasting urine sample was as effective as the standard method (U24-h) in the evaluation of patients with nephrolithiasis using potassium citrate / Mestre

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / O estanho é um elemento natural na crosta terrestre, amplamente utilizado na indústria pelo baixo ponto de fusão, formação de ligas, resistência à corrosão e oxidação. A exposição ao metal e seus compostos pode produzir diversos efeitos nos sistemas neuro,hemato e imunológicos, além de danos ao fígado e rins, entre outros. O objetivo desse trabalho foi a avaliação da exposição ao estanho dos indivíduos residentes na Vila Massangana. Para tal, metodologias para determinação do estanho em sangue e urina foram desenvolvidas (ET AAS). A mesma temperatura ótima de pirólise (1300°C) foi alcançada com ambas as matrizes, enquanto que a de atomização ficou em 2100°C e 2200ºC para sangue e urina, respectivamente. A maior sensibilidade foi alcançada na diluição de 7X para sangue, bem como 5X na urina, ambos diluídos em Triton X-100 0,1 por cento (v/v). (...) / Tin is a natural element in the earth's crust, widely used in industry due to some characteristics like low melting point, production of alloys and resistance to corrosion and oxidation. Exposure to tin metal and its compounds may produce different effects on neural, hemato and immunological systems as well as damage to the liver and kidneys, among others. The aim of this work was the exposure assessment to tin for the population from Vila Massangana. To this end, methodologies for the determination of tin in blood and urine were developed (ET AAS). The same optimum pyrolysis temperature (1300°C) were achieved with both matrices, while the optimum atomization temperature was 2100°C and 2200°C for blood and urine, respectively. The highest sensitivity was achieved in the dilution of 7X for blood and urine 5X, both diluted in 0.1% (v / v) Triton X-100. The efficiency of three different masses of the modifier (Pd and Mg) was studied and the best sensitivity was reached using 10 !g Pd + 6 !g Mg and 15 !g Pd + 10 !g Mg for both matrices. Tin showed linearity up to 50 !g Sn L-1 for curves in blood and urine, which showed the existence of the matrix effects, 0.81 ± 0.06 e 1.32 ± 0.04, respectively. The limit of detection (3") was 0.8 ± 0.1 μg L-1 for urine and 2.7 ± 0.5 μg L-1 for whole blood, which allows the determination of tin in blood and urine of the population not exposed environmentally. The accuracy was verified by analysis of reference materials. For urine, Seronorm Urine (54.6 ± 2.7 μg L- 1) was used and the result was 54.3 ± 1.6, while Contox I Serum (3,0 ± 2 μg L-1) was used for blood, resulting in 2.9 ± 1.2 μg L-1 . After validation, tin concentration was determined in whole blood and urine samples of 22 individuals (blood: 10.5 ± 1.7 μg L- 1, urine: 3.2 ± 1.1 μg L-1) living in Vila Massangana and 11 people (blood: 8.4 ± 1.2 μg L-1; urine: 1.0 ± 0.5 μg L-1) in the control group. There was a statistically significant difference (p <0.05) between these two groups, showing the existence of environmental exposure. There was a statistically significant difference (p <0.05) between these two groups, showing the existence of environmental exposure.

No Brasil, estudos apontam aumento de quase 30% no número de acidentes de trânsito em rodovias federais de 2008 a 2010 sendo que, no último ano, os veículos de carga, especificamente, estiveram envolvidos em 88.963 acidentes. Relata-se que muitos motoristas profissionais têm estreitos prazos de entrega a serem cumpridos e, portanto, se veem obrigados a dirigir por longo período de tempo e/ou sem paradas para descanso. A fim de atingir tal objetivo, alguns motoristas acabam recorrendo ao uso de anfetaminas, estimulantes do SNC, popularmente conhecidas como \"rebite\". Análises toxicológicas utilizadas para verificar o uso de drogas por motoristas de caminhão em estudos epidemiológicos, por exemplo, baseiam-se em testes de triagem utilizando imunoensaios, cujos resultados positivos são confirmados por técnicas de espectrometria de massas. Os testes disponíveis no mercado para a triagem detectam a presença de anfetamina, que pode ser proveniente da biotransformação de alguns medicamentos. Entretanto, motoristas de caminhão relatam também o uso dos anorexígenos Dualid® S, Inibex® S e Hipofagin® S, cujo princípio ativo é a dietilpropiona, que se biotransforma diretamente em fenilpropanolamina e, portanto, não é detectada pelos testes de triagem convencionais, o que pode gerar resultados falso-negativos e, assim, subestimar o número de casos positivos em uma pesquisa. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e validação de um método para detecção de anfetamina, dietilpropiona e femproporex, por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD) e a posterior aplicação deste método em amostras de urina coletadas de caminhoneiros. A extração líquido-líquido da urina (2,0 mL) foi realizada com éter etílico (4,0 mL) e a validação seguiu o guia do United Nations Office on Drugs and Crime. Os limites de detecção e quantificação encontrados foram 120 e 150 ng/mL respectivamente. O método mostrou-se preciso, com coeficientes de variação inferiores a 15% e a recuperação para os três analitos foi superior a 50%. A linearidade abrangeu a faixa de 150 ng/mL a 1000 ng/mL (r2 > 0,99) e para a dietilpropiona e anfetamina foi utilizado o coeficiente de ponderação 1/y devido à heteroscedasticidade apresentada. Entre as amostras analisadas (n=385), nove foram positivas para anfetamina e uma, para femproporex e anfetamina. Através da aplicação de questionário, foi traçado também o perfil sociodemográfico dos entrevistados. O método desenvolvido se mostrou preciso e sensível, podendo assim ser utilizado em estudos epidemiológicos e testes em ambientes de trabalho para a análise de anfetamina, dietilpropiona e femproporex em urina / In Brazil, studies indicate an increase of approximately 30% in the number of traffic accidents on federal highways, from 2008 to 2010 and, in 2010, cargo vehicles, specifically, were involved in 88,963 accidents. In fact, many professional drivers have tight deadlines to be met and, therefore, are forced to drive for long periods of time and/or without rest stops. In order to achieve this goal, some drivers end up resorting to the use of amphetamines, CNS stimulants, popularly known in Brazil as \"rebite\". Toxicological analyses used to verify the use of drugs by truck drivers in epidemiological studies are based on immunoassays screening tests and positive results are confirmed by mass spectrometry techniques. The commercially available screening tests detect the presence of amphetamine, which can be derived from the biotransformation of some drugs. However, truck drivers also report the use of anorectic Dualid® S, Hipofagin® S and Inibex® S, whose active compound is diethylpropion, which metabolizes directly to phenylpropanolamine. Therefore it is not detected by conventional screening tests, which can generate false-negative results and underestimate the number of positive cases. Thus, the aim of this study was the development and validation of a method for the detection of amphetamine, diethylpropion and fenproporex by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD) and the subsequent application of this method in urine samples collected from truck drivers. The liquid-liquid extraction of urine (2.0 mL) was carried out with diethyl ether (4.0 mL) and the validation was performed according to United Nations Office on Drugs and Crime guidelines. The limits of detection and quantification were 120 and 150 ng/mL, respectively. The method was precise, with coefficients of variation less than 15% and the recovery for the three analytes was greater than 50%. The linearity covered the range of 150 ng/mL to 1000 ng/ml (r2 > 0.99) and for diethylpropion and amphetamine it was applied the weighting factor 1/y due to heteroscedasticity. Among the analyzed samples (n=385), nine were positive for amphetamine and one tested positive for femproporex and amphetamine. Sociodemographic profile of the interviewees was obtained through the application of questionnaires. The developed method proved to be accurate and sensitive, and thus can be used in epidemiological studies and in workplace drug testing

As aflatoxinas são substâncias naturais que apresentam efeitos tóxicos aos humanos e são reconhecidamente carcinogênicas. Estas substâncias podem estar presentes na dieta humana ou, em casos específicos, no ar respirado. Desta maneira, a exposição humana às aflatoxinas é objeto de muita preocupação. Uma das maneiras mais eficazes de avaliar a exposição humana as aflatoxinas é através da mensuração da presença de biomarcadores da exposição a estas substâncias em fluidos biológicos. Dentre as possibilidades de biomarcadores de exposição às aflatoxinas tem-se que aflatoxina M1 (AFM1), presente na urina e leite humano, é considerada um biomarcador válido. Assim sendo, o objetivo deste trabalho de pesquisa foi avaliar a presença de AFM1 em amostras de urina provenientes de indivíduos residentes na região urbana e rural da cidade de Piracicaba-SP, assim como, de leite de gestantes de Piracicaba e cidades da região. Nos indivíduos doadores de amostras de urina foi levantado também o padrão de ingestão de alimentos com alto risco de conter aflatoxinas, através da aplicação de inquéritos de freqüência alimentar e recordatórios 24 horas. A análise de AFM1 em urina e leite foi realizada por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) com detecção por fluorescência. A extração e purificação do extrato foram realizadas com auxílio de colunas de imunoafinidade. No total 69 amostras de urina e 18 de leite foram analisadas. Entre as amostras de urina detectou-se a presença de AFM1 em 54 (78%) das amostras, com concentrações variando de 1,8 até 39,9 pg/mL. Não foi observada diferença estatística entre as concentrações médias detectadas entre urinas de indivíduos da zona urbana e rural, bem como no nível de consumo de produtos de risco. Apesar das concentrações de AFM1 detectadas serem inferiores as concentrações médias reportadas em outros países a freqüência de amostras positivas foi bastante elevada mostrando que as populações estudadas estão sendo expostas às aflatoxinas. Assim, melhores avaliações dos níveis de exposição necessitam ser realizados considerando que a amostragem utilizada foi pontual, pode existir variação de contaminação sazonal com aflatoxinas na dieta e a contaminação é heterogênea dentro no alimento. Não foi observada uma correlação entre o nível do consumo de produtos de risco e as concentrações detectadas em amostras de urina. Apenas uma amostra de leite apresentou contaminação detectada; entretanto, o nível de contaminação estava entre o limite de detecção (LD) e o limite de quantificação (LQ). / Aflatoxins are natural substances that present toxic and carcinogenic effects to humans. These substances may be present in human diet or, in specific cases, in the breathing air. Thus, the human exposition to aflatoxins is object of concern. One of the most effective ways to evaluate human exposition to aflatoxins is to measure the presence of biomarkers in biological fluids. Among the possibilities of aflatoxin presence biomarkers, the aflatoxin M1 (AFM1), present in human urine and milk, is considered a valid biomarker. The objective of this work was to evaluate the presence of AFM1 in urine samples from individuals who live in urban and rural areas in the county of Piracicaba, state of São Paulo, Brazil, and in milk of pregnant women from Piracicaba and neighbor cities. Urine-donor individuals were researched in relation to the ingestion of food with high risk of containing aflatoxins through the application of a food frequency questionnaire and 24-hour recall. The analysis of AFM1 in urine and milk was performed through high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. The extract purification and extraction were performed with the aid of immunoaffinity columns. Overall, 69 urine and 18 human breast milk samples were analyzed. Among urine samples, the presence of AFM1 was detected in 54 (78%), with concentrations ranging from 1.8 to 39.9 pg/mL. No statistical difference was observed between average concentrations detected in the urine of individuals from urban and rural areas, as well as the consumption of aflatoxin risky food. Although the AFM1 concentrations detected are lower than those reported for other countries, the frequency of positive samples was quite high, showing that the populations studied are exposed to aflatoxins. Thus, further evaluations on the exposition levels should be performed, and considering that the sampling used in this work was punctual, there may be seasonal contamination variations in diet and the contamination level is heterogeneous within a food. No correlation between the consumption of risky food and concentrations detected in urine samples was observed. Only one milk sample presented detected contamination; however, the contamination level was between the limit of detection (LOD) and the limit of quantification (LOQ).

Na tentativa de reduzir o número de ocorrência de acidentes de trânsito, o Brasil adotou leis para restringir o consumo de álcool por motoristas e para garantir que as mesmas sejam cumpridas, o contingente policial conta com teste de etilômetro. Ao realizar o teste, se o resultado for positivo para o uso de etanol, o motorista pode ser encaminhado para uma unidade de saúde para que a coleta de sangue seja realizada, para confirmar a presença de etanol ou de outras drogas caso necessário. Porém, pode haver um longo tempo entre a abordagem do motorista e a realização da coleta de sangue, fazendo com que a concentração de etanol no organismo do motorista se altere, além disso, a coleta de sangue é um método invasivo e é necessária a presença de um profissional especializado para que seja realizada. O presente estudo propõe a utilização da saliva como matriz biológica alternativa para dosagem de etanol em motoristas, uma vez que essa matriz permite a dosagem de etanol e de outras drogas, além de permitir que a análise seja repetida, diferentemente do teste do etilômetro, desde que a cadeia de custódia for preservada. Além disso, a coleta dessa amostra não é invasiva, podendo ser realizada no local da abordagem e sob supervisão (coleta vigiada), sem necessitar de profissional especializado. Para verificar se a variação de etanol ao longo do tempo na saliva é semelhante à do ar exalado e da urina, matrizes já utilizadas na dosagem de etanol em motoristas, foi realizado um experimento de ingestão controlada de bebidas alcoólicas por voluntários sadios de maneira controlada, coletando-se amostras de saliva, urina e ar exalado nos tempos de 10, 30, 60 e 90 min após a ingestão. Na segunda etapa do estudo, foi verificado um possível interferente no teste de Etilômetro e na análise de saliva, uma vez que o limite de etanol permitido por lei atual é muito baixo, fazendo-nos questionar se o uso de produtos comuns ao dia a dia e que contém álcool em sua composição, como o enxaguatório bucal, seria capaz de gerar um resultado falso positivo para a ingestão de bebidas alcoólicas. No experimento de interferência, foram testados os seguintes enxaguatórios bucais: Anapyon®, Listerine Cool Mint®, Listerine Cuidado Total®, Cepacol®, Oral B®, Oral B complete®, e ar exalado e saliva foram coletados nos tempos de 5, 10, 15 e 20 minutos. O etanol em amostras de saliva e urina foi determinado por cromatografia em fase gasosa acoplada a detector de ionização por chama (GC-FID) e as amostras de ar exalado foram analisadas no Etilômetro Alcotest 7410 da Dräger. / In an attempt to reduce the number of traffic accidents, Brazil has adopted laws to restrict ethanol consumption among drivers, and to guarantee the effectiveness of this law, police officers make use of breathalyzers. When the breathalyzer test is performed, the results can indicate alcohol intake, in this case the driver can be routed to a health unit to collect blood, and then ethanol dosage can be made as well as other drugs if necessary. Therefore, a long time can occur between drivers approach and the blood collection, and the concentration of ethanol in blood can be altered. In addition this sample collection is invasive and needs an specialized personnel to be done. The present study proposes the use of saliva as an alternative biological matrix to ethanol dosage in drivers, once this matrix permits not only the dosage of alcohol but as well as other drugs, and this analysis can be repeated, if the chain of custody has been preserved. Besides, saliva has a non invasive way of collection and can be done under supervision and does require specialized personnel. To verify if the range of ethanol concentration in saliva is the same found in urine and breath, matrixes already used to monitor drivers in traffic, an experiment of alcohol intake in a controlled manner was performed, and urine, saliva and breath were collected in 10, 30, 60 and 90 minutes after alcohol intake. In a second stage of this study, a possible interfering in the breathalyzer test and in saliva analysis was investigated, since the limit if ethanol permitted for drivers in now very low, making us wonder whether the use of products like mouthwashes, that contain ethanol in its composition is capable of generate an false positive result for alcohol intake. It was tested the following mouthwashes: Anapyon, Listerine Cool Mint, Listerine Cuidado Total, Cepacol, Oral B , Oral B complete. Breath and saliva were collected in 5, 10, 15 and 20 minutes after the mouthwashes use. The ethanol in saliva and urine was determined using Gas Chromatography with Flame Ionization Detector (GC-FID), and the ethanol in breath was analyzed using Alcotest 7410 breathalyzer by Dräger.

Metodologia proteômica baseada em eletroforese bi-dimensional (2D-PAGE) foi usada para auxiliar no entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na injúria renal induzida pelo flúor (F) e definir biomarcadores potenciais para fluorose. Três grupos de ratos Wistar machos recém-desmamados (21 dias de vida) foram tratados com água de beber contendo 0 (controle), 5 ou 50 ppm F, por 60 dias (n=6/grupo). Durante o período experimental, os animais foram mantidos individualmente me gaiolas metabólicas, a fim de que o consumo de água e ração fosse avaliado, bem como as excreções urinária e fecal de F. Os animais foram mortos e o rim esquerdo e o soro foram coletados para análises histopatológica e de F, respectivamente. Para análise proteômica foram coletados o rim direito e a urina (no dia anterior ao sacrifício, num coquetel contendo inibidores de protease em gelo). Após o isolamento das proteínas, os perfis proteômicos renal e urinário foram examinados usando 2D-PAGE e coloração com azul de Coomassie brilhante. Foi possível detectar uma doseresposta em relação à ingestão e excreção de F, bem como em relação aos níveis de F presentes no soro e nos rins dos animais. As análises histológicas não revelaram danos aos rins induzidos pelo F, com exceção de uma congestão vascular no grupo de 50 ppm F. Para os rins, a análise quantitativa de intensidade (software Image Máster Platinum, alterações de 2 vezes) revelou 30 e 17 proteínas diferencialmente expressas, respectivamente, entre os grupos controle X 50 ppm F e controle X 5 ppm F. Para a urina, 9, 10 e 13 proteínas aumentaram ou diminuíram nos grupos controle X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F e controle X 50 ppm F, respectivamente. Nove proteínas foram identificadas satisfatoriamente por MALDI-TOF TOF MS. As proteínas identificadas estão relacionadas principalmente ao metabolismo, desintoxicação e housekeeping. Esses dados indicam que a análise proteômica de rim e urina de animais tratados com F é capaz de identificar proteínas diferencialmente expressas, mesmo em casos de baixas doses de F. Assim, essa ferramenta pode contribuir para o entendimento dos mecanismos envolvidos na fluorose, apontando proteínas-chave que deveriam ser melhor investigadas, bem como potenciais biomarcadores de toxicidade. / Two-dimensional gel electrophoresis (2D-PAGE) based proteomics approach was used to better understand the molecular mechanisms of renal injury induced by fluoride (F) and define potentials biomarkers of fluorosis. Three groups of weanling male Wistar rats (21 days old) were treated with drinking water containing 0 (control), 5, or 50 ppm F for 60 days (n=6/group). During the experimental period, the animals were kept individually in metabolic cages, in order to analyze the water and food consumption, as well as fecal and urinary F excretion. Animals were killed and left kidney and serum were collected for histopathological examination and F analysis, respectively. For proteomic analysis, right kidney and urine (one day before sacrifice, in protease-inhibitors cocktail for 8 hours in ice box) were collected. After protein isolation, renal and urinary proteome profiles were examined using 2D-PAGE and coomassie brilliant blue staining. It was possible to detect a dose-response regarding F intake and F excretion, as well as F levels in serum and kidneys. The histological analysis revealed no damage in kidneys induced by F, except for a vascular congestion in the 50 ppm F group. For kidney, quantitative intensity analysis (Image Master Platinum software, 2-fold changes) revealed 30 and 17 differentially expressed proteins between control X 50 ppm F, and control X 5 ppm F groups, respectively. As for urine, 9, 10 and 13 proteins increased or decreased in control X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F and control X 50 ppm F groups, respectively. Nine proteins were successfully identified by MALDI-TOF TOF MS. The identified proteins are mainly related with metabolism, detoxification and housekeeping. These data indicate that proteomic analysis in kidney and urine of F-treated animals is able to identify differentially expressed proteins, even in cases of low F doses. Thus, this approach can contribute for the understanding of the mechanisms underlying fluorosis, by indicating key-proteins that should be better addressed, as well as potential toxicity biomarkers.