As regiões orofacial e craniana são densamente inervadas pelo nervo trigêmeo e suas ramificações. Condições patológicas, como cefaléias e dores orofaciais, têm sua fisiopatogenia relacionada ao funcionamento do sistema trigeminal. Existem poucos modelos experimentais de avaliação comportamental para estudo da nocicepção mediada pelo nervo trigêmeo. Essa dissertação teve por objetivo realizar estudos comportamentais sobre a modulação da nocicepção mediada por vias trigeminais, em modelo animal correlacionável com os quadros de dores orofaciais e cefálicas em seres humanos. Para tal, foi promovida a ativação do sistema trigeminovascular de modos periférico (dor orofacial induzida por formalina) e sistêmico (modelo neurovascular de ativação sistêmica por administração de nitroglicerina). Após essa ativação, avaliaram‐se comportamentos de auto‐limpeza, motricidade e orientação espacial, em campo aberto, e resposta reflexa a estímulo nociceptivo, por meio da medida de latência de retirada da cauda. Entre as respostas comportamentais avaliadas, o tempo despendido em reflexo de auto‐limpeza foi considerado o parâmetro representativo da resposta nociceptiva no modelo de dor orofacial induzida pela formalina. A administração de nitroglicerina, por si só, não foi capaz de promover alterações comportamentais sugestivas de atividade nociceptiva. A medida de latência de retirada da cauda não foi capaz de aferir alterações nociceptivas potencialmente desencadeadas pelos dois modelos empregados nessa Dissertação. Na associação desses dois modelos, observou‐se que a nitroglicerina foi capaz de promover redução do tempo gasto no reflexo de auto‐limpeza desencadeado pela formalina administrada por via subcutânea. É possível que a nitroglicerina participe modulando e/ou ativando os mecanismos envolvidos na nocicepção trigeminal, porém mais estudos necessitam ser realizados para delinear melhor sua ação nesse processo. / The orofacial and cranium regions are densely innervated by the trigeminal nerve and their branches. Pathological states as headache and orofacial pain have their pathogenesis related to the trigeminal functions. There are few experimental models for behavioral evaluation of the nociception mediated by the trigeminal nerve. The present work aimed to study the behavioral parameters related to the modulation of trigeminal system, using an animal model capable of simulating orofacial and cephalic pain in human beings. Afterwards, it was performed the activation of trigeminovascular system using regional (through the orofacial formalin test) and/or systemic models (through intraperitoneal administration of nitroglycerine). In open field, it was evaluated grooming, crossing, and rearing behaviors. In tail-flick test, it was evaluated the nociceptive response to the noxious stimulus. In the present study, grooming was considered the representative behavior of the nociceptive response in the orofacial pain model (induced by formalin). Nitroglycerine was not capable to determine behavioral changes that suggest nociception reaction in the open field. The tail‐flick latency did not detect potential nociceptive effects occurred in the evaluated models. In the association of the two models of regional and systemic trigeminal activation, nitroglycerine reversed the increase of grooming induced by the subcutaneous administration of formalin. The result suggests that nitroglycerine could act modulating and/or activating mechanisms involved in the trigeminal nociception. However, more studies are needed.

Determinou-se a Intensidade de Atividade de Inibição (IINIB) e a Intensidade de Atividade de Inativação (IINAB) de extratos hidroalcoólicos submetidos a destilação fracionada em rota-vapor com reidratação posterior, de 32 plantas com indicativo etnográfico condimentar na região metropolitana de Porto Alegre/RS, sobre inóculos padronizados de Escherichia coli (ATCC 11229), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Salmonella enteritidis (ATCC 11076) e Enterococcus faecalis (ATCC 19433). Coletou-se talos, folhas, frutos ou bulbos preferencialmente em período de floração. Extratos de 12 plantas apresentaram capacidade de inibição e ou inativação seletiva sobre os inóculos padronizados, sendo que as plantas que melhor se destacaram foram sálvia (Salvia officinalis L.), alho poró (Allium porrum L.), alho nirá (Allium tuberosum L.) e pimentas do tipo Jardim (Capsicum annuum L.), malagueta (Capsicum frutencens L.), calabreza (pool de Capsicum sp.) e dedo de moça (Capsicum baccatum L.). S. aureus demonstrou a maior resistência, enquanto que S. enteritidis foi a mais sensível. Simulou-se ainda, alimento envolvendo leite desnatado estéril, condimentado com estragão (Artemisia dracunculus Linn. ASTERACEAE var inodora) no substrato BHI , contaminado com Log 104 UFC/ml de Salmonella enteriditis (ATCC 11076), verificando-se posteriormente, em duas repetições independentes, a ausência de isolamento desta bactéria em alíquotas de 25 ml, após períodos de 24, 48 e 72 horas de incubação à 36ºC, comprometendo a Validade Preditiva dos Resultados Negativos (VPR -) da pesquisa de salmonela, neste alimento, segundo as normas regulamentares vigentes. Através do método de diluição, com sistema de tubos múltiplos e o emprego de desinibidores bacterianos, determinou-se a Intensidade de Inibição/Inativação (IINIB/IINAB) sobre esta bactéria, a partir de extrato aquoso do estragão, observando-se inibição expressiva, bem como ausência de inativação sobre salmonela. Na presença do fator matéria orgância/sujeira, representado por leite desnatado estéril, estes atributos se repetiram, embora com menor intensidade de inativação. Nas investigações epidemiológicas de surtos toxinfectivos alimentares poderiam ser acrescidas informações sobre condimentação vegetal, entre outras, pertinentes à complexidade crescente dos sistemas de alimentação e nutrição. / It was determined Intensity of Activity of Inhibition and the Intensity of Activity of Inativation of hidro-alcoholic extracts submitted the fracionated destillation in route-vapor with posterior rehidratation of 32 plants with etnograph indicative to spices in the region metropolitan of Porto Alegre/RS P, on standardized steins of Escherichia coli (ATCC 11229), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Salmonella enteritidis (ATCC 11076) and Enterococcus faecalis (ATCC 19433). One collected stems, leves, fruits or bulbs preferential in period of budding. Extracts of 12 plants had presented inhibition capacity and or selective inativation on the standardized species of bacteria, being that the plants that had better been distinguished had been sage (Salvia officinalis L.), poró garlic (Allium porrum L.), nirá garlic (Allium tuberosum L.) e types of peppers like, "garden" (Capisucum annuum L.), "malagueta" (Capsicum frutencens L.), "calabreza" (pool of Capsicum sp.) and young-woman-finger (Capsicum baccatum L.). S. aureus demonstrated the biggest resistence, while that S. enteritidis was most sensible. In the simulated food involving skimmed barren milk, condimented with tarragon (Artemisia dracunculus Linn. ASTERACEAE var. inodora) in substratum BHI, contaminated with Log 104 CFU/ml de Salmonella enteritidis (ATCC 11076), later, it was verified, in two independent repetitions, the absence of isolation of this bacterium in aliquot of 25 ml, after periods of 24, 48 and 72 hours of incubation at 36ºC, compromising the Preditive Validity of the Negative Results (PVR -) of the research of salmonela, in this food, according to prescribed norms. Through the Method of Dilution, with system of multiple pipes and the job of bacterial inhinibitors, it was determined Intensity of inhibition/inativation on the bacterium in study, from aquous extract of the tarragon, observing itself significant inhibition, as well as absence of inactivation on this bacteria. In presence of the organic substance, represented by skimmed barren milk, these attributes if had repeated, even so with lesser intensity of inhnibition. In the epidemiologic inquiries of alimentary toxinfective studies, information could be increased about vegetal condimentary, among others, pertinent to the increasing complexity of the systems of feeding and nutrition.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2014-05-13T13:07:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação-AnaCordeiro.pdf: 12658622 bytes, checksum: 9be8042ba2e3e6e3bf8746875ee265ca (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-13T13:07:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação-AnaCordeiro.pdf: 12658622 bytes, checksum: 9be8042ba2e3e6e3bf8746875ee265ca (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / Meningite é a inflamação das meninges em resposta a infecções ou exposição a agentes químicos. As meningites são classificadas como asséptica (MA) ou bacteriana (MB). Enquanto as MA, mais frequentemente causadas por enterovírus, geralmente são benignas e de curso autolimitado, as MB estão associadas a altas taxas de mortalidade e morbidade que permanecem inalteradas apesar dos avanços nas terapias antimicrobianas e cuidados intensivos para a manutenção dos sistemas vitais dos pacientes. O diagnóstico preciso e rápido das meningites é fundamental para a tomada de decisão em tempo hábil pela abordagem terapêutica adequada para cada forma de meningite. Neste trabalho, a associação de 2D-PAGE com espectrometria de massas permitiu a identificação de proteínas da resposta do hospedeiro para as meningites bacterianas – pneumocócica e meningocócica e para a meningite viral. Dentre estas proteínas, quatro são potenciais candidatos a biomarcadores para o diagnóstico diferencial das meningites e foram utilizadas para a construção de um modelo preditivo qualitativo com essa finalidade. Com a classificação de ausência/ presença de proteínas específicas da resposta do hospedeiro em cada condição patológica, foi possível diferenciar os pacientes com meningite pneumocócica, meningocócica, viral e os indivíduos sem infecção no sistema nervoso central. A descoberta desse modelo preditivo qualitativo proteico é o passo inicial para a construção de um kit rápido para o diagnóstico diferencial das meningites. A utilização deste kit poderá auxiliar na escolha da terapia adequada, de acordo com o agente etiológico, uma vez que o tratamento eficaz continua sendo a melhor alternativa para a redução das sequelas permanentes e de óbito associados à meningite bacteriana. Além disso, foram identificadas, por bioinformática, as principais vias metabólicas e de sinalização mais afetadas por cada uma das formas da doença, o que possibilitou a seleção de novos candidatos a alvos terapêuticos para as meningites. / Meningitis is the inflammation of the meninges in response to infection or chemical agents. The meningitis is classified as aseptic (MA) or bacterial (MB). While MA, most frequently caused by enteroviruses, is usually benign and self-limiting course, MB remains associated with high morbidity and mortality rates, despite advances in antimicrobial therapy and intensive care for the maintenance of patient’s vital systems. The fast and accurate diagnosis of meningitis is crucial for decision making to the appropriate therapeutic approach for each meningitis form. In this work, the association of 2D-PAGE with mass spectrometry allowed the identification of host response proteins to bacterial meningitis – pneumococcal and meningococcal, and viral meningitis. Among these proteins, four are potential candidate biomarkers for the differential diagnosis of meningitis and were used to build a qualitative predictive model for this purpose. Sorting absence / presence of specific proteins in the host response in each pathological condition became possible to differentiate pneumococcal, meningococcal, viral meningitis those individuals without central nervous system infection. The discovery of this novel qualitative predictive model is the beginning step for generation of a fast kit for differential meningitis diagnosis. It could provide individualized therapy according to the causative etiological agent of illness, once the effective treatment remains the best choice for lower permanent sequelae and mortality due to bacterial meningitis. Furthermore, were identified, by bioinformatics, the main metabolic and signaling pathways most affected by each meningitis form, which enabled the selection of novel candidate therapeutic targets for meningitis.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 42-45 / A Schinus terebinthifolius Raddi (STR) é utilizada pela população do litoral paranaense no tratamento de afecções bucais, porém são pouco conhecidos seus efeitos antiinflamatório e cicatrizante. Sendo assim, esta pesquisa teve como objetivo verificar a aç / Schinus terebinthifolius Raddi (STR) is used by the Paraná coast people in the healing of oral lesions, however its antiinflamatory and healing effects are not well established. Therefore the aim of this research was to verify the action of leaves extract

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A esquizofrenia é um transtorno neuropsiquiátrico crônico de fisiopatologia pouco conhecida, debilitante e de consequências muito graves. As teorias sobre a doença versam principalmente sobre uma desregulação em um ou mais sistemas de neurotransmissores, sendo que a progressão do transtorno acarreta na presença de danos oxidativos a proteínas e lipídeos de membrana desencadeados pelo desbalanço das enzimas antioxidante que combatem o estresse oxidativo muito presente neste transtorno. A presença de marcadores inflamatórios durante o desenvolvimento da esquizofrenia também indica a possibilidade de que o distúrbio seja inicialmente uma doença inflamatória. Para o tratamento os medicamentos antipsicóticos têm sido o método utilizado ao longo dos anos. Entretanto, a eficácia tardia do tratamento e os efeitos colaterais levam ao abandono dos pacientes ao uso dos antipsicóticos. Estudos tem demonstrado que o ácido ascórbico possui efeitos neuroprotetores, atuando também na síntese de neurotransmissores e ainda possui grande poder antioxidante, sendo por isso seu estudo de grande interesse para novas estratégias terapêuticas no transtorno esquizofrênico. O objetivo desse trabalho foi avaliar a suplementação do ácido ascórbico em um modelo animal de esquizofrenia. Foram avaliados parâmetros comportamentais tais como (discriminação olfatória, interação social e inibição por Pré-pulso), danos oxidativos as membranas através da avaliação das proteínas carboniladas, grupo sulfidrilas, glutationa e as TBARS, atividade das enzimas antioxidantes (SOD-CAT-GPx) e também citocinas envolvidas na inflamação IL-1β, IL-10. Foram utilizados 96 ratos Wistar com 60 dias de vida, os quais tiveram suplementação com ácido ascórbico nas doses de 0,1, 1 e 10 mg/kg ou salina durante 14 dias, via gavagem orogástrica. Posteriormente, 4 grupos (12 ratos por grupo) receberam administração de cetamina (25mg/kg) e 4 grupos receberam salina, via intraperitoneal, do 9º-15º dia de experimento. Após 30 minutos da última administração de cetamina/salina realizou-se os testes comportamentais, em seguida os animais foram decapitados por guilhotina e imediatamente as estruturas cerebrais retiradas (bulbo, córtex pré-frontal, estriado e hipocampo). Pode-se concluir que a suplementação de ácido ascórbico neste modelo animal de esquizofrenia induzido por cetamina foi capaz de prevenir danos oxidativos a lipídeos e proteínas. Além disso, foi observada também uma prevenção na perda sensório motora, além de manter as enzimas antioxidantes e citocinas pró e anti-inflamatórias dentro de parametros fisiológicos. Estes resultados mostram que o ácido ascórbico pode ser um importante alvo terapêutico na esquizofrenia podendo auxiliar na melhora da qualidade de vida do paciente esquizofrênico.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivos: Comparar a efetividade e tolerância da sinovectomia radioisotópica realizada pelo 90Y e pelo 153SmPHYP associados ao HT no tratamento de sinovite crônica de joelhos em pacientes com artrite reumatoide (AR). Material e Métodos: 84 pacientes com AR (90 joelhos) com sinovite crônica de joelhos participaram de um estudo controlado, randomizado, duplo-cego. Os pacientes foram randomizados para receber infiltração do joelho guiada por fluoroscopia com 5 mCi de Ítrio-90 associado a 40 mg de hexacetonide de triancinolona (HT) (grupoY/HT) ou 15 mCi de Samário-153 hidroxiapatita associado a 40 mg de hexacetonide de triancinolona (grupo Sm/HT) ou 40 mg de hexacetonide de triancinolona isolada (grupo HT). Foram realizadas avaliações “cegas” dos pacientes no tempo inicial (T0), após uma (T1), quatro (T4), 12 (T12), 32 (T32), e 48 (T48) semanas da intervenção através dos seguintes instrumentos de avaliação: escala visual analógica (EVA) de dor e edema, rigidez matinal, amplitude de movimento, circunferência do joelho, Escala Visual Analógica de Melhora (EVAM) segundo o paciente e o avaliador, porcentagem de melhora segundo o paciente, questionário de avaliação funcional HAQ, questionário genérico de qualidade de vida SF-36, questionário de avaliação funcional Lequesne de joelho, consumo diário de diclofenaco e de prednisona, número de telefonemas para médico, número de idas ao hospital, número de efeitos adversos. Resultados: a amostra foi homogênea no tempo inicial e houve três perdas antes da intervenção. Houve diferença estatística entre os grupos apenas para a variável EVA de dor (p=0,022*), a favor do grupo Y/HT em relação ao grupo Sm/HT (p=0,025*) em T1 e em relação ao grupo HT (p=0,026*) em T48. O grupo Sm/HT apresentou mais efeitos adversos (p=0,042*) e o grupo HT apresentou mais efeitos adversos não relacionados com o procedimento (0,012*). Para outras variáveis não houve diferença entre os grupos. Conclusão: a sinovectomia radioisotópica do 90Y associado ao HT apresentou melhor resposta do que a do 153SmPHYP associado ao HT e do que a do HT isolado apenas em relação à dor. / Objectives. The aim of the present study was to investigate effectiveness of and tolerance to Yttrium-90 and Samarium-153-particulate hydroxyapatite radiation synovectomy in patients with rheumatoid arthritis (RA) and chronic knee synovitis. Methods. Eight-four patients (90 knees) with chronic knee synovitis and RA (according to the American College of Rheumatology criteria) participated in a controlled double-blinded trial. Patients were randomized to receive an intra-articular injection with either 5 mCi Yttrium-90 plus 40 mg of triamcinolone hexacetonide (Y/TH Group), 15 mCi Samarium-153-particulate hydroxyapatite plus 40 mg of triamcinolone hexacetonide (Sm/TH Group) or 40 mg triamcinolone hexacetonide alone (Control Group). Blinded examination at baseline (T0), one (T1), four (T4), 12 (T12), 32 (T32) and 48 (T48) weeks post-intervention was performed on all patients and included a visual analog scale (VAS) for joint pain and swelling, morning stiffness, range of motion, knee circumference, Likert scale, percentage of improvement, Stanford Health Assessment Questionnaire (HAQ), SF-36 Questionnaire, Lequesne index, use of non-steroidal anti-inflammatory drugs, use of oral corticosteroids, events and adverse effects, calls to the physician and hospital visits. Results. The sample was homogeneous at T0 and there were three withdrawals prior to the injections. No differences were found between groups for most variables. Regarding the variable pain (VAS), there was a significantly better response in the Y/TH Group versus the Sm/TH Group at T1 (p = 0.025*) and versus TH alone at T48 (p = 0.026*). The Sm/TH group exhibited more adverse effects (p = 0.042*), but these were mild and transitory. No severe adverse effects were reported during the follow up. Conclusion. With regard to pain, Yttrium-90 radiosynovectomy associated to TH provided better results than Samarium-153-particulate hydroxyapatite radiosynovectomy associated to TH as well as a better response than chemical synovectomy with TH alone. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação em Psicologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328323.pdf: 4210748 bytes, checksum: 601e3a9d30043788b21d004d74997056 (MD5) Previous issue date: 2014 / O descontrole do sistema nervoso autônomo está na base de um número significativo de doenças e de disfunções psicofisiológicas, como o estresse crônico. O controle indireto do sistema nervoso autônomo tem se mostrado possível por meio de técnicas como a respiração controlada e a meditação mindfulness. Contudo, não foi encontrado na literatura um trabalho que combinasse, em um único protocolo de intervenção, as duas técnicas (respiração controlada e meditação mindfulness) e mensurasse esse efeito sobre a variabilidade da frequência cardíaca. Desta forma, nesta tese, investiga-se qual é o efeito da combinação da respiração controlada e da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca; em que são comparados à variabilidade da frequência cardíaca antes, durante e depois da intervenção com as técnicas. Três etapas são realizadas para responder às questões centrais: 1) Qual é o efeito da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca? 2) Qual é o efeito da respiração controlada sobre a variabilidade da frequência cardíaca? 3) Qual é o efeito da respiração controlada e da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca? Para cada etapa, participaram 40 indivíduos divididos em G1 (grupo experientes) e G2 (grupo não experientes). Além das medidas fisiológicas coletadas por meio do monitor cardíaco Polar ? RS 800®, foram coletadas também medidas psicológicas por meio da Escala de Estresse Percebido e da Escala de Humor de Brums. Como resultado da primeira etapa, é possível afirmar que, por meio da intervenção com a meditação mindfulness, ocorreu uma melhoria do estresse percebido e da maior parte das variáveis de G1 e G2 relacionadas aos estados de humor e da variabilidade da frequência cardíaca. Como resultado da segunda etapa, pode-se afirmar que, por meio da intervenção com a respiração controlada, ocorreu uma melhora do estresse percebido e dos estados de humor em G1 e G2. Contudo, com relação à variabilidade da frequência cardíaca, houve um incremento desta mesma em G1, o que não foi observado em G2. Como resultado da terceira etapa, que corresponde ao resultado central desta tese, observa-se, por meio da intervenção do protocolo que combina respiração controlada e meditação mindfulness, um efeito paradoxal sobre a variabilidade da frequência cardíaca, podendo, mediante a observação no periodograma de um "pico ressonante", ser indicado para o aumento da capacidade de atenção em sujeitos experientes.<br> / Abstract : The lack of control of the autonomic nervous system is the basis of a substantial number of illnesses and psychophysiological disorders such as chronic stress. The indirect control of the autonomic nervous system has been shown to be possible by means of techniques such as controlled breathing and mindfulness meditation. However, it was not found in the literature a work that combines, in a single intervention protocol, the two techniques (controlled breathing and mindfulness meditation) and measured this effect on heart rate variability. Therefore, this thesis investigates what is the effect of the combination of controlled breathing and mindfulness meditation on the heart rate variability; in which are compared the heart rate variability before, during and after the intervention with the techniques. Three stages are performed to answer the central questions: 1) What is the effect of mindfulness meditation on the heart rate variability? 2) What is the effect of controlled breathing on heart rate variability? 3) What is the effect of controlled breathing and mindfulness meditation on heart rate variability. For each stage participated 40 subjects divided into G1 (experienced group) and G2 (non-experienced group). Besides the physiological measurements collected by the Polar heart monitor - RS 800 ® psychological measures was collected through Perceived Stress Scale and Brums Mood Scale. As a result of the first stage it is possible to say that, through the intervention with mindfulness meditation occurred an improvement in perceived stress and most of the G1 and G2 variables related to mood states and heart rate variability. As a result of the second stage can be affirmed that, through the intervention with controlled breathing, there was an improvement in perceived stress and mood states in G1 and G2. However, in relation to heart rate variability occurred an increment in G1, which was not observed in G2. As a result of the third stage, which corresponds to the central result of this thesis, it is observed through the intervention protocol that combines controlled breathing and mindfulness meditation a paradoxical effect on heart rate variability, that may, by noticing a "resonant peak" in the periodogram, be indicated to increases the attention capacity in experienced subjects.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luciana_miranda_ipec_mest_2011.pdf: 2273487 bytes, checksum: 2458e3ceb6d02fad0808bbad9e7f3bd5 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os antimoniais pentavalentes representam a principal opção para tratamento das leishmanioses, sendo utilizado no Brasil, o antimoniato de meglumina (Glucantime\F0D2). A variabilidade da resposta ao tratamento pode estar condicionada a fatores relacionados ao hospedeiro, aos parasitas ou mesmo aos esquemas terapêuticos empregados. Neste estudo, avaliamos amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis em ensaios in vitro quanto à sensibilidade ao antimoniato de meglumina. Foram comparadas as DL50 observadas, tanto para formas promastigotas quanto para formas amastigotas, de amostras isoladas no momento do diagnóstico antes do tratamento (amostra A) e de amostras isoladas após o primeiro ciclo de tratamento (amostra B). Sete pares de amostras (A e B) foram selecionados, sendo quatro isolados de pacientes com falha terapêutica e três de pacientes com reativação. As formas promastigotas foram expostas a concentrações de antimoniato de meglumina entre 3,955 \03BCg e 8,1 mg/mL e avaliadas após 24 e 48 horas de exposição. As formas amastigotas, em macrófagos murinos, foram expostas a concentrações de 20, 40 e 80 \03BCg/mL de antimoniato de meglumina, cuja cinética de infecção foi avaliada em intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas, baseada em dois parâmetros: percentual de células infectadas e número médio de amastigotas por macrófago Todas as amostras B de formas promastigotas apresentaram valores da DL50 superiores aos obtidos com as amostras A, exceto para as amostras de um paciente. Nos ensaios com formas amastigotas, as amostras B apresentaram valores da DL50 mais elevados que a amostra A em 4 casos, com aumentos que variaram de 17 a 20% em 3 pacientes e de 100% em um caso. Nos demais pacientes, os valores da DL50 de A e B foram semelhantes. Dos sete pacientes estudados, um abandonou o tratamento e seis apresentaram cura, após retratamento, pelo uso da Anfotericina B (4 casos) ou antimoniato de meglumina (2 casos). Não foi possível correlacionar os resultados obtidos neste estudo com a clínica ou a resposta ao tratamento. É possível que outros fatores relacionados aos pacientes, tais como a condição imunológica e a resposta frente à infecção possam influenciar na resposta à terapêutica antimonial / Pentavalent antimonials are the first drug of choice for leishmaniasis treatment and in Brazil meglumine antimoniate (Gl u cantime  ) is used. The variability of the re sponse to treatment may be conditioned to factors related to the host, the parasites or even the therapeutic plan. In this study we assessed the susceptibility to meglumine antimoniate of samples of Leishmania (Viannia) braziliensis in in vitro tests. We compared the DL 50 of both promastigote and amastigote forms of samples isolated at diagnosis before treatment (sample A ) and samples isolated after the first cycle of treatment (sample B ). Seven pairs of samples ( A and B ) were selected, four isolated from patients with treatment failure and three from patients with reactivation. The promastigote forms were exposed to meglumine antimoniate concentrations between 3,955 μg and 8,1 mg/mL and were assessed after 24 and 48 hours of exposition. The amastigotes, in murine macrophages, were exposed to concentrations of 20, 40 and 80 μg/mL of meglumine antimoniate, and the infection kinetics was assessed at time intervals of 0, 24, 48 and 72 hours, through two parameters: percentage of infected cells and average numbe r of amastigotes per macrophage. All B samples of promastigotes presented DL 50 values higher than those obtained with A samples, except for one patient. In tests with amastigotes, the B samples showed higher DL 50 values than sample A in 4 cases, with incr eases ranging from 17 to 20% in 3 patients and 100% increase in one case. In other patients, DL 50 values of A and B were similar. One of the seven patients studied abandoned treatment and six were clinically healed after retreatment with Anphotericin B (4 cases) or meglumine antimoniate (2 cases). It was not possible to correlate the results of this study with the clinics or response to treatment. It is possible that other patient related factors such as immunological condition or response to infection may influence the response to antimonial treatment

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência, em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliar a ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso, camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção. Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas (MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes em pares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmeas e vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente. / Currently, the drug of choice in schistosomiasis treatment is Praziquantel (PZQ). Some cases of S. mansoni resistant strains to PZQ in field and laboratory have been already reported. These cases reports reflect a small parcel of the real problem due to the difficulty to prove this resistance in laboratory conditions. Recently, our group induced resistance in a S. mansoni strain using successive PZQ treatments in B. glabrata infected, under laboratory conditions (LE-PZQ strain). Thus, this work aimed to evaluate the resistance/ susceptibility of the LE-PZQ strain during its development in the vertebrate host as well as to evaluate the PZQ action in susceptible and resistant cercarie in order to obtain a rapid test to detect resistance, and lastly to study the involvement of SMDR, SmMRP1 and SmMVP proteins in the S. mansoni resistance to PZQ. For that, mice were infected with LE-PZQ strain or susceptible strain (LE) and treated with PZQ after 2, 6, 16, 23 and 45 days of infection. The results showed a bigger worm recovery when it was treated after 16 and 23 days of the infection when compared with susceptible strain. We also aimed to evaluate tail loss of LE and LE-PZQ cercarie after exposure to PZQ for 1 or 2 hours in different concentrations. LE-PZQ cercarie showed a statistically smaller tail loss after PZQ exposure in all concentrations for 1 or 2 hours. Works about multidrug resistance (MDR) have been important to studies of resistance in several organisms. Therefore, we investigated levels of RNA for SMDR2, SmMRP1 and SmMVP using RT-PCR. Females showed high levels of expression when compared to males and paired worms in the LE strain. In the LE-PZQ strain, female worms showed high levels of expression only when compared to male worms. When compared both strains, the resistant showed high levels of expression in males, females and paired worms. SmMRP1 showed upregulated in males and paired worms in both strains when compared to females. In the susceptible and resistant strain comparison, LE-PZQ strain showed high levels of expression in male and paired worms. We investigated also RNA and proteins levels for SmMVP. It was possible to observe that SmMVP was found differentially expressed in adult males and females from the susceptible strain.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:23Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A radioterapia é uma modalidade importante para tratar o câncer de Cabeça e Pescoço, no entanto falhas do tratamento já foram observadas e recorrência da doença é comum. Novas abordagens para melhorar os efeitos benéficos de radioterapia têm sido desenvolvidas e terapia gênica surge como uma ferramenta importante para atingir esse objetivo. Apesar de modelos in vitro serem úteis para entender os efeitos da radiação em níveis celulares um modelo mais próximo ao esquema de irradiação clínica, que permita reproduzir irradiação diária, é necessário. Sinais de cálcio no núcleo têm demonstrado desempenhar um papel crucial em células de mamíferos por regularem a expressão de genes envolvidos na proliferação celular, e ja foi também demonstrado que o tamponamento de Ca2+ nuclear prejudica o crescimento das células cancerosas in vitro, bem como in vivo. O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo in vitro que simulava radioterapia de cabeça e pescoço de acordo com parâmetros clínicos e investigar o papel do tamponamento de Ca2+ nuclear para aumentar o efeito antitumoral de raios-X em carcinoma de células escamosas humano. Para estes fins, células da linhagem celular A431 foram submetidas a dose acumulada de 10Gy de raios- X, em esquema de fracionamento diário de doses, (XRCd10Gy) ou em associação com o tamponamento de Ca2+ nuclear (Ca2+n). Análise do ciclo celular, ensaio de proliferação, a quantificação de lesões de DNA nuclear /mitocondriail, expressão de ADAM-17, a expressão de EGFR e fração de sobrevivência foram investigadas. Nosso modelo forneceu irradiações uniformes à monocamada de células, minimizando as incertezas, independente da posição dos frascos dentro de campo de irradiação, Todos os frascos receberam 100 ± 2% da dose calculada total. Descobrimos que XRCd10Gy induziu apenas 4,3 ± 0,3% de morte celular (SubG1), indicando radiorresistência. Após o tamponamento de Ca2+n a proliferação de células A431 diminuiu significativamente (p < 0,001) em comparação com o controle. Análise do ciclo celular mostraram que a associação do tamponamento Ca2+ n com XRCd10Gy aumentou a percentagem de células A431 em G2/M (35,7 ± 2,5 %), sem danos de DNA nucleares/mitocondrial aparentes. No entanto, o tamponamento de Ca2+n preveniu significativamente (p < 0,05) o aumento da expressão de ADAM -17 e a ativação do EGFR, induzidas por irradiação. Além disso, a terapia de associação diminui significativamente a formação de colônias das celulas A431 (91 ± 0,4 %), mesmo com cerca de metade da dose cumulativa. Os efeitos dos bloqueadores de integrina 4B4 e cRGD sobre a migração de células do melanoma humano da linhagem MV3 foram investigados, em cultivo celular 3D, mostrando que além de alterar a morfologia celular, o bloqueio das subunidades de integrina β1 e αvβ3 reduziram o índice de alongamento celular (3.8 ± 0.6 AU) quando comparado com o controle não tratado (8.5 ± 1.7 AU, p<0,001), bem como a velocidade média de migração 0.1 ± 0.06μm/minuto comparado ao controle não tratado 0.5 ± 0.1μm/minuto (p<0,001). Juntos, estes resultados contribuem para o desenvolvimento de nova estratégia de radioterapia para o tumor da cabeça e pescoço, com a combinação da terapia gênica e radiação ionizante, permitindo reduzir a exposição celular aos raios-X. / Radiotherapy is one important modality to treat Head and Neck cancer, however treatment failure has been observed and recurrence disease is common. New approaches to improve beneficial radiotherapy effects have been developed and gene therapy arises as an important tool to achieve this aim. Although in vitro models are useful to understand radiation effects at cellular levels one model more close to clinical irradiation schedule that allows reproduce daily irradiation is needed. Calcium signals in the nucleus have been demonstrated to play a crucial role in mammalian cells regulating the expression of genes involved in cell proliferation, and it also was demonstrated that the buffering of nuclear Ca2+ impairs the growth of cancer cells in vitro as well as in vivo. The aim of this study was to develop an in vitro protocol that simulated head and neck radiotherapy according to clinical parameters and investigate the role of nuclear Ca2+ buffering to enhance the antitumor effect of X-rays on Human Squamous Cell Carcinoma. For these purposes A431 cell line was submitted to 10Gy cumulative X-rays therapy alone (XRCd10Gy) or in association with nuclear Ca2+ buffering protocol (Ca2+n). Cell cycle analysis, proliferation assay, quantification of nuclear/mitochondrial DNA lesions, ADAM- 17, EGFR expression and survival fraction were investigated. Our model provided uniform irradiations to monolayer cells, minimizing uncertainties since independent of the flasks position inside irradiation field, all flasks received 100±2% of the total calculated dose. We found that XRCd10Gy induced only 4.3±0.3% of cell death (SubG1), indicating radioresistance. Upon Ca2+n buffering, A431 cell proliferation decreased significantly (p<0.001) as compared to control. Cell cycle analysis showed that association of Ca2+n buffering with XRCd10Gy increased the percentage of A431 cells at G2/M (35.7±2.5%) with no apparent nuclear/mitochondrial DNA damages. Nonetheless, Ca2+ n buffering significantly (p<0.05) prevented the increase in ADAM-17 expression and EGFR activation induced by irradiation. Furthermore, the association therapy significantly decreases the A431colony formation (91±0.4%), even using approximately half of the cumulative dose. The effects of Integrins blockage on human melanoma cell MV3 were investigated using 3D cell culture. There were phenotype alterations after blockage of β1 e αvβ3 integrins subunits using 4B4 and cRGD even reduction of elongation index (3.8 ± 0.6 AU) compared to untreated cells (8.5 ± 1.7 AU, p<0.001) as well as migration average speed was decreased 0.1 ± 0.06μm/minute after integrins blockage compared to untreated cells 0.5 ± 0.1μm/minute (p<0.001).Together, these findings contribute to the development of novel radiotherapy strategy to head and neck tumor, combining gene therapy with ionizing radiation, allowing reducing X-rays irradiation exposure