Orientador: Luis Octávio Regasini / Coorientador: Tiana Tasca / Banca: Gustavo Henrique Goulart Trossini / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: A tricomoníase, causada pelo protozoário Trichomonas vaginalis, é considerada a doença sexualmente transmissível (DST) não-viral mais comum do mundo. Para o tratamento da tricomoníase, nitrocompostos como o metronidazol são os mais prescritos, embora existam cepas resistentes e severos efeitos adversos. Dessa forma, é premente a busca de novos agentes tricomonicidas. No presente trabalho, foram planejadas hidroxichalconas (série I) avaliando a importância da posição da hidroxila no anel A e o anel B substituído por grupos preconizados pelo Método Manual de Topliss, além da substituição do anel B fenílico por anéis π-isoeletrônicos e hidrofóbicos. A série II foi composta por ferrocenilchalconas, avaliando a importância do ferroceno como grupo doador de ferro como anel B, tendo o anel A substituído por grupos preconizados pelo Método Manual de Topliss e anéis π-isoeletrônicos. As chalconas das séries I e II foram sintetizadas por meio da reação de condensação aldólica de Claisen-Schmidt, com rendimentos que variaram de 17 a 98%. Em linhas gerais, as ferrocenilchalconas foram sintetizadas com rendimentos superiores às hidroxichalconas, devido às últimas serem purificadas por etapas adicionais de recristalização e cromatográficas. As estruturas das substâncias foram confirmadas por Ressonância Magnética Nuclear. As chalconas com hidroxila no anel A exibiram atividade contra Trichomonas vaginalis (ATCC 30236) superior àquelas com hidroxila no anel B, sendo utilizadas para etapas... / Abstract: Trichomoniasis, caused by the protozoa Trichomonas vaginalis, is considered the most common non-viral sexually transmitted disease (STD) around the world. For the treatment of trichomoniasis, nitro-compounds such as metronidazole are the most prescribed, although there are resistant strains and severe adverse effects. Thus, search for new trichomonicidal agents is urgent. In the present work, hydroxychalcones (series I) were designed, evaluating importance of hydroxyl position on rings A and B, as well as ring B substituted by groups recommended by the Manual Method of Topliss, ring B replaced by π-isoelectronic and hydrophobic rings. Series II was composed by ferrocenylchalcones, assessing the importance of ferrocene as an iron donor group as ring B and ring A substituted by groups recommended by Manual Method of Topliss and replaced by π-isoelectronic rings. Chalcones of series I and II were synthesized via aldol condensation reaction of Claisen-Schmidt, in yields ranging from 17 to 98%. In general, the ferrocenylchalcones were synthesized in higher yields than the hydroxychalcones, because these last were purified by recrystallization and additional chromatographic steps. The structures of the substances were confirmed by Nuclear Magnetic Resonance. Chalcones with hydroxyl on ring A exhibited activity against T. vaginalis (ATCC 30236) higher than those with hydroxyl on ring B, being the first used for bioactivity optimization steps. Among these, the 4'-hydroxychalcone (4) ... / Mestre

Dentro de las Enfermedades de Transmisión Sexual, la importancia de Trichomonas vaginalis es diversa. Esto debido al desconocimiento de la población de la existencia de este parásito y en muchos casos por no tener acceso a los servicios básicos de salud que permitan educar y al mismo tiempo evitar una posterior cadena de contagio. Es importante conocer cuales son las consecuencias que puede traer el padecer la infección y considerar que infectarse es innecesario, pues como en toda Enfermedad de Transmisión Sexual esta se puede y se debe prevenir. La importancia que se le da en nuestro país esta relacionada muchas veces con la disponibilidad de medios para realizar el diagnóstico, o del uso solamente de criterios clínicos en su identificación. La investigación llevada a cabo en los Servicios de Ginecología del Instituto Especializado Materno Perinatal entre los meses de Mayo a Julio del 2004 tiene como objetivo determinar la prevalencia de infección por Trichomonas vaginalis en gestantes en su primer trimestre de embarazo, que acuden a consulta externa del hospital. Con esta finalidad se realizó un estudio de tipo prospectivo,descriptivo, observacional, de corte transversal. El procedimiento se llevó a cabo luego que la paciente fue informada debidamente y firmó la hoja de consentimiento, de acuerdo a lo que reglamenta la Declaración de Helsinki. (Anexo 04) La toma de muestra de secresión vaginal, se realizó con ayuda del Gineco-Obstetra en los consultorios del hospital. La población tomada en cuenta para el estudio cumplía con los requisitos de: Encontrarse dentro del primer trimestre de embarazo, no haber tenido tratamiento contra Trichomonas vaginalis, no haber sido tratada con duchas o lavados vaginales previos al examen ginecológico. Tomada la muestra esta fue procesada dentro de los quince minutos de obtenida. Se utilizó para esto el medio de cultivo In Pouch TV, además se realizó el examen directo de la secreción, obteniéndose un resultado preliminar que en algunos casos no fué el mismo luego de ser cultivado. Las muestras fueron incubadas y leídas luego de 24, 48, 72 horas, cuarto y quinto día, llevándose un registro de los resultados que se obtenían luego de las lecturas. Se obtuvo muestras de un total de 105 pacientes, las que cumplían con los criterios de inclusión de nuestro estudio. De las 105 pacientes estudiadas, 6 presentaron resultados positivos al cultivo para Trichomonas vaginalis, lo que representa un 5,7% de infección en esta población. Las gestantes presentaron al mismo tiempo un rango de edad que fue de los 16 a los 40 años, período en el que muchas de ellas aún mantenían relaciones sexuales. Dentro de los signos y síntomas observados en las gestantes se encuentran el flujo vaginal anormal (abundante), mal olor, ardor y prurito. El flujo vaginal presentó características como el aspecto que varió de grumoso, cremoso, espeso, a líquido y mucoso que constituyó el flujo normal. En el color se observó una variedad de ellos que iban desde el transparente, blanco, blanco-amarillento, blanco-sanguinolento, amarillo, amarillo-verdoso y verde. Se hace también una comparación de los antecedentes de estas pacientes, en relación al uso o no de métodos anticonceptivos, uso de preservativos de la pareja y si compartían una o mas parejas sexuales; todo esto relacionado con la positividad al cultivo para Trichomonas vaginalis. Se evalúa también la importancia que existe entre el grado de instrucción de las gestantes y su ocupación, versus los cuadros de positividad al cultivo. Se concluye que es necesario hacer una evaluación mas completa de las pacientes gestantes que son atendidas, no solo en las etapas iniciales del embarazo, sino durante toda la gestación. Así mismo se debe utilizar métodos más sensibles de identificación para el diagnóstico de Trichomonas vaginalis; debido a que no solo se deben considerar criterios clínicos en el diagnóstico, pues esta demostrado que el mejor diagnóstico es la observación directa del parásito.

T. vaginalis is a protozoan parasite without an observed sexual stage in its life cycle. However, T. vaginalis has genes, such as Dmc1, known to be involved in meiosis in other organisms. In order to look at the expression of these genes in T. vaginalis, RT-PCR was done using purified mRNA. It shows that Dmc1 is expressed in both normal and drug treated cells. However, relative levels are unclear. Localization studies were done in T. vaginalis using immunofluorescence against Dmc1 protein with an HA tag. These studies showed that recombinant Dmc1 remained in the cytoplasm upon treatment with DNA damaging drugs. Additionally, T.vaginalis Dmc1 protein was expressed and purified from E.coli to have polyclonal antibodies made to use in further immunofluorescence studies.

A família Amaryllidaceae é reconhecida como fonte de compostos bioativos, sendo o isolamento e elucidação estrutural de seus alcaloides, aliado às avaliações farmacológicas, um tema importante. Estudos mostram que o mecanismo de ação da citotoxicidade desses alcaloides é seletivo e depende da linhagem celular. Trichomonas vaginalis é um protozoário parasita que causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível de origem não viral mais comum no mundo. Além de ser considerado um importante organismo patogênico, suas características bioquímicas peculiares, como a ausência de mitocôndrias, torna o tricomonas um adequado modelo para estudos de vias metabólicas de morte celular. A atividade anti-T. vaginalis dos alcaloides de Amaryllidaceae licorina e candimina, assim como o potencial citotóxico de diaminas sintéticas, foram investigados. Estudos de semi-síntese com a licorina também foram desenvolvidos. Nossos resultados mostraram que a licorina e candimina induzem importantes alterações na ultraestrutura dos parasitos e nenhum marcador morfológico clássico de apoptose, como corpos apoptóticos, foi observado. Além disso, nem a fragmentação do DNA genômico nem a exposição de resíduos de fosfatidilserina foram detectadas. Por outro lado, ambos os alcaloides atrasaram o ciclo celular do parasito e inibiram a atividade das enzimas NTPDase e ecto-5`- nucleotidase, importantes na manutenção da relação parasito/hospedeiro. O alcaloide pró-apoptótico licorina e a candimina induziram morte celular no parasito amitocondriado T. vaginalis por um mecanismo de ação que não cumpre as características morfológicas de apoptose. Entretanto, similaridades com a morte celular denominada paraptose foram observadas: intensa vacuolização citoplasmática periférica aliada à integridade nuclear. Considerando que a citotoxicidade dos alcaloides pode ser considerada moderada (250 μM), derivados de poliaminas foram escolhidos para desenvolver estudos de semi-síntese com a licorina e aperfeiçoar a atividade do alcalóide. Poliaminas são moléculas catiônicas de estruturas simples, essenciais para a diferenciação celular e regulação do ciclo celular. Neste trabalho demonstrou-se a síntese e avaliação da atividade anti-T. vaginalis de uma série de derivados de diaminas, dos quais N-hexadecil-1,4-butanodiamina apresentou CIM igual a 2,5 μg/ml, duas vezes mais ativo em comparação ao metronidazol, utilizado como composto de referência. A hibridização molecular da licorina com as diaminas foi prejudicada pela instabilidade da licorina mesilada, intermediário chave para prosseguir a rota sintética. No entanto, seis derivados inéditos da licorina, todos ésteres, aromáticos ou alifáticos, foram sintetizados. / Amaryllidaceae family has proven to be plentiful sources for therapeutic agents. Hence, the isolation, biology and chemistry of the Amaryllidaceae alkaloids make an important subject. Investigations on cytotoxic mechanisms of these alkaloids indicate a promising selective cell-type-dependent cytotoxicity. Trichomonas vaginalis is a parasite that causes trichomonosis, the number one non-viral sexually-transmitted disease in the world. However, whilst T. vaginalis is a prime pathogenic target, its lack of mitochondria makes it a suitable biochemical model to study cell death-related mechanisms. Anti-T. vaginalis activity of lycorine and candimine alkaloids were investigated, as well as the cytotoxic potential of diamine analogs. Finally, studies on lycorine semi-synthesis were developed. Our results showed that, after lycorine and candimine treatment, no hallmark suggestive of apoptosis were observed, such as apoptotic bodies, but instead several important ultrastructural alterations, assessed by electronic microscopy. Additionally, DNA fragmentation and membrane phosphatidylserine exposure were not detected. Analysis showed that lycorine and candimine arrested T. vaginalis cell cycle and inhibited the NTPDase and ecto-5`- nucleotidase activities, important enzymes on parasite/host relationship. The proapoptotic alkaloid, lycorine, and the lactone alkaloid, candimine, caused cell death in the amitochondriate T. vaginalis by a mechanism of action that fails to completely fulfill the criteria for apoptosis. However, some similarities were observed to paraptotic cell death, like intense cytoplasmic periferic vacuolization and nuclear integrity. Since the cytotoxic potential of the alkaloids was moderated (250 μM), the polyamines analogs were chosen to investigate the anti-T. vaginalis activity and to develop semi-synthesis studies with lycorine in order to improve the alkaloid cytotoxicity. Polyamines are simple structured aliphatic amines essential for cell proliferation and differentiation and it has been shown that interfering with their function or biosynthesis the cellular growth can be blocked. Our results showed the synthesis of a series of diamine derivatives, and N-hexadecil-1,4-butanediamine was found to be the most active compound in vitro against T. vaginalis with MIC of 2.5 μg/mL, twice more active in comparison to the reference drug metronidazole. The molecular hybridization of lycorine with diamines was impaired by the unsuccessful synthesis of the lycorine mesilate, a key intermediary on the synthetic route. However, six new lycorine ester derivatives were synthesized.

A família Amaryllidaceae é reconhecida como fonte de compostos bioativos, sendo o isolamento e elucidação estrutural de seus alcaloides, aliado às avaliações farmacológicas, um tema importante. Estudos mostram que o mecanismo de ação da citotoxicidade desses alcaloides é seletivo e depende da linhagem celular. Trichomonas vaginalis é um protozoário parasita que causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível de origem não viral mais comum no mundo. Além de ser considerado um importante organismo patogênico, suas características bioquímicas peculiares, como a ausência de mitocôndrias, torna o tricomonas um adequado modelo para estudos de vias metabólicas de morte celular. A atividade anti-T. vaginalis dos alcaloides de Amaryllidaceae licorina e candimina, assim como o potencial citotóxico de diaminas sintéticas, foram investigados. Estudos de semi-síntese com a licorina também foram desenvolvidos. Nossos resultados mostraram que a licorina e candimina induzem importantes alterações na ultraestrutura dos parasitos e nenhum marcador morfológico clássico de apoptose, como corpos apoptóticos, foi observado. Além disso, nem a fragmentação do DNA genômico nem a exposição de resíduos de fosfatidilserina foram detectadas. Por outro lado, ambos os alcaloides atrasaram o ciclo celular do parasito e inibiram a atividade das enzimas NTPDase e ecto-5`- nucleotidase, importantes na manutenção da relação parasito/hospedeiro. O alcaloide pró-apoptótico licorina e a candimina induziram morte celular no parasito amitocondriado T. vaginalis por um mecanismo de ação que não cumpre as características morfológicas de apoptose. Entretanto, similaridades com a morte celular denominada paraptose foram observadas: intensa vacuolização citoplasmática periférica aliada à integridade nuclear. Considerando que a citotoxicidade dos alcaloides pode ser considerada moderada (250 μM), derivados de poliaminas foram escolhidos para desenvolver estudos de semi-síntese com a licorina e aperfeiçoar a atividade do alcalóide. Poliaminas são moléculas catiônicas de estruturas simples, essenciais para a diferenciação celular e regulação do ciclo celular. Neste trabalho demonstrou-se a síntese e avaliação da atividade anti-T. vaginalis de uma série de derivados de diaminas, dos quais N-hexadecil-1,4-butanodiamina apresentou CIM igual a 2,5 μg/ml, duas vezes mais ativo em comparação ao metronidazol, utilizado como composto de referência. A hibridização molecular da licorina com as diaminas foi prejudicada pela instabilidade da licorina mesilada, intermediário chave para prosseguir a rota sintética. No entanto, seis derivados inéditos da licorina, todos ésteres, aromáticos ou alifáticos, foram sintetizados. / Amaryllidaceae family has proven to be plentiful sources for therapeutic agents. Hence, the isolation, biology and chemistry of the Amaryllidaceae alkaloids make an important subject. Investigations on cytotoxic mechanisms of these alkaloids indicate a promising selective cell-type-dependent cytotoxicity. Trichomonas vaginalis is a parasite that causes trichomonosis, the number one non-viral sexually-transmitted disease in the world. However, whilst T. vaginalis is a prime pathogenic target, its lack of mitochondria makes it a suitable biochemical model to study cell death-related mechanisms. Anti-T. vaginalis activity of lycorine and candimine alkaloids were investigated, as well as the cytotoxic potential of diamine analogs. Finally, studies on lycorine semi-synthesis were developed. Our results showed that, after lycorine and candimine treatment, no hallmark suggestive of apoptosis were observed, such as apoptotic bodies, but instead several important ultrastructural alterations, assessed by electronic microscopy. Additionally, DNA fragmentation and membrane phosphatidylserine exposure were not detected. Analysis showed that lycorine and candimine arrested T. vaginalis cell cycle and inhibited the NTPDase and ecto-5`- nucleotidase activities, important enzymes on parasite/host relationship. The proapoptotic alkaloid, lycorine, and the lactone alkaloid, candimine, caused cell death in the amitochondriate T. vaginalis by a mechanism of action that fails to completely fulfill the criteria for apoptosis. However, some similarities were observed to paraptotic cell death, like intense cytoplasmic periferic vacuolization and nuclear integrity. Since the cytotoxic potential of the alkaloids was moderated (250 μM), the polyamines analogs were chosen to investigate the anti-T. vaginalis activity and to develop semi-synthesis studies with lycorine in order to improve the alkaloid cytotoxicity. Polyamines are simple structured aliphatic amines essential for cell proliferation and differentiation and it has been shown that interfering with their function or biosynthesis the cellular growth can be blocked. Our results showed the synthesis of a series of diamine derivatives, and N-hexadecil-1,4-butanediamine was found to be the most active compound in vitro against T. vaginalis with MIC of 2.5 μg/mL, twice more active in comparison to the reference drug metronidazole. The molecular hybridization of lycorine with diamines was impaired by the unsuccessful synthesis of the lycorine mesilate, a key intermediary on the synthetic route. However, six new lycorine ester derivatives were synthesized.

A família Amaryllidaceae é reconhecida como fonte de compostos bioativos, sendo o isolamento e elucidação estrutural de seus alcaloides, aliado às avaliações farmacológicas, um tema importante. Estudos mostram que o mecanismo de ação da citotoxicidade desses alcaloides é seletivo e depende da linhagem celular. Trichomonas vaginalis é um protozoário parasita que causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível de origem não viral mais comum no mundo. Além de ser considerado um importante organismo patogênico, suas características bioquímicas peculiares, como a ausência de mitocôndrias, torna o tricomonas um adequado modelo para estudos de vias metabólicas de morte celular. A atividade anti-T. vaginalis dos alcaloides de Amaryllidaceae licorina e candimina, assim como o potencial citotóxico de diaminas sintéticas, foram investigados. Estudos de semi-síntese com a licorina também foram desenvolvidos. Nossos resultados mostraram que a licorina e candimina induzem importantes alterações na ultraestrutura dos parasitos e nenhum marcador morfológico clássico de apoptose, como corpos apoptóticos, foi observado. Além disso, nem a fragmentação do DNA genômico nem a exposição de resíduos de fosfatidilserina foram detectadas. Por outro lado, ambos os alcaloides atrasaram o ciclo celular do parasito e inibiram a atividade das enzimas NTPDase e ecto-5`- nucleotidase, importantes na manutenção da relação parasito/hospedeiro. O alcaloide pró-apoptótico licorina e a candimina induziram morte celular no parasito amitocondriado T. vaginalis por um mecanismo de ação que não cumpre as características morfológicas de apoptose. Entretanto, similaridades com a morte celular denominada paraptose foram observadas: intensa vacuolização citoplasmática periférica aliada à integridade nuclear. Considerando que a citotoxicidade dos alcaloides pode ser considerada moderada (250 μM), derivados de poliaminas foram escolhidos para desenvolver estudos de semi-síntese com a licorina e aperfeiçoar a atividade do alcalóide. Poliaminas são moléculas catiônicas de estruturas simples, essenciais para a diferenciação celular e regulação do ciclo celular. Neste trabalho demonstrou-se a síntese e avaliação da atividade anti-T. vaginalis de uma série de derivados de diaminas, dos quais N-hexadecil-1,4-butanodiamina apresentou CIM igual a 2,5 μg/ml, duas vezes mais ativo em comparação ao metronidazol, utilizado como composto de referência. A hibridização molecular da licorina com as diaminas foi prejudicada pela instabilidade da licorina mesilada, intermediário chave para prosseguir a rota sintética. No entanto, seis derivados inéditos da licorina, todos ésteres, aromáticos ou alifáticos, foram sintetizados. / Amaryllidaceae family has proven to be plentiful sources for therapeutic agents. Hence, the isolation, biology and chemistry of the Amaryllidaceae alkaloids make an important subject. Investigations on cytotoxic mechanisms of these alkaloids indicate a promising selective cell-type-dependent cytotoxicity. Trichomonas vaginalis is a parasite that causes trichomonosis, the number one non-viral sexually-transmitted disease in the world. However, whilst T. vaginalis is a prime pathogenic target, its lack of mitochondria makes it a suitable biochemical model to study cell death-related mechanisms. Anti-T. vaginalis activity of lycorine and candimine alkaloids were investigated, as well as the cytotoxic potential of diamine analogs. Finally, studies on lycorine semi-synthesis were developed. Our results showed that, after lycorine and candimine treatment, no hallmark suggestive of apoptosis were observed, such as apoptotic bodies, but instead several important ultrastructural alterations, assessed by electronic microscopy. Additionally, DNA fragmentation and membrane phosphatidylserine exposure were not detected. Analysis showed that lycorine and candimine arrested T. vaginalis cell cycle and inhibited the NTPDase and ecto-5`- nucleotidase activities, important enzymes on parasite/host relationship. The proapoptotic alkaloid, lycorine, and the lactone alkaloid, candimine, caused cell death in the amitochondriate T. vaginalis by a mechanism of action that fails to completely fulfill the criteria for apoptosis. However, some similarities were observed to paraptotic cell death, like intense cytoplasmic periferic vacuolization and nuclear integrity. Since the cytotoxic potential of the alkaloids was moderated (250 μM), the polyamines analogs were chosen to investigate the anti-T. vaginalis activity and to develop semi-synthesis studies with lycorine in order to improve the alkaloid cytotoxicity. Polyamines are simple structured aliphatic amines essential for cell proliferation and differentiation and it has been shown that interfering with their function or biosynthesis the cellular growth can be blocked. Our results showed the synthesis of a series of diamine derivatives, and N-hexadecil-1,4-butanediamine was found to be the most active compound in vitro against T. vaginalis with MIC of 2.5 μg/mL, twice more active in comparison to the reference drug metronidazole. The molecular hybridization of lycorine with diamines was impaired by the unsuccessful synthesis of the lycorine mesilate, a key intermediary on the synthetic route. However, six new lycorine ester derivatives were synthesized.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-02-09T16:33:20Z No. of bitstreams: 2 Tese - Patrícia Abreu Pinheiro de Lemos - 2017.pdf: 4158494 bytes, checksum: 4b77e3a773c3ae35ad05d2c25c885673 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-13T09:52:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Patrícia Abreu Pinheiro de Lemos - 2017.pdf: 4158494 bytes, checksum: 4b77e3a773c3ae35ad05d2c25c885673 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T09:52:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Patrícia Abreu Pinheiro de Lemos - 2017.pdf: 4158494 bytes, checksum: 4b77e3a773c3ae35ad05d2c25c885673 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction Trichomonas vaginalis is a flagelate protozoa found in genital human secretions. Tricomoniasis is considered the most prevalent non viral sexually transmitted disease worldwide. Pregnant women and population with immunossupression had the highest frequencies in accord with literature. Purposes The presente study aimed firstly at the systematic review “Trichomonas vaginalis, genetic variation, and HIV-positive women” and secondly focused at the original article “ Association between T. vaginalis in pregant, non-pregnant and HIV-positive women” in order to: a) establish the prevalence of diagnostic techniques in 3 groups of women; b) verify whether imunossupression and/or coinfection conditions represents a risk fator for acquiring T. vaginalis; d) evaluate the accuracy of diagnostic techniques taking PCR as gold standard. Methods The study population included 309 women receiving care at 3 referral public healthcare centers in Goiânia. Pregnant women (100) at Dona Iris Maternity and General Hospital, non-pregnant women at Federal University of Goiás’ Teaching Hospital and 103 HIV-positive women in heathcare at an outpatient clinic of the Tropical Diseases Hospital in Goiânia, Goiás, Brazil. The parasite has been detected comparatively through 4 diagnostic techniques: wet mount, culture, Papanicolaou’s smear and PCR. Accuracy from all techniques was performed in the three women population and PCR was considered gold standard. Results The present study found a positive association between T. vaginalis’ frequency in HIV positive compared with non-pregnant women (ODDS RATIO (OR) 2,26). Comparisom between pregnant women and the non-pregnant women control group demonstrated no association (OR 1,07). PCR technique and wet mount presented the most elevated percentage in the pregnant and HIV positive groups correlated with the women control group. Culture presented almost the same acuracy percentages in the three groups (sensibiity) and the stainning techniques were the most sensibles however with the lowest specificities due to the vast number of false positives (FP). Precancerous lesions were associated with T. vaginalis’ presence both in pregnant and HIV positive women (OR=4,53 and OR-2,12). Conclusion T. vaginalis’ frequency in non- Abstract xvi pregant-women was 18%, in pregnant women was 19% and in HIV positive was 33%. Physiological immunossupression (pregnancy) did not represent risk factor for T. vaginalis’ infection however coinfection for HIV represented risk factor. Accuracy of diagnostic techniques (wet mount and culture) presented higher sensitivitie rates in HIV-positive women (54% e 70%). Cultured T. vaginalis stained by Quick Panoptic presented lower specificity rates in the 3 study groups. / Introdução Trichomonas vaginalis é um protozoário flagelado encontrado em secreções genitais humanas. A Tricomoníase é considerada a doença sexualmente transmissível não viral mais frequente no mundo. Gestantes e portadoras do vírus da imunodeficiência são as que têm apresentado frequências mais elevadas. Objetivos O presente estudo realizou uma revisão sistemática “Trichomonas vaginalis, genetic variation, and pathogenicity” e um artigo original intitulado “Association between T. vaginalis in pregnant, non-pregnant and HIV-positive women” no intuito de: a) estabelecer a frequência dos testes de diagnóstico para detecção do parasito nos 3 grupos de mulheres; b) verificar se as condições de imunossupressão ou coinfecção são fatores de risco para T. vaginalis; c) avaliar a acurácia das técnicas de diagnóstico tendo como padrão-ouro a reação em cadeia da polimerase (PCR). Métodos A população do estudo foi constituída por 309 mulheres atendidas em três hospitais de referência de Goiânia: gestantes no Hospital e Maternidade Dona Iris (HMDI), 106 não gestantes atendidas no Hospital das Clínicas/ Universidade Federal de Goiás, e 103 HIV-positivas atendidas no Hospital de Doenças Tropicais da secretaria estadual de saúde, Goiânia, Goiás, Brasil. A detecção do parasito foi realizada comparativamente através de quatro técnicas de diagnóstico: exame a fresco, cultura, citologia de Papanicolaou e PCR. A acurácia das técnicas foi realizada para as três populações de mulheres onde a PCR foi considerada o padrão ouro. Resultados O presente estudo encontrou chance significativa de associação entre a frequência de T. vaginalis em HIV positivas e a sua frequência em não grávidas representada pelo ODDS RATIO (OR) 2,26. A comparação entre gestantes e o grupo controle de não gestantes não apresentou chance significativa (OR=1,07). A PCR e o exame a fresco apresentaram os percentuais mais elevados no grupo das gestantes e das HIV positivas e a sensibilidade de ambas foi também mais elevada nos dois grupos em relação ao grupo de não grávidas. A cultura apresentou percentuais de acurácia quase que semelhante nos 3 grupos (sensibilidade) e as técnicas coradas foram as mais sensíveis, porém as menos específicas devido ao elevado Resumo xiv número de falsos positivos (FP). A presença de lesões pré-cancerígenas esteve associada à presença de T. vaginalis tanto no grupo das grávidas quanto no das HIV positivas (OR= 4,65 e OR= 2,14). Conclusão A frequência de T. vaginalis em mulheres não grávidas foi 18%, em gestantes foi 19% e em portadoras do HIV foi 33%. A imunossupressão fisiológica (gravidez) não é fator de risco para T. vaginalis, sendo que a co-infecção pelo HIV é fator de risco. No teste de acurácia o exame a fresco e a cultura apresentaram taxas de sensibilidade maior no grupo das HIV-positivas (54% e 70%). Os percentuais de especificidade da cultura corada apresentaram-se baixos nos 3 grupos.

The antigens of Trichomonas vaginal is grown jn Diamond 1 s medium modified by Klass were analyzed by gel diffusion methods. Three methods were employed in the extraction of the antigens. They were Genetron extract, Borate Buffer Saline extract, and alcohol extract. The alcohol extract was made up of four fractions (TF1 , TF2, TF3, TF4). The antisera used as analytic agents were made in two rabbits obtained from the Center for Disease Control Breeding Colony. All the antigens were compared to show bands of identity, non-identity, and partial identity, and to determine the number of bands produced by each extract. Genetron extract antigen and Borate Buffer Saline extract antigen reacted strongly with the homologous antiserum made in rabbit 3 (R3), producing 4 bands each, while alcohol extract reacted minimally. Fractions TF1 and TF4 produced 3 bands each and fraction TFz and TF3 produced 2 bands each Two bands of precipitate were found to be common to all the antigens, suggesting the similarity of the antigens. In rabbit 4 (R4), 3 bands were produced by each antigen and they were all identical, confirming the similarity of the antigens. Rabbit 3 antiserum reacted more strongly than rabbit 4, even though all the rabbits were inoculated on the same dates with the same number of live Trichomonas vaginalis antigens under the same conditions.

Oxidative decarboxylation of pyruvate is a fundamental reaction of living organisms in general, leading to energy conservation. In some anaerobic or microaerophilic eukaryotic or prokaryotic organisms pyruvate decarboxylation is carried out by a single enzyme, pyruvate:ferredoxin oxidoreductase (PFO). PFO contains Fe-S clusters and thiamin pyrophosphate cofactor (TPP). In the reaction catalyzed by PFO, from pyruvate and Co-A arise acetyl-CoA, CO2, and two electrons are released. Those electrons are accepted by low molecular carrier proteins. Most frequently these proteins are ferredoxins or flavodoxins such as in nitrogen fixating bacteria. PFO can perform a reversible reaction. Trichomonads are mostly parasitic or endosymbiotic organisms with mitochondria-like organelles, hydrogenosomes. These organelles possess PFO which is one of the key enzymes in the metabolism of Trichomonas vaginalis hydrogenosomes. PFO of T. vaginalis, a sexually transmitted pathogen of man, plays also a role in a term of medical importance. PFO is, by a universally accepted concept, one of the key proteins acting in the activation of antimicrobial drugs against trichomoniasis 5-nitroimidazoles, including metronidazole. In the genome of T. vaginalis seven PFO genes were identified. They were named PFO A, B1, B2, C, D, E and...

Orientador: Camila Marconi / Resumo: A microbiota vaginal normal é predominantemente composta por espécies de Lactobacillus spp., enquanto que o principal tipo de alteração de microbiota vaginal, a vaginose bacteriana (VB), é composta por uma diversidade de bactérias, não pela predominância de uma única espécie. Todavia, dentre as bactérias mais prevalentes nessa condição estão Atopobium vaginae e Gardnerella vaginalis, espécies conhecidamente produtoras de fatores de virulência, dentre eles a capacidade de formar biofilmes vaginais, dificultando a ação de drogas antimicrobianas, como o metronidazol, para o tratamento da VB. No caso particular da G. vaginalis deve-se destacar a produção de sialidases por algumas linhagens que conferem a capacidade de comprometer a barreira mucosa e degradar IgA vaginal, contribuindo para a adesão e proliferação de diversas espécies bacterianas que pertencem ao core patológico da VB. Entretanto, a ação das sialidases sobre a composição desse microbioma vaginal ainda não foi investigada. Dessa forma, os objetivos desse estudo foram: (1) determinar se as cargas cérvico-vaginais das espécies A. vaginae e G. vaginalis na VB estão associadas com o desfecho do tratamento, utilizando o tratamento convencional com metronidazol; (2) avaliar a influência da presença do gene da sialidase de G. vaginalis e da produção de sialidases sobre a composição do microbioma vaginal. Para tanto, foram incluídas 245 mulheres em idade reprodutiva no primeiro estudo, classificadas de acordo com o padrão d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor