De nombreuses études dans la seconde moitié du 20ème siècle, ont mis en évidence que des génotoxiques cancérogènes réagissent avec l'ADN pour former par liaison covalente des adduits qui sont impliqués dans le processus cancérigène. Bien qu’il existe des preuves convaincantes de la présence de multiples adduits à l'ADN dans les poumons de sujets exposés au tabagisme ou en milieu professionnel à un aldéhyde donné, il est évident que c'est un domaine dans lequel des recherches supplémentaires ont été nécessaires. L’objectif de ce travail de thèse est d’établir des profils d’adduits exocycliques à l'ADN induits par le mélange d’aldéhydes, qui pourraient à terme être considérés comme un marqueur génotoxique de l’exposition aux aldéhydes, tant endogène qu’environnemental. Pour cette raison, nous avons validé une méthode en UHPLC-MS/MS rapide, sensible et précise en utilisant la dilution isotopique, pour la quantification à l’état de trace de 9 adduits exocycliques à l’ADN dérivés de 8 principaux aldéhydes exogènes et endogènes, notamment le formaldéhyde, l’acétaldéhyde, l’acroléine, le crotonaldéhyde, le malondialdéhyde, le 4-hydroxy-2-nonénal, le glyoxal et le méthylglyoxal. Ces adduits ont été synthétisés et purifiés ainsi que leurs homologues marqués au 13C10, 15N5, identifiés et quantifiés par le biais des courbes d'étalonnage allant de 0,25 à 250 ng/mL d'adduits dans l'eau et l'ADN afin de décrire les effets matrice. Des échantillons de contrôle qualité ont été préparés et analysés afin de vérifier l'exactitude et la précision de la méthode dans des situations de répétabilité et de fidélité intermédiaire. L'absence de contamination croisée a également été démontrée. La méthode est capable de différencier les 9 analytes d'intérêt et leurs étalons internes en utilisant pour chaque analyte une transition de quantification et une seconde de confirmation. Cette méthode a été validée selon les recommandations de l'Agence Européenne des Médicaments concernant les méthodes bioanalytiques. Elle répond à tous les critères essentiels pour garantir l'acceptabilité des performances et la fiabilité des résultats d'analyse. Cette méthode est la toute première validée et peut être utilisée en adductomique dans le cadre d'études sur l'exposome. En plus, nous avons simultanément mesuré par une approche in vitro les 9 adduits exocycliques dans de l’ADN de thymus de veau exposé à de différentes concentrations de chaque aldéhyde seul ou en mélanges équimolaires. Cette approche nous a permis d’établir des relations dose-dépendantes pour tous les aldéhydes à l’exception du malondialdéhyde et du méthylglyoxal. Une relation dose-réponse a également été observée avec les mélanges équimolaires d’aldéhydes. Elle a permis de définir des réactivités différentes des aldéhydes en mélange vis-à-vis de l’ADN. Les profils de ces adduits exocycliques ont été également déterminés dans l'ADN de sang de fumeurs et de non-fumeurs. La fumée de cigarette contient plusieurs aldéhydes connus de se lier par covalence aux bases de l’ADN, ainsi l’adduit à l’ADN peut être considéré comme biomarqueur d’exposition au tabac. Des différences significatives dans les niveaux d’adduits ont été obtenues entre l’ADN des fumeurs et celui des non-fumeurs à l’exception de l’adduit induit par le malondialdéhyde. Des corrélations ont été établies entre chaque adduit et les marqueurs de la consommation tabagique sans aucune corrélation significative de la totalité des adduits avec un marqueur spécifique. Par ailleurs, nous avons montré que l’exposition au formaldéhyde, au butanal et au benzaldéhyde a eu un effet sur les concentrations du MDA urinaire mesurées chez les policiers libanais stationnés au carrefour pendant 7 h par jour et après exposition de 5 jours aux émissions du trafic routier. Une augmentation du MDA plasmatique a été décrite ; les années de travail avaient une incidence sur les concentrations de ce biomarqueur. / Many studies in the second half of the 20th century have shown that genotoxic carcinogens, either directly or after metabolic activation, react with DNA to form covalently bonded adducts that are absolutely central in the carcinogenic process. Although there is compelling evidence of the presence of multiple DNA adducts in the lungs of subjects exposed to smoking or occupational exposure to a given aldehyde, it is clear that this is an area in which further research has been necessary. The aim of this thesis is to establish exocyclic DNA adducts profiles induced by the mixture of aldehydes, which could eventually be considered as a genotoxic marker of aldehyde exposure, both endogenous environmental. For this reason, we have validated a fast, sensitive and precise method on liquid chromatography coupled to mass spectrometry in tandem mode (UHPLC-MS/MS) using isotopic dilution, for trace quantification of 9 exocyclic DNA adducts derived from 8 major exogenous and endogenous aldehydes, including formaldehyde, acetaldehyde, acrolein, crotonaldehyde, malondialdehyde, 4-hydroxy-2-nonenal, glyoxal and methylglyoxal. These adducts were synthesized and purified as well as their labeled homologues, identified and quantified through standard curves ranging from 0.25 (LLOQ) to 250 ng/mL (ULOQ) adducts in water and in DNA to describe the matrix effects. Quality control (QC) samples were prepared and analyzed to verify the accuracy and precision of the method in repeatability and intermediate fidelity situations. The absence of cross-contamination has also been demonstrated. The method is able to differentiate the 9 analytes of interest and their internal standards using for each analyte a quantification transition and a confirmation transition. This method has been validated according to the recommendations of the European Medicines Agency (EMA) concerning bioanalytical methods. It meets all the essential criteria to guarantee the acceptability of the performances and the reliability of the analysis results. This method is the very first validated and can be used in adductomics in the context of studies on the exposome. In addition, the exocyclic adducts were simultaneously measured by an in vitro approach in calf thymus DNA exposed to different concentrations of each aldehyde apart or in equimolar mixtures. This approach allowed us to establish dose-dependent relationships for all aldehydes with the exception of malondialdehyde and methylglyoxal. A dose-response relationship was also observed with equimolar mixtures of aldehydes. It made it possible to define different reactivities of aldehydes in mixture versus DNA. The profiles of these exocyclic adducts were also determined in the blood DNA of smokers and non-smokers. Cigarette smoke contains several aldehydes known to covalently bind to DNA bases, so the DNA adduct may be considered as biomarker of tobacco exposure. Significant differences in adducts levels were obtained between smokers and non-smokers DNA with the exception of malondialdehyde-induced DNA adduct. Correlations were established between each adduct and smoking-related markers without any significant correlation of all adducts with a specific marker. Furthermore, we have shown that exposure to formaldehyde, butanal and benzaldehyde had an effect on the concentrations of urinary MDA measured in Lebanese police stationed at the intersection for 7 hours a day and after 5-day exposure to road traffic. An increase in plasma MDA has been described; years of work had an impact on the concentrations of this biomarker. These results are promising and it would be interesting to validate in population the profile of 9 exocyclic adducts as biomarkers of exposure to both exogenous and endogenous aldehydes as part of an adductomic approach to understand the carcinogenic risk in relation to aldehydes exposures in urban areas.

Les éléments traces (ET) se trouvent naturellement dans l’environnement. Ces dernières années, des apports croissants en ET sont induits par des activités anthropiques, causant des problèmes environnementaux surtout dans le milieu marin. Certains ET sont toxiques et le besoin de méthodes fiables pour leur analyse dans des échantillons environnementaux est indéniable. À travers cette thèse, des méthodes analytiques ont été développées et validées pour l’analyse des ET dans les sédiments et les organismes marins par spectrométrie d’absorption atomique à source continu, haute résolution et introduction solide directe (SS-HR-CS-AAS). Des études environnementales basées sur l’utilisation de cette méthode et d’autres ont été réalisés. Une première étude a été réalisée sur des sédiments (de surface et carottes) collectés en Namibie. Cette thèse présente une série inédite de concentrations de base sur la côte namibienne. Une contamination importante en Pb, Cu, Zn et Cd a été démontrée autour des zones les plus peuplées. Les pollutions au Pb et leurs sources ont été étudiées grâce aux rapports isotopiques du Pb. Une deuxième étude a été réalisée sur différentes espèces d’éponges marines et des sédiments collectés en France et en Irlande. Il est montré que les éponges accumulent plus les ET que les sédiments et de façon différente selon les espèces. Des analyses de spéciation de l’arsenic ont été réalisées sur les éponges par chromatographie liquide haute performance couplée à un ICP-MS. Les résultats ont montré une bioaccumulation très importante de ce métalloïde dans les éponges et sa biotransformation des formes inorganiques en formes organiques beaucoup moins toxiques. / Trace elements (TE) naturally occur in the environment but their inputs have been increasing by anthropogenic activities in the last decades, causing environmental concerns, particularly in coastal ecosystems. TE are toxic and the need of reliable methods for their determination in environmental samples is undeniable. The first part of this PhD was focused on the development and full validation of methods for the analysis of TE in sediments and marine organisms by Solid Sampling High Resolution Continuum Source Atomic Absorption Spectrometry (SSHR-CS-AAS). Second, environmental studies based on these and others methodologies were then performed. A first monitoring survey was performed on sediments (surface and core samples) collected along the Namibian coast. This thesis provides the first baseline of TE contents and historical record of pollution in the area. Significant Pb, Cu, Cd and Zn enrichments were highlighted around the most populated areas, providing a needed baseline for present and future evaluation of the Namibian marine environment. Pb pollutions and their sources were also tracked through the use of Pb isotope ratios. A second monitoring survey was performed on different marine sponges and sediments collected in the French Mediterranean and in the Irish coasts. This work showed that sponges accumulate more TE than sediments in different extents according to species. Arsenic speciation analysis was performed in sponges by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled with ICP-MS. This special focus on arsenic highlighted the great bioaccumulation of this metalloid in sponges and its biotransformation from inorganic forms to less toxic organic forms.

La séparation des énantiomères de principes actifs pharmaceutiques suscite un vif intérêt en raison des propriétés pharmacologiques, toxicologiques ou biologiques différentes qui peuvent exister entre deux isomères optiques. Le développement de méthodes d'analyse spécifiques et sensibles est donc nécessaire afin de contrôler la présence de traces de l'énantiomère inactif dans des lots de fabrication de médicaments.<br /> L'utilisation d'un détecteur à dichroïsme circulaire en chromatographie en phase liquide a permis de déterminer simultanément les puretés optique et chimique de plusieurs principes actifs pharmaceutiques. La sensibilité de la détection dichroïque est toutefois influencée par différents facteurs (nature des chromophores de l'analyte, pH de la phase mobile, température de la cellule de détection, utilisation d'un filtre électronique). Malgré un manque de sensibilité, le détecteur à dichroïsme circulaire permet de déterminer rapidement la pureté énantiomérique de principes actifs en CPL, sans séparation préalable des énantiomères sur un support chiral.<br /> D'autre part, l'aptitude de l'électrophorèse capillaire à séparer des énantiomères de pesticides possédant des hétéroatomes comme centres d'asymétrie a été confirmée. Ainsi, la séparation des énantiomères d'un pesticide organophosphoré et de ses deux métabolites chiraux a été réalisée. Cette méthode a été pré-validée puis appliquée à des matrices environnementales.<br /> Enfin, la simplicité d'utilisation et la sensibilité de la détection conductimétrique sans contact à couplage capacitif sont des atouts indéniables lors de la détermination de la pureté énantiomérique d'amines dénuées de groupements chromophores en électrophorèse capillaire.

Le contexte de ce projet de thèse était d’approfondir la compréhension du métabolisme de Trypanosoma brucei. Les trypanosomes utilisent différents types de sources de carbone, des hydrates de carbone ainsi que des acides aminés pour alimenter leurs besoins énergétiques et biosynthétiques (conditions imitant réellement l'environnement dans la mouche tse-tse). Les différences de thioesters d'acyl-CoA sont encore inconnues dans ces conditions. Une telle élucidation est essentielle pour comprendre les adaptations métaboliques de l'organisme au cours de son cycle de vie. Cet objectif pourrait être complété par une combinaison d'analyses sensibles de divers groupes de métabolites, de délétions dirigées de gènes ou de régulations négatives. Ces derniers développements intègrent un flux de travail complet d'analyse des flux métaboliques par 13C à l’état-instationnaire. Ce flux de travail combine les méthodes existantes pour la collecte d'échantillons, la métabolomique quantitative basée sur MS et l'analyse isotopique d'acides organiques, d'acides aminés, de composés phosphorylés en plus des thioesters d'acyl Coenzyme A (acyl-CoAs), qui représentent un point central entre le métabolisme central du carbone et les voies anaboliques. Ce flux de travail a d'abord été évalué et validé sur l'organisme modèle Escherichia coli et a fourni de nouvelles idées sur son fonctionnement métabolique. Par la suite, ce flux de travail a ensuite été exploité pour étudier le métabolisme de T. brucei, pour lequel les résultats préliminaires sont décrits et discutés dans cette thèse. / Unusual metabolism of protozoan parasite causing deadly sleeping sickness, Trypanosoma brucei, has been enigmatic for many years. In the past decades, targeted genetic perturbations combined with metabolic analysis have advanced the view on complex compartmentalized metabolism of this organism, but acyl-CoA metabolism on the crossroad between catabolic and anabolic pathways, remains largely uncharacterized. Present work aims at clarifying mitochondrial operation and topology of acyl-CoA network of T. brucei, as well as its interconnections with the rest of metabolism. This has required the development of a complete framework for investigation of acyl-CoA metabolism in T. brucei integrating isotope labeling experiments with metabolite quantification. Sensitive LC-MS method for identification and quantification of acyl-CoAs based on high-resolution mass spectrometry (HRMS) with LTQ-OrbiTrap has been established and applied to investigate acyl-CoA metabolism in the protozoan parasite, as well as in the model organism in systems and synthetic biology, Escherichia coli. Complete workflow from cell cultivation, measurement of extracellular fluxes and analysis of isotopic profile which is result of enzyme-specific incorporation of isotopic tracer allowed modelling of metabolic network and calculation of metabolic fluxes. The entire workflow has been biologically validated and has clarified the link between acyl-CoA and central carbon metabolism in E. coli. The proposed framework has been adapted to T. brucei, for which several sample collection methods have been evaluated thoroughly. It was possible to extract, identify and quantify main acyl-CoA species produced from glucose catabolism. This optimised setup for acyl-CoA analysis will allow collection of data for NMR-based analysis of metabolic end products as well as collection of intracellular metabolites from same sample.

La validité des contrôles microbiologiques, réalisés dans l'objectif d'assurer la sécurité sanitaire des aliments, nécessite notamment l'obtention de résultats d'analyse fiables. La fiabilité des résultats implique l'utilisation de méthodes validées, mises en œuvre par un laboratoire compétent. Les essais inter-laboratoires permettent de s'assurer, du moins en partie, du respect de ces deux conditions. Cependant, en raison de limites expérimentales, ces essais ne sont pas aussi largement pratiqués dans le domaine de la microbiologie des aliments qu'ils ne le sont dans d'autres domaines analytiques. Dans un premier temps, une revue des documents de référence permet d'établir un état des lieux. Cette revue concerne les trois objectifs que l'on peut assigner à des essais interlaboratoires, à savoir l'évaluation de méthodes d'analyse, celle des laboratoires, et la caractérisation de matériaux de référence. Les documents de portée générale, puis ceux spécifiques de l'analyse des aliments, sont pris en compte, et leur degré d'applicabilité à l'analyse microbiologique des aliments est envisagé. Les référentiels et pratiques propres au domaine d'intérêt traité sont finalement présentés, et les déviations par rapport aux documents généraux analysées. Sur cette base, sont présentées les conditions de mise en œuvre de deux types d'essais interlaboratoires, soit la validation de méthodes dans le cadre d'un projet européen du 4ème Programme Cadre de Recherche & Développement d'une part, et l'évaluation de laboratoires par le biais d'essais d'aptitude pour les Laboratoires Nationaux de Référence sur le lait d'autre part. Les difficultés relatives au protocole expérimental, et liées aux spécificités de la microbiologie, sont mises en exergue. Les modes d'exploitation des résultats, en fonction des objectifs et de la nature, qualitative ou quantitative, de la détermination, sont expliqués. En ce qui concerne la caractérisation de la performance des méthodes d'analyse, l'utilisation de statistiques robustes pour estimer la fidélité des méthodes quantitatives est discutée, ainsi que la façon de caractériser la fidélité comme la justesse des méthodes qualitatives. Sur ces aspects, des perspectives d'amélioration sont envisagées. L'intérêt de l'organisation des essais inter-laboratoires en microbiologie des aliments est ensuite abordé. Celui-ci réside dans l'utilisation que l'on peut faire de ces essais comme éléments incontournables de validation d'une méthode d'analyse et d'évaluation d'un laboratoire afin, d'une part, de crédibiliser ou d'améliorer les méthodes d'analyse normalisées au niveau international, et d'autre part d'estimer l'incertitude de mesure attachée aux résultats d'analyse. Quant aux limites de ces essais, essentiellement d'ordre expérimental, elles tiennent surtout à la nature vivante de l'analyte, et concernent des questions de représentativité.

Le déoxynivalénol (DON) est une mycotoxine qui contamine la plupart des cultures de céréales dans toutes les régions du monde. Capable de résister aux procédés de transformation subies par les céréales, le DON peut se retrouver alors, à l'état de contaminants dans les matières premières (céréales) ainsi que dans les denrées alimentaires transformées destinées à l'Homme (pâtes, pain, bières) et à l'animal (granulés) à des concentrations supérieures aux limites règlementaires. Malgré les efforts de recherche pour caractériser les multiples aspects de l'impact d'une contamination par le DON, les effets bactériologiques de cette mycotoxine n'étaient pas encore documentés chez l'Homme. L'Agence Nationale de Sécurité Sanitaire (Anses), dans le cadre de sa mission de protection du consommateur, a donc souhaité évaluer l'impact d'une contamination au DON sur le microbiote intestinal humain (MIH). Dans cette étude, nous avons d'abord évalué la cinétique du DON chez le porc et chez le rat, puis nous avons utilisé un modèle de rats à flore humanisée pour évaluer l'impact d'une exposition sub-chronique de la mycotoxine sur la composition du MIH. Le DON est un contaminant rapidement distribué et éliminé. Au sein du tractus digestif, il entraine des changements bactériologiques significatifs chez certains principaux groupes bactériens composant le MIH. Cette étude apporte des données complémentaires à l'analyse du risque lié à l'exposition du DON chez l'Homme et montre l'intérêt des modèles animaux étudiés dans des scénarii particuliers d'exposition au DON.

Le déoxynivalénol (DON) est une mycotoxine qui contamine la plupart des cultures de céréales dans toutes les régions du monde. Capable de résister aux procédés de transformation subies par les céréales, le DON peut se retrouver alors, à l'état de contaminants dans les matières premières (céréales) ainsi que dans les denrées alimentaires transformées destinées à l'Homme (pâtes, pain, bières) et à l'animal (granulés) à des concentrations supérieures aux limites règlementaires. Malgré les efforts de recherche pour caractériser les multiples aspects de l'impact d'une contamination par le DON, les effets bactériologiques de cette mycotoxine n'étaient pas encore documentés chez l'Homme. L'Agence Nationale de Sécurité Sanitaire (Anses), dans le cadre de sa mission de protection du consommateur, a donc souhaité évaluer l'impact d'une contamination au DON sur le microbiote intestinal humain (MIH). Dans cette étude, nous avons d'abord évalué la cinétique du DON chez le porc et chez le rat, puis nous avons utilisé un modèle de rats à flore humanisée pour évaluer l'impact d'une exposition sub-chronique de la mycotoxine sur la composition du MIH. Le DON est un contaminant rapidement distribué et éliminé. Au sein du tractus digestif, il entraine des changements bactériologiques significatifs chez certains principaux groupes bactériens composant le MIH. Cette étude apporte des données complémentaires à l'analyse du risque lié à l'exposition du DON chez l'Homme et montre l'intérêt des modèles animaux étudiés dans des scénarii particuliers d'exposition au DON.

Le déoxynivalénol (DON) est une mycotoxine qui contamine la plupart des cultures de céréales dans toutes les régions du monde. Capable de résister aux procédés de transformation subies par les céréales, le DON peut se retrouver alors, à l'état de contaminants dans les matières premières (céréales) ainsi que dans les denrées alimentaires transformées destinées à l'Homme (pâtes, pain, bières) et à l'animal (granulés) à des concentrations supérieures aux limites règlementaires. Malgré les efforts de recherche pour caractériser les multiples aspects de l’impact d’une contamination par le DON, les effets bactériologiques de cette mycotoxine n’étaient pas encore documentés chez l’Homme. L'Agence Nationale de Sécurité Sanitaire (Anses), dans le cadre de sa mission de protection du consommateur, a donc souhaité évaluer l'impact d'une contamination au DON sur le microbiote intestinal humain (MIH). Dans cette étude, nous avons d’abord évalué la cinétique du DON chez le porc et chez le rat, puis nous avons utilisé un modèle de rats à flore humanisée pour évaluer l'impact d'une exposition sub-chronique de la mycotoxine sur la composition du MIH. Le DON est un contaminant rapidement distribué et éliminé. Au sein du tractus digestif, il entraine des changements bactériologiques significatifs chez certains principaux groupes bactériens composant le MIH. Cette étude apporte des données complémentaires à l’analyse du risque lié à l’exposition du DON chez l’Homme et montre l’intérêt des modèles animaux étudiés dans des scénarii particuliers d’exposition au DON. / Deoxynivalenol (DON) is one of the most prevalent mycotoxins present in cereal crops worldwide. Able to withstand the transformation process undergone by grains, DON can be found as contaminant in raw materials (cereals) and in processed food for humans (pasta, bread, beer) and animals (grains) at concentrations upper the control limits. Despite research efforts to characterize various aspects of the impact of DON contamination, the microbiological effects of DON were not documented in humans. The French agency for food, environmental and occupational health and safety (Anses), as part of its mission to protect the consumer, wanted to assess the impact of DON contamination on the Human Gut Microbiota (HGM). In this study, we first evaluated the kinetics of DON in pigs and rats, and then we assessed the impact of an oral subchronic exposure of deoxynivalenol on the composition of HGM in a human microbiota-associated rats model. DON is a contaminant rapidly distributed and eliminated. In gut, DON leads to significant changes in some of the main bacterial groups of the HGM. This study provides additional data to analyze the risk exposure of DON in humans and shows the interest of these animal models in studies dealing with particular scenarios of DON exposure.

Les entreprises pharmaceutiques ont progressivement adopté le concept de Process Analytical Technology (PAT) afin de contrôler et d'assurer en temps réel la qualité des produits pharmaceutiques au cours de leur production. Le PAT et un composant central du concept plus général de Quality-by-Design (QbD) promu par les agence régulatrices et visant à construire la qualité des produits via une approche scientifique et la gestion des risques.Une méthode basée sur la spectroscopie proche infrarouge (PIR) a été développée comme un outil du PAT pour contrôler en ligne la cristallisation d'un principe actif pharmaceutique. Au cours du procédé les teneurs en principe actif et en solvant résiduel doivent être déterminées avec précision afin d'atteindre un point d'ensemencement prédéfini. Une méthodologie basée sur les principes du QbD a guidé le développement et la validation de la méthode tout en assurant l'adéquation avec son utilisation prévue. Des modèles basés sur les moindres carrés partiels ont été construits à l'aide d'outils chimiométriques afin de quantifier les 2 analytes d'intérêt. La méthode a été totalement validée conformément aux requis officiels en utilisant les profils d'exactitude. Un suivi du procédé en temps réel a permis de prouver que la méthode correspond à son usage prévu.L'implémentation de cette méthode comme à l'échelle industrielle au lancement de ce nouveau procédé permettra le contrôle automatique de l'étape de cristallisation dans le but d'assurer un niveau de qualité prédéfini de l'API. D'autres avantages sont attendus incluant la réduction du temps du procédé, la suppression d'un échantillonnage difficile et d'analyses hors ligne fastidieuses. / Pharmaceutical companies are progressively adopting and introducing the Process Analytical Technology (PAT) concept to control and ensure in real-time product quality in development and manufacturing. PAT is a key component of the Quality-by-Design (QbD) framework promoted by the regulatory authorities, aiming the building of product quality based on both a strong scientific background and a quality risk management approach.An analytical method based on near infrared (NIR) spectroscopy was developed as a PAT tool to control on-line an API (active pharmaceutical ingredient) crystallization. During this process the API and residual solvent contents need to be precisely determined to reach a predefined seeding point. An original methodology based on the QbD principles was applied to conduct the development and validation of the NIR method and to ensure that it is fitted for its intended use. Partial least squares (PLS) models were developed and optimized through chemometrics tools in order to quantify the 2 analytes of interest. The method was fully validated according to the official requirements using the accuracy profile approach. Besides, a real-time process monitoring was added to the validation phase to prove and document that the method is fitted for purpose.Implementation of this method as an in-process control at industrial plant from the launch of this new pharmaceutical process will enable automatic control of the crystallization step in order to ensure a predefined quality level of the API. Other valuable benefits are expected such as reduction of the process time, and suppression of a difficult sampling and tedious off-line analyzes.