El estudio tuvo como objetivo evaluar los potenciales reservorios silvestres de Trypanosoma sp. en cuatro localidades de los departamentos de Amazonas y Loreto, capturando y analizando marsupiales, roedores y quirópteros en busca de este protozoo. Además, se comparó la diversidad y presencia de Trypanosoma sp. en hospederos silvestres del departamento de Amazonas y Loreto, área endémica y no endémica de la enfermedad de Chagas, respectivamente. El estudio se realizó en los centros poblados el Ron y Tres Marías, provincia de Utcubamba departamento de Amazonas y los caseríos Cahuide y Manacamiri en la provincia de Maynas, departamento de Loreto. Los roedores y marsupiales fueron capturados utilizando trampas Tomahawk y Sherman, y para los quirópteros se utilizó redes de neblina. Los animales capturados fueron anestesiados para aplicar la técnica de xenodiagnóstico. Se determinó los índices de biodiversidad utilizando el programa Past; para el análisis porcentual y Prueba Exacta de Fisher se utilizó el software STATA. Se capturaron 95 individuos correspondiendo a 16 especies, Loreto mostro mayor diversidad de especies y abundancia, sin embargo Amazonas mostro mayor abundancia de individuos reservorio conocidos de Trypansoma sp. El 10, 68% (5/47) de los individuos fueron positivos a Trypanosoma sp.: Didelphis marsupialis (2/3), Mus musculus (1/7) y Phyllostomus elongatus (2/4). El quiróptero Phyllostomus elongatus se reporta como nueva especie de reservorio de Trypanosoma sp. para el Perú. Además, se lograron aislar las cepas Trypanosoma sp. obtenidas en los reservorios silvestres estudiados, que según las características morfológicas son compatibles con Trypanosoma cruzi. Por último, se obtuvieron nuevos protocolos anestésicos para los quirópteros y marsupiales capturados. / --- The study aimed to assess the potential wild reservoirs of Trypanosoma sp. in four localities of the departments of Amazonas and Loreto, capturing and analyzing marsupials, rodents and bats in search of this protozoan. In addition, diversity and presence of Trypanosoma sp. wild hosts in Amazonas and Loreto department, endemic and non-endemic area of Chagas disease respectively. The study was conducted in two population centers Ron y Tres Marias in the province of Utcubamba, Amazonas department and Cahuide and Manacamiri villages in the province of Maynas, Loreto department. Rodents and marsupials were captured using Tomahawk and Sherman traps, and bats used mist nets. Captured animals were anesthetized for xenodiagnosis technique. Biodiversity indices using the Past program were determined; for the percentage analysis and Fisher Exact Test was used STATA software. 95 individuals corresponding to 16 species, Loreto showed greater species diversity and abundance were captured, however Amazonas showed greater abundance of individuals known reservoir of Trypanosoma sp. The 10, 68% (5/47) of the individuals were positive for Trypanosoma sp.: Didelphis marsupialis (2/3), Mus musculus (1/7) and Phyllostomus elongatus (2/4). The chiropteran Phyllostomus elongatus reported as a new reservoir of Trypanosoma sp. for Peru. Furthermore, Trypanosoma sp. strains were isolated. obtained in the studied wild reservoirs, according to the morphological characteristics that are compatible with Trypanosoma cruzi. Finally, news anesthetic protocols for bats and marsupials captured were obtained.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas constituye un problema de salud pública en el continente americano. De acuerdo a la OMS existirían 18.000.000 personas con esta parasitosis. Brasil con 5.000.000 y Argentina con 2.200.000 infectados, son los países más afectados. En Chile se estiman que existen actualmente 200.000 chagásicos crónicos. Existen características clínicas regionales de la Enfermedad de Chagas, siendo la cardiopatía y las megaformaciones las principales manifestaciones en la etapa crónica. El diagnóstico es abordado desde el punto de vista clínico-epidemiológico y se orienta en función de la etapa de la infección. En los casos agudos, debido a la elevada parasitemia, los métodos de elección son parasitológicos y en la etapa crónica, por las fluctuantes y bajas parasitemias, la detección de T. cruzi es más compleja. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en sangre periférica de individuos chagásicos, ha permitido aumentar la sensibilidad diagnóstica. Recientemente, se ha aplicado PCR en deyecciones de triatominos alimentados mediante xenodiagnóstico (XD) en chagásicos crónicos sometidos a tratamiento quimioterapéutico. Con el fin de conocer la sensibilidad y precocidad de la detección de kDNA de T. cruzi en deyecciones de triatominos alimentados mediante XD en pacientes con enfermedad de Chagas crónica, a 25 infectados con XD (+) (Grupo I) y 25 infectados con XD (-) (Grupo II), se aplicó PCR al pool de deyecciones de triatominos incubados durante 30, 60 y 90 días. En todos los casos con XD (+) se detectó la banda específica de 330 pb. Mientras a los 60 días el XD era positivo en el 84% de los casos, PCR tuvo un 100% de positividad. En el Grupo II, de chagásicos con XD (-) a los 30, 60 y 90 días, 9 casos (36%) tuvieron PCR positivo. Los resultados permiten concluir que PCR aplicado en deyecciones de triatominos es una herramienta más precoz para detectar T. cruzi que el XD, ya que a los 30 días, XD y PCR tienen un 44% y un 92% de positividad, respectivamente. El 100% de los casos es pesquisado mediante PCR a los 60 días, mientras que el XD necesita 90 días para obtener el mismo resultado. El XD actúa como un medio de cultivo biológico para amplificar T. cruzi, lo que permite aplicar PCR en las deyecciones, por esta razón, ambas técnicas son complementarias / Financiamiento: Proyectos DI SAL 03/06-2 y Fondecyt 1040731

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas constituye uno de los principales problemas de Salud Pública en países como Brasil, Bolivia y Chile. Esta parasitosis es producida por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi y se caracteriza por presentar una fase aguda, generalmente sintomática y una crónica asintomática que puede ser de larga evolución. El diagnóstico en esta última fase se basa fundamentalmente en la detección de anticuerpos anti-T. cruzi mediante técnicas serológicas, debido a que las parasitemias pueden ser bajas y fluctuantes. Si bien las reacciones de PCR Tiempo Final y PCR Tiempo Real (qPCR) han permitido un importante avance en el diagnóstico parasitológico de T. cruzi, es posible combinarlas con técnicas parasitológicas convencionales como el xenodiagnóstico (XD). En este trabajo, se evaluó la eficacia del diagnóstico parasitológico de T. cruzi mediante tres técnicas convencionales/no convencionales. Xenodiagnóstico convencional fue aplicado a 50 pacientes con enfermedad de Chagas crónica procedentes de la IV Región de Coquimbo, Chile. Posterior al examen microscópico de las deyecciones de los triatominos a los 30, 60 y 90 días post alimentación sobre el paciente, las muestras fecales de los triatominos obtenidas en el XD fueron procesadas para realizar PCR Tiempo Final (PCR-XD) y PCR Tiempo Real (qPCR-XD) en los 3 períodos de estudio. A los 30 días, la positividad fue del 6%, 68% y 88% para XD, PCR-XD y qPCR-XD, respectivamente. A los 60 días, la positividad fue de 14%, 74% y 96% y, a los 90 días, del 24%, 76% y 98%. Mediante la pruebas de Cochran y Mc Nemar fue posible determinar que a los 30 días no existen diferencias significativas entre la positividad de PCR-XD y qPCR-XD (p-value=0.063). Por el contrario, a los 60 y 90 días, qPCR-XD presenta diferencias significativas con las técnicas de XD y PCR-XD (p-value=0.003). Se concluye que la técnica de qPCR-XD es más eficiente que XD y PCR-XD en el diagnóstico de T. cruzi, pues no sólo confirma la presencia del parásito, sino que permite cuantificar la carga presente en el vector biológico. No obstante, los resultados de la cuantificación parasitaria en las deyecciones de los triatominos no pueden ser extrapolados a la parasitemia circulante en el paciente, pues en la técnica de XD existen variables imposibles de controlar, como la capacidad individual de los triatominos para alimentarse sobre el paciente infectado / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1100768

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas, también conocida como tripanosomiasis americana, es una enfermedad zoonótica producida por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi. Actualmente se reconocen seis linajes distintos de T. cruzi, conocidos también como unidades discretas de tipificación (DTUs). Estos corresponden a TcI-TcVI. La presencia de distintos linajes de T. cruzi ha sido detectada con anterioridad en el roedor endémico Octodon degus, observándose variaciones temporales en la presentación sanguínea de éstos. Un total de 11 ejemplares silvestres de O. degus, previa confirmación de infección con T. cruzi mediante ensayo de PCR a muestras de sangre periférica, fueron sometidos a dos ensayos de xenodiagnóstico separados por 6 meses en promedio. Utilizando los resultados del muestreo de sangre y ambos procedimientos de xenodiagnóstico se determinó la identidad del o los linajes de T. cruzi presentes en la sangre de los roedores en tres momentos distintos. Se utilizaron tres especies distintas de vectores, empleándose ejemplares de Triatoma infestans y Mepraia gajardoi durante el primer xenodiagnóstico y ejemplares T. infestans y Mepraia spinolai durante el segundo. Las heces de los triatominos fueron analizadas en tres oportunidades luego de cada xenodiagnóstico. Se detectaron variaciones en la identidad de los linajes de T. cruzi detectados en las heces de los triatominos a lo largo del seguimiento realizado de forma posterior a cada xenodiagnóstico. Conjuntamente fue posible evidenciar la existencia de variaciones temporales en la presentación sanguínea de linajes de T. cruzi en los 11 roedores estudiados luego de los tres procedimientos diagnósticos realizados / Proyecto Fondecyt 1120122

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En este estudio demostramos la detección de Trypanosoma cruzi en el roedor silvestre Octodon degus por medio de PCR en sangre y xenodiagnóstico usando los vectores doméstico (Triatoma infestans) y silvestre (Mepraia spinolai) de la enfermedad de Chagas. Se estudiaron 35 Octodon degus y 33 Oryctolagus cuniculus capturados en un área endémica de Chile. Para realizar el PCR se usaron muestras de sangre y contenido intestinal de los vectores alimentados con los animales. Los resultados muestran que el porcentaje de roedores naturalmente infectados con Trypanosoma cruzi depende de la muestra biológica usada en el PCR y la especie de vector usada en el xenodiagnóstico. Los PCR realizados en muestras de sangre no detectaron el DNA de Trypanosoma cruzi, pero el PCR del contenido intestinal indicó que ambos vectores fueron positivos al protozoo. Por lo tanto esta prueba resultó más sensible para detectar el Tripanosoma cruzi en estas especies. Por su parte Mepraia spinolai resultó 4 veces más sensible en detectar la infección por Trypanosoma cruzi en Octodon degus que Triatoma infestans, 22.9% y 5.7% respectivamente. Los resultados en Oryctolagus cuniculus fueron negativos tanto en las muestras de sangre como en los insectos. Todas las muestras positivas al PCR fueron analizadas con pruebas específicas de hibridación usando cuatro genotipos diferentes de Trypanosoma cruzi. Los resultados de la hibridación indican que Mepraia spinolai detectó más genotipos de Trypanosoma cruzi que Triatoma infestans. Estos resultados plantean que Mepraia spinolai es un insecto con una mejor capacidad vectorial que Triatoma infestans. Finalmente se informa el mejoramiento de la detección de Tripanosoma cruzi en animales silvestres con una combinación de PCR y xenodiagnóstico usando el vector endógeno y silvestre Mepraia spinolai / Proyecto FONDECYT No. 1040762 y Proyecto FONDECYT No. 1040711

Foram selecionados aleatoriamente 38 cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi oriundos de Araçatuba, São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral, e os quais foram distribuídos em dois grupos: o primeiro com 24 cães sintomáticos e, o outro, composto por 14 animais assintomáticos. Correlacionou-se a caracterização clínica (assintomáticos ou sintomáticos) com os: potencial em infectar o inseto vetor, padrão inflamatório da pele, perfil de imunidade celular e parasitismo tegumentar desses cães. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 no tegumento, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,1584), sendo que a densidade de parasitos na pele mostrou uma correlação positiva moderada com os títulos de anticorpos anti-Leishmania (p = 0,042). Quanto à infectividade ao vetor, evidenciada pelo xenodiagnóstico, 16 (66,7%) cães sintomáticos e 13 (93%) assintomáticos foram capazes em transmitir Leishmania aos flebotomíneos, dentre estes, respectivamente, seis (37,5%) e oito (61,5%) animais não apresentavam parasitismo cutâneo, embora todos, de ambos os grupos, tenham sido positivos quando da pesquisa de parasitos no linfonodo poplíteo. Observou-se um maior percentual de transmissibilidade para o vetor a partir de cães assintomáticos (p = 0,0494). As alterações histológicas cutâneas foram similares em ambos os grupos e se caracterizaram, de modo geral, por um infiltrado inflamatório, ora focal ora difuso, na derme, constituído, principalmente, por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), variando de discreto a intenso. Quanto à caracterização da resposta imune celular no tegumento dos animais, somente a densidade (células/mm2) de células iNOS+ foi significantemente maior na derme dos cães sintomáticos quando comparado aos assintomáticos (p = 0,0368). Observou-se correlação positiva moderada entre a densidade de parasitos na pele e a densidade de macrófagos (p = 0,031), de células T CD4+ (p = 0,015) e CD8+ (p = 0,023), e, também, naquela de células iNOS+ relativamente a de células T CD3+ (p = 0,005), CD4+ (p = 0,001) e CD8+ (p = 0,0001). Verificou-se, ainda, correlação negativa moderada com o número de manifestações clínicas e/ou gravidade da enfermidade (p = 0,028), confirmando, assim, maior transmissibilidade de parasitos ao vetor, a partir de animais assintomáticos, demonstrando-se, dessa forma, que tais cães são fontes de infecção em potencial para insetos vetores em áreas endêmicas para leishmaniose visceral canina. / Thirty-eight dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were randomly selected from Araçatuba of São Paulo state (Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis. The subjects were distributed into two groups: the first comprising 24 symptomatic dogs and the second consisting of 14 asymptomatic dogs. Possible correlations of clinical characterization (in both symptomatic and asymptomatic subjects) with potential to infect the insect vector, skin inflammatory pattern, cutaneous cellular immunity profile and cutaneous parasitism were investigated. Regarding to the number of cutaneous leishmania amastigotes/mm2, there was not a significant difference between the groups (p = 0.1584); density of skin parasites showed a moderate positive correlation with anti-Leishmania antibody titers (p = 0.042). Concerning to the infectivity to the insect vector, as evidenced by xenodiagnosis, 16 (66.7%) symptomatic and 13 (93%) asymptomatic dogs were able to transmit Leishmania to phlebotomines. Among these, six (37.5%) and eight (61.5%) dogs, respectivelly, did not show cutaneous parasitism, although all participant dogs were found positive when searching for parasites in the popliteal lymph nodes. Asymptomatic dogs showed higher transmissibility to the vector than symptomatic ones (p = 0.0494). Histological features in the skin were similar in both groups and were generally characterized by an inflammatory infiltrate, either diffuse or focal, in the dermis, mainly consisted of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes and plasma cells), varying from mild to intense. Concerning characterization of the cutaneous cellular immune response, only iNOS+ cells density (cells/mm2) was significantly higher in the dermis of the symptomatic dogs compared to the asymptomatic ones (p = 0.0368). Moderate positive correlation between the cutaneous parasites density and the macrophages density (p = 0.031), the CD4+ T cells (p = 0.015) and CD8+ T cells (p = 0.023) were observed. Furthermore, density of iNOS+ cells in relation to CD3+ T cells (p = 0.005), CD4+ T cells (p = 0.001) and CD8+ T cells (p = 0.0001) were found positively correlated at a moderate level. It was also found a moderate negative correlation between cutaneous parasites density and the number of clinical signs and/or disease severity (p = 0.028), confirming grater parasites transmission to the vector from asymptomatic animals. It was therefore demonstrated that these dogs are potential sources of infection to insect vectors in endemic areas for canine visceral leishmaniasis.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-07-11T13:41:05Z No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-07-13T01:15:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T01:15:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) / Leishmaniose Visceral é uma zoonose causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. O controle da doença é bastante complexo, sendo que atualmente sugere-se a necessidade de redirecionamento nas medidas de controle, sobretudo no que se refere à identificação de cães verdadeiramente transmissores e à necessidade de um refinamento no controle vetorial. Neste trabalho foi avaliada a infectividade de cães naturalmente infectados com L. infantum para a L. longipalpis, bem como a capacidade atrativa de diferentes compostos orgânicos voláteis para o mesmo vetor. A partir de testes xenodiagnósticos, foi observado que cães com maior manifestação de sinais clínicos são mais infectivos ao vetor que cães com pouco ou nenhum sinal clínico, entretanto não houve diferença na taxa de transmissibilidade quando diferentes protocolos de xenodiagnóstico foram confrontados. Sendo que, para cães infectados com L. infantum e agrupados conforme a presença de anormalidades clínicas e patológicas, a taxa de infectividade nos flebotomíneos foi significativamente menor (p=0,0098) , quando estes se alimentaram de cães com doença moderada (0,01%), comparativamente aos cães com doença severa (38,2%).Demonstrou-se também que machos e fêmeas de L. longipalpis são atraídos por compostos aldeídos e alcanos (octanal, decanal e heptadecano) identificados no pelo canino e álcoois (heptanol, octanol, octenol e nonanol) encontrados em plantas. Esses compostos químicos podem ser utilizados como iscas em armadilhas para captura dos insetos ou ainda associados com inseticidas de efeito residual. Mais estudos são necessários sobre a biologia e comportamento da L. longipalpis e sua relação com cães infectados com L. infantum, buscando melhor entender essa interface e identificar novas alternativas de controle para a leishmaniose visceral. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by the protozoan Leishmania infantum and transmitted by the phlebotominae sand fly Lutzomyia longipalpis. The control of the disease is quite complex, being suggested presently the necessity to redirect the control measures, especially concerning the identification of dogs truly transmitters and the necessity of a refinement of the vector control. This work was evaluated the infectivity of dogs naturally infected with L. infantum to L. longipalpis as well as the attractive ability of different volatile organic compounds to same vector. It was observed, by xenodiagnosis, that dogs with higher manifestation of clinical signs are more infective to the vector that dogs with few or no clinical signs, however there was no difference in the transmission rate when different xenodiagnosis methodologies were compared. Therefore for dogs infected with L. infantum and grouped according to presence of clinical and pathological abnormalities in the infectivity rate sandflies was significantly lower (p = 0.0098), when these were fed dogs with moderate disease (0, 01%) compared to dogs with severe disease (38.2%). It was also demonstrated that males and females of L. longipalpis are attracted by aldehyde and alkane (octanal, decanal and heptadecane) compounds identified on the canine hair and alcohols found in plants (octenol, octanol, heptanol and nonanol). These chemical compounds can be used as bait in traps to capture insects and even be associated with insecticides with residual effect. More studies are necessary about the biology and behavior of L. longipalpis and its relationship to dogs infected with L. infantum, searching to better understand this interface and identify new alternatives to control visceral leishmaniasis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-07T16:33:35Z No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-07T16:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / No Novo Mundo, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela Leishmania infantum, que tem como vetor o inseto flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. Os cães são considerados o principal reservatório urbano da infecção. Devido ao fato do controle da LV se basear, principalmente, no controle da leishmaniose visceral canina (LVC), é importante estudar o papel dos cães na transmissão da infecção. Foi demonstrado que cães apresentando diferentes apresentações clínicas da LV, inclusive os assintomáticos transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. Nenhum estudo sistemático avaliou a associação direta entre a carga parasitária em diferentes tecidos e a transmissão do parasito. A hipótese desse estudo é que cães com baixa carga parasitária na pele e no sangue não transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. O objetivo deste estudo foi analisar se há correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes apresentações clínicas da LV e a transmissão ao vetor Lutzomyia longipalpis. Foram selecionados 35 cães de dois canis, locazidos em area endêmica (n=23) e não endêmica (n=12) para LV. Os animais foram classificados de acordo com o número de sinais clínicos em: assintomáticos (sem sinais; n=12), oligossintomáticos (1-3 sinais; n=15) e polissintomático (<3 sinais; n =8). Todos os 35 cães foram positivos em pelo menos um dos testes diagnósticos: ELISA (n=8), cultura de aspirado esplênico (n=9) e qPCR (n=35) dos tecidos avaliados. Diferentes tecidos (sangue periférico, aspirado esplênico e biópsia de pele) foram coletados para quantificação do DNA do parasito pela qPCR. Para avaliar a capacidade de transmissão dos cães, foi realizado xenodiagnóstico, seguido de determinação da carga parasitária em cada flebótomo utilizando qPCR. Finalmente, a capacidade de transmissão de Leishmania foi estimada pela determinação, após o xenodiagnóstico, da infectividade de cães ao flebótomo, da taxa de infecção de flebótomos, e da carga parasitária transmitida aos flebótomos. Baixa carga parasitária na pele e no sangue foi detectada em aproximadamente 85% dos cães assintomáticos. A infectividade de cães ao flebótomo variou de 60 a 90%, e foi similar entre animais apresentando diferentes números de sinais clínicos. Foi identificado que o maior percentual (51%) de cães transmite parasitos a um pequeno número de flebótomos (de 1 a 5 em 30 flebótomos utilizados no xenodiagnóstico). Entre os tecidos analisados, correlação positiva foi detectada entre a infectividade de cães ao vetor e a carga parasitária nas amostras de sangue (r = 0.50, p<0.01). Adicionalmente, foi observada, correlação positiva entre menor taxa de infecção dos flebótomos e baixa carga parasitária no sangue (r = 0.53, p<0.01). Em conjunto, estes dados mostram que cães com baixa carga parasitária são capazes de transmitir o parasito, porém a um pequeno número de flebótomos e com uma baixa carga parasitária. / In the New World, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum and is usually transmitted by Lutzomyia longipalpis. Dogs are considered the main urban reservoir of the parasite. Evaluation of the importance of dogs in Leishmania transmission in VL is well established. Dogs with different clinical forms of VL have shown to transmit the infection to the sandfly vector, even those with no clinical signs of the disease. Comprehensive studies that correlate transmission and parasite load in different tissues are scarce. Our hypothesis is that dogs with low parasite load in the skin and blood do not transmit the infection to the sandfly vector. We aimed to analyze the correlation between parasite load of dogs with different clinical forms of CVL and transmission to the vector Lutzomyia longipalpis. Thirty five dogs were selected from two canine kennels, located in an endemic (n=23) and non-endemic area (n=12) for VL. These animals were classified according to the clinical signs into asymptomatic (no signs; n=12), olygosymptomatic (1-3 signs; n=15) and polysymptomatic (>3 signs; n=8). All the 35 dogs tested positive for at least one of the diagnostic tests: ELISA (n=8), culture in splenic aspirates (n=9) and qPCR for Leishmania DNA detection (n=35). Different tissues (blood, splenic aspirate and skin biopsy) were collected for quantification of parasite load using qPCR. To evaluate the infectivity of the dogs to vector, first we performed the xenodiagnosis, then we quantified parasite load in each sandfly using qPCR. Finally, transmission of Leishmania was estimated by determining infectivity to sandflies, and the infection rate, and the parasite load transmitted to sandflies. Low parasite load in the skin and blood was detected in approximately 85% of asymptomatic dogs. Infectivity to sandflies varied from 60 to 90%, and shown to be similar among animals presenting different number of clinical signs. It was noted that the highest percentage (51%) of dogs transmitted infection to a small number of sandflies (from 1 to 5 in 30 sandflies used in xenodiagnosis). Positive correlation between infectivity to sandflies and parasite load was only detected in blood among the tissues analyzed (r = 0.50, p <0.01). Additionally, a lower parasite load in blood (r = 0.53, p <0.01) were correlated to the presence of lower number of positive sandflies in xenodiagnosis. These findings indicate that animals with low parasite load are capable to transmit Leishmania to sandflies, although to a lower number of sandflies and with a low parasite load.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-14T19:12:00Z No. of bitstreams: 1 alejandro_mh_moreno_ioc_mt_0001_2010.pdf: 339583 bytes, checksum: 457b4793ca6b03e5f5a4b94f0e5534b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-14T19:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alejandro_mh_moreno_ioc_mt_0001_2010.pdf: 339583 bytes, checksum: 457b4793ca6b03e5f5a4b94f0e5534b1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O objetivo deste trabalho é descrever a evolução eletrocardiográfica, sorológica e parasitológica de pacientes com doença de Chagas na forma indeterminada, tratados com benzonidazol, comparando-os com um grupo controle de pacientes que não receberam tratamento etiológico. Para determinação da freqüência de surgimento de alterações eletrocardiográficas durante o período de seguimento, os grupos de pacientes tratados (n = 62) e não tratados (n = 62) foram observados por, em média, 118,3 ± 61,7 meses (7333,7 pacientes-meses) e 144,51 ± 49 meses (8959,9 pacientes-meses), respectivamente. A freqüência de surgimento de alterações eletrocardiográficas foi de 8/62 (12,9%) no grupo tratado e 10/62 (16,1%) no grupo não tratado (p = 0,400), com densidades de incidência de 1,09 / 1000 pacientes-meses e 1,11 / 1000 pacientes-meses nestes dois grupos, respectivamente (risco relativo = 0,98). Não foi observada relação entre a evolução para piora eletrocardiográfica e as variáveis idade (35,2 ± 9,6 entre os que evoluíram para este desfecho e 34,8 ± 6,7 entre os que não evoluíram), sexo ou naturalidade. Para comparação da evolução dos títulos sorológicos, os grupos de pacientes tratados e não tratados foram observados por 88,7 ± 49,6 meses e 140,9 ± 47,8 meses, respectivamente. Após conversão dos títulos de diluição sorológicos para valores em uma escala linear na qual o valor 1 representa a diluição de 1:40 e o valor 6 a diluição de 1:1280, observou-se que os pacientes tratados evoluíram com uma redução significativa dos títulos (4,07 no pré-tratamento e 2,85 ao fim do acompanhamento, p < 0,001), redução esta que não foi observada entre os não tratados (4,22 no início do acompanhamento e 4,11 ao término do seguimento, p = 0,503). Embora quando comparados aos títulos observados antes da terapia específica os títulos sorológicos pós- tratamento apresentem significativa redução, estes últimos apresentam uma tendência de elevação com o passar do tempo, após 100 a 150 meses de acompanhamento. Não foi observada relação entre a evolução dos títulos sorológicos ou os títulos sorológicos iniciais e o surgimento de alterações eletrocardiográficas, assim como entre estes títulos e a naturalidade dos pacientes. No grupo tratado com benzonidazol, todos os pacientes (62) realizaram xenodiagnóstico, observando-se 32 pessoas com exames positivos (51,6%). Após o tratamento, apenas um destes pacientes permaneceu positivo. Conclui- se que, na amostra de pacientes estudada: i) os pacientes com xenodiagnóstico positivo, ao serem tratados evoluem, em sua maioria, com negativação deste exame; ii) o tratamento específico proporciona uma redução significativa dos títulos sorológicos e iii) não há relação entre o tratamento etiológico da doença de Chagas com benzonidazol e a evolução eletrocardiográfica. / The aim of this study was to describe the effect of benzonidazol treatment on the electrocardiographic, serological and parasitological evolution of patients in indeterminate form of Chagas disease. In order to do this, we retrospectively analyzed a group of 62 patients that were treated with benzonidazol and compared their clinical findings with the findings of an untreated group (n=62) with Chagas disease. The frequency of electrocardiographic alterations in the treated group was followed for 118.3 ± 61.7 months (7333.7 patients-months) and in the untreated group was followed for 144.51 ± 49 months (8959.9 patients-months). The rate of disease progression from indeterminate to the cardiac form of Chagas disease based on electrocardiographic findings was 12.9% (8/62) among treated patients and 16.1% (10/62) among untreated (p = 0.4). The incidence densities of this outcome was 1.09/1000 patients-months and 1.11/1000 patients-months in treated and untreated groups, respectively (relative risk = 0.98). There was no correlation between the progression to cardiac form and age, sex or place of birth. The serological titers of benzonidazol treated and untreated patients were followed for 88.7 ± 49.6 months and 140.9 ± 47.8 months, respectively. The titers were converted to a linear scale, where 1 represented a 1:40 dilution and 6 a 1:1280 dilution. The serological titer reduced significantly after benzonidazol treatment ((4.07 before treatment vs. 2.85 post-treatment, p < 0.001). Such reduction was not observed among untreated persons (4.22 at the beginning of the follow-up vs. 4.11 at the end, p = 0.503). Despite the observed reduction of the serological titers after benzonidazol treatment, the post-treatment titers tended to increase throughout the follow-up period, mainly after 100-150 months. Furthermore, we failed to detect a relationship between serological evolution and electrocardiographic alterations. All treated patients were submitted to xenodiagnosis and 32 proved positive. After treatment, xenodiagnosis remained positive in only one patient. We concluded that: i) parasitemia seems to be suppressed soon after specific treatment ii) treatment with benznidazole is associated with a significant reduction in serological titers, and iii) among studied patients there was no relationship between etiologic treatment and electrocardiographic evolution

Foram selecionados aleatoriamente 38 cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi oriundos de Araçatuba, São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral, e os quais foram distribuídos em dois grupos: o primeiro com 24 cães sintomáticos e, o outro, composto por 14 animais assintomáticos. Correlacionou-se a caracterização clínica (assintomáticos ou sintomáticos) com os: potencial em infectar o inseto vetor, padrão inflamatório da pele, perfil de imunidade celular e parasitismo tegumentar desses cães. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 no tegumento, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,1584), sendo que a densidade de parasitos na pele mostrou uma correlação positiva moderada com os títulos de anticorpos anti-Leishmania (p = 0,042). Quanto à infectividade ao vetor, evidenciada pelo xenodiagnóstico, 16 (66,7%) cães sintomáticos e 13 (93%) assintomáticos foram capazes em transmitir Leishmania aos flebotomíneos, dentre estes, respectivamente, seis (37,5%) e oito (61,5%) animais não apresentavam parasitismo cutâneo, embora todos, de ambos os grupos, tenham sido positivos quando da pesquisa de parasitos no linfonodo poplíteo. Observou-se um maior percentual de transmissibilidade para o vetor a partir de cães assintomáticos (p = 0,0494). As alterações histológicas cutâneas foram similares em ambos os grupos e se caracterizaram, de modo geral, por um infiltrado inflamatório, ora focal ora difuso, na derme, constituído, principalmente, por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), variando de discreto a intenso. Quanto à caracterização da resposta imune celular no tegumento dos animais, somente a densidade (células/mm2) de células iNOS+ foi significantemente maior na derme dos cães sintomáticos quando comparado aos assintomáticos (p = 0,0368). Observou-se correlação positiva moderada entre a densidade de parasitos na pele e a densidade de macrófagos (p = 0,031), de células T CD4+ (p = 0,015) e CD8+ (p = 0,023), e, também, naquela de células iNOS+ relativamente a de células T CD3+ (p = 0,005), CD4+ (p = 0,001) e CD8+ (p = 0,0001). Verificou-se, ainda, correlação negativa moderada com o número de manifestações clínicas e/ou gravidade da enfermidade (p = 0,028), confirmando, assim, maior transmissibilidade de parasitos ao vetor, a partir de animais assintomáticos, demonstrando-se, dessa forma, que tais cães são fontes de infecção em potencial para insetos vetores em áreas endêmicas para leishmaniose visceral canina. / Thirty-eight dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were randomly selected from Araçatuba of São Paulo state (Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis. The subjects were distributed into two groups: the first comprising 24 symptomatic dogs and the second consisting of 14 asymptomatic dogs. Possible correlations of clinical characterization (in both symptomatic and asymptomatic subjects) with potential to infect the insect vector, skin inflammatory pattern, cutaneous cellular immunity profile and cutaneous parasitism were investigated. Regarding to the number of cutaneous leishmania amastigotes/mm2, there was not a significant difference between the groups (p = 0.1584); density of skin parasites showed a moderate positive correlation with anti-Leishmania antibody titers (p = 0.042). Concerning to the infectivity to the insect vector, as evidenced by xenodiagnosis, 16 (66.7%) symptomatic and 13 (93%) asymptomatic dogs were able to transmit Leishmania to phlebotomines. Among these, six (37.5%) and eight (61.5%) dogs, respectivelly, did not show cutaneous parasitism, although all participant dogs were found positive when searching for parasites in the popliteal lymph nodes. Asymptomatic dogs showed higher transmissibility to the vector than symptomatic ones (p = 0.0494). Histological features in the skin were similar in both groups and were generally characterized by an inflammatory infiltrate, either diffuse or focal, in the dermis, mainly consisted of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes and plasma cells), varying from mild to intense. Concerning characterization of the cutaneous cellular immune response, only iNOS+ cells density (cells/mm2) was significantly higher in the dermis of the symptomatic dogs compared to the asymptomatic ones (p = 0.0368). Moderate positive correlation between the cutaneous parasites density and the macrophages density (p = 0.031), the CD4+ T cells (p = 0.015) and CD8+ T cells (p = 0.023) were observed. Furthermore, density of iNOS+ cells in relation to CD3+ T cells (p = 0.005), CD4+ T cells (p = 0.001) and CD8+ T cells (p = 0.0001) were found positively correlated at a moderate level. It was also found a moderate negative correlation between cutaneous parasites density and the number of clinical signs and/or disease severity (p = 0.028), confirming grater parasites transmission to the vector from asymptomatic animals. It was therefore demonstrated that these dogs are potential sources of infection to insect vectors in endemic areas for canine visceral leishmaniasis.