Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-05-20T18:06:29Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-05-20T18:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by VANESSA SANTOS MOURA null (vanessa_smoura@hotmail.com) on 2017-08-29T04:50:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Vanessa_Santos_Moura.pdf: 2606729 bytes, checksum: 3c16d37b47ce11933b2d1f88e4aa9b1f (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-29T18:18:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moura_vs_me_jabo.pdf: 2606729 bytes, checksum: 3c16d37b47ce11933b2d1f88e4aa9b1f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T18:18:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moura_vs_me_jabo.pdf: 2606729 bytes, checksum: 3c16d37b47ce11933b2d1f88e4aa9b1f (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O bolor verde e a podridão azeda destacam-se entre as doenças de pós-colheita em frutos cítricos, causados por Penicillium digitatum e Geotrichum citri-aurantii, diminuindo a qualidade e a quantidade dos frutos e, consequentemente, resultando em significativas perdas econômicas. Uma alternativa para controle destes fungos é através da toxinas killer produzidas por algumas espécies de levedura, capazes de matar fungos filamentosos. Saccharomyces cerevisiae produz toxinas killer proteicas que são letais para células sensíveis de levedura. Estas toxinas foram agrupadas em quatro tipos, K1, K2, K28 e Klus, codificado por elementos extra cromossomais associados a partículas virais na forma de dsRNA. Este trabalho tem como objetivo caracterizar a toxina killer de S. cerevisiae ACB-K1 e testar sua atividade antagônica em patógenos pós-colheita de citros. O isolado ACB-K1 apresentou atividade killer, sobre levedura sensível (S. cerevisae NCYC 1006) além do fitopatógeno P. digitatum, não apresentando porém inibição contra o patógeno G. citri-aurantii. A toxina apresentou máxima atividade em pH 4,1 a 22 °C, tanto para a levedura sensível quanto para o fitopatógeno P. digitatum. A toxina apresentou estabilidade em diferentes pH de 4,1 a 6,0, após a incubação de 24h a 22 °C sobre o fungo. O isolado ACB-K1 apresentou dsRNA, sendo detectadas duas formas (LA e M-dsRNA), sugerindo que a base genética para a produção da toxina é extra cromossomal, dado confirmado pela cura do fenótipo killer a 40 °C. As frações obtidas por cromatografia de exclusão molecular em gel de Sephadex G75 demonstraram características de biocontrole contra o fitopatógeno P. digitatum. / Green mold and sour rot are among post-harvest diseases in citrus fruits, caused by Penicillium digitatum and Geotrichum citri-aurantii, reducing a quality and quantity of fruits and, consequently, resulting in significant economic losses. An alternative for the control of fungi is using killer toxins produced by some species of yeasts, capable of killing filamentous fungi. Saccharomyces cerevisiae produces protein killer toxins that are lethal to yeast sensitive cells. These toxins were grouped into four types, K1, K2, K28 and Klus, encoded by extrachromosomal elements associated with viral particles in the form of dsRNA. This work aims to characterize a killer toxin of S. cerevisiae ACB-K1 and to test its antagonistic activity in post-harvest citrus pathogens. The isolate ACB-K1 showed activity killer on sensitive yeast (S. cerevisae NCYC 1006) besides the phytopathogenic P. digitatum, but did not present inhibition against the pathogen G. citri-aurantii. The killer toxin showed maximum activity at pH 4.1 at 22 ° C for both a sensitive yeast and the phytopathogenic P. digitatum. The toxin presented stability at pH range from 4.1 to 6.0, after a 24h incubation at 22 ° C on the fungus. The ACB-K1 isolate showed dsRNA and two forms were detected (LA and M-dsRNA), suggesting that a genetic basis for a toxin production is extrachromosomal, confirmed by curing the killer phenotype at 40 ° C. The fractions obtained by exclusion chromatography Sephadex G75 gel, demonstrated biocontrol characteristics against the phytopathogen P. digitatum.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:14:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NicaciaBC.pdf: 325579 bytes, checksum: 3a55757ec6b6aa0195f9152f3b8605f1 (MD5) Previous issue date: 2005-09-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Dermatomycoses are fungal infections that attack the skin, hair and nails, in addition to the mucosal and cutaneous-mucosal zones. Objective: Observe the frequency of dermatomycoses, identify etiological agents and establish an association between the results and sex. Age, collection site, time and lesion location. Methods: Between February, 2002 and December, 2004, samples were collected from patients at Giselda Trigueiro Hospital in Natal, Brazil, by lesion scraping and hair removal, following 70% alcohol disinfection, and submitted to direct and culture examination. Results: Of the 817 lesions collected, 325 (39.8%) were fungus positive, with the hair collection site yielding the highest number of positive results (65.8%) and the scalp and hair representing the most frequent lesion sites (65.9%). Negative results occurred mainly in the lower limbs (78.6%). Of the species identified, 55.9% were yeasts, 41.6% dermatophytes and 2.5% Fusarium spp. Non-albicans Candida was the most isolated yeast (43.3%), mainly in females (61.7%) over the age of 40 years (56.4%). T. rubrum was the most isolated dermatophyte (67.9%),notably in males (59.2%) in the 0-20 age group (44.7%). With respect to collection site, 73.9% of the dermatophytes were present in the skin and 61.1% of the yeasts in the nails. When assessing the collection site, the inguinocrural regional was 22.6% positive for dermatophytes, and the nails and hands, 41.8% for yeasts. Conclusions: The results obtained verified that: most of the positive lesions were found in the hair, whereas skin and nail lesions yielded more negative results; T. rubrum was the most isolated dermatophyte and non-albicans candida the most commonly found yeast; positivity was greater in males in the 0-20 year age group at the skin site and in the inguinocrural region, while yeasts were more frequent in females in the over-40 age group at the nail sites / As dermatomicoses s?o infec??es f?ngicas humanas que atingem pele, p?los e unhas, al?m de mucosas e zonas cut?neo-mucosas. Objetivo: Observar a freq??ncia das dermatomicoses, identificar os agentes etiol?gicos e estabelecer uma associa??o dos resultados encontrados com sexo, idade, s?tio de coleta, tempo e local da les?o. M?todos: No per?odo de fevereiro de 2002 a dezembro de 2004, as amostras foram coletadas de pacientes atendidos no Hospital Giselda Trigueiro, por meio da raspagem das les?es e remo??o dos p?los, ap?s desinfec??o com ?lcool a 70%, e submetidas ao exame direto e cultura. Resultados: Das 817 les?es coletadas, 325 (39,8%) foram positivas para fungos, sendo o s?tio de coleta p?los o respons?vel pelo maior n?mero de resultados positivos (65,8%), e couro cabeludo e cabelos foi o local de les?o mais freq?ente (65,9%). Resultados negativos ocorreram principalmente nos membros inferiores (78,6%). Quanto ?s esp?cies identificadas, 55,9% eram leveduras, 41,6% dermat?fitos e 2,5% Fusarium spp. Candida n?o albicans foi a levedura mais isolada (43,3%), principalmente no sexo feminino (61,7%), com idade acima de 40 anos (56,4%). T. rubrum foi o dermat?fito mais isolado em 67,9% dos casos notadamente no sexo masculino (59,2%) e na faixa et?ria de 0-20 anos (44,7%). No tocante ao s?tio de coleta, 73,9% dos dermat?fitos estavam presentes na pele e 61,1% das leveduras nas unhas. Ao se avaliar o local da les?o, a regi?o inguno-crural apresentou positividade de 22,6% de dermat?fitos e as unhas das m?os, 41,8% de leveduras. Conclus?es: Diante dos resultados obtidos, constatou-se que: a maioria das les?es positivas foi encontrada nos p?los, enquanto les?es de pele e unhas geraram mais resultados negativos; T. rubrum foi o dermat?fito mais isolado e Candida n?o albicans a levedura mais presente; a positividade por dermat?fitos foi maior no sexo masculino, na faixa et?ria de 0-20 anos, no s?tio de coleta pele e na regi?o inguino-crural, enquanto que as leveduras foram mais freq?entes no sexo feminino, na faixa et?ria acima de 40 anos, no s?tio de coleta unhas e nas unhas das m?os

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Elizabete Brasil dos Santos / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Cristiane Yumi Koga-Ito / Resumo: Superinfecção resulta no desenvolvimento de patógenos residentes prejudiciais ou oportunistas em conseqüência de alteração da microbiota benéfica e pode representar uma complicação na terapia antimicrobiana. O presente estudo avaliou a presença de leveduras, estafilococos, enterobactérias e Pseudomonas na cavidade bucal e sulco gengival de indivíduos submetidos à terapia antibiótica para tratamento de tuberculose pulmonar e indivíduos controle. Foram incluídos cinqüenta indivíduos diagnosticados com tuberculose pulmonar e que estivessem sob antibioticoterapia por um período mínimo de 45 dias e máximo de seis meses. Para controle foram incluídos indivíduos sistemicamente saudáveis. A coleta de material da cavidade bucal foi realizada pela técnica de enxágüe bucal e do sulco gengival utilizando-se cones de papel absorvente esterilizados. As amostras coletadas foram semeadas em duplicata em placas de Petri contendo ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol, ágar Manitol e ágar MacConkey. As amostras de Candida spp. e de estafilococos coagulase-positivas foram identificadas por provas bioquímicas específicas e as amostras de estafilococos coagulase-negativas, enterobactérias e Pseudomonas foram identificadas utilizando-se o sistema API. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico de Mann-Whitney (p<0,05). Candida spp. foram detectadas em número significativamente maior na cavidade bucal de indivíduos com tuberculose pulmonar em relação aos controles, sendo C. albicans mais prevalente em ambos os grupos. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos para Staphylococcus spp., enterocatérias e Pseudomonas. Concluiu-se que os indivíduos sob antibioticoterapia para tratamento de tuberculose pulmonar apresentaram maior prevalência de Candida spp. na cavidade bucal em relação aos controles. / Abstract: Superinfection results an overgrowth of potentially harmful resident or other opportunistic pathogens and can further represent a complication of an antimicrobial therapy that alters a beneficial microbiota. The present study evaluated the presence of yeasts, staphylococci, enteric rods and pseudomonads in the oral cavity and gingival sulcus of individuals with pulmonary tuberculosis undergoing antibiotic treatment and controls individuals. There were included 50 individuals diagnosed with pulmonary tuberculosis that were submitted to antibiotic therapy during a minimal period of 45 days and maximum 6 months. Systemically health individuals were included in the control group. Samples from oral cavity were collected through oral rinses and subgingival samples were taken using sterile paper points. Samples were cultured in duplicate onto Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol, manitol agar and MacConkey agar. The isolates of Candida spp. and coagulase-positive staphylococci were identified by phenothypic characterization and the isolates of coagulase-negative staphylococci, enteric rods and pseudomonads were identified by API system. Data were analyzed statistically by Mann-Whitney test (p<0.05). Candida spp. were detected in the oral cavity of pulmonary tuberculosis individuals in a significant higher number when compared to controls, and C. albicans was the most prevalent specie found in both groups. No significant statistical differences were observed between the groups related to Staphylococcus spp., enteric rods and pseudomonads. It was concluded that individuals with pulmonary tuberculosis showed significant increase in the quantity of Candida spp. concerning controls. / Doutor

Resumo: As formigas da tribo Attini são conhecidas pela complexa simbiose que mantêm com fungos, os quais cultivam como alimento. É sabido que além desse fungo, outros microrganismos podem ser encontrados nos ninhos desses insetos e estudos prévios apontaram que alguns microfungos (i.e. leveduras e fungos filamentosos) podem ser importantes nessa simbiose. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel desses microfungos associados aos jardins dessas formigas. Analisando várias espécies do gênero Acromyrmex do sul do Brasil, demonstrou-se que as formigas importam uma comunidade diversa de microfungos para seus ninhos, provavelmente provenientes do solo e do substrato vegetal que as formigas utilizam para cultivar seu fungo. Num segundo estudo, avaliando formigas Attini da América do Norte (Atta texana, Trachymyrmex septentrionalis e Cyphomyrmex wheeleri) observou-se que a estrutura das comunidades de microfungos nos jardins desses insetos não se correlaciona com a variação sazonal, sugerindo que não existam relações espécie-específicas entre as formigas e os microfungos. Apesar de tais microrganismos não serem especialistas dos jardins desses insetos, é sugerido que os microfungos atuem como antagonistas do fungo simbionte. Ainda, descobriu-se que o parasita especializado Escovopsis spp. parece ser menos freqüente nas populações de formigas da América do Sul em relação as Attini da América Central, porém estudos adicionais são necessários para estabelecer a epidemiologia desse parasita nos ninhos das Attini. Num terceiro estudo, demonstrou-se que leveduras presentes nos jardins de fungos da formiga cortadeira A. texana inibem o crescimento de Escovopsis spp., sugerindo que esses insetos utilizam outros microrganismos, além das bactérias presentes em suas cutículas (Pseudonocardia spp.), para inibir esse parasita. Esse achado traz importantes implicações para essa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ants in the tribe Attini are well-known social insects that maintain a symbiotic relationship with fungi which they cultivate as food. Besides of the cultivated fungi, fungus gardens contain several other microorganisms considered to be potential players in this symbiosis. The aim of the present study was to evaluate the possible roles of microfungi (i.e. yeasts and filamentous fungi) in attine gardens. Our microbial profiling of gardens from several species in the genus Acromyrmex from South Brazil revealed that ants can harbor a diverse community of microfungi that probably originated from the surrounding soil or from the substrate used to manure the cultivated fungus. In this sense, additional studies of North American attine species (Atta texana, Trachymyrmex septentrionalis and Cyphomyrmex wheeleri) demonstrated that the structure of microfungal communities in gardens of these ants did not correlate with seasonal changes over a one year period, again suggesting there are no species-specific relationships among ants and microfungi species. Although, the microfungi are not specialized parasites of the attine ant-fungus symbiosis we suggest they can be considered antagonists to the cultivated fungus. Moreover, we demonstrated that the specialized parasite Escovopsis spp. is probably less frequent in South America than in Central America and we reinforce that additional studies are necessary to unravel the epidemiology of this parasite in attine gardens. In another study, we showed that yeasts isolated from gardens of the leafcutter ant A. texana can significantly inhibit the growth of Escovopsis sp. This interesting finding suggests that attine ants may use additional microbes to protect their gardens against Escovopsis spp. and not only actinomycete bacteria (Pseudonocardia spp.) found in their cuticles. Finally, we studied microfungi relationships with female alates (gynes) in two... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Coorientador: Mauricio Bacci Junior / Banca: Carlos Augusto Rosa / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Luiz Carlos Forti / Banca: Maria José Aparecida Hebling / Doutor

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Marcelo Fabiano Gomes Boriollo / Resumo: A irradiação com microondas tem sido recomendada para a desinfecção de próteses odontológicas de resinas acrílicas devido ao seu poder inibitório sobre os microrganismos. Entretanto, as alterações celulares provocadas pela irradiação e que levam à inativação dos microrganismos presentes nas próteses não estão esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos das microondas sobre células de Candida albicans, por meio de parâmetros de contagem celular e de liberação de substâncias intracelulares. Foram obtidas culturas de C. albicans de 24 horas em Tryptic Soy Broth (TSB) a partir de cepas padrão (ATCC 10231). As células foram centrifugadas, lavadas e ressuspensas em 400 mL de água destilada gelada na concentração de 108 cél/mL. Essa suspensão foi dividida em experimental e controle. A suspensão experimental (200 mL) foi colocada em um béquer de 500 mL contendo uma prótese total acrílica estéril e irradiada por microondas durante 6 min a 650 W. A suspensão controle não foi submetida à irradiação. Para ambas as suspensões, foram realizadas diluições seriadas para contagem celular em câmara de Neubauer, utilizando a entrada do corante azul de Metileno, como indicativo de alteração de permeabilidade de membrana. Alíquotas diluídas também foram semeadas em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Alíquotas não diluídas foram analisadas quanto à densidade óptica (DO) a 550 nm. Para a quantificação de substâncias liberadas, as células foram eliminadas das suspensões por centrifugação e filtragem e a solução resultante foi liofilizada. O conteúdo liofilizado foi ressuspenso em 5 mL de água destilada e analisado pelos seguintes métodos: Microprote e Sensiprote, para quantificação de proteínas; potenciometria, para quantificação de Na+ e K+; Liquiform, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microwaves have been used in the disinfection of acrylic resin dentures as a result of its inhibitory effect on microorganisms. However, much controversy exists concerning the lethal effects of microwave radiation on microorganisms. Evaluating the presence of significant differences on cell counts and substances released between irradiated and non-irradiated Candida albicans cell suspensions was the aim of this study. A stock C. albicans strain (ATCC 10231) was cultured in 600 mL of Tryptic Soy Broth (TSB) at 37ºC on a rotating shaker. The cells were centrifuged, water-washed and resuspended in distilled cold water to a final concentration of 108 cell/mL. The cell suspensions were equally divided in a 200 mL experimental suspension, which was placed in a 500 mL beaker with an acrylic resin denture inside and irradiated for 6 min at 650 W. The control suspension (200 mL) was not submitted to irradiation. Aliquots of both suspensions were serially diluted and counting in a Neubauer chamber using the uptake of Methylene blue dye as indicative of alterations in membrane cell permeability. Serially diluted aliquots were spread on Agar Sabouraud dextrose (ASD) plates for viability assay. Non-diluted aliquots were spectrophotometrically measured at 550 nm. To quantify the intracellular released substances, the cells were separated from the suspensions by centrifugation followed by filtering, and the resulting solution was freeze-dried. This liophylized was resuspended in 5 mL of cold water and submitted to optical density (OD) analyses of protein contents by the Microprote and Sensiprote systems; potenciometry analysis of Na+ and K+ contents; Ca++ contents analysis by Liquiform; and nucleic acids contents analysis by OD measurements at 260 nm...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

A transformação do mosto de uva em vinho envolve uma série de ações combinadas de diferentes gêneros e espécies de microrganismos. A espécie Saccharomyces cerevisiae domina a fase intermediária e a fase final da fermentação alcoólica. De modo geral, as leveduras enológicas podem ser caracterizadas pela capacidade fermentativa, produção de H2S (sulfeto de hidrogênio) e seu comportamento killer. A Embrapa uva e vinho possui em sua Coleção, diversas leveduras autóctones isoladas de bagas de uvas oriundas de diversas regiões do Brasil. Entretanto, a diversidade genética destes isolados não é conhecida. Neste estudo foram avaliados a capacidade fermentativa, formação de H2S, fator killer e sensibilidade ao fator killer de 150 leveduras provenientes das cultivares Malvasia Bianca (FMB14), Moscato Alexandria (FMA14) e Moscato Tradicional (MBTF14) todas oriundas da região de Farroupilha- RS. A capacidade fermentativa foi avaliada juntamente com a formação de H2S, inoculando as leveduras em meio mosto sulfito. Os testes ao fator killer e sensibilidade ao fator killer foram avaliados através do meio Lorena/ELNC (80:20). As linhagens com perfil para elaboração de vinhos e produtoras da toxina killer foram identificadas por amplificação da região ITS1- 5.S- ITS2 por PCR e por PCR-RFLP. Foi avaliada também a diversidade genética de 23 linhagens da espécie de Saccharomyces cerevisiae da Coleção da Embrapa Uva e Vinho, usando a técnica de PCR-RAPD. Foram empregados para detectar a variabilidade genética das leveduras os oligonucleotídeos iniciadores: (GTG)5, (GAC)5, (GACA)4 e M13. Os resultados mostraram que a maioria das linhagens apresentaram baixa velocidade fermentativa aliada à diferentes níveis de produção de H2S. Somente 3 linhagens apresentaram capacidade fermentativa adequada quando comparadas com as linhagens de referencia 1vvt/97 e K1, quais sejam, 29MBF14, 39MBTF14 e 50MBF14. Apenas a linhagem 29MBTF4 formou pequenas quantidades de H2S. Verificou-se que 64% das linhagens isoladas mostraram-se metabolicamente capazes de biossintetizar H2S. Somente 9,33% apresentaram comportamento killer e apenas 6,66% mostraram sensibilidade à proteína killer. Os resultados apresentados sugerem ter relação com as cultivares utilizadas no isolamento. Verificou-se a existência de diferenças genéticas entre as linhagens de Saccharomyces cerevisiae estudadas com todos os iniciadores utilizados. Os iniciadores que mais discriminaram linhagens de Saccharomyces cerevisiae foram (GTG)5 e (GAC)5. / Grape must conversion into wine involve combined actions of different genus and species of microorganism. The species Saccharomyces cerevisiae dominates intermediate and final stages of alcoholic fermentation. Generally, the oenological yeasts are characterized by their fermentative capacity, production of H2S (hydrogen sulfide) and killer behavior. Embrapa Grape and Wine has a Yeast Collection that encompasses many autochthonous strains isolated of grape berries from different regions of Brazil. However, the genetic diversity of these yeasts are stilling known. This study has evaluated the fermentative capacity, production of H2S, killer factor and killer factor sensibility of 150 yeasts isolated from the cultivars Malvasia Bianca (FMB14), Moscato Alexandria (FMA14) and Moscato Tradicional (MBTF14) all belonging from Farroupilha commune in Rio Grande do Sul State. The fermentative capacity has been tested along with the evaluation of H2S production by the inoculation of the yeasts in sulfite must medium. The production and detection of factor killer and the evaluation of sensitive characteristics have been measured in Lorena/ELNC (80:20) solid medium. Yeasts with optimal fermentative characteristics and the ones producing killer toxin have been identified by amplification of ITS1-5.8S-ITS2 region by PCR -RFPL. This study also has evaluated the genetic diversity of 23 yeasts strains of Saccharomyces cerevisiae, belonging to the Yeast Collection of Embrapa Grape and Wine, employing PCRRAPD technique. The primers (GTG)5, (GAC)5, (GACA)4 and M13 have been used to detect the yeasts genetic diversity. The results showed that the majority of the yeasts analyzed have demonstrated low fermentative velocity combined with different levels of H2S production. From the three cultivars analyzed, only Moscato Tradicional showed yeasts with a suitable fermentative capacity when compared to the reference yeasts EMBRAPA 1vvt97 e K1, and they were named as 29MBF14, 39MBTF14 and 50MBF14. It was verified that 84%, 76% and 36% of the isolated strains from Malvasia Bianca, Moscato Tradicional and Moscato Alexandria, respectively, were capable to biosynthesize H2S. Concerning to killer behavior, 14%, 12% and 2% of the isolated strains from Moscato Tradicional, Moscato Alexandria and Malvasia Bianca, respectively, were capable of producing killer factor. These outcomes suggest the influence of the cultivar into the microflora biodiversity. Genetic differences were also demonstrated between the strains of Saccharomyces cerevisiae for all the primers tested. Primers GTG5 and GAC5 were the most discriminative.

Ésteres produzidos por via biotecnológica são considerados e classificados como naturais e sua demanda tem aumentado. Várias leveduras podem produzir ésteres e seu método de seleção é altamente importante para inúmeros tipos de indústrias. Trinta e quatro cepas de leveduras, isoladas de vinhos tintos em barris de carvalho elaborados na Serra Gaúcha e de queijos artesanais do Sul do Brasil, foram utilizadas neste trabalho. Cada cepa foi inoculada na superfície de meio sólido inclinado rico em glicose e nitrogênio, diretamente no frasco utilizado para a microextração em fase sólida (SPME) seguida pela injeção num cromatógrafo gasoso com detecção por espectrometria de massas (GC/MS) e quantificação utilizando detector de ionização de chama (GC-FID). O método foi desenvolvido e validado, sendo que a fibra DVB/PDMS/CAR, temperatura de extração de 80˚C e 20 minutos de aquecimento da amostra antes da extração foram as condições ótimas estabelecidas. A metodologia de superfície e resposta foi usada para a otimização da produção de acetato de etila pela levedura Zygosaccharomyces bailii BCV 08, e um planejamento fatorial 22 foi aplicado para determinar as melhores condições de temperatura de cultivo (X1, 20 até 36 ˚C) e agitação (X2, 0 a 200 rev/min). Os melhores resultados foram obtidos com a temperatura de 28 ˚C e 0 rev/min, onde houve um aumento de 60% na produção de acetato de etila. Foram avaliados os efeitos das fontes de carbono (glicose e frutose) e do mosto de uva sobre a produção de acetato de etila. A máxima concentração de acetato de etila produzida foi de 71,11 mg/L, utilizando o mosto de uva como meio. Experimentos utilizando biorreatores de 4L levaram à produção máxima de 133,74 mg/L de acetato de etila, 14,57 mg/L de hexanoato de etila, 4.093,74 mg/L de octanoato de etila e 3.775,28 mg/L de decanoato de etila. / Esters produced by biotechnological means are legally labeled as natural and there is an increasing demand for these products. Several yeasts can accumulate esters, and their selection is highly interesting for many industries. Thirty-four yeast strains isolated from red wine oak barrels of Serra Gaúcha winemaking region and from homemade cheeses of Southern Brazil were used in this research. The yeasts were inoculated in agar slants of a solid medium rich in glucose and nitrogen, directly inside the extraction transparent glass vials, using a headspace solid phase microextraction (SPME) method followed by injection of gas chromatography with mass spectrometric detection (GC/MS), and quantification by flame ionization detector (GC/FID). The analytical method was developed and validated, and the DVB/PDMS/CAR fiber, extraction temperature of 80˚C, and 20 minutes of sample heating time volatilization prior to the extraction step were the best conditions. A response surface methodology was used to optimize the production of ethyl acetate by Zygosaccharomyces bailii BCV 08, which was selected, and a 22 full factorial central composite design was applied to determine the best conditions for the cultivation temperature (X1, 20 to 36 ˚C) and stirring speed (X2, 0 to 200 rev/min). The best results were found with temperature of 28 ˚C and medium agitation of 0 rev/min, with a 60% increase in ethyl acetate production. We evaluated the effect of the carbon sources (glucose and fructose) and grape must on ethyl acetate formation; the maximal yield was reached with grape must and the highest concentration of ethyl acetate produced was 71.11 mg/L. Employing experiments on bioreactors of 4L, it was possible to improve the esters production by this yeast; a maximal production of 133.74 mg/L of ethyl acetate, 14.57 mg/L of ethyl hexanoate, 4093.74 mg/L of ethyl octanoate, and 3775.28 mg/L of ethyl decanoate was reached.

L'acidose ruminale est l'une des préoccupations majeures des exploitations laitières actuelles. Les levures vivantes (LV) ont été largement étudiées et utilisées chez les vaches laitières pour stabiliser la fermentation ruminale. Récemment, la mesure du potentiel redox ruminal (Eh, en mV) a été considérée comme un outil intéressant pour indiquer le trouble de la fermentation ruminale. L'effet positif de LV sur Eh ruminal a été rapporté, mais il reste variable selon les conditions expérimentales. Les objectifs de ce travail étaient de fournir une meilleure compréhension du mode d'action de LV et de définir la condition optimale de l'utilisation de LV chez les vaches laitières. La première partie de ce travail a consisté en une analyse quantitative des résultats de 22 expériences avec des vaches laitières canulées. La deuxième partie de ce travail a consisté à vérifier certains des résultats de l'analyse quantitative par une expérience chez des vaches en lactation. En utilisant l'analyse quantitative de données existantes provenant d'expériences antérieures, nous avons clarifié la relation entre le Eh ruminal et d'autres paramètres ruminaux principaux tels que le pH et le profil VFA, et suggéré que les variations de Eh pourraient être liées au transfert d'électrons dans les réactions dans le rumen. En outre, la réponse du Eh après la supplémentation en LV était également liée à celle du profil AGV ruminal, suggérant que l'effet de LV sur le profil VFA était atteint par l'augmentation du pouvoir réducteur, reflétant un meilleur transfert d'électrons dans le rumen. L'analyse a en outre démontré que la régulation du Eh ruminal par LV serait particulièrement efficace lorsque le risque de troubles digestifs est élevé. Puisque l'influence des caractéristiques de la ration sur le Eh ruminal a été quantifiée, l'effet de LV dans un régime donné pourrait être estimé indirectement. En outre, l'analyse quantitative a également révélé que la réponse de Eh suite à la supplémentation en LV était associée à la quantité de sucres solubles ingérée. L'expérience in vivo chez des vaches en début de lactation a confirmé un effet plus important de LV sur Eh ruminal avec une ration riche en sucres solubles, et a démontré que la supplémentation en LV avait un impact sur la richesse des bactéries, et que les métabolites ont également été influencés par la supplémentation en LV, probablement associée à la diminution du Eh ruminal. / Ruminal acidosis is one of the major concerns of current dairy farms. Live yeasts (LY) have been extensively studied and used in dairy cows for stabilization of rumen fermentation. Recently, measurement of ruminal redox potential (Eh, in mV) has been considered as an interesting tool to indicate ruminal fermentation disorder. The positive effect of LY on ruminal Eh has been reported, but it remains variable according to the experimental conditions. The aims of this work was to provide better understanding of mode of actions of LY, and to define the optimal condition of LY utilization in dairy cows. The first part of this work consisted to quantitative analysis of existing results from 22 experiments with cannulated dairy cattle. The second part of this work consisted to verify some of the results from quantitative analysis by an in vivo experiment in lactating cows. By using quantitative analysis of existing data from previously conducted experiments, we clarified the relationship between ruminal redox and other main ruminal parameters such as pH and VFA profile, and suggested that Eh variations might be related to the transfer of electrons in the reactions producing VFAs in the rumen. Moreover, response of ruminal Eh following live yeast supplementation was also related to that of ruminal VFA profile, which suggested that the effect of LY on VFA profile was achieved via the increase of reducing power, possibly reflected improved electron transfer and use in the rumen. The analysis further demonstrated that the regulation of ruminal Eh by LY would be particularly effective when risk of digestive disorder is high. Since the influence of dietary characteristics on ruminal Eh was quantified, the effect of LY in a given diet could be indirectly estimated. In addition, quantitative analysis also associated the response of ruminal Eh following LY supplementation to the intake of soluble sugars. The in vivo experiment in early-lactating cows confirmed greater effect of LY on ruminal Eh in diet rich in soluble sugars, and further demonstrated that i) LY supplementation tended to impact the richness of ruminal bacteria, and ii) some unidentified metabolites were also influenced by LY supplementation, probably associated to the decrease of ruminal Eh.

A facilitaÃÃo como atenuante do estresse ambiental, resultante de atividades antrÃpicas, entre populaÃÃes microbianas imobilizadas, Ã o principal objetivo do presente estudo, que foi dividido em cinco capÃtulos. O primeiro consta do estado da arte sobre imobilizaÃÃo microbiana, importÃncia das interaÃÃes facilitadoras entre espÃcies sob estresse ambiental e a imobilizaÃÃo celular como ferramenta para aumentar a eficiÃncia de tratamento de poluentes tÃxicos em Ãguas residuÃrias de origem industrial. No segundo capÃtulo, foi definido o tipo de espuma de poliuretano e meio de cultura a ser usado para imobilizaÃÃo natural. No terceiro, testes qualitativos e quantitativos foram realizados para seleÃÃo de linhagens microbianas ambientais com potencial para adesÃo celular. O quarto capÃtulo constou da avaliaÃÃo do efeito de estresse ambiental sobre populaÃÃes microbianas imobilizadas em monocultivo. No quinto e Ãltimo capÃtulo, as linhagens microbianas selecionadas foram imobilizadas consorciadas e foi testado o efeito de estresse fisiolÃgico, sobre o valor adaptativo de populaÃÃes microbianas, indicativo do tipo de interaÃÃo predominante entre espÃcies. O potencial das linhagens para processos de biotransformaÃÃo de poluentes quÃmicos tÃxicos tambÃm foi investigado. Os resultados mostraram a espuma de poliuretano de 23 kg/m3 e caldo Luria-Bertani 1/10 como adequados para retenÃÃo de aproximadamente 107 UFC/cm2 cÃlulas da bactÃria Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619. Entre as linhagens microbianas de origem ambiental a bactÃria Serratia marcescens e a levedura C. rugosa mostraram melhor potencial de adesÃo. As cÃlulas dessas culturas, imobilizadas sobre espuma de poliuretano, foram mais resistentes ao fenol que as respectivas cÃlulas em suspensÃo. Quando consorciadas, as duas linhagens apresentaram melhor valor adaptativo na presenÃa do fenol, em relaÃÃo Ãs mesmas cÃlulas imobilizadas em cultivo individual, comprovando a prevalÃncia das interaÃÃoes facilitadoras entre as populaÃÃes avaliadas / The attenuating influence of facilitate or positive interactions between immobilized and associated microbial populations under environmental stresse conditions is the main objective of this study. In this perspective, five chapters were developed. The first shows the state of the art of microbial immobilization, importance of facilitating interactions between species under environmental stress and cell immobilization as a tool to increase the efficiency of treatment of toxic pollutants in industrial wastewaters. In the second chapter was defined the type of polyurethane foam and the culture medium to be used for natural immobilization. In the third, qualitative and quantitative tests were conducted for selection of environmental microbial strains with potential for cell adhesion. The fourth chapter consisted of the evaluation of the effect of environmental stress on microbial populations immobilized in monoculture. In the fifth and last chapter, the selected microbial strains were immobilized in consortium and tested the effect of a physiological stress on the adaptive value of microbial populations, indicative of the predominant type of interaction between the species. The potential of strains for biotransformation processes of toxic chemical pollutants was also investigated. The results showed polyurethane foam of 23 kg/m3 immersed in Luria-Bertani broth diluted ten fold, as appropriate for cell retention of about 107 cells of Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619. Among environmental microbial strains the Serratia marcescens bacterium and the yeast C. rugosa showed better adhesion potential. Individual microbial cells immobilized on polyurethane foam were more resistant to phenol than the respective cell suspensions. When associated, the two strains showed better adaptive value in the presence of phenol, compared to the same cells immobilized in individual cultivation, proving the prevalence of facilitative interactions between microbial populations.