Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-10-20T03:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335061.pdf: 1755815 bytes, checksum: c6c1c3e4fe4bad0fe180e46b0f06e46a (MD5) Previous issue date: 2014 / O uso indiscriminado de antimicrobianos na terapêutica tem desencadeado diversos tipos de mecanismos de resistência, o que tem impulsionado cada vez mais pesquisas focando na obtenção de novos fármacos, desenvolvimento ou melhoramento das formulações disponíveis no mercado. A nistatina é um antifúngico poliênico amplamente utilizado no tratamento de candidíases. Seu mecanismo de ação deve-se à ligação ao ergosterol, esteróide presente na membrana celular de fungos patogênicos como a Candida sp, promovendo a desestruturação e liberação do seu conteúdo celular. Além disso, a nistatina pertence à classe IV do Sistema de Classificação Biofarmacêutica, de modo que sua atividade biológica é impactada por sua baixa solubilidade e baixa permeabilidade. Neste contexto, sistemas microparticulados de cloridrato de quitosana destinados à via tópica foram desenvolvidos através de spray drying e emulsificação/evaporação de solvente seguida de liofilização objetivando um aumento da retenção cutânea e melhorias na atividade microbiológica da nistatina. Os sistemas foram obtidos em diferentes proporções de fármaco:polímero (1:1; 1:2 e 1:3, m/m), sendo caracterizados quanto às suas propriedades cristalinas, térmicas e morfológicas e avaliados no tocante ao teor e eficiência de encapsulação, atividade microbiológica e capacidade de retenção cutânea. Os resultados demonstram adequados valores de eficiência de encapsulação para todas as formulações e parâmetros físico-químicos dependentes da técnica de preparo aplicada. Em relação aos testes microbiológicos frente a cepas de Candida albicans, a formulação obtida por spray drying na proporção 1:2 (fármaco:polímero, m/m) apresentou o dobro da atividade antifúngica do fármaco puro, resultando em valores de concentração inibitória mínima e concentração fungicida mínima de 0,4 µg/mL e 1,6 µg/mL, respectivamente. Esta formulação, quando avaliada por modelo ex vivo em amostras de pele de orelha suína, apresentou alta retenção de nistatina na derme e epiderme. Os resultados são considerados estatisticamente diferentes em comparação ao fármaco puro e demonstram o potencial deste sistema no tratamento tópico da candidíase.<br> / Abstract : The indiscriminate use of antimicrobials has triggered various types of resistance mechanisms, which have continuously stimulated researches focused on the obtainment of new drugs, development or improvement of dosage forms available for marketing. Nystatin is a polyene antifungal widely employed on the treatment of candidiasis. Its mechanism of action occurs via its binding to ergosterol, a steroid present in the cell membrane of pathogenic fungi such as Candida sp, which promotes the disintegration and release of cellular contents. In addition, nystatin belongs to Class IV of the Biopharmaceutical Classification System, and so its biological activity is affected by its low solubility and low permeability. In this context, microparticulate systems of chitosan hydrochloride intended for the topical route were developed through spray drying and through emulsification/solvent evaporation followed by freeze drying, aiming an enhancement of the skin retention and microbiological activity of nystatin. The samples were obtained in different drug:polymer ratios (1:1, 1:2 and 1:3, w/w), being characterized by means of their crystalline, thermal and morphological properties and evaluated regarding their content, entrapment efficiency, microbiological activity and skin retention. Results demonstrate that all microparticles presented adequate entrapment efficiencies and that their physicochemical properties were dependent on the obtainment technique. Microbiological tests against strains of Candida albicans revealed that the spray dried sample composed of a 1:2 drug:polymer (w/w) ratio presented an increase up to a 2 factor in the antifugal activity with minimum inhibitory concentration and minimum fungicide concentration of 0.4 µg/mL and 1.6 µg/mL, respectively. This formulation, when submitted to ex vivo studies in porcine ear skin presented high retention of nystatin on both dermis and epidermis. These results are considered statistically different in comparison to the pure drug and demonstrate the potential of this microparticle for the topical treatment of candidiasis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-17T03:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347963.pdf: 5315133 bytes, checksum: 479bf40f096e7da108ddccad20292210 (MD5) Previous issue date: 2017 / O diagnóstico das neoplasias de células linfoides B maduras (NCLBM) é baseado nos exames histopatológicos, imunofenotípicos, citogenéticos e moleculares. Atualmente, a imunofenotipagem por citometria de fluxo é considerada uma ferramenta fundamental para o diagnóstico dessas neoplasias e existe uma tendência de tentar alcançar a subclassificação correta das NCLBM com apenas a avaliação do imunofenótipo. No entanto, devido à sobreposição fenotípica, esse propósito não pode ser atingido em todos os casos. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar a importância dos novos marcadores imunofenotípicos CD150 e CD307a para o diagnóstico diferencial das NCLBM. Por conseguinte, foi avaliada a expressão de ambos antígenos por meio da citometria de fluxo em 120 amostras de pacientes portadores de NCLBM. As amostras foram marcadas com o painel anticorpos monoclonais pela técnica de marcação direta e a expressão de CD150 e CD307a foi avaliada por meio da intensidade de fluorescência média (IFM) nas células B neoplásicas e qualitativamente por meio da comparação com o controle negativo interno. Os resultados mostram que existe uma expressão diferencial do antígeno CD150 entre os casos de linfoma de Burkitt (LB) e as neoplasias de células B precursoras, portanto, a expressão de CD150 parece ser útil na identificação dos casos de LB com características fenotípicas de precursor B. A forte expressão de CD150 nos dois casos de linfoma folicular (LF) grau 3A avaliados sugerem que esse marcador é importante para o diagnóstico diferencial desse subtipo de NCLBM e o LF de baixo grau. A perda da expressão de CD150 observada nos plasmócitos clonais dos linfomas com diferenciação plasmocitária (LDP), representa um achado inédito e a única alteração fenotípica observada em todos casos de LDP estudados. Foi observado que todos os casos de linfoma de células do manto (LCM) apresentaram diminuição da expressão de CD307a em relação aos linfócitos B normais. Em contrapartida, a expressão desse marcador no grupo das leucemias linfoides crônicas (LLC) foi heterogênea com casos totalmente negativos até casos com expressão forte e maior à observada nos linfócitos B normais. Assim, pode ser inferido que a expressão moderada e forte desse marcador poderia excluir o diagnóstico de LCM. Foi corroborado que tanto o marcador CD150 quanto o CD307a apresentam menor expressão nos casos de LLC com marcadores prognósticos desfavoráveis. Em vista dos resultados obtidos, a inclusão desses marcadores no painel imunofenotípico de rotina pode contribuir com o aprimoramento da imunofenotipagem por citometria de fluxo para o diagnóstico diferencial das NCLBM.<br> / Abstract : Diagnosis of mature B cell neoplasms (MBCN) is based on results yielded by histopathological, immunophenotypic, cytogenetic and molecular analysis. Consequently, flow cytometric immunophenotyping is deemed fundamental as a tool for B cell neoplasms diagnosis. Given the advantages this methodology provides, there exists a tendency to attempt to fully subclassify MBCN solely on the basis of flow cytometric immunophenotyping results. However, due to the existence of overlapping phenotypes this aim is not achieved in every single case. Because of that, the goal of the present study was to investigate on the importance of novel immunophenotypic markers CD150 and CD307a in the differential diagnosis of the MBCN. To accomplish that, the expression of both antigens was analyzed in 120 samples taken from patients diagnosed with MBCN. Samples were assessed with a panel of monoclonal antibodies using a direct staining protocol and the CD150 and CD307a expression was quantitated by calculating the mean fluorescence intensity (MFI) for neoplastic B cell in each case, and was also ascertained in qualitative terms in comparison with internal negative control. A differential expression of CD150 has been proven to exist between Burkitt lymphoma (BL) and precursor B cell neoplasms cases; therefore, the expression of CD150 might identify BL patients with phenotypic features of B cell precursors. Both follicular lymphoma (FL) grade 3A cases studied showed high homogenic levels of that marker, which becomes relevant in differential diagnosis of that entity with low grade FL. Neoplastic plasma cells of B cell lymphomas with plasmacytic differentiation (LPD) showed a loss of expression of CD150 when compared to normal polyclonal plasma cells. Such decrease was the only phenotypic aberration observed in every LPD sample evaluated. It was also ascertained that every mantle cell lymphoma (MCL) case showed lower levels of CD307a in comparison to normal B cell population. Differently, a spectrum of CD307a expression, from negative to bright, was seen in chronic lymphocytic leukemia (CLL). Thus, moderate and bright CD307a expression virtually excludes MCL diagnosis. A lower expression of both markers in CLL patients with unfavorable prognosis was confirmed in this study. In conclusion, these results suggest that the inclusion of both markers in an immunophenotypic panel could improve the differential diagnosis of MBCN by flow cytometry.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-12-05T03:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349064.pdf: 1109231 bytes, checksum: 83616007deed552bace5999d8777b6df (MD5) Previous issue date: 2017 / O fígado é um órgão central do metabolismo humano, sendo responsável por mais de uma centena de funções que garantem a homeostase do indivíduo. O principal tipo celular que exerce essas funções é o hepatócito. A cirrose é uma condição extrema que acontece quando os hepatócitos começam a morrer e são substituídos por uma matriz de colágeno, que não exerce função nenhuma. Esta morte pode ser causada por diversos fatores, como infecções virais, abuso crônico de álcool, desordens autoimunes entre outros. Nesta condição, o fígado perde a capacidade de realizar suas funções adequadamente, causando graves danos sistêmicos ao indivíduo, levando inclusive a óbito. Neste trabalho foram analisadas amostras de sangue periférico de 62 indivíduos em crise cirrótica, e comparou-se esses resultados com 35 indivíduos saudáveis, a fim de obter resposta se há ou não diferença entre os grupos no que diz respeito a marcadores de dano ao DNA e de estresse oxidativo. Foram encontradas diferenças significativas entre os grupos nos parâmetros Dano Cometa (p < 0,001), Número de Micronúcleos (p = 0,002), Número de Pontes Nucleoplasmáticas (p < 0,001), Número de Brotos Nucleares (p = 0,003) e concentração de Substâncias que Reagem com o Ácido Tiobarbitúrico (TBARS, p = 0,012). Os resultados indicam que os pacientes apresentaram uma instabilidade genômica sistêmica, associada a um desequilíbrio oxidativo e reforça a ideia de que as técnicas utilizadas podem ser bons marcadores a serem utilizados como prognóstico para a condição dos indivíduos cirróticos. / Abstract : The liver is a central organ of metabolism, accounting for more than a hundred functions that guarantee the individual?s homeostasis. The main cellular type that performs these functions is the hepatocyte. Cirrhosis is an extreme condition that occurs when the hepatocytes begin to die and are replaced by a matrix of collagen, which has no function at all. This death can be caused by several factors, such as viral infections, chronic alcohol abuse, autoimmune disorders, among others. In this condition, the liver loses the ability to perform its functions properly, causing serious systemic damage to the individual, leading to death. In the present study, peripheral blood samples from 62 individuals in a cirrhotic crisis were analyzed, and these results were compared with 35 healthy individuals in order to obtain a response whether or not there was a difference between the groups to markers of DNA damage and oxidative stress. Significant differences were found between groups in the Comet Assay (p < 0,001), Number of Micronuclei (p = 0,002), Number of Nucleoplasmic Bridges (p < 0,001), Number of Nuclear Buds (p = 0,003) and values of Thiobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS, p = 0,012). The results show that the patients presented systemic genomic instability, associated with an oxidative imbalance, and reinforces the idea that the techniques used may be good markers of prevention of worsening of the disease in patients with cirrhosis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-12-05T03:15:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349062.pdf: 2186530 bytes, checksum: e75b0e1a3978f841dbb9e4a7004b2658 (MD5) Previous issue date: 2017 / A Anfotericina B (AB) é o principal fármaco de escolha para o tratamento de infecções fúngicas. A alta incidência e gravidade destas infecções estão relacionadas principalmente a pacientes hospitalizados, que apresentam algum estado de imunossupressão, seja pelo uso de agentes quimioterápicos ou pacientes imunocomprometidos com HIV/AIDS. A formulação de AB em desoxicolato de sódio (AB-DOC), comercialmente disponível como Fungizone®, é a terapia comumente utilizada e considerada padrão-ouro, entretanto, sua administração em pacientes já debilitados provoca efeitos adversos graves, destacando-se a nefrotoxicidade. O aquecimento de AB foi avaliado quanto à formação de agregados e quanto à toxicidade em células de epitélio renal humano in vitro e eficácia em isolados clínicos de Candida spp. provenientes de amostras coletadas de pacientes atendidos no HU-UFSC. Para tal, a citotoxicidade das formulações de AB-DOC, AB-DOC aquecida e Ambisome® foi avaliada por citometria de fluxo, pela verificação da integridade da membrana celular em células de epitélio renal humano (HEK-293) marcadas com iodeto de propídeo. A identificação e caracterização dos isolados clínicos foram feitas através do subcultivo em ágar-sabouraud dextrose por 24 horas e posteriormente submetidas ao microcultivo em lamínula para identificação da espécie. A suscetibilidade antifúngica foi determinada através dos testes de microdiluição em caldo. Nos ensaios de citotoxicidade, a AB-DOC aquecida mostrou-se menos tóxica frente às células de epitélio renal. Observou-se ainda que a atividade antifúngica da AB-DOC aquecida foi tão eficaz quanto a AB-DOC convencional. Além disso, em isolados de Candida albicans, Candida parapsolis e Candida tropicalis, a AB-DOC aquecida foi mais ativa que a AB-DOC. Portanto, o pré-aquecimento de AB-DOC para uso intravenoso surge como futura alternativa não onerosa, conferindo perfil de seletividade a uma formulação já disponível no mercado, com baixo custo e considerado padrão ouro até os dias de hoje. / Abstract : Amphotericin B (AB) is the drug of choice for the treatment of fungal infections. The high incidence and severity of these infections are mainly related to hospitalized patients, who present immunosuppression, either by the use of chemotherapeutic agents or immunocompromised patients with HIV/AIDS. The formulation of AB in sodium deoxycholate (AB-DOC), commercially available as Fungizone®, is the commonly used therapy and is considered gold standard, however, its administration in already debilitated patients causes serious adverse effects, especially nephrotoxicity. Heated AB was evaluated regarding its aggregate state and for in vitro toxicity in human renal epithelial cells as well as its efficacy in clinical isolates of Candida spp. collected from samples patients at HU-UFSC. For that, the cytotoxicity of the AB-DOC, heated AB-DOC and Ambisome® formulations was assessed by flow cytometry, evaluating cell membrane integrity in human renal epithelium (HEK-293) cells labeled with propidium iodide. The identification and characterization of the clinical isolates were done through the subculture in agar-sabouraud dextrose for 24 hours and later submitted to the microculture in coverslip for identification of the species. Antifungal susceptibility was determined by broth microdilution tests. In cytotoxicity assays, heated AB-DOC was shown to be less toxic to renal epithelial cells. It was further observed that the antifungal activity of heated AB-DOC was as effective as conventional AB-DOC. In addition, in the isolates of Candida albicans, Candida parapsolis, and Candida tropicalis, h-AB-DOC was more active than AB-DOC. Therefore, heated AB-DOC for intravenous use appears as a future non-costly alternative, giving a selectivity profile to a formulation that is already available in the market, with low-cost and considered the gold standard nowadays.

Saquinavir é um medicamento antirretroviral desenvolvido para inibir a protease do vírus da imunodeficiência humana. Este fármaco apresenta várias limitações em função dos seus efeitos colaterais, baixa biodisponibilidade e sensorial não agradável. A nanoencapsulação de fármacos é uma técnica promissora para superar esses problemas. O objetivo deste trabalho é desenvolver suspensões aquosas de nanocápsulas poliméricas contendo saquinavir utilizando uma mistura de poli-ε-caprolactona (PCL) e poli- ε-caprolactone triol (PCL-T) visando uma formulação líquida adequada para o tratamento de crianças infectadas. As nanocápsulas foram preparadas pela técnica de deposição interfacial de polímeros pré-formados. A análise de diâmetro médio de partícula foi realizada por diferentes técnicas, difração a laser, dispersão de luz dinâmica e análise de rastreamento de nanopartículas. O potencial zeta foi determinado por mobilidade eletroforética, o pH por potenciometria e o teor de fármaco e a taxa de encapsulação por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção no ultravioleta. O ensaio de liberação in vitro foi realizado com membrana de diálise e coleta das amostras nos intervalos de 0-120 horas, a 37°C. A estabilidade foi verificada nos tempos 0, 15, 30, 60 e 90 dias, ao abrigo da luz, em temperatura ambiente e com o monitoramento do pH, potencial zeta, diâmetro, teor de fármaco e através da análise de retroespalhamento de luz. A morfologia foi observada por microscopia eletrônica de transmissão. A citotoxicidade em linfócitos T humano foi determinada pelo teste de exclusão de azul de tripan e o mascaramento do sabor de saquinavir pela língua eletrônica. Todas as formulações apresentaram tamanho nanométrico entre 172 ± 18 e 225 ± 4 nm e uma boa distribuição de tamanho. A taxa de encapsulação de saquinavir foi maior que 99%. As nanocápsulas apresentaram potencial zeta negativo, valores de pH levemente ácido e morfologia esférica. Os parâmetros avaliados na estabilidade mantiveram-se constantes ao longo do tempo analisado. O ensaio in vitro mostrou uma liberação controlada de saquinavir. As formulações não apresentaram toxicidade in vitro e foram capazes de mascarar o sabor do saquinavir. Portanto, a associação de polímeros é eficaz para a encapsulação de saquinavir, apresentando características nanotecnológicas adequadas para a sua administração. / Saquinavir is an antiretroviral drug designed to inhibit the human immunodeficiency virus protease. This drug presents several limitations regarding side effects, very low bioavailability and sensory not pleasant. The drug nanoencapsulation is a promising technique to overcome these issues. The aim of this work is to develop aqueous suspensions of polymeric nanocapsules containing saquinavir using poly-ε-caprolactone (PCL) and poly-ε-triol caprolactone (PCL-T) towards a liquid formulation suitable for the treatment of infected children. The nanocapsules were prepared using the technique of interfacial deposition of preformed polymers. The characterization study was conducted by examining the average particle diameter by three techniques, the laser diffraction, the dynamic light scattering and the nanoparticle tracking analysis. The zeta potential was evaluated by electrophoretic mobility, the pH by potentiometry and drug content and encapsulation rate by high performance liquid chromatography with UV detection. The in vitro release assay was carried out in a dialysis membrane with analysis at 0-120 hours, at 37 °C. The stability was checked at 0, 15, 30, 60 and 90 days, protected from light, at room temperature and by monitoring the pH, zeta potential, diameter, drug content and by multiple light scattering analysis. The morphology was observed by transmission electron microscopy. The cytotoxicity in human T lymphocytes was determined by exclusion of trypan blue test and the taste masking by the electronic tongue. All formulations presented nanometric size between 172 ± 18 and 225 ± 4 nm and a good size distribution. The drug encapsulation rate was higher than 99%. The nanocapsules presented negative zeta potential, pH values slightly acidic and spherical morphologies. The parameters evaluated in stability remained constant over time analyzed. The in vitro assay showed a controlled drug release from nanocapsules formulations. The developed formulations showed no toxicity and were able to mask the taste of saquinavir. The association of polymers is effective for saquinavir nanoencapsulation presenting suitable nanotechnological features for drug administration.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:02:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336853.pdf: 4946218 bytes, checksum: bfd0e43173c8c1a525f2bb6a81de4026 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os cardenolídeos, tais como digoxina e oubaína, são conhecidos por sua eficácia no tratamento da insuficiência cardíaca congestiva e como fármacos antiarrítmicos. Recentemente, foram detectadas novas atividades farmacológicas para esses "antigos" fármacos. Tendo em vista o crescente interesse na pesquisa e desenvolvimento desta classe de compostos como potenciais quimioterápicos, frente a diversas linhagens celulares tumorais, o presente trabalho de tese objetivou avaliar os efeitos citotóxicos em células tumorais de três cardenolídeos (glucoevatromonosídeo, digitoxigenina monodigitoxosídeo e convalotoxina), previamente selecionados pela sua potente ação citotóxica. Inicialmente, eles foram avaliados em linhagens celulares tumorais de diferentes origens e todos demonstraram uma potente ação, em concentrações nanomolares, em todas as linhagens testadas, especialmente nas células de tumor de pulmão (A549). Essa linhagem tumoral foi então selecionada para a continuação dos experimentos para detectar o tipo de morte celular causada por esses três cardenolídeos. O glucoevatromonosídeo (GEV), composto mais promissor, também foi investigado em células U937 (linfoma histiolítico). Todos os três causaram bloqueio da fase G2/M, enquanto que a convalotoxina (CON) aumentou o número de células em subG0 do ciclo celular. O GEV foi capaz de inibir a expressão de importantes proteínas relacionadas ao ciclo celular, como ciclina B1 e p53 em A549. Ainda, esse composto causou bloqueio em subG0 em células U937, demonstrando um efeito dependente do tipo celular. O efeito de morte celular causado pelo GEV também foi tipo celular dependente, já que foi observada morte celular pela ação de caspases nas células U937 e independente da ação das caspases em células A549. A digitoxigenina monodigitoxosídeo não apresentou efeito significativo de morte celular em células A549. A CON aumentou o número de núcleos picnóticos e células Anexina-V positivas, configurando morte celular apoptótica. Alem disso, os três compostos foram capazes de inibir a migração e invasão celulares, em células A549, bem como de reduzir a expressão das proteínas: MMP2, MMP9 e FAK (proteína de adesão focal), que são essenciais no processo de metástase. Além disso, o GEV foi capaz de inibir a expressão de importantes cinases, geralmente super expressas em células tumorais. O conjunto desses dados sugere que estes compostos, especialmente o GEV, podem ser considerados candidatos promissores para o desenvolvimento de uma forma farmacêutica a ser usada no tratamento do câncer de pulmão.<br> / Abstract : Cardenolídeos such as ouabain and digoxin are known for their efficacy in treating congestive heart failure as antiarrhythmic drugs. Recently, new pharmacological activities have been found (antiviral and antitumor) to these "old" drugs. Given the growing interest in research and development of this group of compounds, as potential chemotherapeutic agents, this work aimed to evaluate the cytotoxic effects on tumor cells of three cardenolides (glucoevatromonoside, digitoxigenin monodigitoxoside and convallatoxin) previously selected for its potent cytotoxic action. Initially, they were screened in tumor cell lines of different origins and all of them showed potent action at nanomolar concentrations in all cell lines tested, particularly in lung tumor cells (A549). This cell line was then selected for further investigation to detect the kind of cell death caused by these three cardenolides. Glucoevatromonoside (GEV) was the most promising compound, and also investigated in U937 cells (histiocytic lymphoma). All these compounds block G2/M phase, whereas the convallatoxin increased the number of cells in subG0 phase. GEV was able to inhibit the expression of important proteins related to cell cycle, such as Cyclin B1 and p53. Beyond that, this compound caused cell cycle blockage in subG0 phase in U937 cells, demonstrating dependent cell type effect. The effect of cell death caused by GEV was also cell type dependent. In U937 cells, GEV showed a caspase dependent cell death while it is independent of caspase in A549 cells. Digitoxigenin monodigitoxoside did not show a significant percentage of cell death in A549 cells. Convallatoxin increased the number of pyknotic nuclei and Annexin-V positive cells, setting apoptotic cell death in A549 cells. Furthermore, the three compounds are capable of inhibiting cell migration and invasion in A549 cells as well as to reduce the expression of some proteins as MMP2, MMP9 and FAK (focal adhesion protein), which are essential in the process of metastasis. Moreover, GEV was able to inhibit the expression of important kinases, usually over expressed in tumor cells.. Taken together, these data suggest that these compounds, especially GEV can be considered promising candidates for the development of a pharmaceutical form to be used in the treatment of lung cancer.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336850.pdf: 4039664 bytes, checksum: cbc6c96957200c358eb257cc7593d3c3 (MD5) Previous issue date: 2015 / A espermatogênese, processo que ocorre nos túbulos seminíferos (TS), é controlada por uma rede de fatores endócrinos e outros fatores regulatórios. Dentre eles, os hormônios da tireoide (HT), a 1a,25(OH)2-vitamina D3 (1,25-D3), e o 17ß-estradiol (E2) são críticos para a manutenção da reprodução. Os resultados obtidos neste estudo, utilizando células de Sertoli de ratos de 11 dias de idade, mostraram que concentrações muito baixas de T3 reverso (T3r) estimulam a captação de cálcio nestas células depois de 1 minuto de exposição. Este efeito estimulatório envolve alterações no fluxo iônico, uma vez que canais de cálcio dependentes de voltagem, canais de potássio, canais de cloreto e o cálcio intracelular estão envolvidos no efeito do hormônio. Além disso, sugere-se que a integrina avß3 atue como um receptor para o T3r, evidenciado pelo bloqueio do influxo de cálcio na presença do RGD (um inibidor da interação integrina-ligante). Também foi demonstrado que a entrada de cálcio estimulada pelo hormônio é dependente de PKC e ERK e que o T3r estimula a secreção celular, mediada pelo receptor de integrina. Além do T3r, o metabólito T2 também apresentou um efeito estimulatório na captação de cálcio tanto em testículos (10-13 M e 10-7 M) quanto em células de Sertoli isoladas (10-12 M e 10-15 M). Este efeito ocorreu com apenas 30 segundos de exposição ao hormônio. Estes dados apontam que os metabólitos T3r e T2 apresentam efeitos importantes nas células de Sertoli de ratos imaturos. O T3r modula a entrada de cálcio e a secreção celular, o qual pode ter uma função na regulação de uma variedade de processos intracelulares envolvidos na fisiologia da reprodução masculina, por outro lado, mais estudos devem ser realizados para compreender as funções do T2 nestas células. Neste estudo, também foi demonstrado que o E2 (10-6 M), assim como a 1,25-D3 (10-9 M), estimulam a captação de cálcio em testículos de ratos de 30 dias de idade e parece que ambos os hormônios dependem dos receptores clássicos do E2 (ESR1 e ESR2) para que este efeito ocorra. Este evento estimulado pelo E2 envolve a participação de canais de cálcio dependentes de voltagem, canais de cloreto e do cálcio intracelular. Além disso, PLC, PKA, PKC e MAPK estão envolvidas neste efeito estimulatório. Resultados semelhantes já foram descritos para a 1,25-D3 em testículos de ratos de 30 dias. Como estas vias de sinalização são utilizadas por diferentes hormônios esteróides para ligar ações iniciadas na membrana com ações nucleares, verificou-se o envolvimento da 1,25-D3 na expressão de genes envolvidos na sinalização do E2 e no ciclo celular. A quantificação dos níveis detranscritos de genes relacionados à sinalização do E2 e ao ciclo celular, em cultura de TS, foi realizada usando o método quantitativo de PCR em tempo real. Investigando os efeitos da 1,25-D3 na expressão dos receptores de estrogênio (ESR), observou-se que a expressão de ESR1 e ESR2 foi inibida quando os TS foram tratados com 1,25-D3, E2, ou ambos. Além disso, a 1,25-D3 inibiu a expressão gênica e protéica das ciclinas A1 e B1, enquanto que o E2 inibiu somente a expressão do gene da ciclina A1, porém inibiu a expressão de ambas proteínas (ciclinas A1 e B1). Para a expressão das proteínas p16 e p53, o tratamento dos TS com a 1,25-D3 aumentou a expressão das mesmas, já o tratamento com E2 aumentou somente os níveis da proteína p16. Estes resultados mostram que a 1,25-D3 pode regular a sinalização do E2, uma vez que este secosteróide estimula a expressão do gene Cyp19, assim como, diminui a expressão dos genes ESR1 e ESR2. Em TS, as ciclinas A1 e B1 são altamente expressas nas células germinativas que progridem através da espermatogênese, assim, a diminuição da expressão dos genes destas ciclinas e o aumento da expressão das proteínas p16 e p53 induzida pela 1,25-D3 em TS sugere que este metabólito ativo da vitamina D possa controlar o balanço entre proliferação/diferenciação na espermatogênese.<br> / Abstract : Spermatogenesis which takes place in the seminiferous tubules (ST) is a complex process controlled by a network of endocrine and other regulatory factors. In this context, thyroid hormones (TH), 1a,25(OH)2-vitamin D3 (1,25D3), and 17ß-estradiol (E2) are critical for the maintenance of normal reproduction. The results here presented show that very low concentrations of reverse T3 (rT3) are able to increase calcium uptake in 11 day-old rat Sertoli cells after 1 min of exposure. This stimulatory effect involves changes in ionic flow since voltage-dependent calcium channels, potassium and chloride channels and intracellular calcium are involved in the hormone effect. Also, our findings suggest that calcium uptake stimulated by rT3 may be mediated by integrin avß3 receptor in as much as that effect was blocked in the presence of the RGD peptide (an inhibitor of integrin-ligand interactions). In addition, it was demonstrated that calcium uptake stimulated by rT3 is PKC and ERK-dependent and the outcomes indicate that rT3 also stimulates cellular secretion via integrin receptor. Beyond rT3, the T2 metabolite also showed a stimulatory effect on calcium uptake in both testes (10-13 M and 10-7 M) and in isolated Sertoli cells (10-12 M and 10-15 M). This effect occurred with only 30 seconds of exposure to the hormone. These data indicate that rT3 and T2 metabolites have significant effects on Sertoli cells of immature rats.The rT3 modulates the calcium entry and cellular secretion, which might play a role in the regulation of a plethora of intracellular processes involved in male reproductive physiology, on the other hand, further studies must be conducted to understand the functions of T2 in these cells. Our study also demonstrated that E2 (10-6 M), as well as 1,25-D3 (10-9 M), stimulated calcium uptake in 30-day-old rat testis and it seems that the classical E2 receptors (ESR1 and ESR2) are necessary for this effect to occur. The event stimulated by E2 involves the voltage-dependent calcium channels, chloride channels and intracellular calcium participation. In addition, PLC, PKA, PKC and MAPK are involved in this stimulatory effect. Similar results have been described for 1,25-D3 in 30-day-old rat testis. In so far as these signaling pathways are used by various steroid hormones to connect membrane-initiated actions to nuclear actions, the involvement of 1,25-D3 in the expression of genes involved in E2 signaling and in the cell cycle was verified. The quantification of transcripts levels from genes related to the E2 signal and the cell cycle was performed in TS culture using the RT-PCR. Investigating the 1,25-D3 effects on the estrogen receptor (ESR)expression, it was observed that ESR1 and ESR2 expression was inhibited when TS were treated with 1,25-D3, E2, or both. Moreover, 1,25-D3 inhibited the cyclin A1 and B1 gene and protein expression while E2 only inhibited the cyclin A1 gene expression but inhibited the expression of both proteins (cyclin A1 and B1). TS treatment with 1,25-D3 increased the expression of p16 and p53 proteins whereas the E2 treatment only increased p16 protein levels. These results show that 1,25-D3 can regulate E2 signal, since this secosteroid stimulates Cyp19 gene expression as well as decreases ESR1 and ESR2 gene expression. In TS, cyclins B1 and A1 are highly expressed in germ cells that progress through spermatogenesis, thus the decrease of these cyclins genes expression and the increase of the p16 and p53 proteins expression induced by 1,25-D3 suggests that the active metabolite of vitamin D can control the balance between proliferation / differentiation in spermatogenesis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 304258.pdf: 2091210 bytes, checksum: 11b7eef91d19fd27619a139420f1f8ad (MD5) / Introdução: O gênero Mycobacterium compreende mais de 150 espécies, incluindo patogênicas, oportunistas e não patogênicas. As micobactérias pertencentes ao Complexo M. tuberculosis (CMTB) são responsáveis por causar tuberculose (TB), enquanto as Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) podem causar micobacterioses. Embora sejam clinicamente indistinguíveis, micobacterioses e TB diferem em relação ao tratamento. O diagnóstico convencional das micobactérias apresenta limitações quanto ao tempo de execução e à operacionalidade, visto que o resultado pode levar até 60 dias para ser liberado. Entretanto, o diagnóstico rápido e a identificação da espécie são fundamentais para a adoção da terapia adequada e consequente controle da doença. Objetivos: realizar a identificação de MNT e determinar a variabilidade das espécies isoladas no Laboratório de Referência do Estado de Santa Catarina, verificar a ocorrência de MNT em pacientes com diagnóstico de TB internados no Hospital de Referência para Tuberculose do Estado de Santa Catarina e avaliar o rendimento de técnicas moleculares para diagnóstico e identificação de micobactérias. Métodos: Oitenta e oito isolados de MNT, obtidos junto ao Laboratório de Referência do Estado de Santa Catarina, entre agosto de 2009 e agosto de 2011, foram identificados utilizando-se os métodos MMSA e PRA-hsp65. Amostras de escarro foram coletadas de 57 pacientes com diagnóstico de TB, internados no Hospital de Referência do Estado de Santa Catarina entre abril de 2010 e abril de 2011. A identificação das espécies foi realizada pelos métodos MMSA e PRA-hsp65. Estas amostras também foram utilizadas para a avaliação do rendimento das técnicas de PCR convencional, PCR em tempo real, PRA-hsp65 e MMSA, diretamente da amostra clínica. Resultados: Dentre os isolados de MNT recebidos do Laboratório de Referência, M. avium foi a espécie de maior ocorrência (39,8% dos casos), seguida de M. fortuitum (14,8%), M. abscessus (12,5%) e M. kansasii (6,8%). O pulmão foi o principal sítio de isolamento (85,3% dos casos) e 61,4% das amostras eram procedentes das regiões da Grande Florianópolis e do Vale do Itajaí. Do total de isolados de MNT, 34,2% foram associados ao desenvolvimento de doença. O Complexo M. avium foi o principal agente identificado (65,4% dos casos) e o pulmão foi o sítio de infecção mais frequente (88,6% dos casos). Houve predomínio do gênero masculino e de pacientes HIV-soronegativos e a média de idade foi de 46,1 ± 14,6 anos. Dos pacientes internados com diagnóstico de TB no Hospital de Referência, em apenas um foi identificada a presença de MNT. As técnicas de PCR e PCR em tempo real, utilizadas para detecção de micobactérias diretamente de amostras de escarro, apresentaram sensibilidade de 91,2% e 100%, respectivamente, tomando-se como padrão áureo o cultivo em meio sólido. Os métodos MMSA e PRA-hsp65 identificaram a espécie de micobactéria, diretamente de amostras de escarro, em 50,9% e 47,4% dos casos, respectivamente. Quando associados, possibilitaram a identificação em 75,4% das amostras. Conclusão: O presente estudo permitiu uma avaliação da realidade epidemiológica das MNT no Estado de Santa Catarina, que até então não havia sido estudada. Além disso, permitiu a avaliação de técnicas moleculares que podem ser utilizadas como ferramentas para a agilização do diagnóstico e da identificação de micobactérias. / Background: The genus Mycobacterium comprises more than 150 species. The Mycobacterium tuberculosis Complex (MTC) causes tuberculosis (TB), while the Nontuberculous Mycobacteria (NTM) can cause mycobacteriosis. These diseases are clinically indistinguishable, but require different therapeutic regimens. The conventional diagnosis of mycobacteria is time-consuming and may take up 60 days. However, early diagnosis and identification followed by appropriate treatment are essential for an effective control of these diseases. Objectives: to identify and study the variability of NTM species isolated at the Reference Laboratory of Santa Catarina State, to find the occurrence of NTM among patients hospitalized with TB diagnosis in the Reference Hospital of Santa Catarina State and to estimate the yield of molecular techniques to early diagnosis and identification of mycobacteria. Methods: A total of 88 NTM isolates, obtained from Reference Laboratory between August 2009 and August 2011, were identified using MMSA and PRA-hsp65 methods. Sputum samples were collected from 57 patients with TB diagnosis who were hospitalized in the Reference Hospital of Santa Catarina between April 2010 and April 2011. Species identification was performed using MMSA and PRA-hsp65. These samples were also used to estimate the yield of PCR of 16S rRNA gene, real time PCR, PRA-hsp65 and MMSA, directly of the clinical samples. Results: Among the NTM isolates obtained from Reference Laboratory, M. avium was the most common specie (39,8% of cases), followed by M. fortuitum (14,8%), M. abscessus (12,5%) and M. kansasii (6,8%). Pulmonary cases were more frequent (85,3% of cases) and 61.4% of the isolates were from Grande Florianópolis and Vale do Itajaí. Twenty six cases (34.2%) were characterized as mycobacteriosis. Of these cases, 65.4% were attributed to M. avium Complex and 88.6% were characterized as pulmonary disease. The mean age of patients was 46,1 ± 14,6 years. Men and non-HIV patients were more affected by the disease. At the Reference Hospital, NTM was identified in only one patient with TB diagnosis. PCR and real time PCR showed sensitivity of 91.2% and 100%, respectively. MMSA and PRA-hsp65 identified the species, directly of the sputum, in 50.9% and 47.4% of cases, respectively. When associated, these methods identified the specie in75,4% of samples. Conclusions: This study provided the epidemiology of NTM of Santa Catarina State, that had not been studied yet. It also allowed the assessment of molecular techniques that can be used as tools for early diagnosis and identification of mycobacteria.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 223016.pdf: 1153182 bytes, checksum: c7d551328a9bf4d360df884ecc2456ec (MD5) / Derivados n-alquil-ésteres do ácido gálico (galatos) têm ampla aplicação como antioxidante na indústria alimentícia, cosmética e farmacêutica. O ácido gálico também é empregado na indústria de tinturas para o desenvolvimento de cores. Em estudos recentes, foram demonstradas atividades biológicas de derivados do ácido gálico, como antiviral, antibacteriana, antitumoral e antioxidante. A porção ácida do ácido gálico foi esterificada com álcoois alifáticos, e cadeias alquílicas (C1 - C18) foram introduzidas na molécula. Estes derivados n-alquil-ésteres diferem entre si apenas no tamanho da cadeia alifática lateral, o que influencia nas respectivas lipofilicidades, definidas pelo Log P. Neste trabalho, foi realizado um estudo comparativo entre o tamanho da cadeia alifática lateral (e o Log P) dos galatos e a atividade antioxidante in vitro, bem como as respectivas toxicidades em tecido hepático de ratos. Os valores de Log P variaram entre 0,8918 e 7,6791. As IC50 variaram entre 8,46 e 41,93 M para inibição da atividade da mieloperoxidase (MPO); 3,0 e 29,6 M para a reatividade com HOCl; 21,7 e 140,0 M para proteção da lipoperoxidação induzida por ascorbil ("Asc); e 117,2 e 282,8 M para proteção da lipoperoxidação induzida por peroxinitrito (ONOO-). Nenhum dos compostos apresentou reatividade com óxido nítrico nem apresentaram toxicidade em tecido hepático de ratos. O tamanho da cadeia alifática influenciou na atividade da MPO, pois quanto menor o número de C maior foi a inibição da enzima. Por outro lado, os compostos com Log P próximos a 4 (C6 a C10) apresentaram maior proteção contra a lipoperoxidação induzida tanto por "Asc quanto por ONOO-. O galato mais ativo contra a lipoperoxidação (galato de octila) foi incorporado em lipossomos de fosfatidilcolina e aumentou a intensidade do efeito antioxidante. Em resumo, os compostos testados apresentaram potencial antioxidante, ressaltando-se o efeito contra a atividade da mieloperoxidase, uma enzima com papel importante nos processos inflamatórios. Adicionalmente, pode-se sugerir que os compostos também podem atuar como seqüestradores de espécies reativas além de interagir com as membranas lipídicas impedindo a propagação do processo de oxidação. Derivatives n-alquil-esters of gallic acid (gallates) have broad application as antioxidant in food, cosmetic and pharmaceutical industry. The gallic acid also is used in dye industry in colors development. In recent studies, were demonstrated several biological activities of gallic acid derivatives, such as antiviral, antibacteriana, antitumoral, antifungical and antioxidant. The acid function of gallic acid was esterified with aliphatic alcohols, in which alquilic chain (C1 - C18) was attached at the molecule. The compounds were different only at the size of their aliphatic side chain having influence on their lipophilicity, that was evaluated through their respective Log P. In these work, it was carried out a comparative study between the size side chain aliphatic (and the Log P) of the gallates and the antioxidant activity in vitro, as well as their toxicity in rat hepatic tissue. The Log P values varied between 0,8918 and 7,6791. The IC50 for myeloperoxidase (MPO) activity inhibition varied from 8,46 to 41,93 M; 3,0 to 29,6 M for reactivity with HOCl; 21,7 to 140, M for lipoperoxidation protection induced by ascorbyl ("Asc); and 117,2 to 282,8 M for lipoperoxidation protection induced by peroxynitrite (ONOO-). Anyone of the compounds showed reactivity with neither nitric oxide nor toxicity for rat hepatic tissue. The size of aliphatic side chain affected on the MPO activity, since the smaller the lateral aliphatic chain higher the inhibition of the enzyme. On the other hand, the compounds with Log P near 4 (C6 to C10) showed higher protection against lipoperoxidation induced by both "Asc or ONOO-. The more active compound against the lipoperoxidation (octyl gallate) was incorporated into liposomes and the intensity of antioxidant effect increased. Concluding, the analyzed compounds showed antioxidant potential in the interval mentioned concentration standing out the effect against MPO activity, an enzyme with important role in inflammatory process. Additionally, they were able to scavenge reactive species and to interact with the lipid membranes avoiding the propagation of the oxidation process.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:25:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 221615.pdf: 1153264 bytes, checksum: 76630da8416a7fca95cb42457f8a1d12 (MD5)