Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-17T03:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335889.pdf: 1632074 bytes, checksum: 11da9ea08683144287d48d52a331c49a (MD5) Previous issue date: 2015 / As leucemias agudas (LA) compreendem um grupo heterogêneo de doenças caracterizadas pela rápida e incontrolada expansão clonal de células progenitoras do sistema hematopoiético. Segundo a OMS, características imunofenotípicas, citogenéticas e moleculares, além de outras associações, estão relacionadas ao prognóstico e contribuem para a estratificação das LAs, que é baseada na citogenética e na incidência de mutações gênicas, como as mutações no gene NPM1 e FLT3. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a associação das mutações nos genes NPM1 e FLT3 (DIT e D835) com outros parâmetros laboratoriais e clínicos em casos de LA, atendidos pelo Serviço de Hematologia (HUUFSC), no período de janeiro de 2012 a setembro de 2014. Entre as 57 amostras encaminhadas ao LOEH, 42 estavam de acordo aos critérios de inclusão. A análise das amostras em relação a essas alterações foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Para avaliar a presença de mutações no gene NPM1, foi realizado o sequenciamento da região de interesse. Entre os pacientes diagnosticados com leucemia mieloide aguda (LMA), 30,7% apresentaram a mutação no gene FLT3 (FLT3-DIT: 19,2% e FLT3- D835: 11,5%). Nos pacientes diagnosticados com o subtipo leucemia linfoide aguda (LLA) apenas um caso (7,1%) apresentou a mutação FLT3-D835. Não foi observado associação entre a presença dessas mutações com o subtipo de LA. Porém, observou-se que a presença da mutação foi mais incidente em pacientes com LMA. Os resultados mostram que nos casos onde foi detectada a mutação FLT3-DIT, os pacientes apresentaram tanto pior progressão clínica da doença (P=0,006) quanto menor taxa de sobrevida global (P=0,002). Ainda mais, foi possível observar valores para leucometria, atividade da enzima LDH e porcentagem de blastos maiores em relação àqueles sem a presença da mutação. Esses resultados sugerem que a presença de mutações FLT3-DIT são preditivos de mau prognóstico e atuam de forma independente, pois não foi possível observar associação com os demais fatores prognósticos. Em relação mutação FLT3-D835, não foi possível encontrar associação entre esta variável e os demais parâmetros analisados. Na análise da mutação NPM1 entre os pacientes incluídos no estudo, nenhum apresentou mutações compatíveis às descritas na literatura. No entanto, foi possível detectar uma nova mutação no gene NPM1 em amostras de três pacientes. Apesar do número pequeno de casos, pode-se observar que os pacientes apresentaram fatores prognósticos desfavoráveis como o percentual do número de blastos, leucocitose em dois dos três casos, e foram a óbito antes da primeira remissão. Esses dados sugerem que essa mutação pode ser considerada de mau prognóstico, como as mutações no gene NPM1 do tipo não-A. Entretanto, a avaliação prognóstica requer maior número de casos avaliados para sua elucidação. Esses resultados mostram, que diferentes mutações no gene NPM1 podem não ser raras, e requerem a análise da sequência alvo completa. Assim, outros tipos de alteração podem ser detectadas. No geral, o presente estudo destaca a importância de incluir a investigação de marcadores moleculares na avalição prognóstica dos pacientes portadores de LA no momento do diagnóstico, a fim de que a escolha do protocolo terapêutico seja o mais apropriado.<br> / Abstract : Acute leukemias (ALs) are a heterogeneous group of diseases characterized by a fast and uncontrolled clonal proliferation of hematologic progenitor cells. According to the current classification proposed by WHO, the prognosis is defined by immunophenotypic, cytogenetic and molecular characteristics, which contribute to the stratification of ALs, which is based on cytogenetic and on the incidence of gene mutations, as mutations in NPM1 and FLT3. Thus, the aim of this study was to evaluate the prognostic impact of the association between mutations in NPM1 and FLT3 (DIT and D835) genes with other laboratory and clinical parameters in patients with AL before the first therapy. Patients attended the Hematology Department (UFSC-HU) from January 2012 to September 2014. Among the 57 samples sent to (LOEH), 42 were according to the inclusion criteria. The analysis of the mutations in the samples was performed by polymerase chain reaction (PCR). To assess the presence of mutations in NPM1 gene, it was further carried out the sequencing of the region of interest. Among the patients diagnosed with acute myeloid leukemia (AML) included in this study, 30.7% had mutations in the FLT3 gene (FLT3-DIT: 19.2% and FLT3-D835: 11.5%). Among the patients diagnosed with acute lymphocytic leukemia (ALL), only one patient (7.1%) had a mutation FLT3-D835. There was no association between the presence of these mutations and the LA subtype. However, it was observed that the presence of the mutation was more prevalent in patients with AML. The results show that when the mutation FLT3-DIT was observed, patients had a worse clinical progression (P=0.006) and a reduced overall survival rate (P=0.002). Moreover, patients with this mutation had higher values of white blood cell count, LDH enzyme activity and blasts percentage in relation to those without the mutation. The results suggest that the presence of FLT3-DIT mutations are predictive of a worse prognosis, but they act independently, since it was not observed an association with the other prognostic factors. Regarding NPM1 mutation, none of the patients included in this study showed mutations according to the described in the literature. However, by sequencing analysis, it was possible to detect a new mutation in NPM1 gene in three patient samples. Despite the small number of patients, it may be noted that all three cases had unfavorable prognostic factors such as the percentage of blasts, high white blood cell count in two of the three cases, and all of them died before the first remission. These data suggest that this mutation can be considered as poor prognosis, such as mutations in NPM1 gene non-A type. However, the prognostic evaluation of this new mutation requires a larger number of cases to be fully elucidated. These results show that different mutations in NPM1 gene may not be rare, and require analysis by sequencing of the complete target sequence.Thus, other typesof changes can be detected. Overall, the present study highlights the importance of including the investigation of molecular markers in prognostic evaluation of patients with AL at the diagnosis, so the most appropriate treatment protocol can be chosen.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-17T03:12:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335833.pdf: 2075808 bytes, checksum: 1ebab313b99f115d6ebbbc21b39fdc4d (MD5) Previous issue date: 2015 / As membranas serosas pleurais, peritoneais e pericárdicas são aquelas que envolvem, respectivamente, as superfícies do pulmão, da cavidade abdominal e do coração. Em condições patológicas, uma quantidade maior de líquido se acumula nessas cavidades formando um processo denominado efusão cavitária. Efusões cavitárias malignas são definidas como a presença de células malignas nas cavidades serosas. Recentes estudos mostram que a análise multiparamétrica por citometria de fluxo é uma metodologia sensível e rápida que permite avaliar um grande número de células com diferentes marcadores. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o fenótipo das células presentes nos líquidos cavitários e analisar a sua importância como marcadores fenotípicos para o diagnóstico diferencial entre as efusões malignas e as benignas. A primeira etapa deste trabalho consistiu em padronizar a marcação e a análise das amostras de efusões serosas por citometria de fluxo. Após a padronização, a celularidade de 65 amostras de líquidos cavitários foi avaliada por citometria de fluxo e comparada com a avaliação da morfologia por microscopia de luz, a qual é metodologia considerada padrão ouro para análise desses líquidos. A etapa seguinte consistiu em avaliar a eficiência dos marcadores Ber-EP4, TTF-1, Vimentina, GCFPD-15, CK7 e CK20 utilizados na imunocitoquímica para diferenciar as células reacionais das neoplásicas por citometria de fluxo em líquidos pleurais. Apesar do pequeno número de amostras analisadas (n=18), foi possível concluir que o painel de anticorpos padronizado neste estudo é útil para distinguir as células neoplásicas das normais e, com isso, fazer o diagnóstico diferencial entre as efusões malignas e as benignas. No entanto, mais estudos com um número maior de amostras serão necessários para o estabelecimento da metodologia na rotina laboratorial de investigação de células neoplásicas.<br> / Abstract : The pleural, pericardial and peritoneal membranes are respectively engaging the lung, abdominal cavity and the heart surfaces. Under pathological conditions, a greate quantity of fluid accumulates in these cavities forming a process known as cavity effusions. Malignant effusions are defined as the that the multi-parameter flow cytometric analysis is a sensitive method, which allows quick evaluation of a large number of cells with different markers. Thus, the aim of this study was to assess the phenotype of these cells in the cavity fluids, besides analyzing their importance as phenotypic markers for the differential diagnosis of malignant and benign effusions. The first stage of this work was to standardize the measurement and the analysis of samples of serous effusions by flow cytometry. After standardization, the cellularity from 65 samples of serous fluid was evaluated by flow cytometry and compared with the assessment of morphology by light microscopy, which is considered the gold standard methodology for analysis of liquids. The next step was to evaluate the efficiency of the Ber-EP4, TTF-1, Vimentina, GCFPD-15, CK7 and CK20 markers used in immunocytochemistry to differentiate reactions from neoplastic cells by flow cytometry in pleural fluids. Despite the small number of samples (n = 18), the results showed that the standard antibody panel in this study is useful to distinguish cancer from normal cells and, as a result, it is possible to make the differential diagnosis of malignant and benign effusions. However, further studies with a larger number of samples are needed to establish the methodology in laboratory investigation of cancer cells routine.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-18T04:17:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345303.pdf: 3466861 bytes, checksum: e9c2e5bdc3733d3791f1d037929b06b9 (MD5) Previous issue date: 2016 / A infecção genital por Chlamydia trachomatis (CT) é reconhecida atualmente como uma das infecções sexualmente transmissíveis (ISTs) mais prevalentes no mundo, acometendo principalmente mulheres jovens. O caráter primariamente assintomático da infecção por CT constitui a base para formação de reservatórios que perpetuam a transmissão e a aquisição de demais IST, favorecendo a ascensão da infecção para o trato genital superior, resultando em agravos que modulam o risco de transição da infecção cervical para a malignidade. Admite-se que a coinfecção por CT em mulheres HIV soropositivas favorece a infectividade viral, prolongando e/ou aumentando o seu potencial de infecciosidade no trato genital, promovendo o aumento da excreção viral em decorrência do recrutamento de leucócitos infectados pelo HIV em resposta à infecção local e/ou por causa da crescente produção de citocinas inflamatórias que podem estimular a replicação do vírus. Diante desse cenário, o objetivo deste estudo transversal foi avaliar a prevalência de CT em mulheres HIV soropositivas atendidas pelo Sistema Único de Saúde do Município de Palhoça/SC. Durante o período de abril a julho de 2016, foram coletadas 111 amostras endocervicais durante consulta médica ginecológica no Centro Especializado em Aconselhamento e Prevenção (CEAP) de Palhoça/SC. As análises foram realizadas em parceria com o Laboratório de Biologia Molecular, Sorologia e Micobactérias (LBMM) da Universidade Federal de Santa Catarina. As amostras foram submetidas à extração de DNA utilizando um método in house baseado na extração por Acetato de Amônio, e posteriormente submetidas à técnica padronizada de PCR multiplex, utilizando os conjuntos de iniciadores PCO3/PCO4 para identificação do gene da ß-globina humana, e CTP1/CTP2 para a identificação do DNA bacteriano. A coinfecção CT/HIV foi detectada com taxa de prevalência de 1,8% (2/111) na população estudada. Observou-se associação da coinfecção CT/HIV com a variável idade (p=0,013). Não houve diferença significativa entre as demais variáveis e a positividade para CT. Das 104 (93,7%) participantes que relataram 2 ou mais parceiros ao longo da vida, 48,1% (50) relataram uso irregular de camisinha. No grupo das coinfectadas CT/HIV, 50,0% (1) também declarou uso descontínuo de preservativo. Esse fato eleva a chance de infecção por outras ISTs e/ou reinfecção, possibilitando inclusive gestações de alto risco. Foi observada a associação entre o conhecimento de ter HPV e o histórico de lesão no colo do útero (p=0,001). De maneira mais minuciosa, do total de 96 (86,5%) pacientes que responderam não ter HPV ou desconhecer ter, 10 (10,4%) declararam algum grau de lesão. O histórico de condiloma acuminado (HPV) também foi associado ao conhecimento de ter HPV (p=0,000). A metodologia de PCR multiplex exibiu bom desempenho no estudo para a identificação do material genético bacteriano. A técnica de PCR é financeiramente vantajosa e pode ser aplicada em processos de rastreamento que se baseiam na investigação de infecções assintomáticas em mulheres HIV soropositivas. Apesar da baixa prevalência na população analisada, mais estudos acerca da epidemiologia sinérgica da coinfecção CT/HIV em mulheres são necessários a fim de reduzir as conseqüências à saúde da mulher e os custos com tratamento, principalmente em mulheres com idade =30 anos. Por conseguinte, é necessário aprimorar a gestão de campanhas de prevenção e esclarecimento a respeito das ISTs, suas causas e desfechos, juntamente com a inclusão do rastreamento de CT em mulheres HIV soropositivas na prática clínica aos programas já existentes no Município.<br> / Abstract : Chlamydia trachomatis (CT) genital infection is currently recognized as one of the most prevalent sexually transmitted infections (STIs) in the world, affecting mainly young women. The primary asymptomatic character of CT infection is the basis for the formation of reservoirs that perpetuate the transmission and acquisition of other STIs, favoring the rise of infection to the upper genital tract, resulting in diseases that modulate the risk of transition from cervical infection to malignity. It is believed that CT coinfection in HIV-seropositive women favors viral infectivity by prolonging and / or increasing its infectivity potential in the genital tract, promoting the increase of viral excretion due to the recruitment of HIV-infected leukocytes in response to infection and/or due to increased production of inflammatory cytokines that may stimulate virus replication. In view of this scenario, the objective of this cross-sectional study was to evaluate the prevalence of TC in HIV-seropositive women treated by the Unified Health System of the city of Palhoça/SC. During the period from April to July 2016, 111 endocervical samples were collected during a gynecological medical visit at the Specialized Center for Counseling and Prevention (CEAP) in Palhoça/SC. The analyzes were carried out in partnership with the Laboratory of Molecular Biology, Serology and Mycobacteria (LBMM) of the Federal University of Santa Catarina. The samples were submitted to DNA extraction using an in-house method based on Ammonium Acetate extraction, and then submitted to a standard multiplex PCR technique, using the PCO3/PCO4 primer sets to identify the human ß-globin gene, and CTP1/CTP2 for identification of bacterial DNA. CT/HIV coinfection was detected with a prevalence rate of 1,8% in the studied population. There was an association between CT/HIV coinfection and age (p=0.013). There was no significant difference between the other variables and the positivity for CT. Of the 104 (93,7%) participants who reported 2 or more lifetime partners, 48,1% (50) reported using irregular condoms. In the CT/HIV coinfected group, 50,0 (1/2) also reported discontinuous condom use. This fact raises the chance of infection by other STIs and/or reinfection, making possible even high-risk pregnancies. The association between the knowledge of having HPV and the history of cervical lesion (p=0.001) was observed. In a more detailed way, of the total of 96 (86,5%) patients who responded not to have HPV or to be unaware of it, 10 (10,4%) reported some degree of injury. The history of condyloma acuminata (HPV) was also associated with knowledge of having HPV (p = 0.000). The multiplex PCR methodology showed good performance in the study for the identification of bacterial genetic material. The PCR technique is financially advantageous and can be applied in screening processes that are based on the investigation of asymptomatic infections in HIV-seropositive women. Despite the low prevalence in the analyzed population, more studies on the synergistic epidemiology of CT/HIV coinfection in women are needed in order to reduce the consequences to women's health and treatment costs, especially in women aged =30 years. Therefore, it is necessary to improve the management of prevention and enlightenment campaigns regarding STIs, their causes and outcomes, together with the inclusion of CT screening in HIV-seropositive women in clinical practice to existing programs in the county.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325542.pdf: 3639586 bytes, checksum: 40fd2c2211ee08a5f7935d434d732ef9 (MD5) Previous issue date: 2013 / O câncer corresponde a um grupo de doenças que possuem em comum o descontrole na proliferação celular. A leucemia linfóide aguda (LLA) é uma desordem maligna causada pela proliferação de progenitores linfóides B e T e possui uma incidência maior em crianças. As chalconas são compostos intermediários essenciais para a biossíntese de flavonóides e têm demonstrado uma grande variedade de efeitos farmacológicos entre eles o efeito antitumoral. A primeira parte deste trabalho consistiu na avaliação da atividade antitumoral de três chalconas derivadas quimicamente da 2-naftilacetofenona denominadas R7, R13 e R15, em células murinas de LLA (L1210). Observou-se que as chalconas induziram apoptose nas células L1210 por diferentes mecanismos. Particularmente, as chalconas R7 e R13 induziram apoptose através das vias intrínseca e extrínseca e também como resultado de um estresse de retículo endoplasmático. A chalcona R15 induziu a apoptose através da via extrínseca e estresse de retículo endoplasmático não induzindo danos mitocondriais. Na segunda parte deste trabalho buscou-se avaliar o efeito das três chalconas encapsuladas em um sistema nanoestruturado lipídico. Um dos objetivos da encapsulação é a vetorização dos fármacos para as células tumorais melhorando a atividade antitumoral e diminuindo os efeitos adversos. Inicialmente, avaliou-se o efeito de três nanopartículas lipídicas em células não-tumorais VERO e in vivo utilizando camundongos, a fim de escolher o sistema mais biocompatível. A NE foi o único sistema que não induziu toxicidade in vitro e foi escolhida como veículo para incorporação das moléculas. As chalconas R7 e R15 encapsuladas induziram a mesma toxicidade que as moléculas livres em células de leucemia L1210. Já a encapsulação da chalcona R13 diminuiu o seu efeito antileucêmico indicando que esta molécula pode não estar sendo liberada da nanopartícula. A toxicidade das chalconas livres e encapsuladas foi avaliada em células não-tumorais (in vitro) e in vivo. Com esta avaliação, verificou-se que o encapsulamento impediu a toxicidade das chalconas em células não-tumorais VERO e in vivo, principalmente diminuindo a inflamação hepática induzida nos animais tratados com as chalconas livres. Os resultados portanto demonstraram que o encapsulamento não melhorou a atividade antileucêmica das chalconas, entretanto, diminuiu a respectiva toxicidade em células não tumorais. A terceira e última parte deste trabalho corresponde a avaliação de chalconas, bis-chalconas e cromonas como possíveis inibidores da proteína de resistência ABCG2. A expressão dessa proteína tanto em células de leucemia quanto em outros tumores torna essas célulasresistentes aos tratamentos convencionais. Neste trabalho a cromona 4a e a bis-chalcona BC20 apresentaram alta atividade inibitória desta proteína comparando-se aos melhores inibidores já estudados e sendo potenciais compostos para ensaios clínicos.<br> / Abstract : Cancer is a group of several diseases that have in common the uncontrolled proliferation. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant disorder caused by the proliferation of lymphoid progenitor cells. Chalcones are essential intermediate compounds in the flavonoids biosynthesis in plants. They have demonstrated a great variety of pharmacological effects including antitumoral. The first part of this work shows the antileukemic activity of three chalcones 2-naphtylacetofenone derivatives. The molecules were named R7, R13 and R15 and their antitumoral activities were evaluated in L1210 cells. The chalcones induced apoptosis in L1210 cells by several mechanisms. Particularly the chalcones R7 and R13 triggered the intrinsic and extrinsic apoptosis pathways as well as the endoplasmic reticulum stress. Conversely, the chalcone R15 triggered only the extrinsic apoptosis and endoplasmic reticulum stress and had no effect on mitochondria. In the second part of this work, the toxicity of these chalcones encapsulated in lipid nanoparticles was evaluated. One of the goals of drug encapsulation is to enhance the pharmacological activity and decrease the side effects. Initially, we evaluated the cytotoxicity of three empty lipid nanoparticles in non-tumoral cells and in vivo, in order to choose a biocompatible system. The three kinds of nanoparticles evaluated were: solid lipid nanoparticles (NLS), composed nanoparticles (NLC) and nanoemulsion (NE). NE was the only system that did not induce toxicity in vitro and was chosen as the vehicle to chalcones incorporation. The encapsulated R7 and R15 induced toxicity in the same level of the free molecules in leukemia cells (L1210) and the encapsulated chalcone R13 induced lower toxicity than free R13, indicating that this molecule probably is not being released from the nanoparticles. After, the antileukemic activity and the toxicity of free and encapsulated chalcones were evaluated in non-tumoral cells (VERO) and in vivo. The encapsulation decreased the toxicity of chalcones in VERO cells and in vivo, mainly by decreasing hepatic inflammation induced by the free molecules in vivo. The results therefore demonstrated that the encapsulation did not improve the antileukemic activity, but reduced their toxicity to non-tumoral cells. The third and last part of this study corresponds to the evaluation of chalcones, bis-chalcones and chromones as potential inhibitors of the resistance protein ABCG2. The high expression of this protein converts these tumors resistant to conventional treatments. As a result of this work the chromone 4a and bis-chalcone BC20 showed high inhibitory activitytoward this protein. This effect is comparable with the best inhibitors that have been studied, resulting in potential compounds for clinical trials.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326778.pdf: 1607245 bytes, checksum: 36642cd4411a839a236f802925f916af (MD5) Previous issue date: 2014 / Abstract : Congenital hypothyroidism can lead to a variety of neurochemical and morphophysiological alterations that may be associated with learning deficits, hypomyelination and delayed development of the central nervous system (CNS). In this study, it has been investigated whether the hormone 3,3',5' -triiodothyronine (reverse T3, rT3) is able to reverse the biochemical changes caused by congenital hypothyroidism in hippocampal slices from 15 day-old rats, as well as the mechanism of action of this hormone. Congenital hypothyroidism was induced by adding 0.05% propylthiouracil (PTU) in the drinking water from gestation day 8 and continually up to lactation day 15. Euthyroid rats, receiving only water during the same period, were used as controls. Control and hypothyroid pups were used at 15 day-old, considering the period of maximum synaptogenesis. Hippocampal slices from controls and hypothyroid pups were incubated for 30 min with or without rT3 (10-9 M). Receptor antagonists (RGD and AP-5), inhibitors or activators of cell signaling pathways of p38, CaMKII, ERK1/2, PKA and PKC (SB239063, KN-93, PD98059, H89 and PMA, respectively), as well as L-type voltage-dependent calcium channel blocker (nifedipine) and intracellular calcium chelator (BAPTA -AM), were used to determine the mechanisms involved in the nongenomic action of rT3 on hippocampal cells. We also analyzed some biochemical markers (aminotransferase activity) and oxidative stress parameters, as well as changes in the uptake of 45Ca++ and [14C]-2-deoxy-D-glucose in the hippocampus of immature rats treated or not with rT3. Results showed that hypothyroidism leads to accumulation of intracellular Ca++ and induces oxidative stress. On the other hand, rT3, previously considered as an inactive metabolite of thyroid hormones (TH), was able to reverse, at least some of the biochemical changes induced by congenital hypothyroidism. In this context, rT3 interacts with the surface ?vß3 integrin receptors activating several signal transduction pathways (PKA, CaMKII, ERK1/2 and p38). These events cause a decrease in 45Ca++ influx, stimulation in [14C]-2-deoxy-D-glucose uptake, as well as reverse the oxidative stress induced by congenital hypothyroidism. Considering that changes in TH levels could be associated with neurodegenerative disorders, depression, anxiety, among others, the understanding of mechanisms of action of these hormones might allow the development of more specific and targeted drugs in controlling several physiopathological disorders of CNS.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331906.pdf: 2155440 bytes, checksum: e07e41caffa026243cf13dce36796e3b (MD5) Previous issue date: 2014 / O objetivo do estudo foi caracterizar o uso dos medicamentos na perspectiva da racionalidade e da segurança num município de pequeno porte. Os dados foram obtidos a partir do banco de dados de um inquérito de base populacional por meio de entrevistas domiciliares, respondidas por residentes do município, de ambos os sexos, acima de 20 anos, no período de 2009 a 2010. Os resultados foram analisados segundo os indicadores de racionalidade da OMS, do Critério de Beers para os Medicamentos Inapropriados aos Idosos (MII), dos Medicamentos Potencialmente Perigosos (MPP) e da ocorrência de potenciais Interações Medicamentosas (IM) com relevância clínica. Dos 936 entrevistados, 60% usaram medicamentos nos últimos 15 dias. O perfil do usuário foi sexo feminino (70%), casados (59%); aposentados (57%); com renda de um salário mínimo (33%) e que estudaram de 5 a 8 anos (46%). Com relação aos hábitos sociais, 16% dos usuários eram fumantes e 15% ingeriam álcool. Os medicamentos utilizados nos últimos 15 dias totalizaram 1.393. O medicamento mais utilizado foi o captopril (23%). A classe de medicamentos mais utilizada foi a do aparelho cardiovascular com 34%. Os indicadores da OMS revelaram que a média de medicamentos utilizados foi de 2,5 por usuário, 64% dos medicamentos constavam da RENAME e 73% da REMUME, 0,4% eram injetáveis e 2,7% eram antibióticos. Segundo o Critério de Beers, dos medicamentos em uso pelos idosos, 22% eram medicamentos inapropriados aos idosos, sendo consumidos por 40% dos idosos. O percentual de medicamentos potencialmente perigosos foi de 7% sendo usado por 18% dos usuários. Foram encontradas 179 IMs com relevância clínica, em 18% dos usuários e a IM mais prevalente foi AAS-Captopril (21%). O estudo mostrou que a média de medicamentos por usuários foi elevada, que a população idosa está utilizando medicamentos com potencial de risco conhecidos e que podem ser evitáveis. Enfim, os resultados trazem um alerta quanto ao uso de medicamentos com potencial de risco ao paciente e que é necessário intervir para garantir a segurança da terapia.<br> / Abstract :The aim of the study was to characterize the use of medications from the perspective of rationality and security in a small city. Data were obtained from the database of a population-based survey through home interviews, answered by residents of the municipality, of both sexes, over 20 years, from 2009 to 20101 The results were analyzed according indicators of rationality WHO, of Potentially Hazardous Drugs (MPP) and the occurrence of potential Interactions (IM) with clinical relevance. Of the 936 interviewed, 60% had used drugs in the last 15 days. The user profile was women (70%), married (59%); retirees (57%); earning the minimum wage (33%) and studied 5-8 years (46%). With regard to the social habits, 16% of users were smokers and 15% drank alcohol. The drugs used in the last 15 days totaled 1,393. The most commonly used drug is captopril (23%). The most widely used class of drugs has been the cardiovascular system of 34%. The WHO indicators revealed that the average number of medicines used was 2.5 per user, 64% of medicines were contained in the RENAME and 73% REMUME, were 0.4% and 2.7% were intravenous antibiotics. The percentage of potentially dangerous medications was 7% being used by 18% of users. 179 IMs were found clinically relevant in 18% of the users and the most prevalent IM was AAS-Captopril (21%). The study showed that the elderly population is using drugs with known potential risk that may be preventable. Finally, the results provide a warning about the use of medications with potential risk to the patient and what is needed to ensure the safety of the therapy.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:12:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327917.pdf: 1061841 bytes, checksum: 7f4ae41c7bbd4a27105581a71bb38132 (MD5) Previous issue date: 2014 / As infecções pelo vírus da hepatite B (HBV) e pelo vírus da hepatite C (HCV) constituem um grave problema de saúde pública mundial que afeta milhões de indivíduos todos os anos. O presente trabalho objetivou estabelecer a prevalência dos marcadores sorológicos de imunidade e infecção pelo HBV e infecção pelo HCV em adolescentes com idade entre 10 a 15 anos, estudantes de Joinville, Santa Catarina. A pesquisa foi realizada com 400 voluntários, sendo que todos os participantes responderam a um questionário e as carteiras de vacinação foram verificadas. Os marcadores sorológicos HBsAg, anti-HBc, anti-HBs e anti-HCV foram analisados por meio da metodologia de quimioluminescência utilizando o equipamento automaticado ADVIA CENTAUR® e reagentes da marca SIEMENS®. Dentre os participantes, 60,5% eram do gênero feminino e 39,5% do masculino. A análise sorológica evidenciou ausência dos marcadores anti-HCV e HBsAg. A prevalência do anti-HBc reagente foi 1,25% e reatividade para anti-HBs de 39,5%. A maioria dos voluntários (71,75%) não souberam responder sobre o conceito de hepatite e 59,0% não sabiam responder sobre a forma de transmissão. Observou-se ainda que 56,25% dos voluntários demonstrou conhecimento sobre a vacina preventiva contra o HBV e que a cobertura vacinal foi de 96,5% Em conformidade com os dados obtidos, conclui-se que a circulação do HBV e HCV na cidade de Joinville entre adolescentes de 10 a 15 é baixa e que o nível de conhecimento sobre as hepatites B e C nessa população revelou a necessidade de implantação de estratégias educacionais voltadas ao tema.<br> / Abstract : Infection by the hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) is a serious global public health problem that affects millions of individuals every year. This study aimed to establish the prevalence of serological markers of HBV infection and immunity and HCV infection among adolescents aged 10 to 15 years, studying in Joinville, Santa Catarina. Four hundred volunteers answered a questionnaire and vaccination cards were verified. The serological markers HBsAg, anti-HBc, anti-HBs and anti-HCV were analysed via the chemiluminescence method using ADVIA CENTAUR ® automated equipment and SIEMENS ® reagents. Among the participants, 60.5% were female and 39.5% male. Serological analysis showed no markers of anti-HCV or HBsAg. The prevalence of anti-HBc reagent was 1.25% and reactivity to anti-HBs 39.5%. Most volunteers (71.75%) did not know what hepatitis is and 59.0% did not know how it is transmitted. It was also observed that 56.25% of volunteers knew about the preventive vaccine against HBV and vaccination coverage was 96.5%. It was concluded that the circulation of HBV and HCV among adolescents aged 10?15 in the city of Joinville is low and that the level of knowledge about hepatitis B and C in this population indicates the need to implement educational strategies focused on this topic.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:20:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329867.pdf: 3227519 bytes, checksum: 3b26231f801439ad1649a6fc7170a135 (MD5) Previous issue date: 2014 / Em medicamentos administrados via oral, as características físico-químicas dos fármacos estão diretamente relacionadas à sua eficácia terapêutica. Desta forma, conhecer e controlar estas características é de fundamental importância na área farmacêutica. Neste contexto, o presente trabalho aplicou diferentes estratégias envolvendo as engenharias de cristais e partículas visando ao aperfeiçoamento das propriedades biofarmacêuticas dos fármacos cloridrato de terbinafina, carvedilol e nevirapina. Para o cloridrato de terbinafina, um novo hábito cristalino foi obtido a partir da técnica de evaporação lenta de solvente. A comparação entre os resultados de velocidade de dissolução intrínseca da matéria-prima e dos cristais aciculares do fármaco revelaram valores inferiores para o novo hábito. A estratégia aplicada ao carvedilol abrangeu ensaios de cristais multicomponentes com diversos coformers. O screening foi iniciado via moagem assistida por solvente e sistemas promissores foram obtidos com carvedilol: ácido benzoico e carvedilol: ácido oxálico. Estes sistemas foram então selecionados para a cristalização pelas técnicas de slurry e gel. Os resultados demonstraram que a técnica de slurry foi melhor sucedida no sistema carvedilol: ácido oxálico uma vez que permitiu a obtenção de uma única fase cristalina em oposição à mistura de fases obtida por moagem assistida por solvente. Por outro lado, a técnica de cristalização em gel permitiu o preparo de monocristais compostos por carvedilol: ácido oxálico que foram caracterizados por difração de raios X de monocristal, espectroscopia no infravermelho e calorimetria exploratória diferencial. As duas últimas técnicas mencionadas também foram aplicadas ao sistema carvedilol: ácido benzoico e resultados complementares permitiram a identificação destes sistemas como sais de carvedilol. Cocristais compostos por fármaco base fraca e coformer ácido utilizaram como fármaco modelo a nevirapina e demonstraram que a solubilidade destes cocristais é pH dependente e pode ser modelada pela seleção dos componentes do cocristal. Os modelos matemáticos que preveem a solubilidade destes sistemas demonstram a influência do pH, do pKa e da concentração do coformer. Os diagramas de solubilidade de fases gerados apresentaram um ponto de intersecção (pHmax) o qual estabeleceu regiões de solubilidade e estabilidade dos cocristais. Os resultados experimentais de solubilidade apresentaram excelente concordância com os valores calculados.<br> / Abstract: The physicochemical characteristics of a drug are directly related to its therapeutic efficacy in solid oral dosage forms. Thus, the knowledge and the control of these characteristics are of great importance in the pharmaceutical area. In this context, the present work applied different strategies involving the crystal and particle engineering aiming the enhancement of the biopharmaceutical properties of terbinafine hydrochloride, carvedilol and nevirapine. For terbinafine hydrochloride, a new crystal habit of needle-like shape was obtained through the slow solvent evaporation technique. A comparison between the results regarding the intrinsic dissolution rate of the raw material and the needle-like crystal revealed lower values for the new crystal habit. The strategy applied to carvedilol involved tests of multicomponent crystals with different coformers. Firstly, the screening was performed via solvent-assisted grinding and promising systems were achieved with carvedilol: benzoic acid and carvedilol: oxalic acid. These systems were then selected for assays with the slurry and gel crystallization techniques. The results demonstrated that the slurry technique was adequate to obtain a single crystalline phase of carvedilol: oxalic acid system. On the other hand, the gel crystallization allowed the preparation of single crystals composed of carvedilol:oxalic acid which were characterized through single crystal X-ray diffraction analysis, infrared spectroscopy and differential scanning calorimetry. The two last mentioned techniques were also applied to carvedilol: benzoic acid system and the complementary results contributed to identify both multicomponent systems as carvedilol salts. Cocrystals composed of basic drug and acidic coformer used nevirapine as a model drug. This system showed pH-dependent solubility which can be modeled by selecting the cocristal components. The mathematical models that predict the solubility of these systems displayed an influence based on pH, pKa and coformer concentration. The phase solubility diagrams exhibited an intersection point (pHmax) which establishes regions of cocrystal solubility and stability. The experimental measured solubility values were in excellent agreement with values predicted by the mathematical models.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-03-18T21:01:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332251.pdf: 1513718 bytes, checksum: 2f3923361172d337671e9439925208f6 (MD5) Previous issue date: 2014 / A diabetes é uma doença crônica que afeta milhões de pessoas no mundo. As previsões para 2035 são de que a doença atinja mais de 592 milhões de pessoas. Estes dados revelam um importante problema de saúde pública e reforçam a necessidade de buscar por alternativas de tratamento preventivo e terapêutico. As plantas medicinais são uma importante fonte de compostos bioativos. Dentre estas, as isoflavonas despontam como uma classe de biomoléculas com importante atividade antidiabética, associadas principalmente a efeitos fitoestrógenos. Dessa forma, este estudo objetivou caracterizar a atividade anti-hiperglicêmica das isoflavonas PMA2.31 e PMA19, extraídas da fração acetato de etila de Polygala molluginifolia, bem como, elucidar os mecanismos pelos quais estas ações ocorrem. Para tanto, ambas as isoflavonas foram submetidas ao teste de tolerância oral à glicose, no qual, ratos Wistar machos receberam o tratamento (PMA2.31 e PMA19) isoladamente ou combinado com sitagliptina por gavagem e, 30 min após, uma sobrecarga de glicose foi administrada e a glicemia determinada aos 15, 30, 60 e 180 min subsequentes a esta administração. A avaliação da atividade das dissacaridases intestinais in vivo e o conteúdo de glicogênio hepático e muscular foi realizado no tempo 180 min. A atividade de dissacaridases também foi avaliada mediante incubação in vitro. Amostras de soro foram utilizadas para a dosagem de insulina e GLP-1 sérico. A atividade de DPP-IV (Dipeptidilpeptidase-IV) foi mensurada in vitro. A fim de identificar os mecanismos pelos quais as isoflavonas agem secretando insulina e/ou GLP-1, o efeito de PMA2.31 e/ou PMA19 foi avaliado no influxo de cálcio em fatias do intestino (cólon) e em ilhotas pancreáticas. Ainda, PMA2.31 e PMA19 foram incubadas na presença de albumina e glicose ou frutose, para determinação da glicação. Os resultados obtidos demonstraram a redução glicêmica induzida por PMA2.31 e PMA19 após 15 e 30 min, respectivamente. Ainda, PMA2.31 apresentou o efeito anti-hiperglicêmico potenciado quando combinado com sitagliptina. Ambas as isoflavonas aumentaram os níveis séricos de insulina além de PMA2.31 aumentar GLP-1 (Glucagon Like Peptide-1) sérico. O mecanismo pelo qual PMA2.31 atua nestes efeitos envolve a inibição parcial de DPP-IV e aumento da secreção de GLP-1 via ativação de PKC, uma vez que, houve um aumento significativo do influxo de cálcio em fatias de intestino e inibição deste estímulo quando utilizado inibidor de PKC (Proteína cinase C). Diferente de PMA2.31, PMA19 age estimulando a secreção direta de insulina, devido ao incremento observado no influxo de cálcio em ilhotas pancreáticas, sendo estas ações semelhantes às do estradiol e envolvem efeitos no canal de potássio dependente de ATP, canal de cálcio dependente de voltagem e ativação de PKA (Proteína cinase A). Além das ações supramencionadas, PMA2.31 aumentou o conteúdo de glicogênio hepático e assim como a fração acetato de etila, inibiu a atividade de maltase. A fração acetato de etila e as isoflavonas também diminuíram a glicação com albumina demonstrando um potencial efeito antidiabético. Ambas as isoflavonas não produziram alterações na concentração sérica de LDH, sugerindo serem atóxicas na concentração e tempo de tratamento avaliado.<br> / Abstract : Diabetes is a chronic disease that affects approximately 382 million people worldwide, with predictions stating that this number will increase to 592 million in 2035. These data reveal an important public health problem and support the necessity to search for new targets for preventive and therapeutical treatment. Medicinal plants are an important source of bioactive compounds. Among those, the study of plants that contain isoflavones indicates these compounds as a class of biomolecules with important antidiabetic activity, mainly associated with phytoestrogens action. Therefore, this study aimed to characterize the anti-hyperglycemic activity of isoflavones PMA2.31 and PMA19, isolated from ethyl acetate fraction of P. molluginifolia, as well as to elucidate the mechanisms by which these actions occur. To this end, both isoflavones were submitted to oral glucose tolerance test, in which, male Wistar rats received the treatment (PMA2.31, PMA19) by gavage, with/without sitagliptin and, after 30 min, a glucose load was administered and blood glucose levels were determined at 15, 30, 60 and 180 min.The evaluation of in vivo intestinal disaccharidases activity, muscle and hepatic glycogen content was measured at 180 min. The disaccharidase activity was also performed by in vitro treatment. Serum samples were collected for insulin and GLP-1 dosage. In vitro DPP-IV activity was also measured. To investigate the mechanisms by which isoflavones act in insulin and/or GLP-1 secretion, PMA2.31 and/or PMA19 effect on calcium influx in pancreatic islets and intestine slices (colon) was evaluated. PMA2.31 and PMA19 were also tested for albumin glycation measurement. The results showed a significantly blood glucose reduction after treatment with PMA2.31 and PMA19 in 15 and 30 min, respectively. The effect of PMA2.31 was higher when co-administered with sitagliptin. Both isoflavones increased insulin serum levels and PMA2.31 was able to increase GLP-1 serum levels. The PMA2.31 effect on GLP-1 may involve an intermediate DPP-IV inhibition and augmented GLP-1 secretion via PKC activation, since there was a significant increase in calcium influx in intestine slices, and this effect was inhibited by co-incubation with a PKC inhibitor. On the other hand, PMA19 acts directly on insulin secretion due to its stimulus in pancreatic islets calcium influx, with a similar mechanism of action to estradiol, which involve effects on ATP-dependent potassium channel, voltage-gated calcium channel and PKA activation. In addition to the above actions, PMA2.31 increased hepatic glycogen content and both this isoflavone and ethyl acetate fraction, inhibited maltase activity. The ethyl acetate fraction and both isoflavones also decreased albumin glycation, demonstrating a potential antidiabetic effect. Both isoflavones did not produce change in serum LDH, indicating they are non-toxic in the concentration and treatment period studied.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-03-18T21:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332263.pdf: 3821795 bytes, checksum: 2742ec05aa8cfa0eb1f0a8a3e79c7aab (MD5) Previous issue date: 2014 / Espécies do gênero Passiflora são utilizadas há muito tempo pela população de vários países como sedativas e calmantes. Na presente tese buscou-se identificar extratos e substâncias isoladas com atividade no Sistema Nervoso Central das espécies P. alata, P. edulis f. edulis, P. ligularis, P. manicata, P. quadrangularis e P. tripartita f. mollissima, de ocorrência na América do Sul. Nesse sentido, avaliou-se a atividade sedativa de quatorze extratos provenientes das folhas, pericarpo ou polpa das várias espécies através do teste do sono induzido por éter etílico em camundongos (v.o.). Os extratos aquosos do pericarpo de P. alata (600 mg/kg) e P. quadrangularis (100 e 300 mg/kg), das folhas de P. quadrangularis (60 mg/kg), P. edulis f. edulis (600 mg/kg) e P. manicata (100 mg/kg) e da polpa de P. ligularis (30, 100 e 300 mg/kg) foram ativos nesses testes. Os extratos das folhas e do pericarpo de P. quadrangularis foram escolhidos para a realização de outros testes neurofarmacológicos e para o fracionamento bioguiado pela atividade sedativa. Além da atividade sedativa, o extrato aquoso do pericarpo de P. quadrangularis apresentou atividade tipo-ansiolítica nos testes de transição claro-escuro (100 mg/kg) e de esconder esferas (600 mg/kg). Na investigação da composição fitoquímica, foi observada a presença de flavonoides em todos os extratos, sendo identificadas a apigenina e a vitexina-2?-O-xilosídeo como os flavonoides majoritários dos extratos do pericarpo e folhas de P. quadrangularis, respectivamente. Observou-se, ainda, a presença de saponinas e aminoácidos no extrato das folhas de P. quadrangularis. A apigenina foi avaliada no teste do sono induzido por éter etílico, no qual mostrou atividade sedativa (0,6 mg/kg) sugerindo ser o principal composto responsável por essa atividade do extrato. Para o extrato aquoso das folhas de P. quadrangularis realizou-se o fracionamento químico, o qual forneceu três frações distintas enriquecidas em aminoácidos, saponinas e flavonoides. Foi observada a atividade sedativa apenas na fração enriquecida em flavonoides (6 mg/kg), o que indica uma correlação entre a atividade sedativa do extrato e os flavonoides presentes. O flavonoide majoritário desse extrato, a vitexina-2?-O-xilosídeo, foi isolado e avaliado no teste do sono induzido por éter etílico, apresentando atividade sedativa (1,0 e 6,0 mg/kg), sendo, por isso, considerado um dos compostos responsáveis pela atividade sedativa. Após a observação da atividade sedativa dos flavonoides apigenina e vitexina-2?-O-xilosídeo, o envolvimento da viaGABAérgica no mecanismo de ação sedativa desses flavonoides foi avaliado pelo teste do sono induzido por éter etílico após pré-tratamento com flumazenil (in vivo) e teste eletrofisiológico do tipo voltage clamp (in vitro). Os resultados permitiram concluir que os flavonoides, após administração oral, parecem atuar via receptores GABAA benzodiazepínicos, porém o mecanismo molecular necessita ainda ser melhor elucidado.<br> / Abstract : Species of the genus Passiflora are used in tradicional medicine of many countries as sedatives and mild tranquilizers. In this thesis, we attempted to identify extracts and isolated compounds with Central Nervous System activity from the species P. alata, P. edulis f. edulis, P. ligularis, P. manicata, P. quadrangularis and P. tripartita f. mollissima. The sedative activity of fourteen aqueous extracts from leaves, pericarp or pulp of the species was assessed through the ethyl ether-induced hypnosis test in mice (p.o.). The active extracts were the pericarp extracts of P. alata (600 mg/kg) and P. quadrangularis (100 and 300 mg/kg), the leaves extracts of P. quadrangularis (60 mg/kg), P. edulis f. edulis (600 mg/kg) and P. manicata (100 mg/kg) and the pulp of P. ligularis (30, 100 and 300 mg/kg). The extracts from leaves and pericarp of P. quadrangularis were evaluated in other neuropharmacological tests and the fractionation of the extracts was bioguided by the sedative activity. The aqueous extract obtained from the pericarp of P. quadrangularis showed anxiolytic-like activity in the light-dark transitions (100 mg/kg) and marble burying tests (600 mg/kg). The investigation of the compounds present in the extracts showed the presence of flavonoids in all extracts and we have identified apigenin and vitexin-2?-O-xyloside as the major flavonoids in pericarp and leaves extracts of P. quadrangularis, respectively. The presence of saponins and amino acids in the leaves extract of P. quadrangularis was also observed. Apigenin showed sedative activity (0,6 mg/kg) in the ethyl ether-induced hypnosis test suggesting that the main compound is responsible for this activity of the extract. For the aqueous extract from leaves of P. quadrangularis were obtained three distinct fractions enriched in amino acids, saponins and flavonoids. Only the fraction enriched in flavonoids showed sedative activity (6 mg/kg), which indicates a correlation between the sedative activity of the extract and the flavonoids composition. The major flavonoid of this extract, vitexin-2?-O-xyloside, was evaluated in the ethyl ether-induced hypnosis test, showing sedative activity (1,0 and 6,0 mg/kg). The involvement of GABAergic pathway in the action mechanism of action of apigenin and vitexin-2?-O-xyloside was evaluated in an in vivo and an in vitro test. The in vivo results suggest that the flavonoids can activate de GABAergic pathway through GABAA receptors after oraladministration of the extracts, but the molecular mechanism needs to be elucidated yet.