Orientador: Pedro de Oliva Neto / Banca: Fumio Yokoya / Banca: Maria Helena Miguez da Rocha Leão / Banca: Jorge Horii / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Resumo: Neste trabalho duas linhagens de Saccharomyces cerevisiae PE-2 e M- 26 foram analisadas quanto à potencialidade de fermentação alcoólica sob condições de alto grau de estresse do mosto: 200 mg NaHSO3/L, 6 g de ácido lático /L, 9,5% (p:v) de etanol (conversão teórica) e pH 3,6. Foi verificado, ainda, o efeito do tratamento ácido (45min, pH 2,0) no metabolismo da linhagem PE-2 durante sua fermentação sob condições de alto grau de estresse. Desta forma, esta levedura foi submetida a valores de até 390 mg/L de metabissulfito de sódio, 6 g de ácido lático /L, 9,5% (p:v) de etanol (conversão teórica) e pH 3,6 durante processos fermentativos. Investigou-se, também, o potencial de fermentação alcoólica desta levedura em um pool de pH (3,5; 4,0; 4,5 e 5,0) em mostos com: 200 mg/L de metabissulfito de sódio, 6 g de ácido lático /L, 9,5% (p:v) de etanol (conversão teórica). Na última etapa deste trabalho foi estudado o efeito do contaminante Lactobacillus fermentum CCT 1396, do pH ácido no mosto e do tratamento ácido durante o processo fermentativo, no metabolismo de S. cerevisiae PE- 2. Para tanto, esta levedura foi analisada quanto ao potencial de fermentação alcoólica em pHs 3,8 ou 4,8, e submetida ao tratamento com ácido sulfúrico até atingir pH 2,5 em tempos de 1 h ou 2h. O pH baixo (3,6) foi o fator de maior impacto para o aumento de estresse das duas linhagens de leveduras testadas durante os processos fermentativos. A 114 linhagem S. cerevisiae M-26 apresentou maior produção de ácidos orgânicos que a outra. As duas linhagens de levedura tiveram um desempenho semelhante durante os processos fermentativos, não tendo diferenças significativas quanto à viabilidade celular e rendimento etanólico. O pH 3,6 associado ao tratamento ácido (pH 2,0 por 45 min) foi o fator de maior impacto para o aumento de estresse metabólico da linhagem PE-2 durante os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: In this work two Saccharomyces cerevisiae strains, PE-2 and M-26, were analyzed for their alcoholic fermentation potential under must with high stress conditions: 200 mg NaHSO3/L, 6g lactic acid/L, 9.5% (p/v) ethanol (theoretical conversion) and pH 3.6. The effect of the acid treatment (45min, pH 2.0) in the PE-2 strain metabolism was also verified during fermentation under high stress conditions. This yeast was submitted up to 390 mg/L sodium metabisulfite, 6g lactic acid/L, 9.5% (p/v) ethanol (theoretical conversion) and pH 3.6 during the fermentation processes. The alcoholic fermentation potential of this yeast was investigated in a pool of pHs (3.5; 4.0; 4.5 and 5.0) in sugar cane musts with 200 mg/L sodium metabisulfite, 6 g lactic acid /L and 9.5% (p/v) ethanol (theoretical conversion). In the last stage of this work the effect of the contaminant Lactobacillus fermentum CCT 1396, the acid pH in the must and the acid treatment during the fermentation process in the S. cerevisiae PE-2 metabolism were also studied. In these conditions, the yeast was analyzed for its alcoholic fermentation potential in pHs 3.8 or 4.8, and submitted to a sulphuric acid treatment in pH 2.5 for 1h or 2h. Low pH (3.6) was the major impact factor in the increase of stress in both yeast strains during the fermentation processes. S. cerevisiae M-26 strain 116 produced more organic acids than PE-2. Both yeast strains had similar performance during the fermentation processes. There were no significant differences on cellular viability and ethanol yield. The pH 3.6 associated with acid treatment (45 min, pH 2,0) was the major impact factor for the increase of metabolic stress in PE-2 strain during the fermentation processes. The optimum pH zone for ethanol fermentation ranged from 4.0 to 5.0, with less residual sugar, residual protein and more ethanol yield and productivity... (Complete abstract, access electronic addres below) / Doutor

Orientador: Eliane Giachetto Saravali / Banca: Jussara Cristina Barboza Tortella / Banca: Alessandra de Morais Shimizu / Resumo: Apresentam-se, neste estudo, os resultados da pesquisa de mestrado, financiada pela CAPES, fundamentada na Epistemologia Genética de Jean Piaget no âmbito do conhecimento social acerca das noções referentes ao meio ambiente. A problemática era verificar se uma intervenção pedagógica, pautada em princípios construtivistas, proporcionaria a construção do conhecimento social acerca das noções ambientais. Tínhamos, também, como objetivo comparar a noção social pesquisada com a construção das estruturas operatórias de inclusão, seriação e conservação. Esta pesquisa-ação possui um delineamento pré-experimental e contou com três fases : um pré-teste, uma intervenção pedagógica e um pós-teste. Os instrumentos metodológicos no pré e pós-teste foram uma entrevista semiestruturada sobre noções ambientais e três provas do diagnóstico do pensamento operatório (flores - inclusão, bastonetes - seriação, líquido - conservação). Com base nas hipóteses de que os sujeitos participantes apresentariam uma evolução no pós-teste em relação ao pré-teste nas suas noções ambientais e que existiria relação entre os níveis de compreensão da realidade social e o nível de construção das estruturas lógicoelementares pesquisadas, foram submetidos aos procedimentos metodológicos doze sujeitos de um segundo ano do ensino fundamental, sendo a pesquisadora a professora da turma. Os dados da entrevista foram analisados qualitativamente de acordo com os níveis de compreensão da realidade social e, no caso das provas, de acordo com o critério de não construção da estrutura, transição e construção. Os dados foram ainda analisados quantitativamente a partir da tabulação da frequência e frequência relativa e com aplicação dos testes de Wilcoxom e Spearman. Os resultados demonstraram que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We present, in this study, the results of a master degree research funded by CAPES, based on Jean Piaget's genetic epistemology under the social knowledge about the concepts related to the environment. The issue was whether a pedagogical intervention, based on constructivist principles, would provide the construction of social knowledge about environmental notions. We also aimed to compare the social concept surveyed with the construction of the operative structures of inclusion, seriation and conservation. This action research has a pre-experimental design and featured three stages: a pre-test, a pedagogical intervention and a post-test. The methodological tools in the preand post-test were asemi-structured interview about environmental notions and threetests of operative thoughtdiagnostics (flowers - inclusion, rods - seriation, liquid- conservation). Based on the assumptions that the participants would present an evolution concerning their environmental notions in the post-test compared to the pre-test and that there would be a relation between the levels of understanding of social reality and the level of construction of logic-elementary structures surveyed, twelve elementary students from second year were subjected to methodological procedures by their own teacher. The interview data were analyzed qualitatively according to the levels of understanding of social reality and, in the case of evidence, in accordance with the criterion of non-construction of the structure, transition and construction. The data were also analyzed quantitatively from the tab stop on the frequency and relative frequency and Wilcoxom tests and Spearman. The results showed that, in general, the educational intervention was effective for the development of environmental notions and that there is a relation... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador : Prof. Dr. Raul Osiecki / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Educaçao Física. Defesa: Curitiba,30/08/2013 / Bibliografia: fls. 63-73 / Área de concentração: Exercício e esporte / Resumo: O objetivo do estudo foi analisar a Influência do polimorfismo do ACTN3 e ACE I/Dem indicadores de performanceem atletas profissionais de futebol. A amostra foi composta de 40 atletas de uma equipe da primeira divisão do futebol brasileiro. A genotipagem dos polimorfismos do ACTN3 e ACE I/D foi realizada por reação em cadeia da polimerase (PCR) a partir do DNA genômico. Foram avaliados também vários indicadores de performance física (velocidade, impulsão vertical, VO2máx, limiar anaeróbio e habilidade de realização de estímulos intensos repetidos). As frequências genotípicas e alélicas foram comparadas com populações controle e de atletas pelo testes do Qui-Quadrado e exato de Fisher e os indicadores de performance foram comparados utilizando Kruskal-Wallis para os genótipos isoladamente ou Mann-Whitney para os modelos dominante e recessivo. Para todas as análises foi adotado p<0,05. As frequências genotípicas e alélicas do ACTN3 (RR=45%, RX=50% e XX=5%; R=70% e X=30%) e do ACE I/D (DD=30%, ID=57,5% e II=12,5%; D=58,8% e I=41,2%) não diferiram significativamente tanto da população controle, quanto de outros grupos de atletas de futebol, com a exceção de um estudo do ACE I/D. Também não foram encontradas diferenças significativas entre os genótipos ACTN3 e ACE I/D para nenhum dos indicadores de performance testados. Concluindo, os dados sugerem que na amostra estudada os genótipos ACTN3 e ACE I/D não foram associados com fenótipos relacionados à performance física. / Abstract: The purpose of the present study was to analyze the influence of ACTN3 and ACE I/Dpolymorphisms on performance phenotypes in professional soccer players. The sample consisted of 40 athletes from a first division team of Brazilian soccer. Genotyping ACTN3 and ACE I/D polymorphisms was performed by polymerase chain reaction (PCR) from genomic DNA. We also evaluated several physical performance indicators (speed, vertical jump, VO2max, anaerobic threshold and ability to repeatedly perform intense exercise). The genotypic and allelic frequencies were compared with control populations and athletes by chi-square and exact Fisher tests. The performance indicators were compared using Kruskal-Wallis test for genotypes alone or Mann-Whitney test for dominant and recessive models. For all analyzes was set at p<0.05. The allele and genotype frequencies ACTN3(RR=45%, RX=50% and XX=5%; R=70% and X=30%) and ACE I/D (DD=30%, ID=57,5% e II=12,5%; D=58,8% e I=41,2%) did not differ significantly from both the control population, as other groups of soccer playerswith the exception of one study of ACE I/D. We also found no significant differences between ACTN3 and ACE I/D genotypes for any of the performance indicators tested. In conclusion, the data suggest that in the studied sample ACTN3 and ACE I/D genotypes were not associated with phenotypes related to physical performance.

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-09-30Bitstream added on 2014-06-13T19:55:48Z : No. of bitstreams: 1 pereira_rm_me_jabo.pdf: 566981 bytes, checksum: 088ad2e32ed1c30b35e3ce3731bb840a (MD5) / Os métodos tradicionais de isolamento e cultivo para análise da diversidade microbiana do meio ambiente são limitados, pois poucos microrganismos são cultiváveis. Grandes avanços na ecologia microbiana molecular ocorreram através da construção de bibliotecas metagenômicas, fornecendo análises dos microrganismos não-cultiváveis. O solo, que é o mais importante habitat para os microrganismos, principalmente procariotos, sofre contínuas alterações. Devido à prática agrícola intensiva, parte da diversidade de microrganismos do solo pode ser alterada, antes de se tornar conhecida. Este trabalho teve por objetivo estimar a diversidade das comunidades bacterianas pela extração direta de DNA do solo em duas áreas (área de agricultura intensiva e área de floresta nativa) no município de Guaíra-SP, ilustrando o impacto da agricultura na microbiota. Utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos e seqüenciamento parcial do gene 16S rDNA, fragmentos dos produtos de PCR (~1.5kb) foram clonados em vetor pGEMR-T e transformados em Escherichia coli, linhagem DH5a. Para cada biblioteca foram coletados e seqüenciados 240 clones. As seqüências obtidas foram submetidas à análise de similaridade com seqüências depositadas no banco de dados GenBank. As análises revelaram extensiva diversidade em ambos os solos, assim como características distintas das comunidades bacterianas, sendo que a área sob floresta apresentou maior diversidade em relação à área sob agricultura intensiva. Os resultados obtidos demonstram que as práticas agrícolas promoveram aumento quantitativo das comunidades bacterianas pertencentes aos filos Proteobacteria e Firmicutes, ao passo que causaram uma diminuição nas comunidades pertencentes aos filos Acidobacteria e Verrucomicrobia, corroborando estudos anteriores. / Traditional methods of isolation and cultivation to analyze the microbial diversity of environment are very limited, because few microorganisms are cultivable. Advances in molecular microbial ecology has occurred through the construction of metagenomic libraries, providing analysis of uncultured microorganisms. The soil, which is the most important habitat to microorganisms, principally prokaryotes, suffers continuous alteration. Due to intensive agricultural practices, part of the diversity of the soil microbial diversity could be reduced, even before being known. The aim of this work was to assess the diversity of bacterial community, through direct extraction of DNA of microorganisms from two conditions soil, (intensive agriculture and native forest) Guaíra- SP, to show the impact of agriculture in bacterial community. Using specific primers and partial sequencing of 16S rDNA gene, fragments from PCR (~1.5kb) were cloned in a vector pGEMR-T and transformed into Escherichia coli, strain DH5a. To each library 240 clones were collected and sequenced. The sequences obtained were compared against the GenBank database. The analysis showed extensive diversity in both soils, as well as distinct characteristics of bacterial community. Also, the forest field showed greater diversity than the intensive agriculture. The results obtained showed that agricultural practices promote quantitative grow of bacterial community that inhere the phyla Proteobacteria and Firmicutes, as well as generate one diminution in communities inhere the phyla Acidobacteria and Verrucomicrobia, as previously reported.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:57:00Z : No. of bitstreams: 1 luperini_bco_me_botfm.pdf: 564910 bytes, checksum: 91757ff2101acf986d486de210c8c0ba (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve fatores hereditários, ambiente e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão também relacionadas à presença de co-morbidades como a hipertensão arterial, diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Sabe-se, hoje, que há genes relacionados ao peso corporal, embora as relações entre genética e obesidade sejam ainda questões de muito debate. Portanto, o presente estudo teve como objetivos avaliar os níveis de danos no DNA (teste cometa) em linfócitos de pacientes obesas (n=300) e mulheres eutróficas (n=300); a frequência de polimorfismos dos genes FTO (rs9939609) e APM1: 45T/G (rs2241766) e a existência de associação entre essas variantes gênicas e a incidência de lesões genotóxicas nessas populações. Os dados obtidos evidenciaram que as mulheres obesas possuem maiores níveis de lesões primárias no DNA de linfócitos, incluindo purinas e pirimidinas oxidadas, independentemente de seus genótipos para os genes FTO e APM1. A avaliação das variantes do gene FTO mostrou que os genótipos AA e TT foram, respectivamente, mais e menos frequentes nas pacientes obesas do que nas mulheres do grupo controle e que aquelas com a variante AA em ambos os grupos apresentaram maiores níveis de lesões nos DNA. Para o gene APM1, o genótipo TT foi o mais frequente em ambos os grupos, mas as mulheres com as variantes TG+GG foram as que apresentaram níveis mais elevados de lesões genotóxicas. Esses resultados indicaram, portanto, que a obesidade está relacionada a níveis mais altos de lesões genotóxicas em linfócitos de sangue periférico e que o genótipo AA do gene FTO, além de ser mais frequente em mulheres com obesidade mórbida está associado a maiores níveis de danos no DNA, assim como o alelo G do gene APM1. Assim sendo, pode-se... / Obesity is a multifactorial disorder which involves heredity, environment and lifestyle. Its consequences are not just social or psychological, but also related to the presence of comorbidities such as hypertension, type 2 diabetes, cardiovascular disease and various types of cancer. Although some genes have been associated to body weight, the relationship between genetics and obesity are still object of debate. Therefore, this study aimed to assess the level of DNA damage (comet assay) in lymphocytes from morbid obese patients (n=300) and normal weight women (n=300); the frequencies of FTO (rs9939609) and APM1: 45T/G (rs2241766) gene polymorphisms and the relationship between these gene variants and the amount of genotoxic damage were also investigated. Data showed higher level of DNA primary lesions, including oxidized purines and pyrimidines, in lymphocytes of obese than in eutrophic women, regardless their FTO and APM1 genotypes. The AA and TT FTO genotypes were respectively more and less frequents in obese patients than in the control population. Those women with the AA variant, in both groups, presented the highest levels of DNA damage. For APM1 gene, TT genotype was the most frequent in both groups, however women with the allele G (TG+GG variants) presented the highest levels of genotoxic damage. These results indicated that obesity is associated to high levels of genotoxic damage in peripheral blood lymphocytes, and that the AA genotype of the FTO gene is related to morbid obesity and to the highest levels of DNA damage, as well as the G allele of the APM1 gene. In conclusion, obese patients with FTO AA genotypes are at higher risk... (Complete abstract, click access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-13Bitstream added on 2014-06-13T18:57:31Z : No. of bitstreams: 1 emerson_ms_me_botfmvz.pdf: 234958 bytes, checksum: 0bb5599883f96b005e6031ecfebc603a (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Foram utilizadas as carcaças de 78 cabritos, abatidos com média de 120 dias de idade, de cinco grupos raciais: Alpina (A), ½ Boer + ½ Alpina (½ BA), ½ Anglo Nubiano + ½ Alpino (½ ANA), ¾ Boer + ¼ Alpino (¾ BA), e ¼ Boer + ¼ Alpino + ½ Anglo Nubiano (tricross – TC), machos não castrados e fêmeas e dois sistemas de terminação (ST1 – cabrito com a mãe em pastagem e ST2 – cabrito desmamado e confinado, a partir dos 60 dias de idade). As carcaças foram cortadas ao meio, a metade esquerda dividida nos cortes paleta, perna, costela, lombo e pescoço, e esses cortes foram dissecados, separados em músculo, osso, gordura e outros tecidos. O grupo racial, gênero e sistema de terminação influenciaram os rendimentos de gordura e osso na carcaça. O rendimento de músculo foi influenciado apenas pelo sistema de terminação, e o rendimento de outros tecidos, influenciado pelo gênero. A primeira geração de cruzamento da raça Alpina com a Boer aumentou a deposição de gordura e diminuiu a de ossos, contribuindo para melhorar o acabamento da carcaça. As fêmeas apresentaram maior proporção de gordura e menor de ossos que os machos. Houve correlação significativa entre músculo, gordura e osso da carcaça com esses mesmos tecidos nos cortes. Devido à elevada relação entre os componentes constituintes da carcaça com os cortes costela e perna, e proporcionarem equações de predição com os maiores coeficientes de determinação, são os cortes que devem ser utilizados para esse propósito / Were used the 78 carcasses of kids, slaughtered with an average of 120 days old, of five racial groups: Alpine (A), ½ Boer + ½ Alpine (½BA), ½ Alpine + ½ Anglo Nubian (½ ANA), ¾ Boer + ¼ Alpine (¾ BA), ¼ Boer + ¼ Alpine + ½ Anglo Nubian (Tricross - TC), not castrated males and females and two finishing systems (ST1 – kid with mother goat in pasture and ST2 - kid weaned and confined, from 60 days old). The carcasses were split down the dorsal midline. The left side was divided into five primal cuts: shoulder, leg, rib, loin and neck. After, each cut was separated into dissectible muscle, bone, fat and other tissues. The racial group, gender and finishing system affected the income of fat and bone in the carcass. The income of muscle was influenced only by termination system, and the income of other tissues influenced by gender. The first generation of the crossing of breed Alpine with Boer increased fat deposition and decreased the bone, helping to improve the finish of the carcass. Females had a higher proportion of fat and less bone than males. There was significant correlation between muscle, fat and bone carcass with these same tissues in cuts. Due to the high relationship between the constituent components of the carcass with the rib and leg cuts, and provide prediction equations with the highest coefficients of determination, the cuts are to be used for this purpose

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-26Bitstream added on 2014-06-13T20:49:48Z : No. of bitstreams: 1 silva_mb_me_botib.pdf: 435647 bytes, checksum: 214eaf077d57cf98dfcad34295798f53 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo foi conduzido no intuito de avaliar a resistência e o desempenho produtivo de cordeiras puras Santa Inês (SI), Ile de France (IF) e animais produtos do cruzamento entre matrizes Santa Inês e reprodutores Dorper (DOxSI), Ile de France (IFxSI), Suffolk (SUxSI) e Texel (TExSI) artificialmente infectadas por Haemonchus contortus. Foram utilizadas cento e oito cordeiras com idade inicial de três meses. O experimento foi dividido em duas fases. Na primeira fase (18/09/2007 a 19/12/2007) os animais foram infectados com 500 larvas infectantes (L3) de H. contortus, três vezes por semana (segunda feira, quarta feira e sexta feira), totalizando 20, 500 L3. Após um período de 26 dias de suspensão das infecções, iniciou-se a segunda fase do experimento (14/01/2008 a 11/02/2008), quando os animais foram desafiados com uma dose única de 10, 000 L3, seguido de infecções seriadas com 1, 000 L3, três vezes por semana. Ao final do experimento totalizou-se 41, 500 L3 administradas a cada animal. Animais controles de cada um dos grupos genéticos foram mantidos livres de infecções helmínticas. Inicialmente as cordeiras receberam dieta de 16% PB, na proporção 90% concentrado e 10% volumoso ad libitum, na segunda fase a dieta passou a ser restrita, na proporção 50% de concentrado e 50% de volumoso. A cada 14 dias, o desempenho dos animais foi avaliado e exames parasitológicos e hematológicos foram realizados. Ao final do experimento, os animais foram sacrificados para a recuperação, contagem e classificação dos parasitas e para a colheita de amostras de tecido e muco do abomaso para análises histológicas e imunológicas. Os animais SUxSI mostraram-se os mais susceptíveis às infecções, demonstrando maior prejuízo do ponto de vista produtivo. Animais IF mostraram-se ineficientes em impedir o estabelecimento e desenvolvimento da infecção, contudo, seu desempenho produtivo... / This trial was carried out to evaluate the resistance status and produtivity to a artificial infection with Haemonchus contortus in purebred Santa Ines (SI) and Ile de France (IF) lambs, also in animals produced by crosses of Santa Ines dams and rams Dorper (DOxSI), Ile de France (IFxSI) Suffolk (SUxSI) and Texel (TEXSI) breed. The experiment was divided into two phases. At first, (18/09/2007 to 19/12/2007), a total of 108 three-month-old worm-free lambs were infected with 500 third-stage larvae (L3), three times a week, totaling 20.500 larvaes. After a period of 26 days of suspension in infections, began the second phase (14/01/2008 the 11/02/2008), when the lambs were challenged with trickle infection of 10.000 L3, followed by sequential infections with 1000 L3, a total of 2100 larvae. At the end of the experiment, each animal received 41.500 L3. Control animals were kept free of helminth infections. Initially, the lambs received a diet with 16% CP, the proportion was 90% concentrate and 10% forage ad libitum. In the second phase, the diet became restricted in the proportion of 50% concentrate and 50% forage. Every fourteen days, animals were weighed and blood and faecal samples were collected for measurement of parasitological and hematological tests. Respectively, twenty two weeks after infections, the animals were slaughtered to determine the worm burden and sampling of tissue and mucus from the abomasums were collected to histological and immunological analysis. Parasitological and productive results showed that SUxSI lambs were most susceptible to nematode infections. The IF group were ineffective in preventing the establishment and development of infection, however, its growth performance was superior to the other genetic groups, thus, this animals were classified as tolerant to infection. The SI group were the most resistant, with low FEC and worm burden and hematologic ... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-10-07T13:45:39Z No. of bitstreams: 1 DissMOG.pdf: 9813481 bytes, checksum: d5fdf73e1fcd764903f71fe58d1c80c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T19:35:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissMOG.pdf: 9813481 bytes, checksum: d5fdf73e1fcd764903f71fe58d1c80c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T19:35:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissMOG.pdf: 9813481 bytes, checksum: d5fdf73e1fcd764903f71fe58d1c80c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T19:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissMOG.pdf: 9813481 bytes, checksum: d5fdf73e1fcd764903f71fe58d1c80c8 (MD5) Previous issue date: 2014-09-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Studies focusing on genetic diversity and population structure of naturally fragmented taxa are of conservation concern. Such fragmented populations are more subject to endogamy and genetic diversity erosion due to the pronounced effects of isolation and genetic drift. Pilosocereus jauruensis is a columnar cactus species restricted to patches of xeric vegetation on rock outcrops occurring around the Pantanal biome in southwestern South America. This species has been recently resurrected from synonymy with P. machriisi in the P. AURISETUS species group, and three taxa (P. paraguayensis, P. saudadensis e P. densivillosus) are synonymized with P. jauruensis in the current taxonomy. The present study aims to investigate the genetic population structure of P. jauruensis and identify possible distinct population segments within this species. We used data from four SSR markers in 157 individuals of six P. jauruensis populations and 49 individuals of two populations of P. vilaboensis, a related species occurring close to P. jauruensis populations in central Brazil. Furthermore, nucleotide variation in two plastid intergenic spacers (trnSGCU-trnGUCC and trnT-trnL) was investigated in four to five samples of each population. The indices FST e G”ST for SSR data in P. jauruensis was 0.201 and 0.559 respectively, revealing high levels of genetic differentiation among populations. Three haplotypes (Hd 0.663) of P. jauruensis with six polymorphic sites were found in the cpDNA. NJ dendograms showed similar relationships using SSR and cpDNA markers. Two populations, occurring in the same geographic region of the invalid taxa P. saudadensis were highly differentiated from other P. jauruensis populations. The cpDNA haplotype found in the northernmost P. jauruensis population was closely related with P. vilaboensis haplotypes. Also, two populations, occurring in the same geographic region of the invalid taxa P. densivillosus were highly differentiated from other P. jauruensis populations. These results were incongruent with the current taxonomic circumscription of P. jauruensis and suggest the presence of distinct taxa within this species. / Os estudos sobre a diversidade genética e estrutura populacional de espécies naturalmente fragmentada são de grande interesse para a conservação. Essas populações fragmentadas estão mais sujeitas a endogamia e perda da diversidade genética devido aos efeitos pronunciados de isolamento e deriva genética. Pilosocereus jauruensis é uma espécie de cacto colunar restrita a manchas de vegetação seca sobre afloramentos rochosos que ocorrem em torno do bioma Pantanal, no sudoeste da América do Sul. Esta espécie foi recentemente retirada de sinonímia com P. machriisi no grupo de espécies P. AURISETUS e três táxons desse grupo (P. paraguayensis, P. saudadensis e P. densivillosus) são atualmente sinonimizados a ela. O presente estudo tem como objetivo investigar a estrutura genética de populações de P. jauruensis e identificar possíveis segmentos populacionais distintos dentro desta espécie. Foram utilizados dez marcadores microssatélites em 157 indivíduos de seis populações de P. jauruensis e 49 indivíduos de duas populações de P. vilaboensis, uma espécie do grupo P. AURSETUS que ocorre em regiões próximas às populações de P. jauruensis no Brasil central. Além disso, a variação nucleotídica em dois espaçadores plastidiais intergênicos (trnSGCUtrnGUCC e trnT-trnL) foi investigada em quatro a cinco amostras de cada população. Os índices de FST e G"ST para dados SSR em P. jauruensis foi 0,201 e 0,559, respectivamente, revelando elevados níveis de diferenciação genética entre as populações. Três haplótipos plastidiais (Hd 0,663) de P. jauruensis com seis sítios polimórficos foram encontrados. As relações de similaridade entre as populações foram semelhantes entre os dois tipos de marcadores estudados. Duas populações, que ocorrem na mesma região geográfica do táxon inválido P. saudadensis, foram altamente diferenciadas em relação às outras populações de P. jauruensis e proximamente relacionadas às populações de P. vilaboensis. As duas populações de P. jauruensis que ocorrem na mesma região geográfica do táxon inválido P. densivillosus também foram diferenciadas em relação às populações restantes de P. jauruensis. Estes resultados foram incongruentes com a circunscrição taxonômica atual de P. jauruensis e sugerem a presença de táxons distintos dentro desta espécie.

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No. of bitstreams: 1 DissNLG.pdf: 8153268 bytes, checksum: d6e08bab696e4cda4275474ec2fa4b5a (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aspergillus fumigatus is an opportunistic pathogenic filamentous fungus, and the causative agent of aspergillosis, including the invasive pulmonary aspergillosis in immunocompromised individuals, most lethal form of the disease. As in all eukaryotes, the plasma membrane of A. fumigatus is composed of sterols, glycolipids and sphingolipids. The sphingolipids molecules are structural elements that participate in the regulation of the actin cytoskeleton endocytosis, and cell growth. In Saccharomyces cerevisiae, the sphingolipid synthesis is regulated by proteins such as the "AGC kinases" known as Ypk1p and Ypk2p that inactivate Orm1p and Orm2p, which are inhibitory proteins of the serine palmitoyltransferase (SPT) enzyme, the first enzyme that participates in biosynthetic pathway of sphingolipids. Thus, Ypk1/2p are responsible for stimulating the production of sphingolipids in response to several cellular stress factors, such as cell wall stress and heat stress. Here, we aimed to expand the study of sphingolipid biosynthesis in A. fumigatus by functional characterization of the ypkAYPK1 gene by establishing its role in the regulation of sphingolipid synthesis and in the maintenance of cell integrity. To accomplish this goal, one null mutant strain ΔypkAypk1 and a conditional mutant strain niiA::ypkA of A. fumigatus were obtained. The mutant strains were characterized by phenotypic tests aimed at understanding the role of this gene in sphingolipid synthesis, virulence and pathogenicity of this fungus. Subsequently real time RT-PCR experiments were performed to quantify the expression of this gene in conditions of heat stress. The results indicated that deletion of the gene ypkA promotes changes in the development of the fungus, which presents severe defects in the vegetative growth and absence of conidia. In addition, the conditional mutant shows increased sensitivity to lipid synthesis inhibitory drugs. The results also indicate that there is no interaction between genetic ypkA and pathway genes of the cell wall. Thus, we propose that protein kinase YpkA in A. fumigatus is related to vegetative growth and participates in the sphingolipid biosynthesis in A. fumigatus, contributing to the development and integrity of the fungal cell. / Aspergillus fumigatus é um fungo filamentoso patogênico oportunista, e o agente etiológico da aspergilose, que em imunocomprometidos pode vir a ocasionar a forma mais letal da doença, a aspergilose pulmonar invasiva. Como em todos os eucariotos, a membrana plasmática de A. fumigatus é composta por esteróis, glicolipídios e esfingolipídios. As moléculas de esfingolipídios são elementos estruturais que participam da regulação da endocitose, do citoesqueleto de actina e do crescimento celular. Em Saccharomyces cerevisiae, a síntese de esfingolipídios é regulada pelas proteínas do tipo “AGC quinases” conhecidas como Ypk1p e Ypk2p, que inativam Orm1p e Orm2p, as quais são proteínas inibidoras da enzima serina palmitoil-transferase (SPT), a primeira enzima que participa da via de biossíntese dos esfingolipídios. Dessa forma Ypk1/2p são responsáveis por estimular a produção de esfingolipídios na membrana plasmática em resposta a diversos fatores de estresse celular, como por exemplo o estresse de parede celular, estresse térmico entre outros. Diante disso, este trabalho teve como objetivo ampliar o estudo da biossíntese de esfingolipídios em A. fumigatus através da caracterização funcional do gene ypkAYPK1, de forma a estabelecer sua função na regulação da síntese de esfingolipídios e na manutenção da integridade celular. Para cumprir esse objetivo, uma linhagem mutante nulo ΔypkAypk1 e uma linhagem mutante condicional niiA::ypkA em A. fumigatus foram obtidas. As linhagens mutantes foram caracterizadas através de ensaios fenotípicos visando a compreensão do papel desse gene na síntese de esfingolipídios, na virulência e patogenicidade desse fungo. Posteriormente, foram realizados experimentos de RT-PCR em tempo real para a quantificação da expressão desse gene em condições de estresse térmico. Os resultados indicaram que a deleção do gene ypkA promove alterações no desenvolvimento vegetativo do fungo, o qual cresce na forma de colônias pequenas as quais não formam conídios. Ainda, o mutante condicional, quando reprimido, apresenta sensibilidade a drogas inibidoras da síntese de lipídeos e esfingolipídios. Os resultados indicam também que não há interação genética entre ypkA e os genes da via da integridade da parede celular. Assim, podemos propor que a proteína quinase YpkA de A. fumigatus está relacionada com o crescimento vegetativo e participa da biossíntese de esfingolipídios em A. fumigatus, contribuindo com o desenvolvimento e integridade da célula fúngica.