Leishmania é um gênero de protozoários tripanossomatídeos, dimórficos, causadores das leishmanioses. As espécies do subgênero Viannia, como Leishmania (Viannia) braziliensis, são causadoras da leishmaniose cutânea e cutâneo-mucosa nas Américas Central e do Sul. A regulação da expressão gênica em Leishmania ocorre preferencialmente no nível póstranscricional com a participação de elementos regulatórios de ação cis e trans e proteínas ligantes de RNA. Neste contexto, RNAs não codificadores (ncRNAs) conhecidos por seus papéis regulatórios em diversos organismos, ainda são pouco explorados em Leishmania. Sendo assim, o presente estudo analisou o transcriptoma de L. braziliensis explorando o conteúdo codificador e não codificador do parasita. A investigação de expressão diferencial (DE), incluindo análises de enriquecimento de ontologias gênicas, confirmou padrões de expressão, por categoria funcional, como os já reportados para outras espécies de Leishmania durante o desenvolvimento. No entanto, a avaliação do conjunto desses genes DE, empregando a ortologia como parâmetro, sugeriu uma possível contribuição de genes parálogos para a diversidade entre espécies de Leishmania. Para a análise de ncRNAs, um pipeline desenvolvido por Patrícia C. Ruy possibilitou a identificação e caracterização de 11372 ncRNAs putativos em L. braziliensis. Análises acerca dos padrões de expressão diferencial foi conduzido e trinta e cinco ncRNAs putativos foram categorizados, selecionados e submetidos a Northern blotting para avaliação do tamanho e confirmação do padrão de expressão; seis genes foram selecionados para análises funcionais subsequentes. Para avaliação de uma possível função para os ncRNAs a serem investigados, foram gerados parasitos nocaute de cinco desses ncRNAs. O crescimento dos parasitos nocaute em cultura axênica não foi afetado pela ausência dos genes mas o perfil de infecção de macrófagos in vitro foi afetado em 4 dos 6 transfectantes; sugerindo que os ncRNAs sejam funcionais. Cinco ncRNAs foram submetidos a ensaios de pull-down e o conjunto de proteínas ligantes desses transcritos foi identificada. Esse estudo do transcriptoma de L. braziliensis contribui para o entendimento da modulação da expressão dos genes codificadores de proteínas, revela o conteúdo de ncRNA putativos, sua expressão diferencial durante o seu desenvolvimento e ensaia os primeiros estudos funcionais sobre os últimos / Leishmania is a genus of trypanosomatid protozoan parasites, causative agents of leishmaniases. Viannia sub-genera species as Leishmania (Viannia) braziliensis are the causative agents of cutaneous and muco-cutaneous leishmaniasis in Central and South America. The gene expression in this parasites is regulated via post-transcriptional mecanisms comprising the action of cis and trans regulatory elements and RNA binding proteins. In this context, non coding RNAs poorly explored as putative factors involved in regulation of gene expression in Leishmania must be investigated. In this study the transcriptome of coding and ncRNAs of L. braziliensis were analysed. Differential expression analysis, including gene ontology enrichment analysis, during the parasite development revealed the expected paterns for gene expression in Leishamnia spp. A comparative analysis, considering up-regulated genes suggested a contribution of paralogues genes to diversity between Leishmania. spp. To uncover putative ncRNAs, a computational pipeline was previous designed identifying and characterizing 11,372 putative ncRNAs in L. braziliensis, allowing a classification into different ncRNAs classes. The differential expression analysis revealed similar patterns to those observed for protein coding genes. Thirty-five putative ncRNAs were categorized, selected and subjected to Northern blotting being 6 of them selected to functional analysis. These selected group was investigated conducting and stablishing knockout lines, that revealed phenotypic differences concerning diminishing in promastigote growth and in vitro macrophage infection, suggesting possible functional roles of ncRNAs in L. braziliensis. Finnaly, the protein interactions of these ncRNAs were revealed and must be explored in the future to uncover possible regulatory roles of this ncRNAs until now, putative in L. braziliensis. This work represents an outline of L. braziliensis transcriptome contributing to improve the understanding of coding and noncoding RNA content in the parasite

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-09-26T20:15:20Z No. of bitstreams: 2 Clayson Gomes - 2012 - dissertação.pdf: 1729605 bytes, checksum: 48dd1bd05f0e954a3dd14fb20b162e2f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-09-26T21:28:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Clayson Gomes - 2012 - dissertação.pdf: 1729605 bytes, checksum: 48dd1bd05f0e954a3dd14fb20b162e2f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-26T21:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Clayson Gomes - 2012 - dissertação.pdf: 1729605 bytes, checksum: 48dd1bd05f0e954a3dd14fb20b162e2f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Introduction: Leishmaniasis is a tropical zoonoses that is endemic, causing different clinical forms including cutaneous, diffuse, disseminated, mucosal and visceral manifestations. The L. (V.) braziliensis is the most common parasite found in cutaneous leishmaniasis in Brazil and is the major agent for the mucosal leishmaniasis. The manifestation of the disease and the clinical forms are dependent on several factors related between the parasite and host. Objective: The aim of this study was to compare the ability of amastigote parasite isolated from patients with cutaneous or mucosal leishmaniasis to stimulate the production of cytokines in peripheral blood mononuclear cells cultures (PBMC) obtained from health donors. Methods: Isolates of patients with cutaneous or mucosal lesion were inoculated in IFNγ knockout mice to obtain amastigotes, which were purifyed by density using Percoll. The PBMCs from healthy individuals were separated by density using Ficoll. The cells were incubated in cultures at different times with amastigotes and then the supernatant were collect to quantify cytokines by ELISA or cells that are used to quantify cytokines using the real time PCR. Results: PBMCs produced higher amounts of IL-1β, IL-6, IL-10 and TGFβ in cultures after stimulation with amastigotes than uninfected controls. When comparing isolates from cutaneous or mucosal disease it was not found differerence regarding to the production of IL-6, IL-10 and TGFβ, but amastigotes from patients with cutaneous leishmaniasis induced more IL-1β than in parasites obtained from mucosal lesion. Production of IFNγ IL17, and TNF was was not detected at different times after stimulation with L. (V.) braziliensis amastigotes. Conclusion: The results suggest that amastigotes of patients with cutaneous leishmaniasis interact with innate immunity cells by inducing the production of proinflammatory or anti-inflammatory and isolated from mucosal lesions induce less IL-1 than parasites obtained from skin lesions. The greatest amount of IL-1 promotes an inflammatory response with migration of cells to the site of infection, so a low xvii production would cause a slower disease and would prejudice an effective acquired response. Thus, the parasite would be able to survive longer in host in a silent way. / Introdução: A leishmaniose é uma zoonose tropical endêmica com diferentes formas clínicas, incluindo as formas cutânea, difusa, disseminada, mucosa e visceral. L. (V.) braziliensis é o parasito mais comumente encontrado na leishmaniose tegumentar no Brasil sendo, o principal agente da leishmaniose mucosa. A manifestação da doença e as formas clínicas existentes são dependentes de diversos fatores relacionados ao parasito e ao hospedeiro. Objetivo: Comparar a habilidade de formas amastigotas isoladas de pacientes com leishmaniose cutânea ou mucosa em estimular a produção de citocinas em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) obtidas de doadores sadios. Métodos: Isolados obtidos de pacientes com lesões cutâneas ou mucosas foram inoculados em camundongos deficientes de IFNγ para obtenção de formas amastigotas, que foram separadas por gradiente de densidade usando o Percoll. As PBMCs de indivíduos sadios foram separadas por gradiente de densidade usando o Ficoll e cultivadas por diferentes tempos com as formas amastigotas. O sobrenadante foi coletado para quantificar as citocinas por ELISA e as células restantes foram lisadas para análise do mRNA para citocinas usando o PCR em tempo real. Resultados: As PBMCs produziram IL-1β, IL-6, IL-10 e TGFβ em culturas após a estimulação com amastigotas. Os isolados de lesões cutâneas produziram quantidades semelhantes de IL-6, IL-10 e TGFβ quando comparados com isolados de lesões mucosas. Formas amastigotas obtidas de pacientes com leishmaniose cutânea induziram uma maior produção de IL-1β do que parasitos obtidos de lesões mucosas. A produção de IFNγ, IL-17, e TNF não foi detectada em todos os tempos avaliados, após a estimulação com amastigotas de L. (V.) braziliensis. Conclusão: Os resultados sugerem que formas amastigotas de pacientes com leishmaniose tegumentar interagem com células da imunidade inata, induzindo a produção de citocinas pró e anti inflamatórias, sendo que isolados oriundos de lesão mucosa induzem menos IL-1 do que parasitos obtidos de lesões cutâneas. A maior quantidade de IL-1 favorece uma resposta inflamatória com a migração de células para xv o local da infecção. Uma baixa produção dessa citocina faria com que a doença fosse mais lenta prejudicando a formação de uma resposta adquirida eficiente. Portanto, o parasito poderia ser capaz de sobreviver por um tempo maior no hospedeiro de uma maneira silenciosa, causando a forma mucosa.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Renata da Silva Ribeiro.pdf: 705558 bytes, checksum: e16373fa17f99c734d58ede2a54543c6 (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Ouratea cuspidata (Ochnaceae) crude extracts were added to experimental systems containing either host macrophages, or Leishmania braziliensis promastigotes (L566). The biological effect by the use of the hexane (OCH), methanol (OCMeH) and ethyl-acetate (OCAcEt) extracts added at different concentrations: 2mg/mL; 4mg/mL; 8mg/mL, 16mg/mL e 32mg/mL. The OCMeOH was the only fraction to which the anti parasitic potentiality was achieved at doses rates that generated bio protective effects in the host cells. The parasiticide action, due by direct exposure of promastigotes to OCMeOH, as well as the parasitic growth, and morphological alterations intermediary metabolism alterations (mitochondrial activity) were concomitantly measured. Biological macrophagic functions were also evaluated using Cricetus cricetus peritoneal macrophages as a model (Mf). Bio-protective assays were carried out in order to determine the free radical generation by the extract constituents. The results were compared with non treated L566 and Mf. 78% of the 16 mg/106 Mf/mL treated Mf were viable but a significant decrease of their phagocytosis capability (92%) was detected. Such alterations were evident in 62% of the cells treated with 32mg/106 Mf/mL. At this concentration cells were 70% viable and presented 98% phagocytosis suppression. The macrophages enzymatic- mitochondrial activity was gradually diminished, with 87% activity at exposures to 8mg/106 Mf/mL; 66,3% at exposures to 16mg/106 Mf/mL, and 49% at exposures to 32mg/106 Mf/mL, respectively. The anti parasitic effects were not associated to the promastigotes lack of viability. Instead, a significant rising on the L566 cells counting was detected when compared to control non treated parasites, from the first 6 hours treatment until 24 hours exposure. Morphological changes were detected in 62% of the 8mg/106 L566/mL parasite treated cells; 78% after 16mg/106 L566/mL treatment, and 98% of the cells presented morphological changes after 32mg/106 L566/mL treatment. Cells were either round-shaped, showing incomplete mitosis, or presenting double flagella, suggesting that the present extract containing substances that might interfere in the parasitic topoisomerase function. The parasitary mitochondrial activity evidenced the occurrence of a metabolic acceleration due by the OCMeOH treatment. The mitochondrial enzymatic activity was of 220% at exposures to 8mg/106 L566/mL; 389% at exposures to 16mg/106 L566/mL and of 480% at exposures to 32mg/106 L566/mL, respectively, when compared to the non treated parasites (100%). The anti parasitic potential (Therapeutic Index) was considered to be positive (acceptable) (TI=4,0) when estimated in function of the morphological changes observed at the extract concentration of 32mg/106 Mf/mL (LD62%), and at 8mg/106 L566/mL (ED62%), respectively. Since bi-flavonoids are the main constituents present in the OCMeOH, results were suggestive the anti parasitic effect was due to this group of secondary metabolites. As such biologically active molecules are known COX2 selective inhibitors, its internal use should be avoided. Otherwise, bi- flavonoids are good candidate substances to be applied as topical medicine to treat the American Tegumentar Leishmaniasis. / Os efeitos dos extratos de Ouratea cuspidata (Ochnaceae) foram avaliadas a partir da exposi??o de c?lulas hospedeiras e de promastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis (L566) ?s fra??es oriundas da sua parti??o hex?nica (OCH), metan?lica (OCMeOH) e acetato de et?lica (OCAcEt). Dentre estas, a fra??o OCMeOH foi a ?nica que apresentou potencial antiparasit?rio em doses que geraram bioprote??o aos sistemas hospedeiros. Assim, procederam-se an?lises de a??o parasiticida direta do extrato OCMeOH sobre formas promastigotas, onde, tamb?m, foram avaliados o crescimento, altera??es morfol?gicas e fun??es do metabolismo mitocondriais. Do mesmo modo, foram realizadas observa??es semelhantes em macr?fagos peritoneais de hamsters Cricetus cricetus (Mf) afim de se determinar a toxicidade relativa para o hospedeiro. Finalmente, foram realizados ensaios complementares de bioprote??o e gera??o de radicais livres, com a finalidade de confirmar a poss?vel aplica??o terap?utica dos constituintes presentes no extrato. Em todas as etapas experimentais, foram utilizadas cinco concentra??es de OCMeOH (2mg/mL; 4mg/mL; 8mg/mL; 16mg/mL e 32mg/mL), sendo que os resultados obtidos foram comparativamente avaliados em rela??o a sistemas de controle (L566 e Mf n?o tratados). Os (Mf) tratados com 16 mg/106 Mf/mL do extrato sofreram uma diminui??o significativa (92%) de sua capacidade fagocit?ria, mas permaneceram vi?veis, em sua maioria (78%). As altera??es morfol?gicas mostraram-se mais evidentes em 62% das c?lulas tratadas com 32mg/106 Mf/mL, com 70% de viabilidade e 98% de inibi??o da fagocitose. A atividade enzim?tica-mitocondrial macrof?gica apresentou diminui??o gradativa, com a preserva??o de 87% das fun??es enzim?ticas nas c?lulas tratadas com 8mg/106 Mf/mL; 66,3% daquelas tratadas com 16mg/106 Mf/mL e 49% das tratadas com 32mg/106 Mf/mL. As L566 n?o apresentaram a perda da viabilidade ap?s exposi??o de 24horas ?s diferentes concentra??es de OCMeOH. Ao contr?rio, houve um aumento significativo no n?mero de promastigotas que, a partir de seis horas de cultivo, mostraram-se sempre superiores ? quantidade de parasitos n?o tratados. Foram detectadas altera??es morfol?gicas em 62% das L566 tratadas com 8mg/106 L566/mL; 78% daquelas tratadas com 16mg/106 L566/mL e 98% das tratadas com 32mg/106 L566/mL. As promastigotas tratadas apresentaram-se arredondadas, com mitose incompleta, ou apresentando dois flagelos, sugerindo que as subst?ncias presentes no extrato podem interferir nas topoisomerases parasit?rias. A atividade mitocond rial parasit?ria evidenciou a ocorr?ncia de acelera??o metab?lica induzida pelo tratamento com OCMeOH. A atividade enzim?ticamitocondrial foi de 220% no tratamento com 8mg/106 L566/mL; de 389% com 16mg/106 L566/mL e 480% com 32mg/106 L566/mL quando comparadas ao controle (100%). O potencial antiparasit?rio (Indice Terap?utico) foi considerado positivo (IT=4,0) em fun??o das altera??es morfol?gicas observadas nas concentra??es de 32mg/106 Mf/mL (LD62%), e 8mg/106 L566/mL (ED62%). Sendo biflavon?ides os constituintes presentes em maior propor??o, atribuiu-se a este grupo de subst?ncias a a??o antiparasit?ria e imunot?xica observadas para OCMeOH. Os bi-flavon?ides presentes no extrato metan?lico de Ouratea cuspidata est?o entre os inibidores seletivos de COX2, sugerindo o desenvolvimento de pesquisas que visem sua utiliza??o t?pica em animais naturalmente infectados.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T17:10:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Walker Oliveira.pdf: 646440 bytes, checksum: 715267f8e674a7d1a347adde1fef2b75 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T17:10:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Walker Oliveira.pdf: 646440 bytes, checksum: 715267f8e674a7d1a347adde1fef2b75 (MD5) / NIH Grant; CAPES / Introdução: A forte resposta do tipo Th1, com produção exagerada de IFN- e TNF-α, observada na leishmaniose tegumentar humana causada por Leishmania braziliensis está associada com a destruição tecidual e desenvolvimento de lesão observada em pacientes com leishmaniose cutânea (LC) e em pacientes com leishmaniose mucosa (LM). Em contraste com essas formas clínicas, 10% dos indivíduos residentes em área endêmica, apesar de apresentarem reação de hipersensibilidade tardia para o antígeno de Leishmania, não apresentam evidências de doença clínica e são considerados como tendo a forma subclínica (SC) da doença. A produção de IFN-γ e TNF-α nestes indivíduos é menor quando comparada com pacientes com LC. Existem várias evidencias que a forte resposta inflamatória não modulada está associada com a patogênese da LC e da LM. Embora os indivíduos SC apresentem uma resposta inflamatória mais fraca, ainda não é bem conhecido como eles controlam a infecção. Uma resposta Th1 eficiente e modulada pode estar envolvida na proteção da infecção por L. braziliensis. A modulação da resposta imune é feita principalmente por citocinas moduladoras como IL-10, TGF-β e mais recentemente por IL-27. Objetivo: Avaliar o papel de citocinas regulatórias e de antagonistas de citocinas na modulação da resposta imune na infecção por L. braziliensis. Metodologia: Células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de 40 pacientes com LC, 18 com LM e 13 indivíduos com infecção subclínica foram estimuladas com antígeno solúvel de Leishmania (SLA) na presença e ausência de citocinas regulatórias (IL-10, IL-27 e TGF-β) ou antagonistas de citocinas (α-TNF-α e α-IFN-γ). A produção de citocinas (IL-10, IL-17, TNF-α e IFN-γ) foi mensurada através da técnica de ELISA e de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Resultados: IL-10 e TGF-β apresentaram atividade moduladora da produção de TNF-α e IL-17, sobretudo na LC, enquanto IL-27 não apresentou efeito modulador na produção de TNF-α, IFN-γ e IL-17 em nenhuma das formas clínicas da leishmaniose tegumentar. A neutralização de TNF-α diminuiu a produção de IFN-γ, mas não alterou a produção de IL-10, enquanto a neutralização de IFN-γ diminuiu a produção de TNF-α e aumentou a produção de IL-10 nesses pacientes. A produção de IL-17 foi maior nos indivíduos SC, embora sem significância estatística e a neutralização de IL-10 não alterou a produção de IFN-γ nesses indivíduos. Entretanto a expressão de IL-27 foi maior em pacientes com LC quando comparado com os indivíduos SC. Conclusões: IL-10 e TGF-β parecem ser as citocinas mais envolvidas na modulação da resposta imune em pacientes com LC e LM, principalmente IL-10, desde que a neutralização de IFN-γ diminui a produção de TNF-α de uma forma dependente de IL-10. A produção de IL-17 nos indivíduos SC sugere que essa citocina pode estar envolvida na proteção contra a infecção por L. braziliensis. / Salvador

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T00:30:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado BP - Camila Mesquita Rodrigues.pdf: 2143075 bytes, checksum: ece36df5bf0e778217222b79d03c4bd8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T00:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado BP - Camila Mesquita Rodrigues.pdf: 2143075 bytes, checksum: ece36df5bf0e778217222b79d03c4bd8 (MD5) Previous issue date: 2011-12-08 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O ferro é um elemento essencial para a sobrevivência dos microorganismos in vitro e in vivo, atuando como cofator de diversas enzimas e desempenhando um papel crítico durante a interação parasito-hospedeiro. Somente os parasitos mais virulentos são dotados de mecanismos eficazes para adquirir ferro do hospedeiro sadio, conseguindo invadir, colonizar, se multiplicar e estabelecer a infecção. L. (V.) braziliensis é um parasito distribuído por todo o continente americano sendo considerado o principal agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). No presente estudo, o efeito do ferro sobre a proliferação, a ultraestrutura e a expressão protéica de L. (V.) braziliensis é analisado pelo uso do quelante 2,2-dipyridyl. A curva de crescimento de L. (V.) braziliensis foi afetada tanto pela concentração do quelante quanto pelo tempo de cultivo em meio depletado de ferro. Nos ensaios de citotoxicidade, a relação entre a intensidade da fluorescência e a concentração do quelante de ferro também foi dose dependente. As concentrações de 100, 140 e 180 µM de 2,2-dipyridyl afetaram significativamente a fluorescência emitida por ambos os isolados após 24 e 48 horas de incubação. Os valores da IC50 foram calculados após 24 e 48 horas e o isolado IOC-L 2483, relacionado à forma disseminada da LTA, foi escolhido para a realização de todos os ensaios subseqüentes. A análise ultraestrutural das formas promastigotas tratadas com 100 µM de 2,2-dipyridyl revelou grande dano a mitocôndria que sofreu perda da matriz e da crista e passou a apresentar estruturas membranares concêntricas em seu interior. A depleção de ferro também induziu a ruptura do complexo de Golgi e a intensa vacuolização citoplasmática. A análise de parasitos incubados com TMRE e PI por citometria de fluxo demonstrou que a depleção de ferro acarreta na dissipação do potencial de membrana mitocondrial embora não esteja associada permeabilização da membrana celular. A incubação dos parasitos com TUNEL demonstrou que a privação de ferro não acarreta em fragmentação do DNA nuclear. A análise dos extratos totais das formas promastigotas por eletroforese bidimensional e espectrometria de massas revelou que as proteínas que tiveram sua expressão aumentada ou diminuída após tratamento com o quelante estão relacionadas à manutenção da homeostase do ferro, ao metabolismo dos ácidos nucléicos e à indução de modificações pós traducionais. Nossos resultados demonstram que a depleção de ferro afeta a proliferação, a ultraestrutura e a expressão protéica de L. (V.) braziliensis, induzindo à disfunção mitocondrial e levando a morte do parasito. / Iron is an essential element for in vitro and in vivo survival of microorganisms, acting as a cofactor of several enzymes and playing a critical role in host-parasite relationship. Only the more virulent strains, endowed with effective mechanisms to acquire iron from healthy hosts can invade, colonize, multiply and establish infection. Leishmania (Viannia) braziliensis is a parasite widespread in the new world and considered to be the major etiological agent of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL). In the present study, the effect of iron on growth, ultrastructure and protein expression of L. (V.) braziliensis is analyzed by use of the chelator 2,2-dipyridyl. Growth curve of L. (V.) braziliensis was affected by both concentration of iron chelator and time of culture in depleted medium. In citotoxicity assays, the ratio between fluorescence intensity and concentration of iron chelator was also dose dependent. Concentrations of 100, 140 and 180 µM of 2,2-dipyridyl significantly affected the fluorescence emitted by both isolates after 24 and 48 hours of incubation. The IC50 values were calculated after 24 and 48 hours and IOC-L 2483, related to the disseminated clinical manifestation of the LTA, was chosen to perform all the subsequent assays. Ultrastructural analysis of treated promastigotes revealed a remarkable mitochondrial swelling with loss of cristae and matrix and presence of concentric membranar structures inside the organelle. Iron depletion also induced Golgi disruption and intense cytoplasmic vacuolization. Fluorescence- activated cell sorting analysis of tetramethylrhodamine stained parasites showed that 100 µM of 2,2-dipyridyl collapsed the mitochondrial membrane potential. Incubation of parasites with propidium iodide demonstrated that disruption of mitochondrial membrane potential was not associated with plasma membrane permeabilization. TUNEL labelling for DNA fragments was negative. Two dimensional electrophoresis and mass spectrometry analysis of whole extracts from promastigotes showed that proteins involved in homeostasis of iron, metabolism of nucleic acids and coordination of post-translational modifications suffered up- or down- regulation after treatment with the iron chelator. Our results show that iron depletion affects growth, ultrastructure and protein expression of L. (V.) braziliensis leading to mitochondrial dysfunction and cell death.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-05-24T14:53:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Lucas Fonseca Rodrigues.pdf: 1491783 bytes, checksum: 4c381c126501225055166afa8882ba08 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-24T14:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Lucas Fonseca Rodrigues.pdf: 1491783 bytes, checksum: 4c381c126501225055166afa8882ba08 (MD5) Previous issue date: 2012 / Apesar da busca por tratamentos alternativos para a Leishmaniose Cutânea (LC), os antimoniais pentavalentes (SbV) ainda permanecem como os fármacos mais amplamente usados no tratamento dessa doença. Eles podem ser eficazes e relativamente bem tolerados; entretanto, reações adversas graves e falha terapêutica ocorrem frequentemente. A possibilidade de a falha terapêutica estar associada a diferenças na sensibilidade ao SbV dos parasitos foi investigada utilizando-se, principalmente, análise de sensibilidade in vitro. Os resultados, até o momento, porém, são contraditórios. Portanto, faz-se necessária a busca por novos modelos de avaliação de sensibilidade a fármacos em Leishmania e por tratamentos alternativos que sejam menos tóxicos, como por exemplo, o desenvolvimento de formulações de uso tópico. Por isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade in vivo de Leishmania (Viannia) braziliensis isoladas de pacientes portadores de LC ao antimoniato de meglumina, bem como a atividade da combinação de uma baixa dose de SbV, considerando-se o modelo de hamsters dourados (Mesocricetus auratus), com aplicação tópica de uma formulação hidrofílica de paromomicina (PA). Para a análise de sensibilidade in vivo, hamsters foram infectados com 13 diferentes isolados e tratados com 50mg SbV/Kg/dia, durante 20 dias. Em comparação à resposta observada para a cepa de referência de L. (V.) braziliensis MHOM/BR/1975/M2903, todos os isolados mostraram-se sensíveis ao antimoniato de meglumina. Para a avaliação da combinação SbV + PA, hamsters foram infectados com três dos 13 isolados utilizados na análise de sensibilidade e com a cepa M2903 e separados em grupos que receberam esquemas terapêuticos de 25mg Sb V /Kg/dia, 25mg SbV/Kg/dia + PA e apenas PA, todos por 20 dias. Para esses isolados, a dose de 25mg SbV/Kg/dia, por 20 dias, por si só, foi eficaz na cicatrização dos animais, o que prejudicou a avaliação da eficácia da associação dessa dose com a aplicação tópica de PA, considerando o parâmetro tamanho de lesão. Porém, por outro lado, também evidenciou maior sensibilidade dos isolados ao antimoniato de meglumina. Considerando-se o parâmetro carga parasitária, a combinação dos fármacos foi eficiente para redução do parasitismo no sítio de lesão apenas em um dos isolados, quando comparada à ação dos fármacos isoladamente. Para a cepa M2903, a combinação SbV + PA mostrou-se eficaz na a redução do tamanho da lesão nos animais, mas não na redução da carga parasitária. / Despite the search for alternative treatments for cutaneous leishmaniasis (CL), the pentavalent antimonials (SbV) still remain the most widely used drugs in the treatment of this disease. They can be effective and well tolerated, but serious adverse reactions and therapeutic failure occur frequently. The relation between therapeutic failure and differences in sensitivity to SbV of parasites was investigated using in vitro sensitivity analysis mainly. The results until now, however, are inconclusive. Therefore, it is necessary to search for new models for evaluating drug susceptibility in Leishmania and for alternative treatments which are less toxic, such as the development of formulations for topical use. Therefore, the objective of this study was to evaluate the in vivo sensitivity of Leishmania (Viannia) braziliensis isolated from patients with CL to meglumine antimoniate, as well as the activity of the combination of low doses of SbV, considering the model of gold hamsters (Mesocricetus auratus), with a topical paromomycin (PA) hydrophilic formulation. For in vivo sensitivity analysis, 13 hamsters were infected with different isolates and treated with 50mg SbV /kg/day for 20 days. In comparison to response observed for the reference strain of L. (V.) braziliensis MHOM/BR/1975/M2903, all isolates were susceptible to meglumine antimoniate. To evaluate the combination SbV + PA, hamsters were infected with three of the 13 isolates used in the sensitivity analysis and the strain M2903 and separated into groups that received 25 mg SbV/kg/day, 25 mg/kg/day + PA and only PA, all for 20 days. For these isolates, the dose of 25 mg SbV /kg/day for 20 days, by itself, was effective for the lesion healing, which hampered the evaluation of the efficacy of this dose associated with the topical application of PA, considering the lesion size parameter. How ever, on the other hand, this result also showed increased sensitivity of the isolates to meglumine antimoniate. Considering the parasitic load parameter, the combination of the drugs was effective in reducing the parasitism at lesion site in only one of the isolates compared to the action of the drugs alone. For M2903 strain, the PA + SbV combination was effective in reducing lesion size but not in the reducing the local parasitic burden.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69451.pdf: 4079686 bytes, checksum: 9b991595fb0df78a519d167be0107efd (MD5) 69451.pdf.txt: 169969 bytes, checksum: 0558fd707963da6904db0fdbaf1ae42c (MD5) 69451.pdf.jpg: 1207 bytes, checksum: bcc7c08652d64972e962953f82606a29 (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / As leishmanioses são um complexo de doenças causadas por diferentes espécies de Leishmania cujas apresentações clínicas variam de acordo com a espécie do parasito envolvido na infecção e com o número de parasitos inoculados além das características imunológicas e genéticas do hospedeiro. Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal espécie envolvida na leishmaniose tegumentar Americana (LTA) e, apesar de sua grande importância, o conhecimento de sua imunopatogênese é baseado em estudos com pacientes. Poucos estudos foram conduzidos utilizando modelos experimentais de infecção por L. braziliensis, provavelmente devido à falta de uma linhagem murina que reproduza a infecção por esta espécie. O golden hamster representa o modelo experimental mais suscetível a espécies do subgênero Viannia, porém a ausência de reagentes imunológicos específicos para este modelo limita sua utilização. Além disso, os estudos disponíveis com o modelo apresentam diferentes protocolos de infecção utilizando diversas cepas em inóculos geralmente altos, levando a diferentes cursos clínicos da doença e culminando com a visceralização do parasito. Este estudo teve como objetivo investigar o inóculo ideal de L. braziliensis, em condições padronizadas, que garanta a infecção sem levar a uma doença exacerbada e analisar os aspectos clínicos e imunopatológicos associados a cada inóculo Para isto, grupos de cinco animais, em quatro experimentos independentes, foram infectados por via intradérmica com 104, 105 e 106 promastigotas de L. braziliensis. O desenvolvimento das lesões foi acompanhado por 105 dias e então fragmentos da pele inoculada, do linfonodo drenante, do baço além de soro foram coletados para avaliação da carga parasitária, expressão de citocinas, investigação da visceralização para o baço, análise histopatológica, e dosagem de IgG anti-Leishmania. Os resultados mostraram que o tempo de surgimento das lesões foi inversamente proporcional ao tamanho do inóculo e que o tamanho final das lesões variou entre os inóculos de 104 e 105 e entre 104 e 106, sem variação entre 105 e 106. O aspecto clínico das lesões também variou com o inóculo, onde os animais inoculados com 104 apresentaram lesões mais nodulares em contrapartida aos animais inoculados com 106, com lesões mais ulceradas. Apesar da diferença no número de parasitos inoculados, a carga parasitária foi a mesma entre os três inóculos. A expressão de citocinas e a dosagem de IgG anti-Leishmania apresentaram níveis elevados em todos os grupos analisados, porém sem diferenças estatísticas entre os diferentes inóculos. A análise histopatológica revelou envolvimento inflamatório leve na pele dos animais infectados com 104 enquanto os infectados com 105 e 106 apresentaram elevado grau de dano tecidual A visceralização foi diretamente proporcional ao tamanho do inóculo, pouco frequente no inóculo de 104, acometendo a maioria dos animais infectados com 106. Portanto, verificou-se que diferentes números de parasitos no inóculo exercem influência na evolução e na apresentação clínica da doença, no tamanho final da lesão e no grau de dano tecidual, porém não exerce influência na carga parasitária e na expressão de citocinas na lesão e no linfonodo e nos níveis de IgG anti-Leishmania. Estes resultados indicam que o inóculo de 104 gera lesão mais benigna e menor comprometimento sistêmico e que a modulação da resposta imune frente a diferentes números de parasitos inoculados ocorre na fase inicial da infecção e determina o estabelecimento e a magnitude da fase crônica da doença / Leishmaniasis are complex of diseases caused by different species of Leishmania which clinical presentation varies according to involved parasite species as well as the number of parasites inoculated, immunological and genetic characteristics of the host. Leishmania (Viannia) braziliensis is the main species involved in American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) and despite its great importance the majority of current knowledge about its immunopathogenesis comes from studies in patients. Few studies were conducted using experimental models of L. braziliensis, probably due to the lack of a susceptible murine model for this Leishmania species. The golden hamster appears as the most susceptible model for species from Viannia subgenus but the absence of specific commercial immunological reagents to this animal model limits its utilization. Besides that, the available studies have different infection protocols with variances in clinical features and the number of innoculated parasites is usually high, leading to the visceralization of Leishmania. This study aimed to investigate the innoculum that ensures infection without leading to an exacerbated disease in a well standardized innocula conditions and analyse the clinical and immunopathological features associated with each one. For that, groups of five animals in four independent experiments were intradermally infected with 104, 105 and 106 promastigotes from L. braziliensis. Lesion development was accompanied for 105 days and after that skin of infected site, draining lymph node, spleen and sera were collected for evaluation of final parasite load, spleen visceralization, cytokine expression, histopathological features and levels of IgG anti-Leishmania. Our results showed that outcome of skin lesions was inversely proportional to innoculum burden and that final lesion size varied among 104 and 105 or 106 infected animals, but not between 105 and 106 ones. Clinical aspects of lesions also varied with innoculum, which 104 animals presented more nodular lesions and 106 more ulcerated lesions. Despite difference in the number of parasites inoculated, final parasite load was the same among the three innocula. Cytokine expression and levels of anti-Leishmania IgG presented high levels in all infected animals, but with no statistical differences among different innocula. Histopathological analysis revealed a mild inflammatory involvement in skin of 104 infected animals, while 105 and 106 presented elevated degree of tissue damage. Finally, visceralization was directly proportional to the innoculum burden, less frequently observed in 104 infected animals, with high spleen commitment between 106 animals. In summary, different numbers of inoculated parasites influences disease outcome, clinical presentation, final lesion size and degree of tissue damage among innocula but not final parasite load, cytokine expression and IgG anti-Leishmania levels. These results indicates that 104 inoculum generates more benign lesions and a less systemic commitment and that modulation of immune response to different parasites innoculated occurs in the early phase of infection and dictates the establishment and magnitude of the chronic phase of disease.

Made available in DSpace on 2014-07-22T13:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf: 2136659 bytes, checksum: 65e880db1ab1d3e228d81f13c3c71081 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf.txt: 205495 bytes, checksum: f34784c76df3529d6b7191e82d533e3c (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf.jpg: 1358 bytes, checksum: 91aa2a1eacf705026ff4acca258f2bdc (MD5) Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / Pacientes com leishmaniose cutânea (LC) apresentam variada resposta à terapêutica com antimoniais pentavalentes, desde a cura clínica até a falha terapêutica e reativação da doença. Aspectos relacionados ao hospedeiro, aos parasitos, aos diferentes fármacos e aos diferentes esquemas terapêuticos podem influenciar nesse desfecho. No estado do Rio de Janeiro, tem sido relatada resposta terapêutica favorável a baixas doses de antimoniais (5mg Sbv/kg/dia). É possível que esse resultado esteja relacionado a características genéticas das subpopulações de Leishmania braziliensis que circulam nesse Estado. Neste estudo investigou-se a variabilidade genética e a sensibilidade in vitro ao antimoniato de meglumina de amostras de L. braziliensis, comparando isolados obtidos de pacientes com LC respondedores ou não respondedores ao tratamento com 5mg Sbv/Kg/dia. Foram estudadas amostras de pacientes diagnosticados no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses (Vigileish) do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas - Fundação Oswaldo Cruz entre 1999 e 2011. Utilizamos uma amostra de conveniência compreendendo 54 isolados recuperados do banco de cepas do Vigileish, as quais foram distribuídas em quatro subgrupos obedecendo a critérios de inclusão: RRJ) Respondedores ao primeiro curso de tratamento, com infecção adquirida no estado do Rio de Janeiro; NRRJ) Não respondedores ao primeiro curso de tratamento, com infecção no estado do Rio de Janeiro; ROE) Respondedores ao tratamento, com infecção adquirida em outros estados brasileiros e NROE) Não respondedores, com infecção em outros estados brasileiros A metodologia utilizada compreendeu inicialmente a caracterização das amostras pela técnica de isoenzimas e após, avaliação da sensibilidade ao antimoniato de meglumina por diluição limitante (DL50) utilizando formas promastigotas e análise da variabilidade genética por Low-Stringency Single-Specific-Primer (LSSP-PCR). Dados clínicos e laboratoriais relacionados ao diagnóstico dos pacientes e aos resultados obtidos neste estudo foram analisados estatisticamente por cálculos em Excel e usando o programa GraphPadPrism 5.0. Os níveis da dose letal de 50% (DL50) das amostras variaram, respectivamente, de 1.9 a 6.0 mg/mL e de 2.3 a 6.4 mg/mL para pacientes respondedores ao tratamento e para pacientes não respondedores, e os valores médios para cada grupo apresentaram diferença significativa (p=0,0007). A diferença se manteve quando os grupos foram analisados separadamente por local de origem Entretanto, não foi possível associar tal resultado a padrões genéticos dos parasitos estudados após análise dos dendrogramas gerados pela técnica de LSSP-PCR. Os valores médios da Intradermorreação de Montenegro (IDRM) foram significativamente maiores em pacientes respondedores (p= 0,0301). É possível que, no grupo estudado, fatores relacionados ao hospedeiro sejam mais importantes para variação da resposta terapêutica que os fatores genéticos do parasito e que o resultado da IDRM possa ser um indicativo de resposta terapêutica na LC / Patients with cutaneous leishmaniasis (CL) have varied response to the therapy with pentavalent antimonials, from clinical cure to therapeutic failure and reactivation of the disease. Aspects related to the host, to parasites, to different drugs and different therapeutic schemes can influence this outcome. In Rio de Janeiro State, good therapeutic response with low doses of antimonials (5 mg Sbv/kg/day) has been reported. It is possible that this result is related to genetic characteristics of Leishmania braziliensis subpopulations circulating in that State. This study investigated the in vitro sensitivity of samples of L. braziliensis to meglumine antimoniate, as well as their genetic variability, comparing isolates obtained from CL responder patients or unresponders to treatment with 5 mg Sbv/kg/day. These patients were diagnosed at the Leishmaniasis Surveillance Laboratory (Vigileish) at the Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas – Fundação Oswaldo Cruz, between 1999 and 2011, and parasite strains obtained from samples of their skin lesions were studied. We used a convenience sample comprising 54 isolated retrieved from the Vigileish archived strains, which were distributed in four subgroups according to the following inclusion criteria: RRJ) Responders to the first course of treatment, with infection acquired in the State of Rio de Janeiro; NRRJ) Unresponders to the first course of treatment, with infection in the State of Rio de Janeiro; ROE) Responders to the treatment, with infection acquired in other Brazilian States and NROE) Unresponders, with infection in other Brazilian States. The methodology comprised initially the characterization of the samples by isozymes technique and after, assessment of sensitivity to meglumine antimoniate by limiting dilution using promastigote forms and analysis of genetic variability by Low- Stringency- Single-Specific Primer (LSSP-PCR). Clinical and laboratory data related to diagnosis of patients and the results obtained in this study were statistically analyzed through Excel calculations and using the program Graph Pad Prism 5.0. The levels of the 50% lethal dose (LD50) of the samples varied from 1.9 to 6.0 mg/mL and from 2.3 to 6.4 mg/mL for Responder patients and for Unresponder patients, respectively, and the results for each group presented significant difference (p = 0.0007). The difference persisted when the groups were analyzed separately according to the origin location. However, it was not possible to associate this result to the parasites genetic patterns after analysis of dendrograms generated by the LSSP-PCR technique. The average values of Montenegro Skin Test (MST) were significantly higher in Responder patients (P = 0.0301). It is possible that, in the studied groups, host-related factors are more important for variation of therapeutic response than the parasite genetic factors, and the result of MST can be an indication of the therapeutic response in CL.

Made available in DSpace on 2014-12-22T16:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mirian_melgares_ipec_mest_2012.pdf: 999218 bytes, checksum: 95c75bcb7288ee30a20fc9109f4e84c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Na atualidade o tratamento de escolha para a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) continua sendo os antimoniais pentavalentes com doses de 10 a 20mg Sb5+/kg/dia, apesar dos relatos de baixa efetividade e de elevado número de efeitos adversos, inclusive óbito. Este estudo teve como objetivo descrever e comparar a efetividade e a segurança dos esquemas contínuo e intermitente com antimoniato de meglumina na dose de 5mg Sb5+/Kg/dia para o tratamento de pacientes com a forma mucosa ou cutâneomucosa (LM/LCM) da LTA. Trata-se de um estudo descritivo e retrospectivo, tipo série de casos acompanhados longitudinalmente. Os dados foram coletados dos prontuários dos pacientes com LM/LCM atendidos no Serviço de Otorrinolaringologia do Laboratório de Vigilância em Leishmanioses-Instituto de Pesquisa Evandro Chagas,Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil, entre 1º de outubro de 1998 e 31 de setembro de 2008 e tratados com baixa dose de antimoniato de meglumina, de forma contínua ou intermitente (em séries com intervalos de 10 dias de descanso) Nesse período, 102 pacientes apresentaram LM/LCM. Destes, 63 (61,8%) foram incluídos neste estudo. A maioria dos pacientes eram homens com provável local de infecção na região Sudeste do Brasil. Tanto o acometimento nasal quanto a forma cutâneo-mucosa concomitante foram os mais frequentes. Os pacientes submetidos ao tratamento em séries eram na maioria mais idosos e com mais comorbidades. Ambos os esquemas terapêuticos apresentaram boa efetividade com reduzido número de efeitos adversos. Mesmo nos pacientes com necessidade de retratamento, estes esquemas se mantiveram bem tolerados e eficazes, com 95,2% de sucesso terapêutico. Em ambos os grupos de tratamento a dose de 5mg Sb5+/kg/dia se mostrou eficaz e segura, sem indício de resistência ao antimoniato de meglumina nem de indução a falha terapêutica no retratamento dos pacientes com Anfotericina B / At the present time, the treatment of choice for American Tegumentary Leishmaniasis (LTA) continues being the pentavalent antimony with doses of 10 20mg Sb5+/kg/day, althoug h the stories of low effectiveness and the raised number of adverse effects, including death. This study had as objective to describe and to compare the effectiveness and the security of continuous and intermittent treatment with Meglumine Antimoniate in the dose of 5mg Sb5+/Kg/day in patients with the mucous form or cutaneous - mucosal (LM/LCM) of the LTA. It is a descriptive and retrospective study, type series of longitudinally followed cases. The data had been collected of handbooks of patients with LM/LCM taken care in Otolaringology Service of the Laboratory of Monitoring in Leishmaniosis - Pesquisa Evandro Chagas Institude, Oswaldo Foundation Cross, Rio De Janeiro, Brazil, between 1º of October, 1998 and 31 of September, 2008 and treated with lo w dose of meglumine antimoniate, of continuous or intermittent form (in series with intervals of 10 days of rest). In this period, 102 patients had presented LM/LCM. Of these, 63 (61.8%) had been enclosed in this study. The majority of the patients were me n with probable place of infection in the Southeastern region of Brazil. Both the nasal involvement and mucocutaneous form were the most frequent concomitant . The patients submitted to the treatment in series were older in the majority and with much more c omorbidity. Both treatment presented good effectiveness with reduced number of adverse effects. Although, in the patients when retreat was necessity, these treatments were well tolerated and efficient, with 95,2% of the terapeutical success. In both groups the dose of 5mg Sb5+/kg/ day showed efficient and insurance; without indication of resistance to the meglumine antimoniate nor induction to the therapeutical imperfection in the retreat of the patients with Anphotericin B

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T13:34:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T13:34:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T16:14:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T16:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente, e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré-codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação (IDR), exames parasitológicos ( exame direto, fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP). Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes, durante e no final do tratamento com antimónio pentavalente meglumina. Doses de 15 mg/kg/dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea) e 20 mg/kg/dia durante 30 dias ( leishmaniose mucosa) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes, com maior ocorrência nas áreas conhecidas como "Brejo Mata Fome" (47,5% casos) e "Itapicuru" ( 43,8% dos casos). A distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7%) e mulheres (48,3%) . Idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos. Os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. Maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%). O tempo entre o início da lesão eo diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses. Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente. Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%) apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas. Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co-infecções, número, tamanho, aparência e localização das lesões, tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis. Após 20 dias de tratamento, epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5, IC 95 % = 2,0-21,7) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes (73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não-cicatrizadas houve uma associação entre a falha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3), uso de medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses (OR = 6,3, IC95% = 1,1-36,7). Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que com este estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá. / The Xakriabá indigenous community located in the municipality of São João das Missões, north of Minas Gerais has recorded, since 2001, cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL). This study aimed to describe the cases identified from June 2008 to September 2010, as well as treat and monitor their clinical course for 12 months after the end of treatment. Suspected cases were identified in a population survey and by indigenous health agents. After signing the Informed Consent Form, patients were interviewed and clinically evaluated, and the information was recorded in structured and pre-coded questionnaires. The diagnosis was confirmed by intradermal reaction assays (IDR), parasitological exams (direct examination, fragment from biopsy or aspirate culture and molecular techniques (PCR-RFLP). The confirmed diagnoses were those which tested positive for at least one of the tests. Hematological, biochemical and electrocardiographic (ECG) tests were performed before, during and at the end of treatment with pentavalent antimony Meglumine. Doses of 15 mg / kg / day for 20 days (cutaneous leishmaniasis) and 20 mg / kg / day for 30 days (mucosal leishmaniasis) were used. Among the 94 patients with skin lesions evaluated, 89 were confirmed as LTA and 60 treated and monitored. The cases came from five existing areas, with higher occurrence in the areas known as “Brejo Mata Fome" (47.5% cases) and "Itapicuru "(43.8% cases). The distribution of cases was similar among men (51.7%) and women (48.3%). Patients’ ages ranged from 1 to 72 years old, with the median of 18. The cases occurred predominantly among rural workers earning less than the minimum wage. Most of the patients presented atypical lesions (70.1%) and a single lesion (60.7%). The time between the onset of injury and diagnosis ranged from less than one month to 72 months. There were no contraindications for using pentavalent antimony. Sixty patients were treated, and after the 20th day, 24 (40.0%) presented lesions which were completely epithelialized while others presented partially healed ones. These two groups were compared for demographic characteristics, co-infections, number, size, appearance and location of lesions, time of onset of symptoms, bacterial infections, use of homemade or commercial medications, size of induration, discontinuation of treatment, results of diagnostic tests and Leishmania braziliensis genotypes. After 20 days of treatment, complete epithelialization was associated with lesions partially epithelialized in the first clinical examination (OR = 6.5, CI 95% = 2.0-21.7) and bacterial infection (OR = 0.1, CI 95% = 0.0-0.7). An evaluation carried out 90 days after the end of the treatment indicated that 44 patients (73.3%) presented completely epithelialized lesions. When these patients were compared to the nonhealed ones, there was an association between treatment failure and previous LTA in the past (OR = 8.2, IC 95% = 1.5-46.3), use of homemade medication (OR = 7.10, CI 95% = 1.6-71.9) and time of onset of symptoms greater than 8 months (OR = 6.3, CI95%= 1.1-36.7). Six (10%) relapses cases were observed. Among the 60 patients treated, 35 had not completed one year of monitoring at the time of data analysis. The objective of this study is to expand knowledge regarding LTA and to contribute to improving the diagnosis and treatment of the disease in the Xakriabá indigenous community.