Uma das formas de se quantificar os possíveis efeitos de metais sobre o estado de saúde de organismo é analisar os biomarcadores do estresse oxidativo. Bioensaios foram realizados com a tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) com concentrações de cádmio (4,25 \'mü\'g/L), cobre (45,0 \'mü\'g/L ) e zinco (260,0 \'mü\'g/L). Os peixes foram expostos aos metais separados (\'CD\', \'CU\' e \'ZN\'), associados dois a dois (\'CD\'/\'CU\', \'CD\'/\'ZN\' e \'CU\'/\'ZN\') e aos três metais juntos (\'CD\'/\'CU\'/\'ZN\'), por doze dias. Foram retiradas amostras de rim, fígado e brânquias para análise de biomarcadores de estresse oxidativo, a superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx), o efeito da peroxidação de lipídios (HP), a glutationa S-transferase (GST) e a metalotionéina (MT). Pelos reusltados obtidos constatou-se que, mesmo nas baixas concentrações de exposição aos metais, ocorreram alterações no sitema de defesa antioxidante de O. niloticus. A primeira barreira antioxidante, composta pela SOD, não foi suficiente para barrar os efeitos da exposição aos metais. Em brânquias, onde a ativação desta enzima foi proeminente, formação de HP ocorreu. E, mesmo inicialmente em rim e fígado, tecidos onde ocorreu diminuição da atividade da SOD, ocorreu também a formaçao de HP nas etapas seguintes. A CAT e a GPx também atuaram no sentido de tentar evitar o aparecimento de HP, mas não foram bem sucedidas neste processo. A GST, como enzima da fase II de biotransformação pode ter auxiliado no processo de eliminação dos metais, mas como ocorre de forma tardia em relação à defesa antioxidante, acarretando danos celulares. Em relação às enzimas que compõem o sistema de defesa antioxidante não se verificou também especificidade de tecidos nas respostas. No entanto, a brânquia foi o órgão que teve maior intensidade nas respostas (em termos de ativação das enzimas), nos tratamentos de metais combinados dois a dois, evidenciando que este órgão, por estar em contato com a água e ser sede de processos fisiológicos de homeostase, desempenhou papel importante na tentativa de neutralizar os efeitos dos metais. / One way of quantifying metals effects upon organisms\' health state is to analyse oxidative stress biomarkers. Bioassays were conducted with Nile tilapia (Oreochromis niloticus) with cadmium (4,25 \'mü\'g/L), copper (45,0 \'mü\'g/L ) and zinc (260,0 \'mü\'g/L). Fishes were exposed to metals separatelly (\'CD\', \'CU\' e \'ZN\'), associated two by two (\'CD\'/\'CU\', \'CD\'/\'ZN\' e \'CU\'/\'ZN\') and to three metals together (\'CD\'/\'CU\'/\'ZN\'), for twelve days. Gills, liver and kidney samples were taken to analyse oxidative stress biomarkers, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx), the effect of lipid peroxidation (HP), an enzyme of phase II biotransformation, glutathione S-transferase (GST) and metallothionein (MT). From results obtained, it was stablished that, even in low concentrations of metals, O. niloticus antioxidant defense system was modified. The first antioxidant barrier, SOD, wasn\'t able to minimize metal exposition effects. In gills, where activaton of this enzyme was prominent, didn\'t avoi HP formation. And even in liver and kidney, tissues where SOD activity decreased, HP formation also occurred. CAT and GPx also acted trying to avoid HP formation, but weren\'t successfull. GST, like a phase I enzyme, could help eliminating metals, but in a late moment in relation to antioxidant defense, leading to cell damage. For antioxidant enzymes no relation to tissue-specificity response was observed. But gills were the organ which had more intense responses (in terms of enzyme activation), mainly in metals combined two by two, evidencing that gills are important like a first organ in antioxidant defense because it is in direct contact with water and determine the main processes in homeostasis, trying to neutralize metals effects.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The antioxidant properties of selenium organic compounds have been largely investigated in the last decades, especially because the oxidative stress is directly related to various chronic-degenerative deseases. However, a few studies verify the action of nucleophlilic or electrophilic radicals on the protective activity of selenium compounds. In this work, it was evaluated the influence of different substituent radicals on the antioxidant activities of β-selenoamines. The capacity of β-selenoaminas in mimicry the glutathione peroxidase (GPx) activity and/or be substrate to the hepatic thioredoxinereductase (TrxR) enzyme were also investigated in experimental modelsin vitro.In DPPH assay, the β-selenoamines tested did not show antioxidant activity when compared to acorbic acid (AA). However, similar to compound (PhSe)2, the β-selenoamines with p-methoxy and tosylradicals were effective in preventing the lipid peroxidation induced by Fe2SO4. The compounds with other radicals did not exhibit the same activity. The β-selenoamine with the substituent group p-methoxy also showed mimetic activity to GPx and was reduced by hepatic TrxR. Furthermore, a positive correlation was observed among these parameters to β-selenoamines, which was not found in the results obtained with (PhSe)2. The data of this work show the influence of different substituent radicals on activity of organic selenium compounds and point the use of β-selenoaminas as pharmacological promissor compounds in in vivo experimental models. / As propriedades antioxidantes de compostos orgânicos de selênio têm sido amplamente investigadas nas últimas décadas, especialmente pelo fato do estresse oxidativo estar diretamente relacionado a uma grande variedade de doenças crônico-degenerativas. Contudo, poucos estudos têm verificado a ação exercida por radicais nucleofílicos ou eletrofílicos na atividade protetora de compostos de selênio. Neste trabalho foi avaliada a influência de diferentes radicais substituintes sobre a atividade antioxidante de β-selenoaminas. A capacidade das β-selenoaminas em mimetizar a atividade da glutationa peroxidase (GPx) e/ou serem substratos para a enzima tiorredoxina redutase hepática (TrxR) também foram investigadas em modelos experimentais in vitro. No ensaio de DPPH , as β-selenoaminas testadas não apresentaram atividade antioxidante quando comparadas ao ácido ascórbico (AA). Contudo, assim como o composto disseleneto de difenila (PhSe)2, as β-selenoaminas com grupos p-metóxi e tosil na estrutura foram efetivas em prevenir a peroxidação lipídica induzida por Fe2SO4. Os compostos com outros radicais não apresentaram a mesma atividade. A β-selenoamina com o grupo substituinte p-metóxi também apresentou atividade mimética à GPx e foi reduzida pela TrxR hepática. Além disso, uma correlação positiva foi encontrada entre estes parâmetros para as β-selenoaminas; o que não foi observado quando considerados os resultados obtidos com o composto (PhSe)2. Os dados do presente trabalho mostram a influência de diferentes radicais substituintes na atividade de compostos orgânicos de selênio, bem como, aponta o uso de β-selenoaminas como compostos promissores farmacologicamente em modelos experimentais in vivo.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3640.pdf: 5869617 bytes, checksum: 4643e7ab6ff128afd74bd3d51d8588f3 (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / Financiadora de Estudos e Projetos / This study, based on molecular docking, describes the search for the most favorable conformations when complexes between herbicides, used in soybean cultivation, and an enzyme involved in the detoxification process are formed and based on these results some guidelines for the developing of new compounds are proposed. The glutathione transferase Tau, GmGSTU4-4, from soybean was the target protein, and diclofop, fluazifop, Clethodim, clomazone, diquat, paraquat, atrazine, diuron, bentazone, acifluorofem, fomesafem, sulfentrazone, glyphosate and clorimurom, the 14 herbicides studied. These last ones were chosen based on the list of those that are used in soybean crops and are registered with the Ministry of Agriculture and Supply of Brasil. For all of them the GmGSTU4-4-herbicide complexes were obtained. The protein binding site, analyzed by molecular visualization, presents an almost cylindrical shape, open and exposed to the solvent and is composed of two sites G and H. Three water molecules were observed in the G-site in that participate in molecular interactions with several of the studied herbicides, This finding suggests that new compounds that could, and should, be developed need to have in their structure chemical groups capable of interacting with the water, both as donors and acceptors of hydrogen bonds. Another interesting finding was that the largest herbicides may occupy both the G and H sites, and seem to be most promising in the activity of detoxification. / Este estudo, baseado em docking molecular, descreve a busca das conformações mais favoráveis para a formação dos complexos alvo-ligante com herbicidas utilizados no cultivo de soja e uma enzima envolvida no processo de desintoxicação, e baseado nestes resultados são propostas algumas diretrizes para o desenvolvimento de novos compostos. A proteína estudada foi a glutationa transferase Tau de soja, a GmGSTU4-4. Foram estudados 14 herbicidas: diclofope, fluazifope, cletodim, clomazona, diquate, paraquate, atrazina, diurom, bentazona, acifluorofem, fomesafem, sulfentrazona, clorimurom e glifosato. A escolha dos herbicidas se baseou na lista daqueles que são utilizados na cultura da soja e estão registrados no Ministério da Agricultura e Abastecimento do Brasil. Foram obtidos os complexos GmGSTU4-4-herbicidas. O sítio de ligação analisado por visualização molecular mostra uma forma quase cilíndrica, aberta e exposta ao solvente e composto de dois sítios G e H. No sítio G foram observadas três moléculas de água que participam de interações moleculares com vários dos herbicidas estudados o que sugere que novos compostos poderiam ser desenvolvidos observando a necessidade da presença de grupos químicos capazes de interagir com a água, tanto como doadores como aceptores de ligações de hidrogênio. Os herbicidas maiores podem ocupar os sítio G e H e parecem ser mais promissores na atividade de desintoxicação.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-15T17:49:26Z No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:27:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:28:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / This project aims to investigate the TiO2-NP toxicity after acute (48 h) and subchronic (14 d) exposure using hematology, biochemical and morphological biomarkers in P. lineatus. TiO2- NP only caused blood disorders after subchronic exposure and did not show geno- and neurotoxicity, but they affected the immunity of P. lineatus. In gills, acute exposure to TiO2- NP decreased reactive oxygen species (ROS) formation and increased glutathione (GSH) levels, while subchronic exposure increased ROS and GSH levels and inhibited superoxide dismutase (SOD) activity. In kidney, acute exposure to TiO2-NP did not cause ROS formation and changes in antioxidant enzymes activity, but increased GSH and lipid peroxidation (LPO) levels. Subchronic exposure inhibited catalase activity in kidney tissue, but redox balance was not impaired. In the liver, acute exposure to TiO2-NP did not alter the antioxidant enzymes activity and metallothionein levels, but ROS formation decreased and GSH levels increased. After subchronic exposure, SOD activity did not change, but GPx and GST activity and GSH levels increased in the liver. Additionally, morphological damage was found in gills, liver and kidneys. Gills showed slight changes after acute exposure and slight to moderate changes after subchronic exposure. In kidney and liver tissue, degenerative changes and necrosis occurred after TiO2-NP exposure. TiO2-NP also inhibited enzymes of osmoregulation activity in gills after acute exposure, but had no effect after subchronic exposure and in renal tissue. Mitochondria-rich cells (MRC) density increased in gill filaments and renal tissue after subchronic exposure, while plasma osmolality decreased and calcium ions (Ca2+) concentration increased after acute exposure. Osmolality, however, was restored after subchronic exposure. These results suggest that GSH played an important role in preventing ROS formation. In liver and kidneys, TiO2-NP can cause moderate to severe tissue damage the long term, may lead to organ dysfunction, as considerable portion of the organ was reduced due to necrosis and degenerative damage. Osmoregulatory system impairment was caused after acute exposure to TiO2-NP, but no after subchronic exposure, probably due to proliferation of new MRC and morphological changes in gills. However, these morphological changes may hinder gases exchange and osmotic and ionic balance in the long term. / O presente projeto teve como objetivo investigar a toxicidade das NP-TiO2 após exposição aguda (48 h) e subcrônica (14 d) utilizando biomarcadores de hematologia, bioquímicos e morfológicos em P. lineatus. As NP-TiO2 causaram distúrbios hematológicos apenas após exposição subcrônica e não mostraram genotoxicidade e neurotoxicidade, porém afetaram a imunidade dos animais. Nas brânquias, a exposição aguda a NP-TiO2 diminuiu a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e aumentou os níveis de glutationa (GSH), enquanto a exposição subcrônica aumentou as ERO e os níveis de GSH e diminuiu a atividade da superóxido dismutase (SOD). Nos rins, a exposição aguda a NP-TiO2 não causou formação de ERO e alteração na atividade das enzimas antioxidantes, porém causou um aumento nos níveis de GSH e lipoperoxidação (LPO). Após exposição subcrônica a atividade da catalase diminuiu sem causar desbalanço oxidativo. No fígado, a exposição aguda a NP-TiO2 não alterou as enzimas antioxidantes e metalotioneína, mas causou diminuição de ERO e aumento de GSH. Após exposição subcrônica ocorreu uma diminuição na atividade da SOD e aumento da atividade das enzimas GPx e GST e do conteúdo de GSH no fígado. Danos morfológicos também foram encontrados em brânquias, fígado e rins. As brânquias mostraram alterações leves após exposição aguda e alterações leves e moderadas após exposição subcrônica. No tecido renal e hepático, mudanças degenerativas e necrose ocorreram após exposição a NPTiO2. As NP-TiO2 inibiram a atividade das enzimas com função de osmorregulação branquiais após exposição aguda sem nenhuma alteração após exposição subcrônica e no tecido renal. A densidade de células ricas em mitocôndrias (CRM) aumentou nos filamentos branquiais e tecido renal após exposição subcrônica, enquanto a exposição aguda diminuiu a osmolalidade plasmática e aumentou a concentração de íons cálcio (Ca2+). No entanto, a osmolalidade foi restabelecida após exposição subcrônica. Esses resultados sugerem que a GSH pode ser uma das principais vias no combate as ERO. No fígado e nos rins, as NP-TiO2 podem causar danos moderados a severos no tecido que podem levar à perda da função do órgão em longo prazo, uma vez que a porção do tecido funcional reduziu devido aos danos degenerativos e necrose. Desequilíbrio osmorregulatório foi causado pela exposição aguda a NP-TiO2, mas não após exposição subcrônica devido à proliferação de novas CRM e mudanças morfológicas nas brânquias. No entanto, essas mudanças morfológicas podem dificultar a troca de gases e o equilíbrio osmótico e iônico em longo prazo.

Made available in DSpace on 2016-12-06T17:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Schveitzer.pdf: 1403767 bytes, checksum: 300f03a4ead7ff7b06f9329650147535 (MD5) Previous issue date: 2012-03-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to investigate the effects of an acute dose of NAC as a possible modulator of a large number of markers of oxidative stress and tissue damage in volleyball athletes. Was conducted with 18 young athletes who performed their regular training without the use of antioxidant supplementation, where they underwent an intense training session of volleyball under the effect of Nac (1200mg) or placebo, and measured the biochemical markers before and after exercise. There were no significant changes in markers of oxidative stress and tissue damage. An interesting finding was observed that the amount of vitamin C showed high and may have masked the results of physical exercise and placebo. The ingestion of two doses of 600 mg of NAC is not sufficient to promote antioxidant and / or the protective tissue damage. / Este estudo objetivou investigar os efeitos de uma dose aguda de NAC, como possível modulador de um amplo número de marcadores de estresse oxidativo e de dano tecidual em atletas de voleibol. Foi realizado com 18 atletas juvenis que realizavam seu treinamento regular sem o uso de suplementação com antioxidantes, onde foram submetidos a uma sessão de treinamento intenso de voleibol, sob efeito de Nac (1200mg) ou placebo, sendo mensurados os marcadores bioquímicos pré e pós-exercício. Não houve alterações significativas nos marcadores de estresse oxidativo e de dano tecidual. Um dado interessante foi observado que a quantidade de Vitamina C apresentou elevada, podendo ter mascarado os resultados do exercício físico e placebo. A ingestão de duas doses de 600mg de NAC não é suficiente para promover efeito antioxidante e/ou protetivo a danos teciduais.

Submitted by LILIAN XAVIER DA SILVA null (lilianx1104@hotmail.com) on 2017-09-17T19:38:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Lilian Xavier da Silva.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-09-19T18:37:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lx_me_araca.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T18:37:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lx_me_araca.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / A doxorrubicina (DXO) é eficaz contra diferentes formas de câncer, em adultos e crianças, porém seu uso pode causar cardiotoxicidade aguda e crônica, associada ao aumento do estresse oxidativo. Alguns antioxidantes naturais demonstraram ser eficazes em minimizar esses efeitos da DXO, no entanto, o chá mate (CM), não foi avaliado neste contexto. Nossa hipótese é que o pré-tratamento com CM por 30 dias, reduz o dano oxidativo agudo no coração e assim preserva a função cardíaca. Para testar essa hipótese, foram investigados os efeitos do pré-tratamento diário de ratos Wistar machos com 40 mg/kg m.c. de CM, contra a cardiotoxicidade aguda induzida por DXO. Para a escolha da dose de CM ratos Wistar foram divididos em grupo tratados com doses diferentes de chá (10, 20 e 40 mg/m.c., gavagem) e DXO (grupos CM + DXO). Os grupos controle (C), tratados com DXO (DXO) receberam água (1,0 mL, gavagem). Os grupos receberam CM solúvel diluído em água (8 mg/mL). No 29° do tratamento com CM, administrou-se uma dose de DXO (15 mg/kg m.c. - IP) aos grupos DXO e CM + DXO. No 31° dia, após administração de tiopental (50 mg/kg m.c.) associado à lidocaína (4,0 mg/kg m.c.), foram submetidos ao eletrocardiograma (ECG) antes da punção cardíaca (Autorização CEUA FOA: 416/2015). Creatina quinase total (CK) e a fração MB (CK-MB), foram estimadas no plasma. No homogenato de coração (KCl 1,15% m/v) foram quantificadas as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), glutationa (GSH), atividade de superóxido dismutase total (SOD) e da isoforma SOD1, e expressões de SOD1, Akt total e p-Akt, por western blotting. O pré-tratamento com 40 mg/kg m.c. de CM preveniu o aumento da frequência cardíaca, o prolongamento do intervalo QTc e PR, o aumento de CK e CK-MB e de TBARS. Também preveniu a redução de GSH, SOD e SOD1. Além disso, o aumento da relação p-Akt/Akt. Concluímos que o pré-tratamento com 40 mg/kg m.c. CM previne o dano oxidativo cardíaco agudo induzido pelo DXO, preservando a função cardíaca. / Doxorubicin (DXO) is effective against different forms of cancer in adults and children, but its use may cause acute and chronic cardiotoxicity associated with increased oxidative stress. Some natural antioxidants have been shown to be effective in minimizing the effects of DXO; however, mate tea (CM), has not been evaluated in this context. Our hypothesis is that CM pretreatment for 30 days, reduces acute oxidative damage in the heart. To test this hypothesis, the effects of daily pretreatment of male Wistar rats at 40 mg / kg m.c. of CM, against acute cardiotoxicity induced by DXO were investigated. For the choice of CM dose, Wistar rats were divided into groups treated with different doses of tea (10, 20 and 40 mg / mc, gavage) (CM + DXO groups). Groups control (C), treated with DXO (DXO) received water (1.0 mL, gavage). The CM + DXO groups received soluble CM diluted in water (8 mg / mL) during the same period. At 29 ° of CM treatment, DXO and CM + DXO groups were given a dose of DXO (15 mg / m.c.-IP). On the 31st day, after administration of lidocaine (4.0 mg / kg mc) thiopental (50 mg / kg mc), all rats were submitted to electrocardiogram (ECG) prior to cardiac puncture (CEUA FOA Authorization: 416 / 2015). Total creatine kinase (CK) and MB fraction (CK-MB) were estimated in plasma. The thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), glutathione (GSH), total superoxide dismutase (SOD) activity and the cytoplasmic isoform SOD1, in addition to SOD1 expression, were quantified in the heart homogenate (KCl 1.15% m / v) , Total Akt and p-Akt, by western blotting. Pretreatment with 40 mg / kg m.c. of CM prevented a increased heart rate, prolongation of the QTc and PR interval, increase in plasma CK and CK-MB, and TBARS in the tissue. It also prevented the reduction of GSH, SOD and SOD1. In addition, the increase in the p-Akt / Akt ratio observed after DXO was not observed in rats pretreated at 40 mg / kg m.c. of CM. We conclude that pretreatment with 40 mg / kg m.c. CM prevents acute cardiac oxidative damage induced by DXO, preserving cardiac function.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GinaMMC.pdf: 1174181 bytes, checksum: 37699ea266658587623a87a8fcd376f3 (MD5) Previous issue date: 2008-01-30 / Schistosomiasis is an ancient disease caused by helminth Schistosoma mansoni and is a public health problem in Brazil. The granulomatous lesion, typical of the disease, associates itself with increase in the oxidative damage through the generation of free radicals. The aim of this work was to evaluate the occurrence of changes in parameters oxidant / antioxidant that are part of the human defense system, and observe whether they would cause oxidative stress in subjects with schistosomiasis. Moreover, correlating with some biochemical and hematological parameters. Two groups were selected for study, consisting of individuals of both sexes, aged between 16 and 30 years. A control group, formed by individuals without schistosomiasis (n = 30) and a test group, formed by individuals with schistosomiasis (n = 30). The evaluation of lipid peroxidation in plasma was performed by determination of malondialdehyde and antioxidant defense by the quantification of reduced glutathione and catalase activity. For the parameters that assess oxidative stress, the results showed a decrease in the content of reduced glutathione and no change in the activity of catalase, with an increase in the value of malondialdehyde. Therefore, the data found suggest the occurrence of oxidative stress in subjects with schistosomiasis. Of the parameters that assess hepatic function, only levels of aspartate aminotransferase have been high, while there was a decrease of bilirubine. There was a significant change in the lipid profile (p <0.5), however with regard to the renal function of patients, there was a decrease in creatinine. The assessment hematological, made through hemogram and the quantification of hemoglobin, shows increase of eosinophils individuals in the group test, which can be related to the presence of the parasite. The amendments suggest the involvement of oxidative stress in the pathophysiology of this disease / A esquistossomose ? uma doen?a milenar causada pelo helminto Schistosoma mansoni e constitui um problema de sa?de p?blica no Brasil. A les?o granulomatosa, t?pica da doen?a, est? associada com o aumento do dano oxidativo atrav?s da gera??o de radicais livres. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorr?ncia de altera??es nos par?metros oxidante/antioxidante que fazem parte do sistema de defesa do organismo, e observar se os mesmos provocariam estresse oxidativo em indiv?duos com esquistossomose. Al?m disso, correlacionando com alguns par?metros bioqu?micos e hematol?gicos. Foram selecionados dois grupos de estudo, constitu?dos de indiv?duos de ambos os sexos, com faixa et?ria compreendida entre 16 e 30 anos. Um grupo controle, formado por indiv?duos sem esquistossomose (n=30) e um grupo teste, formado por indiv?duos com esquistossomose (n=30). A avalia??o da peroxida??o lip?dica no plasma foi realizada por meio da determina??o do malondialde?do e a defesa antioxidante pela dosagem da glutationa reduzida e determina??o da atividade da catalase. Em rela??o aos par?metros que avaliam o estresse oxidativo, os resultados demonstraram uma diminui??o do conte?do de glutationa reduzida e nenhuma altera??o na atividade da catalase, com um aumento nos valores de malondialde?do. Portanto, os dados encontrados sugerem a ocorr?ncia do estresse oxidativo nos indiv?duos com esquistossomose. Dos par?metros que avaliam a fun??o hep?tica, apenas os n?veis de aspartato amino transferase mostraram-se elevados, enquanto ocorreu uma diminui??o da bilirrubina. N?o houve uma altera??o significativa no perfil lip?dico (p<0.5), entretanto com rela??o ? fun??o renal dos pacientes, houve uma diminui??o da creatinina. A avalia??o hematol?gica, realizada atrav?s do hemograma completo e a dosagem da hemoglobina, mostra eosinofilia nos indiv?duos do grupo teste, que pode estar relacionada com a presen?a do parasita. As altera??es apresentadas sugerem a participa??o do estresse oxidativo na fisiopatologia da referida doen?a

A exposição ao chumbo ainda permanece como um sério problema de saúde pública, especialmente nos países em desenvolvimento como o Brasil. Apesar do número crescente de estudos mostrando déficits neurocomportamentais em indivíduos expostos ocupacionalmente ao chumbo, os mecanismos envolvidos com a manifestação destes transtornos permanecem pouco conhecidos. Desta forma, o uso de modelos animais abre grandes possibilidades, não somente de investigação dos mecanismos biológicos envolvidos com a toxicidade do chumbo, mas também na elaboração de estratégias para proteção e/ou reversão dos seus efeitos. Portanto, o objetivo central deste trabalho foi avaliar o potencial do comportamento rotacional, medido em testes de nado livre, como um modelo em roedores para estudo dos efeitos neurocomportamentais da exposição ao chumbo durante a vida adulta. Para tanto, foram realizados três estudos. No primeiro, avaliamos os efeitos da exposição subcrônica (60-90 dias) ao chumbo sobre a atividade locomotora no teste de nado livre e em um teste tradicionalmente utilizado para avaliar a ação de substâncias neurotóxicas sobre a locomoção, o campo aberto. Enquanto no campo aberto não foram encontradas diferenças significativas entre o grupo exposto e o grupo controle, no teste de nado livre, os animais expostos ao chumbo apresentaram maior atividade natatória e menor quantidade de alternâncias espontâneas no sentido de natação que o grupo controle. No segundo estudo, observamos que a magnitude dos efeitos do chumbo no teste de nado livre variou em função da consistência da lateralidade, sendo os resultados mais pronunciados no grupo de animais não consistentes (com menor lateralidade). Nos dois estudos, os efeitos do chumbo foram independentes do nível de chumbo em sangue (PbS) dos animais expostos. No terceiro estudo, mostramos um aumento dos níveis de glutationa oxidada no cérebro somente no grupo de animais com PbS acima de 60 &#956;g/dL. Com base nestes resultados, podemos concluir que: 1) O comportamento rotacional medido em teste de nado livre é um modelo interessante para estudar os efeitos neurocomportamentais do chumbo; 2) A consistência da lateralidade pode ser um fator determinante da susceptibilidade aos efeitos tóxicos do chumbo no sistema nervoso; e 3) Os efeitos do chumbo no teste de nado livre ocorrem mesmo em níveis de estresse oxidativo que não afetam os níveis de glutationa oxidada no cérebro. / Lead exposure continues to be a serious public health problem, particularly in developing countries such as Brazil. Despite the increasing number of studies showing neurobehavioral deficits in people occupationally exposed to lead, the mechanisms involved in the manifestation of these problems remain largely unknown. In this sense, the use of animal models opens up the possibility of not only investigating the biological mechanisms associated with lead toxicity but also of elaborating strategies aiming at protecting individuals against its ill effects or even reversing those that already present. Therefore, the main objective of the present work was to assess the potential of the rotatory behavior in the free-swimming test as a rodent model for studying of the neurobehavioral effects adult life lead exposure. In the first study, we analyzed the effect of subchronic lead exposure on motor activity in the freeswimming test and in open-field test, which has been traditionally used to assess the effects of toxic substances on locomotion. While no significant differences were observed between the exposed and control groups in the open-field, in the free-swimming test, lead exposed animals displayed increased natatory activity and fewer spontaneous alterations in the direction of locomotion in comparison with the control group. In the second study, we observed that the magnitude of the effects of lead exposure varied as a function of the consistency of the lateralization, being the results more pronounced in inconsistent animals (lesser degree of lateralization). In both studies, the effects of lead were not dependent on blood levels of lead exposed animals. In the third study, we demonstrated a significant increase in the levels of oxidized glutathione in the brain (indicative of oxidative stress) only in the group of animals that had lead levels above 60 &#956;g/dL. Based in these results, we can conclude that: 1) Rotatory behavior in the free-swimming test constitutes an interesting model for the study of the neurobehavioral effects of lead exposure, 2) Consistency of laterality may be a relevant factor regarding the susceptibility to the toxic effects of lead on the nervous system and 3) The effects of lead are observable in the free-swimming test even at oxidative stress levels that do not affect brain levels of oxidized glutathione.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O oxigênio é fundamental para os vertebrados. No entanto, variações dos níveis de oxigênio na água podem provocar estresse oxidante em peixes porque privação de oxigênio seguida de reoxigenação forma espécies reativas de oxigênio (ERO) em células. Níveis intracelulares de ERO aumentados favorecem que moléculas de proteínas, fosfolipídios e ácidos nucleicos sofram alterações, vindo a prejudicar muitas funções celulares. No Pantanal, habitat do pacu, o nível de oxigênio varia circadianamente na água das lagoas rasas que acabam isoladas dos rios na seca. O pacu evoluiu sob a pressão contínua da exposição aos efeitos prejudiciais das ERO causados pelos pulsos de inundação. A melatonina, uma indolamina produzida na glândula pineal, influencia os níveis de atividade de enzimas antioxidantes que reduzem ERO, além de ser capaz de doar elétrons ou captar radicais livres de forma não enzimática. Os níveis de melatonina no pacu são mais altos no verão e menores no inverno. Isoenzimas de glutationa S-transferases que conjugam o tripetídeo glutationa com o 4-hidroxinonenal, aldeído derivado da peroxidação de ácidos graxos por ERO, são importantes para evitar alteração funcional de proteínas por ligação do 4-hidroxinonenal à sua estrutura. Neste trabalho procuramos relação entre estresse oxidante, níveis de atividades de glutationa S-transferase e melatonina, para estabelecer se a melatonina ajudaria pacus a superar os efeitos deletérios das espécies reativas de oxigênio. Ensaiamos atividades de isoenzimas de glutationa S-transferases no citosol de fígado de pacus mantidos em normoxia, hipoxia, reoxigenação e hiperoxia no inverno e no verão. Medimos o efeito da melatonina in vitro e in vivo sobre as atividades de isoenzimas de glutationa S-transferase. Medimos os efeitos do estresse oxidante sobre a ligação do 4-hidroxinonenal com proteínas nos fígados de pacus tratados com melatonina. Somente as isoenzimas que conjugam 4-hidroxinonenal com glutationa mostraram menor atividade no inverno em relação ao verão; outras isoenzimas de glutationa S-transferases não alteram suas atividades sazonalmente. In vitro a melatonina não alterou a atividade de isoenzimas de glutationa S-transferase que conjugam o 4-hidroxinonenal, mas inibiu outras isoenzimas de glutationa S-transferase. In vivo a melatonina aumentou a atividade encontrada no inverno das isoenzimas que conjugam o 4-hidroxinonenal para os níveis do verão. A ligação de 4-hidroxinonenal com proteínas foi menor em pacus inoculados com melatonina. Nossos resultados mostram que a melatonina pode influenciar os efeitos de ERO em fígado de pacus. Ficou claro que a melatonina do plasma mantém os níveis de atividade conjugadora de 4-hidroxinonenal do fígado em pacus e que a baixa produção de melatonina no inverno não é adequada para a conjugação do 4-hidroxinonenal em fígado de pacus. / Oxygen is vital for vertebrates. However, changes in the levels of dissolved oxygen in water might cause oxidative stress in fishes because the shortage of oxygen followed by reoxygenation originates reactive oxygen species (ROS) inside cells. Higher intracellular levels of ROS favor alterations of proteins, phospholipids and nucleic acid molecules, which result in impairment of many cell functions. In Pantanal, the pacus habitat, circadian variation of the oxygen levels occurs in water of the shallow lagoons that ended up isolated from the rivers along the dry season. Pacu has evolved under the pressure of continuous exposition to harmful effects of ROS caused by the annual inundation pulses. Melatonin, an indolamine produced by the pineal gland, influences the levels of activity of antioxidant enzymes that reduce ROS, and is capable of donating electrons or scavenge free radicals nonenzymatically. Pacus melatonin levels are higher during summer than in winter. Glutathione S-transferases isoenzymes that catalyze the conjugation of the tripeptide glutathione with 4-hydroxynonenal, an aldehyde derived from peroxidation of fat acids by ROS, are important to avoid functional alterations of proteins consequential to the binding of 4-hydroxynonenal to their structures. In this work, we searched for facts that linked oxidative stress, levels of activity of glutathione S-transferase and melatonin, in order to establish whether melatonin could help pacus to overcome the pernicious effects of reactive oxygen species. We carried out assays of glutathione S-transferases in liver cytosol of pacus kept under normoxia, hypoxia, reoxygenation and hyperoxia, in the summer and in the winter. We measured the effect of melatonin in vitro and in vivo on isoenzymes of glutathione S-transferases. We measured the effects of oxidative stress on the binding of 4-hydroxynonenal to proteins in liver of pacu treated with melatonin. Only isoenzymes that conjugate 4-hydroxynonenal with glutathione showed less activity during the winter in comparison to the summer; other isoenzymes did not have their activities changed seasonally. In vitro, melatonin did not change the activity of glutathione S-transferases isoenzymes that conjugate 4-hydroxynonenal, but inhibited other isoenzymes of glutathione S-transferase. In vivo, melatonin enhanced the liver activity of the glutathione S-transferase that conjugate 4-hydroxynonenal found in winter up to the levels found in summer. The binding of 4-hydroxynonenal to proteins was lower in liver cytosol from pacus injected with melatonin. Our findings show that melatonin can influence the effects of ROS in liver of pacu. It became evident that plasma melatonin maintains the liver levels of the conjugating activity of 4-hydroxynonenal and that the lower production of melatonin during winter is not adequate to the conjugation of 4-hydroxynonenal.

A doença inflamatória intestinal (DII) e a esclerose sistêmica (ES) são doenças inflamatórias crônicas de difícil diagnóstico e tratamento. A etiologia da DII e da ES ainda não é completamente compreendida, mas sabe-se que fatores genéticos, imunológicos e ambientais estão envolvidos na sua patogênese. A DII possui dois principais subtipos clínicos: a doença de Crohn (DC) e a retocolite ulcerativa (RCU), caracterizados pela inflamação do intestino delgado e/ou cólon. Evidências sugerem que o aumento do estresse oxidativo desempenha um papel importante na fisiopatologia da DII. A ES é uma doença inflamatória autoimune rara, caracterizada pela fibrose progressiva da pele e de órgãos internos. A hipótese de que o aumento do dano oxidativo pode iniciar o dano vascular e desencadear os eventos patológicos observados na ES vem sendo investigada. Genes e enzimas envolvidos na metabolização (Fase I) e detoxificação (Fase II) de xenobióticos são utilizados como marcadores de susceptibilidade para o desenvolvimento de doenças que possuem fatores ambientais como fatores de risco. Em uma reação de Fase I, as enzimas do Citocromo P450 (CYP) inserem um átomo de oxigênio em um substrato deixando-o eletrofílico e reativo, criando um sítio para posterior conjugação pelas enzimas de Fase II. As enzimas Glutationa S-tranferases (GST) de Fase II catalisam a conjugação da glutationa com uma grande variedade de compostos eletrofílicos, detoxificando substâncias endógenas e exógenas. A atividade catalítica aumentada das enzimas CYP, bem como a falha na detoxificação de metabólitos pelas GST pode contribuir para o aumento do estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi investigar o papel de polimorfismos nos genes que codificam enzimas de metabolização (CYP1A*2C e CYP2E1*5B) e detoxificação (GSTT1 nulo, GSTM1 nulo e GSTP1 Ile105Val) na susceptibilidade a estas doenças. O grupo de pacientes com DII era constituído por 235 indivíduos e o grupo controle por 241 indivíduos, todos eurodescendentes. Na ES, 122 pacientes (99 eurodescendentes e 23 afrodescendentes) e 329 controles (241 eurodescendentes e 87 afrodescendentes) foram analisados. Os polimorfismos CYP foram genotipados por PCR-RFLP, enquanto que os polimorfismos em GSTT1 e GSTM1 foram genotipados por PCR multiplex e PCR-RFLP para GSTP1. As frequências alélicas e genotípicas foram comparadas entre pacientes e controles usando o teste de Qui-Quadrado. A respeito dos resultados das análises em DII, as frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos CYP1A1*2C, CYP2E1*5B e GSTP1 Ile105Val, bem como as frequências genotípicas do polimorfismo de presença/ausência de GSTM1, foram similares nos três grupos de pacientes (DII, DC e RCU) quando comparados ao grupo controle (P>0,05). Observouse uma frequência significativamente aumentada do genótipo nulo de GSTT1 no grupo de pacientes com DII quando comparado ao grupo controle [0,28 vs 0,18; χ² com Yates P=0,02; OR=1,71 (IC 95% 1,09 –2,71)]. Quando separamos o grupo de pacientes em DC ou RCU, esta frequência permaneceu significativamente aumentada somente no grupo de pacientes com RCU comparado ao grupo controle [0,29 vs 0,18; χ² com Yates P=0,035; OR=1,84 (IC 95% 1,03 –3,24)]. Com relação aos resultados das análises na ES, uma frequência significativamente aumentada do genótipo *1A/*1A (P=0,03; 0,74 vs. 0,61) e do alelo *1A (P=0,013; 0,86 vs 0,78; OR=0,57, IC 95% 0,36–0,90) do polimorfismo CYP1A1*2C foi observada entre os indivíduos controles eurodescendentes. Em contrapartida, a frequência do alelo *2C estava significativamente aumentada entre os pacientes de mesma etnia (P=0,013; 0,22 vs 0,14; OR=1,75, IC 95% 1,11–2,74). Com relação às frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos CYP2E1*5B e GSTP1 Ile105Val, e as frequências genotípicas do polimorfismo de presença/ausência de GSTM1, nenhuma diferença significativa foi observada quando os grupos de pacientes de ambas as etnias foram comparados aos grupos controle (P>0,05). Uma frequência significativamente aumentada do genótipo nulo de GSTT1 [0,29 vs 0,18; χ² com Yates P=0,035; OR=1,85 (IC 95% 1,03–3,29)], bem como uma alta frequência da dupla deleção de GSTT1/GSTM1 [0,19 vs 0,08; χ² com Yates P=0,007; OR=2,62 (IC 95% 1,25 –5,46)], foi observada no grupo de pacientes comparado aos controles (eurodescendentes). Estas associações não se repetiram entre indivíduos afrodescendentes. Concluindo, nossos resultados sugerem que o genótipo nulo de GSTT1 está associado à susceptibilidade a DII e pode influenciar na definição do curso da doença para a RCU. Além disso, o genótipo nulo de GSTT1 sozinho ou em combinação com o genótipo nulo de GSTM1 é um fator genético de susceptibilidade para a ES, enquanto que o genótipo *1A/*1A ou a presença do alelo *1A do polimorfismo CYP1A1*2C pode exercer um papel protetor contra o desenvolvimento da ES em indivíduos eurodescendentes. / Inflammatory bowel disease (IBD) and systemic sclerosis (SSc) are chronic inflammatory diseases of difficult diagnosis and treatment. The etiology of IBD and SSc is not completely understood but it is known that genetic, immunologic and environmental factors are involved in its pathogenesis. Crohn’s disease (CD) and ulcerative colitis (UC) are the two major subtypes of IBD, characterized by inflammation of the small intestine and/or colon. Evidences suggest that the increase of oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of IBD. SSc is a rare autoimmune inflammatory disease of the connective tissue characterized by progressive fibrosis of the skin and internal organs. The hypothesis that the increase of oxidative stress can initiate vascular damage and triggers the pathological events in SSc has been investigated. Genes and enzymes involved in metabolism (Phase I) and detoxification (Phase II) of xenobiotics are used as markers of susceptibility to the development of diseases that have environmental factors as risk factors. In a Phase I reactions, the Cytochrome P450 (CYP) enzymes insert an oxygen atom in a substrate that making it more electrophilic and reactive, and creating a site for subsequent conjugation by Phase II enzymes. Phase II Glutathione S-transferases (GSTs) enzymes catalyze the conjugation of glutathione with a variety of electrophilic compounds, detoxifying endogenous and exogenous substances. A higher catalytic activity of CYP enzymes, as well as the failure in detoxifying of metabolites by GST enzymes may to contribute for the increase of oxidative stress. The aim of this study was investigated the role of polymorphisms in genes coding Phase I enzymes (CYP1A*2C and CYP2E1*5B) and Phase II (GSTT1 null, GSTM1 null and GSTP1 Ile105Val) in susceptibility to these diseases. IBD group was constituted by 235 patients and the control group by 241 individuals, all European-derived. In SSc group, 122 patients (99 European-derived and 23 African-derived) and 329 controls (241 European-derived and 87 African-derived) were analyzed. The CYP polymorphisms were genotyped by PCR-RFLP, whereas polymorphisms in GSTM1 and GSTT1 were genotyped by multiplex PCR and PCRRFLP for GSTP1. Allelic and genotypic frequencies were compared between patients and controls using the Chi-square test. Concerning IBD, allelic and genotypic frequencies of CYP1A1*2C, CYP2E1*5B and GSTP1 Ile105Val polymorphisms, as well as genotypic frequencies of GSTM1 presence/absence polymorphism were similar in all groups patients (IBD, CD, and UC) and controls (P>0.05). We observed a significantly increased frequency of GSTT1 null genotype in IBD group as compared to controls [0.28 vs. 0.18, χ ² with Yates P=0.02, OR=1.71 (95% CI 1.09 – 2.71)]. When patients were classified in CD or UC group, this frequency remained significantly increased only among UC patients [0.29 vs. 0.18, χ ² with Yates P=0,035, OR=1.84 (95% CI 1.03 – 3.24)] as compared to controls. Regarding results in SSc, a frequency significantly increased of *1A/*1A genotype (P=0.03; 0.74 vs. 0.61) and *1A allele (P=0.013; 0.86 vs 0.78; OR=0.57, 95% CI 0.36–0.90) from CYP1A1*2C polymorphism was observed among European-derived controls. On the other hand, the frequency of *2C allele was significantly increased among patients of same ethnic group (P=0.013; 0.22 vs 0.14; OR=1.75, 95% CI 1.11–2.74). The allelic and genotypic frequencies of CYP2E1*5B and GSTP1 Ile105Val polymorphisms, as well as genotypic frequencies of GSTM1 presence/absence polymorphism were similar between SSc patients and controls of both ethnic groups (P>0.05). We observed a significantly increased frequency of GSTT1 null genotype [0.29 vs. 0.18, χ ² with Yates P=0.035, OR=1.85 (95% CI 1.03–3.29)], as well as an increased frequency of GSTT1/GSTM1 double-null in SSc patients as compared to controls [0.19 vs. 0.08; χ ² with Yates P=0.007, OR=2.62 (95% CI 1.25 – 5.46)]. These associations were exclusive to European-derived individuals. In conclusion, our results suggest that the GSTT1 null genotype is associated with susceptibility to IBD and may influence in defining the course of the disease for RCU. Furthermore, the GSTT1 null genotype alone or combined with GSTM1 null genotype is a susceptibility genetic factor to SSc, while the *1A/*1A genotype or the presence of *1A allele from CYP1A1*2C polymorphism may plays a protector role in SSc development in Brazilian Europeanderived individuals.