Small on-site sanitation systems for wastewater collection and treatment are prevalent in suburban and rural areas in many countries. However, these systems often underperform, causing potential impact to the receiving waters and increasing the risks to public health, thus hindering the overall sustainability of the systems. Understanding the different sustainability dimensions and trade-offs between assessment indicators can support the planning of sustainable on-site sanitation systems for a specific context. The overall aim of this thesis was to evaluate the sustainability and function of on-site sanitation systems by defining a set of indicators to assess on-site sanitation options and estimating them for different scenarios, and by investigating the treatment efficiency of on-site facilities for domestic wastewater treatment in a field study. Particular attention was given to the removal of phosphorus (P) and indicator bacteria due to their relevance in terms of eutrophication risk and public-health concern. In a multi-criteria approach, twelve indicators were defined to assess nine on-site sanitation systems. A reference group representing stakeholders’ views assigned weights to express the relative importance of each indicator. The reference group assigned the highest weights to the indicators robustness, risk of pathogen discharge and nutrient removal. Assessing the robustness proved to be challenging, as there is a gap between how the sanitation systems are expected to perform based on their design, and how they actually perform in practice, mainly due to incorrect construction, operation and maintenance. The discriminating power of the indicators was calculated using the entropy method, which showed that the indicators energy recovery and capital cost had little impact in the final ranking of the alternatives. A sustainability ranking was obtained by using the method ELECTRE III. A scenario analysis based on different settings of interest based on socio-economic and geographical factors was done to evaluate the changes in the ranking of alternatives. Overall, the greywater–blackwater separation system ranked the highest in the baseline scenario and when nutrient-related indicators were important (Scenario 2), together with the urine diversion system. The sand filter and drain field were the most sustainable options when nutrient removal and recycling was not important (Scenario 1), and (in combination with chemical P-removal) when the indicators related to energy and climate change had the highest weights (Scenario 3). In terms of P-removal, chemical removal outranked the alkaline P-filter. In a field study, the effluent wastewater from twelve on-site wastewater treatment facilities with sand and alkaline P-filters was evaluated in terms of removal and discharge of organic content, total and dissolved phosphorus, and indicator bacteria (E. coli, total coliforms, intestinal enterococci and C.perfringens). The results showed that the investigated sand filters generally had low P-removal capacity and sometimes exceeded the criteria for excellent water quality set by the EU bathing water directive with regard to intestinal enterococci and E. coli. Only one sand filter of eight was confirmed to remove P according to the Swedish guidelines for areas with non-sensitive receiving waters with a tot-P effluent concentration below 3 mg L−1. This indicates that a downstream treatment step is needed to meet the guidelines regarding P discharge concentrations. Alkaline P-filters generally removed P efficiently. Despite high effluent pH, the collected data did not generally confirm a further reduction of the bacterial content of the wastewater in the P-filters, as had been previously hypothesized. However, effluent concentrations of indicator bacteria showed moderate positive correlations with effluent concentrations of P and organic matter, indicating the potential of the P-filters to serve as a polishing step also for bacteria. / Små lokala avloppssystem för insamling och rening av avloppsvatten är vanligt förekommande i omvandlings- och landsbygdsområden i många länder. Dessa system fungerar ofta sämre än förväntat vilket kan leda till effekter på recipienter, ökad risk för folkhälsan och begränsa systemens hållbarhet. En djupare förståelse för hållbarhetsdimensioner och avvägningar mellan olika indikatorer kan stödja planering och implementering av hållbara lokala avloppsystem för specifika sammanhang. Det övergripande syftet med denna uppsats var att utvärdera hållbarhet och funktion av enskilda avloppssystem. Detta utfördes genom att först definiera en uppsättning indikatorer för bedömning av ett antal enskilda avloppsalternativ och sedan utvärdera dem för olika scenarier. Vidare var syftet att undersöka några systems prestanda för rening av hushållsavloppsvatten i en fältstudie. Särskilt fokus lades på reduktion av fosfor (P) och indikatorbakterier på grund av deras relevans i relation till övergödningsrisk och folkhälsoperspektiv. I en multikriteriestudie definierades tolv indikatorer för att bedöma nio typer av enskilda avloppssystem. En referensgrupp som representerade olika intressenter viktade indikatorerna för att uttrycka den relativa betydelsen av varje indikator. Referensgruppen gav systemens robusthet, risk för utsläpp av patogener, och näringsreduktion störst vikt. Att bedöma robusthet var en utmaning i studien, eftersom det finns ett gap mellan hur systemen förväntas fungera, och hur de faktiskt fungerar i praktiken, mestadels på grund av felaktig konstruktion, drift och underhåll. Indikatorernas diskriminerande effekt räknades ut med entropimetoden, som visade att indikatorerna energiåtervinning och kapitalkostnad hade liten inverkan på alternativens slutgiltiga rangordning. En scenarioanalys genomfördes baserad på socioekonomiska och geografiska faktorer. En hållbarhetsrankning erhölls genom att använda ELECTRE III-metoden. Överlag rankades system som separerar gråvatten – svartvatten samt urinseparerande system högst i basfallsscenariot och när näringsrelaterade indikatorer var viktiga (scenario 2). Markbäddar och infiltrationsanläggningar var de mest hållbara alternativen när rening och återvinning av näringsämnen inte var viktigt (scenario 1) och (i kombination med kemisk P-rening) när indikatorer relaterade till energi och klimatförändringar viktades högst (scenario 3). När det gäller P-rening, gav system med kemisk rening ett bättre utfall än de med alkaliska P-filter. I en fältstudie utvärderades tolv enskilda avloppsanläggningar med markbaserade system och alkaliska P-filter med avseende på rening och utsläpp av organiskt innehåll, totalt och löst P och indikatorbakterier (E.coli, totala koliformer, intestinala enterokocker och C.perfringens). Resultaten visade att de markbaserade systemen generellt hade låg P-reningskapacitet och ofta överskreds kriterierna för utmärkt vattenkvalitet enligt EUs badvattendirektiv avseende intestinala enterokocker och C. perfringens. Endast ett markbaserat system av åtta uppvisade en P-rening som låg under de svenska riktlinjerna för områden med normal skyddsnivå, med en utsläppskoncentration på under 3 mg L-1 tot-P. Detta indikerade att markbäddar behöver nedströms placerade reningssteg för att uppfylla nuvarande riktlinjer för utsläpp av P. Alkaliska P-filter avskilde generellt P effektivt. Trots högt pH-värde kunde ingen ytterligare minskning av bakterieinnehåll i avloppsvattnet från P-filtren påvisas statistiskt. Utsläppen av indikatorbakterier uppvisade emellertid måttliga positiva korrelationer med utsläpp av P och organiskt material, vilket visar på en viss potential att P-filtren kan fungera som ett ytterligare poleringssteg även för bakterier.

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Foram utilizadas nove vacas Holandês x Zebu, no terço médio da lactação, distribuídas em três quadrados latinos 3 x 3, submetidas a três tratamentos, que consistiram da inclusão de 0, 80 e 160 g de glicerina bruta/kg de MS das dietas. O experimento foi constituído por três períodos de 20 dias cada, sendo os onze dias iniciais destinados à adaptação aos tratamentos e, o restante, destinado à obtenção de dados. A inclusão da glicerina nas dietas não influenciou (P>0,05) os consumos matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), fibra em detergente neutro (FDN) e fibra em detergente neutro corrigida para cinzas e proteína (FDNcp). Para o consumo matéria seca (MS), a tendência foi quadrática (P<0,087), enquanto que para o extrato etéreo (EE) e carboidratos não fibrosos (CNF) o comportamento foi linear (P<0,001). Não houve efeito (P>0,05) da inclusão da sobre a produção de leite e produção de leite corrigida para 3,5% de gordura, tampouco para as porcentagens de gordura, sólidos totais, extrato seco desengordurado, contagem de células somáticas e nitrogênio uréico do leite. Houve efeito quadrático (P=0,017) para o teor de lactose do leite com o maior valor, de 4,29%, observado quando da adição de 80 g glicerina/kg MS. Houve efeito linear (P=0,007) no teor de proteína do leite com valores observados entre 3,42 e 3,52% para as dietas com 0 e 160g/kg de MS de glicerina, respectivamente. Os coeficientes de digestibilidade da MS, MO, PB, FDN e FDNcp aumentaram (P<0,05) com a inclusão crescent da glicerina, enquanto que para os CNF não houve efeito (P>0,05), obtendo-se valor médio de 79,54%. O volume urinário reduziu (P<0,05) com a inclusão da glicerina bruta. Não houve diferença (P>0,05) para as excreções urinárias de alantoína, ácido úrico, purinas totais, relação alantoína/ purinas totais, purinas absorvidas, síntese de compostos nitrogenados microbianos (Nmic) e síntese de proteína microbiana (Pmic). As purinas totais e as purinas microbianas absorvidas não foram afetadas (P>0,05) pela inclusão de glicerina bruta na dieta, apresentando médias de 132,29 e 107,39 mmol/dia, respectivamente. Não foi observado efeito (P>0,05) da inclusão de glicerina sobre o nitrogênio ingerido, balanço de nitrogênio e relação do retido/absorvido, apresentando valores médios de 0,43 kg; 0,27 kg e 77,41%, respectivamente. A quantidade de N absorvido (kg) e o valor percentual do N absorvido aumentaram linearmente (P<0,05) com a inclusão da glicerina bruta, cujos valores variaram de 340 a 370 g/dia, e em percentual de 79,19 a 84,96%, para dietas com 0 a 160 g/kg de glicerina bruta na dieta. Concluiu-se que a inclusão da glicerina bruta em até 160 g/kg de MS na dieta de vacas leiteiras no terço médio da lactação promoveu diferentes efeitos sobre os parâmetros nutricionais, balanço de nitrogênio e síntese microbiana, sem, contudo afetar negativamente a produção e composição do leite de vacas desta categoria animal, podendo-se recomendar o seu uso até a quantidade avaliada e em dietas baseadas no uso de silagem de milho e alta participação de FDN. / The objective was to evaluate the effects of the use of crude glycerin up to 160g / kg DM on nutritional parameters, milk yield and composition, nitrogen balance and microbial protein synthesis in lactating cows in the middle third fed silage-based diets High corn and NDF. Nine Holstein x Zebu cows were used, in the middle third of lactation, distributed in three Latin squares 3 x 3, submitted to three treatments consisted of inclusion of 0, 80 and 160 g of crude glycerin / kg DM diets. The experiment consisted of three periods of 20 days each, with eleven early days for adaptation to treatment and the rest, for the data collection. The inclusion of glycerin in diets did not affect (P> 0.05) intakes organic matter (OM), crude protein (CP), neutral detergent fiber (NDF) and neutral detergent fiber corrected for ash and protein (NDFcp). For the dry matter intake (MS), the trend was quadratic (P <0.087), while for (EE) and non-fiber carbohydrate (NFC) a linear model (p <0.001). There was no effect (P> 0.05) the inclusion of on milk production and milk production corrected for 3.5% fat, either for fat percentages, total solids, nonfat dry extract, somatic cell count and urea nitrogen milk. There was a quadratic effect (P = 0.017) for the milk lactose content with the highest value of 4.29%, observed when adding 80 g glycerin / kg DM. There was a linear effect (P = 0.007) in milk protein content observed with values between 3.42 and 3.52% for the diets containing 0 and 160g / kg DM glycerin, respectively. The digestibility coefficients of DM, OM, CP, NDF and NDFcp increased (P <0.05) with the crescent inclusion of glycerin, while for NFC no effect (P> 0.05) to yield an average value of 79.54%. The urine volume decreased (P <0.05) with the inclusion of crude glycerin. There was no difference (P> 0.05) for the urinary excretion of allantoin, uric acid, total purine, allantoin ratio / total purine, absorbed purines, synthesis of microbial nitrogen compounds (Nmic) and microbial protein synthesis (PMIC). The total absorbed microbial purines and purine were not affected (P> 0.05) by the inclusion of glycerin in the diet, with averages of 132.29 and 107.39 mmol / day, respectively. There was no effect (P> 0.05) the inclusion of glycerin on nitrogen intake, nitrogen balance and ratio of retained / absorbed, with average values of 0.43 kg; 0.27 kg, and 77.41%, respectively. The amount of N absorbed (kg) and the percentage of N absorbed increased linearly (P <0.05) with the inclusion of crude glycerin, with values ranging 340-370 g / day, and the percentage of 79.19 84.96% to diets with 0 160 g / kg of crude glycerin in the diet. It was concluded that the inclusion of crude glycerin up to 160 g / kg DM in the diet of dairy cows in mid lactation third promoted different effects on the nutritional parameters, nitrogen balance and microbial synthesis, without however adversely affect production and composition of milk of cows of this category of animal and may be recommended its use to the evaluated amount and diets based on the use of corn silage and high participation of NDF.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:37:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 05177.pdf: 1071515 bytes, checksum: 549d323670762fe6597fcda6cf7ea4fc (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Orientador: Raul José Silva Gírio / Banca: Vicente Borelli / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Banca: Luís Antônio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Resumo: O trabalho presente objetivou pesquisar a presença de Leptospira interrogans sorovar Canicola em 32 cães, dos quais 20 infectados e 12 controle, em 4 grupos de estudo com 5 infectados e 3 de controle. No G1 os animais foram eutanasiados 7 dias após a inoculação, no G2, 15 dias, no G3, 30 dias e no G4 45 dias. Colheu-se sêmen, urina e sangue nos dias 0, 3, 5, 7, 10 e após, a cada 5 dias, com realização de exames andrológicos do sêmen e bioquímicos da urina e do sangue, e reação em cadeia da polimerase (PCR) dessas amostras. Avaliou-se o estado clínico, e o soro sangüíneo foi submetido à soro-aglutinação microscópica (SAM). Os títulos sorológicos dos infectados chegaram a 2.560. Na PCR, detectou-se DNA de leptospiras primeiro no sêmen e depois na urina, e não se detectou nos testículos, epidídimos, próstata, rins e fígado. Na Levaditi, foi encontrada leptospira em um fígado, e no histopatológico, 5 animais com prostatite, evidenciada também pelo aumento do número de espermatozóides com a patologia cabeça isolada. O exame andrológico mostrou declínio na motilidade, no vigor, na concentração espermática e defeitos maiores acima de 10%. No hemograma, observou-se alterações a partir do dia 3 pós-infecção, e ao exame bioquímico a partir do dia 30, indicando possíveis alterações hepáticas e renais. Conclui-se que cães infectados com Leptospira interrogans sorovar Canicola apresentam queda na qualidade espermática, sendo importantes fontes de infecção para o homem e animais, podendo inclusive transmitir a leptospirose por meio de sêmen nos primeiros dias pós-infecção, antes da transmissão urinária, sendo detectada pela PCR anteriormente a SAM. / Abstract: The present study aimed to investigate the presence of Leptospira interrogans serovar Canicola. in 32 dogs, of which 20 are infected and 12 control, 4 study groups with 5 infected and 3 of control. In G1 animals were euthanasing 7 days after inoculation, the G2, 15 days, the G3, 30 days in the G4 and 45 days. It is collected semen, urine and blood on days 0, 3, 5, 7, 10 and after, every 5 days, with laboratory tests of semen andrological and biochemical of urine and blood, and polymerase chain reaction (PCR ) Of these samples. Evaluated the clinical status, and serum was submitted to serum-microscopic agglutination (SAM). The serological evidence of infection arrived in 2560. In PCR, DNA was found in semen of leptospires first and then in the urine, and is not detected in testis, epididymis, prostate, kidney and liver. In Levaditi, was found leptospira in a liver, and the histopathology, 5 animals with prostatitis, evidenced also by increasing the number of sperm with the pathology head alone. The examination showed andrologic decline in motility, in effect, defects in sperm concentration and higher above 10%. In the blood, it was observed changes from day 3 post-infection, and the biochemical examination on the day 30, indicating possible kidney and liver abnormalities. It follows that dogs infected with Leptospira interrogans serovar Canicola present decrease in sperm quality, and important sources of infection for humans and animals, which may include forward to leptospirosis through semen during the first day post-infection, before urinary transmission, and PCR detected earlier by the SAM. / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esse trabalho compreende dois diferentes estudos de caso: o primeiro foi a respeito de um medicamento para o qual foi desenvolvida uma metodologia para determinar norfloxacino (NOR) por espectrofluorimetria molecular e validação por HPLC. Primeiramente foi desenvolvida uma metodologia por espectrofluorimetria onde foram feitos alguns testes preliminares a fim de estabelecer qual valor de pH iria fornecer a maior intensidade de emissão. Após fixar o pH foi feita a determinação de NOR em padrões aquosos e soluções do medicamento usando calibração univariada. A faixa de concentração trabalhada foi de 0500 &#956;g.L-1. O limite de detecção para o medicamento foi de 6,9 &#956;g.L-1 enquanto que o de quantificação foi de 24,6 &#956;g.L-1. Além dessas, outras figuras de mérito também foram estimadas para desenvolvimento da metodologia e obtiveram resultados muito satisfatórios, como por exemplo, os testes de recuperação no qual a recuperação do analito foi de 99.5 a 103.8%. Para identificação e quantificação do NOR da urina foi necessário diluir a amostra de urina (estudada em dois diferentes níveis de diluição: 500 e 1000 x) e também uso do método da adição de padrão (na mesma faixa de concentração usada para medicamento). Após a aquisição do espectro, todos foram usados para construção do tensor que seria usado no PARAFAC. Foi possível estimar as figuras de mérito como limite de detecção de 11.4 &#956;g.L-1 and 8.4 &#956;g.L-1 (diluição de 500 e 1000 x respectivamente) e limite de quantificação de 34 &#956;g.L-1 e 25.6 &#956;g.L-1 (diluição de 500 x e 1000 x respectivamente). O segundo estudo de caso foi na área alimentícia no qual se usou espectroscopia NIR e FT MIR acopladas a quimiometria para discriminar óleo de soja transgênica e não transgênica. Os espectros dos óleos não mostraram diferença significativa em termos visuais, sendo necessário usar ferramentas quimiométricas capazes de fazer essa distinção. Tanto para espectroscopia NIR quanto FT MIR foi feito o PCA a fim de identificar amostras discrepantes e que influenciariam o modelo de forma negativa. Após efetuar o PCA, foram usadas três diferentes técnicas para discriminar os óleos: SIMCA, SVM-DA e PLS-DA, sendo que para cada técnica foram usados também diferentes pré processamento. No NIR, apenas para um pré processamento se obteve resultados satisfatórios nas três técnicas, enquanto que para FT-MIR ao se usar PLS-DA se obteve 100% de acerto na classificação para todos os pré processamentos / This paper comprises two different researches: the firts one was related to a medicament for which was developed a methodology to quantify Norfloxacin (NOR) by molecular spectrofluorimetry and validation by HPLC. First of all, was developed a methodology for spectrofluorimetry where were done some preliminary tests to establish which value of pH would provide the highest emission intensity. After fix pH, it was performed NOR determination in aqueous standard and medicament using univariate calibration. The concentration range was 0-500 &#956;g.L-1. The limit of detection for medicament was 6,9 &#956;g.L-1 while the limit of detection was 24,6 &#956;g.L-1. Beyond that, other figures of merit were also estimated for developing methodology and offered results quite satisfactory, such as recovering tests in which analyte recovery was 99.5 - 103.8%. For identify and quantify NOR in urine was necessary to dilute the samples (studied in two different levels: 500 and 1000 X) and also standar method addition (in same concentration range used for medicament). After spectra acquisition, all of them were used to built the tensor that would be used in PARAFAC. It was possible to estimate figures of merit such as limit of detection: 11.4 &#956;g.L-1 and 8.4 &#956;g.L-1 (dilution of 500 and 1000 X respectively) and limit of quantification: 34 &#956;g.L-1 and 25.6 &#956;g.L-1 (dilution of 500 and 1000 X, respectively). The second studied case was in food area in which was used NIR and FT-MIR spectroscopy coupled with chemometric to discriminate transgenic and no transgenic soybean oil. Oils spectra did not show significative difference in visual terms, being necessary using chemometric tools capable of perform this distinction. For NIR and FT-MIR spectroscopy it was performed PCA that aimed identify anomalous samples that would be a negative influence. After perform PCA were used three different techniques to discriminate oils samples: SIMCA, SVM-DA and PLS-DA, being used for each technique different preprocessing. In NIR, only for one preprocessing it was obtained good results for three techniques while in FT-MIR when PLS-DA was used it was achieved 100% in classification for all preprocessing

Introdução: A Doença da Urina do Xarope do Bordo (DXB) é um Erro Inato do Metabolsimo (EIM), causada pela deficiência da atividade do complexo enzimático desidrogenase dos L-cetoácidos de cadeia ramificada (CACR). O programa público brasileiro de triagem neonatal não inclui o diagnóstico e o tratamento da DXB. Objetivo: Caracterizar aspectos relacionados ao diagnóstico e ao tratamento de pacientes brasileiros com DXB. Metodologia: Estudo retrospectivo. Os pacientes foram identificados a partir dos registros de laboratório considerado referência nacional para o diagnóstico de DXB, e de contato com demais serviços nacionais de referência em genética médica. O diagnóstico foi realizado entre 1992-2011. Os dados analisados foram obtidos a partir da revisão de prontuários. Resultados: Oitenta e três pacientes, oriundos de 75 famílias, foram incluídos no estudo (mediana de idade= 3 anos; IQ25- 75= 0,57-7). A mediana da idade de início dos sintomas foi de 10 dias (IQ= 5-30), enquanto que a mediana da idade ao diagnóstico foi de 60 dias (IQ= 29-240, p= 0,001). Apenas três (3,6%) pacientes foram diagnosticados antes de desenvolverem manifestações clínicas. A comparação entre os pacientes com (n=12) e sem (n=71) diagnóstico precoce mostrou que o mesmo associa-se com a presença de história familiar positiva e diminuição da prevalência de manifestações clínicas ao diagnóstico, mas não com melhor resultado; além disso, a maioria desses diagnósticos foi realizada entre 2002-2011 (n= 10/12). Considerando a amostra total, 98,8% dos pacientes apresentam atraso de desenvolvimento neuropsicomotor. Conclusão: Os pacientes com DXB são diagnosticados tardiamente no Brasil, de forma que as complicações associadas a esta condição não são prevenidas. Entretanto, existem indícios de que está havendo um melhora gradual desse panorama desde a última década. Os nossos dados indicam que o diagnóstico precoce dessa condição, mesmo que em fase sintomática, associa-se a um melhor prognóstico do paciente. Sugere-se a elaboração de políticas públicas específicas para doenças raras no país. / Introduction: Maple syrup urine disease (MSUD) is an Inborn Errors of Metabolism, is caused by a deficiency in activity of the branched-chain L-keto acid dehydrogenase complex. The Brazilian neonatal screening program does not include the diagnosis and treatment of MSUD. Objective: To draw a profile of aspects related to the diagnosis and treatment of Brazilian patients who received. Methods: In this retrospective study, patients were identified through a search of records from a national reference laboratory for the diagnosis of MSUD and through contact with other medical genetics services across Brazil. A diagnosis of MSUD between 1992 and 2011. Data were collected by means of a chart review. Results: Eighty-three patients from 75 families were enrolled in the study (median age 3 years; interquartile range, 0.57–7). Median age at onset of symptoms was 10 days (IQR 5–30), whereas median age at diagnosis was 60 days (IQR 29–240, p=0.001). Only three (3.6%) patients were diagnosed before the onset of clinical manifestations. A comparison between patients with (n=12) and without (n=71) an early diagnosis show that early diagnosis is associated with the presence of positive familial history and decreased prevalence of clinical manifestations at the time of diagnosis, but not with a better outcome. Overall, 98.8% of patients have some psychomotor or neurodevelopmental delay. Conclusion: In Brazil, patients with MSUD receive a late diagnosis and show neurological compromise and poor survival even with an early diagnosis. We suggest that specific public policies for rare diseases should be developed and implemented in the country.

A disfunção tireoidiana durante a gestação cursa com maior morbidade materno-fetal. A deficiência de iodo continua sendo uma causa importante de disfunção tireoidiana. O estado de São Paulo é considerado uma região suficiente em iodo. No entanto, as gestantes são consideradas grupo de risco para deficiência iódica devido a maior necessidade de produção dos hormônios tireoidianos ao longo da gestação. Este trabalho objetiva avaliar a suficiência iódica de gestantes residentes em São Paulo e correlacionar as concentrações de iodo com os valores dos hormônios tireoidianos em cada trimestre de gestação. Métodos: Foi realizado estudo transversal com gestantes em pré-natal de baixo risco nos três trimestres de gestação. Foram analisadas 251 mulheres sem doença tireoidiana prévia ou atual, com autoanticorpos antitireoidianos negativos e que não estavam em uso de polivitamínico contendo iodo. A concentração de iodo urinário foi feita em amostra isolada pelo método Sandell- Kolthoff. As dosagens de TSH, T4, T3, T4 livre (T4L), T3 livre (T3L), tireoglobulina (TG), globulina ligadora da tiroxina (TBG) anticorpo antitireoperoxidase (AntiTPO), antitireoglobulina (AntiTG), estradiol e hCG foram feitas por método eletroquimioluminescente. Ultrassonografia da tireoide foi realizada com aparelho Philips IU-22 e transdutor 7,5-12 mHz. Resultados: Os valores de TSH correspondentes aos percentis 2,5 e 97,5 foram 0,38 uIU/mL e 4,23 uIU/mL, respectivamente. Observou-se valores de TSH > 2,5-3,0 uIU/mL em 13,1% gestantes. Valores de TSH > 4 uIU/mL foi observado em 3,6% dos casos. Os valores de T4T e T3T correspondentes aos percentis 2,5 e 97,5 foram 7,8 ug/dL e 16,1 ?g/dL; 122 ng/dL e 249 ng/dL, respectivamente. Os valores de T4l e T3l correspondentes aos percentis 2,5 e 97,5 foram 0,76 ng/dL e 1,42 ng/dL; 0,21 ng/dL e 0,36 ng/dL, respectivamente. Houve aumento significativo na relação T3:T4 ao longo dos trimestres e, em 8% das amostras, essa relação estava acima do valor de referência para gestantes. As dosagens de iodúria não apresentaram diferenças estatísticas entre os três trimestres da gestação. As medianas foram 135ug/L, 153ug/L e 140ug/L, respectivamente. Encontramos iodúria < 150ug/L em 52,2% das gestantes. Comparando o grupo com iodúria < 150ug/L (deficiente em iodo) e o grupo com iodúria entre 150-250ug/L (suficiente em iodo), observou-se diferença significativa nos valores de TSH e de T3 nas gestantes do 2o Trimestre (média de TSH = 2,24 uIU/mL e TSH = 1,78 uIU/mL e média de T3 = 196 ng/dL e T3 = 181 ng/dL entre o grupo deficiente e suficiente, respectivamente). Não houve diferenças significativas entre os valores de TG e o volume tireoidiano ao longo dos trimestres. Conclusão: A frequência de hipotireoidismo subclínico variou de 3,6% a 13,1%, dependendo dos critérios adotados. Não foi possível estabelecer a frequência de hipotiroxinemia materna, devido à ausência de valores de corte de T4l estabelecido na nossa população. Foi encontrada deficiência iódica em 52,2% das gestantes avaliadas. Embora estas gestantes apresentem deficiência leve de iodo, foram necessários mecanismos adaptativos para equilibrar a função tireoidiana materna com possível produção preferencial de T3, aumento da relação T3:T4 e valores mais elevados de TSH. Conclui-se que, embora esta seja uma região suficiente em iodo, as mulheres poderiam se beneficiar com a suplementação deste nutriente durante a gestação / Thyroid dysfunction in pregnancy is associated with increased rate of obstetrical and neonatal adverse outcomes. Iodine deficiency continues to be a major cause of thyroid dysfunction. The state of São Paulo is considered a sufficient iodine region. However, pregnant women are considered a risk group for iodine deficiency due to an increased demand for production of thyroid hormones throughout pregnancy. This study aims to evaluate the iodine sufficiency of pregnant women in São Paulo and to correlate iodine concentrations with thyroid parameters in each trimester of gestation. Methods: A cross-sectional study was carried out with low-risk pregnant women in the three trimesters of gestation. We analyzed 251 women without history of thyroid disease, with negative antithyroid autoantibodies (anti TPO and anti TG) and who were not taking iodine supplementation. The urinary iodine concentration (UIC) was measured by the Sandell-Kolthoff digestion method in casual morning urine samples. Serum TSH, T4, T3, free T4 (FT4), free T3 (FT3), thyroglobulin (TG), TBG, anti-TPO, anti-TG, estradiol and hCG were measured by the electrochemiluminescence method. Thyroid ultrasound was performed with Philips IU-22 and 7.5-12 mHz transducer. RESULTS: The TSH values corresponding to the 2.5 and 97.5 percentiles were 0.38 IU/mL and 4.23 IU/mL, respectively. TSH levels > 2.5-3.0 IU/mL were observed in 13.1% pregnant women. TSH values > 4 IU/mL were observed in 3.6% of the cases. The T4T and T3T values corresponding to the 2.5 and 97.5 percentiles were 7.8 ug/dL and 16.1 ug/dL; 122 ng/dL and 249 ng/dL, respectively. The FT4 and FT3 values corresponding to the 2.5 and 97.5 percentiles were 0.76 ng/dL and 1.42 ng/dL; 0.21 ng/dL and 0.36 ng/dL, respectively. There was a significant increase in the T3:T4 ratio over the trimesters and in 8% of the samples it was above the reference value for pregnant women. The dosages of UIC did not present statistical differences between the three trimesters of gestation. The medians were 135 ug/L, 153 ug/L and 140 ug/L, respectively. We found UIC < 150 ?g/L in 52.2% of pregnant women. Comparing the group with UIC < 150 ?g/L (iodine deficient) and the group with UIC between 150-250 ug/L (sufficient in iodine), a significant difference was observed in TSH and T3 values in the 2nd trimester (TSH = 2.24 IU/mL and TSH = 1.78 IU/mL and mean T3 = 196 ng/dL and T3 = 181 ng/dL between the deficient and sufficient groups, respectively). There were no significant differences between TG values and thyroid volume over the trimesters. Conclusion: The subclinical hypothyroidism frequency ranged from 3.6% to 13.1%, depending on the adopted criteria. It was not possible to establish frequency of maternal hypothyroxinemia, due to the absence of FT4 cutoff established in our population. Iodine deficiency was found in 52.2% of pregnant women evaluated. Although these pregnant women presented mild iodine deficiency, adaptive mechanisms were necessary to balance thyroid function with possible preferential production of T3, increase in T3:T4 ratio and higher values of TSH. It is concluded that although this is an iodine sufficient region, women could benefit from supplementation of this nutrient during pregnancy

Metodologia proteômica baseada em eletroforese bi-dimensional (2D-PAGE) foi usada para auxiliar no entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na injúria renal induzida pelo flúor (F) e definir biomarcadores potenciais para fluorose. Três grupos de ratos Wistar machos recém-desmamados (21 dias de vida) foram tratados com água de beber contendo 0 (controle), 5 ou 50 ppm F, por 60 dias (n=6/grupo). Durante o período experimental, os animais foram mantidos individualmente me gaiolas metabólicas, a fim de que o consumo de água e ração fosse avaliado, bem como as excreções urinária e fecal de F. Os animais foram mortos e o rim esquerdo e o soro foram coletados para análises histopatológica e de F, respectivamente. Para análise proteômica foram coletados o rim direito e a urina (no dia anterior ao sacrifício, num coquetel contendo inibidores de protease em gelo). Após o isolamento das proteínas, os perfis proteômicos renal e urinário foram examinados usando 2D-PAGE e coloração com azul de Coomassie brilhante. Foi possível detectar uma doseresposta em relação à ingestão e excreção de F, bem como em relação aos níveis de F presentes no soro e nos rins dos animais. As análises histológicas não revelaram danos aos rins induzidos pelo F, com exceção de uma congestão vascular no grupo de 50 ppm F. Para os rins, a análise quantitativa de intensidade (software Image Máster Platinum, alterações de 2 vezes) revelou 30 e 17 proteínas diferencialmente expressas, respectivamente, entre os grupos controle X 50 ppm F e controle X 5 ppm F. Para a urina, 9, 10 e 13 proteínas aumentaram ou diminuíram nos grupos controle X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F e controle X 50 ppm F, respectivamente. Nove proteínas foram identificadas satisfatoriamente por MALDI-TOF TOF MS. As proteínas identificadas estão relacionadas principalmente ao metabolismo, desintoxicação e housekeeping. Esses dados indicam que a análise proteômica de rim e urina de animais tratados com F é capaz de identificar proteínas diferencialmente expressas, mesmo em casos de baixas doses de F. Assim, essa ferramenta pode contribuir para o entendimento dos mecanismos envolvidos na fluorose, apontando proteínas-chave que deveriam ser melhor investigadas, bem como potenciais biomarcadores de toxicidade. / Two-dimensional gel electrophoresis (2D-PAGE) based proteomics approach was used to better understand the molecular mechanisms of renal injury induced by fluoride (F) and define potentials biomarkers of fluorosis. Three groups of weanling male Wistar rats (21 days old) were treated with drinking water containing 0 (control), 5, or 50 ppm F for 60 days (n=6/group). During the experimental period, the animals were kept individually in metabolic cages, in order to analyze the water and food consumption, as well as fecal and urinary F excretion. Animals were killed and left kidney and serum were collected for histopathological examination and F analysis, respectively. For proteomic analysis, right kidney and urine (one day before sacrifice, in protease-inhibitors cocktail for 8 hours in ice box) were collected. After protein isolation, renal and urinary proteome profiles were examined using 2D-PAGE and coomassie brilliant blue staining. It was possible to detect a dose-response regarding F intake and F excretion, as well as F levels in serum and kidneys. The histological analysis revealed no damage in kidneys induced by F, except for a vascular congestion in the 50 ppm F group. For kidney, quantitative intensity analysis (Image Master Platinum software, 2-fold changes) revealed 30 and 17 differentially expressed proteins between control X 50 ppm F, and control X 5 ppm F groups, respectively. As for urine, 9, 10 and 13 proteins increased or decreased in control X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F and control X 50 ppm F groups, respectively. Nine proteins were successfully identified by MALDI-TOF TOF MS. The identified proteins are mainly related with metabolism, detoxification and housekeeping. These data indicate that proteomic analysis in kidney and urine of F-treated animals is able to identify differentially expressed proteins, even in cases of low F doses. Thus, this approach can contribute for the understanding of the mechanisms underlying fluorosis, by indicating key-proteins that should be better addressed, as well as potential toxicity biomarkers.

Os Poliomavírus JC e BK são os mais importantes integrantes da família Polyomaviridae, gênero Orthopolyomavirus, devido ao seu grau de patogenicidade no homem. O poliomavírus humano JC (JCV) foi isolado a partir de fragmento do cérebro de um paciente com linfoma de Hodgkin e leucoencefalopatia multifocal progressiva por Padgett e colaboradores. Já o poliomavírus humano BK foi isolado em 1971 por Gardner e colaboradores a partir da semeadura da urina de um paciente, submetido a transplante renal, em cultura de células da linhagem VERO Poucos são os dados sobre os poliomavírus humanos JC e BK em indivíduos sadios no mundo e no Brasil. Além disso, as formas de excreção e transmissão destes vírus ainda não estão completamente elucidadas. Este estudo teve como objetivos principais determinar a incidência, a dinâmica de excreção e a caracterização genotípica dos poliomavírus JC e BK em amostras sequenciais de urina de indivíduos sadios. Como objetivo secundário, foram analisados filogeneticamente os subtipos dos vírus encontrados. Foram incluídos 71 indivíduos de ambos os sexos, com idades variando entre 21 e 65 anos e destes foram coletadas amostras mensais de urina durante 6 meses. Todas as amostras do estudo foram submetidas a um teste de PCR em tempo real, que amplifica um fragmento do gene que codifica o antígeno T, e a um PCR convencional que amplifica um fragmento do gene da proteína VP1 do vírus. Ao final do período de 6 meses de acompanhamento a incidência de excreção urinária dos poliomavírus JCV e BKV na população estudada foi de 53,52% e 64,79% respectivamente. O perfil de excreção do JCV mostrou-se continuo em 42% dos casos , intermitente em 8% e esporádico em 50% dos casos. Analisando o perfil de excreção do BKV, em 80% dos casos mostrou-se esporádico, em 17% intermitente e em 3% dos casos contínuo. Posteriormente, as amostras positivas foram sequenciadas e analisadas filogeneticamente observando-se que os genótipos mais prevalentes do JCV foram o 1, subtipo 1B e 3, seguidos dos genótipos 1, subtipo 1A e 4. Com relação ao BKV, o genótipo 1, subtipo 1A foi o mais prevalente, seguido do 4 e do 1, subtipo 1B. / The Polyomavirus JC and BK are the most important members of Polyomaviridae family, genus Orthopolyomavirus, due to their degree of pathogenicity in humans. The human polyomavirus JC (JCV) was isolated from a fragment of the brain of a patient with Hodgkin\'s lymphoma and progressive multifocal leukoencephalopathy by Padgett et al. On the other hand the human polyomavirus BK was also isolated in 1971 by Gardner et al from the urine of a patient who underwent renal transplantation in VERO cell line. There are few data on human polyomavirus JC and BK in healthy individuals on the world and in Brazil. Moreover the forms of excretion and transmission of these viruses are not yet fully elucidated. This study aimed to determine the incidence, the dynamics of excretion, and the molecular characterization of polyomavirus JC and BK in serial samples of urine of healthy individuals. A secondary objective was to analyze phylogenetically the subtypes of the viruses found during the study. Were included 71 patients of both genders, aged from 21 to 65 yearsold. Urine samples were collected every month for six months. All samples in the study were screened by a real time PCR which amplifies a fragment of the T antigen gene, and to a conventional PCR that amplifies a fragment of the gene of VP1 protein of the virus. At the end of 6 months of follow-up, the incidence of urinary excretion of polyomaviruses BKV and JCV in the study population was 53.52% and 64.79% respectively The profile of excretion of JCV was continuous in 42% of cases, intermittent in 8% and sporadic in 50% of cases. The profile of excretion of BKV was shown to be sporadic in 80% of cases, intermittent in 17% and continuous in only 3% of cases. Subsequently, the positive samples were sequenced and analyzed phylogenetically showing that the more prevalent genotypes were JCV 1, subtype 1b and 3, followed by genotype 1, subtypes 1a and 4. Regarding the BKV genotype 1 subtype 1a was the most prevalent, followed by 4 and 1, subtype 1b.

Introdução: A Doença da Urina do Xarope do Bordo (DXB) é um Erro Inato do Metabolsimo (EIM), causada pela deficiência da atividade do complexo enzimático desidrogenase dos L-cetoácidos de cadeia ramificada (CACR). O programa público brasileiro de triagem neonatal não inclui o diagnóstico e o tratamento da DXB. Objetivo: Caracterizar aspectos relacionados ao diagnóstico e ao tratamento de pacientes brasileiros com DXB. Metodologia: Estudo retrospectivo. Os pacientes foram identificados a partir dos registros de laboratório considerado referência nacional para o diagnóstico de DXB, e de contato com demais serviços nacionais de referência em genética médica. O diagnóstico foi realizado entre 1992-2011. Os dados analisados foram obtidos a partir da revisão de prontuários. Resultados: Oitenta e três pacientes, oriundos de 75 famílias, foram incluídos no estudo (mediana de idade= 3 anos; IQ25- 75= 0,57-7). A mediana da idade de início dos sintomas foi de 10 dias (IQ= 5-30), enquanto que a mediana da idade ao diagnóstico foi de 60 dias (IQ= 29-240, p= 0,001). Apenas três (3,6%) pacientes foram diagnosticados antes de desenvolverem manifestações clínicas. A comparação entre os pacientes com (n=12) e sem (n=71) diagnóstico precoce mostrou que o mesmo associa-se com a presença de história familiar positiva e diminuição da prevalência de manifestações clínicas ao diagnóstico, mas não com melhor resultado; além disso, a maioria desses diagnósticos foi realizada entre 2002-2011 (n= 10/12). Considerando a amostra total, 98,8% dos pacientes apresentam atraso de desenvolvimento neuropsicomotor. Conclusão: Os pacientes com DXB são diagnosticados tardiamente no Brasil, de forma que as complicações associadas a esta condição não são prevenidas. Entretanto, existem indícios de que está havendo um melhora gradual desse panorama desde a última década. Os nossos dados indicam que o diagnóstico precoce dessa condição, mesmo que em fase sintomática, associa-se a um melhor prognóstico do paciente. Sugere-se a elaboração de políticas públicas específicas para doenças raras no país. / Introduction: Maple syrup urine disease (MSUD) is an Inborn Errors of Metabolism, is caused by a deficiency in activity of the branched-chain L-keto acid dehydrogenase complex. The Brazilian neonatal screening program does not include the diagnosis and treatment of MSUD. Objective: To draw a profile of aspects related to the diagnosis and treatment of Brazilian patients who received. Methods: In this retrospective study, patients were identified through a search of records from a national reference laboratory for the diagnosis of MSUD and through contact with other medical genetics services across Brazil. A diagnosis of MSUD between 1992 and 2011. Data were collected by means of a chart review. Results: Eighty-three patients from 75 families were enrolled in the study (median age 3 years; interquartile range, 0.57–7). Median age at onset of symptoms was 10 days (IQR 5–30), whereas median age at diagnosis was 60 days (IQR 29–240, p=0.001). Only three (3.6%) patients were diagnosed before the onset of clinical manifestations. A comparison between patients with (n=12) and without (n=71) an early diagnosis show that early diagnosis is associated with the presence of positive familial history and decreased prevalence of clinical manifestations at the time of diagnosis, but not with a better outcome. Overall, 98.8% of patients have some psychomotor or neurodevelopmental delay. Conclusion: In Brazil, patients with MSUD receive a late diagnosis and show neurological compromise and poor survival even with an early diagnosis. We suggest that specific public policies for rare diseases should be developed and implemented in the country.